IV.

1 – Preparando a curva padrão com Glicose a 5µmol/mL:

Usar 6 tubos de ensaio e adicionar o padrão de Glisose e água em cada um deles de acordo com a
tabela abaixo.

Tubo
Tubos Glicose Sacarose
H2O (mL)
DNS Aquecer Tampão
Resfriar HDNS Enzima
ABS DNS
2O
ABS 0,02M
(mL) 0,03 M
(mL) 0,05M(mL) 0,1M
a 100 00,2M
C (µL) (µL)
(mL) (µL)nm)
(540 (µL)
1 ---- 1 0,2 5 min 2 min 1,8 0,050
0,005 B1 0,1 2 min60 200 40 -
2 0,2 0,8 0,2 5 min 1,8 0,250
0,209
31 0,1
0,4 0,6 0,2 5 min 2 min60 -
1,8 40
0,377 200
0,0078 B2 0,1 2 min60 200 40 -
4 0,6 0,4 0,2 5 min 1,8 0,560
0,295
52 0,8 0,1 0,2 0,2 5 min 2 min60 -
1,8 40
0,650 200
0,0067 B3 0,1 2 min60 200 40 -
6 1 ---- 0,2 5 min 1,8 0,870
0,312 3 0,1 60 - 40 200
0,0098 B4 0,1 60 200 40 -
0,346 4 0,1 60 - 40 200
0,0076 B5 0,1 60 200 40 -
0,578 5 0,1 60 - 40 200

IV.3 – Nos tubos 1, 2, 3, 4 e 5, o DNS deve ser adicionado após, exatamente, 5 min de reação.

IV.4 – Aquecer todos os tubos a 100 0C por 5 min.

IV.5 – Resfriar e adicionarw 2,6 mL de água destilada. Homogeinizar. Ler as absorbâncias a 540nm.

IV.6 – Anotar os resultados na tabela seguinte.

IV.7 – Lançar em gráfico “velocidade de reação X [S]” e determinar o Km e Vm.

IV.8 – Lançar em gráfico “1/v X 1/[S]” e determinar o Km e Vm (Método de Lineweaver e Burk).

0,209
0,295
0,312
0,346
0,578