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Revista Brasileira de
Ciências Farmacêuticas Artigo

http://dx.doi.org/10.1590/s2175-97902023e21224

Caracterização química, citotoxicidade, potencial

antimicrobiano e antioxidante de Justicia pectoralis
Extratos de Jacq e Croton jacobinensis Baill
,
Leilanne Márcia Nogueira de Oliveira1
Maria do Socorro Rocha Bastos2 Ana Cristina Silva de Lima1
,
,
Evânia Altina Teixera de Figueiredo3 , Flayanna Gouveia Braga Dias3
Larissa Morais Ribeiro da Silva3 , Selene Dahia Benevides2,
Paulo Riceli Vasconcelos Ribeiro2
, Luiz Bruno de Sousa Sabino4*,
Raimundo Wilane de Figueiredo3

1 Northeast Biotechnology Center, Federal University of Ceará, Fortaleza, Brazil,

2 3
Embrapa Agroindustria Tropical, Fortaleza, Brazil, Departamento de Alimentos
4
Engineering, Federal University of Ceará, Fortaleza, Brazil, Departamento de
Chemical Engineering, Federal University of Ceará, Fortaleza, Brazil

Nesta pesquisa foram caracterizados os extratos aquoso e etanólico de Justicia pectoralis Jacq e Croton Jacobinensis
Baill. A análise UPLC-QTOF-MSE foi realizada nos extratos identificados, predominantemente, flavonoides, taninos e
ácidos. Os extratos não indicaram toxicidade em células epiteliais humanas. C. jacobinensis apresentou concentração
de fenólicos 60,5% maior que J. pectoralis em todos os cenários avaliados e, para ambas as amostras, o extrato
hidroalcoólico a 70% apresentou a melhor eficiência na extração (14501,3 e 32521,5 mg GAE 100 g-1 para J . pectoralis
e C. jacobinensis, respectivamente). A atividade antioxidante apresentou correlação positiva com a concentração de
fenólicos, sendo 1.186,1 e 1.507,9 ÿM de Trolox para J. pectoralis e C. jacobinensis a 70% de etanol; entretanto, não
foi verificada diferença estatística entre as soluções etanólicas (p < 0,05). A atividade antimicrobiana dos extratos de J.
pectoralis foi destacada uma vez que foi a mais eficaz contra bactérias gram-positivas. Os resultados sugerem que os
extratos de J. pectoralis e C. jacobinensis apresentam potencial para serem aplicados como aditivos naturais devido à
sua atividade antioxidante e antimicrobiana e segurança. Assim, sugere-se o desenvolvimento de estudos que
investiguem a interação desses extratos vegetais com matrizes alimentícias.

Palavras-chave: Extratos naturais. Compostos bioativos. Identificação. Terapêutica.

INTRODUÇÃO aditivos, sem componentes sintéticos (Calo et al., 2015; Mak et

Extratos naturais de plantas têm sido estudados como
aditivos de conservação de alimentos, com o objetivo de utilizar
suas atividades contra microrganismos patogênicos em alimentos. espécies vegetais apresentam grande potencial para uso como
A relevância do uso desses metabólitos está relacionada
ao desejo dos consumidores de alimentos naturais de alta qualidade
*Correspondence: L. B. de S. Sabino. Departamento de Engenharia Química.
Universidade Federal do Ceará. Campus Universitário do Pici.
Av. Mister Hull, 2977, 60356-000, Fortaleza, Ceará, Brasil. Phone: +55 85 986687879.
E-mail: lunosousa@gmail.com. ORCID https://orcid.org/0000- 0002-2745-5393
al., 2013). Extratos vegetais podem ser incorporados em
formulações utilizadas na indústria alimentícia, como
revestimentos comestíveis (Lv et al., 2011). No Brasil, algumas
extratos devido ao seu cultivo simples e baixo custo de produção.
J. pectoralis é uma planta popularmente conhecida no Brasil
como chambá, chambabá, anador ou trevo-cumaru (Kalyne et al.,
2017). Chambá foi previamente relatado como uma fonte alternativa
de compostos antimicrobianos naturais em função da presença de
compostos bioativos como cumarina (1,2 benzopirana) e umbelliferon.
Foi relatado anteriormente

Braz. J. Pharm. ciência 2023;59: e21224 Página 1/13

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Leilanne M. N. Oliveira, Maria S. R. Bastos, Ana C. S. Lima, Evânia A. T. Figueiredo, Flayanna G. B. Dias, Larissa M. R.
Silva, Selene D. Benevides, Paulo R. V. Ribeiro, Luiz B. S. Sabino, Raimundo W. Figueiredo
que o extrato aquoso de J. pectoralis foi capaz de inibir o
crescimento de Staphylococcus aureus e Escherichia coli
(Guimarães et al., 2020). Compostos fenólicos como os
flavonoides e taninos estão presentes de forma marcante
nos extratos de chambá e podem contribuir para suas
atividades antioxidantes e anti-inflamatórias (Chanfrau et
al., 2013). Além disso, várias espécies do gênero Justicia
são utilizadas na medicina popular para o tratamento de
problemas respiratórios (Agra, Freitas, Barbosa-Filho,
2007), problemas gastrointestinais (Corrêa, Alcântara,
2012), diabetes e doenças da próstata (Lizcano et al., 2010).
C. jacobinensis é uma planta conhecida popularmente
como “lagosta negra” e apresenta diversas atividades
biológicas (Pontes et al., 2011), incluindo propriedades
antibacterianas e citotóxicas , atividades acaricidas contra
Tetranychus urticae, propriedade anti-hipertensiva (Neves,
Câmara, 2011) atividade antimalárica (Villamizar et al.,
2009) e atividades antimicobacterianas contra Mycobacterium
tuberculosis (Kulkarni et al., 2013) e Staphylococcus (Liu et
al., 2014).
Não há informações confiáveis sobre o uso de J.
pectoralis e C. jacobinensis em preparações ou
processamento de alimentos. No entanto, é inegável o
potencial biológico de ambas as plantas, o que requer mais
estudos para prospectar seu uso em diferentes campos de pesquisa.
Portanto, o objetivo desta pesquisa foi investigar as atividades
antioxidante e antimicrobiana de extratos aquosos e
hidroalcoólicos das folhas de J. pectoralis e C. jacobinensis
para avaliar o potencial destes para futura aplicação como
conservantes naturais de alimentos.
MATERIAL E MÉTODOS
Material vegetal
As folhas de J. pectoralis e C. jacobinensis foram
coletadas manualmente pela Dra. Leilanne Marcia no
Herbário Prisco Bezerra (EAC) pertencente à Universidade
Federal do Ceará (UFC) localizada em Fortaleza (Estado
do Ceará, Brasil). A identidade de ambas as plantas foi
determinada por comparação com o número de exsicatas
(amostras secas) depositadas em EAC, que foram 61.197
e 61.198 para J. pectoralis e C. jacobinensis,
respectivamente. O material vegetal (folhas frescas) foi coletadoágua
com (A)
tesoura emde ácido fórmico em acetonitrila (B). A eluição UPLC
e 0,1%
Página 2/13
da manhã das 8 às 10 horas sob condições de
temperatura máxima (32°C) e mínima (24°C) e
umidade relativa do ar de 65%, durante o período de
janeiro a março. As folhas foram lavadas com água destilada
e secos em estufa de circulação de ar (35 ± 3°C por
24 h para J. pectoralis e 48 h para C. jacobinensis). O
material seco foi armazenado sob proteção luminosa
a 25 ± 1°C até o preparo dos extratos, cuja preparação
foi realizada em triplicata.
Preparação de extratos
Os extratos foram feitos a partir de infusões de
folhas (com 0,84 mm de granulometria). Os extratos aquosos
foram obtidos com água destilada a 90°C na proporção 1:20
(folhas secas: água). Os extratos hidroalcoólicos (preparados
na concentração de 50 e 70% - v/v) foram obtidos com leve
aquecimento (70°C) na mesma proporção utilizada para a
preparação do extrato aquoso. As extrações foram sustentadas
por 30 min e posteriormente filtradas. O material foi liofilizado
em Beta 1-8 LD plus (CHRIST, Alemanha), a -40°C e pressão
de 0,025 mbar. Após o processo de liofilização, os extratos
foram armazenados em recipientes de polietileno, protegidos
da luz e mantidos em freezer (-18°C) até a análise.
Caracterização de extratos
caracterização química
Para caracterização química, 10 mg de amostras
secas foram solubilizadas em 10 mL de água ultrapura.
As soluções foram homogeneizadas em banho de
ultrassom USC 1400 (Unique Indaiatuba, Brasil) por 5 minutos.
Após, as soluções foram filtradas em filtro Millipore de 0,22µm,
coletadas em frascos e enviadas para análise.
As análises foram realizadas em um sistema
cromatográfico Acquity UPLC (Waters), acoplado a um
quadrupolo/tempo de vôo (QTOF, Waters).
As corridas cromatográficas foram realizadas em um
Waters Acquity UPLC BEH (150 mm x 2,1 mm, 1,7 ÿm),
temperatura fixa de 40 °C. O sistema de eluição de
gradiente binário consistiu em 0,1% de ácido fórmico em
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Caracterização química, citotoxicidade, potencial antimicrobiano e antioxidante dos extratos de Justicia pectoralis Jacq e Croton jacobinensis Baill

as condições foram otimizadas da seguinte forma: gradiente
linear de 2 a 95% B (0-15 min), 100% B (15-17 min), 2% B
(17,01), 2% (17,02-19,01 min), um fluxo de 0,4 mL min-1 e um
volume de injeção de amostra de 5 ÿL.
O perfil químico das amostras foi realizado acoplando
o sistema Waters ACQUITY UPLC ao espectrômetro de
massa QTOF (Waters, Milford, MA, USA), com interface
de ionização por eletrospray em modo de ionização
negativa (ESI- ). O modo (ESI-) foi adquirido na faixa de
110-1180 Da, temperatura da fonte fixa em 120 °C,
temperatura de dessolvatação 350 °C, fluxo de gás de
dessolvatação de 500 L h-1, cone de extração de 0,5 V, tensão capilar de 3 kV.
Leucina encefalina foi utilizada como lock mass. O modo
MS usado Xevo G2-XS QTOF. O espectrômetro operou
com programação MS e centróide, utilizando uma rampa
de tensão de 20 a 40 V. O instrumento foi controlado pelo
software Masslynx 4.1 (Waters Corporation, EUA).
Teor total de polifenóis (TPC)
Para a quantificação dos polifenóis, soluções com
concentração igual a 1 mg/mL foram preparadas a partir da
solubilização de amostras secas em água destilada. Após
completa homogeneização, as soluções foram armazenadas
sob refrigeração até o momento da análise. O CPT foi
(ABTS•+), conforme técnica relatada por Re et al. (1999) e
modificado por Rufino et al. (2010). No escuro, uma alíquota
de 30 ÿL de cada extrato foi misturada com 3 mL do radical
ABTS•+ e homogeneizada. Após 6 min, as leituras foram feitas
em 734 nm usando o espectrofotômetro Shimadzu. Os
resultados foram expressos em TEAC - Capacidade
Antioxidante Equivalente a Trolox ( ácido 2-carboxílico-6-
hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromano) em micrômetros por grama
de extrato.
Microrganismos e atividade antimicrobiana
E. coli (ATCC 25922), S. enteritidis (IAL 1132), S. aureus
(ATCC 27664) e L. monocytogenes (ATCC 19115) foram
utilizados para avaliar a atividade antibacteriana dos extratos
de J. pectoralis e C. jacobinensis . Este estudo baseou-se no
método de microdiluição em placas sugerido pelos valores
(CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) . Água e
etanol Branen e Davidson (2004) e Brandt et al. (2010), com
adaptações. Um método usando microplacas de 96 poços
(MicrotestTM, Becton Dickinson and Co.) foi usado para
determinar a concentração inibitória mínima. Os extratos (50 e
70% - v/v) a 250 mg/ mL foram preparados de forma
semelhante ao descrito anteriormente.
Os extratos foram diluídos em água para obtenção de diferentes

determinado pelo método descrito por Larrauri, Rupérez e concentrações (0,5-100 mg/mL) e esterilizados usando filtros
Saura-Calixto (1997), que utiliza o reagente Folin Ciocalteu e de membrana de 0,22 ÿm. Em cada poço, caldo TSB,
o ácido gálico como padrão. Alíquotas de 0,1 mL dos extratos, suspensão bacteriana (aproximadamente 105 UFC/mL) e uma alíquota de
0,5 mL de água destilada, 0,5 mL do reagente de Folin- cada diluição dos extratos estudados foram incubados com

Ciocalteau (1:3), 1,0 mL de solução de NaCO3 20% e 1,0 mL agitação a 35°C por 24 horas. O teste também foi
de água destilada foram utilizadas para esta análise. Após a realizado em poços contendo meio de cultura, água
homogeneização, o produto foi protegido da luz por 30 min e destilada e suspensão bacteriana, como controle
foi lido a 700 nm em espectrofotômetro Shimadzu (modelo negativo. Um agente antimicrobiano comercial (amicacina)
UV-1800). e inóculo foi usado como controle positivo. A densidade
Os resultados foram expressos em miligramas de equivalente óptica (DO) foi lida a 630 nm usando o leitor de
de ácido gálico (GAE)/100 g de extrato. absorbância ELx 808 (BioTek Instruments, Inc. Winooski,
VT, EUA). Os resultados finais foram obtidos pela
Atividade Antioxidante Total variação da absorbância em diferentes tempos (0 e 24
horas após a incubação). Considerando as MICs, as
As mesmas soluções preparadas para concentrações que apresentaram diferenças entre as
quantificação de polifenóis foram utilizadas para leituras foram ÿ 0,05 nm. Dos poços que indicaram
determinar a atividade antioxidante total de J. atividade inibitória (ÿ 0,05 nm), 100 ÿL foram inoculados
pectoralis e C. jacobinensis. O método foi baseado em meios de cultura e meios diferenciais específicos
na redução do radical 2,2'-azinobis (ácido 3-etilbenzotiazolina-6-sulfônico)
foram fornecidos para cada espécie: Mac Conkey Agar (Oxoid) para

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Leilanne M. N. Oliveira, Maria S. R. Bastos, Ana C. S. Lima, Evânia A. T. Figueiredo, Flayanna G. B. Dias, Larissa M. R.
Silva, Selene D. Benevides, Paulo R. V. Ribeiro, Luiz B. S. Sabino, Raimundo W. Figueiredo
para L. monocytogenes, Ágar Baird-Parker (BD) para S.
aureus e ágar desoxicolato-lisina-xilose (XLD) para S. eteritidis.
As placas foram incubadas a 35°C por 48 h, e o MBC foi
considerado a menor concentração de teste
em que uma placa mostrou a ausência de crescimento microbiano.
Os resultados foram expressos em miligramas por mililitro
de extrato seco.
Atividade de citotoxicidade
Testes de atividade de citotoxicidade foram feitos com
os extratos que apresentaram a melhor atividade
antimicrobiana, de acordo com o método descrito por
Mosmann (1983) usando MTT [brometo de 3-(4,5-
dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazólio) . A citotoxicidade foi
medida pela exposição de células epiteliais intestinais
(aproximadamente 20.000 células da linhagem IEC 6
previamente cultivadas) a 100 ÿL das soluções do extrato
com concentração variando de 0,25 a 20 mg/mL. As frações
obtidas foram comparadas com controles positivos (cultivo
de células apenas em meio de cultura) e negativos
(Clostridium difficile citotoxina A), sendo o controle positivo considerado 100%
Os resultados das absorbâncias obtidos foram submetidos
ao teste de comparações múltiplas de Bonferroni e os
resultados expressos em média e desvio padrão.
Página 4/13
Análise estatística
Os resultados de polifenóis extraíveis totais e atividade
antioxidante total foram analisados estatisticamente comparando-
se as médias pela Análise de Variância (ANOVA) e teste de
Tukey, ao nível de 5% de significância, usando
o software Statistica 10.0. Os dados obtidos para
a atividade antimicrobiana foi expressa através das
concentrações mínimas inibitórias e bactericidas.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
caracterização UPLC
Os resultados de UPLC do extrato aquoso de J.
pectoralis Jacq. mostrou a presença de doze picos
(Figura 1A e Tabela I). Para o extrato de C.
jacobinences , foram encontrados quatorze picos (Figura 1B e Ta
A identificação dos compostos presentes em cada extrato
foi feita por comparação com resultados presentes em
banco de dados da literatura. Assim, para maior nível de
confiança, de viabilidade
considerou-se celular. similaridade com a
a máxima
massa calculada, fragmentos e fórmula empírica e,
considerou-se o menor erro possível entre as substâncias
avaliadas.
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Caracterização química, citotoxicidade, potencial antimicrobiano e antioxidante dos extratos de Justicia pectoralis Jacq e Croton jacobinensis Baill

A)

B)

FIGURA 1 - Cromatograma dos extratos (A) Justicia pectoralis Jacq e (B) Croton jacobinences Baill por extrato UPLC-
QToF-MSE.

TABELA I - Compostos identificados no extrato hidroalcoólico de Justicia pectoralis Jacq.

TR [MH]- [MH]- fragmentos de íons Empírico

Pico Erro Referência
(min) Observado Calculado (MS/MS) Fórmula

341.0875; 315,1050; (Spínola;

1 2,74 503,1406 503,1401 C21H27O14 1,0
179.0343; 135.0444 Castilho, 2017)

(Spínola;
2 3,11 341.0881 341.0873 179,0325; 135.0416 C15H17O9 2,3
Castilho, 2017)

(Bresciani et
3 3,25 355,0658 355.0665 179.0370; 135,0440 C15H15O10 -2,0
al., 2017)

(Vênila;
4 3,35 313.0923 313.0923 137.0607 C14H17O8 0,0
Rajangam, 2015)

5 3,41 329.0973 329.0973 135,0333; 72,9945 0,0 -

C14H17O9

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Leilanne M. N. Oliveira, Maria S. R. Bastos, Ana C. S. Lima, Evânia A. T. Figueiredo, Flayanna G. B. Dias, Larissa M. R.
Silva, Selene D. Benevides, Paulo R. V. Ribeiro, Luiz B. S. Sabino, Raimundo W. Figueiredo

TABELA I - Compostos identificados no extrato hidroalcoólico de Justicia pectoralis Jacq.

TR [MH]- [MH]- fragmentos de íons Empírico

Pico Erro Referência
(min) Observado Calculado (MS/MS) Fórmula

(Simirgiotis et
6 3,51 325.0916 325.0923 163.0361; 119.0514 C15H17O8 -2,2
al., 2017)

(Simirgiotis et
7 3,82 327.1068 327.1080 165.0520 C15H19O8 -3,7
al., 2017)

(Simirgiotis et
8 3,92 325,0909 325.0923 163,0358; 119.0483 C15H17O8 -4,3
al., 2017)

9 4,13 651,1984 651,1984 - 0,0 -

C23H39O21

10 4,35 503,2480 503.2492 429,1721; 161.0344 -2,4 -

C24H39O11

11 4,57 771,2230 771,2254 637,2074; 327.1073 -2,4 -

C23H47O28

12 5,08 709,3126 709,3130 223.0609; 165.0626 -0,6 -

C28H53O20

TABELA II - Compostos identificados no extrato hidroalcoólico de Croton jacobinences Baill.

TR [MH]- [MH]- fragmentos de íons Empírico

Pico Erro Referência
(min) Observado Calculado (MS/MS) Fórmula

(Jiménez-Sánchez et
1 4,21 191.0195 191.0192 111.0121 C6 H7 O7 1,6
al., 2015)

2 4,53 371.0613 371.0614 209,0265; 191.0194 C15H15O11 -0,3 (Ruiz e outros, 2013)

3 4,62 371.0612 371.0614 209,0256; 191,0215 C15H15O11 -0,5 (Ruiz e outros, 2013)

4 4,87 463.0892 463.0877 301,0330; 300.0279 C21H19O12 3,2 Padrão

5 5,13 593.1479 593.1506 285.0401 C27H29O15 -4,6 (Navarro e outros, 2017)

6 5,31 291.1600 291.1596 273.1513 1,4 -

C17H23O4

7 5,61 331,1904 331,1909 201,1284; 71.0183 C20H27O4 -1,5 (Xu; Liu; Liang, 2018)

8 5,74 357,1326 357,1338 - -3,4

C20H21O6 (Xu; Liu; Liang, 2018)

329,0634; 314.0413;
9 5,92 347,1846 347,1858 C20H27O5 -3,5 (Xu; Liu; Liang, 2018)
299.0165

295,1371;
10 6,17 339,1216 339,1232 C20H19O5 -4,7 (Xu; Liu; Liang, 2018)
116,0312;109,0322

11 6,30 315,1949 315,1960 225,1668 C20H27O3 -3,5 (Xu; Liu; Liang, 2018)

281,1558; 265,1228;
12 6,37 325,1441 325,1440 C20H21O4 0,3 (Xu; Liu; Liang, 2018)
235,1138

13 6,58 329,1761 329,1753 285,1899; 116,9326 C20H25O4 2,4 (Xu; Liu; Liang, 2018)

14 6,71 327.1598 327.598 283,1722; 163,1791 C20H23O4 0,6 (Xu; Liu; Liang, 2018)

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Caracterização química, citotoxicidade, potencial antimicrobiano e antioxidante dos extratos de Justicia pectoralis Jacq e Croton jacobinensis Baill

Em relação aos compostos encontrados, derivados
do ácido cafeico (dihexosídeo do ácido cafeico, hexosídeo
do ácido cafeico e glicuronídeo do ácido cafeico) são
relatados na literatura associados ao potencial
antioxidante e anti-inflamatório. Além disso, possuem
atividade antimicrobiana (Moosavi et al. 2017). As
substâncias p-Coumaroil glucoside e p-Coumaroil
galactoside são derivadas de compostos fenólicos com
atividade antioxidante conforme descrito por Tang et al. (2001).
A literatura mostra várias classes de diterpenos
associadas às fórmulas moleculares dos compostos
referentes aos picos 7 a 14 (Xu, Liu, Liang, 2018). No
entanto, devido ao grande número de isômeros, não foi
possível estabelecer a identificação de cada substância e
eles foram identificados provisoriamente como diterpenos. O
ácido cítrico é conhecido na literatura como um antioxidante
natural (Ryan et al., 2019) e possui efeito antimicrobiano por
modificar o pH do meio. Os diterpenos são relatados com
várias atividades biológicas, com larvicida (Geris et al., 2008),
inseticida (Viegas Júnior, 2003) e antimicrobiana (Sá Firmino
et al., 2019). A isoquecitrina tem um efeito positivo na
osteogênese (Li et al., 2019), atividade antibacteriana
(Yun, Woo, Lee, 2018) e antioxidante (Silva et al., 2009).
Kaempferol-O-rutinoside é relatado na literatura com efeito
hepatoprotetor (Wang, Tang, Zhang, 2015), além de outros
compostos fenólicos apresentarem atividade antioxidante e
anti-inflamatória (Ma et al., 2019).
Teor de polifenóis e atividade antioxidante
É possível verificar na Tabela III que, comparadas à
água, as soluções hidroalcoólicas apresentaram maior
eficiência na recuperação de fenólicos e, em todos os
cenários avaliados, C. jacobinensis Baill. apresentou a maior
concentração desses compostos. Geralmente, o aumento da
polaridade do meio favorece a solubização de diferentes
fitoquímicos, como os fenólicos entre os hidroalcoólicos.
Assim, como era de se esperar, a solução hidroalcoólica de
C. jacobinensis preparada a 70% (v/v) foi a mais eficaz na
extração de fenólicos (32.521,5 mg GAE.100g-1), sendo
estatisticamente diferente daquelas preparadas com 50% (v/
v) (31.384,7 mg GAE.100g-1) e com água (24.908,9
GAE.100g-1) com significância de 5%.

TABELA III - Teor de polifenóis totais (TPC) e atividade antioxidante de J. Pectoralis Jacq e C. jacobinensis Baill. extratos.

Polifenóis extraíveis totais

Atividade antioxidante (ÿM de Trolox g-1)
Método de extração expressos (mg GAE 100g-1)

J. Pectoralis Jacq. C. membros jacobinensis. J. Pectoralis Jacq. C. membros jacobinensis.

Aquoso 8.436,1cB ± 105,3 24.908,9cA ± 227,7 367,5cB ± 0,80 967,8bA ± 13,69

etanol 50% 12.111,9bB ± 406,5 31.384,7bA ± 250,4 1.146,8bB ± 83,85 1,486,4aA ± 2,34

etanol 70% 14.501,3aB ± 416,8 32.521,5aA ± 219,9 1.186,1aB ± 54,65 1.507,9aA ± 34,96

Médias com letras iguais, na mesma coluna e linha, não diferiram entre si ao nível de 5% de significância para o teste de Tukey.

Em relação a J. pectoralis Jacq., a solução etanólica a obteve para cada solvente a quantidade de fenólicos
70% (v/v) (igual a 14.501,3 GAE.100g 1) apresentou presentes em C. jacobinensis Baill. foi 60,5% superior ao
eficiência de extração 16 e 42% maior que a preparada com presente em J. pectoralis Jacq (p>0,05).
50% de etanol (12.111, 9 mg GAE.100g-1) e água (8.436,1 A pesquisa atual envolve uma avaliação de diferentes

mg GAE.100g-1), respectivamente. Na mesma situação, solventes e métodos de extração de compostos bioativos

para C. jacobinensis Baill., os valores foram 3,5 e 23,4%. de plantas (Feng et al., 2020). Artega et ai. (2011)
Considerando a média das concentrações compararam os efeitos do uso de água, etanol e acetato de etila como

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Leilanne M. N. Oliveira, Maria S. R. Bastos, Ana C. S. Lima, Evânia A. T. Figueiredo, Flayanna G. B. Dias, Larissa M. R.
Silva, Selene D. Benevides, Paulo R. V. Ribeiro, Luiz B. S. Sabino, Raimundo W. Figueiredo
solventes na extração de compostos fenólicos de J. pectoralis.
Os autores apontaram o etanol como o melhor extratante
na recuperação dos polifenóis, sendo 42 e 66% mais
eficiente que a água e o acetato de etila, respectivamente.
Agra, Freitas e Barbosa-Filho (2007) encontraram
maiores teores de fenólicos no extrato etanólico de J.
pectoralis com valor médio de 23,795 mg AGE/100 g.
Esse valor foi superior ao relatado nesta pesquisa para
essa planta, e isso pode ser função das diferenças das
características da cultivar, bem como no próprio processo de extração.
As informações sobre a caracterização antioxidante da
Anteriormente, destacou-se a quantidade
considerável de fenólicos apresentados por C.
jacobinensis Baill; no entanto, há carência de informações
sobre sua caracterização fitoquímica na literatura. Assim,
a quantidade de fenólicos encontrada em outras espécies
de Croton foi comparada com os dados encontrados
nesta pesquisa. da Silva e cols. (2019) avaliaram
diferentes fitoquímicos em extratos hidroalcoólicos de C.
floribundus e C. urucurana e encontraram concentração
fenólica igual a 9,141 e 7,997 mg AGE/100g,
respectivamente. Uma média de 2,602 mg AGE/100g
para o extrato aquoso de C. cajucara Bentda foi relatada
por da Silva et al. (2013). Para efeito de comparação, o
extrato aquoso produzido nesta pesquisa apresentou
uma concentração de fenólicos 89,55% superior ao
apontado pelos autores. Dall'Acqua et al. (2021)
avaliaram o uso de metanol, água, diclorometano,
acetato de etila e água na extração de compostos
fenólicos presentes em C. hirtus L'Hér. O autor encontrou
concentrações iguais a 1,796, 2,424, 2,251 e 2,238 997
mg AGE/100g, expressivamente inferiores à média obtida nesta pesquisa para
e nutricionais. EmC.relação
Segundo Dutta, Dey e Chaudhuru (2013), as folhas de
Croton ssp são ricas em fitoquímicos (por exemplo,
compostos fenólicos) que possuem diversas propriedades
bioativas, fazendo com que a planta tenha potencial para
ser utilizada como agente terapêutico. Segundo os autores,
os compostos fenólicos apresentam ações anti-inflamatória,
vasodilatadora, antioxidante e podem prevenir diversas
doenças, como câncer e complicações cardíacas. O teor
de fenólicos totais e a atividade antioxidante podem
depender do solvente utilizado para a extração.
É possível verificar na Tabela III que a atividade
antioxidante média foi de 900 e 1.320,7 ÿM de Trolox g-1
para J. pectoralis Jacq e C. jacobinensis Baill,
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respectivamente. Encontrou-se correlação positiva entre a
concentração de fenólicos e a atividade antioxidante; assim,
os extratos hidroalcoólicos apresentaram maior atividade
antioxidante em relação ao extrato aquoso, para ambas as
espécies avaliadas. Entre as espécies, o C. jacobinensis
Baill. exibiu a maior atividade antioxidante em todos os
cenários avaliados, porém os extratos preparados com 50 e
70% de etanol não apresentaram diferença estatística
(P>0,05).
espécie J. pectoralis são limitadas.
Para as infusões aquosas preparadas com a folha de J.
pectoralis, Lizcano et al. (2010) encontraram uma atividade
antioxidante de 18,8 e 89,7 ÿM de Trolox g-1 e empregando
os métodos ABTS•+ e capacidade de absorção de radicais
de oxigênio (ORAC), respectivamente. Esses resultados
foram 95 e 75,6%, respectivamente, inferiores ao
apresentado pelo extrato aquoso avaliado nesta pesquisa.
Croton spp são considerados uma fonte de compostos
antioxidantes, sendo relatados na literatura vários estudos
que demonstram a sua capacidade de eliminação de
radicais livres de forma dependente da dose (da Silva et al.,
2019; Suresh Reddy et al., 2015; Baqueiro-Peña, Guerrero
-Beltrán, 2017). Para C. jacobinensis, Keerthana, Kalaivani
e Sumathy (2013) relataram que o extrato etanólico das
folhas de C. bonplandianum apresenta boa capacidade
antioxidante após o uso do método de captura do radical DPPH.
A pesquisa de antioxidantes naturais de plantas
tem sido aplicada em testes de aditivos farmacêuticos e
alimentícios, devido às suas propriedades terapêuticas
jacobinensis Baill de
à indústria (29,604,3 mg AGE/100g).
alimentos,
essas substâncias de origem vegetal são consideradas
alternativas à substituição de antioxidantes sintéticos,
como o butilhidroxianisole e o butilhidroxitolueno, que
podem causar efeitos adversos à saúde (Rameshkumar,
Sivasudha, 2012). Assim, os resultados preliminares
indicam tanto J. pectoralis quanto C. jacobinensis Baill
como potenciais antioxidantes naturais.
Actividade antimicrobiana
É possível avaliar na Tabela IV que todos os materiais
vegetais apresentaram atividade contra as cepas bacterianas
testadas. Os extratos aquoso e etanólico 50% de J.
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Caracterização química, citotoxicidade, potencial antimicrobiano e antioxidante dos extratos de Justicia pectoralis Jacq e Croton jacobinensis Baill

pectoralis apresentaram atividade antimicrobiana contra
S. aureus, L. monocytogenes, S. enteritidis e E. coli.
O extrato etanólico (70% v/v) não apresentou atividade
antibacteriana para E. coli. Os extratos de J. pectoralis
foram mais efetivos contra bactérias gram-positivas. O C.
jacobinensis extratos de folhas mostraram ação contra
as bactérias Gram-positivas, S. aureus e L.
monocytogenes (Tabela IV). Apenas o extrato
hidroalcoólico (70% v/v) apresentou ação inibitória e
bactericida contra as duas bactérias gram-negativas testadas.

TABELA IV - Atividade antimicrobiana dos extratos de J. pectoralis Jacq e C. jacobinensis Baill

J. peitoral Jacq C. jacobinensis Membros

Microrganismo
Etanol Etanol
Aquoso Etanol Aquoso 50% Etanol 70%
50% 70%

CIM 1 15 5 0,5 1 1,5

S. aureus
CBM 1 15 15 1 2 1,5

CIM 10 15 25 8 6,25 3
L. monocytogenes
CBM 10 15 35 12,5 25 6

CIM 25 25 45 - 25 25
S. enteritidis
CBM 25 25 - - 25 25

CIM 25 40 - - - 25
E. coli
CBM 50 50 - - - 30

MIC = concentração inibitória mínima; CBM = concentração bactericida mínima. Valores em (mg/mL).

A ação antimicrobiana está associada à considerados mais sensíveis aos antimicrobianos.

características específicas do extrato a ser utilizado como
agente antimicrobiano: sua composição determinará o
desempenho deste produto como aditivo conservante em
alimentos. Os aspectos particulares do agente antimicrobiano
a ser aplicado no alimento podem limitar sua ação como
conservante. Alguns metabólitos com atividade antimicrobiana
possuem propriedades hidrofóbicas que podem impedir a
dissolução do extrato em água, limitando seu uso como aditivos
alimentares. As concentrações necessárias para inibição/
inativação de microrganismos estão intrinsecamente ligadas
aos alvos específicos do agente antimicrobiano, pois dependem
da estrutura da célula microbiana alvo e da maquinaria genética
específica de cada espécie de microrganismo (Furtado et al.,
2015).
Os extratos aquosos proporcionaram maior atividade
antimicrobiana (1 e 10 mg/L MIC, respectivamente) contra S.
aureus e L. monocytogenes. Essas bactérias são
devido à constituição de suas paredes celulares. Estes
são em sua maioria de peptideoglicano, o que facilita a
permeabilidade dessas substâncias (Singh et al., 2011).
Maiores concentrações de extrato foram necessárias para
inibição do crescimento celular e morte de bactérias gram-negativas.
A mesma concentração para MIC e MBC (25 mg/ mL)
foi observada para os extratos aquosos e para o extrato
etanólico 50% para S. enteritidis (Tabela IV).
O extrato aquoso foi mais eficiente que o etanólico
(a 50% v/v) para E. coli. As bactérias gram-negativas são
mais resistentes aos antimicrobianos do que as gram
-positivas, pois a parede celular dos gram-negativos
possui uma membrana externa composta por
lipopolissacarídeos e lipoproteínas. Além disso, existem
bombas de fluxo que removem ativamente moléculas
nocivas das células, aumentando assim ainda mais a
tolerância ao tratamento antimicrobiano. No entanto,
alguns autores encontraram comportamento diferente quando o extr

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Leilanne M. N. Oliveira, Maria S. R. Bastos, Ana C. S. Lima, Evânia A. T. Figueiredo, Flayanna G. B. Dias, Larissa M. R.
Silva, Selene D. Benevides, Paulo R. V. Ribeiro, Luiz B. S. Sabino, Raimundo W. Figueiredo

usado contra bactérias gram-negativas. Furtado et ai. (2015) teve ação apenas contra a bactéria P. aeruginosa
Justicia pectoralis, Cymbopogon citratus frente a cepas (37,5% de inibição a 100 mg/mL). O extrato metanólico
de bactérias gram-positivas e gram-negativas. Trata- apresentou o melhor potencial antimicrobiano, sendo
se de uma pesquisa de caráter experimental, ineficaz apenas para S. aureus.
quantitativo e observacional. O material botânico
(folhas) estudou a atividade antimicrobiana de um Teste de citotoxicidade

extrato aquoso de J. pectoralis feito por difusão em

ágar e verificou que o extrato não foi eficiente contra Para o teste de citotoxicidade, foram avaliados o
E. coli e Klebsiella pneumoniae, ambas Gram- extrato aquoso de J. pectoralis e o extrato hidroalcoólico
negativas. Isso se justifica pelo fato de diferentes a 70% (v/v) de C. jacobinensis. De acordo com a Figura
técnicas foram usadas para determinar a atividade 2, pode-se afirmar que ambos os extratos não
antimicrobiana, diferentes métodos foram usados para apresentaram efeitos citotóxicos para o cultivo IEC 6 a
obter os extratos e as plantas são originárias de partir da comparação direta com o controle negativo
diferentes países. O extrato hidroalcoólico (50% etanol (citotoxina A), que, como esperado, apresentou notável
v/v) foi eficaz apenas para S. enteritidis. Singh et al. redução na população celular. Foi observado um
( 2011) avaliou o potencial antimicrobiano de extratos aumento proporcional na viabilidade celular com o aumento das co
aquosos, metanólicos e éter de petróleo de C. bonplandianumEm emmaiorconcentrações
concentração de
(2050-125
mg/mL)mg/mL.
verificou-se aumento
Estes foram obtidos pelo método de difusão em ágar e de 40 e 10% no crescimento da cultura celular, para J.
foram usados contra Bacillus (agora Paenibacillus) pectoralis e C. jacobinensis, respectivamente . Este
macerans, S. aureus, Pseudomonas aeruginosa e resultado significa que os extratos estimulam o crescimento
Pseudomonas striata. Os autores verificaram que o extrato aquoso
das células e implica a segurança de ambos os extratos.

Viabilidade
celular
(%)

(mg/mL)

FIGURA 2 - Citotoxicidade in vitro do extrato aquoso de Justicia pectoralis Jacq e do extrato hidroalcoólico (70% v/v) de Croton
jacobinences Baill.

Semelhante a esta pesquisa, Nunes et al. (2018) não o mesmo extrato reduziu a viabilidade de linhagens celulares
encontraram efeitos citotóxicos em células mononucleares neoplásicas, demonstrando seu potencial no tratamento do câncer.
de sangue periférico normal tratadas com extrato de J. Segundo Brighenti et al. (2014), a identificação e
separação da fração ativa do bruto
pectoralis usando uma concentração de 100 ÿg/mL. Por outro lado,

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Caracterização química, citotoxicidade, potencial antimicrobiano e antioxidante dos extratos de Justicia pectoralis Jacq e Croton jacobinensis Baill

extrato de cada planta pode reduzir o potencial de REFERÊNCIAS

citotoxicidade das concentrações estudadas. Os autores
também destacam que o uso do MTT apresenta Agra MF, Freitas PF de, Barbosa-Filho JM. Sinopse das plantas
conhecidas como medicinais e venenosas no Nordeste do Brasil. Rev
limitações metodológicas, necessitando de estudos mais
Bras Farmacogn. 2007;17(1):114-40.
acurados com modelos animais. Neste caso, estudando
Artega JJM, Perea EM, Váron EY, Ospina WFS, Osório JN, Martínez
a toxicidade de microcápsulas de J. pectoralis pelo
OMM. Influência do clima na composição química e atividade antioxidante
método Zebrafish, Guimarães et al. (2020) não relataram
de Justicia pectoralis Jacq. Rev Cuba de Fazenda. 2011;45(1):88-100.
efeito sedativo ou prejuízo na locomoção nos animais
testados com a amostra em diferentes concentrações.
Baqueiro-Peña I, Guerrero-Beltrán JÁ. Physicochemical and antioxidant
Também empregando o método Zebrafish, Ramos et al. characterization of Justicia spicigera. Food Chem. 2017;218:305-12.
(2009) avaliaram a citotoxicidade de diferentes extratos
vegetais utilizados na medicina nordestina, entre eles
Brandt AL, Castillo A, Harris KB, Keeton JT, Hardin MD, Taylor TM.
várias espécies de Croton. Em relação a C. jacobinensis, Inibição de Listeria monocytogenes por Antimicrobianos Alimentares
os autores apontaram que os extratos preparados com Aplicados Isoladamente e em Combinação. J Food Sci. 2010;75(9):M557.

as folhas utilizando etanol e hexano não apresentaram

toxicidade para os animais. Por outro lado, o extrato Branen JK, Davidson PM. Aumento das atividades antimicrobianas da
etanólico preparado com caule apresentou toxicidade nisina, lisozima e monolaurina pelo ácido etilenodiaminotetracético e
lactoferrina. Int J Food Microbiol. 2004;90(1):63-74.
elevada. De maneira geral, mesmo sendo diferentes
métodos para avaliar a toxicidade de amostras naturais,
Brighenti FL, Salvador MJ, Delbem ACB, Delbem ÁCB, Oliveira MAC,
os resultados relatados pelos autores podem colaborar
Soares CP, et al. Triagem sistemática de extratos de plantas do pantanal
para afirmar a segurança dos extratos produzidos com ambas as plantas estudadas.
brasileiro com atividade antimicrobiana contra bactérias com relevância
cariogênica. Cárie Res. 2014;48(5):353-60.
CONCLUSÕES

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O extrato etanólico 70% mostrou-se mais eficaz por antimicrobianos em sistemas alimentares – Uma revisão. Controle
apresentar maiores quantidades de compostos bioativos, Alimentar. 2015;54:111-9.

como compostos polifenólicos e apresentou maior atividade
antioxidante. Os extratos orgânicos estudados apresentaram
atividade antimicrobiana contra S. aureus, L. monocytogenes,
S. enteritidis e E. coli. Os extratos de J. pectoralis e C.
jacobinensis apresentaram potencial para uso em produtos
alimentícios, justificado pelas propriedades antioxidantes e
antimicrobianas indicadas e pela não toxicidade às células
humanas dos extratos de ambas as plantas.
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solventes. Moléculas. 2021;26(7):1902.
information and does not imply recommendation or endorsement.

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Caracterização química, citotoxicidade, potencial antimicrobiano e antioxidante dos extratos de Justicia pectoralis Jacq e Croton jacobinensis Baill

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Recebido para publicação em 14 de abril de 2021

Aceito para publicação em 19 de outubro de 2021

Braz. J. Pharm. ciência 2023;59: e21224 Página 13/13