Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
Parte II
I0
I0 I
𝐼
transmitância 𝑇=
𝐼0
9
𝑇= = 64.3%
14
b
S S
d
a
0 b
a
na
Probabilidade de absorção em uma fatia infinitesimal: P(absorção ) = p n – número de centros absorventes por fatia
S p – probabilidade de ocorrer uma transição
a – área de seção transversal de captura
S – área de incidência do feixe de luz
I0 I1 I2 I3 ... I
d
0 1 cm
na
P (absorção ) = p Qual a probabilidade de um fóton “sobreviver” a todas as camadas?
S
20000000
Se o diâmetro da espécie for de 500 pm, a 1
concentração do analito for de 100 µmol/L e 1 − = 0.9999999312 20000000 = 0.252
14530000
probabilidade de ocorrer uma transição for de
12/1000:
T = 25.2%
1 12 1
𝑃(𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟çã𝑜) ≅ 𝑃(𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟çã𝑜) ≅
170000 1000 14530000
I0 I1 I2 I3 ... I
Série de Mercator:
𝑥2 𝑥3 𝑥4
𝑙𝑛 1 + 𝑥 = 𝑥 − + − +⋯
2 3 4
−1 < 𝑥 ≤ 1
d
0 b
numa fatia: 𝑛𝛼 1
𝑛𝛼 𝑥=− 𝑝 𝑥=−
𝑃 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟çã𝑜 = 𝑝 𝑆 14530000
𝑆
𝑛𝛼 somatória
𝑃 𝑛ã𝑜 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟çã𝑜 = 1 − 𝑝
𝑆 -6.88231E-08 1 -6.88231E-08 -6.88231E-08
4.73662E-15 2 2.36831E-15 -6.88231E-08
após todas as fatias: -3.25989E-22 3 -1.08663E-22 -6.88231E-08
2.24356E-29 4 5.6089E-30 -6.88231E-08 𝑏 𝑛𝛼
𝑏 -1.54409E-36 5 -3.08818E-37 -6.88231E-08 𝑙𝑛 𝑇 = −𝑝
𝑇 = 𝑃 𝑛ã𝑜 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟çã𝑜 𝑑 𝑑 𝑆
quando |x| é muito pequeno:
𝑏
𝑛𝛼 𝑑 𝑙𝑛 1 + 𝑥 = 𝑥
𝑇 = 1− 𝑝
𝑆 n – número de centros absorventes por fatia
p – probabilidade de ocorrer uma transição
𝑏 𝑛𝛼 a – área de seção transversal de captura
𝑙𝑛 𝑇 = 𝑙𝑛 1 − 𝑝 𝑏 𝑛𝛼 S – área de incidência do feixe de luz
𝑑 𝑆 𝑙𝑛 𝑇 = − 𝑝
𝑑 𝑆 d – espessura da fatia
I0 I1 I2 I3 ... I
𝑆
d
0 b
𝑉 =𝑑∙𝑆
𝑏 𝑛𝛼 𝑛
𝑙𝑛 𝑇 = −𝑝 𝑁
𝑑 𝑆 𝑐= 𝐴
𝑑∙𝑆 𝑑
𝑙𝑛 𝑇 = −𝑝𝛼𝑁𝐴 𝑏𝑐
20000000
1
1 − = 0.9999999312 20000000 = 0.252
14530000
I0 I1 I2 I3 ... I numa fatia:
𝑛𝛼
𝑃 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟çã𝑜 = 𝑝
𝑆
𝑛𝛼
𝑃 𝑛ã𝑜 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟çã𝑜 = 1 − 𝑝
𝑆
𝑛𝑥 𝛼𝑥 𝑛𝑦 𝛼𝑦
𝑃 𝑛ã𝑜 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟çã𝑜 = 1 − 𝑝𝑥 1− 𝑝𝑦
d 𝑆 𝑆
0 b
após todas as fatias:
𝑏
𝑛𝛼
𝑏
𝑛𝑥 𝛼𝑥 𝑛𝑦 𝛼𝑦 𝑑 𝐴 = 𝜀𝑖 𝑏𝑐𝑖 ou 𝐴 = 𝐴𝑖
𝑑
𝑇 = 1− 𝑝 𝑇= 1− 𝑝𝑥 1− 𝑝𝑦 𝑖 𝑖
𝑆 𝑆 𝑆
𝑏 𝑛𝛼 𝑏 𝑛𝑥 𝛼𝑥
𝑙𝑛 𝑇 = 𝑙𝑛 1 − 𝑝 𝑙𝑛 𝑇 = 𝑙𝑛 1 − 𝑝𝑥
𝑑 𝑆 𝑑 𝑆
𝑏 𝑛𝑦 𝛼𝑦
... + 𝑙𝑛 1 − 𝑝𝑦
𝑑 𝑆 n – número de centros absorventes por fatia
... p – probabilidade de ocorrer uma transição
a – área de seção transversal de captura
𝐴 = 𝜀𝑏𝑐 𝐴 = 𝜀𝑥 𝑏𝑐𝑥 + 𝜀𝑦 𝑏𝑐𝑦 S – área de incidência do feixe de luz
d – espessura da fatia
𝑝𝛼𝑁𝐴 𝑝𝑦 𝛼𝑦 𝑁𝐴 c – concentração (mol/L)
𝑝𝑥 𝛼𝑥 𝑁𝐴 V – volume
𝜀= 𝜀𝑥 = 𝜀𝑦 =
ln(10) ln(10) ln(10) 𝑁𝐴 – número de Avogadro
Extração com solvente
HA ⇌ H+ + A- pKa = 9,0
HA A-
1.0 1.0
99,9%
0.8 0.8
99%
fração molar
fração molar
0.6 0.6
90%
50%
0.4 0.4
0.2 0.2
0.0 0.0
6 8 10 12 6 8 10 12
pH pH
pH αHA αA- 𝛼
pKa 0,5 0,5 𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
1−𝛼
pKa – 1 0,909 0,091
pKa – 2 0,990 0,010 10𝑝𝐻−𝑝𝐾𝑎
pKa – 3 0,999 0,001 𝛼=
1 + 10𝑝𝐻−𝑝𝐾𝑎
Extração com solvente
coeficiente de distribuição
𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 𝑜𝑐𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙
𝑙𝑜𝑔𝐷 = 𝑙𝑜𝑔
𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 á𝑔𝑢𝑎
Tensoativos aniônicos
• Formação de par iônico com azul de metileno e extração
em clorofórmio (l = 652 nm).
azul de metileno
sem com
tensoativo tensoativo
H2O
dodecil sulfato de sódio
CHCl3
barbital
fenobarbital
pentobarbital
Barbituratos em plasma
A1 = bc1
v A0 = bc 0
V0 V0 + v
Se a absorbância for medida após a diluição (A1),
como saber a absorbância original?
• Procedimento:
•
•
...
A absorbância é medida a 260 nm (ApH13) Abarbituratos = ApH 13 −
(V
amostra + vNH 4Cl )A
pH 10
• O pH é reduzido para 10 com NH4Cl Vamostra
• A absorbância é novamente medida (ApH10). Os
barbituratos não absorvem em pH 10.
Determinação de ferro e cobre
𝐴 = 𝜀𝑏𝑐
Determinação de
púrpura de metacresol
pH
HIn In-
434 nm 578 nm
In−
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾2 + 𝑙𝑜𝑔
HIn
𝑝𝐾2 = 8.32
10 µM
azul de metileno
Por que luz monocromática?
filtro cubeta
I0 ' I'
detector T→A absorbância medida (Am)
I0" I"
I '+ I " I '+ I "
Tm = Am = − log
I 0 '+ I 0 " I '+
0 0 I "
I
T= = 10 − A I ' = 10− A' I 0 ' I " = 10− A" I 0 "
I0
Am = ' bc
energia de dissociação de
ligação química
transições eletrônicas
vibração molecular
rotação molecular
Moléculas vibram e rodam
Deformação simétrica
Estiramento simétrico Estiramento assimétrico
no plano (scissoring)
https://youtu.be/b0IbXG0hnOk
https://youtu.be/3RqEIr8NtMI
transição
eletrônica +
vibracional +
transição rotacional
eletrônica +
vibracional
transição
eletrônica
transição
transição
vibracional +
vibracional
rotacional
Espectro molecular (fase gasosa e baixa pressão)
10000 S2
250 nm
população absorvedora
8000
6000
4000 S1
2000 350 nm
0
200 250 300 350 400
comprimento de onda / nm
S0
Quando os vizinhos interferem...
3p 3p 3p 3p
energia
3s 3s 3s 3s
Na Na Na Na
3p
3p 3p
3p
• Processos de absorção de
energia
Na Na Na Na
10000
vácuo 400
1
população absorvedora
população absorvedora
8000
6000
4000 200
Espectro molecular
2000
0 0
(efeito do ambiente)
200 250 300 350 400 200 250 300 350 400
comprimento de onda / nm comprimento de onda / nm
2 3
400 200
população absorvedora
população absorvedora
200 100
0 0
200 250 300 350 400 200 250 300 350 400
comprimento de onda / nm comprimento de onda / nm Simulação com ~35000 moléculas
4 100 5 a diferentes pressões
população absorvedora
população absorvedora
100 80
60
50 40
20
0 0
200 250 300 350 400 200 250 300 350 400
comprimento de onda / nm comprimento de onda / nm
Efeito do solvente
tetrazina
Desativação do estado excitado
A – absorção
singleto tripleto
R – relaxação
CI – conversão interna
F – fluorescência
P – fosforescência
tempo / segundos
Rendimento Quântico de Fluorescência
Fluorescência:
S → S + h
*
d S*
= −k F S *
dt
kF
F =
Processos não radiativos: k F + k nr
S → S + Ek
*
d S*
= −k nr S *
dt
• Favorecem a fluorescência:
• maior rigidez da molécula (diminuição da conversão interna)
• líquidos de alta viscosidade ou meio sólido (diminuição da
conversão externa)
Fluorimetria
Fluorescência e Concentração
• Só há fluorescência, se um fóton for absorvido.
circuito
potência absorvida: PA = P0 − P eletrônico
onde
ΦF é o rendimento quântico de fluorescência (0,0 ... 1,0)
pc é a fração de cobertura do detector (0,0 ... 1,0)
P
T=
F = K ' (P0 − P )
P0
P = P010 −A (
F = K ' P0 1 − 10 − A )
T = 10 − A
Fluorescência e Concentração
(
F = K ' P0 1 − 10− A ) Fluorescência não varia linearmente com a concentração!
xn x 2 x3 x 4
10 z = e 2,3 z função exponencial: e = = 1 + x + + + +
x
n = 0 n! 2! 3! 4!
F = K ' P0 2,3 A −
(− 2,3 A) (− 2,3 A) (− 2,3 A)
2
−
3
−
4
−
2! 3! 4!
F = 2,3 pc F P0bc F = K c
Fluorescência varia linearmente com concentração
somente para baixas concentrações!!!
Fluorescência direta
S2
S1
λ2
Quinina
S0 grupo cromóforo
λ3 λ1 λ3 λ1 λ2 grupo fluoróforo
Fluorimetria indireta
l = 470 nm
l = 500 nm
detector
absorbância
0.6
2 erro (e3)
0.4
3
𝑒32 = 𝑎𝑐3 − 𝐴3 2
0.2
1
0.0
0 2 4 6 8 10
concentração
𝐴 = 𝜀𝑏𝑐 → 𝐴 𝑐 = 𝑎𝑐
Modelo genérico: 𝑦 𝑥 = 𝑎𝑥
1.0
4 𝑦 𝑥 = 𝑎𝑥
0.8
𝑁
0.6 2
2 erro (e3) 𝑔 𝑎 = 𝑎𝑋𝑖 − 𝑌𝑖
y
0.4 𝑖=1
3
O erro acumulado g é
0.2
uma função de a.
1
0.0 O menor valor de
0 2 4 6 8 10
x erro acumulado será
aquele cujo a
0.7
corresponde à
400
0.6 derivada zero.
0.5
300
0.4
200
0.3
g
g
𝑑𝑔(𝑎)
100 0.2 =0
𝑑𝑎
0.1
0
0.0
0.0 0.4 0.8 1.2 0.40 0.42 0.44 0.46 0.48 0.50
a a
𝑁
𝑁
2
𝑔 𝑎 = 𝑎𝑋𝑖 − 𝑌𝑖
𝑎𝑋𝑖 2 − 𝑋𝑖 𝑌𝑖 = 0
𝑖=1
𝑖=1
𝑑𝑔(𝑎)
=0
𝑑𝑎 𝑁 𝑁
𝑎𝑋𝑖 2 − 𝑋𝑖 𝑌𝑖 = 0
𝑁 𝑖=1 𝑖=1
𝑑𝑔(𝑎)
= 2 𝑎𝑋𝑖 − 𝑌𝑖 𝑋𝑖
𝑑𝑎
𝑖=1
𝑁 𝑁
𝑁 𝑎 𝑋𝑖 2 − 𝑋𝑖 𝑌𝑖 = 0
2 𝑎𝑋𝑖 2 − 𝑋𝑖 𝑌𝑖 = 0 𝑖=1 𝑖=1
𝑖=1
𝑁 σ𝑁
𝑖=1 𝑋𝑖 𝑌𝑖
2
𝑎= 2
2 𝑎𝑋𝑖 − 𝑋𝑖 𝑌𝑖 = 0 σ𝑁
𝑖=1 𝑋𝑖
𝑖=1
σ𝑁
𝑖=1 𝑋𝑖 𝑌𝑖
𝑎= 2
σ𝑁
𝑖=1 𝑋𝑖
X Y X2 XY
absorbância
obtido por mínimos
absorbância
11.46 0.6
0.6
𝑎= quadrados (0.0955)
120.00 0.4
0.4
0.2
0.2
𝑎 = 0.0955
0.0
0.0
0
0 2
2 4
4 6
6 8
8 10
10
concentração
E se o modelo corresponder a uma reta completa?
𝑦 𝑥 = 𝑎𝑥 + 𝑏
𝑁
2
𝑔 𝑎, 𝑏 = 𝑎𝑋𝑖 + 𝑏 − 𝑌𝑖
𝑖=1
𝜕𝑔
=0
𝜕𝑎
𝜕𝑔
=0
𝜕𝑏
E se o modelo corresponder a um polinômio?
absorbância
0.6
𝜕𝑔
=0 0.4
𝜕𝑎
0.2
𝜕𝑔
=0 0.0
𝜕𝑏 0 2 4 6 8 10
concentração
𝜕𝑔
=0
𝜕𝑐
50
fluorescência / u.a.
40
30
20
10
0
0 1 2 3 4 5
concentração / mmol L-1
50 50
fluorescência / u.a.
fluorescência / u.a.
40 40
30 30
20 𝑦 = 9.20𝑥 20
𝑦 = 8.73𝑥 + 1.73
10 10
0 0
0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5
concentração / mmol L-1 concentração / mmol L-1
100 100
90 90
fluorescência / u.a.
fluorescência / u.a.
80 80
70 70
60 60
50 50
40 40 𝑦 = 𝑏 1 − 10−𝑎𝑥
30 30
20 20
10 10
0 0
0 5 10 15 20 0 5 10 15 20
concentração / mmol L-1 concentração / mmol L-1
100 100
90 90
fluorescência / u.a.
fluorescência / u.a.
80 80
70 70
60 60
50 50
40 𝑦 = 𝑎𝑥 40
30 30
𝑦 = 𝑎𝑥 + 𝑏
20 20
10 10
0 0
0 5 10 15 20 0 5 10 15 20
concentração / mmol L-1 concentração / mmol L-1
Calibração Externa
curva analítica
água
branco
emissão de
fluorescência
padrão
amostra