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SUMRIO
1. MECANISMOS CATALTICOS A. Catlise cido-Bsica B. Catlise Covalente C. Catlise por ons Metlicos Catlise Eletrosttica D. Catlise por meio de Efeitos de Proximidade e Orientao E. Catlise por Ligao Preferencial do Estado de Transio 2. ANIDRASE CARBONICA A. Estrutura Enzimtica B. Mecanismo Cataltico 3. SERINO-PROTEASES e CISTENO-PROTEASES A. O Stio Ativo B. Estruturas por Difrao de Raio X C. Mecanismo Cataltico D. Zimognios
ENZIMAS
ENZIMAS CLASSES
1. Oxidorreductases:
CH3 CH COO- + NAD+ OH
Lactato
2e- 2H+
O
Piruvato
2. Transferases:
H2O CH2 - CH COO- + THF
OH
NH3+
CH2
Serina
Glicina
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ENZIMAS CLASSES
3. Hidrilases:
NH2 C NH2 + H2O Uria
Urease
CO2 + 2NH3
4. Liases:
CH3 C COO- Piruvato- 3 CH + CO2 CH O O descarboxilase Acetaldedo Piruvato
Fonte: CHAMPE, C. P. et al. Bioqumica Ilustrada.
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ENZIMAS CLASSES
5. Isomerases:
CH3
-OOC
CH C CoA
-OOC
O Metilmalonil - CoA
6. Ligases:
CH3 C COO- + CO2 O Piruvato
ATP Piruvatocarboxilase ADP + Pi
-OOC
Eficincia cataltica;
PROPRIEDADES
Eficincia cataltica;
ENZIMAS PROPRIEDADES
Stios ativos:
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ENZIMAS PROPRIEDADES
Especificidade:
Complementaridade
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ESPECIFICIDADE
Hiptese chave-fechadura:
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MECANISMO CATALTICOS
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MECANISMOS CATALTICOS
Fatores essenciais:
especificidade; organizao otimizada.
Natureza qumica:
catlise cido-bsica; catlise covalente; catlise por ons metlicos.
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MECANISMOS CATALTICOS
Natureza fsica:
catlise eletrosttica; efeitos de proximidade e orientao; ligao preferencial ao complexo do estado de transio.
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CATLISE CIDO-BSICA
Transferncia de prtons entre substrato e enzima. Catlise cida:
Grupo cido doa um prton;
Catlise bsica:
Grupo bsico recebe um prton;
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CATLISE CIDO-BSICA
Ex: tautomerizao ceto-enlica
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CATLISE CIDO-BSICA
Ex: tautomerizao ceto-enlica
CATLISE COVALENTE
Ligao covalente transitria entre enzimasubstrato; Ataques nucleoflico/eletroflico de um radical do stio cataltico sobre o substrato. Etapas:
reao nucleoflica; retirada de eltrons pelo catalisador eletroflico; eliminao do catalisador.
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CATLISE COVALENTE
Interaes inicas:
orientao do substrato; estabilizar cargas.
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CATLISE ELETROSTTICA
Molculas vizinhas - solventes:
reduo dos efeitos de atrao entre grupos qumicos.
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CATLISE ELETROSTTICA
Distribuio de cargas no sitio ativo:
estabilizao dos estados de transio;
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ANIDRASE CARBNICA
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ANIDRASE CARBNICA
Metaloenzima Enzima da classe liase Monmero Stio ativo Zn+ - Histidina 94 - Histidina 96 - Histidina 119 - Molcula de gua
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ANIDRASE CARBNICA
1hcb
Estrutura Enzimtica
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ANIDRASE CARBNICA
1hcb
Estrutura Enzimtica
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ANIDRASE CARBNICA
1hcb
Bicarnobato Zinco
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ANIDRASE CARBNICA
His119
1hcb
Zn His94 His96
Estrutura Enzimtica
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ANIDRASE CARBNICA
gua
BCT
1hcb
Zn
His
His
His
Estrutura Enzimtica
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ANIDRASE CARBNICA
Enzima que catalisa a converso rpida de dixido de carbono em um prton (H+) e um on bicarbonato (HCO3-)
Anidrase Carbnica Dissociao CO2 + H2O H2CO3 H+ + HCO3cido Carbnico
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Fonte: http://deqb.ist.utl.pt/bbio/72/pdf/cataliseenz.pdf
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PROTEASES
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PROTEASES
Catalizam a clivagem de ligaes peptdicas (hidrolizao) Responsveis por:
Renovao de Protenas Reciclagem de aminocidos Obteno de novas protenas Etc.
Fonte: http://graduacao.iqsc.usp.br/files/Aula12BioqIMecCatEnzExemplos201104072.pdf
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PROTEASES
Subdivises
Exopeptidase: atuam grupamento amino ou carboxi terminal Endopeptidase: atuam regies internas
SERINO PROTEASES
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SERINO PROTEASES
Serina
(EC 3.4.21)
3 representa a Classe = Hidrolase (catalisa reaes de hidrlise de ligaes covalentes) 4 a Sub-Classe = Peptidase (hidrolisa ligaes peptdicas) 21 a Sub sub-classe das serino-endopeptidases (enzimas contendo serina no 44 stio ativo) 44
SERINO PROTEASES
Stio Ativo Trade Cataltica: resduos (Ser, Asp e His)
Aspartato
Histidina Serina
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SERINO PROTEASES
Identificao do Stio Ativo
Marcao covalente com DIPF (diisopropylphosphofluoridate) Apenas a Ser reativa ligou ao DIPF - 1 de 20 Ser na Quimotripsina
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Fonte: http://graduacao.iqsc.usp.br/files/Aula12BioqIMecCatEnzExemplos201104072.pdf
SERINO PROTEASES
Estruturas de Raio X
1957 Estrutura da quimotripsina bovina (David Blow) Estrutura primria - ~40% idnticos Ser reativa / His cataliticamente essencial / Asp prxima ao stio 2 domnios Folhas anti paralelas Estruturas Raio X sugerem uma base para diferentes especificidades
Tripsina
Elastase
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Fonte :http://www2.bioqmed.ufrj.br/enzimas/proteases2.htm Fonte: http://chemistry.umeche.maine.edu/MAT500/Peptidase2.html
MECANISMO CATALTICO
Aplicvel todas serino-proteases
A)
MECANISMO CATALTICO
B)
Intermedirio Tetradrico
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MECANISMO CATALTICO
C)
MECANISMO CATALTICO
D)
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MECANISMO CATALTICO
E)
Reverso da Etapa B
Intermedirio acil-enzima
52 Fonte: DONALD VOET & JUDITH G. VOET Bioqumica Ed. Artmed, 2007
MECANISMO CATALTICO
F)
MECANISMO CATALTICO
- Catlise por tencionamento forma estrutura tetradrica
- Intermedirio tetradrico
CISTENO PROTEASES
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CISTENO PROTEASES
Cistena
(EC 3.4.22)
3 representa a Classe = Hidrolase (catalisa reaes de hidrlise de ligaes covalentes) 4 a Sub-Classe = Peptidase (hidrolisa ligaes peptdicas) 21 a Sub sub-classe das cisteno-endopeptidases (enzimas contendo cistena 56 no stio ativo) 56
CISTENO PROTEASES
Divididas de acordo com semelhanas estruturais e funcionais
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CISTENO PROTEASES
Estruturas de Raio X
1 nica cadeia 2 domnios formando a fenda cataltica
Domnio 1
Fenda Cataltica
Domnio 2
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Papaina 8pap
CISTENO PROTEASES
Identificao do Stio Ativo
Trade Cataltica Cys25, His159 e Asn75 (Papana) Cys e His esto em fendas opostas par inico estvel em pH neutro, responsvel pela atividade cataltica.
(Lewis, Johnson et al., 1981)
Fonte: http://ha1000tonc22.br.tripod.com/
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Papana
Papaina 8pap
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MECANISMO CATALTICO
cisteno-proteases
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ZIMOGNIOS
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ZIMOGNIOS
Precursores inativos de enzimas proteolticas Possuem todos os resduos catalticos Stio ativo distorcido Tripsinognio
Enteropeptidase Tripsina A ativao seqencial permite
rpida produo de grandes quantidades de enzimas ativas em resposta a diversos sinais fisiolgicos.
Quimotripsognio
Pr-elastase
Quimotripsina
Elastase
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ATIVAO DE ZIMOGNIOS
Tripsinognio N-terminal Tripsinognio clivagem da ligao entre Lys15 Ile16. N-terminal Tripsina
APLICAES TECNOLGICAS
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APLICAES TECNOLGICAS
Ano de 2009 Enzimas utilizadas para obteno de steres utilizados como produtos alimentcios, farmacuticos e cosmticos.
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APLICAES TECNOLGICAS
Os processos catalticos tradicionais envolvem cidos (como cido sulfrico) e bases (como hidrxido de sdio) como aceleradores da reao. Porm, esses catalisadores tm sido, aos poucos esto sendo substitudos por enzimas, visto que essas apresentam como benefcios condies suaves de operao (temperatura, presso e pH), especificidade e poucas perdas na reao.
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APLICAES TECNOLGICAS
Ano de 2009 Utilizao de enzimas na polimerizao para produo de materiais derivados de fontes renovveis e com caractersticas como biocompatibilidade e biodegradabilidade. 68 Evita a utilizao de catalizadores txicos.
APLICAES TECNOLGICAS
APLICAES TECNOLGICAS
Prs: Propriedades fsicas e qumicas similares ao biodiesel convencional Substitui catalisador alcalino Biodegradveis
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Fonte: http://www.embrapa.br/imprensa/artigos/2011/catalise-enzimatica-produz-biodiesel-mais-verde/
BIBLIOGRAFIA
ALBERT L. LEHNINGER DAVID L. NELSON MICHAEL M. COX Lehninger Princpios de Bioqumica Ed. Sarvier, 2007
OBRIGADO!
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