Apêndice 1 Energia e Enzimas

The force that through the green fuse drives the flower
Drives my green age; that blasts the roots of trees
Is my destroyer.

And I am dumb to tell the crooked rose

My youth is bent by the same wintry fever.

The force that drives the water through the rocks

Drives my red blood; that dries the mouthing streams
Turns mine to wax.

And I am dumb to mouth unto my veins

How at the mountain spring the same mouth sucks.

Dylan Thomas, Collected Poems (1952)

N essas estrofes iniciais do famoso poema de Dylan Thomas, o poeta

proclama a unidade essencial das forças que impelem igualmente
objetos animados e inanimados desde seus primórdios até sua destruição
final. Os cientistas chamam essa força da energia. As transformações de
energia desempenham um papel-chave em todos os processos físicos e quí-
micos que ocorrem nos sistemas vivos. No entanto, a energia sozinha é insu-
ficiente para promover o crescimento e o desenvolvimento dos organismos.
Proteínas catalíticas chamadas enzimas são necessárias para assegurar que as
taxas das reações bioquímicas sejam suficientemente rápidas para sustentar
a vida. Neste apêndice, são examinados os conceitos básicos sobre energia,
o modo pelo qual as células transformam energia para realizar trabalho útil
(bioenergética), assim como a estrutura e a função das enzimas.
A1-2 Apêndice 1 • Energia e Enzimas
Fluxo de energia através
dos sistemas vivos
O fluxo de matéria através de organismos individuais e de
comunidades biológicas é parte da experiência cotidiana; já
o fluxo de energia não, embora ele seja fundamental para
a própria existência dos seres vivos. O que torna conceitos
como energia, trabalho e ordem tão indefiníveis é sua na-
tureza imaterial: considera-se muito mais fácil visualizar a
dança de átomos e moléculas do que as forças e os fluxos
que determinam a direção e a magnitude dos processos na-
turais. O ramo da física que trata desses assuntos é a termo-
dinâmica, disciplina abstrata e exigente que a maioria dos
biólogos contenta-se em ler às pressas. Contudo, a bioener-
gética é tão permeada de conceitos e relações quantitativas
derivadas da termodinâmica que é praticamente impossível
discutir o assunto sem referências frequentes à energia livre,
potencial, à entropia e à segunda lei da termodinâmica.
O propósito deste apêndices é reunir e explicar, de
forma tão simples quanto possível, os conceitos funda-
mentais da termodinâmica e suas relações recorrentes
vistas ao longo deste livro. Os leitores que preferirem um
olhar mais amplo sobre o assunto devem consultar tam-
bém os textos introdutórios de Klotz (1967) e de Nicholls
& Ferguson (1992), ou os textos avançados de Morowitz
(1978) e de Edsall & Gutfreund (1983).
A termodinâmica desenvolveu-se durante o século
XIX, a partir dos esforços para compreender como uma
máquina a vapor funciona e por que é produzido calor
quando se perfura um canhão. O próprio nome “termo-
dinâmica” e muito da linguagem dessa ciência lembram
essas raízes históricas, embora fosse mais apropriado falar
de energética, pois os princípios envolvidos são univer-
sais. As plantas, assim como todos os outros fenômenos
naturais, estão submetidas às leis da termodinâmica. Por
isso, a termodinâmica fornece uma estrutura indispensá-
vel para a descrição quantitativa da vitalidade biológica.
Energia e trabalho
Inicialmente, aborda-se o significado de “energia” e “tra-
balho”. Energia é definida, tanto na física elementar
como na vida diária, como a capacidade de realizar tra-
balho. O significado de trabalho é mais difícil de encon-
(A) (B)
Figura A1.1 Energia e trabalho em um sistema mecânico. (A)
Um peso repousando sobre o chão está fixado a uma mola por meio
de uma corda. (B) Ao puxar a mola, ela é colocada sob tensão. (C) A
trar e mais restrito. Trabalho, no sentido mecânico, é o
deslocamento de qualquer corpo contra uma força oposta.
O trabalho realizado é o produto da força e da distância
percorrida, como expresso na seguinte equação*:
W=f (A1.1)
O trabalho mecânico aparece na química, pois, sempre
que o volume final de uma reação de mistura excede o vo-
lume inicial, o trabalho deve ser realizado contra a pressão
da atmosfera; de modo inverso, a atmosfera realiza traba-
lho quando um sistema se contrai. Esse trabalho é calcula-
do pela expressão PV (onde P representa a pressão e V o
volume), termo que aparece frequentemente em fórmulas
termodinâmicas. Em biologia, trabalho é empregado em um
sentido amplo para descrever o deslocamento contra qualquer
uma das forças que os seres vivos encontrem ou gerem: mecâni-
ca, elétrica, osmótica ou mesmo potencial químico.
Uma ilustração mecânica bem conhecida pode auxiliar
a esclarecer a relação entre energia e trabalho. A mola na Fi-
gura A1.1 pode ser estendida a uma determinada distância
se for aplicada força a ela – isto é, se trabalho for realizado
sobre a mola. Esse trabalho pode ser recuperado por uma
combinação apropriada de roldanas e usado para levantar
um peso sobre a mesa. Pode-se dizer, portanto, que a mola
estendida possui energia, que é numericamente igual ao
trabalho que ela pode realizar sobre o peso (desconsideran-
do o atrito). Por sua vez, pode-se dizer que o peso sobre a
mesa possui energia – em virtude de sua posição no cam-
po gravitacional da Terra –, a qual pode ser utilizada para
realizar outro trabalho, como girar uma manivela. O peso,
portanto, ilustra o conceito de energia potencial – a capa-
cidade de realizar trabalho proveniente da posição de um
objeto em um campo de força –, e a sequência como um
todo ilustra a conversão de um tipo de energia em outro, ou
a transdução de energia.
Primeira lei: a energia total é sempre conservada
É de entendimento comum que dispositivos mecânicos
envolvem tanto a realização de trabalho como a produção
* Pode-se observar, de passagem, que as dimensões do trabalho
são complexas – ml2t–2 –, onde m significa massa, l distância e t tem-
po, e que o trabalho é uma quantidade escalar, isto é, o produto de
dois termos vetoriais.
(C)
energia potencial armazenada na mola estendida realiza o trabalho
de levantar o peso quando a mola se contrai.

ou absorção de calor. Pode-se variar a quantidade de tra-
balho exercido sobre a mola, até um determinado máximo,
usando pesos diferentes, e a quantidade de calor produzida
também variará. Porém, muito do trabalho experimental
tem mostrado que, em condições ideais, a soma do traba-
lho realizado e do calor liberado é constante e depende so-
mente do comprimento inicial e final da mola. É possível,
assim, imaginar uma propriedade – a energia interna da
mola –, com a característica descrita pela seguinte equação:
 U = Q + W (A1.2)
Aqui Q é a quantidade de calor absorvida pelo sistema e W
é a quantidade de trabalho realizada pelo sistema.* Na Fi-
gura A1.1, o trabalho é mecânico, mas poderia também ser
elétrico, químico ou de qualquer outro tipo. Portanto, U
é a quantidade líquida de energia introduzida no sistema,
seja como calor, seja como trabalho; inversamente, tanto a
execução de trabalho como a liberação de calor acarretam
uma diminuição na energia interna. Não se pode especificar
um valor absoluto para o conteúdo de energia; apenas mu-
danças na energia interna podem ser medidas. Observe que
a Equação A1.2 aceita que calor e trabalho são equivalentes;
seu propósito é enfatizar que, em condições ideais, U de-
pende apenas dos estados inicial e final do sistema, e não
de como o calor e o trabalho estão repartidos.
A Equação A1.2 é uma afirmação da primeira lei da
termodinâmica, que é o princípio de conservação de ener-
gia. Se um sistema específico não troca energia com seu
entorno, seu conteúdo de energia permanece constante; se
energia é trocada, a variação na energia interna será dada
pela diferença entre a energia ganha do entorno e aquela
perdida para ele. A variação na energia interna depende
somente dos estados inicial e final do sistema, nem da rota
nem do mecanismo de troca de energia. Energia e traba-
lho são interconversíveis; mesmo o calor é uma medida da
energia cinética dos constituintes moleculares do sistema.
Para colocar isso de maneira tão simples quanto possível, a
Equação A1.2 estabelece que nenhuma máquina, incluin-
do as máquinas químicas que são conhecidas como vivas,
pode realizar trabalho sem uma fonte de energia.
Um exemplo da aplicação da primeira lei ao fenô-
meno biológico é o balanço energético de uma folha. As
folhas absorvem energia de suas adjacências de duas ma-
neiras: como radiação incidente direta do sol e como ra-
diação infravermelha do entorno. Alguma energia absor-
vida pela folha é irradiada de volta para o ambiente como
radiação infravermelha e calor, enquanto uma fração da
energia absorvida é armazenada, tanto como produtos
fotossintéticos como na variação da temperatura foliar.
Desse modo, pode-se escrever a seguinte equação:
* A Equação A1.2 é mais comumente encontrada na forma U =
Q – W, que resulta da convenção na qual Q é a quantidade de
calor absorvida pelo sistema a partir do entorno e W é a quantidade
de trabalho realizada pelo sistema sobre o entorno. Essa convenção
afeta o sinal de W, mas não altera o significado da equação.
Apêndice 1 • Energia e Enzimas A1-3
Energia total absorvida pela folha =
energia emitida pela folha + energia armazenada pela folha
Observe que, embora a energia absorvida pela folha tenha
sido transformada, a energia total permanece a mesma,
conforme a primeira lei.
A variação na energia interna de um
sistema representa o trabalho máximo que
ele pode realizar
A equivalência entre energia e trabalho deve ser quanti-
ficada recorrendo-se a “condições ideais”, isto é, pela exi-
gência de que o processo seja realizado reversivelmente.
O significado de “reversível” em termodinâmica tem uma
conotação especial: o termo descreve condições nas quais
forças opostas são tão equilibradas que uma variação in-
finitesimal em uma ou outra reverteria a direção do pro-
cesso.** Nessas circunstâncias, o processo produz a quan-
tidade máxima possível de trabalho. A reversibilidade
com essa conotação não é encontrada com frequência na
natureza, como no exemplo da folha. As condições ideais
diferem tão pouco do estado de equilíbrio que qualquer
processo ou reação exigiria um tempo infinito e, portan-
to, não ocorreriam. Todavia, o conceito termodinâmico de
reversibilidade é útil: se for medida a variação de energia
interna que um processo acarreta, obtém-se um limite su-
perior para o trabalho que ele pode realizar; para qualquer
processo real, o trabalho máximo será menor.
No estudo de biologia vegetal são encontradas vá-
rias fontes de energia – particularmente transformações
luminosas e químicas –, bem como uma diversidade de
funções do trabalho, incluindo os trabalhos mecânico, os-
mótico, elétrico e químico. O significado da primeira lei
na biologia provém da certeza, meticulosamente estabe-
lecida pelos físicos do século XIX, de que os vários tipos de
energia e trabalho são mensuráveis, equivalentes e, den-
tro de certos limites, interconversíveis. A energia é para a
biologia o que o dinheiro é para a economia: o meio pelo
qual os seres vivos obtêm bens úteis e serviços.
Cada tipo de energia é caracterizado por um
fator capacidade e um fator potencial
A quantidade de trabalho que pode ser realizada por um
sistema, seja mecânico, ou químico, é uma função do tama-
nho do sistema. O trabalho pode sempre ser definido como
o produto de dois fatores – força e distância, por exemplo.
Um é um fator potencial ou intensidade, que independe do
tamanho do sistema; o outro é um fator capacidade e é dire-
tamente proporcional ao tamanho (Tabela A1.1).
Em bioquímica, a energia e o trabalho tradicional-
mente têm sido expressos em calorias; 1 caloria é a quan-
tidade de calor necessária para elevar a temperatura de
1 g da água em 1ºC, especificamente, por exemplo, de
** Em bioquímica, a reversibilidade tem um significado diferente:
em geral, o termo se refere a uma reação cuja rota pode ser invertida,
frequentemente com um entrada (input) de energia.
A1-4 Apêndice 1 • Energia e Enzimas
15 para 16°C. Em princípio, pode-se executar o mesmo
processo realizando o trabalho mecanicamente com uma
pazinha; esse experimento conduz ao estabelecimento
do equivalente mecânico do calor como 4,186 joules por
caloria (J cal–1)*. Existe também a oportunidade de utili-
zar as unidades equivalentes de eletricidade, baseadas no
volt: um volt é a diferença de potencial entre dois pontos,
onde 1 J de trabalho é utilizado na transferência de um
coulomb de carga de um ponto para outro. (Um coulomb
é a quantidade de carga transportada por uma corrente de
1 ampere [A] que flui durante 1 s. A transferência de 1 mol
de carga ao longo de um potencial de 1 volt [V] envolve
96.500 J de energia ou trabalho.) A diferença entre ener-
gia e trabalho é frequentemente uma questão de sinal. O
trabalho deve ser feito para levar uma carga positiva mais
próxima à outra carga positiva, porém as cargas adquirem
energia potencial, que, por sua vez, pode realizar trabalho.
A direção de processos espontâneos
Deixados por sua conta, os eventos no mundo real tomam
um rumo previsível. A maçã cai do galho. Uma mistura
de hidrogênio e oxigênio gasoso se converte em água. A
mosca presa em uma garrafa está condenada a morrer, as
pirâmides a se fragmentarem em areia, as coisas se de-
compõem. Porém, não há nada no princípio de conser-
vação da energia que proiba a maçã de retornar ao seu
ramo com a absorção de calor do entorno ou que impeça
a água de se dissociar nos seus elementos constituintes de
uma maneira similar. A busca pela razão de que nenhuma
dessas coisas ocorra sempre levou a profundos insights fi-
losóficos e gerou relações quantitativas úteis sobre a ener-
gética de reações químicas e a quantidade de trabalho que
pode ser obtida delas. Uma vez que os seres vivos são, em
muitos aspectos, máquinas químicas, esses temas devem
ser examinados com algum detalhe.
Segunda lei: a entropia total sempre aumenta
A partir da experiência diária com pesos caindo e corpos
aquecidos esfriando, pode-se esperar que processos es-
pontâneos sigam na direção que reduz a energia interna,
isto é, a direção na qual U é negativo. Porém, há tam-
bém exceções para que isso seja uma regra geral. A fu-
são do gelo é uma exceção: um cubo de gelo colocado
em água a 1°C irá se liquefazer, mesmo que medições
mostrem que a água líquida (em qualquer temperatura
acima de 0°C) está em um estado de energia mais alta
do que o gelo; evidentemente, alguns processos espon-
tâneos são acompanhados por um aumento na energia
interna. O cubo de gelo fundido não viola a primeira lei,
pois o calor é absorvido à medida que ele derrete. Isso
sugere que há uma relação entre a capacidade para a ab-
sorção espontânea de calor e o critério para determinar
* No padrão em uso atual baseado no metro, quilograma, e, segun-
do, a unidade fundamental de energia é o joule (1 J = 0,24 cal) ou o
kilojoule (1 kJ = 1.000 J).
TABELA A1.1 Fatores potencial e capacidade
em energética
Tipo de energia Fator potencial Fator capacidade
Mecânica Pressão Volume
Elétrica Potencial elétrico Carga
Química Potencial químico Massa
Osmótica Concentração Massa
Térmica Temperatura Entropia
a direção de processos espontâneos, e esse é um caso.
A função termodinâmica que se procura é chamada en-
tropia, a quantidade de energia em um sistema não dis-
ponível para a realização de trabalho, correspondente ao
grau de aleatoriedade de um sistema. Matematicamente,
a entropia é um fator capacidade correspondente à tem-
peratura, Q /T. Pode-se dar a resposta à pergunta, assim
como a segunda lei da termodinâmica, desse modo: a
direção de todos os processos espontâneos é para au-
mentar a entropia de um sistema mais seu entorno.
Poucos conceitos como a entropia são tão básicos
(e, no entanto, tão obscuros) para uma compreensão do
mundo em que se vive. Presumivelmente, isso ocorre
porque a entropia não seja intuitivamente relacionada
às percepções sensoriais humanas, como são a massa e
a temperatura. A explicação dada aqui segue a exposição
especialmente lúcida de Atkinson (1977), que explica a
segunda lei de uma forma, aparentando, à primeira vista,
pouca semelhança com a que foi exposta acima:
Nós devemos tomar [a segunda lei] como o conceito
que qualquer sistema, que não esteja a zero absoluto,
tem uma quantidade mínima de energia irredutível,
que é uma propriedade inevitável daquele sistema
naquela temperatura. Isto é, um sistema requer certa
quantidade de energia apenas para estar a uma tempe-
ratura especificada qualquer.
A constituição molecular da matéria fornece uma ex-
plicação fácil: alguma energia é armazenada no movimento
térmico das moléculas e nas vibrações e oscilações dos seus
átomos constituintes. Pode-se exprimir isso como ener-
gia isotermicamente indisponível, visto que o sistema não
pode transferir nenhuma parte dela sem uma redução na
temperatura (assumindo que não ocorra qualquer alteração
física ou química). A energia isotermicamente indisponível
de qualquer sistema aumenta com a temperatura, visto que
a energia da agitação molecular e atômica aumenta com a
temperatura. Quantitativamente, a energia isotérmica in-
disponível de um sistema particular é dada por ST, em que
T é a temperatura absoluta e S é a entropia.
O que é a entropia? A reflexão sobre a natureza da
energia isotermicamente indisponível sugere que, para uma
determinada temperatura, a quantidade dessa energia será
maior quanto mais átomos e moléculas forem livres para
se mover e para vibrar – ou seja, quanto mais caótico for o

sistema. Por outro lado, o arranjo ordenado dos átomos em
um cristal, com um lugar para cada um e cada um em seu
lugar, corresponde a um estado de baixa entropia. Em zero
absoluto, quando todo o movimento cessa, a entropia de
uma substância pura é igualmente zero. Essa afirmação é, às
vezes, denominada terceira lei da termodinâmica.
Uma molécula grande, uma proteína, por exemplo,
na qual muitos tipos de movimentos podem ocorrer, terá
quantidades consideráveis de energia armazenada dessa
maneira – mais do que uma molécula de aminoácido. Con-
tudo, a entropia da molécula de proteína será menor do que
a dos aminoácidos constituintes nos quais ela pode se dis-
sociar, devido às restrições impostas aos movimentos desses
aminoácidos, já que eles são parte da estrutura maior. Qual-
quer processo que leva ao relaxamento dessas restrições
aumenta a liberdade de movimento e, portanto, a entropia.
Essa é a tendência universal dos processos espontâne-
os, conforme definido na segunda lei; é por isso que as va-
liosas enzimas armazenadas no refrigerador tendem a de-
compor-se e por que o gelo derrete na água. O aumento em
entropia quando o gelo se liquefaz na água é“compensado”
pela absorção de calor do entorno. Enquanto a variação lí-
quida na entropia do sistema mais seu entorno for positiva,
o processo pode ocorrer espontaneamente. Isso não signi-
fica, necessariamente, que o processo ocorrerá: a taxa é, em
geral, determinada por fatores cinéticos independentes da
variação entrópica. Tudo que a segunda lei determina é que
o destino das pirâmides é desintegrar-se em areia, enquanto
a areia nunca irá se agrupar em uma pirâmide; a lei não diz
quão rapidamente isso deve acontecer.
Um processo é espontâneo se a ΔS do sistema e
seu entorno for positiva
Não há nada místico na entropia – ela é uma quantidade
termodinâmica como outra qualquer, medida experimen-
talmente e expressa em unidades de entropia. Um método
de quantificá-la é por meio da capacidade de calor de um
sistema, a quantidade de energia necessária para elevar a
temperatura em 1°C. Em alguns casos, a entropia pode ser
calculada a partir de princípios teóricos, embora apenas
para moléculas simples. Para os propósitos do livro, o que
importa é o sinal da variação na entropia, S: um processo
pode ocorrer espontaneamente quando a S do sistema e
seu entorno é positiva; um processo para o qual a S é ne-
gativa não pode ocorrer espontaneamente, mas o processo
oposto pode; e, para um sistema em equilíbrio, a entropia
do sistema mais seu entorno é máxima e a S é zero.
“Equilíbrio” é outra daquelas palavras familiares que
é mais fácil usar do que definir. Seu significado cotidia-
no indica que as forças atuando sobre um sistema estão
igualmente equilibradas, de modo que não há tendência
resultante para mudança; esse é o sentido no qual o termo
“equilíbrio” será utilizado aqui. Uma mistura de substân-
cias químicas pode estar no meio de uma rápida intercon-
versão, mas, se as taxas das reações em um sentido e no
Apêndice 1 • Energia e Enzimas A1-5
sentido oposto forem iguais, não haverá alteração líquida
na composição, e o equilíbrio prevalecerá.
A segunda lei tem sido expressa em muitas versões.
Uma versão impede a existência de máquinas moto-contí-
nuo: uma vez que a energia é, pela segunda lei, degradada
perpetuamente em calor e torna-se isotermicamente inútil
(S > 0), o movimento contínuo requer uma entrada (input)
de energia do exterior. A versão mais célebre e, ao mesmo
tempo, desconcertante, da segunda lei, foi fornecida por R.
J. Clausius (1879):“A energia do universo é constante; a en-
tropia do universo tende em direção ao máximo”.
Como a entropia pode crescer sempre, gerada a partir
de nada? A raiz da dificuldade é verbal, como Klotz (1967)
habilmente esclareceu. Tivesse Clausius definido a entro-
pia com o sinal oposto (correspondendo à ordem, em vez
do caos), sua tendência universal seria diminuir; então, se-
ria óbvio que as variações espontâneas seguissem a dire-
ção que diminui a capacidade para variações espontâneas
subsequentes. Os solutos difundem-se de uma região de
maior concentração para outra de menor concentração; o
calor flui de um corpo aquecido para um frio. Às vezes, es-
sas variações podem ser revertidas por um agente externo
para reduzir a entropia do sistema em consideração, mas
então esse agente externo deve mudar, de modo a reduzir
sua própria capacidade para futuras mudanças. Em resu-
mo, “a entropia é um índice de exaustão; quanto mais um
sistema tiver perdido sua capacidade para variação espon-
tânea, quanto mais esta capacidade tiver sido exaurida,
maior é a entropia” (Klotz, 1967). Inversamente, quanto
mais distante um sistema está do equilíbrio, maior é sua
capacidade para mudar e menor sua entropia. Os seres vi-
vos ocupam a última categoria: uma célula é o epítome de um
estado que está distante do equilíbrio.
Energia livre e potencial químico
Muitas transferências de energia que ocorrem em orga-
nismos vivos são químicas; necessita-se, portanto, de uma
expressão quantitativa para a quantidade de trabalho que
uma reação química pode realizar. Para esse propósito, as
relações que envolvem a variação de entropia no sistema
mais seu entorno são inadequadas. Há necessidade de uma
função que não dependa do entorno, mas que, assim como
S, alcance um mínimo sob condições de equilíbrio e, desse
modo, possa servir tanto como um critério para a exequibi-
lidade de uma reação como para a medição da energia dis-
ponível para a realização de trabalho a partir dela. A função
empregada universalmente para esse propósito é a energia
livre, abreviada como G em homenagem ao físico-químico
do século XIX J. Willard Gibbs, que a introduziu.
ΔG é negativa para um processo espontâneo em
temperatura e pressão constantes
Anteriormente, tratou-se da energia isotermicamente
indisponível, ST. Energia livre é definida como a ener-
A1-6 Apêndice 1 • Energia e Enzimas
gia que é utilizável em condições isotérmicas, pela se-
guinte relação:
 H = G + TS (A1.3)
O termo H, entalpia ou conteúdo calórico, não é completa-
mente equivalente a U, a energia interna (ver Equação A1.2).
Para ser exato, H é uma medida da variação total de ener-
gia, incluindo o trabalho que pode resultar de variações no
volume durante a reação, enquanto U exclui esse trabalho.
(Um pouco adiante, será retomado o conceito de entalpia.)
Entretanto, no contexto biológico, geralmente enfocam-se
reações em solução, para as quais variações em volume são
desprezíveis. Para a maioria dos objetivos, então,
 U G + TS (A1.4)
e um composto a partir de seus elementos e como a G para
 G U – TS (A1.5)
O que torna essa uma relação útil é a demonstração de que,
para todos os processos espontâneos a temperatura e pressão
constantes, G é negativa. Assim, a variação na energia livre é
um critério de exequibilidade. Qualquer reação química que
prossiga com uma G negativa pode ocorrer espontanea-
mente; um processo para o qual a G é positiva não pode
ocorrer, mas a reação pode prosseguir na direção oposta; e
uma reação na qual a G é zero está em equilíbrio, e não
ocorrerá variação líquida. Para temperatura e pressão deter-
minadas, a G depende apenas da composição da mistura
de reação; por isso, a expressão alternativa “potencial quí-
mico” é especialmente apropriada. Novamente, nada é dito
sobre a taxa, apenas sobre a direção. Se uma reação tendo
uma dada G prosseguirá, e em que taxa, é determinado
pela cinética, e não por fatores termodinâmicos.
Há uma relação estreita e simples entre a variação na
energia livre de uma reação química e o trabalho que a
reação pode realizar. Desde que a reação seja reversível,
 G = Wmáx (A1.6)
Isto é, para uma reação se realizando em temperatura e
pressão constantes, – G é uma medida do trabalho máxi-
mo que o processo pode realizar. Mais precisamente, – G
representa o máximo trabalho possível, exclusivo de tra-
balho pressão–volume, e, desse modo, é uma quantidade
de grande importância em bioenergética. Qualquer pro-
cesso seguindo na direção do equilíbrio pode, em princí-
pio, realizar trabalho. Pode-se, por conseguinte, descre-
ver os processos nos quais a G é negativa como aqueles
“que liberam energia”, ou exergônicos. Inversamente,
para qualquer processo se afastando do equilíbrio, G é
positiva, e fala-se de uma reação “que consome energia”,
ou endergônica. Naturalmente, uma reação endergônica
não pode ocorrer: todos os processos reais se movem em
direção ao equilíbrio, com uma G negativa. O conceito
de reações endergônicas, apesar disso, é uma abstração
útil, pois muitas reações biológicas parecem se afastar do
equilíbrio. Um exemplo excelente é a síntese de ATP du-
rante a fosforilação oxidativa, cuja G aparente é tão alta
–1 –1
quanto 67 kJ mol (16 kcal mol ). Claramente, a célula
deve realizar trabalho para tornar a reação total exergôni-
ca. A ocorrência de processos endergônicos na natureza,
portanto, implica que eles sejam acoplados a um segundo
processo, exergônico. Grande parte da bioenergética celu-
lar e molecular diz respeito aos mecanismos pelos quais o
acoplamento de energia é realizado.
0
A variação na energia livre padrão, ΔG , é a
variação na energia livre quando a concentração
de reagentes e produtos é 1 M
Variações na energia livre podem ser medidas experimen-
talmente por métodos calorimétricos. Eles têm sido tabu-
lados de duas formas: como a energia livre de formação de
uma reação específica. É de extrema importância lembrar
que, por convenção, os valores numéricos se referem a um
conjunto específico de condições. A variação na energia livre
padrão, G , refere-se a condições em que todos os reagentes e
0
produtos estão presentes a uma concentração de 1 M; em bio-
química é mais conveniente empregar G ', que é definida
0
da mesma maneira, exceto que o pH é considerado como
7. As condições observadas no mundo real são passíveis
de serem muito diferentes destas, especialmente quanto
às concentrações dos participantes. Para tomar um exem-
plo bem conhecido, G ', para a hidrólise de ATP, é cerca de
0
–1 –1
–33 kJ mol (–8 kcal mol ). No citoplasma, entretanto, as
concentrações reais de nucleotídeos são aproximadamente
3 mM ATP, 1 mM ADP, e 10 mM Pi. Como se pode ver, as
variações na energia livre dependem fortemente das con-
centrações, e a G para a hidrólise de ATP em condições
fisiológicas, portanto, é muito mais negativa do que a G ',
0
–1 –1
aproximadamente –50 a –65 kJ mol (–12 a –15 kcal mol ).
Desse modo, conquanto os valores da G ', para muitas reações
0
sejam facilmente acessíveis, eles não devem ser usados indiscri-
minadamente como um guia do que acontece nas células.
O valor de ΔG é uma função do deslocamento da
reação a partir do equilíbrio
A discussão precedente sobre a energia livre mostra que
deve haver uma relação entre G e a constante de equi-
líbrio de uma reação: no equilíbrio, G é zero, e quanto
mais distante uma reação está do equilíbrio, maior é a G
e mais trabalho a reação pode realizar. A expressão quan-
titativa dessa relação é
 G0 = –RT ln K = –2,3RT log K (A1.7)
em que R é a constante dos gases, T a temperatura absolu-
ta e K a constante de equilíbrio da reação*. Essa equação é
* N. de T. Na literatura físico-química sobre equilíbrio químico, em
português, utiliza-se o termo constante de equilíbrio da reação (Kc)
para a razão entre a multiplicação das concentrações dos produtos
(cada uma elevada ao seu respectivo coeficiente estequiométrico)
sobre a multiplicação dos reagentes (cada uma elevada ao seu res-
pectivo coeficiente estequiométrico) de uma reação química.

uma das ligações mais úteis entre a termodinâmica e a bio-
química e tem uma série de aplicações. Por exemplo, a equa-
ção é facilmente modificada, permitindo o cálculo da varia-
ção na energia livre em outras concentrações que não as das
condições-padrão. Para as reações mostradas na equação
A+BC+D (A1.8)
a variação real na energia livre, G, é dada pela equação
(A1.9)
 A pura
em que os termos entre colchetes referem-se às concen-
trações no tempo da reação. Estritamente falando, deve-
riam ser utilizadas atividades, mas elas geralmente não
são conhecidas em condições celulares, de modo que as
concentrações devem resolver.
A Equação A1.9 pode ser reescrita para tornar sua
importância um pouco mais clara, fazendo q representar
a razão produtos:reagentes, [C][D]/[A][B]. Substituindo
a Equação A1.7 na Equação A1.9, seguido pelo rearranjo,
resulta a seguinte equação:
(A1.10)

Em outras palavras, o valor de G é uma função do afasta-
mento da reação do equilíbrio. A fim de deslocar um sis-
tema do equilíbrio, trabalho deve ser realizado sobre ele e
a G deve ser positiva. Inversamente, um sistema deslo-
cado do equilíbrio pode realizar trabalho sobre outro sis-
tema, desde que os parâmetros cinéticos permitam que a
reação prossiga e exista um mecanismo que acople os dois
sistemas. Quantitativamente, uma reação de mistura a
25°C, cuja composição é uma ordem de grandeza afasta-
da do equilíbrio (log K/q = 1), corresponde a uma variação
–1 –1
na energia livre de 5,7 kJ mol (1,36 kcal mol ). O valor
da G é negativo se a razão produtos:reagentes real for
menor do que a razão de equilíbrio, e positivo se a razão
produtos:reagentes for maior.
O ponto que a G é uma função do deslocamento de
uma reação (na verdade, de qualquer sistema termodinâmi-
co) do ponto de equilíbrio é central para uma compreensão
da bioenergética. A Figura A1.2 ilustra esquematicamente
essa relação para a interconversão química das substâncias A
e B, e a relação reaparecerá brevemente de outras maneiras.
A variação na entalpia mede a energia
transferida como calor
Processos químicos e físicos são quase invariavelmente
acompanhados da geração ou absorção de calor, o que
reflete a variação na energia interna do sistema. A quanti-
dade de calor transferido e o sinal da reação estão relacio-
nados à variação na energia livre, como demonstrado na
Equação A1.3. A energia absorvida ou liberada como calor
em condições de pressão constante é designada como a
variação no conteúdo de calor ou entalpia, H. Os proces-
sos que geram calor, como a combustão, são exotérmi-
Apêndice 1 • Energia e Enzimas A1-7
Energia livre
A B
B pura
0,001K 0,01K 0,1K K 10K 100K 1.000K
Figura A1.2 Energia livre de uma reação química como uma
função do deslocamento do equilíbrio. Imagine um sistema fechado
contendo os componentes A e B nas concentrações [A] e [B]. Os dois
componentes podem ser interconvertidos pela reação A  B, que está
no equilíbrio quando a razão produtos:reagentes, [B]/[A], se equivale
à unidade. A curva mostra qualitativamente como a energia livre,
G, do sistema varia quando o total [A] + [B] é mantido constante,
mas a razão produtos:reagentes é deslocada do equilíbrio. As se-
tas representam esquematicamente a variação na energia livre, G,
para uma pequena conversão de [A] em [B] ocorrendo em razões
produtos:reagentes diferentes. (Segundo Nicholls & Ferguson, 1992.)
cos; aqueles em que o calor é absorvido, como a fusão ou
a evaporação, são referidos como endotérmicos. A oxida-
ção da glicose a CO2 e água é uma reação exergônica (G
0
–1 –1
= –2.858 kJ mol [–686 kcal mol ]). Quando essa reação
ocorre durante a respiração, parte da energia livre é con-
servada por meio de reações acopladas que geram ATP.
A combustão da glicose dissipa a energia livre da reação,
liberando a maior parte dela como calor (H = –2.804 kJ
–1 –1
mol [–673 kcal mol ]).
A bioenergética está preocupada com a transdução de
energia e, portanto, destaca as transferências de energia
livre, mas às vezes a transferência de calor também pode
apresentar significado biológico. Por exemplo, a água tem
–1 –1
um alto calor de vaporização, 44 kJ mol (10,5 kcal mol ) a
25°C, que desempenha um importante papel na regulação
da temperatura foliar. Durante o dia, a evaporação da água
a partir da superfície foliar (transpiração) dissipa o calor
do entorno e auxilia a resfriar a folha. De modo inverso, a
condensação de vapor de água como orvalho aquece a fo-
lha, uma vez que a condensação da água, sendo o reverso
da evaporação, é exotérmica. A função abstrata entalpia é
medida direta da energia trocada na forma de calor.
Reações redox
Oxidação e redução referem-se à transferência de um ou
mais elétrons de um doador para um aceptor, geralmente
outra espécie química; exemplo é a oxidação do ferro fer-
roso pelo oxigênio, que forma ferro férrico e água. Reações
desse tipo exigem uma consideração especial, pois elas de-
sempenham um papel central tanto na respiração como na
fotossíntese.
A1-8 Apêndice 1 • Energia e Enzimas
A variação na energia livre de uma reação de
oxirredução é expressa como o potencial padrão
redox em unidades eletroquímicas
Reações redox podem ser muito bem descritas em termos
de sua variação na energia livre. Contudo, a participação
de elétrons torna conveniente seguir o curso da reação
com instrumentação elétrica e incentiva o uso de uma no-
tação eletroquímica. Isso permite também a análise minu-
ciosa do processo químico em reações oxidantes e reduto-
ras separadas. Para a oxidação do ferro, pode-se escrever
(A1.11)
(A1.12)
(A1.13)
A tendência de uma substância para doar elétrons, sua
“pressão de elétrons”, é medida por seu potencial-padrão
de redução (ou redox), E0, com todos os componentes a
uma concentração de 1 M. Em bioquímica, é mais conve-
niente empregar E’0, que é definido do mesmo modo, ex-
ceto que o pH é 7. Por definição, então, E’0 é a força eletro-
motriz dada por metade de uma célula em que as espécies
reduzidas e oxidadas estão presentes a 1 M, 25°C e pH 7,
em equilíbrio com um eletrodo que pode aceitar reversi-
velmente elétrons de espécies reduzidas. Por convenção,
a reação é escrita como uma redução. O potencial-padrão
de redução do eletrodo de hidrogênio* serve como refe-
rência: em pH 7, ele equivale a –0,42 V. O potencial-pa-
drão redox como definido aqui é geralmente referido na
literatura sobre bioenergética como o potencial médio
(midpoint potential), Em. Um potencial médio negativo
indica um bom agente redutor; oxidantes têm potenciais
médios positivos.
O potencial redox para a redução do oxigênio à água
3+ 2+
é +0,82 V; na redução do Fe a Fe (a direção oposta
àquela da Equação A1.11), +0,77 V. Portanto, pode-se pre-
2+ 3+
dizer que, em condições-padrão, o par Fe –Fe tenderá a
reduzir o oxigênio à água em vez do inverso. Uma mistura
2+ 3+
contendo Fe , Fe e oxigênio provavelmente não esta-
rá em equilíbrio, e a amplitude de seu deslocamento do
equilíbrio pode ser expressa em termos tanto da variação
na energia livre pela Equação A1.13 ou em diferença no
potencial redox, E’0, entre os pares oxidantes e redutores
(+0,05 V no caso da oxidação do ferro). Em geral,
 G0’ = –nF E’0 (A1.14)
em que n é o número de elétrons transferido e F é a cons-
–1 –1
tante de Faraday (23,06 kcal V mol ). Em outras pala-
* O eletrodo-padrão de hidrogênio consiste em platina, sobre a
qual gás hidrogênio é borbulhado a uma pressão de 1 atm. O ele-
trodo é imerso em uma solução contendo íons hidrogênio. Quando
a atividade dos íons hidrogênio é 1, aproximadamente 1 M H+, o
potencial do eletrodo é considerado como 0.
vras, o potencial-padrão redox é uma medida, em uni-
dades eletroquímicas, da variação na energia livre de um
processo de oxidação-redução.
Como as variações na energia livre, o potencial redox
medido em condições diferentes das condições-padrão
depende das concentrações das espécies oxidadas e re-
duzidas, de acordo com a seguinte equação (é importante
observar a similaridade na forma com a Equação A1.9):
(A1.15)
Aqui Eh é o potencial medido em volts e os outros símbo-
los têm seus significados habituais. Daí resulta que o po-
tencial redox em condições biológicas pode diferir subs-
tancialmente do potencial-padrão de redução.
Potencial eletroquímico
Nas seções precedentes, introduziu-se o conceito de que
uma mistura de substâncias cuja composição diverge do es-
tado de equilíbrio representa uma fonte potencial de energia
livre (ver Figura A1.2). De modo inverso, uma quantidade
semelhante de trabalho deve ser exercida sobre uma mistura
em equilíbrio, a fim de afastar sua composição do equilíbrio.
Nesta seção, são examinadas as variações na energia livre
associadas a outros tipos de deslocamento do equilíbrio – a
saber, gradientes de concentração e de potencial elétrico.
O transporte de um soluto neutro contra seu
gradiente de concentração diminui a entropia
do sistema
Considerando um recipiente separado, por uma membra-
na, em dois compartimentos que contêm soluções de um
soluto neutro nas concentrações C1 e C2, respectivamente,
o trabalho necessário para transferir 1 mol do soluto do
primeiro compartimento para o segundo é dado pela se-
guinte equação:
(A1.16)
Essa expressão é análoga à expressão para uma reação quí-
mica (Equação A1.10) e tem o mesmo significado. Se C2 é
maior do que C1, a G é positiva, e trabalho deve ser rea-
lizado para transferir o soluto. Novamente, a variação na
energia livre para o transporte de 1 mol de soluto contra um
gradiente de dez vezes a concentração é 5,7 kJ, ou 1,36 kcal.
O motivo para que trabalho deva ser realizado para mo-
ver uma substância de uma região de menor para uma de
maior concentração é que o processo acarreta uma variação
para um estado menos provável e, portanto, uma redução na
entropia do sistema. Inversamente, a difusão do soluto da re-
gião de maior concentração para aquela de menor ocorre na
direção de maior probabilidade; isso resulta em um aumento
na entropia do sistema e pode prosseguir espontaneamente.
O sinal da G torna-se negativo e o processo pode realizar

a quantidade de trabalho especificado pela Equação A1.16,
desde que exista um mecanismo que acople o processo de
difusão exergônico à realização de trabalho.
O potencial de membrana é o trabalho que deve
ser realizado para mover um íon de um lado
para o outro da membrana
O assunto torna-se um pouco mais complexo se o soluto
em questão transporta uma carga elétrica. A transferência
de um soluto carregado positivamente do compartimento
1 para o compartimento 2 causará, então, uma diferença
na carga que se desenvolve através da membrana: o se-
gundo compartimento torna-se eletropositivo em relação
ao primeiro. Uma vez que cargas iguais se repelem entre
si, o trabalho realizado pelo agente que move o soluto do
compartimento 1 para o compartimento 2 é uma função
da diferença de carga; mais precisamente, ele depende
da diferença no potencial elétrico através da membrana.
Essa diferença, chamada abreviadamente de potencial de
membrana, aparecerá novamente nas páginas seguintes.
O potencial de membrana, E*, é definido como o
trabalho que deve ser realizado por um agente para mover
uma carga de teste de um lado da membrana para o outro.
Quando 1 J de trabalho deve ser realizado para mover 1
coulomb de carga, diz-se que a diferença de potencial é
1 V. O potencial elétrico absoluto de qualquer fase simples
não pode ser medido, mas a diferença de potencial entre
duas fases sim. Por convenção, o potencial de membrana
sempre é dado em referência ao movimento de uma carga
positiva. Ele indica o potencial intracelular em relação ao
do meio extracelular, que é definido como zero.
O trabalho que deve ser realizado para mover 1 mol
de um íon contra um potencial de membrana de E volts
é dado pela seguinte equação:
 G = zF E (A1.17)
em que z é a valência do íon e F é a constante de Faraday.
O valor da G para a transferência de cátions para um
compartimento positivo é positivo e, assim sendo, exige
trabalho. Inversamente, o valor da G é negativo quando
cátions se movem para um compartimento negativo, de
modo que pode ser realizado trabalho. O potencial elétrico
é negativo através da membrana plasmática da maioria das
células; portanto, os cátions tendem a se difundir para dentro,
mas têm que ser “bombeados” para fora.
A diferença de potencial eletroquímico, Δ , inclui
os potenciais de concentração e elétrico
Em geral, íons movendo-se através de uma membrana
estão sujeitos a gradientes tanto de concentração como de
potencial elétrico. Considere, por exemplo, a situação des-
crita na Figura A1.3, que corresponde ao principal even-
* Muitos textos utilizam o termo  para a diferença de potencial
de membrana. Entretanto, para evitar confusão com o uso de 
para indicar o potencial hídrico (ver Capítulo 3), o termo E é utili-
zado aqui e em todo o texto.
Apêndice 1 • Energia e Enzimas A1-9
1
2
+
+ +
+ +
+ +
+
+
+
+ – + + +
+ +
– + +
+
+ – + +
+
+
+
+
Figura A1.3 Transporte contra um gradiente de potencial eletro-
químico. O agente que move o soluto carregado (do compartimento
1 para o compartimento 2) deve realizar trabalho, superando tanto o
gradiente de potencial eletroquímico como o gradiente de concentra-
ção. Em consequência, os cátions no compartimento 2 foram elevados
a um potencial eletroquímico mais alto do que os do compartimento
1. Os ânions que neutralizam as cargas positivas foram omitidos.
to de transdução de energia durante a fotossíntese. Um
cátion de valência z move-se do compartimento 1 para o
compartimento 2, contra um gradiente de concentração
(C2 > C1) e um gradiente de potencial elétrico de mem-
brana (o compartimento 2 é eletropositivo em relação ao
compartimento 1). A variação na energia livre envolvida
nessa transferência é dada pela seguinte equação:
(A1.18)
G é positiva, e a transferência pode prosseguir apenas se
acoplada a uma fonte de energia – nesse caso, a absorção de
luz. Como resultado dessa transferência, pode-se dizer que
os cátions no compartimento 2 têm um potencial eletroquí-
mico maior do que os mesmos íons no compartimento 1.
O potencial eletroquímico para um íon específico é
designado íon.Os íons tendem a fluir de uma região de
maior potencial eletroquímico para uma de menor poten-
cial e, assim procedendo, podem em princípio realizar tra-
balho. A quantidade máxima desse trabalho, desprezan-
do o atrito, é dada pela variação na energia livre dos íons
que fluem do compartimento 2 para o compartimento 1
(ver Equação A1.6) e é numericamente igual à diferença
de potencial eletroquímico,  íon. Esse princípio é a base
de uma grande parte da transdução biológica de energia.
A diferença de potencial eletroquímico,  íon, é con-
venientemente expressa em quilojoules por mol ou qui-
localorias por mol. Entretanto, frequentemente é conve-
niente expressar a força motriz para o movimento iônico
em termos elétricos, com as dimensões de volts ou mili-
volts. Para converter  íon em milivolts (mV), dividem-se
todos os termos da Equação A1.18 por F:
(A1.19)
A1-10 Apêndice 1 • Energia e Enzimas
Um caso importante em questão é a força motriz de pró-
tons, considerada em detalhe no Capítulo 6.
As Equações A1.18 e A1.19 provaram ser de impor-
tância fundamental em bioenergética. Primeiro, elas me-
dem a quantidade de energia que deve ser utilizada no
transporte ativo de íons e metabólitos, uma função im-
portante das membranas biológicas. Segundo, uma vez
que a energia livre das reações químicas é frequentemente
transferida para outras formas, pela geração intermediária
de gradientes de potencial eletroquímico, esses gradien-
tes desempenham um papel fundamental nas descrições
do acoplamento biológico de energia. Deve ser enfatizado
que os termos elétrico e concentração podem ser adicio-
nados, como na Equação A1.18, ou subtraídos, e que a
aplicação das equações a casos específicos requer aten-
ção cuidadosa aos sinais dos gradientes. Deve-se também
observar que as variações na energia livre nas reações
químicas (ver Equação A1.10) são escalares, enquanto as
reações de transporte têm direção, isto é, um aspecto sutil
mas crítico do papel biológico dos gradientes iônicos.
A distribuição de íons no equilíbrio é um importan-
te caso especial da equação eletroquímica geral (Equação
A1.18). A Figura A1.4 mostra uma vesícula ligada à mem-
brana (compartimento 2) que contém uma alta concentra-
ção do sal K2SO4, envolvida por um meio (compartimen-
to 1) contendo uma concentração mais baixa do mesmo
sal; a membrana é impermeável a ânions, mas permite a
passagem livre de cátions. Os íons potássio irão, portanto,
tender a se difundir da vesícula para a solução, enquanto
os ânions sulfato são retidos. A difusão dos cátions gera
um potencial de membrana, com o interior da vesícula
negativo, que restringe a difusão posterior. No equilíbrio,
G e  é igual a zero (por definição). A Equação A1.18
pode ser, então, adaptada para dar a seguinte equação:
(A1.20)
em que C2 e C1 são as concentrações de íons K+ nos dois
compartimentos; z, a valência, é unitária; e E é o poten-
cial de membrana em equilíbrio com o gradiente de con-
centração de potássio.
Essa é uma forma da célebre equação de Nernst. Se-
gundo ela, no equilíbrio, um íon permeante se distribuirá
através da membrana, de modo que força química motriz
(para fora nesta situação) será contrabalançada pela força
elétrica motriz (para dentro). Para um cátion univalente
a 25°C, cada aumento de 10 vezes no fator concentração
corresponde a um potencial de membrana de 59 mV; para
um íon divalente, o valor é 29,5 mV.
A discussão precedente sobre as consequências ener-
géticas e elétricas da translocação de íons ilustra um pon-
to que deve ser claramente compreendido, isto é, que um
potencial elétrico através de uma membrana pode surgir
por dois mecanismos distintos. O primeiro mecanismo,
ilustrado na Figura A1.4, é a difusão de partículas carre-
gadas a favor de gradiente de concentração preexistente,
1
2
+ + +
+ +
+ –
+ – + + +
+ + – + +
+
+ +
+
+ +
+ +
+ + +
+
Figura A1.4 Geração de um potencial elétrico por difusão iônica.
O compartimento 2 tem uma concentração salina maior do que a do
compartimento 1 (os ânions não são mostrados). Se a membrana é
permeável aos cátions, mas não aos ânions, os cátions tenderão a se
difundir do compartimento 2 para o compartimento 1, gerando um
potencial de membrana no qual o compartimento 2 é negativo.
um processo exergônico. Um potencial gerado por esse
processo é descrito como um potencial de difusão ou
como um potencial de Donnan. (Potencial de Donnan é
definido como o potencial de difusão que ocorre no caso-
-limite, no qual o contraíon é completamente impermeá-
vel ou fixado, como na Figura A1.4.) Muitos íons são dis-
tribuídos desigualmente através de membranas biológicas
e diferem bastante em suas taxas de difusão através da
barreira; portanto, os potenciais de difusão sempre contri-
buem para o potencial de membrana observado. Todavia,
na maioria dos sistemas biológicos, o potencial elétrico
medido difere do valor que seria esperado com base na
difusão iônica passiva. Nesses casos, devem-se invocar
bombas eletrogênicas de íons, sistemas de transporte que
conduzem o processo exergônico indicado na Figura A1.3
a expensas de uma fonte externa de energia. Os sistemas
de transporte desse tipo transferem a energia livre de uma
reação química para o potencial eletroquímico de um gra-
diente iônico e desempenham papel primordial no aco-
plamento biológico de energia.
Enzimas: as catalisadoras da vida
As proteínas constituem cerca de 30% do peso seco total
de células vegetais típicas. Se forem excluídos os materiais
inertes, como a parede celular e o amido, que podem repre-
sentar até 90% do peso seco de algumas células, as proteí-
nas e os aminoácidos representam 60 a 70% do peso seco
de células vivas. Como foi visto no Capítulo 1, as estruturas
do citoesqueleto como os microtúbulos e microfilamentos
são compostos de proteína. As proteínas podem também
ocorrer como formas de armazenamento, particularmente
em sementes. Porém, a principal função das proteínas no
metabolismo é a de servir como enzimas, catalisadores bio-
lógicos que aumentam enormemente as taxas das reações
bioquímicas, tornando a vida possível. As enzimas partici-
pam nessas reações, mas elas não são alteradas fundamen-
talmente no processo (Mathews & Van Holde, 1996).

As enzimas têm sido chamadas de “agentes da vida”
– uma expressão bastante apropriada, pois elas controlam
a quase totalidade dos processos vivos. Uma célula típica
contém vários milhares de enzimas diferentes, que con-
duzem uma ampla diversidade de ações. As característi-
cas mais importantes são sua especificidade, que permite
a elas distinguirem-se entre moléculas muito similares, e
sua eficiência catalítica, que é bem maior do que a de ca-
talisadores comuns. A estereoespecificidade das enzimas
é notável, permitindo a elas distinguirem-se não somen-
te entre enantiômeros (estereoisômeros espelhados), por
exemplo, mas entre átomos ou grupos de átomos aparen-
temente idênticos (Creighton, 1983).
Essa capacidade de discriminar entre moléculas seme-
lhantes resulta do fato de que a primeira etapa na catáli-
se enzimática é a formação de um composto firmemente
ligado, um complexo não covalente entre a enzima e o(s)
substrato(s): o complexo enzima-substrato. As reações
catalisadas por enzimas exibem propriedades cinéticas in-
comuns que estão também relacionadas à formação desses
complexos bastante específicos. Outra característica distin-
tiva das enzimas é que elas estão sujeitas a vários tipos de
controle regulatório, variando desde efeitos sutis sobre a
atividade catalítica por moléculas efetoras (inibidoras ou ati-
vadoras) à regulação da síntese enzimática e à degradação,
pelo controle da expressão gênica ou pelo turnover proteico.
As enzimas são singulares na enorme intensifica-
ção de taxas que elas proporcionam, ordens de grandeza
maior do que aquelas efetivadas por outros catalisado-
res. As ordens típicas de aumento de taxas de reações
catalisadas por enzimas em relação àquelas de reações
não catalisadas correspondentes são 108 a 1012. Muitas
enzimas convertem cerca de milhares de moléculas de
substrato em produto em 1 s. Algumas convertem cerca
de 1 milhão!
Diferente da maioria dos outros catalisadores, as
enzimas funcionam à temperatura e à pressão atmos-
férica ambientes e geralmente em uma estreita faixa de
pH próxima à neutralidade (há exceções; p. ex., proteases
vacuolares e ribonucleases são mais ativas em pH 4 a 5).
Algumas enzimas são capazes de funcionar em condições
extremamente graves, como, por exemplo, as pepsinas, a
enzima degradadora de proteínas do estômago, que têm
um pH ideal por volta de 2,0, e a hidrogenase da arque-
obactéria hipertermofílica (“afinidade extrema ao calor”)
Pyrococcus furiosus, que oxida H2 a uma temperatura ideal
maior do que 95°C (Bryant & Adams, 1989). A presença
dessas enzimas termoestáveis notáveis permite à Pyrococ-
cus crescer otimamente a 100°C.
As enzimas são geralmente denominadas segundo
seus substratos pela adição do sufixo “-ase” – por exemplo,
-amilase, malato desidrogenase, -glicosidase, fosfoenol-
piruvato carboxilase, peroxidase. Milhares de enzimas já
foram descobertas e novas têm sido encontradas todos os
dias. Cada enzima foi denominada de um modo sistemá-
tico pela União Internacional de Bioquímica (International
Apêndice 1 • Energia e Enzimas A1-11
Union of Biochemistry) com base na reação que ela cata-
lisa. Além disso, muitas enzimas têm nomes populares ou
comuns. Assim, o nome popular rubisco refere-se à D-ri-
bulose-1,5-bifosfato carboxilase/oxigenase (EC 4.1.1.39*).
A versatilidade das enzimas reflete suas propriedades
como proteínas. A natureza das proteínas permite tanto o
reconhecimento por uma enzima de seu substrato espe-
cífico como o aparato catalítico necessário para conduzir
diversas e rápidas reações químicas (Stryer, 1995).
Proteínas são cadeias de aminoácidos unidos por
ligações peptídicas
As proteínas são compostas por longas cadeias de ami-
noácidos (Figura A1.5) unidas por ligações amida, co-
nhecidas como ligações peptídicas (Figura A1.6). As
20 diferentes cadeias laterais de aminoácidos dotam as
proteínas de uma grande diversidade de grupos que têm
propriedades químicas e físicas diferentes, incluindo gru-
pos hidrofílicos (polares) e hidrofóbicos (apolares), grupos
polares carregados e neutros, e grupos ácidos e básicos.
Essa diversidade, junto com a relativa flexibilidade da li-
gação peptídica, a elas permite a tremenda variação nas
propriedades das proteínas, desde a rigidez e inativida-
de de proteínas estruturais à reatividade de hormônios,
catalisadores e receptores. O aspecto tridimensional da
estrutura proteica proporciona a discriminação precisa no
reconhecimento de ligantes, as moléculas que interagem
com as proteínas, como mostrado pela capacidade das
enzimas para reconhecer seus substratos e de anticorpos
para reconhecer antígenos, por exemplo.
Todas as moléculas de uma proteína específica têm a
mesma sequência de resíduos de aminoácidos, determi-
nada pela sequência de nucleotídeos no gene que codifica
aquela proteína. Embora a proteína seja sintetizada como
uma cadeia linear pelo ribossomo, após a liberação ela se
dobra espontaneamente em uma forma tridimensional
específica, o estado nativo. A cadeia de aminoácidos é
chamada um polipeptídeo. O arranjo tridimensional de
átomos na molécula é referido como conformação. As
alterações na conformação não envolvem a ruptura de li-
gações covalentes. A desnaturação envolve a perda de sua
forma tridimensional singular e resulta na perda da ativi-
dade catalítica.
As forças responsáveis pela forma de uma molécula
de proteína são não covalentes (Figura A1.7). Essas in-
terações não covalentes incluem pontes de hidrogênio;
interações eletrostáticas (também conhecidas como liga-
ções iônicas ou pontes salinas); forças de van der Waals
(forças dispersivas), que são dipolos transientes entre
átomos espacialmente próximos; e “ligações” hidrofóbi-
cas – a tendência de grupos apolares de evitar o contato
com água e, portanto, para associarem-se. Além disso,
* O número EC (Enzyme Commission) indica a classe (4 = liase) e
a subclasse (4.1 = clivagem carbono–carbono; 4.1.1 = clivagem da
–
ligação C–COO ).
A1-12 Apêndice 1 • Energia e Enzimas

Grupos R hidrofóbicos (apolares)

COO - COO -
+
COO -
+
H3N C H H3N C H
COO - H3N
+
C H H C CH3
CH2
+
H3N C H CH CH2
CH
CH3 H3C CH3 H3C CH3 CH3

Alanina [A] Valina [V] Leucina [L] Isoleucina [I]

(Ala) (Val) (Leu) (Ile)

COO -
COO - COO -
+
+ + H3N C H
H3N C H H3N C H
CH2 COO -
COO - CH2 CH2 +
H CH2 H3N C H COO -
+
C
+
H2N CH2 S CH2 H3N C H
NH
H2C CH2 CH3 SH H

Prolina [P] Fenilalanina [F] Triptofano [W] Metionina [M] Cisteína [C] Glicina [G]
(Pro) (Phe) (Trp) (Met) (Cys) (Gly)

Grupos R hidrofílicos (polares)

Grupos R neutros
COO -
COO - +
H3N C H
COO -
+
H3N C H
-
+ COO - COO
CH2
H3N C H CH2 + +
H3N C H H3N C H
CH2 CH2
C H C OH H C OH
C
H2N O H2N O H CH3 OH

Asparagina [N] Glutamina [G] Serina [S] Treonina [T] Tirosina [Y]
(Asn) (Gln) (Ser) (Thr) (Tyr)

Grupos R básicos Grupos R ácidos

COO -
COO - +
+ H3N C H
H3N C H
CH2 COO -
CH2 + COO -
CH2 H3N C H
COO -
+
CH2 H3N C H
CH2 CH2 +
CH2 H3N C H CH2
NH C
CH2 :NH CH2 CH2
C HC
+ NH3 H2N NH2
+
:N CH COO - COO -

Lisina [K] Arginina [R] Histidina [H] Aspartato [D] Glutamato [E]
(Lys) (Arg) (His) (Asp) (Glu)

Figura A1.5 Estruturas, nomes, códigos de uma única letra (en-

tre colchetes), abreviaturas com três letras e classificação dos ami-
noácidos.
 Apêndice 1 • Energia e Enzimas A1-13

(A) R1 O R2 O pontes dissulfeto covalentes são encontradas em muitas

+ proteínas. Embora cada um desses tipos de interações não
H3N C C N C C
covalentes seja fraco, há tantas interações não covalen-
O–
H H H tes nas proteínas que, na totalidade, elas contribuem para
uma grande quantidade de energia livre para a estabiliza-
Ligação peptídica ção da estrutura nativa.

A estrutura das proteínas é hierárquica

(B) ψ φ As proteínas são compostas de unidades organizacionais
H H O H O H O com complexidade crescente. A estrutura primária de
uma proteína refere-se à sequência de resíduos de ami-
...N C C N Cα C N C C ... noácidos. A estrutura secundária refere-se a unidades
estruturais locais regulares, geralmente mantidas unidas
R1 H R2 H R3
por pontes de hidrogênio. As mais comuns dessas unida-
des são -hélice e folhas  formando folhas -pregueadas
Unidade rígida
paralelas e antiparalelas e voltas (Figura A1.8). A estrutura
Figura A1.6 (A) A ligação peptídica (amida) une dois aminoáci- terciária – a estrutura tridimensional final do polipeptídeo
dos. (B) Sítios de rotação livre, dentro dos limites do impedimento – resulta do empacotamento da estrutura secundária e da
estérico, nas ligações N–C e C–C ( e ); não há rotação sobre a exclusão do solvente. A estrutura quaternária refere-se à
ligação peptídica devido ao seu caráter de ligação dupla.
associação de dois ou mais polipeptídeos separados, for-
mando complexos. Quando associados dessa maneira, os
polipeptídeos individuais são chamados de subunidades.
Uma molécula de proteína consistindo de uma gran-
de cadeia polipeptídica isolada é composta de várias uni-
dades dobradas independentemente, conhecidas como
domínios. Geralmente, os domínios têm uma massa
molecular de cerca de 104 dáltons. O sítio ativo de uma
enzima, isto é, a região à qual se liga o substrato e ocorre a
reação catalítica, é geralmente localizado na interface en-
tre dois domínios. Por exemplo, na enzima papaína (uma
protease vacuolar encontrada no mamão e representativa

PONTES DE HIDROGÊNIO ATRAÇÕES ELETROSTÁTICAS

Entre elementos de
união peptídica +
H C R
CH2 COO– H3N CH2 CH2 CH2 CH2

H C R N H

N H O C

O C H C R

H C R INTERAÇÕES DE VAN DER WAALS

Entre
– + – +
cadeias laterais NH2

CH2 OH O C CH2 + – + –

– + – +
Serina Asparagina

Figura A1.7 Exemplos de interações não covalentes em proteí-
nas. As pontes de hidrogênio são interações eletrostáticas fracas
envolvendo um átomo de hidrogênio entre dois átomos eletrone-
gativos. Em proteínas, as pontes de hidrogênio mais importantes
são aquelas entre ligações peptídicas. Interações eletrostáticas são
ligações iônicas entre grupos carregados positivamente e nega-
tivamente. As interações de van der Waals são interações dipo-
lo transitórias de curto alcance. As interações hidrofóbicas (não
mostradas) envolvem a reestruturação do solvente água em volta
de grupos não polares, minimizando a exposição da área super-
ficial apolar ao solvente polar; essas interações são conduzidas
pela entropia.
A1-14 Apêndice 1 • Energia e Enzimas

Figura A1.8 Hierarquia da estrutura proteica. (A) Estrutura pri- H

mária: ligação peptídica. (B e C) Estrutura secundária: -hélice (B) e
folha -pregueada antiparalela (C). (D) Estrutura terciária: -hélices,
N
folhas -pregueadas e espirais aleatórias. (E) Estrutura quaternária: R
quatro subunidades.
H C
H
N
H C
C R
C N C
O
H C H O
H
C C C
N
N C O
(A) Estrutura primária
C O
H H
C
N C
O C N
O
H C
H O H O H O H O H
C C
N C C N C C N C C N C C N
N C O C N C C N CC N CC N C C
C H H H H
O H O O O O
C H
N C
C N H H H H
O O O O O O
C C C C
H C C N C N C N C N C N C N C N C N
H C C C C C
C O O O O C
N H H H H
N C O

O (C) Estrutura secundária (folha β-pregueada)

(grupos R não mostrados)
(B) Estrutura secundária (α-hélice)
(grupos R não mostrados)

(D) Estrutura terciária (E) Estrutura quaternária

de uma grande classe de tiolproteases de plantas), o sí-
tio ativo encontra-se na junção de dois domínios (Figura
A1.9). Hélices, laços e folhas  contribuem para a forma
tridimensional singular dessa enzima.
As determinações da conformação de proteínas têm
revelado que há famílias de proteínas que têm dobras tri-
dimensionais em comum, bem como padrões em comum
de estrutura supersecundária, como --.
As enzimas são proteínas catalisadoras
altamente específicas
Todas as enzimas são proteínas, embora recentemente al-
guns pequenos ácidos ribonucleicos e complexos proteína-
-RNA foram encontrados exibindo comportamento similar
a enzimas no processamento do RNA. As proteínas têm
4 6
massas moleculares que variam de 10 a 10 daltons, po-
dendo ser uma cadeia polipeptídica dobrada única (subuni-

Fenda do
sítio ativo
Domínio 1 Domínio 2
Figura A1.9 A estrutura da papaína, mostrando os dois domí-
nios e o sítio ativo inserido entre eles.
dade ou protômeros) ou oligômeros de várias subunidades
(oligômeros são geralmente dímeros ou tetrâmeros). Nor-
malmente, as enzimas têm somente um tipo de atividade
catalítica associada à mesma proteína; isoenzimas ou iso-
zimas são enzimas com função catalítica similar com dife-
rentes estruturas e parâmetros catalíticos, codificadas por
genes diferentes. Por exemplo, várias isoenzimas diferentes
foram encontradas para peroxidase, uma enzima de paredes
celulares vegetais envolvida com a síntese de lignina. Uma
isoenzima de peroxidase foi também localizada nos vacúo-
los. As isoenzimas podem exibir especificidade para tecidos
e mostrar regulação do desenvolvimento.
As enzimas frequentemente contêm um grupo pros-
tético não proteico ou cofator, necessário para a atividade
biológica. A associação de um cofator com uma enzima
depende da estrutura tridimensional da proteína. Uma
vez ligado à enzima, o cofator contribui para a especifi-
cidade da catálise. Exemplos típicos de cofatores são íons
metálicos (p. ex., zinco, ferro, molibdênio), grupos heme
ou agrupamentos ferro-enxofre (especialmente em en-
zimas de oxidação-redução) e coenzimas (p. ex., nicoti-
namida adenina dinucleotídeo [NAD+/NADH], flavina
adenina dinucleotídeo [FAD/FADH2], flavina mononu-
cleotídeo [FMN] e piridoxal fosfato [PLP]). As coenzimas
são geralmente vitaminas ou derivadas de vitaminas e
atuam como transportadoras. Por exemplo, o NAD+ e o
FAD transportam hidrogênios e elétrons em reações re-
dox, a biotina transporta CO2, e o tetra-hidrofolato car-
rega fragmentos de um carbono. A peroxidase tem tanto
heme como grupos prostéticos Ca2+ e é glicosilada; isto é,
ela contém carboidratos ligados covalentemente a cadeias
laterais de asparagina, serina ou treonina. Essas proteínas
são chamadas glicoproteínas.
Apêndice 1 • Energia e Enzimas A1-15
Uma enzima específica catalisará apenas um tipo de
reação química para somente uma classe de molécula – em
alguns casos, para apenas um composto em particular. As
enzimas são também muito estereospecíficas e não geram
subprodutos. Por exemplo, a -glicosidase catalisa a hidró-
lise de -glicosídeos, compostos formados por uma ligação
glicosídica à D-glicose. O substrato deve ter a configuração
anomérica correta: ele deve ser -, não -. Além disso, deve
ter a estrutura de glicose; nenhum outro carboidrato, como
xilose ou manose, pode atuar como substrato para a -gli-
cosidase. Por fim, o substrato deve ter a estereoquímica cor-
reta; nesse caso a configuração D absoluta. A rubisco (D-ri-
bulose-1,5-bifosfato carboxilase/oxigenase) é a enzima mais
abundante do mundo e catalisa a adição do dióxido de car-
bono a D-ribulose 1,5-bifosfato, formando duas moléculas
de 3-fosfo-D-glicerato, a etapa inicial do ciclo C3 redutor do
carbono fotossintético. A rubisco tem especificidade muito
precisa pelo substrato carboidrato, mas ela também catalisa
uma reação oxigenase em que O2 substitui CO2, como foi
discutido mais profundamente no Capítulo 8.
As enzimas reduzem a barreira de energia livre
entre os substratos e os produtos
Os catalisadores aceleram a taxa de uma reação mediante
redução da barreira de energia entre substratos (reagentes)
e produtos, e não são eles próprios gastos na reação, mas
são regenerados. Desse modo, um catalisador aumenta a
taxa de uma reação, mas não afeta a taxa de equilíbrio de
reagentes e produtos, pois as taxas da reação nas duas di-
reções são aumentadas na mesma proporção. É importante
perceber que enzimas não podem provocar a ocorrência de
uma reação não espontânea (energeticamente “ladeira aci-
ma”). Entretanto, muitas reações celulares energeticamen-
te desfavoráveis prosseguem porque elas são acopladas a
uma reação energeticamente mais favorável, geralmente
envolvendo a hidrólise de ATP (Figura A1.10).
A+B C ΔG = +4,0 kcal mol–1
ATP + H2O ADP + Pi + H+ ΔG = –7,3 kcal mol–1
A + B + ATP + H2O C + ADP + Pi + H+ ΔG = –3,3 kcal mol–1
A + ATP A – P + ADP
A – P + B + H2O C + H+ + Pi
A + B + ATP + H2O C + ADP + Pi + H+
Figura A1.10 Acoplamento da hidrólise de ATP para impulsio-
nar uma reação energeticamente desfavorável. A reação A + B 
C é termodinamicamente desfavorável, enquanto a hidrólise de ATP
para formar ADP e fosfato inorgânico (Pi) é termodinamicamente
muito favorável (tem uma grande G negativa). Por meio de inter-
mediários apropriados, como A-P, as duas reações são acopladas,
produzindo uma reação global que é a soma das reações individuais
e tem uma variação de energia livre favorável.
A1-16 Apêndice 1 • Energia e Enzimas
Figura A1.11 Curvas de energia livre para a mesma reação,
tanto não catalisada como catalisada por enzima. Assim como um
catalisador, uma enzima reduz a energia livre de ativação do estado
de transição entre os substratos e produtos em comparação com
aquela da reação não catalisada. Ela faz isso pela formação de vários
complexos e intermediários, como complexos enzima-substrato e
enzima-produto. O estado de energia livre fundamental do com-
plexo enzima-substrato na reação catalisada por enzima pode ser
maior do que aquela do substrato na reação não catalisada, e a
energia livre do estado de transição do substrato ligado à enzima
será significativamente menor do que na reação não catalisada cor-
respondente.
As enzimas atuam como catalisadores porque redu-
zem a energia livre de ativação de uma reação. Elas fazem
isso por meio de uma combinação de aumento do estado
fundamental G do substrato e reduzindo a G do esta-
do de transição da reação, reduzindo, portanto, a barrei-
ra contra a reação (Figura A1.11). A presença da enzima
leva a uma nova rota de reação que é diferente daquela da
reação não catalisada.
A catálise ocorre no sítio ativo
O sítio ativo de uma molécula enzimática é geralmente
uma pequena fenda ou bolsa na superfície (ou próximo
a ela) da enzima. É conveniente considerar o sítio ativo
como composto por dois componentes: o sítio de ligação
do substrato (que atrai e posiciona o substrato) e os gru-
pos catalíticos (as cadeias laterais reativas de aminoáci-
dos ou cofatores, que conduzem as reações de ruptura e
de formação de ligações envolvidas).
A ligação do substrato ao sítio ativo envolve inicial-
mente interações não covalentes entre o substrato e tan-
to as cadeias laterais como as ligações peptídicas da pro-
(A)
D-Glicose
Sítio ativo
Figura A1.12 Alteração conformacional na hexoquinase, in-
duzida pelo primeiro substrato da enzima, D-glicose. (A) Antes da
ligação à glicose. (B) Após a ligação à glicose. A ligação de glicose
à hexoquinase induz uma mudança conformacional em que os dois
domínios principais ficam juntos, próximo à fenda que contém o
Estado de transição
Não catalisada
Energia livre
Catalisada por enzima
Energia livre
de ativação
Substrato
Produto
Progresso da reação
teína. O resto da estrutura proteica fornece uma forma
de posicionamento do substrato e dos sítios catalíticos,
flexibilidade para variações conformacionais e controle
regulador. A forma e a polaridade do sítio de ligação res-
pondem por grande parte da especificidade das enzimas,
e há complementariedade entre a forma e a polaridade
do substrato e as do sítio ativo. Em alguns casos, a li-
gação do substrato induz uma mudança conformacional
no sítio ativo da enzima. A mudança conformacional é
especialmente comum onde há dois substratos. A liga-
ção do primeiro substrato aciona uma mudança confor-
macional da enzima que resulta na formação do sítio de
ligação para o segundo substrato. A hexoquinase é um
bom exemplo de uma enzima que exibe esse tipo de al-
teração conformacional (Figura A1.12).
(B)
sítio ativo. Essa mudança configura o sítio de ligação para o segun-
do substrato, ATP. Dessa maneira, a enzima evita hidrólise inútil de
ATP mediante proteção dos substratos do solvente aquoso. A reação
global é a fosforilação da glicose e a formação de ADP.

Os grupos catalíticos são geralmente as cadeias laterais
de aminoácidos e/ou cofatores que podem funcionar como
catalisadores. Exemplos comuns de grupos catalíticos áci-
dos são (–COOH das cadeias laterais do ácido aspártico ou
do ácido glutâmico, imidazol da cadeia lateral da histidina),
–
básicos (–NH2 da lisina, imidazol da histidina, –S da cis-
–
teína), nucleofílicos (imidazol da histidina, –S da cisteína,
–OH da serina) e eletrofílicos (frequentemente íons metá-
2+
licos, como Zn ). Os grupos catalíticos ácidos funcionam
mediante doação de um próton, os básicos por receber um
próton. Os grupos catalíticos nucleofílicos formam uma li-
gação covalente transitória com o substrato.
O fator decisivo na catálise é a interação direta entre
a enzima e o substrato. Em muitos casos, há um interme-
diário que contém uma ligação covalente entre a enzima
e o substrato. Embora os detalhes do mecanismo catalíti-
co difiram de um tipo de enzima para outro, um número
limitado de características está envolvido em todas elas.
Essas propriedades incluem a catálise ácido-base, a catá-
lise eletrofílica ou nucleofílica e a alteração do estado fun-
damental por meio de forças eletrostáticas ou mecânicas
sobre o substrato.
Uma equação cinética simples descreve uma
reação catalisada por enzima
Sistemas catalisados por enzimas frequentemente exibem
uma forma especial de cinética, denominada cinética de
Michaelis-Menten, que é caracterizada por uma relação
hiperbólica entre a velocidade de reação, v, e a concentra-
ção do substrato, [S] (Figura A1.13). Esse tipo de curva é
conhecido como uma curva de saturação, pois, quando a
enzima se torna saturada com o substrato (i.e., cada molé-
cula da enzima tem uma molécula do substrato associada
a ela), a taxa se torna independente da concentração do
substrato. A cinética de saturação indica que um processo
de equilíbrio precede a etapa limitante da taxa:
em que E representa a enzima, S o substrato, P o produto
e ES o complexo enzima-substrato. Assim, quando a con-
centração de substrato é aumentada, será alcançado um
ponto em que todas as moléculas da enzima estarão na
forma do complexo ES, e a enzima estará saturada com
o substrato. Uma vez que a taxa da reação depende da
concentração de ES, a taxa não aumentará mais, pois não
poderá haver concentração maior de ES.
Quando uma enzima é misturada com um excesso
grande de substrato, haverá um período inicial muito cur-
to (geralmente milissegundos) durante o qual as concen-
trações do complexo enzima-substrato e dos intermediá-
rios crescem até certos níveis; esse período é conhecido
como estado pré-estacionário. Uma vez estabelecidos,
os níveis de intermediários permanecem relativamente
constantes até que o substrato seja esgotado; esse período
é conhecido como estado estacionário.
Apêndice 1 • Energia e Enzimas A1-17
Vmáx
Velocidade inicial (v)
Vmáx [S]
v=
1/2V
máx Km + [S]
Km
Concentração do substrato[S]
Figura A1.13 Gráfico da velocidade inicial, v, versus a concen-
tração do substrato, [S], para uma reação catalisada por enzima.
A curva é hiperbólica. A velocidade máxima, Vmáx, ocorre quando
todas as moléculas de enzima estão completamente ocupadas pelo
substrato. O valor de Km, definido como a concentração de substra-
to em 1/2Vmáx, é um reflexo da afinidade da enzima pelo substrato.
Quanto menor o valor de Km, maior afinidade terá a ligação.
Normalmente, os valores de cinética enzimática são
medidos no estado estacionário, e essas condições ge-
ralmente prevalecem na célula. Para muitas reações ca-
talisadas por enzimas, a cinética nas condições do estado
estacionário pode ser descrita por uma expressão simples
conhecida como a equação de Michaelis-Menten:
(A1.21)
em que v é a taxa ou velocidade observada (em unida-
des como moles por litro por segundo), Vmáx é a velocida-
de máxima (em concentração infinita de substrato) e Km
(geralmente medido em unidades de molaridade) é uma
constante característica de determinado sistema enzima-
-substrato e está relacionada à constante de associação da
enzima com o substrato (ver Figura A1.13). Km representa
a concentração do substrato necessária para semissatu-
rar a enzima e, portanto, a concentração do substrato em
Vmáx/2. Em muitos sistemas celulares, a concentração habi-
tual do substrato está na vizinhança do Km. Quanto menor
o valor do Km, maior a afinidade da enzima pelo substrato.
Os valores típicos para o Km estão na faixa de 10–6 a 10–3 M.
Pode-se obter facilmente os parâmetros Vmáx e Km pelo
ajuste experimental de dados à equação de Michaelis-
-Menten, tanto pelo ajuste da curva por computador como
pela forma linearizada da equação. Um exemplo de uma
forma linearizada da equação é a representação duplo re-
cíproco de Lineweaver–Burk mostrada na Figura A1.14A.
Quando dividido pela concentração da enzima, o valor de
Vmáx resulta no número de rotações, o número de molé-
culas de substrato convertidas em produto por unidade de
A1-18 Apêndice 1 • Energia e Enzimas
1/v
Km
Intercepção 1 Inclinação =
do eixo x = – Vmáx
Km Intercepção
1
do eixo y = –
Vmáx
1/[S]
(A) Reação catalisada por enzima não inibida (B) Inibição competitiva
Figura A1.14 Diagramas duplo recíprocos de Lineweaver-Burk.
Um gráfico de 1/v versus 1/[S] produz uma linha reta. (A) A reação
catalisada por enzima não inibida mostrando o cálculo de Km a partir
da interceptação do eixo x e de Vmáx a partir da interceptação do eixo
y. (B) O efeito de um inibidor competitivo sobre os parâmetros Km e
Vmáx. O Km aparente é aumentado, mas a Vmáx não é alterada. (C) Um
inibidor não competitivo reduz Vmáx, mas não tem efeito sobre o Km.
tempo por molécula de enzima. Os valores do número de
rotações típicos variam de 102 a 103 s–1.
As enzimas estão sujeitas a vários tipos
de inibição
Qualquer agente que diminua a velocidade de uma rea-
ção catalisada por enzima é chamado um inibidor. Os ini-
bidores podem exercer seus efeitos de muitas maneiras
diferentes. Em geral, se a inibição é irreversível, o com-
posto é chamado inativador. Outros agentes podem au-
mentar a eficiência de uma enzima; eles são chamados
ativadores. Inibidores e ativadores são muito importan-
tes na regulação celular de enzimas. Muitos inseticidas e
herbicidas agriculturalmente importantes são inibidores
enzimáticos. O estudo da inibição enzimática pode forne-
cer informação útil sobre os mecanismos cinéticos, a na-
tureza dos intermediários e complexos enzima-substrato,
o mecanismo químico de ação catalítico, bem como a re-
gulação e o controle de enzimas metabólicas. Além disso,
o estudo dos inibidores de potenciais enzimas-alvo é es-
sencial para a concepção racional de herbicidas.
Os inibidores podem ser classificados como reversí-
veis ou irreversíveis. Os inibidores irreversíveis formam
ligações covalentes com uma enzima ou a desnaturam.
Por exemplo, o iodoacetato (ICH2COOH) inibe irre-
versivelmente tiolproteases, como a papaína, mediante
alquilação do grupo –SH do sítio ativo. Uma classe de
inibidores irreversíveis é a dos chamados marcadores de
afinidade ou agentes modificadores direcionados ao sítio
ativo, porque sua estrutura direciona-os ao sítio ativo. Um
exemplo é a clorometil tosila-lisina cetona (tosyl-lysine
chloromethyl ketone, TLCK), que inativa irreversivelmente
a papaína. A parte tosila-lisina do inibidor se asseme-
lha à estrutura do substrato e assim se liga ao sítio ativo.
A parte clorometil cetona do inibidor ligado reage com a
Inibida Inibida
1/v 1/v
Não inibida Não inibida
1/[S] 1/[S]
(C) Inibição não competitiva
cadeia lateral de histidina do sítio ativo. Esses compostos
são muito úteis nos estudos da mecânica de enzimas, mas
eles têm uso prático limitado como herbicidas, devido a
sua reatividade química que pode ser prejudicial à planta.
Os inibidores reversíveis formam ligações fracas, não
covalentes com a enzima, e seus efeitos podem ser competi-
tivos, não competitivos ou mistos. Por exemplo, o herbicida
glifosato (Roundup®), de largo espectro amplamente uti-
lizado, funciona inibindo competitivamente uma enzima-
-chave na biossíntese de aminoácidos aromáticos, a 5-enol-
piruvilchiquimato-3-fosfato (EPSP) sintase. A resistência
ao glifosato foi recentemente alcançada por engenharia
genética de plantas que são capazes de superexpressarem a
EPSP sintase (Donahue et al., 1995).
INIBIÇÃO COMPETITIVA Inibição competitiva é a forma
mais simples e mais comum de inibição reversível. Ela ge-
ralmente se origina da ligação do inibidor ao sítio ativo com
uma afinidade similar ou mais forte do que a do substrato.
Desse modo, a concentração efetiva da enzima é diminuída
pela presença do inibidor, e a reação catalítica será mais len-
ta do que se não houvesse inibidor. A inibição competitiva
é em geral baseada no fato de que a estrutura do inibidor se
assemelha àquela do substrato; por isso, a forte afinidade
do inibidor pelo sítio ativo. A inibição competitiva também
pode ocorrer em enzimas alostéricas, em que o inibidor se
liga a um sítio distante da enzima, causando uma alteração
conformacional que altera o sítio ativo e impede a ligação
normal do substrato. Esse sítio de ligação é chamado sítio
alostérico. Nesse caso, a competição entre o substrato e o
inibidor é indireta.
A inibição competitiva resulta em um aumento aparen-
te no Km e não tem efeito sobre a Vmáx (Figura A1.14B). Por
medição do Km aparente como uma função da concentração
do inibidor, pode-se calcular o Ki, a constante de inibição,
que reflete a afinidade da enzima pelo inibidor.
INIBIÇÃO NÃO COMPETITIVA Na inibição não competi-
tiva, o inibidor não compete com o substrato pela ligação
ao sítio ativo. Em seu lugar, ele pode se ligar a outro sítio
da proteína e obstruir o acesso do substrato ao sítio ativo,
alterando, portanto, as propriedades catalíticas da enzi-
ma, ou ele pode se ligar ao complexo enzima-substrato
e, assim, alterar a catálise. A inibição não competitiva é
 Apêndice 1 • Energia e Enzimas A1-19

(A) Figura A1.15 Curvas de pH e temperatura para reações enzi-

máticas típicas. (A) Os traçados de muitas reações catalisadas por
enzima mostram contornos campanulados da velocidade versus
pH. O ponto de inflexão em cada curva corresponde ao pKa de um
grupo ionizante (i.e., o pH no qual o grupo ionizante está 50%
Velocidade inicial

dissociado) no estado ativo. (B) A temperatura causa um aumento

exponencial na velocidade de reação até que o máximo seja alcan-
çado. Além do ideal, a desnaturação térmica diminui drasticamen-
te a velocidade.

um ácido e outra para o grupo atuando como base (Figura

A1.15A). Embora os efeitos do pH sobre a catálise enzi-
mática reflitam geralmente a ionização do grupo catalítico,
eles podem também refletir uma mudança conformacional
3 4 5 6 7 8 9 da proteína, dependente do pH, que leva à perda de ativi-
pH dade como consequência da alteração do sítio ativo.
(B) A dependência da temperatura da maioria das rea-
ções químicas também se aplica às reações catalisadas
por enzimas. Portanto, a maioria das reações catalisadas
por enzimas mostra um aumento exponencial na taxa
com o aumento da temperatura. Entretanto, uma vez
Velocidade inicial

que as enzimas são proteínas, outro fator fundamental

entra em cena – a saber, a desnaturação. Após certa tem-
peratura ser alcançada, as enzimas exibem uma redução
muito rápida na atividade como um resultado do início
da desnaturação (Figura A1.15B). A temperatura na qual
a desnaturação se inicia e, portanto, na qual a atividade
catalítica é perdida, varia com a enzima específica e com
as condições ambientais, como o pH. Frequentemente, a
desnaturação inicia por volta de 40 a 50°C e é completa
0 10 20 30 40 50 60 acima de cerca de 10°C.
Temperatura (ºC)
Sistemas cooperativos aumentam a sensibilidade
ao substrato e são geralmente alostéricos
observada frequentemente na regulação de enzimas me- As células controlam rigorosamente as concentrações da
tabólicas. Pode-se diagnosticar esse tipo de inibição pois maioria dos metabólitos. Para manter esse controle rigo-
o Km não é afetado, enquanto a Vmáx decresce na presença roso, as enzimas que controlam a interconversão metabó-
de quantidades crescentes do inibidor (Figura A1.14C). lica devem ser muito sensíveis. A partir de um gráfico da
velocidade versus concentração do substrato (ver Figura
INIBIÇÃO MISTA A inibição mista é caracterizada por efei-
A1.13), pode-se ver que a velocidade de uma reação cata-
tos tanto sobre a Vmáx (que diminui) como sobre o Km (que
lisada por enzima aumenta com a concentração crescente
aumenta). A inibição mista é muito comum e resulta da for-
do substrato até Vmáx. Entretanto, podemos calcular a par-
mação de um complexo consistindo da enzima, do substra-
tir da equação de Michaelis-Menten (Equação A1.21) que
to e do inibidor que não se decompõe nos produtos.
o aumento da velocidade de uma reação catalisada por
O pH e a temperatura afetam a taxa das reações enzima de 0,1 Vmáx para 0,9 Vmáx requer um incremento
catalisadas por enzimas enorme (81 vezes) na concentração de substrato:
A catálise enzimática é muito sensível ao pH. Essa sensi-
bilidade é facilmente compreendida quando se considera
que os grupos catalíticos fundamentais são em geral íons
ionizáveis (imidazol, carboxila, amina) e que eles são ca-
taliticamente ativos apenas em seu estado ionizado. Por
exemplo, o imidazol atuando como uma base será fun-
cional apenas em valores de pH acima de 7. Gráficos das
taxas de reações catalisadas por enzimas versus o pH são
geralmente campanulados, correspondendo a duas curvas
sigmoides, uma para um grupo ionizável atuando como
A1-20 Apêndice 1 • Energia e Enzimas
Ativador
adicionado
V membrana pode ser descrita pela equação de
Inibidor adicionado
[S]
Figura A1.16 Sistemas alostéricos exibindo curvas sigmoidais
da velocidade versus a concentração do substrato. A adição de um
ativador desvia a curva para a esquerda; a adição de um inibidor a
desvia para a direita.
Esse cálculo mostra que a velocidade da reação é in-
sensível a pequenas variações na concentração do subs-
trato. O mesmo fator aplica-se no caso de inibidores e
inibição. Em sistemas cooperativos, por outro lado, uma
pequena variação em um parâmetro, como a concentra-
ção do inibidor, resulta em uma grande variação na velo-
cidade. Uma consequência de um sistema cooperativo é
que a curva de v versus [S] não é mais hiperbólica, mas
se torna uma sigmoide (Figura A1.16). A vantagem dos
sistemas cooperativos é que uma pequena mudança na
concentração do efetor crítico (substrato, inibidor ou ati-
vador) levará a uma grande variação na velocidade. Em
outras palavras, o sistema se comporta igual a um inter-
ruptor.
A cooperatividade é normalmente observada em
enzimas alostéricas que contêm múltiplos sítios ativos
localizados sobre múltiplas subunidades. Essas enzimas
oligoméricas geralmente ocorrem em dois estados confor-
macionais principais, um ativo e um inativo (ou relativa-
mente inativo). A união de ligantes (substratos, ativadores
ou inibidores) à enzima perturba a posição de equilíbrio
entre as duas conformações. Por exemplo, um inibidor fa-
vorecerá a forma inativa; um ativador favorecerá a forma
ativa. O aspecto cooperativo funciona da seguinte manei-
ra: um evento de cooperação positiva é aquele em que a
união do primeiro ligante torna a ligação do próximo mais
fácil. De modo semelhante, a cooperatividade negativa
significa que o segundo ligante será ligado menos facil-
mente do que o primeiro.
A cooperatividade na ligação ao substrato (homo-
alosteria) ocorre quando a ligação do substrato ao sítio
catalítico de uma subunidade aumenta a afinidade pelo
substrato de um sítio catalítico idêntico localizado em
uma subunidade diferente. Os ligantes efetores (inibido-
res ou ativadores), em contraste, ligam-se a outros sítios
diferentes do sítio catalítico (heteroalosteria). Essa relação
se ajusta bem ao fato de que os produtos finais das rotas
metabólicas, que frequentemente servem como retroini-
bidores, geralmente não possuem semelhança estrutural
com o substrato da primeira etapa.
A cinética de alguns processos de transporte de
Michaelis-Menten
As membranas contêm proteínas que aceleram o movi-
mento de íons específicos ou moléculas orgânicas através
da bicamada lipídica. Algumas proteínas de transporte
de membrana são enzimas, como ATPases, que usam a
energia da hidrólise do ATP para bombear íons através da
membrana. Quando essas reações ocorrem na direção con-
trária, as ATPases mitocondriais e cloroplastídicas podem
sintetizar ATP. Outros tipos de proteínas de membrana
funcionam como transportadores, ligando seu substrato
em um lado da membrana e liberando-o no outro lado.
A cinética de transporte mediado por carregadores
pode ser descrita pela equação de Michaelis-Menten da
mesma maneira que as reações catalisadas por enzimas
(ver Capítulo 6). Em vez de uma reação bioquímica com
um substrato e produto, entretanto, o carregador liga-se
ao soluto e o transfere de um lado de uma membrana
para o outro. Admitindo X como o soluto, podemos escre-
ver a seguinte equação:
Xexterior + carregador  [X-carregador] 
Xinterior + carregador
Uma vez que o carregador pode se ligar ao soluto mais
rapidamente do que ele pode transportar o soluto para o
outro lado da membrana, o transporte de solutos exibe a
cinética de saturação. Isto é, uma concentração é atingi-
da adicionando mais soluto não resulta em uma taxa de
transporte mais rápida (Figura A1.17). Vmáx é taxa máxima
de transporte de X através da membrana; Km é equiva-
lente à constante de ligação do soluto ao carregador. As-
sim como reações catalisadas por enzimas, o transporte
mediado por carregador requer um alto grau de especi-
ficidade estrutural da proteína. O transporte efetivo do
soluto através da membrana envolve, aparentemente,
alterações conformacionais, também similares àquelas de
reações catalisadas por enzimas.
A atividade enzimática é frequentemente
regulada
As células podem controlar o fluxo de metabólitos me-
diante regulação da concentração de enzimas e de sua
atividade catalítica. Pelo uso de ativadores ou inibidores
alostéricos, as células podem modular a atividade enzi-
mática e obter a expressão cuidadosamente controlada da
catálise.
CONTROLE DA CONCENTRAÇÃO ENZIMÁTICA A quanti-
dade de enzima em uma célula é determinada pelas taxas
relativas de sua síntese e sua degradação. A taxa de sín-

Vmáx
Velocidade de transporte
Vmáx
2
Km
Concentração externa do soluto
Figura A1.17 A cinética do transporte, de um soluto através de
uma membrana, mediado por carregador, é análoga àquela de rea-
ções catalisadas por enzimas. Assim, curvas da velocidade de trans-
porte versus a concentração do soluto são hiperbólicas, tornando-
-se assintóticas para a velocidade máxima em alta concentração de
soluto.
tese é regulada ao nível genético por uma diversidade de
mecanismos, que são discutidos detalhadamente na últi-
ma seção deste apêndice.
COMPARTIMENTALIZAÇÃO Enzimas diferentes ou iso-
enzimas com propriedades catalíticas diferentes (p. ex.,
afinidade pelo substrato) podem estar localizadas em
diferentes regiões da célula, como a mitocôndria e o
citosol. De modo semelhante, enzimas associadas a ta-
refas especiais são frequentemente compartimentaliza-
das; por exemplo, as enzimas envolvidas na fotossíntese
são encontradas nos cloroplastos. Os vacúolos contêm
muitas enzimas hidrolíticas, como proteases, ribonucle-
ases, glicosidases e fosfatases, bem como peroxidases. As
paredes celulares contêm glicosidases e peroxidases. As
mitocôndrias são a localização principal das enzimas en-
volvidas na fosforilação oxidativa e no metabolismo de
energia, incluindo as enzimas do ciclo do ácido tricarbo-
xílico (tricarboxylic acid, TCA).
MODIFICAÇÃO COVALENTE O controle por modificação
covalente de enzimas é comum e geralmente envolve sua
fosforilação ou adenililação*, de modo que a forma fos-
forilada, por exemplo, é ativa, e a forma não fosforilada é
inativa. Esses mecanismos de controle são normalmente
dependentes de energia e quase sempre envolvem ATP.
As proteases são normalmente sintetizadas como
precursores inativos, conhecidos como zimogênios ou
proenzimas. Por exemplo, a papaína é sintetizada como
um precursor inativo chamado propapaína e torna-se ati-
vada após a clivagem (hidrólise) de uma ligação peptídi-
* Embora alguns textos se refiram à conjugação de um composto
com o ácido adenílico (AMP) como “adenilação”, o termo quimica-
mente correto é “adenililação”.
Apêndice 1 • Energia e Enzimas A1-21
E F G
A B C D
H I J
Figura A1.18 A inibição por retroalimentação em uma rota me-
tabólica hipotética. As letras (A-J) representam metabólitos e cada
seta representa uma reação catalisada por enzima. A seta em negri-
to para a primeira reação indica que duas enzimas diferentes com
diferentes susceptibilidades ao inibidor estão envolvidas. As linhas
tracejadas indicam metabólitos que inibem enzimas específicas.
A primeira etapa na rota metabólica e os pontos de ramificação
são locais particularmente importantes para o controle por retroa-
limentação.
ca. Esse tipo de modificação covalente evita a degradação
proteolítica prematura de constituintes celulares pela en-
zima recém-sintetizada.
INIBIÇÃO POR RETROALIMENTAÇÃO Deve-se considerar
uma rota metabólica típica com dois ou mais produtos fi-
nais como aquela mostrada na Figura A1.18. O controle
do sistema requer que, se os produtos finais aumentem
demasiadamente, sua taxa de formação seja diminuída.
De modo semelhante, se o reagente A aumentar muito, a
taxa de conversão de A nos produtos deve ser aumentada.
O processo é geralmente regulado pelo controle do fluxo
no primeiro passo da rota e em cada ponto de ramifica-
ção. Os produtos finais, G e J, que podem não ter seme-
lhança com o substrato A, inibem a enzima em A Ø B e no
ponto de ramificação.
Por haver duas enzimas em A Ø B, cada uma inibi-
da por um dos metabólitos finais, mas não inibido pelo
outro, é possível exercer um controle mais fino do que
com apenas uma enzima. A primeira etapa em uma rota
metabólica é geralmente chamada etapa comprometida
(committed step). Nessa etapa, as enzimas estão sujeitas ao
principal controle.
A frutose-2,6-bifosfato desempenha um papel cen-
tral na regulação do metabolismo de carbono nas plantas.
Ela funciona como um ativador na glicólise (a degrada-
ção de açúcares para produzir energia) e um inibidor na
gliconeogênese (a síntese de açúcares). A frutose-2,6-
-bifosfato é sintetizada a partir da frutose-6-fosfato, em
uma reação que requer ATP e é catalisada pela enzima
frutose-6-fosfato 2-quinase. Ela é degradada na reação
inversa catalisada pela frutose-2,6-bifosfatase, que libera
fosfato inorgânico (Pi). Essas duas enzimas estão sujeitas
ao controle metabólico pela frutose-2,6-bifosfato, bem
como por ATP, Pi, frutose-6-fosfato, di-hidroxiacetona
fosfato e 3-fosfoglicerato. O papel da frutose-2,6-bifos-
fato no metabolismo vegetal é discutido em detalhes nos
Capítulos 8 e 12.
A1-22 Apêndice 1 • Energia e Enzimas
Referências
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