artigo tcnico

Cintica da esterilizao
Douglas Augusto Guilherme*
As empresas utilizam processos de esterilizao em seu dia a dia, mas nem sempre entendem a cintica do pro cesso que executam. Alguns conceitos como o modo que o microorganismo morre quando submetido a um efeito esterilizante, a esterilizao mais como uma probabilida de que um fato absoluto, o uso das informaes para entender o efeito do potencial mortfero de condies esterilizantes, o efeito das mudanas nas condies do efeito mortfero ou como as informaes podem ser usa das para determinar total letalidade de um processo este rilizante e como este conhecimento pode nos assegurar quantitativamente a esterilidade so conceitos que podem ser aplicados para todos os tipos de processos de esterilizao tanto fsicos como qumicos. Para ilustrar conceitos, a esterilizao a vapor ser utili zada como referncia. expostos a um agente letal, no morrem todos ao mesmo tempo. Na verdade, o nmero de organismos vivos reduz exponencialmente com o tempo (Fig. 1). Embora a ausncia de todos os organismos vivos poder ser assegurada somente aps exposio infinita, esterili dade deve ser encarada como um conceito de probabili dade. Por exemplo, a probabilidade de existir um organis mo sobrevivente em uma carga. Para a esterilizao, a probabilidade de menos de um em um milho conside rada aceitvel. Este o comumente chamado Nvel de esterilidade assegurada (NEA) maior que 106. O desenho de um processo de esterilizao que atingir uma probabilidade definida de ocorrncia de sobreviven tes depende de: Conhecimento da populao microbiana inicial (bio burden) Cintica da mortalidade microbiana (resistncia / sus cetibilidade)

Cintica da morte microbiana

Esterilidade relacionada a um estado absoluto, mas na prtica no nada alm disto. Microorganismos, quando

Resistncia microbiana
Quando submetida a um efeito de morte comum, nem todos os microorganismos morrem na mesma freqn cia, alguns morrem muito mais rapidamente que outros, refletindo diferenas em suscetibilidade ou resistncia ao efeito mortfero. Resistncia morte depende do estado fisiolgico do organismo (quanto mais saudvel o organismo, mais resistente ser) e o tipo de organismo. Bactrias Gram negativas geralmente so mais suscetveis que Gramposi tivas, bactrias esporuladas so altamente resistentes e esporos de fungos geralmente no so mais resistentes que bactrias Grampositivas. Verificando na figura 1, a suscetibilidade de organismos mostraria uma curva de morte bem ngreme, enquanto a resistncia de organismos mostraria uma curva mais rasa. Assim, a resistncia do organismo inversamente pro porcional rampa da curva de morte. Podemos quantificar esta resistncia / suscetibilidade determinando o valorD (Dvalue). O valorD o tempo de exposio ou dose requerida para que o nmero de sobreviventes seja reduzido pelo fator de 10 (por exem plo, 1 ciclo logartmico ou 90 %). O valorD pode ser determinado graficamente (Fig. 2) ou matematicamente da equao: D= t

Fig 1. Relao entre dose esterilizante e sobrevivncia microbiana

* Monitor do Departamento de Produtos Estreis da Organon do Brasil Contato: douglas.guilherme@organon.com.br

 Clostridium sporogenes tpico altamente resistente da flora normal e com D121 de aproximadamente 0,8 minuto. Nota: Como a morte exponencial, um organismo com valorD duas vezes maior que de outro, dez vezes mais resistente (no duas vezes mais resistente!) Staphylococcus sp valor D121 aproximadamente 15 segundos. Pseudomonas sp valor D121 aproximadamente 6 segundos.

Fig 2. Relao entre dose esterilizante e sobrevivncia microbiana, mostrando o valor-D

log No log N1 Ento... Organismos suscetveis curva ngreme e pequeno valorD Organismos resistentes curva rasa e grande valor-D Usando esterilizao a vapor como exemplo: Bacillus stearothermophilus mais resistente organismo conhecido, com valorD 121C de aproximadamente 1,5 minuto.

Determinao de efeito mortfero de um tratamento especfico

Munido de informao do valorD do organismo, pode mos prever o efeito mortfero de um tratamento de este rilizao especfico. Usando conhecimento de valorD e tempo de trata mento, podemos calcular o declnio logartmico da populao. Ns chamamos este valor de Fator de inativao (FI) ou Valor de reduo logartmica (VRL)

artigo tcnico

FI = 10VRL VRL = t/D Novamente, usando esterilizao a vapor como exem plo, para calcular o declnio da populao de Bacillus stearothermophilus submetido 121C por 15 minutos: D = 1,5 T = 15 FI = 1015/1,5 = 1010 VRL = 15/1,5 = 10 Ento, as condies esterilizantes podem ser esperadas para reduzir a populao em 10 logs. Portanto, se a populao original era de 103, a probabi lidade de uma unidade no estril de:10 log da populao inicial VRL = 10 3 10 = 107, portanto NEA = 107. Tais clculos so cabveis se for sabido que somente um tipo de bactria est presente no material a ser esterilizado, mas este quase nunca o caso. Populaes misturadas estaro presentes com diferentes resistncias ao efeito este rilizante. Nestes casos a utilizao de pior caso necessria. Da assumirse que Bacillus stearothermophilus o conta minante do processo de esterilizao a vapor.

rida para reduzir o valorD dos organismos em 90% ou para produzir um decrscimo de um ciclo logartmico no trao de resistncia termal. Para esterilizao por calor, as unidades de valorZ so graus de temperatura. O valorZ pode ser estimado grafi camente ou matematicamente usando a equao: Z = T2 T1 log D1 log D2 onde D1 e D2 so valoresD a temperaturas T1 e T2 res pectivamente. A preciso com a qual os valoresZ podem ser estima dos depende da preciso de que cada valorD pode ser experimentalmente determinado. Em particular, se os dados a diferentes temperaturas forem para condies de teste diferentes eles no podem ser combinados para produzir um significvel valorZ. O conhecimento do valorZ nos permite comparar o efei to mortfero de um conjunto de condies de esterilizao com outro conjunto de condies, e permite tambm, cal cular o efeito mortfero total de um ciclo de esterilizao.

Efeitos de mudanas nas condies de esterilizao

A resistncia microbiana morte, como exemplificada pelo valorD, especfica para um conjunto dado de con dies, se as condies mudam, o valorD mudar. Por exemplo, se a temperatura de esterilizao aumen tada, o organismo morrer mais rapidamente e o valorD diminui. Se a temperatura diminui, o valorD aumenta. Esta mudana na taxa de inativao microbiana com a mudana da temperatura o coeficiente temperatura para processo letais. Se o logaritmo do valorD for grafi cado contra temperatura, h um resultado de relao linear (Fig. 3). A figura chamada de Curva de resistncia termal. A recproca negativa da curva nesta linha o valorZ. O valorZ representa o aumento de temperatura reque

Comparao de condies esterilizantes

Imagine se desejssemos saber a efetividade relativa de duas condies esterilizantes: 121C / 15 min e 131C / 6 min.

Se assumssemos que o organismo o Bacillus stearo thermophilus ns sabemos que D121 = 1,5 e D131 = 0,15. Ento, se aumentssemos a temperatura 10C, reduzi ramos o valorD ao fator de 10. Ento para 121C/15 min: VRL = t/D = 15/1,5 = 10 e para 131C/ 6 min: VRL = t/D= 6/0,15 = 40. As condies de temperatura mais alta so mais efetivas no fator de 1030! Um conjunto de condies equivalentes a 121C / 15 min seria 131C / 1,5 min.

Clculo da letalidade total de um ciclo de esterilizao

O conhecimento do valorD pode permitir o clculo de efeito mortfero sob condies conhecidas. No entanto, a maioria dos ciclos de esterilizao leva tempo para atingir um estado regular e tempo para retornar para condies seguras. Por exemplo, durante esterilizao por calor h um perodo de aquecimento e resfriamento. Seguese, ento, que pelo menos uma poro do pero do de aquecimento e resfriamento contribuiro para a letalidade total (efeito mortfero) do ciclo. Conhecimento destas contribuies podem ser vlidas por vrias razes como:

Fig 3. Curva de resistncia termal tpica

 permitir-nos determinar a total letalidade do ciclo e ento determinar a garantia de esterilidade; baseado no desenho dos ciclos (somente na contribuio do perodo de estabilidade) poderia levar a ciclos extre mamente longos que poderia diminuir a estabilidade do produto. Munido destes conhecimentos de D e Z, podemos deter minar o total efeito mortfero por integrao de todas as fases do ciclo de esterilizao e converter o ciclo total a um ciclo equivalente sob um estado regular de condies referncia. Podemos derivar o valorF para o ciclo. F definido como o tempo equivalente da condio regular com seu efeito letal. Usando esterilizao a vapor por exemplo, podemos representar o ciclo como sendo equivalente a uma suces so de perodos de 1 minuto a diferentes temperaturas. Convertendo cada minuto de exposio a um tempo equivalente do estado regular, podemos representar o ciclo total em termos de minutos do estado regular. Por exemplo, 21 min 121C para Bacillus stearothermophi lus, D121 = 1,5 min. Portanto, a letalidade total (VRL) = 21/1,5 = 14; ento, para o desafio de populao inicial de 10 organismos por unidade: NEA = 10114 = 1013 Ento, o ciclo dnos uma garantia muito alta de esteri lidade baseado no desafio de pior caso com organismo altamente resistente. Suponha, entretanto, que o produto seja termosensvel e que estas condies reduzem a estabilidade do produ to. Seria possvel reduzir a total letalidade do ciclo abaixo de VRL = 8 (Fo = 12) e ainda atingir NEA de 107. Por vrios mtodos de esterilizao, os valores-F foram determinados baseados em condies de referncia padro. Por exemplo: Esterilizao a vapor Fo tempo equivalente em minutos a 121C Esterilizao por calor seco Fh tempo equivalente em minutos a 170C

Para ciclo de esterilizao a vapor com Fo de 8 para: Bacillus stearothermophilus VRL = t/D = 8/1,5 = 5,3 portanto para um desafio de 10 organismos por unidade, NEA = 101 5,3 = 104,3 (menos que 106). Assim, o desafio por unidade deve ser menor que 102 para atingir NEA maior que 106 MAS qualquer desafio no ser Bacillus stearothermo philus pois este nunca encontrado em produtos. Clostridium sporogenes VRL = t/D = 8/0,8 = 10 para desafio de 10 organismos por unidade NEA = 101 10 = 109 Staphylococci VRL = t/D = 8/0,3 = 23 para desafio de 10 organismos por unidade NEA = 101 23 = 1022 Podemos ver que para contaminantes normais, mesmo ciclos curtos podem atingir Nveis de Esterilidade Asse gurada altamente satisfatrias.

Liberao de Ciclos de esterilizao baseado em valor-F

Organizaes de regulamentao Europias aceitam, para produtos com esterilizao terminal, o uso de ciclos de esterilizao a vapor com Fo de pelo menos 8 (equiva lncia de 8 minutos a 121C). Nota: Norma farmacopeica de 15 minutos a 121C.

Clculo de Nvel de Esterilidade Assegurada (NEA)