1.

INTRODUO

A descoberta da cromatografia, no final do sculo passado, creditada a um botnico chamado Tswett. Ele usou uma coluna com carbonato de clcio e um solvente que percolava pela mesma, para separar pigmentos de folhas em uma srie de bandas coloridas. O nome cromatografia composto dos termos gregos chroma = cor e graphein = escrita. A partir deste experimento, muitos outros cientistas tm contribudo para o desenvolvimento da teoria e da prtica da cromatografia. O processo cromatogrfico ocorre como um resultado dos fenmenos de adsoro (interao entre um slido e um fluido - um lquido ou gs) e dessoro (capacidade de uma substncia qumica para mover-se com a fase mvel) que acontecem repetitivamente, durante o movimento dos componentes da amostra, atravs do leito estacionrio. A separao ocorre devido a diferentes constantes de distribuio destes componentes entre as fases mvel e estacionria (DEGANI; CASS e VIEIRA, 2011). A cromatografia um mtodo empregado de forma ampla e que permite a separao, identificao e determinao de componentes qumicos em misturas complexas. Nenhum outro mtodo de separao to poderoso e de aplicao to generalizada como a cromatografia. Segundo Skoog et al (2008, p. 875) uma tcnica na qual componentes de uma mistura so separados com base nas diferenas de velocidade nas quais so transportados atravs de uma fase fixa estacionria por uma fase mvel lquida ou gasosa. Os componentes da mistura so transportados atravs da fase estacionria pelo fluxo da fase mvel e as separaes ocorrem com base nas diferenas de velocidade de migrao entre os componentes da fase mvel. tambm um mtodo muito verstil, podendo utilizar colunas de diferentes tipos e dimenses, bem como diversas combinaes de diversas fases mveis e estacionrias (SIMES et al, 2007, p. 241) Os mtodos cromatogrficos servem tambm para fins de identificao e anlise de misturas e de substncias isoladas; nesse caso, chama-se de cromatografia analtica, enquanto a cromatografia que visa o isolamento de compostos dita cromatografia preparativa. A fase estacionria pode encontrar-se empacotada em coluna (aberta ou fechada) ou constituir uma superfcie plana, como na cromatografia em papel e cromatografia em camada delgada.

Em geral, a tcnica cromatogrfica envolve as seguintes etapas (SIMES et al, 2007, p. 240): - montagem da coluna ou placa: disposio adequada da fase estacionria ou suporte e preparao da fase mvel; - aplicao da amostra; - desenvolvimento: passagem de um solvente escolhido fase mvel atravs da fase estacionria; - revelao/visualizao: localizao das diferentes zonas de separao dos compostos e/ou - extrao das substncias retidas na fase estacionria. Este procedimento especialmente til no caso de compostos que so sensveis ao calor, ou no so volteis, ou seja, compostos que no apropriados determinao de ebulio ou cromatografia em fase gasosa. A distncia percorrida por cada composto em uma amostra, dividido pela distncia percorrida pelo solvente conhecido como o Rf (fator de reteno). Comparaes do valor de Rf da amostra com o de um padro um mtodo qualitativo usado na identificao de um composto. Para clculo de valor de Rf mede-se a distncia que a substncia se deslocou a partir do ponto de aplicao (ds), considerando-se para efeito de medida o centro de gravidade da mancha, e divide-se pela distncia percorrida pela frente do solvente a partir do ponto original da amostra (dm):

Linha de chegada fase mvel

dm ds1

ds2 Ponto de aplicao da amostra Nvel mximo da fase mvel

Figura 1: Determinao do Rf no cromatograma em camada fina

1.1 O processo cromatogrfico

O processo cromatogrfico consiste na partio dos componentes de uma mistura entre a fase mvel e a fase estacionria. No caso da cromatografia gasosa o fluido um gs e na cromatografia lquida o fluido um solvente. Na cromatografia lquida a fase estacionria constituda de partculas slidas empacotadas em uma coluna, a qual atravessada pela fase mvel. So as foras fsicas e qumicas que atuam entre os solutos e as duas fases so responsveis pela reteno dos solutos sobre a coluna cromatogrfica. A diferena na magnitude dessas foras que determina a resoluo e, portanto a separao dos solutos individuais. As foras elementares que agem sobre as molculas so de cinco tipos: 1) Foras de disperso de London ou foras de Van der Waals; 2) Interaes de dipolo induzido; 3) Ligaes de hidrognio; 4) Interaes dieltricas; 5) Interaes eletrostticas e coulombianas. As variveis que afetarem essas foras intermoleculares iram influenciar o grau de separao obtido pela passagem dos solutos atravs da coluna cromatogrfica. (CEFET, s.d).

1.2 Classificaes da cromatografia

So vrios os critrios usados para a classificao das diferentes modalidades de cromatografia, sendo os mais comuns relacionados tcnica empregada, ao mecanismo de separao envolvido e aos diferentes tipos de fases utilizadas (COLLINS et al., 1997 apud TRRES, 2009):

a) Classificao pela forma fsica do sistema cromatogrfico

Se subdivide em cromatografia em coluna, na qual a fase estacionria colocada em um tubo cilndrico, e cromatografia planar, disposta sobre uma superfcie planar. Enquanto a cromatografia planar resume-se cromatografia em papel (CP), por centrifugao e cromatografia em camada delgada (CCD), so diversos os tipos de cromatografia em coluna.

b) Classificao pela fase mvel empregada

Cromatografia gasosa, a cromatografia lquida e a cromatografia supercrtica (CSC), usando-se na ltima um vapor pressurizado, acima de sua temperatura crtica. A cromatografia lquida apresenta uma importante subdiviso: a cromatografia lquida clssica (CLC), na qual a fase mvel arrastada atravs da coluna apenas pela fora da gravidade, e a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), na qual se utilizam fases estacionrias de partculas menores, sendo necessrio o uso de uma bomba de alta presso para a eluio da fase mvel. No caso de fases mveis gasosas, separaes podem ser obtidas por cromatografia gasosa (CG) e por cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR). A diferena entre os dois tipos est na coluna.

Figura 2: Representao esquemtica dos diferentes tipos de cromatografia. Fonte: TRRES, 2009, p. 5

c) Classificao pela fase estacionria utilizada

Distingue entre fases estacionrias slidas, lquidas e quimicamente ligadas. No caso da fase estacionria ser constituda por um lquido, este pode estar simplesmente adsorvido sobre um suporte slido ou imobilizado sobre ele. Suportes modificados so considerados separadamente, como fases quimicamente ligadas, por normalmente diferirem dos outros dois em seus mecanismos de separao (COLLINS et al., 1997 apud TRRES, 2009).

d) Classificao pelo mecanismo de separao

Por este critrio, separaes cromatogrficas se devem adsoro, partio, troca inica, excluso ou bioafinidade. Na cromatografia de adsoro as separaes so baseadas em atraes eletrostticas ou dipolares (foras de Van Der Waals) entre a fase estacionria (slido) e os componentes a separar da fase mvel (lquido ou gs). A cromatografia de partio baseada nas diferenas de solubilidade dos componentes na fase estacionria (lquido) e na fase mvel (lquido). Na cromatografia de troca inica a separao ocorre devido a diferentes tendncias dos componentes inicos ou ionizados permutarem com ons da fase estacionria, que, assim, so deslocados para a fase mvel. A afinidade entre os ons da fase mvel e o suporte pode ser controlada por alterao do pH e da fora inica do eluente. Na cromatografia de afinidade ocorre uma ligao molecular especfica e reversvel entre o soluto e um ligante imobilizado na fase estacionria. Utiliza-se esta tcnica especificamente para separar produtos biolgicos, e como exemplos podemos citar: ligaes enzimas e substratos, anticorpos e substratos. A cromatografia de excluso molecular separa os componentes segundo o tamanho efetivo (raio hidrodinmico) das molculas, isto , molculas grandes no penetram no interior do suporte (partculas porosas de gel) e movem-se mais rapidamente ao longo da coluna de onde emergem primeiro, enquanto as molculas pequenas apresentam velocidade de deslocamento retardada porque penetram no gel, portanto, emergem da coluna mais tardiamente (LEDERER & LEDERER, 1973; DEGANI et al., 1998, apud TRRES, 2009).

1.3 Fundamentos de adsoro

O fenmeno da adsoro conhecido desde o sculo XVIII, quando se observou que certa espcie de carvo retinha em seus poros grandes quantidades de vapor dgua, o qual era liberado quando submetido ao aquecimento. Nas ltimas dcadas, com o avano das pesquisas e do conhecimento na rea, bem como o acentuado desenvolvimento registrado na petroqumica, a adsoro

passou a ser utilizada como uma operao unitria importante dentro da engenharia qumica. Atualmente, a adsoro aplicada em processos de purificao e separao, apresentando-se como uma alternativa importante e economicamente vivel em muitos casos. A adsoro um dos fenmenos de transporte e a transferncia de massa se d quando existe uma superfcie de contato entre um slido e um gs ou um lquido e a concentrao de determinado componente deste gs ou deste lquido maior nesta superfcie do que no interior do gs ou do lquido. Desta forma, a adsoro est intimamente ligada tenso superficial das solues e a intensidade deste fenmeno depende da temperatura, da natureza e a concentrao da substncia adsorvida (o adsorbato), da natureza e estado de agregao do adsorvente (o slido finamente dividido) e do fluido em contato com o adsorvente (o adsortivo).

1.3.1 Adsorventes mais utilizados

Sendo a adsoro um fenmeno essencialmente de superfcie, para que um adsorvente tenha uma capacidade adsortiva significante, deve apresentar uma grande rea superficial especfica, o que implica em uma estrutura altamente porosa. As propriedades adsortivas dependem do tamanho dos poros, da distribuio do tamanho dos poros e da natureza da superfcie slida. Os adsorventes mais utilizados em escala industrial atualmente so o carvo ativado, a slica-gel, a alumina ativada e as peneiras moleculares. Os chamados adsorventes amorfos carvo ativado, slica-gel e alumina apresentam reas especficas entre 200-1000m2/g, e uma faixa de distribuio de tamanho de poros bem ampla, enquanto que as peneiras moleculares, por serem materiais cristalinos apresentam um tamanho de poro de ordem de grandeza molecular definido pela estrutura cristalina, e que praticamente no varia.

a.

Slica-gel

A slica-gel formada quando um silicato solvel neutralizado por cido sulfrico, retirando-se a gua um slido poroso obtido. Sua composio qumica pode ser expressa como SiO2.nH2O. Sua principal aplicao industrial como

adsorvente a retirada de umidade de correntes gasosas, mas tambm foi utilizada na separao de compostos aromticos de parafnicos e naftnicos no processo Arosorb.

b.

Alumina

A alumina ativada constituda de xido de alumnio e comumente obtida da bauxita (Al2O3.3H2O). Sua aplicao industrial mais importante tambm na desidratao de correntes gasosas e em algumas purificaes especficas de correntes lquidas.

c.

Carvo ativado

O carvo ativado um dos primeiros adsorventes conhecidos e um dos mais utilizados atualmente. Pode ser produzido de vrias maneiras e suas caractersticas vo depender da matria prima utilizada e da forma de ativao. Geralmente produzido pela decomposio trmica de material carbonceo seguido pela ativao com vapor ou dixido de carbono em temperaturas elevadas. Sua superfcie possui afinidade com substncias de carter orgnico, conferindo-lhe sua principal aplicao atualmente, a descontaminao de gua destinada ao consumo humano. Utilizando-se de tcnicas modernas de ativao possvel produzir um novo material chamado peneira molecular de carvo um carvo ativado com estreita distribuio de tamanho de poros, na faixa observada nas peneiras moleculares. Uma utilizao em larga escala destas peneiras moleculares de carvo na separao de gases.

d.

Peneiras Moleculares

A grande maioria das peneiras moleculares so zelitas, termos que praticamente eram sinnimos at o surgimento de outros tipos de peneiras moleculares como as alumino fosfatadas e as peneiras moleculares de carvo. Zelitas so alumino-silicatos de estrutura cristalina e porosa, de ocorrncia natural ou sintetizados em laboratrio.

A estrutura cristalina das zelitas formada pela unio de tetraedros de SiO4 e AlO4 que formam poliedros caractersticos. Estes poliedros arranjam-se tridimensionalmente dando origem a poros de dimenses moleculares e uniformes. Como o grupo AlO4 apresenta excesso de cargas negativas a estrutura compensada eletronicamente por ons positivos. As diferentes configuraes tridimensionais e a presena de diferentes ctions de compensao determinam uma grande quantidade de tipo de zelitas, cada uma com seu dimetro de poro caracterstico.

2. MATERIAIS E REAGENTES

- 2 cubas para eluio cromatogrfica - 5 placas de vidro (microscpio) - 1 bagueta - capilares de tubo de vidro - papel filtro - gua destilada - amido - gesso em p - rgua e lpis macio - papel toalha - vidro de relgio - canetinha, fita adesiva - etanol, acetona, acetato de etila e ter de petrleo, iodo. - estufa

Parte A 1) Preparo das placa CCD Lavou-se as placas de vidro cuidadosamente com detergente e gua corrente. Aps a lavagem, a superfcie das placas no foi mais tocada com os dedos. Misturou-se num bquer amido (maisena) e gesso em ps na proporo de 2:1, diluiu-se com um pouco de lcool formando uma suspenso homognea. Mantendo-se as placas na posio horizontal, transferiu-se uma poro da suspenso na superfcie das placas, (FOTO 1) espalhando uniformemente a medida

que se suspendia as placas com auxlio de papel toalha e se soltava a placa na bancada. Repetiu-se esta operao at que toda a superfcie estivesse uniforme. A espessura do recobrimento estava com aproximadamente 0,3mm. Repousou-se a placa na bancada e deixou-se secar ao ar por 15 minutos, quando o adsorvente adquiriu uma aparncia opaca. Depois as placas foram transferidas para a estufa onde ficaram por 30 minutos a fim de eliminar a gua adsorvida no suporte.

Foto 1

2) Preparo das tiras para cromatografia em papel Recortou-se o papel filtro, no sentido da fibra, em retngulo que coubessem dentro do bquer sem que suas bordas tocassem nas paredes do bquer.

Parte B Cromatografia de tinta de canetinha em papel Em 4 tiras de papel fez-se um trao a +/- 1 cm da borda, sobre ela fez-se uma pinta de tinta bem pequena na seguinte ordem: verde claro, verde escuro, preto, vermelho, laranja, azul escuro, lils, azul claro e pink (FOTO 2). Dentro do bquer colocou-se um pedao de papel filtro limpo para homogeneizar o ambiente. Prendeu-se a extremidade oposta da tira de papel num vidro de relgio e prendeu-se com fita adesiva. Preparou-se uma mistura de eluente com metade acetona e metade lcool. Colocou-se a tira dentro do bquer que ficou fechado com o vidro de relgio cuidando para que o eluente ficasse apenas na borda da tira e aguardou-se a separao (FOTO 3 e 4). Os resultados foram anotados.

Repetiu-se a operao com uma eluente formado com 75% de lcool e 25% de acetona outra com 25% de lcool e 75% de acetona e outra com lcool, acetona e gua. Anotou-se os resultados.

Foto

Foto 2 Parte C

foto 3

foto 4

Com o capilar, coletou-se uma amostra do extrato de folhas verdes (FOTO 5). Na placa de vidro previamente preparada, colocou-se uma mancha do extrato (FOTO 6). A placa foi transferida para uma cuba cromatogrfica contendo acetato de etila e ter na proporo de 2:1, cuidando para que o nvel do eluente ficasse abaixo do nvel da mancha na placa (FOTO 7). Aps a eluio a placa foi seca na estufa por uns 10 minutos, aps foi colocada no revelador (iodo slido) (FOTO 8) at o aparecimento da mancha de cor verde oliva prxima ao topo da placa (FOTO 9). Anotou-se o resultado. Foto 5 foto 6 foto 7

Foto

Foto 5

foto 6

foto 7

Foto 8

foto 9

RESULTADOS

PARTE A: - Resultados da separao das tintas de caneta: Separao 1: metade lcool e metade acetona separao 2: 30% lcool + 70% acetona

Separao 3: 70% lcool +30% acetona

separao 4: 40% lcool + 30% acetona + 30% gua

Tabela 1: Resultados de Rfs encontrados:

separao verde

Verde escuro

azul

vermelho laranja

preto

lils

Azul claro

pink

1(Dm=4,4)

0,09

0,068

0,13

0,068

0,022

0,18 0,86

0,88

0,15

0,9

2(Dm=4,2)

0,04

0,09

0,09

0,023

0,023

0,11 0,80

0,83

0,88

0,80

3(Dm=5,5)

0,109

0,145

0,09

0,05

0,027

0,181 0,85

0,109 0,109 0,854

0,83

4(Dm=3,4)

0,44

0,29 0,88

0,58 0,91

0,29

0,29

0,088 0,85

0,88

0,82

0,82

14 12 10 8 6 4 2 0 separao 4 separao 3 separao 2 separao 1

Grfico 1: Comparativo entre os Rfs encontrados em cada separao. Atravs do grfico pode-se verificar que o a separao 4 que tinha uma mistura de lcool, acetona e gua a que melhor separou os componentes da tinta. As cores escuras como o preto e o lils foram os que mais se separaram, chegando a ser possvel identificar mais de uma cor na mistura. Apesar da mistura 3 (70% lcool +30% acetona) ter tido um valor maior de dm, ou seja, apresentou maior afinidade com o papel, foi a mistura 4 quem conseguiu uma separao mais eficiente.

PARTE B:

Na foto 10, possvel observar que a mancha verde oliva revelada representa a clorofila que foi arrastada pelo eluente. Assim fio possvel calcular o seu Rf:

Foto 10

Pode-se observar que os fundamentos bsicos para este tipo de separao dependem ds fenmenos de adsoro e que acontecem repetitivamente, durante o movimento dos componentes da amostra, atravs do leito estacionrio. A separao ocorre devido a diferentes constantes de distribuio destes componentes entre as fases mvel e estacionria, consiste tambm na partio dos componentes de uma mistura entre a fase mvel e a fase estacionria que depende da afinidade entre as fases, pois os componentes de uma mistura so separados com base nas diferenas de velocidade nas quais so transportados atravs de uma fase fixa estacionria por uma fase mvel lquida ou gasosa. As interaes decorrentes da polaridade de cada composto so tem maior afinidade por seu semelhante. Os usos mais consagradas da tcnica de cromatografia so: separao, identificao e determinao de componentes qumicos em misturas complexas. Nenhum outro mtodo de separao to poderoso e de aplicao to generalizada como a cromatografia. Os mtodos cromatogrficos servem tambm para fins de identificao e anlise de misturas e de substncias isoladas; nesse caso, chama-se de cromatografia analtica, enquanto a cromatografia que visa o isolamento de compostos dita cromatografia preparativa. As suas desvantagens esto em encontrar o solvente ideal para a separao e por ser um processo caro e demorado. O solvente para ser um bom eluente deve ter afinidade com a substncia a ser analisada para que possa ser separada. Nas experincias realizadas pode-se observar que para a tinta a mistura, lcool,m acetona e lcool foi o melhor eluente, e no caso do extrato de folhas verdes, o acetato de etila tambm foi um bom eluente. Quando suspeitamos que os componentes da amostra a ser analisada pode no ser visvel a olho nu, podemos usar substncias reveladoras, que reagiram com o componente a ser encontrando dando a ela cor. Por exemplo: vapores de iodo e lmpada ultravioleta. No primeiro mtodo, os vapores de iodo regiram com muitos fundamentais

para o entendimento dos fenmenos envolvidos, tendo em vista que cada um deles

compostos orgnicos formando complexos de cor marrom ou amarela. No segundo mtodo, sob a luz UV os compostos geralmente como manchas brilhantes de prata. Outro mtodo consiste na adio de um indicador de fluorescncia ao adsorvente usado para cobrir a placa.

CONSIDERAES FINAIS

Aps este experimento pode-se concluir que a cromatografia um mtodo eficiente na identificao de compostos com polaridades distintas, alm de ser uma tcnica eficaz na classificao do grau de polaridade de compostos desconhecidos, fazendo a separao de mais de um componente. No experimento da cromatografia em papel, pode-se observar que os componentes da tinta tm maior afinidade com uma mistura de lcool, acetona e gua, pode-se dizer que os compostos so polares, uma vez que os solventes tambm os so. Este solvente apesar de ter percorrido o menor caminho, conseguiu separar as tintas em mais de uma cor. Na separao do extrato de folhas verdes foi necessrio o uso de um revelador, uma vez que a substncia a ser identifica no era visvel a olho n. A placa preparada manualmente, apesar de no ter ficado perfeita, apresentou uma boa afinidade com o eluente e com a substncia, pois conseguiu realizar um bom transporte e uma boa separao dos componentes. O mecanismo de separao dado pela interao da fase estacionria e da fase mvel com os componentes da mistura, no caso do experimento, o mecanismo de separao o processo fsico, que denominado de processo de adsoro, que baseado principalmente em atraes eletrostticas ou dipolares (foras de Van Der Waals), incluindo a formao de ponte de hidrognio. A adsoro se d na interface entre o slido e a fase mvel, devido presena de grupos ativos na sua superfcie.

REFERNCIA BIBLIOGRFICA

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