Melhoramento Florestal

Melhoramento Florestal

CAPÍTULO 6

Shinitiro Oda1
Eduardo José de Mello2
João Flávio da Silva3
Izabel Christina Gava de Souza4

1
Engenheiro-Agrônomo e Pesquisador da Suzano Papel e Celulose. E-mail: soda@suzano.com.br
2
Engenheiro Florestal e Pesquisador da Suzano Papel e Celulose. E-mail: emello@suzano.com.br
3
Engenheiro Florestal, M.S. e Pesquisador da Suzano Papel e Celulose. E-mail: joaoflavio@suzano.com.br
4
Engenheira Florestal, M.S. E-mail: izcriga@ig.com.br.

1
 Biotecnologia Florestal

2
 Melhoramento Florestal
Introdução
Os incentivos fiscais concedidos, a partir de
1967, ao setor de reflorestamento, em especial com
espécies exóticas de rápido crescimento, tornaram o
gênero Eucalyptus economicamente importante no
Brasil, em virtude de seu rápido crescimento, sua
elevada produtividade e suas várias aplicações.
Segundo Ferreira (1993), a silvicultura
intensiva moderna teve suas origens nos trabalhos
pioneiros de Navarro de Andrade e das equipes da
Cia. Paulista de Estradas de Ferro. Em 1966, a lei de
incentivos fiscais aplicados ao reflorestamento levou
ao aumento da procura por sementes de Eucalyptus
spp., em razão dos resultados das pesquisas realizadas
nos programas de reflorestamento existentes e do
aumento da demanda de madeira. A preocupação com
a qualidade fisiológica e genética das sementes
justificou, em 1969, a vinda do Professor L.D. Pryor
ao Brasil, visita que resultou na reintrodução de
espécies/procedências potenciais, por meio da
importação de sementes, intensificando estudos de
procedências das sementes e reformulando o programa
de melhoramento baseado nas introduções da
FEPASA. O rendimento médio volumétrico das
populações existentes, que era de 13-30 m3/ha/ano,
com as introduções passa a ser de 30-50 m3/ha/ano
(Ferreira, 2005).
Com o fim do subsídio para o setor florestal,
em 1986, as pesquisas básicas deixam de ser
prioridade e o enfoque passa a ser a busca pela árvore
superior, como unidade de propagação clonal,
concentrando-se as pesquisas na propagação por
estaquia, nas técnicas de micropropagação e nos
estudos sobre a microestaquia. Milhares de árvores
são selecionadas nas populações existentes,
propagadas vegetativamente, para serem incluídas
nos jardins clonais, testes clonais e plantios
comerciais clonais (Ferreira e Santos, 1997). O
programa de melhoramento genético sexuado deve
ser a base para fornecer materiais genéticos
melhorados em gerações avançadas de
melhoramento para a propagação clonal.
A seleção desses materiais genéticos
superiores, em programas de melhoramento florestal,
tem sido feita visando às características silviculturais
de interesse, como volume de madeira, forma do
tronco da árvore, qualidade da madeira para usos
múltiplos e resistência às doenças. Características
do aspecto reprodutivo, como capacidade e
periodicidade de florescimento e produção de
sementes, dificilmente são consideradas na seleção.
Atualmente, são desenvolvidos dois projetos
genoma de Eucalyptus spp. no Brasil, Forests e
Genolyptus. O programa de melhoramento clássico
é a base para otimizar a utilização dos resultados
dos atuais estudos sobre o genoma de Eucalyptus
spp. Esses estudos objetivam: (i) definir da amplitude
da base genética, com a utilização desde marcadores
moleculares, para o melhoramento assistido, até a
transformação genética; e (ii) aplicar os resultados
em espécies puras com alta capacidade geral de
combinação (CGC) e em genótipos endogâmicos S1
e S2, na síntese de híbridos. Para isso, as estratégias
de melhoramento genético clássico são aliadas à
aplicação da biotecnologia, com o desenvolvimento
de linhagens endogâmicas em espécies florestais, em
médio e longo prazo, dentro de populações
denominadas nucléolos, utilizando-se o
melhoramento assistido por marcadores moleculares.
Aspectos das estratégias do melhoramento
genético florestal, com ênfase nos eucaliptos, em
técnicas de propagação vegetativa e aplicação de
ferramentas de biotecnologia serão abordados neste
capítulo.
Adaptabilidade das Espécies
A importação de sementes de eucalipto das
melhores procedências, dentro das melhores origens,
e o estabelecimento de testes de espécies/
procedências/progênies proporcionaram a seleção de
materiais genéticos com potencial para adaptação e
produtividade nas condições edafoclimáticas de
diferentes regiões do Brasil. Segundo Ferreira
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 Biotecnologia Florestal
(1992), o programa tradicional de melhoramento
deve priorizar a adaptação, plasticidade e
produtividade das espécies florestais e não apenas
atuar intensivamente na variabilidade natural ainda
existente, visando produzir a “superárvore” para
futuros plantios clonais.
A pesquisa de procedências é fundamental para
o melhoramento de espécies florestais, pois fornece
condições para a escolha correta das melhores fontes
de sementes, permitindo a identificação dos
componentes genéticos e ambientais da variação
fenotípica entre árvores de diferentes origens
geográficas (Torggler, 1987). Segundo Burley (1969),
o principal objetivo prático dos ensaios de
procedências é localizar, de modo mais rápido e
econômico, as procedências que permitam formar
florestas bem adaptadas e produtivas; o segundo
Figura 6.1 - Fluxograma do melhoramento genético sexuado como suporte à seleção de clones (PA- polinização aberta;
PC- polinização controlada).
Muitos estudos têm mostrado, tanto no caso
de espécies florestais como de plantas cultivadas, as
interações entre materiais genéticos e diferentes
ambientes, observando-se que os genótipos
apresentam respostas diferenciadas às condições do
ambiente. Segundo Mori et al. (1986), a
produtividade da floresta está diretamente
relacionada à qualidade do material genético
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objetivo é estabelecer plantios para a produção de
sementes. A formação de populações-base a partir dos
estudos de procedências permite conhecer
adequadamente as variações inter e intra-procedências
quanto ao comportamento silvicultural, às
características de adaptação, variações devidas a
hibridações, variações clinais e ecotípicas,
identificação incorreta do material e problemas ligados
à amostragem populacional. A população-base
estabelecida fornece sementes recombinadas com
qualidades genéticas e fisiológicas adequadas para se
dar continuidade ao programa de melhoramento, bem
como para plantios comerciais. Na Figura 6.1, tem-se
um fluxograma mostrando que o programa de
melhoramento sexuado deve dar sustentabilidade ao
programa assexuado.
utilizado, tendo sua produtividade maximizada
quando bem adaptado às condições ecológicas locais.
Assim, as estratégias de melhoramento florestal
devem considerar os efeitos da interação genótipo x
ambiente (GxA), visando maior produtividade do
material genético, utilizando aqueles com maior
capacidade de adaptação em diferentes locais.
 Melhoramento Florestal
Para Zobel e Talbert (1984), o termo GxA é
usado para descrever a situação em que há mudança
na classificação de comportamento dos genótipos
quando as plantas crescem em diferentes ambientes.
Segundo os autores, dois métodos para reduzir a
interação GxA têm sido utilizados nos programas
de melhoramento: (i) estratificação das áreas dentro
de uma região de melhoramento em sub-regiões com
condições ambientais similares; e (ii) e seleção de
genótipos produtivos e que mostrem pouca interação
com ampla variedade de condições ambientais.
Segundo Cruz e Regazzi (1994), os resultados
de estudos sobre interação GxA não proporcionam
informações pormenorizadas sobre o comportamento
de cada genótipo frente às variações ambientais. Para
obter essas informações, os autores sugerem que sejam
feitas análises de adaptabilidade e estabilidade, as quais
possibilitam identificar os cultivares de comportamento
previsível e que sejam responsivos às variações
ambientais, em condições específicas ou amplas.
Na literatura, são sugeridos vários métodos
de determinação da estabilidade, fundamentados na
interação GxA. Torres (1988) fornece uma extensa
revisão desses métodos. Vencovsky e Barriga (1992),
abordando a análise da estabilidade e adaptabilidade,
dão exemplos de aplicação dos métodos de Eberhart
e Russell (1966), Silva e Barreto (1985) e Cruz et al.
(1989). O método de Eberhart e Russell (1966) foi
utilizado nos estudos de seringueira (Kalil Filho,
1982), Eucalyptus urophylla (Mori et al., 1988,
Esbrisse et al., 1997), Eucalyptus grandis (López e
Fornés, 1997), Pinus palustris (Pires et al., 1984),
Pinus banksiana (Morgenstern e Teich, 1969) e
Pinus taeda (Owino, 1977); os métodos de Finlay e
Wilkinson (1963) e Eberhart e Russell (1966), em
Picea abies Karst. (Clair e Kleinschmit, 1986); o
método de Finlay e Wilkinson (1963), em clones
híbridos de Eucalyptus (Wyk et al., 1989) e em Pinus
elliottii (Shimizu, s.d.).
De acordo com Morais (1980), citado por
Esbrisse et al. (1997), os termos estabilidade e
adaptabilidade têm recebido diversas definições. As
mais aceitas em trabalhos recentes são:
- a estabilidade fenotípica é definida pela capacidade
de os genótipos apresentarem menor sensibilidade
às variações de ambiente;
- a estabilidade de comportamento, diferentemente
da estabilidade fenotípica, é definida pela
capacidade de os genótipos apresentarem um
comportamento altamente previsível, em função
do estímulo ambiental; e
- a adaptabilidade é a capacidade de os genótipos
aproveitarem vantajosamente os estímulos
ambientais.
Cruz e Regazzi (1994), abordando os reflexos
da interação sobre os ganhos de seleção, afirmam
que, quando as interações são significativas entre
genótipos e ambientes, podem-se considerar duas
situações: (i) a interação manifestada é capitalizada,
como ocorre em alguns casos de interações regionais;
e (ii) a interação é um fator perturbador da seleção,
como se observa na maioria das interações temporais.
Para ZobeL e Talbert (1984), quando as
plantas utilizadas nos testes são plantadas em um
local, a interação GxA está contida no efeito
genotípico. Esse fato tem duas conseqüências, se há
interesse na interação GxA: (i) a herdabilidade pode
ser superestimada, resultando na superestimação de
ganhos quando o material selecionado é plantado
num ambiente não-testado; (ii) os genótipos
selecionados num ambiente testado podem não ser
os melhores naqueles não-testados, o que pode
resultar em perdas no ganho genético.
Estudos sobre estimativas de parâmetros
genéticos considerando a interação GxA foram
realizados por: Kageyama (1980), com Eucalyptus
grandis (origem: Coff’s Harbour/Austrália) em cinco
locais – Agudos, Anhembi, Brotas, Lençóis Paulista
e Resende (SP); Pinto Júnior (1984), com progênies
de Eucalyptus urophylla S.T. Blake da Ilha Flores
(Indonésia), em testes conjugados de procedências
e progênies, em quatro locais: Aracruz (ES),
Anhembi (SP), Bom Despacho (MG) e Planaltina
(DF); Mori et al. (1986), com Eucalyptus saligna
(procedência Itatinga/SP) em três locais, a saber:
General Câmara (RS), Brotas (SP) e Bom Despacho
(MG); Mori et al. (1988), com Eucalyptus urophylla,
aos sete anos de idade, procedentes da Ilha Flores
(Indonésia) em quatro locais: Aracruz (ES), Belo
Oriente (MG) Bom Despacho (MG) e Grão Mogol
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 Biotecnologia Florestal
(MG); Carvalho (1989) com Eucalyptus grandis,
na região de São Mateus (ES). Estes estudos mostram
que os efeitos da interação GxA devem ser
considerados nos programas de melhoramento, uma
vez que podem ocorrer perdas nos ganhos esperados
na seleção dos genótipos.
Considerando o ambiente como a presença
ou ausência de adubação fosfatada, pode-se citar o
trabalho de Gava (2001). O autor avaliou a interação
entre material genético e adubação fosfatada em
vinte clones de eucaliptos, visando agrupar os
materiais em classes de eficiência e responsividade
ao fósforo. Os clones foram classificados em
eficientes responsivos, eficientes não-responsivos,
ineficientes responsivos e ineficientes não-
responsivos. Foram avaliados: a altura, o volume
cilíndrico e a área basal das árvores aos dois anos
de idade. Gava observou que não houve interação
entre adubação (com e sem fósforo) e material
genético, baseado em todas as variáveis estudadas.
O desempenho de alguns clones, mesmo sem
fósforo, foi melhor do que o desempenho de outros
na presença de fósforo. Portanto, segundo o autor,
a presença ou ausência de fósforo não afeta de
forma significativa a tendência de resposta dos
clones, ou seja, independentemente da adubação
fosfatada, os melhores clones são os mesmos em
ambas as condições. Essa metodologia permitiu
identificar genótipos estáveis e com potencial de
se manterem entre os melhores na presença ou
ausência de fósforo. Entretanto, para Lin et al.
(1986), esse tipo de estabilidade (o genótipo é
considerado estável se sua resposta ao ambiente é
paralela ao desempenho médio de todos os materiais
genéticos avaliados no teste) é uma medida restrita
e relativa ao grupo de genótipos que foram
avaliados, não podendo ser generalizada, ou seja,
um genótipo estável em determinado grupo não
necessariamente o será na presença de outros
materiais.
Métodos de Melhoramento
Um programa de melhoramento genético deve
ter suas estratégias bem definidas, planejadas em
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curto e longo prazo, obtendo-se a partir dela materiais
genéticos melhorados quanto à produtividade
volumétrica de madeira, à forma do tronco das
árvores, às qualidades desejáveis da madeira para
diferentes fins e à resistência a doenças, insetos e
condições ambientais adversas. Esses materiais
genéticos devem garantir a sustentabilidade dos
plantios comerciais e a continuidade do programa
de melhoramento mediante a seleção feita em
gerações avançadas de árvores e clones superiores.
As estratégias de melhoramento genético de
espécies florestais exóticas têm sido baseadas na
seleção de espécies/procedências e na seleção
individual dentro de populações-base, explorando-
se a variabilidade natural existente entre populações
e entre indivíduos (Ferreira, 1992). Segundo
Guldager (1975), nos países que possuem programas
de reflorestamento intenso, a implantação ex-situ de
populações de base genética ampla é o meio mais
eficiente de assegurar o abastecimento com sementes
de boa qualidade em longo prazo.
O melhorista atua na seleção de indivíduos na
população-base para obter a população de cruzamentos
e no controle dos cruzamentos entre indivíduos da
população de cruzamentos para originar a nova
população-base (Higa et al., 1991). De acordo com os
autores, as combinações de diferentes métodos de
seleção e delineamentos de cruzamentos são chamadas
de estratégias de melhoramento.
Mori (2005) apresenta os esquemas das
estratégias utilizadas no programa de melhoramento
florestal: tradicional, condução de genótipos estáveis,
multipopulações e múltiplas populações endogâmicas.
A estratégia de multipopulações é dada por Namkoong
e Barnes (1983), e a de múltiplas populações
endogâmicas, por McKeand e Beineke (1980).
Como exemplo ilustrativo, a Figura 6.2 mostra
os ganhos na média de volume de madeira, por meio
da seleção recorrente, nas gerações avançadas da
população por sementes. A mesma Figura mostra
ganhos contínuos em seleções de clones nas gerações
recorrentes avançadas.
 Melhoramento Florestal
Figura 6.2 - Exemplo da seleção recorrente em diferentes populações de gerações avançadas de melhoramento.
Fonte: Comunicação pessoal com Dr. G. Namkoong.
População-base
Segundo Ferreira (1992), o Brasil possui o
maior acervo genético de Eucalyptus spp. fora da
Austrália e Indonésia. De 1970 a 1984,
aproximadamente 2.200 lotes de sementes de 55
espécies foram incluídos na pesquisa florestal
brasileira, não se considerando as importações de
sementes comerciais da África do Sul, Zimbábue e
Austrália para plantios comerciais.
A importação de sementes das melhores
procedências e origens, seguida de testes de espécies/
procedências/progênies dos materiais genéticos mais
adaptados, permite estabelecer as diretrizes para a
instalação de populações-base de monoprocedência
(uma única procedência) e multiprocedência (várias
procedências), visando à recombinação dos
genótipos superiores e à produção de sementes. A
implantação de populações-base de diferentes
espécies de eucaliptos de interesse no Brasil é
necessária para assegurar a variabilidade genética
disponível. E com a conservação dos recursos
genéticos florestais, garante-se a manutenção, em
longo prazo, das florestas implantadas (Ferreira e
Santos, 1990). Eldridge (1990) afirma que os
melhoristas florestais têm a oportunidade única para
controlar e documentar a história genética da
domesticação e, assim, planejar a conservação de
ampla base genética, visando atender a futuras
necessidades. No caso de espécies exóticas, a
formação de populações-base (conservação ex-situ),
de acordo com Brune (1981), tem os seguintes
7
 Biotecnologia Florestal
objetivos: adaptação da espécie/procedência ou
formação de raças locais; garantia de manutenção
da variabilidade genética no novo ambiente;
fornecimento de material genético para os programas
de melhoramento genético da espécie; fornecimento
de sementes para plantios comerciais; e a
independência das fontes internacionais de
fornecimento de sementes.
Estudos com o objetivo de caracterizar
corretamente o material genético introduzido são
fundamentais para a formação da população-base. Nesse
sentido, Valle (1991) e Souza (1996) mostram que, além
das análises estatísticas convencionais de teste de
procedências, devem ser realizados estudos quanto à
variabilidade fenotípica associada à latitude, à longitude,
à amostragem na origem, a espécies associadas e à
vegetação natural da Austrália, estudos quanto à fenologia
da floração e frutificação e quanto à produção de
sementes das diferentes procedências testadas.
Outro aspecto importante da pesquisa de
procedências em espécies florestais é a definição da
metodologia de amostragem em populações naturais.
Ferreira e Araújo (1981) ressaltam que devem ser
considerados na metodologia os locais de amostragem,
o tipo de árvore e o número de árvores a serem
amostradas. Brune (1981) e Ferreira e Araújo (1981)
estabeleceram o número mínimo de 25 árvores
amostradas por procedência, com uma distância de 100
metros entre elas. Vencovsky (1987) adaptou às
atividades de coleta e preservação de germoplasma de
espécies alógamas o conceito de tamanho efetivo
populacional, como medida de representatividade
genética. O autor sugere que tamanhos efetivos (NE)
na casa das centenas já produzem uma segurança
razoável contra a perda de alelos; assim, 25 a 30 árvores
amostradas representam esse tamanho efetivo, uma vez
que NE (no máximo) é aproximadamente igual a 4F,
sendo F o número de árvores-mãe amostradas.
Quanto aos termos procedência da semente e
lotes de sementes, observa-se que, em linguagem
florestal, eles assumem o mesmo significado. Segundo
Ferreira (1980), o termo procedência indica a
localização geográfica e ambiental das árvores ou dos
povoamentos fornecedores de material reprodutivo,
como pólen ou propágulos, entretanto, para essências
8
nativas, o termo confunde-se com origem; e lote de
sementes é o termo utilizado para definir um grupo de
sementes considerado unitário.
A estratégia a ser adotada, de acordo com Ferreira
e Santos (1990), vai depender da ocorrência ou não da
reação da espécie à variabilidade genética entre plantas
de procedências distintas. Assim, segundo os autores, se
ficar comprovada a existência de ecotipos diferentes,
devem-se formar mais de uma população-base; por outro
lado, as espécies que não reagem à variabilidade de
procedência podem ser agrupadas em uma única
população. Ferreira (1990) faz um alerta: misturar
diferentes lotes de sementes/procedências sem estudo
prévio pode não levar aos resultados esperados, pois
existem espécies com ecotipos bem diferenciados, os
quais podem apresentar isolamento reprodutivo, vindo
a florescer em épocas distintas. O autor cita como
exemplos E. camaldulensis, E. tereticornis e E. cloeziana.
Seleção Massal
Definida a população-base, pode-se manejá-la a
fim de formar população de conservação e ou de
melhoramento. Neste caso, a população-base pode ser
trabalhada com seleção intrapopulacional por meio de
seleção massal e seleção individual. Assim, podem-se
formar áreas de coleta de sementes (ACS) e áreas de
produção de sementes (APS), que constituem métodos
de produção de sementes no melhoramento de
populações submetidas à seleção massal.
A seleção massal é a seleção fenotípica de diversos
indivíduos numa população e o uso da mistura de suas
sementes para produzir a geração subseqüente
(Shelbourne, 1969; Ferreira, 1980). Pelo método ACS,
as árvores são selecionadas e suas sementes são colhidas,
sem a eliminação das árvores inferiores da população; e,
portanto, a seleção é efetuada somente do lado feminino,
uma vez que não são controladas as árvores polinizantes
(Ipef, 1977). Na APS, tem-se um povoamento superior
selecionado, desbastado – removendo-se as árvores não-
desejáveis – e cultivado visando ao florescimento e à
produção de sementes abundantes (Ferreira, 1980). Logo,
neste caso, a seleção é realizada nos lados feminino e
masculino, o que permite ganhos superiores aos
proporcionados pela ACS.
 Melhoramento Florestal
Seleção Individual: Teste de
Progênies e Pomares de
Sementes
Os pomares de sementes clonais e os formados
por mudas são métodos de melhoramento nos quais se
utiliza a seleção individual. Neste caso, selecionam-se
indivíduos de uma família, ou de uma população de
árvores, pelo seu próprio mérito, para constituírem
parentais ou bases para clones (Ferreira, 1980). Por esse
método, as árvores selecionadas são propagadas
vegetativamente para se formarem os pomares de
sementes clonais de primeira geração (IPEF, 1977).
Ainda segundo esse autor, as árvores selecionadas são
avaliadas pelo teste de progênies, que definirá as árvores
de “elite”; estas, propagadas vegetativamente, definirão
os pomares de sementes de 1,5 geração; e, a partir da
seleção entre as famílias do teste de progênie e dentro
delas, transforma-se em pomar de sementes por mudas.
A melhor maneira de avaliar o valor genotípico
de árvores selecionadas é verificar suas progênies, o
que permite estimar os valores dos progenitores (Weir,
1977). Com esse procedimento, podem-se separar as
árvores cuja superioridade fenotípica é causada pelas
boas condições do sítio daquelas que apresentam
superioridade genotípica (Allard, 1971; Weir, 1977).
Algumas árvores também podem ter sido selecionadas
por apresentar superioridade fenotípica devido a
algum nível de combinação híbrida favorável, mas
que, uma vez propagada via sementes, segrega
características importantes em seus descendentes,
gerando uma progênie desuniforme e de pouco
interesse comercial (Oda et al., 1989). Esses autores,
abordando os problemas no melhoramento genético
clássico do eucalipto devidos à alta intensidade de
seleção, afirmam que, para programas em médio e
longo prazo, devem-se utilizar intensidades de seleção
moderadas. Já para obter resultados satisfatórios no
melhoramento assexual, eles recomendam alta
intensidade de seleção.
A utilização das árvores de testes de progênies
tem sido importante para a determinação do valor
reprodutivo dos indivíduos selecionados, na
estimativa de parâmetros genéticos, para a seleção
de novos indivíduos superiores e também como fonte
de produção de sementes, mediante sua
transformação em pomar de sementes por mudas
(Kageyama, 1980).
Os testes de progênies são partes integrantes
dos programas de melhoramento florestal, reunindo
grupos de diferentes entidades genéticas (espécies,
raças, famílias ou clones) na forma experimental,
em um ou mais ambientes (Xavier, 1996). O autor,
revisando sobre parâmetros genéticos, observou que
a maioria dos estudos na área de melhoramento
genético florestal tem utilizado a análise univariada
na quantificação dos parâmetros, e com o avanço da
informática, aumenta o interesse pelas técnicas
multivariadas aplicadas ao melhoramento florestal,
no estudo da divergência genética.
Hibridação
Segundo Ipef (1977), se o teste de progênie
envolve cruzamentos controlados, a área é denominada
pomar de sementes por mudas de polinização controlada.
Por outro lado, a produção de híbridos por polinização
aberta consiste no estabelecimento de pomares
envolvendo as espécies progenitoras, de modo que a
polinização interespecífica seja favorecida. Neste pomar
também podem ser conduzidos cruzamentos controlados.
A Cia. Suzano (1987) apresenta métodos de polinização
aberta utilizados na produção de sementes híbridas para
E. grandis x E. camaldulenis, E. grandis x E. urophylla
e E. robusta x E. grandis, enquanto Martins e Ikemori
(1987) citam o estabelecimento de um pomar de sementes
híbridas de E. grandis x E. urophylla utilizando-se 25
clones de E. urophylla e um único clone de E. grandis,
com elevado índice de auto-esterilidade, do qual seriam
coletadas as sementes. Estudos básicos que envolvam
fenologia do florescimento dos clones selecionados,
determinação da habilidade combinatória geral e
específica e o estudo de auto-incompatibilidade são
necessários para conduzir o programa de híbridos com
segurança e obter resultados satisfatórios.
Resende e Higa (1990) apresentam um esquema
de melhoramento para eucalipto visando à seleção de
híbridos interpopulacionais (interespecíficos e intra-
específicos) superiores em cada geração, por meio de
seleção recorrente, propagação via semente e vegetativa.
9
 Biotecnologia Florestal
De modo geral, estudos que envolvam o
desenvolvimento floral e a fenologia do florescimento e
frutificação, vetores e eficiência da polinização,
viabilidade do pólen, produção e viabilidade das sementes
devem ser considerados no programa de melhoramento.
Assis (2000) mostra que importantes características da
madeira de eucalipto, como quantidade de lignina,
densidade básica, rendimento em celulose, viscosidade
e hemicelulose são controladas por genes aditivos, e que
os híbridos F1 apresentam preferencialmente a
característica intermediária dos pais.
Núcleos de Melhoramento
Cotterill et al. (1989) propõem a estratégia de
“núcleos de melhoramento” e citam exemplos de
trabalhos com Pinus radiata na Austrália e E.
globulus em Portugal. No Brasil, os núcleos de
melhoramento têm sido utilizados em trabalhos com
E. grandis nas empresas Cia. Suzano Papel e
Celulose, Votorantim, Eucatex e Duratex. Nesta
estratégia, a população tradicional usada no
melhoramento florestal é dividida em duas estruturas,
a saber: população principal de melhoramento, a qual
é melhorada lentamente, para garantir a continuidade
dos ganhos genéticos no futuro, com seleção menos
intensiva, a fim de se manter ampla base genética; e
populações-núcleo.
Segundo os autores, a estratégia de população-
núcleo ajusta-se com a propagação vegetativa, uma
vez que se podem selecionar materiais mais
produtivos, testados em vários locais, e reproduzi-
los rapidamente. Por outro lado, a população-núcleo
pode ser convertida em pomar de sementes por
mudas e, alternativamente, tornar-se fonte de
material para pomar de sementes clonal.
Partindo da população-núcleo, o programa
pode ser conduzido com seleção direcionada para
caracteres específicos, formando-se uma população
de base genética de duas a cinco famílias, com
progênies obtidas por meio da polinização
controlada. Essa população é uma nova proposta no
melhoramento genético de Eucalyptus spp., a qual
está sendo denominada população-nucléolo. Esta
estratégia, em médio e longo prazo, vem ao encontro
da necessidade do uso de espécies puras com alta
10
capacidade geral de combinação e de linhagens
endógamas S1 e S2, visando à síntese de híbridos.
Endogamia
Segundo Ferreira e Grattapaglia (1998), o
ótimo crescimento de alguns híbridos
interespecíficos de Eucalyptus spp. mostra a
importância da ação genética dominante na
expressão de superioridade fenotípica. Portanto, a
geração de linhagens endógamas permitiria a
exploração mais eficiente desses efeitos genéticos.
A autofecundação artificial é freqüentemente
empregada em espécies alógamas, para a obtenção
de linhagens homozigóticas, que, posteriormente, são
utilizadas na síntese de híbridos (Vencovsky e
Barriga, 1992). Segundo os autores, para obter
linhagens puras, vigorosas e sadias com
probabilidade aceitável, deve-se partir de populações
geneticamente adequadas, o que significa que essas
populações devem ter: alta freqüência de alelos
favoráveis para diversos caracteres de interesse,
atingível pela seleção recorrente, que significa alta
capacidade geral de combinação; e baixa freqüência
de alelos deletérios, ou seja, depressão endogâmica
pouco pronunciada. Essas duas condições são inter-
relacionadas, esperando-se que populações ou
variedades continuamente submetidas à seleção
devam ter maior capacidade geral de combinação e
menor depressão por endogamia, quando
autofecundadas.
A endogamia como método de melhoramento
florestal é abordada por Kageyama (1981). O autor
afirma que a utilização do método de endogamia
seguida da hibridação tem pequena aplicação no
melhoramento de espécies arbóreas. As principais
restrições desse método no melhoramento florestal
são: longos intervalos entre as gerações, baixa
produção de sementes após autofecundação, alta
mortalidade e baixo vigor de plântulas
autofecundadas e altos custos dos cruzamentos
controlados.
Atualmente, as pesquisas sobre florescimento
precoce (Menck et al. 1993) e marcadores
moleculares contribuem significativamente no
melhoramento genético das plantas cultivadas.
 Melhoramento Florestal
Segundo Ferreira e Grattapaglia (1998), a aplicação
dos marcadores moleculares, em médio e longo
prazo, poderia ser extremamente útil no
desenvolvimento de linhagens em espécies florestais.
De acordo com os autores, a endogamia, em
diferentes níveis, como mecanismo de fixação de
alelos favoráveis e remoção de carga genética,
começa a ser utilizada no melhoramento florestal,
por exemplo, no trabalho de Mckeand e Bridgwater
(1992) com Pinus taeda.
De acordo com Ferreira e Grattapaglia
(1998), distorções de segregação de marcadores
moleculares oferecem a capacidade de identificar
locos letais de expressão tardia, facilitando seu
expurgo, e, ao mesmo tempo, os marcadores
poderiam ser utilizados para monitorar a herança e
a fixação de alelos favoráveis nos QTLs
(Quantitative Trait Loci) desejados, em sucessivas
gerações de autofecundação ou cruzamentos
consangüíneos.
Di Ciero e Amaral (2002) afirmam que as
novas ferramentas biotecnológicas devem combinar
o desenvolvimento de árvores superiores com
métodos clássicos de melhoramento, possibilitando
Figura 6.3 - Comportamento das progênies de Eucalyptus grandis submetidos aos tratamentos para IMA aos 3,75 anos de
idade.
a multiplicação em larga escala do material genético
melhorado. As tecnologias aplicadas no
melhoramento florestal serão abordadas
posteriormente.
Em estudo da Cia. Suzano Papel e Celulose,
clones de E. grandis foram autofecundados e
sementes dessas plantas S1 foram testadas
juntamente com as sementes de polinização livre
(meios irmãos) dos parentais. O delineamento
experimental foi o de blocos ao acaso com parcelas
lineares de 10 plantas, envolvendo 24 tratamentos e
4 repetições. A Figura 6.3 apresenta o
comportamento dos clones submetidos aos
tratamentos com relação ao IMA (Incremento Médio
Anual) aos 3,75 anos de idade. Os tratamentos em
que foram feitas autofecundações estão identificados
com o número do clone seguido de S1.
O uso da endogamia (autofecundação)
apresentou resultados diferentes entre os clones
submetidos a este tratamento. Em algumas famílias
de S1, encontram-se indivíduos que produziram
progênies iguais ou até superiores ao clone de
origem. A autofecundação parece ter melhorado as
famílias M36, M50, M07 e M52.
11
 Biotecnologia Florestal
O melhoramento do eucalipto por meio da
endogamia vem sendo pouco estudado pelos
pesquisadores, principalmente devido à grande
demanda de tempo e recursos para se trabalhar com
polinização controlada. No entanto, os resultados
encontrados desse experimento são animadores e
mostram que a estratégia pode ser uma ferramenta
útil para aumentar a variabilidade genética e
propiciar ganhos genéticos no futuro.
A identificação de indivíduos componentes do
nucléolo que apresentem superioridades nas famílias
endogâmicas, com baixa variabilidade genética nas
respectivas progênies, será de grande importância
na produção de semente comercial.
Propagação Vegetativa para
Seleção de Materiais Genéticos
Os métodos de melhoramento mais utilizados
em espécies de propagação vegetativa são a introdução
e seleção de clones, a seleção clonal, a hibridação
intervarietal e interespecífica e a indução de mutações.
Há ainda outros métodos, como indução de
poliploidia, retrocruzamento e seleção recorrente
fenotípica para algumas espécies. O emprego de
técnicas de biotecnologia no melhoramento de plantas,
como a micropropagação, a fusão de protoplastos, a
obtenção de haplóides e posterior diploidização, a
transformação genética e os marcadores moleculares
têm contribuído para a obtenção de novas variedades
(Silva e Santos-Serejo, 2003).
Ferreira (1996), abordando a história da
propagação clonal na silvicultura brasileira, informa
que o fato de um mourão de E. trabuttii ter enraizado
após ter sido fixado ao solo, dando origem a uma
árvore, despertou o interesse na utilização de
métodos de propagação assexuada em eucaliptos.
Outros fatos que contribuíram para acelerar os
estudos dos métodos assexuados foram: as geadas
na região sul e sudeste do Brasil, em 1975, que
mostraram que a propagação vegetativa permitia
selecionar árvores híbridas potenciais resistentes a
geadas; a ocorrência de cancro do eucalipto nas
plantações localizadas nas regiões tropicais do
12
Brasil; no ano de 1976, o trabalho de pesquisadores
franceses na República Popular do Congo, que
estabeleceram as bases para o enraizamento de
estacas de brotações das cepas de árvores adultas,
tecnologia introduzida no Brasil pela Aracruz
Florestal S.A.; neste mesmo ano, o trabalho de
pesquisadores da ESALQ, juntamente com o IPEF,
que começam a estabelecer as bases da
micropropagação; e em 1979, a primeira plantação
clonal no Brasil, estabelecida pela Aracruz. O
período de 1986 a 1990 caracterizou-se pela busca
da árvore ideal, concentrando-se as pesquisas na
estaquia, e também pelo fim do subsídio para o setor
florestal (Ferreira, 1996; Ferreira e Santos, 1997).
De acordo com Ferreira (1996), a filosofia
operacional da silvicultura clonal é trabalhar com o
menor número de clones possível, que eles não
interajam negativamente com o ambiente, sejam
pouco exigentes quanto a nutrientes e tratos culturais,
não sejam susceptíveis a pragas e doenças e que
tenham qualidades silviculturais e da madeira
desejáveis. Assim, segundo o autor, são aplicadas
altas intensidades de seleção, buscando-se indivíduos
com fenótipos superiores, os quais são propagados
vegetativamente, visando à instalação de bancos
clonais, testes clonais e jardins clonais, sendo os
clones que foram selecionados propagados
vegetativamente, dando origem aos plantios clonais
comerciais. A origem e a evolução da silvicultura
intensiva no Brasil e seus reflexos nos programas
de melhoramento são abordados por Ferreira (1992).
Detalhes sobre a clonagem e as doenças do
eucalipto são dados por Alfenas et al. (2004).
Segundo os autores, o processo de clonagem envolve
as fases de seleção, resgate e ampliação do material
genético (matrizes selecionadas e multiplicadas
assexuadamente passam a constituir os clones), testes
clonais, plantio-piloto e multiplicação comercial de
matrizes superiores, seja por macroestaquia,
miniestaquia ou microestaquia.
A técnica de microestaquia, sua potencialidade
e suas limitações na silvicultura clonal são abordados
em Xavier e Comério (1996) e Assis (1996). Os
princípios básicos envolvidos na propagação
 Melhoramento Florestal
vegetativa, os métodos de propagação clonal,
rejuvenescimento, fatores que afetam o
enraizamento, mudanças morfológicas e fisiológicas
durante o ciclo de desenvolvimento da planta e a
evolução do jardim clonal do campo em minijardins
clonais para a produção de miniestacas são descritos
por Higashi et al. (2000).
Os clones selecionados devem ser submetidos
a testes clonais, visando confirmar a superioridade
do material genético, em diversas situações
ambientais que possibilitem a seleção de plantas
resistentes a pragas e doenças (Alfenas, 2004).
Segundo Silva et al. (2003), as etapas de avaliação e
seleção são as mais caras e demoradas do programa
de melhoramento, o que dificulta a elaboração e a
execução de extensos programas de seleção clonal.
Os autores discutem sobre o tamanho ótimo da
parcela experimental em testes clonais de eucalipto,
baseando-se em três métodos de determinação do
tamanho da parcela. Os resultados mostram que
parcelas de cinco a dez plantas proporcionam boa
precisão experimental, porém, para estudos mais
detalhados, parcelas quadradas maiores e, ou,
plantios-piloto são os mais indicados.
Gonçalves et al. (2001), avaliando o progresso
genético por meio da seleção de clones de eucalipto
em plantios comerciais, verificaram que o progresso
genético foi superior a 2,5% ao ano. Os autores
ressaltam que a continuidade dos progressos depende
da condução de programas de melhoramento
sexuado, com sua ampliação, a fim de gerar novas
combinações genotípicas superiores. O método
RELM/BLUP foi utilizado por Garcia e Nogueira
(1995) na seleção de clones de E. grandis, E. pellita
e híbridos de E. urograndis.
A propagação vegetativa pode ser considerada
como uma ferramenta de difusão do progresso
genético obtido pela seleção, quer seja no programa
de melhoramento clássico, quer seja no programa
de híbridos ou na multiplicação de indivíduos
superiores puros ou híbridos (Menck et al., 1988).
O programa de melhoramento genético deve ser a
base para a aplicação de técnicas de propagação
clonal e a seleção de clones.
Tecnologias Aplicadas ao
Melhoramento Florestal
Paterniani (2003), abordando o melhoramento
de plantas no século XXI, cita as seguintes técnicas de
manipulação genética: com reprodução sexual – seleção
(intra e interpopulacional), hibridação (intra e
interespecífica) e heterose (vigor de híbrido); sem
reprodução sexual – ploidia (alterações no número de
cromossomos), mutagênese (indução artificial de
mutações), variação somaclonal (reprodução de
indivíduos a partir de células somáticas), hibridação
somática (fusão de protoplastos); e cíbridos, citoplasma
e organelas da espécie A e núcleo da espécie B –
transgenia (transferência de genes exógenos) e
transplastomia (transferência de plastídeos exógenos).
Segundo o autor, a transgenia, a partir da última década,
vem sendo intensamente pesquisada.
Poliploidia
Poliplóide é um organismo com três ou mais
conjuntos completos de cromossomos, como
triplóide (3n), tetraplóide (4n), pentaplóide (5n),
hexaplóide (6n) e assim por diante (Ferreira, 1980;
Wright, 1976; Allard, 1971). De acordo com Roth
(1984), o interesse dos melhoristas florestais pela
poliploidia surgiu quando da descoberta do choupo
gigante (Populus tremula var. gigas) por Nilsson-
Ehle (1936), identificado como triplóide natural por
Müntzing (1936), por meio de análise citológica.
Ainda segundo a autora, a ocorrência natural da
poliploidia em diversos gêneros de espécies florestais
e sua importância no processo evolutivo influenciou
as pesquisas feitas para se induzir a poliploidia nos
gêneros de interesse silvicultural. Gustafsson (1960)
apresenta uma extensa revisão sobre poliploidia e
mutagênese nas espécies arbóreas.
De acordo com Hyun (1954), provavelmente
foram Mirov e Stockwell (1939) os primeiros a induzir
a mutação cromossômica em plantas lenhosas usando
a colchicina. Os autores induziram a poliploidia com
colchicina em várias espécies de Pinus. Já Mergen e
Lester (1961) trataram sementes e plântulas de nove
espécies de Abies com solução aquosa de colchicina
(0,025-20%) para obter poliplóides.
13
 Biotecnologia Florestal
Segundo Wright (1976), a medição dos
estômatos é um modo rápido de determinar se todas
ou a maioria das folhas de um galho são poliplóides.
Roth (1984), trabalhando com Eucalyptus urophylla
S.T. Blake, com o objetivo de desenvolver uma
metodologia para induzir a poliploidia, verificou a
eficiência do tratamento e as modificações decorrentes
da poliploidização. A autora concluiu que: a indução
de poliploidia na espécie é viável; as plantas tratadas
apresentaram anormalidades morfológicas,
características de plantas poliploidizadas (algumas
folhas tinham limbo deformado, com orifícios,
distorções e reentrâncias, bordas onduladas ou pontas
arredondadas, e as folhas das plantas tratadas com
colchicina apresentaram coloração mais escura e
maior espessura do que as folhas das plantas
testemunhas); e ocorreu redução no número de
estômatos por unidade de área foliar em média de
37,34%, das plantas diplóides não-tratadas para as
plantas tratadas com colchicina.
Suzano (1998) utilizou o tratamento de
sementes de E. grandis com colchicina, visando
induzir a poliploidia. Do material obtido foram
selecionadas árvores classificadas em três grupos:
maior comprimento médio de fibras, comprimento
médio de fibras normal e menor comprimento médio
de fibras. Os materiais genéticos foram avaliados
em diferentes idades, com a finalidade de se
encontrar os melhores resultados, a fim de otimizar
o processo de polpamento industrial da espécie em
estudo. Foram realizadas medições do comprimento
da fibra e contagem do número de estômatos aos
seis meses de idade. Os resultados mostram que
houve uma redução no número de estômatos nos
materiais tratados em relação à testemunha, sendo
14,5 e 19,9, respectivamente. O comprimento de
fibra foi de 0,78 mm no material tratado e 0,73 mm
na testemunha. Na idade de um ano, o comprimento
de fibra foi de 1,13 e 0,97 mm, respectivamente,
material tratado e testemunha.
Marcadores Moleculares
De acordo com Guimarães e Moreira (1999),
como os marcadores moleculares possibilitam
análises genéticas mais detalhadas, eles podem ser
14
utilizados no melhoramento genético de plantas, por
exemplo: em programas de introgressão de genes por
retrocruzamento; na detecção e no mapeamento de
QLTs (Quantitative Trait Loci); na avaliação da
diversidade genética com aplicações filogenéticas e
evolutivas; no mapeamento genético, na clonagem
de genes; e na caracterização de variedades,
linhagens ou híbridos por meio de marcadores de
DNA na proteção do direito intelectual do melhorista,
nos países onde já vigoram as leis de proteção de
cultivares. No Brasil, no processo de proteção de
clones de eucaliptos, os marcadores moleculares são
descritores complementares, sendo sua apresentação
não-obrigatória. Ferreira e Grattapaglia (1998)
detalham as aplicações de marcadores moleculares
no melhoramento clássico de plantas em curto e
médio prazo e no melhoramento transgênico.
Os principais marcadores moleculares
utilizados na análise genética de plantas são:
isoenzimas, RFLP – Polimorfismo no comprimento
de Fragmentos de Restrição, RAPD – Polimorfismo
Amplificado ao Acaso, microsatélites e AFLP –
Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos
Amplificados (Ferreira e Grattapaglia, 1998).
Estudos da variabilidade isoenzimática nos
eucaliptos foram realizados por Mori (1993), em E.
grandis, e por Martins-Corder (1994) em E. grandis
e E. urophylla. Sato e Mori (1996) aplicaram a técnica
de eletroforese de isoenzimas para detectar o nível de
endogamia em lote de sementes de um pomar de
sementes comerciais de E. grandis. Martins-Corder
et al. (1996) quantificou a variabilidade isoenzimática
de E. urophyla, procedência Ilha Flores, que foi
submetida a uma seleção, visando o florescimento
precoce. Junghans (2000) identificou um gene de
resistência à ferrugem em uma progênie de Eucalyptus
grandis constituída de 994 indivíduos segregantes para
resistência à ferrugem. Foram identificados seis
marcadores RAPD ligados ao gene denominado Ppr1
(Puccinia psidii resistence, gene 1), que confere
resistência à ferrugem, mediante o uso da técnica de
BSA. O marcador AT9/917 foi constatado apenas nas
plantas resistentes. Segundo o autor, tendo em vista a
proximidade genética e provavelmente física, esse
marcador poderá ser utilizado na clonagem posicional
de Ppr1.
 Melhoramento Florestal
Transgenia e Descobrimento dos
Genes
Atualmente, são desenvolvidos dois projetos
genoma de Eucalyptus spp. no Brasil, Forests e
Genolyptus. O programa Forests – Eucalyptus
Genome Project Consortium é um programa de
Inovação Tecnológica em Empresas. A primeira
etapa resultou o seqüenciamento de 120.000 ESTs
de eucalipto e na organização de um dos maiores
bancos de genes da espécie (Fapesp, 2003). O
Projeto Genolyptus – Rede Brasileira de Pesquisa
do Genoma de Eucalyptus – foi lançado em 20/
02/2002, com participação de 12 empresas do setor
de papel e celulose, sete universidades e a Embrapa
(Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária). Os
objetivos centrais da Rede Genolyptus são:
descobrimento, seqüenciamento, mapeamento e
determinação de função de genes de importância
econômica em espécies de Eucalyptus spp.,
visando incorporar tecnologias de genética
genômica nos programas de melhoramento,
enfatizando o processo de formação da madeira
(Borém, 2003).
De acordo com Di Ciero (2005), as primeiras
características expressas em árvores geneticamente
modificadas (AGM) e testadas em campo foram as
resistências a insetos, herbicidas e doenças.
Atualmente, a modificação para diminuição ou
alteração das características químicas da lignina é a
segunda maior utilização da transgenia em árvores.
Segundo a autora, a redução do conteúdo de lignina
e a manipulação de sua composição química e modo
de deposição estão entre os objetivos mais
importantes da biotecnologia florestal.
O uso de técnicas de DNA recombinantes em
espécies florestais seguiu os avanços em pesquisa
agrícola (Di Ciero e Amaral, 2002). Segundo os
autores, as novas ferramentas biotecnologicas devem
combinar o desenvolvimento de árvores superiores
com métodos clássicos de melhoramento e
possibilitar a multiplicação em larga escala do
material genético melhorado a partir da seleção
genotípica.
De acordo com Gonzáles et al. (2002), a
introdução de genes de interesse em progênies e
clones comerciais de eucalipto, por meio da
transformação genética, é uma oportunidade de
acelerar a obtenção de genótipos superiores. A
literatura registra a transformação genética de E.
globulus (Moralejo et al.,1998), E. camaldulensis
(Mullins et al,1997) e E. grandis x E. urophylla
(Gonzáles et al, 2002). Os autores citam que a
obtenção de plantas de eucalipto requer uma
metodologia eficiente de regeneração, seja por
organogênese indireta de certos tecidos, seja por
meio da embriogênese somática.
Ferreira (1999) alerta para o fato de que
qualquer transformação genética das árvores deverá
ser convenientemente testada e certificada,
incluindo-as num Sistema de Certificação Nacional.
O Melhoramento Genético
Florestal e as Novas Tecnologias
O Quadro 6.1 relaciona as estratégias de
melhoramento florestal baseadas em população-base,
de melhoramento, núcleo e nucléolo, e a aplicação
da biotecnologia, em médio e longo prazo, num
programa de melhoramento florestal.
A Figura 6.4 esquematiza estratégias para o
uso da biotecnologia no melhoramento florestal.
15
 Biotecnologia Florestal

Quadro 6.1 - O melhoramento florestal e a possibilidade de aplicação da biotecnologia

Semente de E. grandis e Propagação vegetativa Marcador molecular Genoma

E. urophylla
População-base •Alta intensidade de seleção Distância genética ESTs
• Plantio comercial
•Seleção massal •Pomar de sementes
População de melhoramento (100 a •Seleção nas melhores famílias •Paternidade ESTs
200 famílias) •Plantio clonal •Distância genética
•Plantio comercial •Mosaico
•Seleção por progênie •Pomar de sementes
•Interação genótipo x ambiente
•Progênie (CGC e CEC)

População-Núcleo (10 a 20 famílias) •Seleção nos talhões comerciais •Melhoramento assistido •SNPs
•Seleção por progênie das melhores monoprogênies •Genes (BAC) •OGMs
•Interação genótipo x ambiente •Pomar de sementes •Distância genética •Microarray
•Polinização controlada •QTLs
•Progênie (CGC e CEC) •Mosaico
•Autofecundação •Mapeamento
•Ganho de caracteres específicos

População-nucléolo (2 a 5 famílias) •Plantio comercial •Distância genética •Microarray

•Linhagens (S1 e S2) •Pomar de sementes biclonais •QTLs •SNPs
•Polinização controlada (puros e híbridos) •Genes (BAC) •OGMs
•Interação genótipo x ambiente •Mapeamento
•Semente comercial

Figura 6.4 - Estratégias para o uso da biotecnologia no melhoramento florestal.

16
 Melhoramento Florestal
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