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RELAES
HDRICAS
INTRODUO
A gua o principal constituinte das clulas vegetais, podendo chegar at 97%, como o caso das folhas de alface. Ela possui
uma srie de caractersticas que a tornam meio fundamental para a manifestao de todos os fenmenos fsicos, qumicos e biolgicos
essenciais para o desenvolvimento das plantas. Nos tecidos lenhosos e nos rgos dormentes o contedo de gua cai abaixo de 80%. Em
algumas sementes secas o contedo de gua pode ser de apenas 5%. As sementes maduras de algumas plantas (ex. Amaryllis e Crinum
spp.) tem alto teor de gua (normalmente acima de 70%), o que lhes possibilita germinarem sem suprimento de gua.
O mtodo usual para a determinar o contedo de gua consiste em secar o material em estufa at peso constante. Deve-se tomar
cuidado para evitar carbonizao, o que acarretar perda de matria seca, razo pela qual em geral se usam temperaturas relativamente
baixas (inferiores a 85%). Uma pequena quantidade de gua, associadas a substncias orgnicas (gua de ligao), no e removida por
esse processo. O contedo de gua pode ser expresso em porcentagem de peso fresco ou de peso seco. Geralmente se usa porcentagem de
peso fresco, mas algumas vezes prefervel usar porcentagem de peso seco, especialmente quando o contedo de gua elevado, uma vez
que em tais casos, grandes variaes de quantidade de gua presente podem causar pequenas alteraes no teor expresso como
porcentagem de peso fresco. Por outro lado, o contedo de gua representado como porcentagem de peso seco pode algumas vezes ser
mal interpretado, porque se a matria seca alterada, por exemplo, como o resultado de acumulo ou consumo de produo de reserva, o
contedo de gua por unidade matria seca se alterar se a quantidade real de gua presente permanecer constante.
O contedo de gua de uma planta bastante varivel e muda muito com as flutuaes de umidade do solo e do ar. Em muitos
casos a transpirao excede a absoro de gua durante a maior parte do dia e o teor de gua diminui. A noite a situao se inverte. Desse
modo uma planta reabastece durante a noite, os tecidos que perderam gua durante o dia anterior. Em cactus, como por exemplo, em
Opuntia cujos estmatos se fecham durante o dia ocorre o contrario.
De modo anlogo, o contedo de gua do tronco de uma rvore decdua em regies temperadas se eleva durante o inverno,
quando a transpirao baixa, e diminui no vero, quando a transpirao alta. Isto tem conseqncias importantes na industria da
silvicultura, quando os troncos de madeira so transportados flutuando rio abaixo; os que tm gua so mais densos do que os que tiver
sua gua parcialmente substituda por ar.
O contedo relativo de gua (CRA), a quantidade de gua de um tecido comparada com a quantidade que ele poder reter
sem infiltrao nos espaos areos. A (CRA) de uma folha medido tomando-se seu peso da matria fresca (PMF 1) e a seguir colocando-a
para flutuar na gua, preferivelmente luz, e depois, pesando-a novamente (PMF 2) depois de enxugar a gua superficial. O peso da
matria seca (PMS) ento determinado conforme descrito acima e o seu CRA calculado a partir da frmula:
CRA = PMF1 PMS
PMF2 PMS
Assim, o valor mximo do CRA a UNIDADE, freqentemente o CRA expresso como porcentagem do contedo mximo de
gua, multiplicando-se o valor obtido na frmula acima por 100. O dficit de saturao de gua (DSA) o termo algumas vezes aplicado
diferena entre CRA, expresso como porcentagem e 100, isto :
DSA= 100 CRA (%)
2. OBJETIVO
Determinar o contedo relativo de gua (CRA) e o dficit de saturao de gua (DSA) de discos de folhas de vrias espcies
vegetais.
3. MATERIAL NECESSRIO
Placas de petri
Furador de rolhas
Estufa de ventilao forada de ar
Balana
Cmara iluminada (bancada iluminada)
Folhas de espcies vegetais sugeridas pelo instrutor.
4. PROCEDIMENTO
Retire (corte) 50 discos (2 cm de dimetro) de uma folha de cada uma das espcies sugerida pelo instrutor e pese-a
imediatamente, anotando o peso da matria fresca inicial (PMF 1). Coloque-as em uma placa de petri com gua e leve-as para baixo da
bancada iluminada, deixando-as ai por um perodo de 10 horas. Aps esse perodo, pese-os novamente (PMF 2) depois de enxugar a gua
superficial. Determine o peso da matria seca (PMS) aps coloc-los por 24 horas em estufa de ventilao forada com temperatura de 80
0
C +/- 5C.
Com os resultados das pesagens, calcule o contedo relativo de gua (CRA) e o dficit de saturao de gua (DSA) de cada
folha e construa uma tabela mostrando as espcies utilizadas e os respectivos resultados.
5. QUESTIONRIO
Defina CRA e DAS.
Por que na determinao do Peso da Matria Seca (PMS) usa-se a estufa com temperaturas mais ou menos 80 0C?
Qual a diferena em se determinar o contedo de gua em termo de porcentagem de peso da matria seca ou porcentagem de peso da
matria fresca?
Qual a importncia do conhecimento do contedo de gua para Silvicultura?
Determine o C.R.A. de uma folha determinando espcie vegetal sabendo-se que o peso da folha aps a sua retirada da planta era de
1,05g; o peso aps ressaturao era de 1,15g e o peso aps 48 horas em estufa de ventilao forada era de 0,05g. Indicar o
C.R.A. em porcentagem.
lcool etlico
Lmina de barbear
Estilete e basto de vidro
gua destilada
Lminas e lamnulas de vidro para microscopia
4. PROCEDIMENTOS
Com o auxilio de uma lmina de barbear e uma pina remova alguns fragmentos da epiderme inferior de
urna folha de Zebrina (de preferncia sobre a nervura principal). Coloque-os em uma lmina com uma gota de gua destilada, cobrindo
com a lamnula, e observe ao microscpio. Substitua a gua secando com papel de filtro, por uma soluo de sacarose 0,25M. Observe
como o protoplasma se desloca da parede celular em conseqncia da sua diminuio de volume. Este fenmeno chama-se
PLASMLISE. Substitua novamente a soluo de acar por gua destilada, se no houver mudana alguma, repita o procedimento com
clulas plasmolisadas recentemente.
5
Depois de provocar plasmlise num fragmento de epiderme de Zebrina segundo a tcnica usada anteriormente, trate-o com uma
ou duas gotas de lcool. Observe o que acontece com o pigmento vermelho do vacolo (ANTOCIANINA).
5. QUESTIONRIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
4. PROCEDIMENTOS
Coloque algumas gotas de cada uma das solues de sacarose separadamente em cada lmina. Tome, em cada uma 2 ou 3
fragmentos de epiderme de Zebrina. Aps 20 a 30 minutos examinar no microscpio os pedaos correspondentes a cada soluo, contando
o nmero de clulas vermelhas trgidas e clulas vermelhas plasmolisadas. Determine a porcentagem de clulas plasmolisada para cada
soluo. Construa um grfico em que na abcissa esto as concentraes das solues e nas ordenadas, a porcentagem de clulas
plasmolisadas. Identifique a soluo equivalente plasmlise incipiente.
5. QUESTIONRIO
Defina plamlise incipiente.
Por que a plasmlise incipiente pode ser utilizada para determinar a presso osmtica () de um tecido? Por que a plasmlise
qualquer no poderia ser utilizada para medir esse parmetro?
Qual a presso omtica das clulas do material usado, em MPa, a 20oC?
Por que em plasmlise incipiente, a presso osmtica da clula igual presso osmtica da soluo externa?
7
Na determinao da presso osmtica das clulas de Zebrina pelo mtodo plasmoltico voc chegou a um valor equivalente a uma
soluo 0,12M da sacarose:
a)
Qual o valor da presso de parede das clulas em plasmlise incipiente?
b)
Qual o potencial hdrico das clulas nessa mesma condio?
A presso osmtica da clula em plasmlise incipiente tem o mesmo valor que a presso osmtica da clula em sua condio inicial?
Explique. O que seria necessrio para corrigir o valor da primeira para que ela eqivalesse ao valor da segunda?
Quais so as principais vantagens e desvantagens deste mtodo para determinar a presso osmtica do tecido?
INTRODUO
O mtodo tem como princpio, a medio da transferncia de gua lquida entre amostras de tecido vegetal e solues testes de
presso osmtica conhecidas. No mtodo de Schardakow, a transferncia determinada pela mudana de densidade das solues testes. A
densidade das solues aumentar, diminuir ou permanecer invarivel, conforme o tecido tenha potencial hdrico maior, menor ou igual
ao da soluo.
2.
OBJETIVO
MATERIAL NECESSRIO
8
Em folhas de Zebrina pendula encontrou-se, pelo mtodo densimtrico um potencial hdrico de 0,3MPa. Em plasmlise incipiente o
mesmo apresentou uma presso osmtica de +0,2 MPa. Considerando que no tenha havido alterao no volume celular,
pergunta-se:
Qual a presso de turgescncia (P) do tecido (potencial de presso)?
Este tecido absorveria gua, se colocado em gua pura? Porque?
Voc pode com esse mtodo, determinar o valor da presso osmtica das clulas? Explique.
Quais so as vantagens e desvantagens do mtodo densimtrico na determinao do potencial hdrico em tecidos vegetais?
Qual a funo do azul de metileno nestes exerccios? Se fosse tecido de beterraba haveria necessidade desse corante?
0,00
0,01
0,02
SEGUNDAS DECIMAIS
0,03
0,04
0,05
0,06
0,07
0,08
0,09
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1,0
0,00
2,67
5,36
8,23
11,24
14,49
18,03
21,78
25,83
30,09
35,05
0,26
2,95
5,64
8,52
11,55
14,79
18,34
22,18
26,34
30,59
35,56
0,54
3,21
5,94
8,82
11,85
15,20
18,74
22,59
26,74
31,10
36,16
0,80
3,47
6,22
9,12
12,26
15,50
19,15
23,00
27,15
31,50
36,67
1,87
4,54
7,36
10,33
13,47
16,92
20,67
24,62
28,77
33,53
38,70
2,14
4,81
7,65
10,64
13,88
17,32
20,97
25,02
29,17
34,04
39,30
2,41
5,08
7,94
10,94
14,18
17,63
21,37
25,43
29,68
34,54
39,81
1,07
3,75
6,50
9,41
12,56
15,80
19,45
23,40
27,55
32,01
37,18
1,34
4,01
6,79
9,70
12,87
16,21
19,85
23,70
27,96
32,52
37,68
1,61
4,27
7,07
10,00
13,17
16,61
20,26
24,11
28,36
33,02
38,19
Soluo de CuSO4 a 2%
Cristal de K4Fe (CN)6
Tubo de ensaio (1)
4. PROCEDIMENTOS
Coloque no tubo de ensaio 10mL de soluo de sulfato de cobre e adicione um cristal de ferrocianeto de potssio. Ponha o tubo
num lugar firme e sem tocar nele ou mov-lo, observe o que acontece no perodo de 1 hora.
5. QUESTIONRIO
Escreva a reao qumica que esta envolvida na formao da clula artificial de Traube. Qual a constituio qumica da membrana?
Que substncia existe dentro e fora da clula de Traube?
Qual a substncia que atravessa a membrana? Qual a evidncia de sua resposta?
Que aconteceria se a membrana de Traube fosse permevel aos ons cobre?
Durante a formao da clula de Traube, as membranas se rompem e se refazem continuamente at que o processo se detm. Qual a causa
da paralisao do processo?
Por que a clula artificial de Traube se presta para demonstrar o fenmeno osmose?
10
Por que as clulas vegetais no se rompem quando colocadas em gua destiladas, mesmo sabendo-se que a sua concentrao de soluto
(meio interno) maior que o lado de fora (meio externo)?
SUDAO OU GUTAO
1. INTRODUO
Alm da perda dgua em forma de vapor (transpirao), as plantas herbceas, em certas situaes, podem perder gua na forma
lquida (sudao ou gutao). Ao longo das margens das folhas dessas plantas existem poros de abertura fixa, associados com um tecido
parenquimatoso modificado (epitema) - os hidatdios. Quando sobre presso no xilema, a chamada presso radicular, a gua forada a
sair atravs dos hidatdios na forma de gotas (GUTAO).
2. OBJETIVOS
Estudar as condies necessrias para a ocorrncia do fenmeno da gutao ou sudao.
3. MATERIAL NECESSRIO
2 vasos (de plstico ou papel parafinado, pequenos) com 2 ou 3 plantinhas de milho em cada um
Soluo de sal de cozinha (NaCl) a 5%
Campnula ou cuba de vidro
4. PROCEDIMENTO
Obtenha dois vasos pequenos com 2 ou 3 plantinhas de milho de 5cm ou mais. Regue um dos vasos com soluo de sal de
cozinha a 5% e outro com gua. Cubra ambos com uma campnula ou cuba de vidro. Observe as margens das folhas durante duas ou trs
horas.
5. QUESTIONRIO
Por que no houve sudao no vaso irrigado com sal?
Qual a fora responsvel pela sudao, e como essa fora se origina na planta?
Por que h necessidade de cobrir as plantas com campnula?
Descreva a estrutura tpica de um hidatdio, fazendo um desenho e nomeando devidamente os tecidos existentes.
11
12
um Becker contendo gua destilada. Marque o nvel inicial na pipeta e observe o resultado depois de aproximadamente 1 hora. Faa um
desenho esquemtico do resultado encontrado e discuta-o.
5. QUESTIONRIO
O que osmose?
Qual a finalidade de se colocar o corante azul de metileno nessa experincia?
Por que ocorreu uma elevao da coluna lquida na pipeta?
Qual a diferena entre uma substncia que se move a favor de um gradiente de concentrao e uma substncia que se move contra
esse gradiente?
Em termos de concentrao de solutos e potencial hdrico, qual a diferena entre solues isotnicas, hipotnicas e hipertnicas?
O potencial hdrico de uma clula X igual a 0,4 MPa e de uma clula Y igual a 1,8 MPa. Se estas clulas forem colocadas em
contato to ntimo, observa-se um movimento de gua de uma para outra. Qual ser o sentido do movimento da gua? Justifique
sua resposta.
TRANSLOCAO
13
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Observe os quatro tratamentos continuamente durante uns 30 minutos. Explique detalhadamente as diferenas encontradas.
5. QUESTIONRIO
Dentro dos tratamentos aplicados, quais os ramos que recuperaram a turgescncia mais rapidamente?
Como voc explica as diferenas na velocidade de recuperao da turgescncia?
Como voc poder correlacionar esse fenmeno com a teoria coeso-tenso-transpiratria de Dixon?
Tendo em vista suas observaes, que recomendao voc faria a um floricultor quando ao perodo do dia mais indicado para cortar
ramos de flores? Que explicao voc daria para justificar sua recomendao?
Como voc trataria um ramo de flores para conserv-lo trgido por mais tempo?
Vasos com plantas de girassol ou outra planta sugerida pelo instrutor (6), com comprimento de aproximadamente 30 cm.
Soluo de azul de metileno a 1%.
Placas de Petri (6).
PROCEDIMENTO
Tome 6 (seis) vasos com plantinhas de girassol, com 30 cm de comprimento, trs dos quais tenha sido submetidos a dficit hdrico ( 2
tratamentos, sendo 1 com gua e outro sem gua com trs repeties). Coloque as plantas com dficit de gua em posio horizontal,
imergindo a poro mediana na soluo de azul de metileno a 1% contida na placa de Petri. Com uma lmina de barbear, corte a haste
(caule) da planta, mantendo, as seces cortadas submersas na soluo de azul de metileno a 1% por um minuto. Retire as partes
seccionadas e lave-as rapidamente em gua de torneira, enxugando-as com papel absorvente. Remova as folhas da parte terminal e
seccione ao nvel do solo a parte inferior. Tome a parte apical e faa cortes transversais de 0,5 cm de comprimento. Examine
cuidadosamente as superfcies seccionadas (de preferncia com o auxlio de uma lupa) e determine a presena do azul de metileno nos
feixes vasculares. Registre a distncia mxima, a partir do seccionamento original, em que o mais leve indcio do corante observado em
15
qualquer feixe, em direo ao pice (movimento acrpeto). Proceda da mesma forma para determinar a distncia do movimento do
corante na parte inferior (movimento baspeto).
Repita o processo para a planta com suprimento abundante de gua e em todas as repeties.
Apresente seus resultados na forma de desenho esquemtico uma seco transversal da haste (caule), indicando principalmente os
tecidos em que o corante observado e/ou como tabela e discuta-os.
QUESTIONRIO.
1.
2.
3.
4.
INTRODUO
A intensidade na troca de gases varia na diferentes formas de vida. Nos vegetais, o intercmbio de gs carbnico e de oxignio
diretamente proporcional ao vapor de gua. Logo, as plantas com altas taxas de absoro de CO 2 apresentam altas perdas por transpirao,
o que torna implcito que elevados consumos de gua aumentam a produtividade das culturas.
A fotossntese e a respirao envolvem processos qumicos complexos, sensveis e muitas variaes, diferentemente da
transpirao, que mais simples, controlada principalmente por variveis fsicas ligadas difuso dos gases. Pode-se considerar a
transpirao como fluxo de gua proveniente de um reservatrio de capacidade limitada, o solo, a outro de capacidade ilimitada, a
atmosfera, sendo a fora impulsora o gradiente de potencial de gua. Se o solo estiver mido, este gradiente pode cair a zero durante a
noite, mas com a chegada do dia e a gua evaporando das plantas ao ar, haver decrscimo nos potenciais e o conseqente aumento no
gradiente de potencial e no fluxo, desde as razes at o caule, as folhas e a atmosfera.
Apenas uma pequena frao, geralmente menos de 1% da gua absorvida, usa-se nas reaes metablicas e, portanto,
responsvel pelo aumento da biomassa. As perdas de gua por transpirao ocorrem em qualquer parte da planta exposta atmosfera
externa, ressaltando-se os estmatos, seguidos, em pequena escala, da cutcula das folhas. O conjunto solo-planta-atmosfera, em termos
prticos, uma srie de condutores por onde flui a gua com resistncias variveis.
Tm-se empregado diversos mtodos para a avaliao da transpirao, dentre eles tm o do POTMETRO DE GANONG,
onde uma bolha de ar introduzida no tubo capilar e o movimento dessa bolha, registrado em escala, usado como indicao da taxa de
transpirao. Se o dimetro do tubo capilar for conhecido, pode ser calculada a quantidade de gua absorvida em um dado tempo (Q =
vazo).
Os potmetros de um modo geral, so usados tanto para plantas inteiras como para ramos cortados. Quando no se tem o controle
da temperatura onde se realizar o experimento, existe a necessidade de um potmetro controle, sem plantas, que indicar possveis
mudanas no volume da gua devidas s variaes da temperatura ambiente (gradiente de temperatura). importante que a gua esteja
temperatura ambiente antes de se iniciar as medidas.
As velocidades de absoro de gua de um ramo cortado, no potmetro, no so necessariamente iguais s que estariam
ocorrendo se o ramo estivesse preso planta, porque as tenses no xilema e a resistncia do sistema radicular aos movimentos de gua so
eliminadas pelo corte. Pode entrar ar em alguns vasos do xilema durante o corte, tornando-os no funcionais, aumentando desse modo
16
resistncia global do caule. Por essa razo, desejvel, quando possvel, usar plantas intactas. Esses experimentos no podem ser
prolongados, devido dificuldade de se arejar as razes convenientemente.
Com base no princpio de conservao da massa, onde a massa (ou peso) de um fluido que atravessa uma seo qualquer da
corrente sempre a mesma, podemos inferir, tambm, que o volume de lquido por unidade de tempo, que atravessa todas as sees de um
fluxo de corrente, tem sempre o mesmo volume.
A1V1 = Q1
A2V2 = Q2
Quantidades Q1 = Q2
A1V1 = A2V2
Q = A . V (rea x volume)
Ao se iniciar o experimento, como o mesmo no se prolongar por um intervalo de tempo muito grande, podemos inferir que a
taxa de absoro igual a taxa de transpirao, e ainda:
Q = A. V
. D2
A=
4
. D2
Q=
x V
4
. D2 . V
Q=
4
. D2 . Vm
x 10-6 dm3/seg
Q=
4
. D2 . Vm
x 10-6 L / seg
Q=
4
. D2 . Vm
x L / seg
Q=
4
= 3,1416 ....
D = Dimetro do tubo capilar (mm)
Vm = velocidade mdia da bolha de ar (mm/seg)
Q = taxa de transpirao = taxa de absoro de gua
OBJETIVO
Determinar a taxa de transpirao do ramo de uma planta atravs do mtodo do potmetro de GANONG.
MATERIAL NECESSRIO
Potmetro de GANONG.
17
Tubo de vidro capilar graduado ( = 2 mm).
Escala milimtrica.
Becker de 1 L.
Rolhas de borracha.
Funil de separao.
Plantas sugeridas pelo instrutor.
Cronmetro.
PROCEDIMENTO
Coloque o ramo de uma planta no potmetro de GANONG, preencha o mesmo com gua de torneira e vede, hermeticamente, o
potmetro com as rolhas de borracha. Introduza uma pequena bolha de ar no tubo capilar, suspendendo-o temporariamente do Becker
com gua, de modo a posicion-la na origem (se necessrio, afaste a bolha para a extremidade direita do tubo capilar, abrindo,
vagarosamente a torneira do funil de separao). Anote o deslocamento (em milmetro) da bolha e o tempo (em segundos) gasto nesse
deslocamento. Repita o experimento, quantas vezes for necessrio, deslocando a bolha para a origem e anote novamente a distncia
percorrida (em mm) e o tempo gasto (em segundos), por cada repetio.
Calcule, a velocidade mdia ( Vm ), sabendo-se que a velocidade o espao dividido pelo tempo e aps, a transpirao do ramo
utilizado no experimento.
V1 + V2 + ... + Vn
Vm =
n
18
Verificar a existncia da presso (positiva) na seiva do floema.
3. MATERIAL NECESSRIO
lcool etlico comercial
Lmina de barbear
Tubo de ensaio grande e folha de abbora com pecolo
4.
PROCEDIMENTO
Tome um tubo de ensaio contendo lcool comum at cerca da metade da altura. Corte a base do pecolo de uma folha de abbora
usando uma lmina de barbear, e introduza rapidamente o pecolo no tubo com lcool. Observe, quando a exsudao parar, remova o
pecolo do lcool, corte uma pequena fatia de sua base e introduza novamente no lcool. A observao mais fcil colocando-se o tubo
contra a luz.
5. QUESTIONRIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
19
de U. Encha o outro saco de dilise com gua de torneira e amarre sua extremidade no outro terminal do tubo em U. Faa a imerso
do saco com sacarose em um copo com gua contendo a soluo de bicromato de potssio. O saco, contendo gua, deve estar imerso em
um copo com gua. Disponha os copos de tal maneira que o que receber o saco com gua fique num nvel superior a 10-15cm do copo
com soluo de sacarose. Observe o sistema em operao durante duas horas.
5. QUESTIONRIO
1.
Como as trs partes desse modelo podem ser correlacionados com as partes de uma planta viva?
2.
Qual o papel do bicromato de potssio colocado em gua no copo o com saco de sacarose?
3.
Na hiptese do fluxo em massa de Mnch, qual a fora matriz do movimento? Qual razo existe para que seja denominada
Fluxo em massa.
4.
Qual a evidncia de que no modelo artificial de Mnch, a translocao de solutos orgnicos se d sob presso e no sob tenso?
5.
No modelo artificial de Mnch o transporte de soluo de sacarose de uma clula para a outra paralisa aps algum tempo. Como
se explica que, numa planta viva, o fluxo se mantenha sustentado, sempre da fonte (folha) para o dreno (razes, por exemplo)?
20
METABOLISMO
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Folhas de plantas sugeridas pelo instrutor (3)
Tesoura
Areia lavada
Almofariz
Acetona
Algodo
Funil de vidro (1)
Tubo de ensaio (1)
4. PROCEDIMENTO
Tome 3 folhas de plantas sugeridas pelo Instrutor. Pique as folhas com uma tesoura e junte os pedaos com um pouco de areia
num almofariz. Coloque um pouco de acetona e homogenize. Filtre o homogenado em algodo com funil de vidro e receba o filtrado num
tubo de ensaio.
Corte uma tira de papel de filtro de aproximadamente 20 por 4cm, tomando o cuidado de manuse-lo o mnimo possvel (a
gordura da mo atrapalha). Com uma pipeta Pasteur, faa umas 5 a 10 camadas de extrato dos pigmentos foliares sobre a origem do
cromatograma. As camadas de pigmentos devero ser estreitas e concentradas, devendo-se, portanto ventilar levemente o papel, aps
espalhar cada camada. Tome 5 a 10ml de tetracloreto de carbono (solvente) no fundo de cuba. Fixe a tira de papel de filtro numa placa de
petri e introduza-o no interior da cuba at que a sua extremidade encoste, no solvente, mas sem mergulhar a origem. Aps 1 a 2 horas
identifique os pigmentos, tendo em vista que a clorofila a verde-azulada, a clorofila b verde-amarelada, o caroteno laranja e a xantofila
amarela.
5. QUESTIONRIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Homogeinizador (liquidificador)
22
Homogenize 10 a 20g de folhas coloridas em 50ml ou 100ml de acetona a 80%. Filtre o homogenado atravs de oito camadas
de musselina e filtrando novamente atravs de duas camadas de papel de filtro.
Tome 20ml do filtrado num funil separador e adicione, escorrendo pelas paredes, igual quantidade de ter etlico e igual
quantidade de gua destilada. Proceda a movimentos leves de rotao no funil separador. Observe a separao das camadas.
Num tubo de ensaio tome por estimativa 5ml da camada inferior e dilua com igual volume de gua destilada. Proceda da
mesma forma com a camada superior. Observe as diferenas.
5. QUESTIONRIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
(CH2O)n + H2O + O2
cloroplasto
Observa-se que o processo fotossinttico compreende (3) trs passos principais, a saber:
Processo fotoqumico, que resulta na converso da energia luminosa em energia qumica pela formao NADPH 2 e ATP. O processo
envolve pigmentos para a absoro da luz (reao biofsica), cofatores e enzimas diversas (reaes qumicas e bioqumicas); os
principais pigmentos responsveis, pela absoro de luz so as clorofilas e posteriormente os carotenides.
Processo fsico de transporte, por difuso do CO2 do ar externo at o centro de reao nos cloroplastdeos.
Processo bioqumico: relacionados com a reduo do CO2 e consta de vrias reaes enzimticas.
Os fatores externos que afetam diretamente a fotossntese, como a luz, concentrao de CO 2 e temperatura tem efeito seletivo
sobre cada um desses processos parciais. O processo fotoqumico afetado apenas por luz. O processo difusivo funo da diferena de
23
concentrao de CO2 no ar externo (ou turbulento) e no centro de reao dos cloroplastdeos, sendo levemente afetado pela temperatura. J
os processos bioqumicos so afetados principalmente pela temperatura.
O estado hdrico da folha (medido pelo seu potencial hdrico) tem um efeito indireto no processo de transporte de CO 2 atravs
da abertura dos estmatos, que ope uma maior ou menor resistncia ao fluxo de gases e de vapor de gua, do interior da folha para o
meio externo. Os estmatos so, portanto reguladores tanto da fotossntese quanto da transpirao. Um mtodo simples para determinar o
consumo de CO2 em plantas terrestres utiliza-se uma soluo de vermelho de cresol, que indicadora do pH. Essa soluo tem cor
prpura e serve para indicar o teor de CO 2 no ar. Quando o CO2 aumenta, a soluo torna-se mais cida e a sua cor passa para amarelo
(fotossntese menor que a respirao); quando o CO 2 diminui, torna-se mais alcalina e sua cor passa para prpura mais intensa
(fotossntese maior que a respirao).
2. OBJETIVO
Determinar a fotossntese de plantas terrestres pelo consumo de CO2.
3. MATERIAL UTILIZADO
Tubo de ensaio grande( 4 )
Luminria ( 1 )
Soluo indicadora de vermelho de cresol (NaHCO3 84mg/L KCl 7,46g/L: vermelho cresol 10mg/L); pH ajustado 8,1
Suporte para tubos de ensaio ( 1 )
Folhas de plantas terrestres sugeridas pelo Instrutor
Rolhas de borracha com fixador de folhas.
4. PROCEDIMENTO
Tome 4 tubos de ensaio, munidos de rolha e coloque em cada um 3mL do reagente de cresol. Mantenha os tubos abertos
durante duas horas para que haja equilbrio entre o teor de CO 2 do meio e da soluo. Em dois tubos coloque uma ou mais folhas de
plantas suspensas com um fixador, tomando cuidado para que no entre em contato com a soluo. Feche os 4 tubos, enrole
completamente, um tubo com folha e outro sem folha de papel alumnio (tratamento escuro) e os outros dois devem ficar expostos luz.
Observe o que acontece com a soluo aps duas horas.
5. QUESTIONRIO
A soluo indicadora de vermelho de cresol bastante vermelha em meio alcalino, e amarela em meio cido. Por que as folhas
imprimem colorao amarelada a este tipo de soluo quando mantidos no escuro?
Escreva a equao geral da fotossntese?
Faa um desenho esquemtico dessa experincia, indicando cada componente (material utilizado).
Por que plantas de sol, quando colocadas a sombra, geralmente morrem?
Como se prepara uma soluo indicadora de vermelho de cresol?
Por que a colorao indicadora de vermelho de cresol torna-se avermelhada quando a folha for iluminada e torna-se amarela quando a
folha mantida no escuro? Justifique sua resposta.
Prof. Dr. Roberto Cezar Lobo da Costa
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OBJETIVOS
Demonstrar a fotossntese de plantas aquticas pelo desprendimento de O2.
Saber construir um grfico a partir dos resultados obtidos.
MATERIAL NECESSRIO
Eldea sp. ou cabomba ou outra planta aqutica sugerida pelo Instrutor, recentemente colhida.
Becker de 600 mL, tubo de vidro de forma alta.
Lmina de barbear.
Tubo de ensaio grande.
Bicarbonato de sdio 2% (NaHCO3)
Funil de vidro.
Refletor com lmpada de 200W.
PROCEDIMENTO
Tome um Becker ou tubo de vidro e encha-o com gua da torneira e soluo de Bicarbonato de sdio 2%, na proporo de 1:1.
Tome alguns ramos recm-cortados de Eldea sp ou outra planta sugerida pelo Instrutor, coloque-os sob um funil de vidro invertido e
mergulhe o conjunto no Becker ou tubo de vidro. A haste do funil deve ficar totalmente imersa. Encha com gua um tubo de ensaio, tape
sua abertura com o dedo, inverta-o sobre a haste do funil, retirando o dedo lentamente depois de mergulhado, de modo a ficar totalmente
cheio de gua. Coloque o conjunto ao redor da lmpada e observe o que acontece com a planta e a gua do tubo.
Determine o nmero de bolhas produzidas por minuto, durante trs minutos consecutivos, com a planta situada a 90cm da fonte
de luz, 30cm e 10cm. Cada vez que a lmpada for mudada de posio, esperar cinco minutos (5) antes de iniciar nova contagem. Faa
um grfico e uma tabela mostrando os resultados de seu experimento, colocando na ordenada o nmero mdio de bolhas por minuto e na
abscissa a distncia em cm.
QUESTIONRIO
O que reao de Hill? Qual o oxidante natural de Hill?
Qual o papel da luz e dos cloroplastos na fotossntese?
Que gs forma as bolhas que se desprendem de um ramo de Eldea iluminado? Que evidncias voc obteve como suporte de sua
afirmao?
Por que o aumento de intensidade luminosa faz tambm aumentar a fotossntese em Eldea.
Por quem, ao medir-se a taxa de fotossntese em resposta variao na intensidade de luz, deve-se sempre colocar o tubo contendo
Eldea em um copo com gua?
Faa um desenho esquemtico dessa experincia, indicando cada componente (material utilizado).
Escreva a equao qumica da fotlise da gua.
Prof. Dr. Roberto Cezar Lobo da Costa
25
diretamente da fotossntese, a clorofila a, enquanto a clorofila b e os carotenides (caroteno e xantofila) participam indiretamente,
transferindo energia luminosa clorofila a.
2. OBJETIVOS
a)
b)
Determinar o espectro de absoro dos pigmentos dos cloroplastos de folhas de plantas de cupuauzeiro cultivado a
pleno sol e na sombra.
Determinar o teor de clorofilas a, b, (a + b) e razo Clorofila a / Clrorofila b de folhas de plantas de cupuauzeiro
cultivado a pleno sol e na sombra.
3. MATERIAL NECESSRIO
Acetona P.A.
Espectrofotmetro (visvel)
Almofariz com pistilo
Bomba de vcuo
Papel alumnio
Isopor
Gelo
Balana semi-analtica
Balo volumtrico de 25 mL
Plantas de cupuauzeiro cultivadas a pleno sol e na sombra
4. PROCEDIMENTO
Coletar algumas folhas (3 amostragens de cada planta = repeties), enrolar em papel alumnio, identificar e colocar sobre o gelo,
dentro de um isopor e levar ao laboratrio de Fisiologia Vegetal. A extrao e o teor dos pigmentos sero feitos pelo mtodo descrito por
ARNON, 1949. Pesar 100 mg de cada amostra, colocar em um almofariz, contendo acetona 80%, macerar e posteriormente, filtrar a
vcuo (repetir essa filtrao at que o precipitado fique bege) (TODA A EXTRAO DEVE SER FEITA SOBRE O GELO E NO
ESCURO). Transfira o sobrenadante para um balo volumtrico de 25 mL e aferir o volume. Utilizando esse extrato; denominado extrato
cetnico de pigmentos foliares; mea a absorbncia nos comprimentos de onda na faixa de 390 a 700 nm, leituras a cada 20 nm de
intervalo, com o auxlio de um espectrofotmetro. Utilize acetona 80% para ajustar o zero de absorbncia. Nos pontos de maior absoro,
faa leitura a cada 5 nm. Construa um grfico com os seus dados, colocando nas abscissas os comprimentos de onda () e nas ordenadas,
as respectivas absorbncias (A). Posteriormente, com uma outra alquota do extrato cetnico, ler em absorbncia a 644 nm e 662 nm e o
branco para zerar o aparelho acetona 80%. As concentraes de clorofila a, clorofila b clorofilas (a + b) e razo Cl a/ Cl b sero
determinadas conforme as relaes a seguir (ARNON 1949) e expressas em mg de Clorofila / g MF:
Clorofila a =(9,78 x A 662 - 0,99 x A 644) x 0,25
Clorofila b =(21,4 x A 644 - 4,65 x A 662) x 0,25
Clorofilas (a + b) = (5,13 x A 662 + 20,41 x A 644) x 0,25
5. QUESTIONRIO
1.
2.
3.
4.
5.
Quais so as faixas de comprimento de onda que os extratos de pigmentos dos cloroplastdeos mais absorvem?
Por que a absorbncia na regio do verde menor?
Os carotenides apresentam um espectro de absoro semelhante ao das clorofilas?
Quais so os comprimentos de onda mais absorvidos pelos carotenides (carotenos e xantofilas)?
Se quisermos quantificar as clorofilas a e b de um extrato cetnico de pigmentos por meio de um espectrofotmetro, pode-se
utilizar comprimentos de onda na faixa da luz azul? E vermelho? Justifique sua resposta.
6. Qual o princpio bsico do funcionamento de um espectrofotmetro?
7. Transcreva a estrutura molecular dos pigmentos dos cloroplastos.
8. Os carotenides podem ser considerados hidrocarbonetos? Por que?
9. Em que parte dos cloroplastos se localizam os pigmentos fotossintticos? Mostre atravs de uma figura esquemtica essa
localizao.
10. Faa um desenho esquemtico de um cloroplastdeo (cloroplasto), mostrando seus principais constituintes.
26
INTRODUO
A taxa fotossinttica de folhas isoladas pode variar de acordo com a intensidade luminosa, se expostas ao ar atmosfrico normal (320
ppm de CO2) com exceo das Crassulceas, que fixam o CO 2 mesmo em total obscuridade. A intensidade luminosa na qual a fotossntese
igual a respirao (troca de CO2 entre a folha e o meio ambiente zero) chamado de ponto de compensao luminoso. Este ponto
varia com as espcies, com a intensidade luminosa durante o crescimento, com a temperatura e com a concentrao de CO 2 . Somente
acima deste ponto pode ocorrer aumento no peso da matria seca das plantas.
Um mtodo simples para determinar o ponto de compensao luminoso utiliza-se uma soluo de vermelho de cresol, que
indicadora de pH. Essa soluo tem cor prpura e serve para indicar o teor de CO 2 no ar. Quando o CO2 aumenta, a soluo torna-se mais
cida e sua cor passa para amarelo (fotossntese menor do que a respirao); quando o CO 2 diminui, torna-se mais alcalina, e a sua cor
passa a prpura mais intensa (fotossntese maior do que a respirao). Se no ocorrer variao em sua cor, significa que o CO 2 do ar
permaneceu constante (fotossntese igual respirao).
2.
OBJETIVO
Determinar o ponto de compensao luminoso e verificar o efeito do dficit hdrico sobre a fotossntese de folhas isoladas.
3.
MATERIAL NECESSRIO
PROCEDIMENTO
Coloque 2 mL da soluo indicadora de vermelho de cresol em todos os tubos de ensaio, fechando-os bem com a tampa de cortia ou
borracha. Deixe o primeiro tubo como testemunha. Fixe um segmento de folha trgida, ou a prpria folha (dependendo do tamanho) em
cada um dos tubos seguintes e coloque-os distncias de 50, 100, 150, 200 e 250 cm da fonte luminosa. Proceda do mesmo modo com um
outro tubo, mas enrole-o completamente em papel alumnio (tratamento escuro), colocando-o a 100 cm da fonte. Tome num outro tubo um
segmento de folha murcha e coloque-o frente luz forte. Tome um tubo de ensaio que contenha apenas a soluo indicadora, e sopre-o
seguidamente observando a mudana de colorao.
Aps 2 horas ou mais um pouco, observe a colorao da soluo indicadora nos diversos tratamentos e determine o ponto de
compensao luminoso da(s) espcie(s) em estudo.
5.
QUESTIONRIO
27
B 1.500 lux
Qual das duas teria condies de germinar e estabelecer-se sob a floresta? Justifique sua resposta.
Determinou-se o ponto de compensao de luz de uma folha a 20C; posteriormente o ponto de compensao de luz da mesma folha
foi determinado a 40C. Haveria alguma alterao nos valores medidos? Justifique sua resposta.
Espcie
Grama
50cm
100cm
150cm
200cm
250cm
Murcha
Escuro
Capim Colonio
Samambaia
Cacau
Caf
Acssia
Obs: verificar com o auxlio de um luxmetro quando vale em lux cada distncia.
Com o uso de sais de tetrazlio, que so aceptores de hidrognio, possvel verificar a presena in situ da atividade de
deshidrogenases, pois as formazanas precipitam-se onde ocorre essa atividade. A presena de deshidrogenases ativas considerada sinal
de vitalidade do tecido vegetal. As enzimas deshidrogenases catalisam reaes bioqumicas do tipo:
B H2
+
A+
(substrato reduzido) (aceptor oxidado)
B+
+
(produto oxidado)
AH2
(aceptor reduzido)
28
Durante a respirao, pode haver formao de perxido de hidrognio (H 2O2), que txico para as clulas. Sabe-se que esta
substncia um potente inibidor de muitas enzimas, devendo existirportanto um mecanismo enzimtico nos tecidos que promova sua
destruio. H evidncias de que as clulas geralmente; contm enzimas chamadas catalases, que utilizam H2O2 como substrato:
2 H2O2
CATALASE
2 H2O
O2
Outras funes de catalases nas plantas superiores ainda no esto bem definidas ou determinadas.
2. OBJETIVOS
a) Verificar a presena e localizao da atividade de deshidrogenases em sementes de milho.
b) Determinar a presena e observar a atividade de catalases em tubrculos de batatinha.
3. MATERIAL NECESSRIO
Sementes de milho, embebidas durante 12-24 horas, em gua corrente de torneira.
Tubos de ensaio (2) ou pequenos frascos de boca larga.
Soluo a 1% de cloreto de 2,3,5-trifenil-tetrazlio (TTC).
Lmina de barbear.
gua oxigenada a 20 volumes.
Placa de Petri (1).
Tubrculo de batatinha.
4. PROCEDIMENTO
Tome 10 sementes de milho bem+ebidas de vspera e ponha em gua fervente (100C), deixando a por 5 minutos. Com uma
lmina de barbear, corte cada semente longitudinalmente, num plano perpendicular s faces chatas, expondo o eixo maior do embrio.
Faa o mesmo com outro lote de sementes embebidas, mas que no sofreram fervura. Conserve os lotes separados. Emirja as sementes
cortadas em soluo de TTC. Utilize soluo bastante para cobrir as sementes. Observe as mudanas de cor que ocorrem com tempo. Faa
um esquema da distribuio da colorao vermelha nas sementes vivas (tome casos tpicos se por ventura houver diferenas entre as
sementes).
Usando uma placa de Petri, cubra uma fatia fina de tubrculo de batatinha com uma soluo diluda (30:1) de perxido de
hidrognio 20 V. A evoluo de bolhas de oxignio denota a presena da catalase. Repita a operao com uma fatia de batatinha que tenha
sido anteriormente fervida por 5 minutos. Interprete os resultados. Faa um desenho esquemtico dos seus resultados.
5. QUESTIONRIO
O teste do TTC especfico para determinar a atividade de que tipo de enzima? Por que?
Por que o teste do TTC pode ser usado para indicar a vitalidade de sementes?
Quando sementes de milho divididas ao meio so colocadas em soluo de TTC (incolor), apareceu colorao vermelha em certas
regies das sementes. Que tipo de reao essa? Em que regies da semente apareceu a colorao?
Zonas meristemticas de razes vivas apresentam reao positiva ao teste do TTC. Partes suberosas de razes velhas do resultado
negativo ao mesmo tipo de teste. Explique esses resultados.
D o nome de pelo menos trs (3) deshidrogenases que voc conhece e por que o teste do TTC se presta muito bem para determinar a
atividade dessas enzimas?
Escreva a equao geral para a ao de uma deshidrogenase.
D a reao da catalase, indicando o substrato e o produto dessa reao.
Cobrindo-se fatias de batatinha com gua oxigenada, observa-se maior evoluo de bolhas de oxignio nos tecidos da periferia do que
nos tecidos internos. Por que?
Que diferenas existem entre catalase e deshidrogenase quanto s reaes que catalisam?
Explique a principal diferena entre enzimas pr-existentes e sintetizadas de novo.
Prof. Dr. Roberto Cezar Lobo da Costa
29
INTRODUO
O nitrognio inorgnico normalmente absorvido pelas plantas na forma de nitrato (NO 3-), embora sob certas circunstncias,
ons amnio(NH4+) possam ser assimilados. A seqncia global da absoro do nitrognio inorgnico no material orgnico pode ser
resumida nas seguintes seqncias de reaes:
a) Reduo do nitrato, via nitrito amnio
b) Assimilao de amnia no glutamato
c) Transaminao do glutamato para aminocidos
d) Sntese de outros aminocidos.
Alm disto, um nmero de bactrias e microorganismos simbiticos so capazes de reduzir o N 2 atmosfrico a amnio. No caso
das leguminosas, e outras plantas superiores o microorganismo fixador de nitrognio encontrado nos ndulos das razes.
Para a maioria das plantas no seu meio ambiente natural, o nitrato a fonte usual de nitrognio. O nitrato tem que ser
transformado em amnio antes que possa se combinar com os compostos de carbono, de modo a formar os vrios componentes
nitrogenados da clula. O processo conhecido como reduo assimilatria do nitrato para diferencia-lo da reduo do nitrato (tipo
respiratrio) feito por vrios tipos de bactrias, as quais, sob micro-aerofilia ou condio anaerbias, usa nitrato como um aceptor de
eltrons no lugar do oxignio molecular. Pode-se estimar que as plantas assimilam 1010 toneladas de nitrato por ano.
A reduo assimilatria do nitrato ocorre nas plantas superiores, algas e vrias bactrias, fungos e leveduras. O processo pode
ser resumido do seguinte modo:
(+5)
(+3)
(-3)
NO3
2eNO2
6e
NH4+
RN
RNi
Isto envolve a participao seqencial de duas metaloprotinas redutase do nitrato e redutase do nitrito. A fonte fisiolgica
de eltrons a piridina nucleotdeo reduzido ou ferredoxina reduzida, isto vria de acordo com o tipo de enzima. O ATP no necessrio
para a redutase do nitrito ou nitrato. Ambas as reaes ocorrem com decrscimo de energia livre.
Em eucariticos, a redutase do nitrato um complexo enzimtico (PM ~ 200 300.000 D), possuindo flavina (FAD), grupo
heme (citocromo b557) e molibdnio. Eltrons provenientes do NAD(P)H (da fotossntese ou oxidao dos carboidratos) so transferidos
para o nitrato atravs da cadeia enzimtica de transporte de eltrons:
NAD(P)H
NO3
[FAD
cit. b
Mo]
NAD(P)+
NO2 + H2O
Em algas e tecidos fotossintticos, a redutase do nitrato parece estar localizada no citoplasma ou fracamente ligada membrana
externa do cloroplasto.
A enzima apresenta uma alta taxa de regenerao protica e esta presente em altos nveis quando as clulas so alimentadas
com nitrato, porm esta enzima encontra-se reprimida quando a mesma encontra-se em meio contendo ons amnia.
A atividade da redutase do nitrato estimada medindo a quantidade de nitrito produzido a partir do nitrato, e a redutase do
nitrito pelo desaparecimento do nitrito na mistura de reao. O metro in vivo utilizado para a determinao do nitrito (SNELL &
SNELL, 1949), baseado na formao de um sal de diaznio durante a reao em meio cido com a sulfanilamida. Este complexo reage
com o N-(1-Naftil) etilenodiamina (NNEDA), formando um complexo colorido, o qual vermelho, e possui mximo de absoro em
540nm.
OBJETIVOS
a)
b)
Tampo fosfato (KH2PO4) 0,1 M pH 7,5 contendo isopropanol 1% (V/V), KNO3 (50mM) e cloranfenicol (15mg/L).
Sufanilamida 1% em HCl 2,4 N.
NNEDA 0,02%.
Tubos de ensaio.
Tubos de ensaio para bombas de vcuo, com rolha de borracha.
Bomba de vcuo.
Banho-maria.
Termmetro (0 1000C).
30
Espectrofotmetro (visvel).
Estantes para tubos de ensaio.
Agulhas e mangueiras de borracha.
Papel alumnio.
Agitador de tubos
Espcie sugerida pelo Instrutor. (6)
Vasos plsticos de 1 Kg (6)
Terra preta devidamente adubada.
PROCEDIMENTO
Plante, em casa-de-vegetao, seis (6) unidades da espcie sugerida pelo Instrutor. Aps um ms de crescimento e desenvolvimento
das plantas, aplique aproximadamente quatro (4) dias consecutivos de estresse de gua na metade dos vasos plantados trs (3) e em
seguida, leve-as (trs controles e trs estressadas) ao laboratrio de Fisiologia Vegetal para anlise. Pesar aproximadamente 200 mg de
discos foliares(=1cm2) recm-colhidos da espcie sugerida pelo instrutor com e sem estresse hdrico. Transferir para tubos de ensaio
para vcuo contendo 5,0mL do tampo fosfato (meio de reao) e em seguida fazer vcuo por 2 minutos aps, colocar os tubos de ensaio
um banho-maria 300C por 30 minutos e ao abrigo da luz (escuro). Em tubo de ensaio comum, adicionar 1 mL de tampo + 2 mL do
extrato de reao + 1 mL de sulfanilamida 1% + 1 mL de NNEDA 0,02%. Deixar em repouso por 15 minutos. Fazer a leitura no
espectrofotmetro 540nm contra o branco (3 mL de tampo fosfato + 1 mL de sulfanilamida + 1 mL de NNEDA). Comparar
absorbncia com o curto padro de NO 2 (nitrito) e expressar a atividade da enzima em moles de NO2. h1 gMF-1 . Apresentar os
resultados em um grfico e discute-o.
OBS. Aps a realizao da curva-padro do nitrito chega-se a uma formulao que transforma absorbncia em concentrao conforme
descrita abaixo:
W = 6 x L (moles NO2- / g MF / h) (quando tomamos 1 mL de extrato enzimtico); L= leitura do espectrof.
W = 3 x L (moles NO2- / g MF / h) (quando tomamos 2 mL de extrato enzimtico); L= leitura do espectrof.
QUESTIONRIO
Mostre a reao qumica de reduo do nitrato a amnia e indique as enzimas envolvidas nesses passos metablicos.
Mostre a estrutura qumica da redutase do nitrato, indicando a cadeia transportadora de eltrons.
Qual o efeito do estresse hdrico na atividade da redutase do nitrato? Justifique sua resposta.
De que maneira estimada a atividade da redutase do nitrato em plantas pelo mtodo in vivo e mostre os principais passos
metablicos que ocorrem at a formao do complexo colorido o qual vermelho, e possui mximo de absoro em 540nm?
Explique qual a finalidade de se cobrir os tubos de ensaio com pepel alumnio nessa determinao?Na formulao do tampo fosfato
voc coloca um lcool (isopropanol).
Qual a finalidade de se usar este lcool? Justifique sua resposta.
Em que parte da clula vegetal ocorre reduo do nitrato a nitrito e a desse composto a amnia?
Em quais regies da planta ocorre a atividade de redutase do nitrato? Mostre um esquema de uma planta indicando no mesmo cada
um dos passos de reduo de nitrato amnia.
Prof. Dr. Roberto Cezar Lobo da Costa
31
32
CRESCIMENTO
E
DESENVOLVIMENTO
INTRODUO
Nos caules das plantas, a maior taxa de crescimento acorre nos tecidos logo abaixo do meristema apical. Estudos feitos com
caules de plntulas (ervilha) mostraram que naquela regio h uma forte correlao entre a taxa de crescimento e as quantidades de
auxinas difusveis. Foi tambm encontrado que a auxina extrada do coleptilo de aveia estava intimamente relacionada com a taxa de
crescimento deste rgo. Estas observaes indicam que a concentrao de auxina no tecido pode regular sua taxa de crescimento.
A distribuio desigual de auxinas no caule um dos fatores que podem ocasionar um crescimento diferencial (curvatura) de
plantas.
2. OBJETIVO
Observar os efeitos de auxinas no crescimento diferencial de caule de plantas.
3. MATERIAL NECESSRIO
33
Aplique pasta de lanolina contendo auxina (AIA) lateralmente no caule de plantas de feijo, no entren situado logo abaixo do
trifololo mais novo. Trate a outra planta de maneira idntica primeira, mas utilize apenas lanolina pura.
Observe os resultados aps uma semana.
5. QUESTIONRIO
1.
2.
3.
5. QUESTIONRIO
1.
Por que, no correr desse exerccio, utilizaram-se solues de 2,4-D em meio tamponado (tampo fosfato)?
34
2.
3.
4.
5.
6.
Que conclui voc sobre o efeito da auxina sinttica 2,4-D no alongamento das razes?
Como voc poderia explicar, pelo menos uma parte, que altas concentraes de 2,4-D provocam um engrossamento das razes?
Pelas suas observaes as razes e caules apresentaram a mesma resposta as aplicaes exgenas de 2,4-D? Como voc explica
as diferenas encontradas?
Altas concentraes de 2,4-D podem ser consideradas inibidoras da germinao. Por que?
Por que a aplicao de 2,4-D em solos, onde haja sementes em germinao, geralmente acarreta a morte de todas as plntulas,
sejam mono ou dicotilednea?
Prof. Dr. Roberto Cezar Lobo da Costa
Tome copos contendo solues de AIB nas concentraes de 100, 50, 20, 10 e 0mg/L e, em cada copo mergulhe 3cm da base de
4 estacas com folhas, de coleus ou feijo. Depois de 24horas substitua as solues do regulador por gua pura. Deixe as estacas luz
difusa do laboratrio. Aps duas semanas, conte o nmero de primrdios radiculares por tratamento e verifique comparativamente o
comprimento das razes. Se o intervalo de duas semanas for insuficiente, aguarde mais tempo.
5. QUETIONRIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Em que tratamento ocorreu maior enraizamento das estacas? Houve diferenas entre tratamentos quando ao tamanho das razes?
Qual a origem anatmica das razes adventcias em estacas?
Por que estacas de determinadas espcies s enrazam se estiverem enfolhadas, enquanto estacas de outras espcies enrazam
mesmo desfolhadas?
Explique qual seriam os possveis modos de ao de auxina sobre o enraizamento de estacas.
Por que no se empregam solues de auxina de concentrao elevada no enraizamento de estacas?
Poderia um outro tipo de hormnio, que no auxina, provocar o enraizamento de estacas?
Prof. Dr. Roberto Cezar Lobo da Costa
35
DOMINNCIA APICAL
1.
INTRODUO
Ao fenmeno pelo qual, na grande maioria das espcies vegetais, a gema apical inibe o desenvolvimento das gemas laterais,
denomina-se DOMINNCIA APICAL. A remoo da gema apical provoca o arrebentamento das gemas laterais, o que prova este tipo
de inibio correlativa. Adicionando-se auxina na superfcie decapitada de uma planta cuja gema apical foi removida, a dominncia
mantida, o que leva a concluir que as auxinas esto envolvidas no controle desse fenmeno. Parece que as folhas novas da gema apical
produzem grande quantidade de auxinas que seriam o sinal correlativo da dominncia apical.
Desde de que, uma baixa relao auxina / citocinina na gema lateral promove o seu desenvolvimento, pode-se supor que o
suprimento de citocininas para as gemas laterais seja regulado pelas auxinas presentes na gema apical, atravs de um mecanismo de
transporte dirigido por hormnios (altas concentraes de auxinas na gema apicais orientariam o transporte de citocininas ou de seus
precursores para si ao invs de para as gemas laterais). Outros reguladores de crescimento como as giberelinas e o cido abscsico
parecem estar envolvidos no fenmeno da dominncia apical.
2. OBJETIVOS
Observar o efeito da remoo da gema apical sobre o crescimento das gemas laterais, bem como o efeito da aplicao exgena do
cido 3-indoil-actico (AIA) no controle da dominncia apical.
2. MATERIAL NECESSRIO
Plantas de feijo ou caupi apresentando o primeiro par de folhas trifoliadas.
Lanolina ou vaselina pura.
Pasta de lanolina ou vaselina contendo 0,1 % de AIA.
Cotonetes.
3. PROCEDIMENTO
Tome trs vasos plantados com trs feijoeiros ou plantas de caupi que apresentam a primeira folha trifoliada completamente
expandida. Um vaso servir de controle, enquanto que os outros dois sero decapitados na base da primeira folha. Aplique com o auxlio
de um cotonete, lanolina ou vaselina pura na superfcie decapitada das plantas de um dos vasos. No outro vaso cujas plantas foram
decapitadas aplique com o auxlio de um cotonete, a pasta de lanolina ou vaselina contendo o AIA.
Ao final de uma a duas semanas, mea (em mm) o comprimento das gemas axilares surgidas. Mea tambm, em mm, o dimetro
dos caules ao nvel da superfcie seccionada nas plantas decapitadas e intactas. Faa uma TABELA com os resultados encontrados e
discute-os.
5. QUESTIONRIO
Como se explica o desenvolvimento das gemas laterais aps a retirada da gema apical?
De que modo estaria agindo a auxina aplicada na parte decapitada do caule para inibir o crescimento das gemas laterais?
Como se explicam s variaes no dimetro do caule ao nvel das superfcies seccionadas?
Cite tratamentos que poderiam induzir o crescimento das gemas laterais.
Somente as auxinas esto envolvidas na dominncia apical, ou outros fitohormnios podem estar envolvidos nesse fenmeno
fisiolgico?
Pelo fato de que o AIA pode substituir a gema terminal na manuteno da dominncia apical, voc poderia dizer que esse hormnio
inibe o crescimento das gemas laterais? Que outra explicao mais plausvel voc poderia dar?
Um tcnico agrcola obteve duas amostras, sendo uma de citocinina e outra de cido 3 ildolil-actico, mas esqueceu-se de rotul-las,
no sabendo, portanto, identific-las. Como voc poderia ajudar o tcnico na identificao, utilizando-se do fenmeno fisiolgico
da dominncia apical como teste?
Prof. Dr. Roberto Cezar Lobo da Costa
INTRODUO
O 2.4.-D (cido 2,4 diclorofenoxiactico) possui atividade auxnica considervel, em alguns casos superando o efeito do cido
indol-actico (AIA), provavelmente por no ser to facilmente inativado, na planta, como a auxina natural. Em muitas espcies, o 2.4.-D
estimula a produo de etileno, e os efeitos que aparecem na planta so assim devidos a esse hormnio gasoso. Parece que o 2.4.-D
promove a ativao de genes no funcionais, alterando os tipos de RNAs sintetizados, aumentando a atividade das polimerases de RNA e
DNA, e afetando a atividade de vrias enzimas respiratrias. O 2.4.-D um potente herbicida, injuriando ou matando muitas
36
DICOTILEDNEAS; seus efeitos sobre o crescimento das MONOCOTILEDNEAS no so acentuados. Por isso empregado como
herbicida seletivo de plantas de folhas largas em campos de cereais, nas formulaes de amina e ster. prejudicial a peixes e pode levar
poluio (ilegal) de cursos de gua.
2.
OBJETIVO
MATERIAL NECESSRIO
PROCEDIMENTO
Tome 6 vasos contendo, em cada um, uma planta de milho e outra de feijo. Com o atomizador, pulverize as plantas de 3 vasos
com a soluo de 2.4.-D, tomando o cuidado para no contaminar o ambiente de trabalho. Pulverize os outros 3 vasos apenas com a
soluo do agente espalhante. Deixe secar e transfira os vasos para local convenientemente iluminado. Observe as plantas durante UMA
SEMANA, registre as diferenas encontradas.
5.
QUESTIONRIO.
EFEITO DE QUALIDADE
FOTOBLSTICAS
DA
LUZ
NA
GERMINAO
DE
SEMENTES
1. INTRODUO
Muitas sementes, quando recm colhidas, esto dormentes e germinam apenas em presena da luz. A medida que envelhecem, o
requerimento da luz para germinao vai desaparecendo. Determinadas faixas do aspecto da radiao visvel so mais eficientes do que
outras na induo da germinao e devem, naturalmente, ser captadas por um pigmento foto-receptor. Este pigmento, denominado de
Fitocromo, constitudo de um grupo cromforo tetrapirrlico de cadeia aberta associado a uma protena, e apresenta-se sob duas formas
fotoconversiveis: FV (fitocromo que absorve no vermelho-660nm) e FVE (fitocromo que absorve no vermelho extremo 730nm).
Quando o FV absorve luz vermelha (660nm) transforma-se em FVE. Quando o FVE absorve luz vermelho-extremo(730nm), transformase em FV. As interconverses so produtos de reaes luminosas de baixa energia, diferentemente de outros fenmenos fisiolgicos, que
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requerem alta energia. Tendo em vista que uma pequena variao na relao FVE/FV afeta consideravelmente mais a forma FVE, esta
forma considerada a forma fisiologicamente ativa. Aps a percepo e a absoro da radiao pelo fitocromo, uma srie de reaes
desencadeada, e que leva a afetar o crescimento.
Alm da germinao de sementes, vrios outros fenmenos fotomorfognicos so controlados pelo sistema de FITOCROMO,
tais como: florao, crescimento de entrens, desenvolvimento normal da plntula, sntese de pigmentos, atividade da redutase do nitrato,
etc.
2. OBJETIVO
Determinar as faixas do espectro luminoso efetivo na quebra de dormncia de sementes.
3. MATERIAL NECESSRIO
Sementes sugeridas pelo Instrutor, preferencialmente sementes de alface variedade Grand rapids.
Placa de Petri (6)
Papel de filtro
Banco de luz incandescente e fluorescente
Papel celofane nas cores vermelhas, verdes e azuis intensas ou placas de acrlico ou mesmo vidro dessas cores.
4. PROCEDIMENTO
Tome seis placas de Petri, forrando o seu fundo com uma folha de papel de filtro. Em cada placa, coloque no papel de filtro 100
sementes da espcie sugerida pelo Instrutor. Adicione ento 10mL de gua destilada a cada placa.
Cuidadosamente, para no entonar a gua, embrulhe uma placa com trs camadas de papel celofane azul (que transmite entre
390 a 590nm violeta e azul), outra placa com trs camadas de papel celofane verde (que transmite entre 480 a 630nm, pico no verde),
ainda outra com trs camadas de papel celofane azul e duas camadas de celofane vermelho (que transmite luz acima de 670nm vermelho
extremo) e, outra, com duas camadas de papel celofane vermelho (que transmite entre 580 a 680nm com pico no vermelho). Embrulhe
uma placa de Petri em papel alumnio ou coloque-a numa caixa escura (tratamento escuro). Deixe uma placa sem cobertura (luz branca).
Alternativamente, as placas podem ser colocadas em caixas com tampas de vidro ou acrlico, nas cores mencionadas.
Exponha as seis placas a um banco de luz fluorescente incandescente. Ao cabo de uma a duas semanas, examine a protuso das
radculas nos diversos tratamentos, e determine a porcentagem de germinao.
5. QUESTIONRIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
38
A medida do peso a matria seca das diferentes partes da planta simples e exige apenas uma estufa para aquecimento at 100C,
com circulao de ar forada, e uma balana apropriada para pesar a quantidade de material em estudo. Os tecidos so submetidos
temperatura de aproximadamente 70C, at atingirem peso constante, de modo a segurar que o peso da matria seca real foi obtido.
A fim de que o crescimento total da planta possa ser estimado, as razes devem ser consideradas como importantes componentes
do vegetal. Em geral, a recuperao do sistema radicular requer um trabalho adicional bastante significativo, o que faz com que aquela
parte da planta seja, freqentemente, desconsiderada nos clculos de anlise do crescimento.
A determinao da superfcie foliar pode ser feita por diferentes mtodos, alguns utilizando clulas fotoeltricas, componentes de
instrumentos eletrnicos, outros empregando o planmetro e ainda outros baseados na comparao do peso de uma rea conhecida de
papel com o peso dos recortes dos permetros das folhas, traados sobre o mesmo papel.
A determinao da rea foliar importante porque as folhas so as principais responsveis pela captao da energia solar e pela
produo de matria orgnica atravs da fotossntese. Se a superfcie foliar conhecida e a alterao do peso da planta, durante um certo
perodo de tempo, calculada, torna-se possvel avaliar a eficincia das folhas e sua contribuio para o crescimento da planta como um
todo.
2. BASE
O aumento em rea foliar (AF) e no peso da matria seca (PMS) ou (W) num perodo determinado de tempo, permite a obteno
da TAXA ASSIMILATRIA LQUIDA (TAL ou EA) e da TAXA DE CRESCIMENTO RELATIVO (TCR ou R A), sendo que se pode
efetuar a determinao instantnea da RAZO DE REA FOLIAR (RAF ou FA).
OBJETIVO
Determinar EA , R e FA e analisar o crescimento de plantas atravs da tcnica da anlise do crescimento.
PROCEDIMENTO
Cultive, aproximadamente, 100 plantas de caupi [Vgna unguiculata (L.) Walp]. Retire ao acaso vinte (20) plantas com 15 dias
aps a emergncia tomando o cuidado para no danificar o sistema radicular das mesmas. Determine a rea foliar (A F) e o peso da matria
seca total das plantas (WT) aps a secagem em estufa de ventilao de ar forada a 70C durante dois dias. Deixe 20 plantas sob estresse
hdrico, suspendendo a irrigao. Uma semana (7 dias) depois faa uma nova amostragem de 20 plantas (20 controles e 20 estressadas),
realizando as mesmas determinaes. Com os resultados determine a taxa assimilatria lquida (E A) , a taxa de crescimento relativo (RA) e
a razo de rea foliar (FA) tanto das planta controle quanto das plantas estressadas, com o auxlio das seguintes frmulas:
a)
EA =
b)
RA =
lnW2 lnW1
g/g/dia
T2 T1
c)
FA =
AF
wT
dm2/g
onde:
W2 W1 = diferena de peso, em grama, entre duas amostras consecutivas.
A2 A1 = diferena de rea foliar, em dm2, entre as mesmas amostras.
T2 T1 = tempo transcorrido em dias, entre colheitas
ln = logaritmo neperiano
AF = rea foliar (dm2)
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WT = peso da matria seca total (grama)
QUESTIONRIO
Conceitue:
Razo de rea foliar (FA).
Taxa assimilatria lquida (EA).
Taxa de crescimento relativo (RA).
rea foliar especfica (SA).
Razo de peso foliar (Fw).
ndice de colheita (Hi).
ndice de rea foliar (L).
Durao de rea foliar (DA).
Dois sistemas de semeaduras de feijo manipulados por duas densidades de plantio (Alta densidade e Baixa densidade) apresentaram
um crecimento exponencial da forma WT = W0 . eR t , onde: WT = peso da matria seca total; W 0 = peso da matria seca inicial; R
= taxa de crescimento relativo e t = tempo. Quanto tempo (dias) ser gasto para que cada um dos sistemas dobre a matria seca
inicial ?
Tempo (t)
Num experimento com milho, plantado na densidade de 60.000 plantas/ha, foram obtidos os seguintes dados mdios:
Dias aps a emergncia
14
28
42
56
70
rea Foliar
m2/m2
2,1
23,2
150,9
169,8
1066,2
0,04
0,37
1,84
4,80
5,78
Calcular a taxa assimilatria lquida mdia (EA) entre a 6 e a 8 semana aps a emergncia das plantas.
Aplicou-se uma regresso polinomial aos dados primrios, foi encontrada uma significncia de 3 grau e foram obtidas as seguintes
equaes ajustadas:
W = 0,45 t3 0,20 t2 + 0,35 t 0,45
AF = 0,05 t3 + 0,02 t2 + 0,01 t + 0,50
Onde: W = peso da matria seca total
40
AF = rea foliar
t = tempo
As unidades empregadas foram: grama, metro e dia. Calcular a taxa de produo de matria seca instantnea: C t = dw/dt ; a taxa
de crescimento relativo instantneo: RW = 1/w . dw/dt e a taxa assimilatria lquida instantnea : E A = 1/AF . dw/dt ; respectivamente
no 20 e 80 dia aps a emergncia da cultura, sabendo que o valor calorfico da cultura de 4000 cal/g e a radiao solar mdia foi de 400
cal/cm2/dia. Calcular a eficincia da converso da energia solar no 80 dia aps a emergncia.
E% = (100 x C x ) / RA
Onde:
E% = eficincia da converso.
C= taxa de produo de matria seca.
= valor calorfico.
RA = valor mdio dirio da radiao total incidente (Cal/m2/dia)
Dar a equao definidora dos valores instantneos e mdios dos seguintes parmetros de crescimento:
Taxa de crescimento da rea foliar.
Taxa de crescimento relativo.
Taxa assimilatria lquida.
Taxa de crescimento.
Razo de rea foliar.
rea foliar especfica.
Razo de peso foliar.