UNIVERSIDADE ABERTA DO BRASIL UAB

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MONTES CLAROS - UNIMONTES

CURSO: CINCIAS BIOLGICAS UAB
DISCIPLINA: BIOLOGIA MOLECULAR 5 PERODO
PROFESSORA: BRBARA LAFET
TUTORA DISTNCIA: GABRIELA FACCION
TUTORA PRESENCIAL: BIANCA ARAJO
PLO: ALMENARA


Adriana Silva Lcio
Fabrcia Morais Dias
Renato Antunes de Oliveira







GENTICA FORENSE










Almenara-MG
Abril/ 2011
INTRODUO


A gentica forense em menos de vinte anos tornou-se uma ferramenta indispensvel em
investigao criminal. uma das cincias forenses que utiliza o DNA (cido
desoxirribonuclico) para auxiliar a justia (PENA, 2005). Apesar do ramo mais desenvolvido
da gentica forense ser a identificao de DNA e sua aplicao mais popular ser o teste de
paternidade, a gentica forense no se limita a isso, podendo se aplicada na identificao ou
individualizao de animais, plantas ou microorganismos.
O primeiro mtodo de utilizao da anlise do DNA para identificar indivduos foi
desenvolvido em meados da dcada de 1980 por Sir Alec Jeffreys, da Universidade de
Leicester e, apesar do seu enorme poder potencial, houve srias reservas quanto o seu uso
real, pois no inicio, havia muitas dvidas quanto reprodutibilidade e a confiabilidade dos
mtodos (DUARTE et al., 2001; BROWN, 2001).
Com o conhecimento atual, ao menos duas grandes vantagens devem ser citadas sobre a
tiragem molecular: o DNA possui uma alta estabilidade qumica mesmo aps um longo
perodo de tempo e est presente em todas as clulas nucleadas do organismo humano, o que
facilita a obteno do mesmo (MALAGHINI et al., 2006). As primeiras tcnicas forenses de
identificao humana eram convenientes apenas para anlise de DNA de evidncias
biolgicas que contivessem clulas nucleadas. Atualmente, com a implementao do
seqenciamento do DNA mitocondrial, essa limitao tem sido superada (LEE e LAAD,
2001).
Se antes, impresses digitais e outras pistas eram usadas para desvendar crimes; hoje,
so inmeros os espcimes biolgicos dos quais o DNA pode ser extrado. Podemos encontr-
lo em pequenas amostras de sangue, ossos, smen, cabelo, dentes, unhas, saliva, urina, entre
outros fluidos, e anlises cuidadosas desse material ajudam a identificar criminosos
(BENECKE, 2002).









DNA FORENSE


Segundo Sergio Pena (2005), determinao de identidade gentica pelo DNA uma
tcnica muito superior a todas as tcnicas preexistentes de medicina forense, inclusive s
impresses digitais clssicas. Alm disso, os estudos dos polimorfismos de DNA (regies do
genoma nas quais existem variaes entre pessoas sadias) nos permitem construir um perfil
gentico absolutamente indivduo-especfico.
Ao contrrio das protenas, quantidades nfimas de DNA podem ser amplificadas
bilhes de vezes por meio da reao em cadeia da polimerize. Finalmente, caractersticas
moldadas ao longo da histria evolutiva dos seres vivos adaptaram o DNA para ser uma
molcula informacional com baixssima reatividade qumica e grande resistncia
degradao. Essa robustez da molcula de DNA, conjuntamente com o fato de que ele
contm informao digital (ao contrrio da informao analgica das protenas) fazem com
que o DNA seja ideal como uma fonte de identificao resistente passagem do tempo e s
agresses ambientais freqentemente encontradas em cenas de crime.
Como mencionado por Weedn e colaboradores (1996), a determinao de identidade
gentica pelo DNA pode ser usada para demonstrar a culpabilidade dos criminosos,
exonerarem os inocentes, identificar corpos e restos humanos em desastres areos e campos
de batalha, determinar paternidade com confiabilidade praticamente absoluta, elucidar trocas
de bebs em berrios e detectar substituies e erros de rotulao em laboratrios de
patologia clnica.
Nos ltimos anos foram desenvolvidas diversas tcnicas para estudo de diferentes tipos
de polimorfismos de DNA, formando assim um verdadeiro cardpio, no qual os cientistas e
laboratrios podem escolher o mtodo mais adequado para solucionar o problema em mos
(Pena et al., 1995). Alis, por isto, a expresso correta teste em DNA e no teste de DNA.
O mtodo mais usado hoje em dia o estudo de regies repetitivas de DNA chamadas
de minissatlites e microssatlites (Pena e Jeffreys, 1993; Pena e Chakraborty, 1994). A chave
da diversidade nessas regies que o nmero de repeties varia entre indivduos e pode ser
estudado com sondas de DNA ou com a chamada reao em cadeia da polimerize (PCR).
Em geral, uma quantidade significativa de material deve ser coletada para garantir a
extrao de DNA suficiente para os testes. Deve-se levar em conta que o material biolgico
recuperado na cena do crime pode sofrer alteraes ambientais que podero ocasionar quebras
e alteraes da cadeia de nucleotdeos e, como conseqncia, modificar a composio e a
estrutura normal do DNA, impossibilitando a anlise (BONACCORSO, 2004).
Deve-se realizar a documentao antes da coleta, embal-la corretamente e preservar a
amostra (guardar em ambiente frio e seco) at serem submetidos testagem para no colocar
em risco a confiabilidade da amostra. Em casos de justia, se a evidncia no seguir todos
estes passos com muito cuidado, ela pode no preencher os requisitos legais e cientficos para
serem admitidos num tribunal, pois, se ela no foi apropriadamente documentada antes da
coleta, sua origem pode ser questionada e se tiver sido mal coletada ou embalada a
possibilidade de contaminao aumentar, levando a uma maior possibilidade de discordncia
nos resultados da anlise do DNA.





























TCNICAS UTILIZADAS PARA A GENOTIPAGEM DE MARCADORES
GENTICOS

Eletroforese
Por meio dessa tcnica possvel separar molculas em funo da sua massa (tamanho),
forma e compactao. Trata-se de uma tcnica rpida, sensvel e precisa. A molcula em
questo, por exemplo, o DNA, migra em suportes (gis de agarose ou acrilamida) por ao de
uma corrente eltrica com diferentes velocidades, dependendo do seu tamanho e forma.
Quando submetido a um campo eltrico, a molculas de DNA migram para o plo positivo,
pois so carregadas negativamente, e como fora oposta migrao existe o atrito com o
suporte (gel). Quanto maior a molcula, maior o atrito e mais lenta a migrao; portanto,
molculas de tamanhos diferentes tero migrado uma distncia diferente depois de algum
tempo.






Figura 01: Desenho esquemtico de uma eletroforese.
Fonte: http://www.sobiologia.com.br/figuras/Genetica/eletroforese.gif acesso 08/04/2011.

A distncia que o fragmento percorreu a partir do ponto de aplicao comparada com
a distncia que outros fragmentos de tamanhos conhecidos percorreram no mesmo gel
(VIEIRA, 2006). O DNA pode ser visualizado na presena de compostos intercalantes, sendo
que o mais utilizado o brometo de etdio. Em presena desse composto, o DNA emite
fluorescncia por exposio luz UV e, assim, molculas de um mesmo tamanho so
visualizadas em um mesmo ponto do gel, formando uma faixa fluorescente (ZAHA et al.,
2003).









Figura02: Resulta da eletroforese sob luz UV.
Fonte: http://quimicanet.files.wordpress.com/2010/09/foto-1-eletroforese.jpg acesso 08/04/2011.
Se na amostra submetida corrente eltrica existir mais de um tamanho de molcula,
estas sero separadas na migrao e, ento, sero visveis bandas em diferentes localizaes
do gel. Basicamente, duas matrizes slidas so utilizadas atualmente para eletroforese: gis de
agarose e gis de acrilamida. A escolha do tipo de gel depende do tamanho do fragmento e da
diferena de tamanho de diferentes fragmentos de DNA que se quer visualizar. As duas
substncias formam tramas de poros de tamanhos variveis, possibilitando a separao dos
fragmentos, que ter sua eficincia dependente da concentrao do polmero e da intensidade
da voltagem e amperagem aplicadas.
Apesar de sua versatilidade e relativo baixo nvel de dificuldade de realizao, a
eletroforese convencional tem a desvantagem de identificar os fragmentos apenas quanto ao
tamanho e no quanto seqncia (VIEIRA, 2006).

Reao em Cadeia da Polimerase (PCR)
A reao em cadeia da DNA-polimerase (do ingls Polimerase Chain Reaction)
revolucionou a gentica molecular por permitir a rpida clonagem e a anlise do DNA. um
mtodo in vitro rpido e verstil para a amplificao de seqncias-alvo de DNA definidas,
presentes em uma preparao de DNA. Geralmente, o mtodo programado para permitir a
amplificao seletiva de uma seqncia-alvo de DNA especfica a partir de DNA total
previamente extrado. Para permitir tal amplificao seletiva, alguma informao prvia, a
respeito das seqncias-alvo, necessria.
Essa informao utilizada para desenhar dois oligonucleotdeos iniciadores,
denominados primers, os quais so especficos para a seqncia-alvo e apresentam cerca de
15 a 25 nucleotdeos de extenso. Aps os primers terem sido adicionados ao DNA-molde
desnaturado, eles se ligam especificamente s seqncias de DNA complementares ao seu
stio-alvo, flanqueando e delimitando a regio a ser analisada. Na presena de uma DNA-
polimerase termoestvel apropriada e dos quatro desoxirribonucleosdeos trifosfatos (dATP,
dCTP, dGTP e dTTP), iniciada a sntesede novas fitas de DNA, que so complementares a
cada uma das fitas de DNA do segmento-alvo de DNA, formando, desta maneira, um
fragmento de DNA com seqncia idntica do DNA a ser analisado, e previamente
selecionado pelo par de primers (STRACHAN et al., 2002).
Uma vez que este ciclo de duplicao molecular repetido vrias vezes, a PCR uma
reao em cadeia porque as fitas de DNA, recentemente sintetizadas, iro atuar como moldes
para mais uma sntese de DNA nos ciclos subseqentes. Aps cerca de 25 ciclos de sntese de
DNA, os produtos da PCR iro incluir, alm do DNA que iniciou a reao, cerca de 105
cpias da seqncia-alvo especfica, uma quantidade que facilmente visualizada como uma
banda distinta de tamanho especfico quando submetida eletroforese em gel de agarose
(STRACHAN et al., 2002).
O processo relativamente simples e fcil de realizar em laboratrio. Os resultados
podem ser obtidos em um espao curto de tempo, freqentemente menos do que 24 horas, em
contraste com uma anlise do genoma total com southern, que exige at mesmo semanas.





















Figura03: Esquema do processo de PCR.
Fonte: http://www.odec.ca/projects/2005/anna5m0/public_html/pcr.png acesso 08/04/2011.

Principais vantagens da tcnica de PCR
Velocidade e facilidade de utilizao: a clonagem de DNA por PCR pode ser realizada
em poucas horas usando-se um equipamento relativamente simples, cuja funo fundamental
a variao de temperatura em cada passo da tcnica. (STRACHAN et al., 2002).
Sensibilidade: a PCR capaz de amplificar seqncias a partir de quantidades nfimas
do DNA-alvo e, at mesmo,do DNA de uma nica clula. Esta vantagem torna a tcnica
particularmente til na anlise forense, quando, em muitos casos, a quantidade de material
biolgico, e portanto de DNA extrado de algumas amostras, muito pequena, como em fios
de cabelo ou traos de saliva em tocos de cigarro. Alm disso, a pequena quantidade de DNA,
necessria para a PCR, torna mais fcil guardar pores de amostras para repetir os testes no
mesmo ou em outro laboratrio (DUARTE et al., 2001). No entanto, a sensibilidade extrema
do mtodo implica que enormes cuidados devem ser tomados para evitar a contaminao da
amostra com DNA de outras fontes (STRACHAN et al., 2002).
Robustez e possibilidade de anlise de amostras degrada das: a PCR pode permitir a
amplificao de seqncias especficas a partir de material no qual o DNA est gravemente
degradado ou embebido em um meio onde o isolamento de DNA problemtico. Mas em
gentica forense, nem sempre as amostras biolgicas so novas e se encontram em um bom
estado de conservao, o que compromete a integridade do genoma da clula a ser analisada.
Uma vez que somente um fragmento do DNA isolado e amplificado pela PCR, uma enorme
vantagem desta tcnica permitir a utilizao, com sucesso, de amostras que contenham DNA
degradado. Assim, atravs da PCR, possvel a tipagem do DNA em amostra que de outra
maneira no poderiam ser analisadas, como amostras antigas e j decompostas, restos mortais
de vtimas de incndios ou acidentes e corpos em decomposio, por exemplo (DUARTE et
al., 2001).

Principal limitao
A contaminao com DNA externo em nveis semelhantes ao de interesse a principal
desvantagem, pois pode provocar amplificao destes e levar a concluses errnias.
(DUARTE e cols, 2002).

Outras Tcnicas de genotipagem
SOUTHERN BLOTTING: uma das primeiras tcnicas de identificao de seqncia de
DNA de interesse seja para identificao de uma polimorfismos ou at genes de patologias.
Baseada na insero de sondas em DNA total clivado e separado por eletroforese em papel de
nitrocelulose. (VOET et al., 2002). A dificuldade desta tcnica a necessidade de grande
quantidade de DNA integro e completo, o que no meio forense de difcil obteno.
DNA Mitocrodrial: Tcnica que estuda o DNA da mitocndria que apresenta a
vantagem de possui de 500 a 2000 cpias por clula. Por isso til na gentica forense onde a
quantidade de DNA encontrado normalmente pequena. Alm de estudar a linhagem materna
do individuo, pois as mitocndrias so herdadas exclusivamente da me.
(ALBUQUERQUE,2004; PARSONS e COBLE, 2001).
Identificao do cromossomo Y: Bastante utilizado em disputas de identificao de
paternidade pois o cromossomo Y exclusivamente transmito aos seus descendentes pela
linhagem paterna. E tambm na resoluo de casos de estupro onde se encontra smen e
secreo vaginal misturados. (KASHYAP et al., 2004).

CONCLUSO










































REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS


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