Single Cell Sequencing

Beatriz Menezo nº2017253890

Nuna Moreira nº2018
Índice
• Introdução
• O que é o Single Cell Sequencing (SCS)
• Mecanismo do SCS
• Vantagens
• Desvantagens
• Aplicações
• Perspetivas para o futuro
• Conclusão
• Referencias bibliográficas
Introdução
 Nesta breve exposição sobre a tecnologia do Single Cell Sequencing iremos abordar as suas
particularidades, tais como, o modo como se processa, as vantagens e desvantagens, as suas
aplicações e, por fim, as perspetivas para o futuro.
O que é o single cell sequencing?
O SCS é uma tecnologia que examina a sequenciação de células individuais, permitindo uma
melhor compreensão das funções celulares e auxiliando na distinção entre tecido saudável e
lesado. Tendo sido descoberta em 2009, foi considerada como a “técnica do ano” em 2013,
sendo que ainda há muito mais para descobrir.

As análises em células individuais são particularmente importantes para o estudo

de tecidos com altos graus de variações, como o cérebro e tumores, podendo
revelar diferenças estruturais e mutações.
ScRNA-seq vs Single cell genome (DNA)
sequencing
Mecanismos do SCS
 O SCS encontra-se dividido em 3
mecanismos, sendo eles o
ISOLAMENTO de células individuais
de um tecido, posteriormente a
AMPLIFICAÇÃO do DNA da célula
recolhida, e por fim a SEQUENCIAÇAO
desse mesmo material genético.
ISOLAMENTO
AMPLIFICAÇÃO
MÉTODOS PROCESSO VANTAGENS/
DESVANTAGENS
MDA Técnica que utiliza Podem haver erros
simultaneamente as que resultam em
(multiple polimerases Φ29 e Bst e
displacement falsos positivos; não
primers aleatórios
amplifcation) modificados para haver necessita de ciclos
a criação de uma de repetição
estrutura ramificada e,
consequentemente,
amplificação.

MALBAC (multiple combina a MDA e o Alta uniformidade;

annealing
looping-based
PCR Um sequenciamento
feito com
PCR
amplifcation cycle) amostras
amplificadas por
MALBAC alcançam
93% de cobertura
genética
 Na sequenciação
das células recorre-
se ao Next
SEQUENCIAÇÃO
Generation
Sequencing (NGS)
que permite, por
exemplo, detetar Suporta uma ampla gama de aplicações, incluindo perfis de
mutações. expressão genética, contagem de cromossomas, deteção de
alterações epigenéticas e análise molecular.
Vantagens
• Menor custo (um oitavo do custo de outro sistema de preparação de biblioteca)

• Permite estudar e detetar alterações em tecidos variados (certas características celulares podem
passar despercebidas quando se analisa um maior número de células)

• Permite o estudo do genoma completo

• Pode-se fazer com uma amostra pequena (impedindo um maior desconforto do paciente)

• Fácil de usar (sendo que o tempo de preparação da amostra é diminuído)

Desvantagens
• Tamanho da amostra (como as amostras são reduzidas, a degradação, perda ou contaminação
tornam-se mais evidentes prejudicando o sequenciamento)

• Por vezes pode ser difícil isolar as células individuais (pode não se saber o que se procura)

• Dificuldade de análise dos dados (como a quantidade de dados vai ser elevada necessita-se de
mais material e tempo para os analisar)
A
P
L
I
C
A
Ç
Õ
E
S
Aplicações
 Microbiologia

 Estudo genético pré-implantacional em clínicas de fertilização in vitro

 Imunologia

 Oncologia

 Neurociências
Microbiologia

MICROBIOMAS
Fertilização in vitro

Na seleção e triagem de
embriões fertilizados in
vitro para pacientes de
risco
Imunologia
 Oncologia
Uma importante aplicação para o SCS é traçar o perfil genético ou as
sequências de mutações presentes em CTCs e em células tumorais
disseminadas (DTCs- células que se disseminam dentro de tecidos,
como os ossos), permitindo assim o diagnóstico e a monitorização de
pacientes com cancro. A partir dessas células, importantes
informações sobre a atividade do cancro podem ser obtidas sem a
necessidade de uma biópsia.
Perspetivas Para o Futuro
Conclusão
Apesar desta técnica ainda precisar de ser melhorada, já é amplamente utilizada em vários
ramos, o que ajuda na descoberta de novas e variadas patologias e consequentemente em
novas maneiras de ajudar o ser humano.
Bibliografia
•Navin N, Hicks J. Future medical applications of single-cell sequencing in
cancer. Genome Med. 2011;3(5):31.
•Navin N, Kendall J, Troge J, Andrews P, Rodgers L, McIndoo J, et al. Tumour
evolution inferred by single-cell sequencing. Nature. 2011;472.
•Liang J, Cai W, Sun Z. Single-cell sequencing technologies: current and
future. J Genet Genomics. 2014;41(10):513-28.
•Ramsköld D, Luo S, Wang YC, Li R, Deng Q, Faridani OR, et al. Full-length
mRNA-Seq from single-cell levels of RNA and individual circulating tumor cells. NatBiotechnol.
2012;30(8):777-82.
•Vega C, Borda C C. Application of single cell sequencing in cancer physiopathology. 2017;8(2)