Machine Translated by Google

Artigo de pesquisa

O extrato seco de bagas de açaí (Euterpe oleracea Mart.) melhora

úlcera induzida por etanol em ratos
a
Benhur Judá Curya , Boeing tailandês , Lincon Bordignon Somensia , Luisa Nathalia Bolda Mariano ,
Sérgio Faloni de Andradea,b , Eduardo Breviglieria,c, Luiz Carlos Klein-Juniora , Priscila de Souzaa
e Luísa Mota da Silva
~
a
Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, Centro de Pesquisas Químico-Farmacêuticas (NIQFAR), Universidade do Vale do Itajaí
– UNIVALI, Itajaÿ, Santa Catarina, Brazil, b CBIOS, Research Center for Biosciences and Health Technologies, Universidade Lusofona, Lisboa, Portugal
e c Faculdade de Medicina – Estacio de Jaragua, Jaragua do Sul, Santa Catarina, Brazil

Palavras-chave
antocianinas; Euterpe precatoria Mart;
gastroproteção
Correspondência
Thaise Boeing, Programa de Pos-Graduac ~ao
em Ciências Farmacêuticas, Centro de Pesquisa
~ úlcera gástrica em ratos. Sua capacidade de regular as defesas antioxidantes e reduzir
Químico-Farmacêutica
(NIQFAR), Universidade do Vale do Itajaÿ –
UNIVALI, Itajaÿ, Santa Catarina, Brazil.
E-mail: tize.thaise@gmail.com
Recebido em 12 de fevereiro de 2020
Aceito em 26 de abril de 2020
dois: 10.1111/jphp.13290
Abstrato
Objetivos O açaí (Euterpe oleracea) é amplamente consumido no Brasil e conhecido por
suas inúmeras propriedades benéficas à saúde. Este estudo investigou o potencial gastroprotetor do
extrato seco de bagas de açaí (DAE).
Métodos O efeito do extrato de frutos secos de açaí foi avaliado contra
parâmetros inflamatórios foram avaliados nos tecidos ulcerados. O necrófago
a capacidade do DAE foi avaliada pelo ensaio DPPH e composição fitoquímica
foi acessado por UHPLC.
Principais descobertas O extrato mostrou atividade eliminadora de radicais in vitro
(IC50 = 210 µg/ml) e efeito gastroprotetor in vivo, reduzindo a ulceração
área em 83%, 67% e 48% nas doses de 30 e 100 mg/kg (po) e 3 mg/kg
(ip), respectivamente, em comparação com o grupo de veículos. Além disso, DAE (100 mg/kg, VO)
aumentou o conteúdo de GSH e a atividade de GST na mucosa ulcerada. Animais tratados com DAE
apresentaram níveis normalizados de atividade de SOD, atividade elevada de CAT
e diminuição da atividade da MPO, bem como redução dos níveis de TNF-a, em comparação com
grupo de veículos. Peonidina-3-glicosídeo, peonidina-3-rutinosídeo, cianidina-3,5-hex-osídeo-
pentosídeo, cianeto-3-glicosídeo, pelargonidina-3-glicosídeo e pelargoni-din-3-rutinosídeo foram
identificados no DAE.

Conclusões Nossos achados sugerem que o DAE reduz a inflamação e

mantém o equilíbrio oxidativo da mucosa gástrica, sendo, portanto, um promissor
recurso natural ou nutracêutico útil para proteger a mucosa gástrica.

O tratamento farmacológico da DUP é baseado em

Introdução
A úlcera péptica (UDP) é um distúrbio gastrointestinal prevalente em
todo o mundo, causado por um desequilíbrio entre as proteções (barreira
epitelial, secreção de muco, fluxo sanguíneo,
fosfolipídios ativos de superfície, prostaglandinas, renovação celular,
drogas antissecretoras, incluindo os antagonistas da histamina
receptor tipo 2 e inibidores irreversíveis da bomba de prótons.
Esses tratamentos apresentam efeitos adversos, e terapias alternativas
com finalidade nutracêutica representam uma promissora
alternativa.[1,2]

antioxidantes não enzimáticos e enzimáticos, e alguns
fatores de crescimento e regeneração celular) e agentes agressivos
(secreção de ácido-pepsina e espécies reativas de oxigênio
[ROS]).[1] Além disso, o uso prolongado de medicamentos não esteróides
medicamentos anti-inflamatórios, estresse, predisposição hereditária
e infecção por Helicobacter pylori estão envolvidos na úlcera
etiologia.[2]
Os frutos de Euterpe oleracea Mart. (Arecaceae Schultz
Sch.), da Amazônia, popularmente conhecidas como bagas de 'açaí'
têm recebido atenção nos últimos anos devido à saúde
benefícios associados ao alto poder antioxidante relacionado ao
o alto teor de flavonóides da classe das antocianinas.[3] Em
Na última década, houve um aumento notável no uso
do açaí como bebida energética com simultânea

© 2020 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 72 (2020), pp. 1239
Machine Translated by Google
O efeito gastroprotetor das bagas de Açaí
aumento de pesquisas científicas sobre suas propriedades
biológicas e presença de compostos bioativos[4]; entretanto, seus
efeitos gastroprotetores nunca foram elucidados, levando-nos a
investigar o potencial de um extrato seco de açaí (DAE) contra
úlceras gástricas induzidas por etanol em ratos.
Materiais e métodos
Obtenção de extrato seco e análise química
O extrato seco de açaí (DAE) foi obtido da All Chemistry Natural
Products & Pharmaceuticals (São Paulo, Brasil), padronizado em
1,95% do total de antocianinas.
Para identificação fitoquímica, DAE (1 g) foi suspenso em 50
ml de metanol/HCl 0,1% (1:1, v/v) e a fração insolúvel foi removida
por filtração. O metanol foi evaporado em evaporador rotativo
(50°C) e a água foi removida por liofilização. Dez miligramas do
extrato obtido foram dissolvidos em 1 ml de metanol e filtrados
através de filtro de membrana (0,22 µm). Um sistema de
cromatografia líquida de ultra-alta eficiência (UHPLC) (LC 1260
Infinity Agilent, Sta Clara, CA, EUA) foi utilizado para análise
química. A separação cromatográfica foi realizada quando 4 ll da
amostra foram injetados em uma coluna Agilent Eclipse Plus
C18 RRHD (1,8 lm, 2,10 9 50 mm) a 40 °C, eluída com uma fase
móvel contendo água (ácido fórmico 0,1% ) (i), acetonitrila (ii) e
metanol (iii) em um gradiente de 90: 5: 5 (A: B: C, v/v/v, 0 min) a
30: 5: 65 (v/v/ v, 5 min) e a 15:5:80 (v/v/v, 12–20 min) a uma taxa
de fluxo de 0,4 ml/min. A detecção foi realizada em um sistema
de espectrômetro de massa triplo quádruplo Agilent 6420,
contendo uma fonte de ionização por eletrospray operando em
modo positivo e varrendo de m/z 100 a 1000.
Animais
Ratas Wistar fêmeas (200-250 g) provenientes do biotério
Central da UNIVALI foram mantidas em caixas de polipropileno,
em período claro e escuro de 12 horas e 25 C, com livre acesso
a ração (ração comercial Nuvilab Cr-1). e água. Todos os
protocolos foram aprovados pelo CEUA/UNIVALI (034/16p).
Atividade de eliminação de radicais livres
O potencial redutor do DAE (11.000 µg/ml) foi determinado pelas
alterações em 517 nm do radical livre 2, 2-difenil-1-picrilhidrazil
(DPPH).[5] O ácido ascórbico (50 µg/ml) foi utilizado como controle
positivo.
Úlcera aguda induzida por etanol
Conforme descrito por Morimoto et al., [6] os animais (n = 6)
foram pré-tratados com omeprazol (30 mg/kg, o resultado positivo
1240 © 2020 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 72 (2020), pp.
Benhur Judah Cury et al.
controle), veículo (água, 10 ml/kg), DAE (30–300 mg/kg, po) ou
DAE (3 mg/kg, ip). Após uma hora dos tratamentos orais ou 30
minutos da administração intraperitoneal, todos os ratos receberam
etanol a 98% (5 ml/kg). Os ratos foram eutanasiados após uma
hora de ingestão de etanol e os estômagos foram abertos para
medir a área da úlcera utilizando o software EARP.
louça.
Ensaios bioquímicos
semelhança de Meurer et al., [5] o tecido ulcerado foi, à
homogeneizado em tampão fosfato 200 mM (pH 6,5) e
imediatamente utilizado para quantificação dos níveis de glutationa
reduzida (GSH) e lipoperóxidos (LOOH). O material restante foi
posteriormente centrifugado (20 min, 9000g, 4 °C) e no
sobrenadante foi quantificada a atividade da superóxido dismutase
(SOD), catalase (CAT) e glutationa S-transferase (GST). O
precipitado foi utilizado para determinar a atividade da
mieloperoxidase (MPO). O homogeneizado também foi utilizado
para estimar os níveis de TNF-a (fator de necrose tumoral) por
ensaio imunoenzimático utilizando um kit da BD Biosciences
(Franklin Lakes, NJ, EUA) de acordo com as instruções do
fabricante.
Estatisticas
Cada experimento in vitro foi conduzido de forma independente
pelo menos três vezes, e foram necessários mais de cinco
animais por grupo para experimentos in vivo. Os dados foram
expressos como média SEM, e análise de variância (ANOVA)
unidirecional seguida de teste post hoc de Dunnett ou Bonferroni
foi aplicada para verificar as diferenças entre as médias. A análise
estatística foi realizada utilizando o software GraphPad Prism
versão 7.00 (GraphPad Software, La Jolla, CA, EUA). AP < 0,05
foi considerado significativo.
Resultados e discussão
O açaí (E. oleracea) é amplamente consumido no Brasil e ganhou
atenção da comunidade científica na última década. De facto,
estudos têm descrito os seus efeitos antioxidantes e anti-
inflamatórios,[7] ambos relacionados com a sua composição
fenólica. Flavonóides (por exemplo, apigenina, cat-equina e
quercetina) e pequenos compostos fenólicos (por exemplo, ácido
gálico, ácido benzóico e ácido cumárico) são bem descritos para
o açaí; além disso, foram relatadas antocianinas.[4]
A análise química do DAE por LC-ESI-MS (Liquid
Chromatography Electrospray Ionization Tandem Mass
Spectrometric; Figura 1) permitiu a suposta identificação das
principais antocianinas já descritas na literatura: o íon molecular
[M+H]+ em m /z 581,47 foi atribuído a cianidina-3,5-hexosídeo-
pentosídeo (pico 1, tR 8,31 min),
Machine Translated by Google

Benhur Judah Cury et al. O efeito gastroprotetor das bagas de Açaí

m/z 579,21 para pelargonidina-3-rutinosídeo (pico 2, tR 8,31
min), m/z 449,09 para cianidina-3-glicosídeo (pico 3, tR 8,52
min), m/z 433,18 para pelargonidina-3-glicosídeo (pico 4, tR
8,63 min), m/z 463,36 para peonidina-3-glicosídeo (pico 5,
tR 8,94 min) e 609,03 para peonidina-3-rutinosídeo (pico 6,
tR 12,01 min).[8,9] Esses compostos são caracterizado por
seu núcleo flavonóide, contendo um íon flavílio, responsável
pela cor roxa da fruta, bem como por suas ações
antioxidantes e antiinflamatórias.[4]
A hipótese sobre a atividade necrófaga do DAE foi
avaliada no ensaio DPPH (Figura 2c). A incubação DAE
reduziu o radical DPPH em até 90%, comparado

Figura 2 Efeitos do DAE na úlcera gástrica induzida por etanol por via oral (a) e intraperitoneal (b) e atividade eliminadora de DAE (c). NV (Naive: Sem
tratamento), VEH (Veículo, 10 ml/kg); OME (Omeprazol, 30 mg/kg); DAE (extrato seco de açaí); AA, ácido ascórbico, 50 lg/ml. Os resultados são
expressos como média SEM (n = 6). A análise estatística foi realizada utilizando ANOVA unidirecional seguida pelo teste de Dunnett, **P < 0,01 e ***P <
0,01 vs grupo veículo.

© 2020 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 72 (2020), pp. 1241
Machine Translated by Google

O efeito gastroprotetor das bagas de Açaí Benhur Judah Cury et al.

Figura 3 Efeitos do DAE no estresse oxidativo na úlcera gástrica induzida por etanol. (a) GSH (glutationa reduzida); (b) GST (glutationa S-transferase);
(c) SOD (superóxido dismutase); (D) CAT (Catalase). NV (Naive: Sem tratamento), VEH (Veículo, 10 ml/kg), OME (Omeprazol, 30 mg/kg) e DAE
(extrato de açaí seco); Os resultados são expressos como média SEM (n = 6). A análise estatística foi realizada utilizando ANOVA unidirecional seguida pelo teste de Bonfer-roni
###P < 0001 e #
P < 0,05, vs. grupo ingênuo **P < 0,01 e *P < 0,05, vs grupo veículo.

Figura 4 Efeitos do DAE na atividade do MPO (a) e na quantidade de TNF-a (b) na úlcera gástrica induzida por etanol. NV (Ingênuo: Sem tratamento), VEH (Veículo,
10 ml/kg), OME (Omeprazol, 30 mg/kg) e DAE (extrato seco de açaí). Os resultados são expressos como a média SEM (n = 6). A análise estatística foi
realizada utilizando ANOVA unidirecional seguida pelo teste de Bonferroni. ##P < 0,01 quando comparado com o grupo ingênuo, ***P < 0,001 quando comparado
com grupo de veículos.

com grupo veículo (18,81 0,21 lM). Portanto, a capacidade de limpeza
do DAE confirmou novamente que as bagas de açaí são
uma fonte interessante de compostos antioxidantes.
O modelo clássico de úlcera induzida por etanol tem sido
amplamente empregado em estudos gastroprotetores porque o etanol
promove estase do fluxo sanguíneo gástrico e necrose.[10]
Conforme mostrado na Figura 2a, o etanol promoveu lesões graves no
mucosa gástrica, que foram reduzidos em 83% e 67% por
DAE a 30 e 100 mg/kg (po), comparado com o veículo
a administração 12,80 mm2 ). Além disso, o grupo intraperi (96,94)
tonal de DAE reduziu a área da úlcera em
48%, indicando que o DAE não atua apenas topicamente no
mucosa gástrica (Figura 2b).
Dada a atividade eliminadora de DAE, seus efeitos contra
estresse oxidativo durante a patogênese da úlcera gástrica também foram
investigado. O estresse oxidativo é resultante de uma

1242 © 2020 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 72 (2020), pp.
Machine Translated by Google

Benhur Judah Cury et al. O efeito gastroprotetor das bagas de Açaí

desequilíbrio entre os níveis pró-oxidantes e antioxidantes, promovendo
lesões celulares.[11] O GSH atua como um potente antioxidante
endógeno, gerando direta ou indiretamente substrato para outras
enzimas antioxidantes.[12] Comparado ao grupo veículo, o grupo que
recebeu DAE (100 mg/kg) apresentou aumento considerável nos níveis
de GSH (Figura 3a), indicando a preservação do estado redox na
mucosa gástrica. A GSH pode atuar como cofator para enzimas
antioxidantes, como a GST.[13] Curiosamente, os animais tratados
com DAE a 100 mg/kg tiveram um aumento na atividade da GST
(Figura 3b), em comparação com o grupo veículo.
Assim, o incremento na atividade da GST pode ser devido ao aumento
na disponibilidade do seu cofator GSH. Uma vez que o GST é
responsável pela desintoxicação de agentes nocivos endógenos,[12] o
aumento da atividade da enzima glutationa S-transferase em ratos
tratados com DAE reflete sua ação desintoxicante.
Portanto, esta enzima tem sido utilizada como um marcador indireto da
migração de neutrófilos. Conforme mostrado na Figura 4a, a
administração de DAE (100 mg/kg, vo) diminuiu a atividade da MPO
em 67%, bem como reduziu em 34% os níveis de TNF-a (Figura 4b),
relacionados à grupo ulcerado por veículo. Esses achados são
indicativos adequados de que o extrato reduziu a infiltração de
neutrófilos no local da úlcera, evitando assim alguns dos danos
causados pelo processo inflamatório.
Além disso, como o grupo tratado com DAE equivale a níveis basais
de TNF-a, é possível afirmar que o extrato evita danos causados por
essa citocina inflamatória, inclusive a sinalização que favorece a
migração de células inflamatórias. Além disso, compostos fenólicos
como o ácido gálico comumente encontrados nas bagas de açaí
apresentaram resultados semelhantes contra úlcera gástrica induzida
por etanol.[18]

A SOD converte o ânion superóxido (O2– ) em peróxido de

Conclusões
hidrogênio (H2O2), e a catalase converte o peróxido de hidrogênio em
(H2O) e oxigênio (O2).[14] Conforme mostrado nas Figuras 3c e 3d, a As bagas de açaí reduzem a inflamação e mantêm o equilíbrio oxidativo
ingestão de etanol promoveu aumento na atividade de SOD e CAT, da mucosa gástrica danificada pelo etanol, sendo portanto um recurso
visualizado pela diferença entre o grupo ulcerado tratado com veículo natural promissor ou nutracêutico útil para proteger a mucosa gástrica.
e o grupo ingênuo. No entanto, os animais tratados com DAE No entanto, mais estudos são necessários para elucidar os efeitos
apresentaram níveis de atividade de SOD semelhantes aos encontrados curativos gástricos do DAE em um regime de tratamento de longo prazo.
nos grupos não ulcerados (P> 0,05; Figura 3c) e atividade CAT
elevada em comparação com o grupo não ulcerado (P <0,01; Figura
3d).
Declarações
É possível deduzir que a atividade sequestradora de radicais livres
Conflitos de interesse
do extrato ou mesmo o aumento na disponibilidade de GSH após a
administração do extrato reduziu a disponibilidade de substratos para Os autores não declararam conflitos de interesse.
SOD, reduzindo assim a atividade da enzima. A atividade da CAT pode
ser melhorada por compostos dietéticos que melhoram os sistemas
antioxidantes.[15] De maneira semelhante à encontrada em nossos
Reconhecimentos
resultados, o consumo dietético de açaí por mulheres saudáveis Os autores agradecem ao CNPq, CAPES e UNIVALI pela bolsa e apoio
aumentou a atividade da CAT, mas não da SOD.[14] Além disso, das financeiro.
antocianinas identificadas neste estudo, o efeito gastroprotetor da
cianidina-3-glicosídeo foi previamente estudado, mostrando o mesmo
Contribuição do autor
perfil de restauração do equilíbrio oxidativo que o DAE neste estudo.[16]
BJC, LBS e LNBM realizaram os testes farmacológicos; TB e EB
participaram do trabalho experimental e da redação; LCK-J conduziu a
Durante o processo inflamatório ocorre a migração neutrofílica análise fitoquímica; PS realizou a análise estatística e corrigiu o
devido à presença de substâncias quimiotáticas na área da lesão, os manuscrito; SFA e LMS realizaram o desenho do estudo e contribuíram
neutrófilos, por sua vez, sofrem desgranulação de mediadores com reagentes e ferramentas analíticas.
importantes como o MPO.[17] Lá-

Referências
1. SumbulS et al. Papel dos compostos
fenólicos na úlcera péptica: uma visão
geral. J Pharm Bioalied Sci 2011; 3:
361–367.
2. DeVault KR, Talley NJ. Insights sobre o
futuro da supressão do ácido gástrico.
Nat Rev Gastroenterol Hepatol 2009; 6:
524–532.
3. Earling M et al. Suplementos dietéticos de
açaí (Euterpe oleracea):
variações nas concentrações de
antocianinas e flavonóides, conteúdo
fenólico e propriedades antioxidantes.
Alimentos Vegetais Hum Nutr 2019; 74: 421–429.
4. Yamaguchi KKL et al. Açaí da Amazônia:
química e atividades biológicas: uma

© 2020 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 72 (2020), pp. 1243
Machine Translated by Google
O efeito gastroprotetor das bagas de Açaí
análise. Química Alimentar 2015; 179: 137–
151.
5. Meurer MC et al. O extrato hidroalcoólico das
flores de Tagetes erecta L., rico no carotenóide
luteína, atenua a secreção de citocinas
inflamatórias e melhora o estresse oxidativo em
modelo animal de colite ulcerativa.
Nutr Res 2019; 66: 95–106.
6. Morimoto Y et al. Efeitos do novo
agente antiúlcera KB-5492 em lesões
experimentais da mucosa gástrica e fatores
defensivos da mucosa gástrica, em comparação
com os da teprenona e da cimetidina.
Jpn J Pharmacol 1991; 57: 495–505.
7. de Freitas Carvalho MM et al. Effects
do açaí no estresse oxidativo, estresse de RE e
parâmetros relacionados à inflamação em
camundongos com DHGNA induzida por dieta rica
em gordura. Representante Científico 2019; 9: 8107.
8. Astrid Garzón G et al. Composição polifenólica e
atividade antioxidante do açaí (Euterpe oleracea
Mart.) de.
1244
Colômbia. Química Alimentar 2017; 217: 364–
372.
9. Dias ELA et al. Um método UHPLC – PDA
validado rapidamente para anto-
quantificação de cianinas em frutos de Euterpe
oleracea. J Cromatogr B 2012; 907: 108–116.
10. Franke A et al. Distúrbios relacionados ao álcool
facilidades do esôfago e estômago.
Escavar Dis 2005; 23: 204–213.
11. Perez S et al. Sinalização redox no trato
gastrointestinal. Radic Livre Biol Med 2017; 104:
75–103.
12. Cnubben NHP et al. A interação da glutationa
processos
relacionada à defesa antioxidante. Toxicol
Ambiental
Farmacol 2001; 10: 141–152.
13. Junior RL et al. Sistema antioxidante envolvendo
o ciclo metabolico da glu- associado a metodos
tationa
eletroanalÿticos na avaliac~ao do
estresse oxidativo. Quÿmica Nova 2001; 24:
112–119.
© 2020 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 72 (2020), pp.
Benhur Judah Cury et al.
14. Barbosa PO et al. A ingestão dietética de polpa
de açaí (Euterpe oler-acea Mart.) melhora as
enzimas antioxidantes celulares e os
biomarcadores séricos em mulheres saudáveis.
Nutrição 2016; 32: 674–680.
15. Radomska-Lesniewska DM et al.
Modulação da angiogênese por antioxidantes
exógenos. Cent Eur J Immu-nol 2017; 42: 370–
376.
16. Li CY et al. Efeito gastroprotetor da cianidina 3-
glicosídeo em lesões gástricas induzidas por
etanol em ratos. Álcool 2008; 42: 683–687.
17. Lacy P. Mecanismos de desgranulação em
neutrófilos. Alergia Asma Clin Immunol 2006; 2:
98–108.
18. Zhou D et al. Efeito gastroprotetor do ácido gálico
contra úlcera gástrica induzida por etanol em
ratos: envolvimento da sinalização Nrf2/HO-1 e
papel anti-apoptose. Farmacoter Biomédico
2020; 126: 110075.