Universidade Estadual Vale do Acaraú – UVA

PROGRAMA DE BOLSAS DE PRODUTIVIDADE EM PESQUISA, ESTÍMULO

À INTERIORIZAÇÃO E INOVAÇÃO TECNOLÓGICA – BPI
EDITAL nº 02/2020

Hélcio Silva dos Santos

Link para acessar o Currículo Lattes e ORCID

http://lattes.cnpq.br/3478842054984497
https://orcid.org/0000-0001-5527-164X

Síntese, caracterização espectroscópica e avaliação da atividade antimicrobiana

contra bactérias multirresistentes de compostos hidrazônicos obtidos a partir de
benzaldeidos e chalconas utilizando os fármacos comerciais Apresolina® e
isoniazida

Área do conhecimento predominante: Ciências Exatas e da Terra

Áreas do conhecimento correlatas: Química orgânica, Síntese orgânica.

Sobral-Ceará
Setembro 2020

1
1. IDENTIFICAÇÃO DO COORDENADOR DO PROJETO

Coordenador e Pesquisador: Dr. Hélcio Silva dos Santos, Licenciado em Química

com mestrado e doutorado em Química Orgânica pela Universidade Federal do Ceará.
Pós-Doutorado em síntese e avaliação do potencial antimicrobiano de chalconas
realizado na Universidade Federal do Ceará (2018-2019). Atualmente é professor
Associado da Universidade Estadual Vale do Acaraú-UVA e professor permanente dos
Programas de Pós-Graduação em Química Biológica da Universidade Regional do
Cariri-URCA e Pós-Graduação em Ciências Naturais da Universidade Estadual do
Ceará-UECE, além de membro do corpo editorial do periódico Journal of Applied
Biopharmaceutics and Pharmacokinetics. Foi Vice-coordenador (03/2008-02/2010) e
Coordenador (03/2010-03-2014) do curso de Química da UVA. Tem experiência na
área de Química Orgânica, com ênfase em Química de Produtos Naturais e síntese
Orgânica, atuando principalmente nos seguintes temas: isolamento, purificação e
elucidação estrutural de metabólitos secundários e chalconas sintéticas. Atividade:
Realizar a síntese das chalconas e hidrazonas, Discutir com os colaboradores a
elucidação estrutural dos compostos sintetizados por meio da análise dos dados de
Ressonância Magnética Nuclear.

2. ATIVIDADES DE PESQUISA DESENVOLVIDAS (2016-2020)

Artigos publicados em periódicos nacionais e internacionais: 63 artigos publicados

Livro publicado: 01
Capítulos de livro: 02
Patentes: 01 patente depositada
Orientações concluídas: 01 dissertação de mestrado, 04 co-orientações de mestrado e 11
alunos de iniciação cientifica, 06 trabalhos de conclusão de curso de graduação.
Orientações em andamento: 03 orientações de doutorado, 02 orientações de mestrado,
06 co-orientações de doutorado, 02 co-orientações de mestrado, 01 orientação de Pós-
doutorado, 03 orientações de iniciação cientifica.
Parcerias institucionais: Universidade Federal do Ceará, Universidade Regional do
Cariri, Universidade Estadual do Ceará, Universidade Federal do Piaui;
Resumo simples e expandido publicado em anais de eventos: 38 resumos expandidos e
40 resumos simples, totalizando 78 comunicações em eventos científicos;
Parecer de artigo: 07 pareceres

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3. IDENTIFICAÇÃO DOS PESQUISADORES COLABORADORES DO PROJETO

Pesquisador Colaborador: Dr. Alexandre Magno Rodrigues Teixeira, Professor

vinculado ao Departamento de Física da Universidade Regional do Cariri – URCA.
Atividade: Realizar estudo de espectroscopia Raman, infravermelho e UV-Vis e
cálculos computacionais DFT das amostras sintetizadas.

Pesquisador Colaborador: Dra. Raquel Oliveira dos Santos Fontenelle, Professora do

Curso de Biologia da Universidade Estadual Vale do Acaraú-UVA. Atividade:
Realização e análise dos resultados de atividade antimicrobiana e moduladora das
chalconas e hidrazonas sintetizadas.

Pesquisador Colaborador: Dra. Paulo Nogueira Bandeira, Professor do Curso de

Química da Universidade Estadual Vale do Acaraú-UVA. Atividade: Auxiliar na parte
experimental das sínteses das chalconas e hidrazonas.

RESUMO

Nos últimos anos, devido ao uso descontrolado de antibióticos e à evolução natural,

muitos microrganismos patógenos têm adquirido resistência aos fármacos atualmente
disponíveis. E consequentemente, tem aumentado o número de infecções causadas por
esses microrganismos, considerados multirresistentes às drogas antimicrobianas,
tornando-se um grave problema de saúde pública mundial. Por isso, o desenvolvimento
de novos fármacos com atividade antimicrobiana tem estimulado a comunidade
científica a investigar novas substâncias e formulações capazes de controlar esses
microorganismos resistentes, de maneira mais eficiente e seletiva. Chalconas fazem
parte da família de compostos fenólicos que estão sendo extensivamente estudadas por
apresentarem diversas atividades biológicas. Elas são caracterizadas por apresentarem
em sua estrutura fundamental o sistema carbonílico α, β-insaturado interligado por dois
anéis aromáticos. Compostos orgânicos que possuem em sua estrutura química uma
porção hidrazona e N-acilidrazona possuem grande relevância na Química devido às
suas várias propriedades farmacológicas e biológicas. Desta forma, este projeto de
pesquisa tem por finalidade realizar a síntese, caracterização espectroscópica, e
avaliação do potencial de atividade antimicrobiana de compostos hidrazônicos obtidos a
partir de aldeidos e chalconas utilizando fármacos comerciais Apresolina® e isoniazida,

Palavras-chave: Chalconas, hidrazonas, cálculos DFT, microorganismos.

4. REVISÃO DA LITERATURA

3
 A descoberta de agentes antimicrobianos, principalmente os antibióticos, permitiu
um grande avanço da medicina nos últimos anos. Principalmente no que diz respeito a
redução da mortalidade e aumento na expectativa de vida. Nos últimos anos, devido ao
uso descontrolado de antibióticos e à evolução natural, muitos microrganismos
patógenos têm adquirido resistência aos fármacos atualmente disponíveis (Freitas et al.,
2020). Por isso, a comunidade científica tem investigado novas substâncias e
formulações capazes de combater micro-organismos de maneira mais eficiente e
seletiva (Amaral et al., 2017).
Vários estudos teóricos com diferentes métodos de cálculos computacionais têm
sido realizados para melhor entender os espectros vibracionais e a relação estrutura-
atividade de fármacos (Campelo et al., 2017). Nesse contexto, pesquisas envolvendo a
síntese, a caracterização espectroscópica e vibracional de chalconas e hidrazonas bem
como a avalição do seu potencial antimicrobiano têm sido alvo de vários estudos (Lima
et al., 2020; Bingul et al., 2020; Santiago et al., 2018).
As chalconas são compostos fenólicos que fazem parte de uma família de
pequenas moléculas com ampla distribuição em diferentes partes aéreas de plantas. Elas
são caracterizadas pela presença dois anéis aromáticos (A e B) interligados por um
sistema carbonílico, aberto, de três carbonos α, β-insaturados e possuem como estrutura
fundamental o esqueleto C6-C3-C6 (Figura 1) (Rani et al., 2019).

Figura 1. Representação Estrutural do núcleo fundamental das chalconas

A vasta gama de atividades que as chalconas e seus derivados possuem está
relacionada basicamente a dois fatores principais: o primeiro fator é a subunidade prop-
2-en-1-ona α,β-insaturada como parte reativa da molécula, o segundo fator é a
infinidade de possibilidades de modificação das ligações nos anéis A e B desses
compostos, pela adição de diferentes grupos funcionais (Gupta, Singh, Gupta, 2017).
. Elas são substâncias de grande interesse químico-farmacológico por possuírem uma
riqueza de atividades biológicas e farmacológicas associadas à sua diversidade
estrutural (Zhuang et al., 2017). A ampla variedade de atividades que as chalconas
apresentam inclui anticâncer (Bandeira et al., 2019), antiinflamatória (Ferreira et al.,
2018), antioxidante (Arif et al., 2020), antimicrobiana (Silva et al., 2020; Teixeira et al.,
2019; Shaik, Yejella, Shaik, 2017), antileishmaniose (Assolini et al., 2020),

4
antituberculose, antimalárico e antialérgico (Verma, Srivastava; Pandey, 2018), entre
outras.
Assim como as chalconas os compostos orgânicos que possuem em sua estrutura
química uma porção hidrazona e N-acilidrazona (Figura 2) possuem grande relevância
na Química. A literatura tem reportado várias propriedades farmacológicas e biológicas
dessa promissora classe de substâncias. Vale ressaltar que, vários fármacos contendo
um fragmento N-acilidrazona em sua estrutura química foram aprovadas e vêm sendo
utilizados em vários países, dentre os quais podemos citar: a nifuroxazida (antisséptico
intestinal), o dantrolene (relaxante muscular) e o carbazocromo (anti-hemorrágico)
(Arruda et al., 2020).

Figura 2. Representação estrutural da hidrozona e N-acilidrazona

Os fármacos contendo as porções hidrazina e hidrazida (Figura 3) que serão
utilizados para a síntese das hidrazonas e N-acilidrazonas almejadas serão obtidas a
partir dos medicamentos comerciais Apresolina® e isoniazida. O fármaco
Apresolina® exibe ação anti-hipertensiva e vasodilatadora periférica, sendo
denominado quimicamente como cloridrato de 1-hidrazinilftalazina (hidralazina). Este
composto é usado inclusive como redutor emergencial da pressão arterial de pacientes
em crise de hipertensão. A isoniazida é um pró-fármaco usado como primeira escolha
para o tratamento quimioterápico da tuberculose, infecção causada pelo bacilo
Mycobacterium tuberculosis (Arruda et al., 2020).

Figura 3. Representação estrutural dos fármacos hidralazina e isoniazida

Desta forma, este projeto de pesquisa tem por finalidade realizar a síntese,
caracterização espectroscópica, e avaliação do potencial de atividade antimicrobiana de
compostos hidrazônicos obtidos a partir de aldeidos e chalconas utilizando fármacos
comerciais Apresolina® e isoniazida.
5. OBJETIVOS

5
5.1 Objetivo Geral

O objetivo central deste projeto é sintetizar compostos hidrazônicos a partir de

benzaldeidos e chalconas utilizando os fármacos comerciais Apresolina® e isoniazida,
e investigar suas propriedades estruturais, vibracionais e eletrônicas, e avaliar o
potencial de atividade antimicrobiana deste novas hidrazonas e N-acilidrazonas contra
bactérias multirresistentes.

5.2 Objetivos específicos

 Sintetizar chalconas e hidrazonas através de reações químicas planejadas;

 Caracterizar as novas chalconas e hidrazonas sintéticas através de técnicas de
ressonância nuclear magnética de 1H e de 13C uni e bi-dimensionais e
espectrometria de massas (E.M.)
 Realizar medidas de espectroscopia UV-VIS de substâncias orgânicas com o
propósito de identificar transições eletrônicas nestas regiões do espectro
eletromagnético, e conhecer os parâmetros químicos e reatividade química das
substâncias sintetizadas.
 Realizar medidas de espalhamento Raman e espectroscopia infravermelho das novas
substâncias sintétizadas para registar seus espectros vibracionais característicos;
 Realizar cálculos computacionais DFT para determinar as propriedades estruturais,
vibracionais e eletrônicas dos compostos sintetizados;

 Avaliar a relação estrutura-atividade das chalconas, hidrazonas e

N-acilidrazonas sintéticas a partir parâmetros químicos e reatividade química das
substâncias sintetizadas.
 Avaliar o potencial antimicrobiano das novas chalconas, hidrazonas e
N-acilidrazonas contra bactérias multirresistentes;

 Promover a capacitação dos estudantes de Iniciação Científica da UVA, do

Mestrado de Bioprospecção Molecular e do Mestrado e Doutorado em Química
Biológica da URCA e do Mestrado e Doutorado em Ciências Naturais da UECE na
área de espectroscopia molecular, proporcionando que eles aprendam os
fundamentos teóricos da Teoria Quântica de Átomos e Moléculas e obtenham
expertise no uso das técnicas de RMN, espalhamento Raman, infravermelho e
cálculos computacionais de química quântica.

6. METODOLOGIA
6.1 Síntese das chalconas
Em um balão de fundo redondo (25 mL), serão adicionados 300 mg das
acetofenonas dissolvidas em 5 mL etanol, em seguida será adicionado 10 gotas de
NaOH 50% p/v. Em seguida, diferentes quantidades de benzaldeido e seus derivados
6
serão adicionados (Esquema 1). A solução será mantida sob agitação magnética durante
72h em temperatura ambiente. A reação será monitorada por cromatografia em camada
delgada (CCD) utilizando o eluente Hexano/Acetato de etila 2:1. Após as 72h, a solução
será neutralizada com uma solução de HCl 10 % e filtrada (Nogueira et al., 2020).

Esquema 1. Preparação de chalconas (1-6) (a) NaOH 50% p / v, etanol (5 mL),

temperatura ambiente, 72 h.
6.2 síntese das hidrazonas 6-(2-(ftalazina-1-ilhidrazonometil)-fenol)

Em um balão de reação de 25 mL serão misturados 0,50 mmol (0,0601 g) de

aldeídos, 0,471 g do pó do medicamento macerado de hidralazina (contém o
equivalente a 0,50 mmol de fármaco), 9,0 mL de água destilada e 1,0 mL de H 3PO4
concentrado (Esquema 2). Essa reação será colocada sob agitação magnética com
aquecimento (100 oC) por 45 min. Em seguida, será adicionado 15 mL de etanol
absoluto à mistura reacional sendo esta filtrada e o filtrado coletado em um béquer. O
resíduo retido no papel será descartado (excipientes) e sobre o filtrado será adicionado
20 mL de uma solução aquosa gelada de NaHCO 3 a 5,0% (m v-1). O sólido formado será
filtrado a vácuo, lavado com etanol absoluto gelado e seco em estufa por 30 min a 75
o
C. Após esfriar, o sólido será removido do papel, pesado e o rendimento reacional
bruto foi calculado (Arruda et al., 2020).

7
Esquema 2. Preparação das hidrazonas (7-8) a partir de aldeídos

6.3 Síntese da N-Acilidrazona (ácido isonicotínico (2-hidroxi-benzilideno)-

hidrazida)
Em um balão de reação de 25 mL serão misturados 0,50 mmol (0,0601 g) de
aldeídos 0,50 mmol (0,0686 g) de isoniazida, 9,0 mL de água destilada e 1,0 mL de
H3PO4 concentrado (Esquema 3). Essa reação será colocada sob agitação magnética
com aquecimento (100 oC) por 45 min. Em seguida, sobre a mistura reacional será
adicionado 15 mL de etanol absoluto e 20 mL de uma solução aquosa gelada de
NaHCO3 a 5,0% (m v-1). O sólido formado será filtrado a vácuo, lavado com etanol
absoluto gelado e seco em estufa por 30 min a 75 oC. Após esfriar, o sólido será
removido do papel, pesado e o rendimento reacional bruto foi calculado (Arruda et al.,
2020).

Esquema 3. Preparação das N-Acilhidrazonas (9-10) a partir de aldeídos

6.3 Síntese das hidrazonas a partir de chalconas

Em um balão de reação de 25 mL serão misturados 0,50 mmol
das chalconas obtidas no item 5.1, 0,471 g do pó do medicamento macerado de
hidralazina (contém o equivalente a 0,50 mmol de fármaco), 9,0 mL de água destilada e
1,0 mL de H3PO4 concentrado (Esquema 4). Essa reação será colocada sob agitação

8
magnética com aquecimento (100 oC) por 45 min. Em seguida, será adicionado 15 mL
de etanol absoluto à mistura reacional sendo esta filtrada e o filtrado coletado em um
béquer. O resíduo retido no papel será descartado (excipientes) e sobre o filtrado será
adicionado 20 mL de uma solução aquosa gelada de NaHCO 3 a 5,0% (m v-1). O sólido
formado será filtrado a vácuo, lavado com etanol absoluto gelado e seco em estufa por
30 min a 75 oC. Após esfriar, o sólido será removido do papel, pesado e o rendimento
reacional bruto foi calculado (Arruda et al., 2020).

Esquema 4. Preparação das hidrazonas (11-12) a partir de chalconas

6.5 Síntese das N-Acilhidrazonas a partir de chalconas

Em um balão de reação de 25 mL serão misturados 0,50 mmol das
chalconas 0,50 mmol de isoniazida, 9,0 mL de água destilada e 1,0 mL de H 3PO4
concentrado (Esquema 5). Essa reação será colocada sob agitação magnética com
aquecimento (100 oC) por 45 min. Em seguida, sobre a mistura reacional será
adicionado 15 mL de etanol absoluto e 20 mL de uma solução aquosa gelada de
NaHCO3 a 5,0% (m v-1). O sólido formado será filtrado a vácuo, lavado com etanol
absoluto gelado e seco em estufa por 30 min a 75 oC. Após esfriar, o sólido será
removido do papel, pesado e o rendimento reacional bruto foi calculado (Arruda et al.,
2020).

9
Esquema 5. Preparação das N-Acilhidrazonas (13-16) a partir de chalconas
6.6 Determinação estrutural dos constituintes sintetizados
6.6.1 Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio-1 (RMN 1H) e de
Carbono-13 (RMN 13C) e Espectrometria de Massas

Os espectros de Ressonância Magnética Nuclear uni e bidimensionais, serão

obtidos em espectrômetro Bruker DRX-300 e DPX-500 (1H: 300 e 500 MHz; 13C: 75 e
125 MHz), utilizando solventes deuterados. Os espectros de massas serão registrados
em espectrômetro de massas, aparelho Shimadzu QP5050A, operando em 70 eV.

6.6.2 Espectroscopia infravermelho com transformada de Fourier por

reflexão total atenuada (ATR-FTIR)
Para a análise das amostras sintéticas será utilizado um espectrômetro de
absorção infravermelho por transformada de Fourier FT-IR VERTEX 70V, da marca
Bruker à vácuo usando o acessório ATR Platinum com cristal de diamante. Uma fonte
de Globar é utilizado para região do infravermelho médio (MIR) munido de detectores
pitoelétricos DLaTGS para captação de sinais emitidos da amostra. Este equipamento
possui uma fonte de laser HeNe com 633 nm de comprimento de onda que permite a
calibração do caminho ótico do feixe infravermelho junto aos espelhos do
espectrômetro. Este Espectrômetro opera com resolução de 2 cm -1 e divisor de feixe
(beam spliter) Wide-range composto por silício que permite sua utilização para medidas
na região do médio. A utilização do vácuo nestes experimentos é importante para
melhoria da sensibilidade do detector. As medidas ATR-FTIR serão registradas a
temperatura ambiente na região de 130 cm-1 a 4000 cm-1.
6.6.3 Espectroscopia Raman com transformada de Fourier (FT-Ramam) e
Ultravioleta-Visível (UV-VIS)
Os espectros de FT-Raman serão obtidos usando um sistema FTR Bruker
RFS100 /S e um detector D418-T, com a amostra excitada por um laser Nd:YAG que
tem comprimento de onda na linha de 1064 nm. As medidas FT-Raman foram
registradas a temperatura ambiente na região de 40 cm -1 a 4000 cm-1, com resolução de

10
4 cm-1. Os espectros de absorção UV-VIS serão obtidos em um espectrofotômetro UV-
Vis GENESYSTM 10S.
6.6.4 Cálculos Computacionais
Serão utilizados programas de estrutura eletrônica como Gaussian, Quantum
Express e Materials Studio para a realização de cálculos computacionais.
Especificamente,utilizaremos o método de cálculo baseado na Teoria do Funcional
Densidade (DensityFunctional Theory -DFT) para obtenção das propriedades estruturais
e vibracionais das moléculas de interesse.

6.7 Atividade Antimicrobiana e Moduladora

6.7.1 Atividade antibacteriana
Teste biológicos in vitro serão realizados para avaliar dos compostos
sintetizados com relação à sua atividade antimicrobiana intrínseca ou associada a
antibióticos, focando principalmente em microrganismos resistentes à múltiplas drogas
(MDR). As substâncias sintéticas serão associadas com alguns antibióticos com
propósito de potencializar o efeito dos mesmos contra microrganismos resistentes a eles.
6.7.2 Preparo das Soluções
No preparo da solução inicial cada amostra será solubilizada em DMSO
(Dimetilsulfóxido), sendo observadas as seguintes proporções: 10mg da amostra
solubilizada em 1 mL de DMSO, para obter uma concentração inicial de 10mg/mL. Em
seguida, esta solução será diluída para 1024μg/mL da mesma forma e a partir desta,
efetua-se diluições seriadas 1:2 em água destilada, obtendo-se as concentrações de 512 a
0,5 μg/mL (Silva, et al., 2020).
6.7.3 Microrganismos
As linhagens bacterianas de Staphylococcus aureus multirresistentes utilizadas
nos testes serão obtidas através do Instituto Nacional de Controle de Qualidade em
Saúde (INCQS) da Fundação Oswaldo Cruz, Ministério da Saúde. As bactérias
utilizadas serão cepas multirresistentes. Antes do ensaio, as linhagens bacterianas serão
cultivadas por 24h a 37ºC em caldo infusão de cérebro e coração - Brain Heart Infusion
(BHI, Difco Laboratories Ltda.).

6.7.4 Preparo dos Meios de Cultura e dos Inóculos

Serão utilizados nos ensaios biológicos os seguintes meios de cultura: Agar
Heart Infusion - HIA (Difco Laboratories ltda.), caldo Brain Heart Infusion – BHI
(concentração indicada pelo fabricante e 10%) (Acumedia Manufacturers Inc.). Todos

11
os meios de cultura serão preparados segundo as especificações do fabricante. As
culturas bacterianas ficarão mantidas em placas de Petri, contendo o meio Agar Infusão
de coração (Heart Infusion Agar- HIA; Difco Laboratories Ltd.) a 4ºC. Antes da
realização dos ensaios de CIM e modulação, as cepas bacterianas serão retiradas com
uma alça de drigalski da cultura estoque e cultivadas em 5mL de Caldo de Infusão de
cérebro e coração (Brain heart infusion - BHI; HIMEDIA – Índia), sendo em seguida
incubadas em estufa bacteriológica a 35 ± 2 ºC por 24 h. Para preparação do inóculo dos
testes serão utilizadas as suspensões bacterianas em meio BHI descritas anteriormente,
retira-se 100 μL dessa suspensão e inocula-se em 900 μL de caldo BHI 10% (proporção
1:10) para se obter uma concentração final de 105 UFC-mL-1 (unidades formadoras de
colônia/mL) (LEAL, et al., 2019).
6.7.6 Determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM)
Para a determinação da CIM das substâncias serão realizados ensaios de
microdiluição em microplacas contendo 96 poços de fundo redondo de acordo com a
Norma M7-A6. O ensaio deverá proceder da seguinte maneira: em cada poço adiciona-
se 100 μL da solução contendo o inóculo de bactéria de cada cepa (10 5 UFC-mL-1) e o
meio BHI 10%. As cepas bacterianas serão distribuídas no sentido numérico das placas,
sendo cada coluna numérica representada por uma cepa diferente. Em seguida, 100 μL
do composto será colocado no primeiro poço e serão realizadas diluições seriadas (1:1)
até o penúltimo poço da microplaca, obtendo-se as concentrações de 512, 256, 128, 64,
32, 16 e 8 µg-mL-1 do composto. O último poço da microplaca será constituído apenas
pelo inóculo e o meio BHI 10%, representando o controle para verificação da
viabilidade das cepas. Após o procedimento experimental, as placas deverão ser
incubadas a 35 ± 2 °C por 24 h. (Leal et al., 2019)

6.7.7 Atividade Moduladora

Na realização do teste que avalia o efeito de cada substância como modulador da
atividade dos antibióticos serão utilizados antibióticos Gentamicina e Amicacina e
possivelmente outros com penicilina e neomicina, com concentração de 5.000 μg-mL -1.
A modulação será realizada através de um ensaio de microdiluição em microplacas com
96 poços. Com a obtenção da CIM, esse valor será reduzido 8 vezes (CIM/8),
resultando na concentração subinibitória do composto para ser utilizado no ensaio de

12
modulação. Em cada poço será adicionado 100 μL de uma solução contendo: 150 μL do
inóculo (105 UFC-mL-1) de bactéria de cada cepa, o composto na concentração
subinibitória de 16 μg-mL-1 (128/8) e o meio BHI 10% q.s.p 1.500 μL. Em seguida, 100
μL do antibiótico serão adicionados no primeiro poço e realizará diluições seriadas (1:1)
até o penúltimo poço da microplaca. As concentrações dos antibióticos serão 2.500;
1.250; 625; 312,50; 156,25; 78,12; 39,06; 19,53; 9,76; 4,88; 2,44 μg-mL -1. O último
poço da microplaca não contém o antibiótico, a fim de se verificar a viabilidade das
cepas. No grupo controle não será adicionado o composto, apenas o inóculo, o meio
BHI 10 % e o antibiótico. Depois do teste, as placas serão incubadas em estufa
bacteriológica a 35 ± 2 °C por 24 h (Leal et al., 2019).
6.7.8 Leitura dos Ensaios: Avaliação da atividade antimicrobiana e
moduladora
Tanto para os ensaios da CIM, como da modulação, a avaliação do crescimento
microbiano será realizado de forma similar. Para determinar se houve crescimento
bacteriano realiza-se uma análise colorimétrica, utilizando-se o corante resazurina
0,01% (p/v). Após o período de 24h de incubação, será adicionado 20μL do corante em
cada poço da microplaca, e após 1 h a 25°C será feita a leitura. A alteração na cor de
azul para rosa indica que houve crescimento bacteriano e explica-se devido à redução da
resazurina, já a permanência da coloração azul, indica ausência de crescimento. A CIM
será determinada pela menor concentração do composto capaz de inibir o crescimento
bacteriano (Cruz et al., 2020).
6.7.9 Análise Estatistica
Os resultados serão demonstrados através de gráficos e tabela, a diferença
entre as médias dos experimentos será verificada por meio da aplicação do teste One-
way ANOVA com Bonferroni pós teste, executados com o auxílio do programa
GraphPad®, Prism San Diego California USA. Serão considerados estatisticamente
significativos valores de p<0,01.
7. RESULTADOS ESPERADOS

1. Sintetizar, determinar a estrutura molecular e caracterizar pelas técnicas de

espectroscopia de Ressonância Magnética, Raman e infravermelho, cálculos DFT pelo
menos 06 chalconas e 10 hidrazonas;

2. Obter 03 chalconas e 05 hidrazonas com atividade antimicrobiana e com potencial

modulador de antibióticos;

13
 3. Realizar o estudo conformacional de 03 chalconas e 03 hidrazonas;

4. Oferecer oportunidades para os 03 alunos realizarem estágios de iniciação cientifica

correlacionados com o tema do projeto;

5. Obter pelo menos 01 patente com os resultados obtidos;

6. Ter publicado menos dois artigos em periódicos internacionais com FI = 2.5;

7. Ter divulgado os resultados em pelo menos 02 eventos científicos;

8. Ter orientado 02 dissertações de mestrado

9. Iniciar a orientação de 01 tese de doutorado;

10. Ter concluído 03 orientações de Iniciação Científica correlacionadas com o tema do

projeto;

8. CRONOGRAMA DO PROJETO
8.1 ETAPAS DO PROJETO 1ª ANO

MESES
ATIVIDADES (ETAPAS)
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
Revisão bibliográfica X
Síntese de chalconas X X X X X
Síntese de hidrazonas X X X X X
Síntese de N-Acilhidrazonas X X X X X X

14
Purificação dos compostos sintetizados, X X
calculo do rendimento e determinação
do ponto de fusão
Análise dos dados estruturais de RMN X X X X
das chalconas, hidrazonas e N-
Acilhidrazonas sintetizadas
Realização de medidas e análise dos X X
espectros de Infravermelho Raman das
chalconas, hidrazonas e N-
Acilhidrazonas
Realização de medidas e análise dos X X
espectros de UV-Vis das chalconas,
hidrazonas e N-Acilhidrazonas
8.2 ETAPAS DO PROJETO 2ª ANO
ATIVIDADES (ETAPAS) MESES
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
Realização de medidas CG-EM e X X X
análise elementar das chalconas,
hidrazonas e N-Acilhidrazonas
Realização dos cálculos de DFT das X X X
chalconas, hidrazonas e
N-Acilhidrazonas
Realização de estudos conformacionais X X X
Realização de Testes de atividade X X X
antimicrobiana
Realização de Testes de atividade e X X X
moduladora
Análise comparativa dos resultados X X
teóricos com os obtidos pelos
experimentos e discussão dos
resultados
Preparação de resumos para X X
participação em encontros e congressos
Preparação de artigos e X X
submissão de artigos
Relatório Final X

9. Plano de individual de trabalho bolsistas

9.1 Plano de trabalho do bolsista 1
1ª ANO
MESES
ATIVIDADES (ETAPAS)
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
Levantamento Bibliográfico X

15
Síntese de chalconas X X X X X
Purificação dos compostos sintetizados X X X
por recristalização e utilizando
cromatografia em coluna contendo
sílica-gel
Calculo do rendimento e determinação X X
do ponto de fusão das chalconas
Análise dos dados espectrométricos de X X X
RMN para confirmação estrutural das
chalconas sintetizadas

Análise dos dados de Infravermelho X X

Raman das chalconas sintetizadas

Realização de medidas e análise dos X X X X X X

espectros de UV-Vis das chalconas

2ª ANO

MESES
ATIVIDADES (ETAPAS)
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
Realização de medidas CG-EM e X X
análise elementar das chalconas,
Realização dos cálculos de DFT das X X X
chalconas
Realização de estudos X X X
conformacionais das chalconas
Realização dos testes de atividade X X X
antimicrobiana e moduladora
Elaboração de resumos e painéis para X X
divulgação dos resultados em eventos
científicos locais, nacionais e
internacionais.

Elaboração do relatório final X

9.2 Plano de trabalho do bolsista 2

1ª ANO
MESES
ATIVIDADES (ETAPAS)
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
Levantamento Bibliográfico X
Síntese de hidrazonas X X X X X

16
Purificação dos compostos sintetizados X X X
por recristalização e utilizando
cromatografia em coluna contendo
sílica-gel ou
calculo do rendimento e determinação X X
do ponto de fusão das hidrazonas
Análise dos dados espectrométricos de X X X
RMN para confirmação estrutural das
hidrazonas sintetizadas
Análise dos dados de Infravermelho X X
Raman das hidrazonas sintetizadas
Realização de medidas e análise dos X X X X X X
espectros de UV-Vis das hidrazonas
2ª ANO
MESES
ATIVIDADES (ETAPAS)
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
Realização de medidas CG-EM e X X
análise elementar das hidrazonas
Realização dos cálculos de DFT das X X X
hidrazonas
Realização de estudos X X X
conformacionais das hidrazonas
Realização dos testes de atividade X X X
antimicrobiana e moduladora
Elaboração de resumos e painéis para X X
divulgação dos resultados em eventos
científicos locais, nacionais e
internacionais.
Elaboração do relatório final X

9.3 Plano de trabalho do bolsista 3

1ª ANO
MESES
ATIVIDADES (ETAPAS)
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
Levantamento Bibliográfico X
Síntese de N-Acilhidrazonas X

17
Purificação dos compostos sintetizados X
por recristalização e utilizando
cromatografia em coluna contendo
sílica-gel
calculo do rendimento e determinação X
do ponto de fusão das
N-Acilhidrazonas
Análise dos dados espectrométricos de X
RMN para confirmação estrutural das
N-Acilhidrazonas sintetizadas
Análise dos dados de Infravermelho X X X
Raman das N-Acilhidrazonas
sintetizadas
Realização de medidas e análise dos X X X X X X
espectros de UV-Vis das
N-Acilhidrazonas
2ª ANO
MESES
ATIVIDADES (ETAPAS)
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
Realização de medidas CG-EM e X X
análise elementar das
N-Acilhidrazonas
Realização dos cálculos de DFT das X X X
N-Acilhidrazonas

Realização de estudos X X X
conformacionais das N-Acilhidrazonas
Realização dos testes de atividade X X X
antimicrobiana e moduladora
Elaboração de resumos e painéis para X X X
divulgação dos resultados em eventos
científicos locais, nacionais e
internacionais e relatório final

10. ORÇAMENTO
10.1 CUSTEIO
Item Quant. unidade Descrição do material P.Unitário P.Total
Reagentes
Justificativa Realização da síntese e purificação das chalconas, hidrazonas e N-Acilhidrazonas por meio de
colunas cromatograficas com sílica-gel e acompanhar as cromatografias através de cromatografia em camada

18
delgada (CCD).
1 10 500 GR Sílica Gel 60g Cromatografia Camada 499,00 4.990,00
Fina
2 10 500 GR Sílica Gel 60 (0,063- A 0,200mm) P/ 460,00 4.600,00
Cromatografia em Coluna
3 05 500 GR Vanilina 30,00 150,00
4 10 500 GR Sulfato de sódio 20,00 200,00
5 01 500 GR 2′-hidroxiacetofenona 218,00 218,00
6 01 100 GR 4′-Aminoacetofenona 665,00 665,00
7 01 250 GR Isoniazida 495,00 495,00
8 01 10 GR Hidralazina 819,00 819,00
9 01 1L Benzaldeido 184,00 184,00
10 01 100 GR 4-NitroBenzaldeido 677,00 677,00
11 01 100 GR 4-metoxiBenzaldeido 409,00 409,00
12 01 10 GR Acetilferrocene 782,00 782,00
13 01 25 GR Ferrocenecarboxialdeido 1.381,00 1.381,00
14 01 100 GR Tereftalaldeído 538,00 538,00
15 01 1L Acetilacetona 413,00 413,00
16 01 100 GR 2′,5′-Dihidroxiacetofenona 727.00 727.00
17 01 100 GR 3,4,5-Trimetoxibenzaldeído 770.00 770.00
18 01 25 GR 2,4-Diidroxibenzaldeído 681.00 681.00
19 01 10G Adamantil metil cetona 1.304,00 1.304,00
20 01 250 GR 4-CloroBenzaldeido 435,00 435,00
21 01 1 Kg Cinamamaldeido 394,00 394,00
22 01 100 GR 2-tiofeno carbaldeído 630,00 630,00
Total 21.462,00

10.2 Solventes
Justificativa: Solubilização dos reagentes para síntese das chalconas, hidrazonas e N-Acilhidrazonas e para
realização das análises de Ressonância Magnética Nuclear
23 10 Lt Clorofórmio PA 30,00 300,00
24 10 Lt Metanol PA 22,00 220,00
25 10 Lt Etanol PA 20,00 200,00

19
 26 03 Fr 250 Gr Clorofórmio deuterado 527,0 1.581,00
27 02 Fr 50 mL Metanol deuterado 2.247,50 4.495,00
28 02 Fr 25 Gr Dimetilsulfóxido deuterado 1.353,00 2.706,00
Total 9.502,00
10.3 Vidraria
Justificativa: Vidraria necessária para realização da síntese das chalconas, hidrazonas e
N-Acilhidrazonas
29 10 25 mL Balão de fundo redondo, boca 18,00 180,00
esmerilhada
30 10 50 mL Balão de fundo redondo, boca 32,00 320,00
esmerilhada
31 10 50 mL Becker 15,00 150,00
32 10 100 mL Becker 20,00 200,00
33 10 10 mL Proveta graduada 20,00 200,00
34 10 25 mL Proveta graduada 30,00 300,00
35 05 5 cm Vidro de relógio 20,00 100,00
36 05 12 cm Vidro de relógio 26,00 130,00
37 10 25 mL Erlenmeyer 10,00 100,00
38 10 250 mL Kitassato 32,00 320,00
Total 2.000,00
Total Custeio  32 964,00
10.4 CAPITAL
Equipamentos
Justificativa: Realização da síntese das chalconas, hidrazonas e N-Acilhidrazonas.
Item Quant. P.Unitário P.Total
39 Agitador magnético com aquecimento 2 1.318,00 2.636,00
40 Base com haste universal 5 50,00 250,00
41 Espátula 15 10,00 150,00
Total Capital 3.036,00
Total geral: custeio+capital 36.000,00

11. RELEVÂNCIA E IMPACTO DO PROJETO PARA O DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO,

TECNOLÓGICO OU DE INOVAÇÃO

Os itens enumerados abaixo lista alguns impactos dos resultados do ponto de

vista técnico-científico, de inovação, difusão, sócio-econômico que compreendo que
ocorrerá com a execução deste projeto.

1. Revelará conhecimentos científicos essenciais para compreender como as

propriedades estruturais e espectroscópicas são alteradas devido as diferentes
modificações moleculares dos compostos sintetizados a serem estudados neste projeto.

20
2. Os conhecimentos gerados a partir do presente projeto também poderão proporcionar
a descoberta de novos compostos que possam ser utilizados para o tratamento de
infecções bacterianas com grande aplicabilidade na área de pesquisa médica. Assim, a
proposta deste estudo constitui uma oportunidade estratégica para o desenvolvimento
Químico e farmacológico da região Nordeste.

3. Espera-se que os resultados obtidos a partir deste estudo também possam contribuir
para reduzir gastos governamentais com a saúde em relação ao tratamento de pacientes
com doenças causadas por microorgnismos.

4. Otimizará o tempo para o desenvolvimento de novos medicamentos, já que a

caracterização estrutural, espectroscópica e os descritores quânticos obtidos dos cálculos
DFT poderão contribuir significativamente para desenvolvimento de pesquisas de uma
eventual substância deste projeto de interesse de pesquisadores que trabalhem no
desenvolvimento de fármacos antimicrobianos;

5. As informações técnicas produzidas neste estudo poderão ser utilizadas como fonte
de informação por outros profissionais envolvidos na pesquisa relacionada a ação
antimicrobiana de acetofenonas, chalconas e hidrazonas. O anseio é incentivar e
contribuir com outros estudos no desenvolvimento de novos agentes terapêuticos, os
quais irão somar esforços para o avanço no tratamento de pacientes as infecções
bacterianas e fúngicas.

6. Promover o desenvolvimento social e econômico do Estado do Ceará

12. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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