Graduação em Biotecnologia

Disciplina de Biotecnologia Microbiana II

Microrganismos na produção de
poliésteres e polissacarídeos
Michele Pepe Cerqueira
micpepe2@yahoo.com.br

31 de maio de 2011
 Poliésteres
Categoria de polímeros que contém o grupo funcional éster
em sua cadeia principal. Dos poliésteres sintéticos (plásticos)
pode-se destacar o policarbonato e especialmente o
politereftalato de etila (PET).

Polissacarídeos
Os polissacarídeos são macromoléculas formados pela
união de muitos monossacarídeos. Podem ser hidrolisados
em polissacarídeos menores, assim como em
dissacarídeos ou monossacarídeos mediante a ação de
determinadas enzimas.
POLIÉSTERES
BACTERIANOS
 Plásticos
• Produção plásticos no Brasil  2.000.000
toneladas/ano – 2% produção mundial

País Consumo de resinas plásticas

(kg/hab.ano)
Brasil 10
EUA 70
Europa 46
Japão 54
 Problemas associados aos
plásticos
• Descartabilidade muito rápida
• Dificuldade de degradação no ambiente
• Relação custo x benefício da reciclagem
• Uso de recursos não renováveis como matéria
prima
 Alternativas
• Incorporação de materiais biodegradáveis
– Amido, polietileno aditivado com amido
• Plásticos fotodegradáveis

CO2 atmosférico

Fotossíntese
Biodegradação

Produtos agrícolas
Plásticos
biodegradáveis
 Plásticos biodegradáveis
• Apresentam propriedade termoplásticas
• Características de desempenho semelhantes aos
plásticos convencionais
• Facilmente degradado pela ação dos
microrganismo no ambiente – biodegradabilidade
• Exemplos: polilactato, poliglicolato, poli-e-
caprolactona (PCL), álcool polivinílico (PVOH),
polihidroxialcanoatos (PHAs)
Polihidroxialcanoatos (PHAs)
• Grupo diversificado de poliésteres acumulados
por inúmeras bactérias
– Exemplos: poli-3-hidroxibutirado (PHB), poli-3-
hidroxibutirato-co-3-hidroxivalerato (P3HB-co-3HV)
• São termoplásticos biodegradáveis
• Sintetizados por fermentação submersa a partir
de matérias-primas renováveis
– Matérias-primas derivadas da agricultura
Polihidroxialcanoatos (PHAs)
• Polímeros acumulados na forma de grânulos
intracelulares
– Grânulos: reserva de carbono e energia
• Até 80% da massa seca celular
• Síntese de PHA: ocorre quando há excesso de carbono
e energia e limitação de algum nutriente (N, P, Mg, Fe)
• Formados por 90 monômeros diferentes
• Bactéria deve apresentar PHA sintase
• Podem ser eficientemente produzidos em OGM (ex:E.
coli)
PHAs sintetizados por bactérias
Bactérias Substratos Monômeros
Alcaligenes eutrophus Frutose 3HB
Alcaligenes eutrophus Ácido propiônico 3HB, 3HV
Alcaligenes eutrophus 1,5 – pentanodiol 3HB, 3HP
Alcaligenes eutrophus 1,4-butanodiol 3HB, 4HB
Alcaligenes eutrophus 5-clorovalerato 3HB, 3HV, 5HV
Pseudomonas oleovorans Ácido octanóico 3HHx, 3HO, 3HD
Pseudomonas oleovorans Ácido nonanóico 3HHx, 3HHp, 3HO
Pseudomonas oleovorans Octeno 3HHx, 3HO
Pseudomonas oleovorans Ácido 7-metil-octanóico 7Me3HO, 5Me3HHx
Pseudomonas putida Ácido 4-hidroxihexanóico 3HB, 3HHx e 4HHx
Rhodospirillum rubrum Ácido 4-pentenóico 3HB, 3HV
Rhodococcus sp. Frutose 3HB, 3HV
Haloferax mediterranei Amido 3HB, 3HV
Burkholderia sp. Ácido glicônico 3HB, 3HP
 Microrganismos - PHAs
• Alcaligenes sp.
• Bactéria gram-negativa, aeróbicas
• Pseudomonas sp.
• Bactéria gram-negativa, aeróbia, baciliforme
• Rhodospirillum sp.
• Bactéria gram-negativa, anaeróbia facultativa
• Rhodococcus sp.
• Bactérias aeróbicas, não-esporulantes, não móveis, Gram-
positivas
• Haloferax sp.
• Halófilos de ambientes extremamente salinos
• Burkholderia sp.
• Bacilos retos, gram-negativos, oxidase e catalase positivos
 Aplicações - PHAs
• Filmes para embalagem
• Plásticos convencionais
• Fios de sutura cirúrgica
• Implantes ósseos
• Fármacos de liberação lenta
• Produtos de liberação de reguladores de
crescimento de plantas
• Produtos de liberação de pesticidas
Polihidroxibutirado (PHB)
• O principal representante dos PHAs
• Possui propriedades físicas e químicas
semelhantes ao polímero sintético (PP)
• Formado em monômeros de hidroxibutirato -
biodegradável
• São sintetizados no interior de bactérias e
armazenados no citoplasma em grânulos
 PHB
• Desafios para produção  redução dos
custos
– Obtenção de linhagens altamente eficientes na
conversão dos substratos em produtos
– Utilização de substratos de baixo custo
– Desenvolvimento de processos que permitam
explorar ao máximo o potencial da linhagem
– Desenvolvimento de processos de extração-
purificação
Biodegradação - PHAs
Polissacarídeos
 Polissacarídeos
• Macromoléculas (carboidratos) de alta massa
molar
• Ex: amido, alginatos, goma arábica, goma guar e goma
algaroba
• Normalmente obtidos de produtos vegetais e
de algas marinhas
• Aplicação na indústria de alimentos,
farmacêutica e química
 Polissacarídeos -
Exemplos
• Xantana
• Escleroglucana
• Zanflo
• Gelana
• Goma PS-7
• Curdlana
• Alginato bacteriano
• Dextrana
• Glucanas de leveduras de panificação
Polissacarídeos microbianos -
Vantagens

• Propriedades similares aos tradicionais

• Produção independente das condições
climáticas, contaminação marinha, falha nas
colheitas
• Utilização matérias-primas regionais
• Menos suscetíveis a variabilidade na
qualidade
Polissacarídeos microbianos
• LPS – lipopolissacarídeos  constituintes PC
• CPS – polissacarídeos capsulares 
covalentemente PC
Marcadores biológicos

• EPS – exopolissacarídeos  secretado

extracelular
Alimentícia, farmacêutica, petrolífera, cosmética, têxtil, tintureira
 Características - EPS
• São polissacarídeos de cadeia longa
• Provenientes de bactérias, microalgas,
leveduras e fungos
• Superfície celular microbiana
• Aderência em superfícies sólidas
• Formação de biofilmes
 Aplicações - EPS
• Espessantes Beneficios à saude –
• Estabilizantes bactérias láticas
• Emulsificantes • Atividade imuno-
• Coagulantes estimulatória
• Formadores de filmes
• Atividade anti-
• Gelificantes
tumoral
• Agentes de suspensão
• Reduzir níveis de
• Dispersantes
colesterol
• Lubrificantes
 Aplicações - EPS
Função Uso (%)
Estabilizador, agente de suspensão e 25
dispersante
Espessante 23
Agente formador de filmes 17
Agente de retenção de água 12
Coagulante 7
Colóide 6
Lubrificantes 5
Outros 5
Aplicação de goma na indústria de alimentos
Propriedade Função
Aumento de Espessante, suspender sólidos, estabilizar
viscosidade emulsões
Formação de géis Formar géis, suspender sólidos
Ligação de água Afetar solubilidade, facilitar a secagem, facilitar
a precipitação, evitar a separação
Inibição de Melhorar textura, melhor transparência, induzir
cristalização maciez
Tensoativo Melhorar a formação de espumas, melhorar
emulsões, estabilizar espumas
Formação de filmes Fixar aromas, encapsulação
Reatividade com Suspender sólidos, melhorar textura, estabilizar
proteínas espumas, evitar separação de soros
Mistura de Evitar mascaramento de aromas, melhorar
propriedades clarificação, promover floculação
 EPS - Microrganismos
• Xantana – Xanthomonas campestris
• Dextrana – Leuconostoc mesenteroides
• Curdlana – Alcaligenes faecalis
• Gelana – Sphingomonas paucimobilis
 EPS – Síntese e cultivo
• Extração, purificação – processos simples
• Produtividade elevada
• Custos de produção – dependente substratos
• Glicose, sacarose  fontes C preferenciais
• Fontes alternativas: melaço, resíduo soja

• Produção em todas fases de desenvolvimento

• pH  influência na atividade de enzimas
(glicosil-hidrolases)
• Temperatura ótima – 25 a 45°C
 EPS - Rendimento
• Obtenção de mutantes (recombinação gênica)
• Uso de tecnologia de DNA recombinante
(inserção de genes específicos)
• Desenvolvimento e seleção de meios de cultivo
• Maximizar produção, minimizar custos

• Desenvolvimento de condições e sistema de

cultivo mais adequadas
 Goma Dextrana
• Polissacarídeo extracelular
• D-glucopiranosil

• Síntese ocorre extracelularmente

– Subtrato é transformado sem penetrar na célula
• Enzima dextrana-sacarase, presença de
sacarose
– Enzima atua no meio de cultura
• Bactéria envolvida: Luconostoc mesenteroides
 Síntese - Dextrana

Crescimento do microrganismo

Síntese e excreção de dextrana-sacarase

Síntese de dextrana pela ação da enzima

Precipitação dextrana por metanol/etanol

 Aplicações - Dextrana
Área Uso
Alimentícia Estabilizante e agente de viscosidade
Biomedicina Agentes de contraste para imagiologia
Fotografia Emulsões de prata para revelação
Farmacêutica Componentes de géis em colírios,
anticoagulantes
Veterinária Estabilizantes
 Goma Gelana
• Polissacarídeo de cadeia linear, formado por
glicose, ramnose e ácido glicurônio
• Gel termorreversível quando sofre alteração
de temperatura
• Boa estabilidade – pH e calor
• Produção relacionada ao crescimento do
microrganismo
• Sphingomonas paucimobilis, Pseudomonas
elodea
 Aplicações - Gelana
Área Uso

Alimentícia Retenção de umidade, estabilidade

geléias, iogurtes, produtos gelados
Microbiologia Substituição do ágar, maior pureza e
translucidez
Papel Resistência interna do papel e melhor
impressibilidade
Farmacêutica Pílulas, cápsulas e produtos de higiene
pessoal
 Goma Curdlana
• Goma de cadeia linear, unidade ß-D-glicose
• Características variam de acordo com grau de
acetilação
• Alcaligenes faecalis, Agrobacterium radiobacter
• Produz gel termorreversível quando submetidos a
calor/frio
– Gel low-set (50-60°C)
– Termorreversível; similar a agar-agar e gelatina

– Gel high-set (≥80°C)

• Firme, resistente, não termorreversível, estabilidade em ampla
faixa de temp. congelamento
 Aplicações - Curdlana

Área Uso

Alimentícia Modificador de textura, melhorando a

retenção de água (hambúrguer –maciez
e textura; sorvete - viscosidade
Farmacêutica Medicamentos contra infecções
viróticas e bacterianas, agente
anticoagulante e antitrombótico
 Goma Xantana
• Constituída por glicose, manose e ácido
glicurônico
• 30% das ramificações possuem um grupo
piruvato carregado
• Sua estrutura altamente ramificada e alto peso
molecular  confere alta viscosidade
• Completamente atóxica, usada como aditivo de
alimentos
• Boa estabilidade em ampla faixa de pH e T
• Xanthomonas sp.
 Síntese - Xantana
• Necessita elevada aeração e agitação
• Condições: pH neutro, temperatura 28°C
• Metabólico secundário, acumulação inicia após
cessar o crescimento bacteriano
• Maior quantidade de carbono  acúmulo de
produto
• Tempo de fermentação 48-96 horas
• Produção industrial: Kelco, Pfizer, Mero-
Rousselot-Satia,
 Aplicações - Xantana
Área Uso
Alimentícia Controlar viscosidade, textura,
retenção de aromas, suspensão de
sólidos e estabilização de emulsões
Higiene Suspensão e espessante de pasta de
dente, desodorantes em gel
Agricultura Suspensão de compostos químicos
Petrolífera Aumento da recuperação de petróleo
Polissacarídeos microbianos
• Possuem uma grande e crescente importância
no mercado
• Larga aplicabilidade na industria de
alimentos, industria petrolífera, farmacêutica,
têxtil, tintas
• Importância da pesquisa: descoberta de
novos biopolímeros e otimização de processos
de produção