TEORÍA DE LA COLORACIÓN

Se sabe que las imágenes producidas por absorción, en preparaciones coloreadas, son mucho
más fáciles de interpretar que las imágenes de difracciones dada por preparaciones no
coloreadas. Además los diversos elementos de los tejidos poseen poco más o menos el mismo
índice de refracción lo que hace que el reconocimiento sea una tarea difícil.

Estos dos argumentos hacen comprender la necesidad de las coloraciones para el estudio
morfológico de células y tejidos.

Un colorante es un cuerpo coloreado que puede comunicar su color a otro cuerpo.

La mayor parte de los colorantes artificiales (y aún los naturales como la hematoxilina), derivan
de:

Cuerpos incoloros, por ej. De carburos aromáticos.

La coloración es la propiedad que tienen ciertos cuerpos de ejercer una absorción selectiva sobre
la luz.

Dicho de otra manera un cuerpo se ve de tal color porque trasmite por trasparencia o por difusión
las radiaciones complementarias de las que él absorbe.

CLASIFICACIÓN DE LOS COLORANTES

Se clasifican en naturales y artificiales

Colorantes naturales:

En todos ellos hay un principio colorante producido por la naturaleza que luego la técnica del
hombre ha sabido extraer, componer y hacerlo efectivo.

Colorantes artificiales:

Son los colorantes de anilina que proceden de la hulla.

Además los colorantes se clasifican por su apetencia en tres grandes grupos:

COLORANTES BÁSICOS: Son los que tiñen muy bien estructuras acidas.
COLORANTES ÁCIDOS: Son los que tiñen muy bien estructuras básicas.
COLORANTES NEUTROS: Son sales con componentes ácidos y básicos
COLORANTES INDIFERENTES: No forman sales, pero tienen capacidad de disolución en los
alcoholes y en las grasas:
COLORANTES METACROMATICOS: Se caracterizan por teñir de diferente color que el color
utilizado. Ej: El azul de toluidina tiñe de rojo el músculo.

Estos colorantes actúan dependiendo el método o técnica de coloración utilizada.

Existen numerosas técnicas de coloración, veremos las más utilizadas:

TIPOS DE COLORACIONES

COLORACIÓN DIRECTA: Existe una clara afinidad entre el colorante y la sustancia a teñir.
COLORACIÓN INDIRECTA: Se requiere la intervención de intermediarios o mordientes para que
se dé la coloración.
COLORACIÓN PROGRESIVA: El colorante actúa hasta que se obtiene el color deseado
COLORACIÓN REGRESIVA: Primero se utiliza una sobre coloración y luego se elimina el
exceso de coloración con diferenciadores.
COLORACIÓN SIMPLE: Cuando interesa resaltar un solo aspecto del preparado.
COLORACIÓN COMBINADA: Se emplea colorantes ácidos y básicos sucesivamente, que
refuerzan el contraste por doble acción.

Como ejemplo explicativo de una célula teñida, tenemos una célula escamosa del cuello uterino.

En la célula parabasal domina la coloración azul tanto en el núcleo como en el citoplasma, se

debe a que el núcleo tiene un gran componente ácido, que capta colorantes básicos, el citoplasma
se tiñe de basófilo, (azul) porque se trata de una célula joven con gran dotación de ribosomas y
mitocondrias que dan el carácter ácido al conjunto citoplasmático.

CÉLULAS COLOREADA

Figura.37 células
parabasales. Obsérvese predominio de color azul
FERNANDEZ, Alfonso,
LOPEZ, Luciano, Citolología
ginecilógica.
 Figura. 38. Célula escamosa con núcleo picnótico y coloración acidófila
FERNANDEZ, Alfonso, LOPEZ, Luciano, Citolología ginecilógica.

En la célula superficial, el citoplasma pierde su carácter ácido por degradación de las estructuras
ribosómicas y mitocondriales debido al envejecimiento celular por lo que se tiñe con los colorantes
ácidos (eosina) invirtiendo su coloración.

Existen una serie de factores que pueden alterar el patrón normal de las tinciones y son los
fenómenos:

1. Inflamatorios

2. Neoplásicos

3. Desequilibrios hormonales

Ante los cuales se dan fenómenos de falsa eosinofilia. Y metacromasia que pueden entrar en el
campo de la patología. (Fernández. Alfonso, segunda edición 1993)

TINCIÓN DE PAPANICOLAOU.

Es una tinción tri crómica que utiliza los siguientes colorantes:

HEMATOXILINA. Es un colorante natural, de origen vegetal que se extrae de la corteza del árbol
hematoxylon campechianum, oriundo de Centroamérica. En el comercio se encuentra en forma de
cristales rosados o amarillentos solubles en agua o en alcohol. Tradicionalmente se ha mantenido
que la hematoxilina no es un colorante que pueda ser utilizado como tal si no que debe ser
oxidado primeramente con hemateina. Tras el proceso de oxidación, normalmente, debe
implementar su capacidad tintorial agregándole alumbre de potasio o de aluminio como
mordientes. Es un colorante básico con cargas positivas que se une a cualquier sustancia que
tenga acido como es el caso del ADN del núcleo o las proteínas nucleares que tienen carga
negativa.

ORANGE (OG6). Es un colorante ácido, de origen artificial que junto con la eosina alcohólica tiñen
el citoplasma. Aunque este colorante puede prepararse en el laboratorio, con Orange, etanol y
acido fosfotungstico, comercialmente se lo expende como OG6, tiñe de color naranja el
citoplasma de las células que contienen queratina, por ejemplo las células del carcinoma
epidermoide.
EA. (EOSINA ALCOHOLICA). Comercialmente se encuentra ya diluida constituyendo las
mezclas EA36 EA50 EA 55 que proporcionan buenos resultados para cualquier tipo de
muestra, en determinadas ocasiones es recomendable usar alguna en particular, este es el caso
de las muestras ginecológicas con frecuencia gruesas en las que es preferible utilizar EA50 ya
que no colorea tan intensamente el fondo de la preparación o lo hace menos verde, además el
empleo de esta mezcla permite mejor la diferenciación del adenocarcinoma de endocervix (
citoplasma color rosado) con el adenocarcinoma de endometrio (citoplasma azulado). El EA50
contiene verde claro amarillento, pardo Bismark, eosina amarillenta, acido fosfotungstico y
carbonato de litio.

PROCEDIMIENTO PARA LA TINCIÓN DE PAPANICOLAOU

1. Luego de la fijación, se procede a lavar con agua corriente preferible en agua tibia,
hasta eliminar el fijador (principalmente cuando son fijadas las muestras con cito-spray.
Las placas deben hidratarse ya que el primer colorante es acuoso.

2. Les sumergimos en hematoxilina. El tiempo de coloración, depende del tipo de

hematoxilina utilizada.

3. Pasamos por agua tibia corriente para eliminar el exceso de colorante.( el agua tibia nos
da mejor viraje de color y azulamiento)

DESHIDRATACIÓN

Alcohol potable 85%........... 1´

Alcohol potable 85%.............1´
Metanol 95-97%.........1´

REACTIVO DE OG6 en promedio unos 5 minutos

DESHIDRATACIÓN Y LAVADO

Lavar con agua 2 minutos

Alcohol potable al 85% ………. 1 ´
Alcohol potable al 85% ……….1´
Metanol al 95-97% …………… 1´

REACTIVO DE EA 50 durante 4 minutos para contraste

Lavar con agua 2 minutos
Alcohol potable al 85% ……… .1´
Alcohol potable al 85% ……….1´
Metanol al 95-97%………… .1´

ACLARAMIENTO Y SECADO

NEO CLEAR 1 2 minutos

NEO- CLEAR 2 2 minutos

RECOMENDACIONES PARA LA TINCIÓN DE PAPANICOLAU

- Filtre los reactivos, en especial la hematoxilina antes de cada tinción
- Si la hematoxilina es nueva, disminuya los tiempos, pues un exceso de coloración podría
producir falsos positivos
- Los tiempos se pueden ir cambiando, según el ritmo de trabajo y el número de placas que
se tiñan en cada proceso.

Tricrómica de Gomori

Se trata de una solución acética estabilizada que contiene Chromotrope 2R, Azul de Anilina y
Acido Fosfotúngstico. Listo para usar. No requiere dilución.
Colorante Histológico. Tiñe citoplasma y fibras musculares de rojo, mientras que el colágeno toma
un color azulado.

Tricrómica de Masson

Soluciones colorantes destinadas a la tinción según técnica de Masson y sus modificaciones

(Lillie). Los colorantes se presentan listos para usar. No requieren diluciones.
Para su empleo pueden combinarse de acuerdo a las necesidades del usuario para lograr la
tinción deseada.
A diferencia de otros productos comerciales que poseen sólo 2 colorantes, Biopur dispone de los
4 colorantes desarrollados para la técnica. La ventaja principal de poder realizar estas
combinaciones radica en la posibilidad de teñir con colores diferentes de acuerdo a los tipos de
tejidos en estudio.
Se dispone de soluciones de:

Fucsina Acida - Punzó de Xilidina

Fucsina Acida - Escarlata de Biebrich
Azul de Anilina
Fast Green FCF
Verde de Metilo – Pironina

Se trata de una solución de Verde de Metilo asociada con Pironina G según Tarf-Kurnick.
Colorante Histológico.
Empleado para la investigación histológica del ácido nucléico contenido en los tejidos, así como
para demostrar la presencia de células de la serie linfática y células plasmáticas.
También es útil en la identificación de células plasmáticas y RNA en secciones de tejidos y
preparaciones citológicas.

PAS
Se trata de un kit compuesto por soluciones de:
Acido Periódico al 1% (Conservar en Refrigerador 2-10°C)
Reactivo de Schiff Biopur (Conservar en Refrigerador 2-10°C)
Para la demostración histoquímica de componentes celulares que contienen Glicoles, tales como
Carbohidratos, Glicoproteínas, etc.
Permite la observación de Membranas Basales y algunas Mucinas

Mucicarmín
Se trata de un kit que contiene soluciones de:
Mucicarmín Concentrada Biopur
Acética de Tartrazina Biopur
Colorante Histológico.
Usado en la identificación de sitios de tumores primarios, ayudando a la distinción de células
escamosas indiferenciadas mucina-negativas de los adenocarcinomas mucina-positivos.
La cápsula de los criptococos (hongos) se tiñe de rosa oscuro.
La tartrazina tiñe el citoplasma de amarillo.

Rojo Congo

Se trata de un kit que contiene soluciones de:

Rojo Congo (Alcohólica Clorurada) (Stock)
Alcohólica al 80%, clorurada (Stock)
Hidróxido de Sodio 0.25 M
Colorante Histológico (Bennhold-Puchtler).
Destinado a la determinación de proteína amiloide en secciones de tejidos con el empleo de
microscopios de luz común o polarizada.
PARA TEÑIR BACTERIAS

Gram
Se trata de un kit para la coloración de bacterias con la tinción según Gram
Se dispone de soluciones de:
Violeta Cristal
Solución Concentrada de Iodo
Decolorante
Safranina
La tinción de Gram fue desarrollada en el año 1884 por Christian Gram. La tinción hoy en día es
aplicada para la clasificación como paso inicial en la identificación de las bacterias. También,
como consecuencia de la tinción, las bacterias muestran su forma, tamaño, etc., lo que ayuda
significativamente al diagnóstico.

Ziehl
Se trata de un kit compuesto por colorantes y decolorante.
Se dispone de soluciones de:
Fucsina Básica
Decolorante
Azul de Metileno
Método tradicional para la detección del bacilo tuberculoso. Para empleo con esputo, concentrado
o por extensión directa, líquido cefalorraquídeo u otros fluidos corporales, incluyendo orina
cateterizada y material homogeneizado de tejidos.

Tinciones Nucleares

Se trata de soluciones de Hematoxilina a diferentes concentraciones y con aplicaciones

específicas.
Hematoxilina Biopur está basada en la fórmula de Gill #1 conteniendo 2g/L de Hematoxilina. Se
trata de una solución acuosa preparada por vía química en frío, evitando de esta manera la
perjudicial ebullición.
No precipita. No requiere filtrado para su empleo. Posee ácido acético en su fórmula, permitiendo
su empleo inmediato, sin necesidad de aditivo alguno. Por esto, no requiere el agregado de ácidos
ni de mordientes. Lista para usar.
Hematoxilina Biopur encuentra aplicación en técnicas citológicas fundamentalmente.
Hematoxilina "Activada" Biopur está basada en la fórmula de Gill #2 conteniendo 4g/L de
Hematoxilina. Se trata de una solución acuosa preparada por vía química en frío, evitando de esta
manera la perjudicial ebullición.
No precipita. No requiere filtrado para su empleo. Posee ácido acético en su fórmula, permitiendo
su empleo inmediato, sin necesidad de aditivo alguno. Por esto, no requiere el agregado de ácidos
ni de mordientes. Lista para usar.
Hematoxilina Activada Biopur encuentra aplicación en técnicas histológicas fundamentalmente.
Hematoxilina Férrica de Weigert Biopur se compone de 2 soluciones para la preparación de la
misma. Una Solución de Hematoxilina Alcohólica y una Solución de Cloruro Férrico.
Hematoxilina Férrica de Weigert Biopur encuentra aplicación específica en coloraciones
especiales que requieren hematoxilina (Mucicarmín, Tricrómica de Masson, Tricrómica de Gomori)

CLÁSICAS

May Grunwald – Giemsa

Se trata de productos que se complementan para la técnica de tinción según May-Grünwald y
Giemsa. Los colorantes según May-Grünwald y Giemsa son combinaciones de azul y azures de
metileno asociados con eosina.
Estabilizador es un buffer fosfatos pH 6.5 regulador del pH del agua a ser utilizada en tinciones
hematológicas.
Estabilizador Biopur asegura la tinción salmón de los hematíes, descartándose los accidentes de
las tonalidades rojo fucsia, que dificultan la tinción de los leucocitos, y de las azuladas, que
entorpecen la metacromasia.

Wright
Se trata de una solución May-Grünwald-Giemsa compuesta.
Tinción panóptica diferencial en un solo paso.

Tinción 15
Trata de un kit de tinción diferencial rápida compuesto por 3 soluciones:
Fijador
Solución 1 (Xanténicos)
Solución 2 (Tiazínicos)
Coloración de extendidos. Tinción diferencial rápida (15 segundos) Punción aspirativa Tejidos
Biopsias por congelación Muestras hematológicas Recuento leucocitario diferencial

Shorr
En contraste con la tinción de Papanicolaou, la tinción de Shorr se usa solamente en
citodiagnóstico hormonal en el cual es superior.
Permite lograr la diferenciación neta de las células del epitelio vaginal. Tinción nuclear intensa y
coloración citoplasmática homogénea.

TÉCNICA DE MONTAJE DE LAS PREPARACIONES

Figura 39. Técnica de

montaje. FERNANDEZ,
Alfonso, LOPEZ, Luciano,
Citología Ginecológica y
Mamaria, 2da edición

El montaje es una técnica

que se aplica sobre el
espécimen luego de que
este haya sido teñido.
Existen razones básicas para realizar la técnica de montaje el montaje.

- Protección del espécimen

- Señalización de campos
- Archivo de la muestra
- Bioseguridad

Para este objetivo, existen tres tipos de medios de montaje:

- Resinas naturales
- Resinas sintéticas
- Resinas acuosa

Los medios más usados son los acuosos. Para de alguna manera corregir la deshidratación que
se provoca con el alcohol y xilol.
Actualmente las casas comerciales brindan excelentes medios de montaje que son refringentes y
de secado rápido como por ejemplo el permount y el entellan. y el neo- mont