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CAUSAS DE ERRO DE MEDIO VOLUMTRICA NOS LABORATRIOS

A escolha da vidraria volumtrica determinante para a garantia da exactido da medio de volumes. Se os instrumentos no cumprirem uma srie de regras e normas de construo (p.e. ISO 384 Princpios de construo e concepo de vidraria volumtrica) que porventura escapam aos utilizadores, mas que os bons fabricantes cumprem escrupulosamente, no possvel obter resultados com uma boa exactido e repetibilidade. Hoje em dia, os laboratrios portugueses j se preocupam em adquirir produtos fabricados por empresas com sistemas de gesto da qualidade certificados e, no raramente, exigem que os seus produtos sejam acompanhados de um certificado de srie (onde figuram a mdia e o desvio-padro para a capacidade relativa a cada srie de fabrico) ou mesmo de um certificado de calibrao. Contudo, verifica-se frequentemente que, apesar do cuidado na seleco da vidraria na fase de aquisio, os laboratrios, mesmo com sistemas de gesto da qualidade implementados, no do a devida importncia correcta manipulao e manuteno da vidraria volumtrica.

Manipular bem a vidraria volumtrica

Aquele que considerado o maior erro na utilizao de vidraria volumtrica o erro de paralaxe, que depende do dimetro do menisco e da posio do operador relativamente escala do instrumento graduado. A norma ISO 4787 refere alguns erros experimentais na determinao do volume em funo do erro de determinao da posio real do menisco (paralaxe), conforme se mostra na tabela 1. Um pequeno desvio de 1 mm no ajuste do menisco pode significar um erro muito aprecivel no volume medido, como se pode concluir observando a tabela 2. Outro grande inimigo da exactido quando se utiliza vidraria volumtrica a contaminao, em particular por gorduras. Na verdade, estas substncias alteram a forma do menisco dando erros de leitura importantes. Por outro lado, nos instrumentos graduados a escoar, como o caso das buretas, os lquidos a medir deixam de aderir s paredes numa camada uniforme e, ao invs disso, aglutinam-se formando bolhas. Os desvios causados pela contaminao das buretas (p.e. com o prprio lubrificante das torneiras esmeriladas quando usado em excesso) so muitas vezes da ordem dos 50% da tolerncia especificada para o instrumento. Igualmente frequente, um outro erro de manipulao consiste em utilizar pipetas ou buretas com tempo de espera (p.e. da classe AS segundo DIN) e sem que tenha sido observado o tempo de espera de 15 segundos para as pipetas e de 30 segundos para as buretas.

Os erros na medio de volumes que ocorrem nos laboratrios tm, no raramente, impactes muito significativos na exactido dos resultados de ensaios quantitativos. Na origem dos erros de medio de volumes podem considerar-se dois grandes grupos de causas: por um lado, m prtica dos operadores; por outro, falhas dos instrumentos de medio. Os erros devidos a m prtica dos operadores s podem ser reduzidos com formao especfica adequada. Os erros devidos aos instrumentos podem ser reduzidos com uma manuteno adequada ou compensados tendo em conta os resultados das calibraes peridicas, conforme se demonstra neste artigo.
Isabel Faria, Directora do Normalab Laboratrio de Calibrao de Vidraria Volumtrica da Normax

Apesar dos instrumentos de boa qualidade serem fabricados em vidros borosilicatados de grande resistncia qumica, a sua superfcie degradada em contacto com bases fortes e compostos contendo fluoretos, pelo que se deve evitar o contacto prolongado destes compostos com o vidro. importante lembrar que muitos detergentes utilizados nos laboratrios so fortemente alcalinos e portanto no devem ser deixados em contacto prolongado com os instrumentos volumtricos de vidro. Como evidente devem tambm ser evitados os choques trmicos e mecnicos.

Tabela 1. Erros experimentais relacionados com o ajuste do menisco (adaptado da norma ISO 4787). Erro na posio do menisco 0,05 mm 0,1 mm 0,5 mm 1 mm 2 mm Dimetros tpicos de meniscos 5 mm 0,001 ml 0,002 ml 0,010 ml 0,020 ml 0,039 ml 10 mm 0,004 ml 0,008 ml 0,039 ml 0,078 ml 0,157 ml 20 mm 0,016 ml 0,031 ml 0,157 ml 0,314 ml 0,628 ml 30 mm 0,035 ml 0,071 ml 0,353 ml 0,707 ml 1,414 ml

Inspeccionar e/ou calibrar a vidraria volumtrica

A vidraria volumtrica deve ser periodicamente sujeita a uma inspeco visual para detectar sinais de degradao, como por exemplo: riscos profundos provocados por escovilhes, pontas lascadas em buretas e pipetas, superfcie fosca revelando abraso. Deve tambm ser verificada a estanquicidade das torneiras das buretas, pois a perda de uma gota , em regra, superior tolerncia do prprio instrumento. Aperiodicidade desta inspeco dever ser estabelecida em funo da frequncia e tipo de utilizao dos instrumentos, mas o perodo entre inspeces no dever ser superior a um ano. Do mesmo modo, a periodicidade de calibrao dos instrumentos deve ser estabelecida em funo da respectiva utilizao. No caso de instrumentos que sejam utilizados com solues pouco agressivas, regularmente inspeccionados, so geralmente aceites perodos de calibrao at cinco anos.

Tabela 2. Relao entre o erro na posio do menisco e a tolerncia dos instrumentos utilizados. As tolerncias consideradas so as que esto definidas nas normas ISO aplicveis aos instrumentos mencionados. Instrumento Pipeta volumtrica de 20 ml Bureta de 10 ml, diviso 0,02 ml Balo volumtrico de 20 ml Bureta de 25 ml, diviso 0,1 ml Balo volumtrico de 500 ml Balo volumtrico de 2000 ml Tolerncia da classe A 0,03 ml 0,02 ml 0,04 ml 0,05 ml 0,25 ml 00,6 ml Erro na posio do menisco (% da tolerncia) 0,1 mm 07% 10% 20% 16% 12% 12% 0,5 mm 33% 50% 98% 78% 63% 59% 1 mm 067% 100% 195% 156% 126% 118% 2 mm 130% 195% 393% 314% 251% 236%

Tabela 3. Erros associados ao tamanho do instrumento seleccionado para medir 100 l. Sendo E o erro relativo1 (ou desvio) e CV o coeficiente de variao 2 mximos especificados pelo fabricante para o instrumento novo. Instrumento Pipeta de volume fixo de 100 l Pipeta de volume varivel de 10 a 100 l Pipeta de volume varivel de 100 a 1000 l Fabricante 1 E (l) 0,6 0,8 1,6 CV (l) 0,2 0,15 0,3 Fabricante 2 E (l) 0,9 0,8 0,9 CV (l) 0,3 0,3 0,45

Instrumentos volumtricos accionados por mbolo (POVA)

A escolha de um POVA (macro e micropipetas, buretas digitais, doseadores e diluidores) para um determinado trabalho decisiva na qualidade dos resultados. Tomemos como exemplo uma medio de 100l, em que podemos usar diversas micropipetas e supondo em ptimo estado, e podemos mesmo assim obter resultados muito diferentes conforme o tamanho do instrumento seleccionado, tal como se pode ver na tabela 3.

1 O erro relativo o erro sistemtico expresso como percentagem do volume seleccionado (V0), de acordo com a equao: E= [(V V 0) / V 0 ]. 1 0 0 2 O coeficiente de variao dado pela equao CV= 100 s / V uma medida da repetibilidade da micropipeta, obtida com base no desvio padro s, das medies efectuadas.

Manipulao do POVA
A primeira medida para utilizar bem um POVA (Plunger Operated Volumetric Apparatus) ler atentamente o manual, dado que a maioria dos manuais destes instrumentos faz referncia s principais causas de erro. Alm disso, sempre necessrio ter em ateno que no doseamento de pequenos volumes, a temperatura e a humidade do laboratrio so muito importantes devido s perdas por evaporao. Nas buretas e doseadores deve ainda tomar-se ateno ao efeito da ltima gota e em certos instrumentos ao efeito de retorno.

Conselhos para utilizar bem as suas micropipetas

Escolha a ponta correcta e adapte-a firmemente. Aponta deve estar bem adaptada para evitar falhas de estanquicidade. Escolha o modo de funcionamento correcto. Utilize o "modo inverso" s para amostras viscosas. Pr-humedea a ponta. Antes de retirar a amostra aspire e expire pelo menos 3 vezes para formar uma camada de amostra aderente ao interior da ponta. Recolha a amostra no seu centro e no mergulhe a ponta em demasia. Observe a profundidade de recolha da amostra especificada pelo fabricante da pipeta. Mova o mbolo com suavidade e velocidade constante. No deixe o mbolo subir livremente. Faa uma pequena pausa aps a imobilizao do mbolo. Aps a imobilizao do mbolo ainda existe algum fluxo de amostra para o interior da ponta. Retire a pipeta lentamente do recipiente que contm a amostra. Aremoo brusca origina volumes demasiado baixos. Evite inclinar demasiado (ou deitar) uma pipeta enquanto contm amostra. Aamostra pode penetrar no cone, sendo fonte de contaminaes e obstrues indesejveis. Observe a ponta antes de dispensar a amostra. As eventuais gotas aderentes ao exterior da ponta devem ser removidas. Observe a ponta depois de dispensar a amostra. Eventuais gotas retidas no interior da ponta fazem parte do volume medido, significando que a ponta foi reutilizada ou de m qualidade. Evite agarrar a pipeta pela parte inferior e pouse-a entre duas utilizaes. Atransferncia de calor das mos para a pipeta deve ser minimizada. No reutilize as pontas.

Inspeco e/ou calibrao do POVA

Todos os instrumentos com mbolo devem ser regularmente inspeccionados e deve verificar-se se a aco do mbolo suave. Se um mbolo se move "aos solavancos" existe certamente uma perda de exactido e repetibilidade, muito provavelmente devida a sujidade e/ou falta de lubrificao. Num estudo efectuado em 2002 sobre pipetas de laboratrios portugueses, 49% careciam de limpeza, lubrificao e/ou ajuste. Apenas 33% das pipetas estudadas cumpriam as especificaes para E e CV definidas na norma ISO 8655. As pipetas devem ser examinadas regularmente para se verificar se existem falhas de estanquicidade devidas, por exemplo, degradao dos vedantes (o-ring) ou dos cones. As buretas e doseadores devem ser inspeccionados frequentemente para se avaliar o estado das vlvulas e dos tubos de aspirao. Nos instrumentos que utilizam baterias estas devem ser substitudas com a regularidade estabelecida pelo fabricante e no devem ser usados aps o aviso de bateria fraca. Quanto aos intervalos entre calibraes, estes devem ser estabelecidos em funo da utilizao e do historial do instrumento. consensual que, para instrumentos com uma manuteno adequada e observncia das boas prticas de utilizao, o intervalo inicial entre calibraes seja, regra geral, de um ano. Concluindo, os laboratrios nos quais as medies de volumes so relevantes para a exactido e repetibilidade dos resultados dos ensaios devero estabelecer programas de formao especficos para a rea da utilizao de tcnicas de medio de volumes, bem como planos de manuteno, inspeco e calibrao dos instrumentos segundo o tipo de utilizao a que esto associados.
BIBLIOGRAFIA ASTM E542 2001. Standard Practice for Calibration of Laboratory Volumetric Apparatus. ISO 384 1978. Laboratory glassware Principles of design and construction of volumetric glassware. ISO 385 - 1984. Laboratory glassware Burettes. ISO 648 - 1977. Laboratory glassware One-mark pipettes. ISO 835 1981. Laboratory glassware Graduated pipettes. ISO 1042 1998. Laboratory glassware One-mark volumetric flasks. ISO 4787 1984. Laboratory glassware Volumetric glassware - Methods for use and testing of capacity. ISO 8655 2002. Piston-operated volumetric apparatus. Faria, I.; Marques, A. 2002. Micropipetas nos laboratrios portugueses At que ponto podemos confiar no seu desempenho?. In: Laboratrios de Portugal, vol.1. p.48-49.