A VIDA DA CElULA

par

Renata Basile Departamento de 81010g18 Instituto de Biociencias Universldade de Sao Paulo Sio Paulo, BRASIL

Secretaria-Gera' da

Organiza~ao dos Estados Amerlcanos

Programa Regional de Desenvolvimento Clentilico e Tecnol6gico Washington, D.C.

(c~, Copyright 1968 by The Pan American Union Washington, D.C.

Diraitos autorais registeados, 1968 Urri ao Pan-Americana Washington, D.C.

Primera edicao, 1968

Segun da edio;;a('), revisada e atualizada, 1980

Esta monografia foi preparada para publicacao no Departamento de Assuntos Cientfficos e Tecnol6gicos da Secretaria-Geral da Orqanlzacao dos Estados Americanos

Coordenadora da Serie: Eva V. Chesneau

Assesor Tecnico: Professor Eduardo de Robertis

Instituto de Anatomia General y Embriologfa

Facultad de Medicina Universidade de Buenos Aires Buenos Aires, Argentina

o pr og rama de monograiias cientfiicaa Ii urn aapeeto do a.rrrpto traballio da Organizrura:o dos Estados Arne r ica noe , sob a reS~ ponsabilidade do Departamento de As aunroa Ci.ent!ficos da Sec r etarla-Geral, para cujo unanciamento contribui de maneira substancialo Prograrna Regional de Desenvolvirnento Cientffico e Tecno16gico.

Cone ebtdo pelos Chefes de Estado Americanos em Sua reunU(o Ieva.da a eCeito en> Punta del Este, Uruguai, em 1967, e estruturado no s te rmo s da s delibe rac;:Oe s e rnanda tos da Quinta Reunillo do C OnB e Ih o C uLturallnteramericano,r ealizada ern Maraca y, Venezuela, em 1968, 0 Programa Regional de Desenvolvimento Cientrfico e Tecno16gico expreasa a s aspira""e,,, dOB Chefes de Estado Americanoa no sentido de por a eHlncia e a teenologia a s ervi.l;o do s povo s latina - alTlericanos ,

Dernonstrando grande visao, aque la s altas autoridades reconheceram que a ci@ncia e a tecnalogia eata:o lransformando a e s - trutura econemtca e social de muitos parses e que, no momenta, par s e r ern Ins tr-crnentos indi9pens~veiB do p r og r-ee s o da ATn~rica Latina, nee e s .. i ta In de um impulso a ern pr ecedente,

III

o PrograIna Regional de Desenvolvimento Cient!fico e Tecno16gico e wn compferoentc dOB esfororos na c iona ia do s parses latino-americanos e orienta- Se no sentido da ada<;:!IO de :rnedidas que per:mita= 0 desenvolvimento da pesqutsa, do eneino e da difusa:o da ci~n.cia e da tecnologia.; a for~a:o e aperfei~aamento de pessoal cientffico; a interc1irnbio de informa~ae9: e a tr ana!er~neia e adaptaljlo ao s parses iatino-americanos do conhecimento e das tecnologias oriundas de outras regiaes.

No cumprimento des sa a metas fundarnentaf s, 0 pz-og r-a.rna, de monografta s representa wna contribu;lo direta para 0 eneino da s ci@:ncias ern. n{veis educacionais que a. br angem trnpor taotfs - a irno a .. etares da popu1~o e, ao mesmo tern.po, concorre para a divulg~o do saber cient!fico.

A colecao demonografias cieotrficas coneta de quatro series, em espanhol e em por tuguas, sabre terna s de n:"ica, quimica, biologia e rnate.natica. Desde 0 comeco, destinaram- a e as =0- nografias a profess Ores e alunos de ci~ocia do erra lno m~djo e dos pr-irnei r-o s .mos do ensino superior, De \LIlS e de outros j;1 s e tSm recebido testemunho do hom acolhimento a elas drspens a do ,

Este prefado proporciona oportunidade a o Prograrna Regional de DesenvolviInento Cient!fico e Tecno16gico da SecretariaGeral da Organiz~a:o dos EstadoB Arne r icanca para expr es s a r ern seus agradechnentoa aO Doutor Renata Basile, autor desta rnonog rafte, e a toda s as pessoas que COTTl. interesse e boa vantade conrr ibuarn para sua. divulgw;J:o.

IV

!NDteE

Ao s Leito-.:es •...........•.•.....•.•.......••.....•.•

CAPfTULO 1. GENERALlDADES ..•....•.......•.•.•.

CAPiTULO 2. METODOS DE ESTUDO DA CELULA .•••

M6todoa de Prepara<;lIo e Observao;;ao .•.•.•.••..•.• Tipos Especiais de Mic zo s c Spto •••................

Outras T~cnica8 Comuns •..••.••..•..•••• , •.•••.••

CAPITULO 3. COMO TERIA EVOLUfDO A CELULA .••.

DiIeren<;as entre Celulas Animais e Vegetaia •••.....

E .. trutura da C"lula ••.••••••.••...•.•.••••• , ...•• VIrus , .•..................•.•••.... , .......•••. ".

CAPfTUL04. 0 NUCLEO .•.•••••..••••.••.•..••••••

A Carioteca ••....•..••...•..•••.......•••••.•••. Nucleoplastna .•.•...•••.•••••••.•.••.•.•••••.•.••

Estrutura do Nucl~olo .•••..••..••..•.....••.•....

CrOn1.0e901DO I -11 t ~ ~ a '"

CAPiTULO 5. CITOPLASMA •........•..•..•......•••

Ergastoplasma ••.••••••••••....•..•.•.• '" .••..•. Complexo de Golgi ••.•.••••••••.•.....••..•.••.••

MitocOndrias (De Onde Vern a Energia) .•..••••••.•. Li.s oa s orno s (A Digestlto Int-.:acelular) •••••.........

.Ll s c a ao rno s e Doen<;as ••..•••••••.•.•...••••••.•.• PlastoR ••••.••••.•••••••••••••.•••••••••••..••••

CAPITULO 6. A MEMBRANA CELULAR E A

PERMEABILlDADE .

Membrana Pla,nnlitica ........•••••.....••••.••..•

Per:mea bilidade C elular ••...•••.•••..••...••..•..•

P!gin&
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1
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71
77 Pagina

CAPiTULO 7. MITOSE E MEIOSE •••.•.•.••.•.••.... 85

Mito~e , ••••••. , •.•••••.••••.••• , .••..••••• , • • • • 85

Meio'Be ••••...• ,., •.•• " •..•••••.. " ...••••• ".... 88

CAPiTULO 8. MUTAyAO E ADAPTAyAO •••••.• , ••• , 'F

Muta~3es Oi!nicaB •• , •••••.•.... ,., , ....• , , •..•• 98

Mutao;:(5e~ C ro.mos semtcae •......• , .•...... ,..... 1'01

CAPiTULO 9. DIFERENCIAr;AO CELULAR •...•••.•. 105

Diferencia<;ao Cr omo ssi"lmica ••..•..•. , •••.. ".... 107

OBRAS ACONSELHADAS PARA LEITURA .•• ,........ 111

VI

1

OENERALIDADES

Ap6s a d e s cobe rta da celulapor Robe r t Hooke em 1665, muitos c i e nt.i s ta s ooupa ra m c s e do Seu estudo. No inlcio do seculo XIX, Schlciden e Schwann propuseram a charnada Teorw CaW Z<7"l', que em linhas gerais pode s e z- a s e irn resumida: "Todos 08 seres vivos, animais au vegetais, sao formados par elementos morfologica" flsio16gicamentc uuita.rios, as c elula s". No fim do rn e s - rna 5ecul0 Hertwig pr-opos a Teoria P1'otopta8llKftiea, di z endo que a cellll a e formada par urn conjurito de materia v1va,o pl'DtopZasma. N e s ta teo r ia a unidade de vida s e ria 0 protoplasma, e nll.o a co3lu1a, e, sendo a s s irn , ela e rria.l s geral que a pt"imeira, pois pode s e raplicada a o s s e r e s que nll.o apresentam constitui,,!l.o ce lula r tlpica , como e a c a so da s ba ct e r-ia e , e aOB s er e s acelulares, como o s vi'ruB.

A descoberta da celula to r-nou-, s e posslvel apos a inveny1!.o do m i c r o s copf o (pOT do i s irmaoa holandeses, Hans e Za.ca r ie s Janssen, em 1590), pais a grande maioria da s celulas e microscopica.. 0 material que Hooke utilizou em sua observa'i1!.o foi a corti«", qu e e formada po r C elulas rno rtas. E" sa s c Hulas faz em parte de urn tecido periferica da s arvorea, 0 suber, que tempor fun .. ao proteger a planta, princl.palmente contra a calor. 0 suber resul ta da depasio;;ao de suberina na s paredes ce lu la.r es , as quais s e to r na m irnpe rrnejivet s , de modo que as clilula" mo r r em , Quando s e observam c elukas da co r ti.ca , 0 que realmente s e vt; s>lo sua s paredes espessadas, limitando espa~oa centrais va z.i o s , lembrando a conjunto 05 favo s de mel das abelhas. Fa> pOl' e s s e rrio ti vo que Hooke deu as estruturas ob ae r vada s 0 nome de ceZuZa. que vern do latim e significa "pequena cavidade".

A evolu"ao dOB conhecimentos scb re a celula esta diretamente ligada nao !lO a evoluo;ao da teenica usada para p r epa ro do rna tl'"r i a I a s e r es tudado , mas tarnbern a evoluo;l!.o do aparelho u ti « Ii z ado para a sua ob s e rvacac , 0 mi c roacopio. Gra nd e parte do conhedmento que temos hoje s ob r e a celula provem de e atudo s f"itos corn 0 m i c r o s copio eletrOnico, que permite amplia"oes da o r dern de mu i ta s d ez ene.s de mUhares de vezes. A aplicao;ao da rnt c ro s cop ia eletrOnica a citologia Ii relatl.vamente r-e cenre e !oi

reapona ave L pOl' cons i de r ave 1 p rogre s s o ne sa a ciencia. Outro fato fundamental que c ont r ibutu para tal p r o gr e e s o fei a grande evolusao ocorrida ne.s t aa ultirnas decadas nas ci~nciaa basicas, especialmente na bi oqufmi ca ,

A reuni:l:o doa dados obtidos com diferentes tecnicas permit e -nos hoje te T urna c Ia r-a ideia sob re a mo dologia ea fisiologja cia celula. E isso oS 0 que p r oc u r a r-e rno s mostrar nesta monografia.

"-' * *

Notas Hiet6ricas {Cronologia da s Principais Descobertas Ligadas a Citologia}

.. L 590: H. e Z. JANSSEN, mediante a c crnbi na cao de lentes c onve ",as, i nve nt arn 0 micl'oscopio oompoe ta •

... 1651: W. HARVEY Ianca 0 conceito de que todos as seres vi vos originam- s e a pa rti r de o vo s .

2

... 1657: R. de GRAAF descobre o s f(J~£CU~08 no ovario humano e interpreta-os err<:>neamente como s e ndo o vo s ,

• ] 665: R. HOOKE publica sua "Mtc ro g r afi a!': Sabre a tiex» tul"a da aortis:a e as "iZuZ-as e poroe, e alguns oubro» COl'pos espumos08. na qual Iaz a prirnei1:a descric;:iIo da celula.

• 1677: A. V. LEEUWENHOECK ob s e r va, pe Ia primeira vez celulas vivas [he ma ct a e de perxe , espermatozOides hu.rna no s e de out r o s .rnarnHe r oe , p r oto aoa r io s , fibras muecuta re s , rntc r-Sbi o s ), sem por e m entender o seu significado.

GREWe MALPIGHI repetem as ob s e r va cbe s de Hooke em diferentes ve ge rars , e, encontram "peqllenas ca vi dade s ", as quais denominamutl'Wu~(JB au vea£=.l.a, •

... 1808-9: IvIlRBEL, em seu trabalho TeoI'ia da Organizat;(io Veqetal., che ga ~ conclusllo de que as plantas sao constituldas por urn tecido membranoso celu1ar.

... 1809: LAMARK afirma que "nenhum carpo pode te r vida s e as auas partes c ona tj.tu.i.nt.e s nllo s:loIormadas par tecido ce1ular". Esea ideia e ta.rnb e m defendida p o r

Dutrochet (1824), Turpin (18Z6), Meyen (1830) e Von Mohl (1831).

... 1833: R. BROWN, em celulas de orqufdea, de s c ob r e 0 nucleo.

... 1835: F .. DUJARDIN e studa 0 mate rial vivo entre 0 nii.cleo e a rrre mb r ana doa proto2'.oarios (riz6podes e foraminlferos) e c ha ma s c 8al'codio. (Purkinje e Von Mohl de norrri ua r arn -no protoplasma.)

... 1838-9: M. J. SCHLEIDEN, estudando celulas vegetais, e T.

SCHW ANN, estudando c,Hulas a ni m a'i s , p1'opi">ern a eeor-ia aeZuttU'. Schleiden descobdu ainda 0 nu c Le oLo no interior do nucleo.

... 1841: A. KOLLIKER mostra que os eapermatozoides 1'esultam de trans1ormal;i3ea de celulas doe tea tlculol'; e aplica a teoria ce.Iul a r ll. embriologia.

REMAK descreve urn proces so de di vi e ao ce Iura r que chama direto ou amito8e, rejeitando a hip6tese de Schwann, segundo a qual as celulas proviriam de urn Ifquido encontrado noa Beres vivos, 0 qual chamara c it.ob Ia s t erria ,

3

... 1844: A. KOLLIKER :mostra que tarnbern 06 ovulos sao formados no interior do organismo e que a partir de divis<5es deles urn novo organiamo a e 1orma.

... 1845: Von SIEBOLD estende a teoria ce Iul a r ao s protozoarios.

J. DZlERZON mostra que us zang{)es p ro varn de 6vulos nlio fe rtili zadoil, enquanto as rainhas e a aope rariaa das abelhas prov@rn. de ovulos fertilizados.

... 1855: R. VIRCHOW enuncia 0 princ{pio de que t od oa os seres vivos originam-se a partir de outros preexistentea (Onnie oel"Ulla e cellula).

... 1860: T. A. E. KLEBS introduz 0 metoda de inclusi![o de pe~as em para.fina.

... 1861: M. SCHULTZE reconhece 0 sarc6dio e 0 protoplasrna como sendo a rne srna cotsa ,

... 1869: F. MIESCHER descobre oa ;icidos nuc Ie i co s ,

• 1 870: W. HlS inventa 0 mial'otomo.

• 1873: A. SCHNEIDER che ga a auaa primeiras conc lus oes a respeito do pr ocea ao de divislto celular, 0 qual c harnou aarweineae.

.. 1875: E. STRASBURGER estuda a di vi s ao c e Iul.a r em plantas e chama 0 processo divisao indit'eta.

O. HER TWIG deacreve 0 p r oc ea s o de fertiliza<;a.o em ani.rna i s (OLll'i<;o do mar), dizendo que 0 me s mo, tanto para animaie Como para plantas, significa a fusao f{sica dos doia pl'ontlcleos (masculino e feminino) •

• 1878-83: W. FLEMING chama mitoae a p r oc e s s o de divisao da.s c,Hulas antrnat a e ve ge ta.i s , caracterizando-o poate rto rrnenre c orno sendc U.In p r oc e s s c de divisao e quacional (1879).

.. 1880: HANSTEIN propoe 0 norne Pl'Otopla8tO para a dilula.

4

• 1887: E. ABEE c orneca a publ i ca r trabalhos importantes sabre rrnc r os c opi a optica.

H. FOL ob s s r va 0 eape rrnatoz oi de penetrando ern ovulo de es trela do mar.

• 1 BSl: E. G. BALBIANI descobre os o1'om08801111)8 poUttmi(JOB na glandula s ali va,r da s larvas do di'ptero Chiro- 1I0n1UB.

.. l88Z: W. FLEMING descobre os CParJ08BDmOll pZumulados.

.. 1883:.E. VAN BENEDEN descreve a fertiliz<Ls;:;to em maInHeros.

W. ROUX enuncia que os c r omo saomo s no mic le o da s cetulas sao os portadores dos fatores he r e dit a r'i os ,

• 1884: E. STRASBURGER descreve a fertilizas::l:o na s plantas.

• 1888: T. BOVER! e E. VAN BENEDEN de s c r ave m a cent rfo l o.

W. WALDEYER de norni na as cromossomos.

... 1890: W. W ALDEYER r e Lac i ona a mitose C9m a f9rmas::l:0 de fl l am eritoa no nucle9 (c romo ae ornoe}.

... 1892: O. HER TWIG p r opoe a teorof..a protop1.alJlTlatitJa no sou t r aba.lho: A cilu1.a e Os Tecidos.

... 1898: BENDA descobre as mitoccmdriaa.

GOLGI descobre 0 oompl.exo de GoZgi.

... 1902.: C. E. MCLUNG de s c r e ve o s cromossomos se xua i s ,

W. S. SUTTON verifica uma identidade no cornpo eramento d os c r omos sornos e d o s Iat o r e s he re dita ri c s ,

... 1907: R. G. J-IARRlNSON inventa 0 metodo de cu lru ra de tecidos.

... 1922: CHAMBERS inicia as trabalhos de micl'odi88ec~{fo •

... 1924: R. FEULGENeH. ROSSENBECKdescrevemummetodo citoqufmlco para a determina<;ilo da pr e s e nca de DNA.

5

... 1932: M. KNOLL e A. RUSKA descrevem a primeiro tipo de rn i c r oa c Spj o e Ie t r orric o.

... 1933; T. S. PAINTER inicia estudos de cltogenetica com 05 c r-cm os eomoe politenicos de [flo080phila.

... 1935: F. ZERNICKE des creve 0 princfpio do mi c ros copto de fase.

... 1936; T. CASPERSON usa pela primeira vel'. rne tcdos de ciLoespectrolotornetria para a determinao;:3:o quantitativa da composi<;3:o qufmi c a das cHulaa.

&1940-41: J. BRACHET e T. CASPERSON localizam citoquimicamente 0 DNA no nueleo e 0 RNA no nueleo e cit op La s rna.

... 194(,: Irn c i a> sa a apUca<;ao da rni c roscopia de fase na, citologia.

.. 1952.: D. MAZIA e K. DAN isolam 0 aparelho mU6t'ico.

R. BRIGGS e T. J. KING mostrarn, eom experin .. s n - tos de transp1ante, que 0 nucleo Boire dilerencia"ao.

lnicia- se, a aplica<;ao da rnlc rose opia eletrOniea na citologia •

... 1953: J.D. WATSONeF.H.C. CRlCKprop1:iernull1rnodelo helicoidal para a estrutura do DNA.

... 1955: M. E. BREUERe C. PAVAN m.ostram que nos "pu£es '" dos cromossornos politl!nieos de Rhynchoscia.ra a11- gelas ha aumento adicional na quantidade de DNA. 0 que o e Ie vou a pensar em. dHertm<;a:o' crom.ossOmica •

... 1956: J.H. TJIO e A. LEVAN demonstram que 0 m:i.mero de c eornos s ornoe da e s pec ie humana e 46.

... 1957: J. H. TAYLOR, P. S. WOODS e W. L. HUGHESiniciam estudoe carr> ti rru di na tdtiadae auto-radiografiapara dete rrni na cao do mecanismo de duplieac;:lo de DNA.

... 1959: S. OCHOA e A. KORNB.ERG recebern 0 pr~mio Nobel com se us e s tudos sobre slntese de acidos nueleieos in vitro ..

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... L961: F. JACOB e J. MONOD conce rtuarn 0 "operon"'e ex-

pHeam co:rno urn gene pode ser r e p r i rrn do au a ti va do ,

... 1965: M. DIAZ e C. PAVANdescobrem infec<;1:Iesporvi'ru$ e rnf c r oapo rfde os que causam profundas altera9i':ies nos eromossomos de R. angelae.

.. 1969: R .. J, BRITT EN e E. H. DAVIDSON tentam expl lca r , a tr a ves de um modelo te6rico, 0 mecanismo de regulao;§o g@nica em eucariotos.

O. L. lvlILLER; Jr. e B, R. BEATTY mc s tt-a m atravfs de rru c r oac opi a eletrOnica 0 gene (DNA) transerevenda (produzindo RNA).

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METOOOS DE ESTUDQ DA CELULA

MtTODOS DE PREPARA<;:AO E OBSERVA9AO

a) &ame Vita~

Urna ce luka pode s e r observada viva, ao microsc6pio, au entao marta, ap6s fixa~a:o e colora.;!to de suaa estruturas. Quando fazem06 urn exame vi'tal, au a. 1T'8$(10, de Ulna c e Iu la qualquer, va mos encontr-a r est r utu ra r elati varnen te s Irnp le s , Nun~a ve re mas a membrana plasmatioa, mas no ca s o de celulas vegetal>; podemos ver a parede ceZuZar .. que e morta. (pazoaplasmaJ e bastante e s pe s s a , No interior da rn errrb ea.rra notare:rnos rna.s s a opticamente homogenea, 0 oizoplasma, contendo urn co r pus culo rneuo r , ° rriiaZeo. 0 nucleo fica s eparado do c ito pla a rna par urna membrana, a oax-iateoa cu membrana rual-easr, e no inte r i o r- dele poderno s atnda, em alguns casos, observar urn ou rrra i s !ltlClSoZos. Em celulas anima"!s nada mai s podera s e r visto. Em celulas vegetais pode r-e mo s ve r ainda pZastoa, vaodaloe com pign'\entos e inaZusi5Bs minBruis.

7

o exarne vital deve s e r (eito s errrpr e com 0 rna.te rIa l rrre r gu lha do nurn mere que co r r e sponda em coric errtr acao aquere de que a c elula provetc, ASBim, para celulas de plantas aquaticas, usaremoa agua; para celulas animals, urn li'quido de concentra<;;ao B etnelhante ao do plasma s angiifne o (isotOnico). Esse Hqu ido recebe 0 nome de B01.W;ao fisioZogiea e deve ser isotonico para evitar que a pressao osmotica determine altera~oes na celula. Se a 50lu<;;lio for hipotOnioa, a celula intumesce ra, por entrada de agua, e s e for hipe:rton:wa, a celula pe r der a aglla, conh'aindo-s e.

o ex arrie vita.l apresenta varias vantagens: mostra 0 material como ele realmente s e encontra no s e r de origem, Sern 0 pedgo de altera<;;oes caus adas pelo tratamento com fixadores, que sao cha « madasarti{{cios de teonica; permite a observa,,1io de fe1l0menos fislologicos, como rno vi.m e nto s c e lula r es , emiss;;:e de pseud6podes, batimento de ci'lios ou flagelos, ciclos e, resposta das celulas a diIe r ent ee e stfmutc s , ou entrada e sa(cIa de material da celula; permite

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observao;;ao imediata do material, bastando coloca-l0 entrelarnina e lamfnuta., no Hquido ade quado, e leva-l0 ao rrri c r05 copio.

Ao lado dessas vant age ns , 0 exarn e vital a.p re s e nra tambem. des vancagens , po ts na~ n08 mostra po rrneno r es da e s t.r utu r a . Is e o porque os organulos intracelulares ap r e s entarn lndices de refrao;;ao muito proximos, 0 que corife r e a celula homogeneidade Optica. laso e facilmente entendiclo, lembrando-se que no mt c r cs copi.o a luz provem de urrra fonte situada abaixo da preparao;ao e aatravessa. Atualmente e s s a dificuldade tern. sido at eriua.da grao;;as ao ern - prego de micros copios rna i s aprimorados para a s s e tipo de e xa me , como 0 miOI'a800pio de rase, 0 de inte:rferOncia e a de lundo euou» ro, que r ea Icarn difereno;;as mfnimas de fndice de refra<;iio, par rn ei o de feixes Iurrrlno aos espectais. Uma obs ervas:ao vital nurica po de 5 er feita ao mia'l'OB",fpio elet:r>"nico, pais nete 0 material tern de pe r rn ar.e c a r no vacuo, onde a dllu!a niio pod e permanecer viva.

bJ Fi:crl#.o

Quando fa z-erno s observa<;ao de urn material f ixa.do e cor-ado, muitas estruturas podem ser vistas. Fi:1:.at;iio e a opera<;ilo que tern por finalidade matar a celuLa por me io de urn agente adequado cham ado fixador. 0 fixador faz com que as estruturas ce Iu.Ia r e s 50- !ram urn mfnimo de alter a<;eI eS , permanecendo no mesmo local onde s e encontravam. 0 fixador sera tanto rnelhor quanta m ai s rapidamente penetrar nas dilulas e precipitar s eu s cons tttu.inte a. A e s cojh a do fixador depende da e s tz-utu ra que se pretend e fixar, bern como do corante a ser us ado posteriormente. 0 tempo de fixacrao tambem varia confo rrne a a,Pente u aado , os fixadores po de m SOIl' classificadoB em !{sicos e qu=iaos. Entre 09 f(sicos, rernos 0 aquecimento e a congela"ao. Eles tam a vantagem de nao causaI' alteraor5es qu Irn ic a.s na e at r utu r a , 0 que pode acontecer com as n"adores qufmicos, pois estes r ea.g ern com as subst.1ncias ce - lulares. Dentre estes ternos as ~(quid08 i80~<ldo8. como Io r rno l, alcool, acido acetico, acido osmico, e as mieturae [i."Cadol'Qs, como Bout n , Ca.rnoy, Zenker; temos ainda gases fixadores, como gases de iodo, de aldei'do formico, de acido 06mico.

0) Co lo1'o.¢o

Apos a fixa<;:ao as celulas sao coradas. Corante e tOda substauc ia capaz de fornecer certos grupamentos qufmicos, ch arn a.do s crornoforos, as e ubs eanetae celulares, conferindo-lhes ce r ta cor. Essa opera<;!io e mu i to importante poi e , gra<;:as aela, as e s truturas celulares que e r arn opticarnente homogeneas, tendo reagido com 0 corante, passam a ab s o e ve r a Iu z corn intensidades dife-

l'",ote S, a que as to roa obs erviveis. Dire r errte s e s trutu ra s corams e distintam",nte em pr'esen ... a de coranee s dife e entas e, as vezes, com urn mesmocorance, podem co r a r vse em tonalida.des diferente s , Algumas estruturas c or arnv a e especHicamente par certa corante devido ao fato de pas s u(rem certa s llbst:lnc ill. qui"mica que tern aiinidade e s pe cfft ca pe Io corante. Por exernplo, 0 RNA (acido rj bonuc lE;i co) cora -!l e es pe cific,arr"~nte pe Ill. pi r anina, e a DNA (addo desoxi-ribonucleieo) pelo metoda de Feulg(m. Se Cize r mo s urna p repara ... ;!o do tipa HE (hernataxilina e eostna), 0 nucleo val co r-a r e-s e em roxo pela hemato:x:ilina, que e, urn corante basico, enquant o 0 c itopfa s ma c,oral'-se-a em reseo pela eosina, que e um co r a nt e acido.

Podemos fazer tambem co1.0l'f.J(){jss vit(lis. em qUI> 0 c o r a nt e a usado em concentrao:;:1:les pequenfs s i.ma s , podendo s e r apltcado as celulas vrvas .• sem mata-Ias. 0 verde Janus, em diluiyaa de 1: 30000 erri soluto fisiologieo, evideuc i a 0 c ondr io rna de certas collula s , As colors!ri'ies vitais tern. Int e r-es s e para compa raeoes entre os aspectos vistos na cell1.l'a viva e 0 que s eobs e r va na celuis flxada e co r a.da,

Nunca poderemoe observar todas as estruturas celularee com u.=a unica prepara.9:!:o. Usaudo determinado metQdQ, vemos bern determina das e s t rutu ras , mas niio outras. U sando outr a til c nica, verrio s m.elhor out r as es t r utu r a s , Po s te r to rme nte , a reuni.ao das imag errs a bt i.da s pelos di. ve rs OB meto dos pe rmite -no 8 imagina r a ceiula com todas as suas estruturas e diferencia<;oes. Ass im, aliando o s dados obtidos por rne io de tecnicas citoqu1"micRs, cl toffs i cas e bioqui"micas, pelo uso de diferentes tipos de rn i c ros cepia e po r roic romaoipula<;a.o, chegou -s." a c onhec e r com inacreditaveis minl]c ia.s a es rrutu ra da cHulac am to dOB O~ s eus or ganulos .

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d) Obten;ilo de COl'tes

Apes a nxac;:ilo da pec;:a que s e de s eja e~tuda:t, deve -secorta-la em fatias muito finas, po is e Ia s devem permitir a passagem de Iuz para que s e possa observa-las ao mt cro s copto. Deve-se proceder entao"a i=Zusao da pe ... a. Essa opera ... ao e feitacolocando-se a pe ... a (apos completa desidrata<;ao em serie de alcoois com coneentra!;Jio c r e s cente ate 1000/,.) num rn e i o , como a pa.rafina, ou ace101- dina lrquida. Es.ses meios tl:!m a ca pa c ida de de p""atrar noa espac;:os intercelulares, dando resi.stl!:ncia a. pe ca apos resfriamento e solidHicac;::to.

Em ge:ral, a inc:1uaa:o e feita em parafinapor ser urn metodo rna i s pratieo e menos dl.spendl.oso. Para e e t.e caso, ap65 a desidratac;:ao,

a peca e cratada po r xilol ou toluol, 0$ quais saO m e io s qUt! s e dissolvern no .ileool 100 (de onde vern a pe<;a) e diseolvem a paj-af'ma , Alem die so, des Him a capacidade de tornar a pe ca mais transparente (diafanizagao). A parafina li'quida (ponto de fusao ± 57°C) if colocada nurna forma e logo a pe ca e orientada DO s eu interior. Apos a solidifica<;ao, esse bloco de pa r af'i na e "aparado" com gi.Ie » te e Hxado sabre urn suporte de madeira e, ent ao , Ie va do ao "I{C1'Otomo {aparelho us ado para a realiza<;:ao de cortes}. Os cortes pod ern variar de e s pe s s u r a (em geral usa-se de 4 a 10 urn), Obt i « dos os cortes, sa:o eles col oc ado s sabre laminas a l burn Lni z.a.da s , para que a aderancia seja boa, e deixados em. e stufa a 37' C para born distendimento. Entao sao hidratados, co r ado a , e monca do s em wZsamo do Canadd, euparol, permount, etc.

Para cas oa e s pe ci a.i s pode -6 e obter cortes di rBta mente apos a nxao;;ll:o por aon{Jela~ao. A pe ca congelada (fixada) e cortada. dir eta m e nt e nurn m ic r otorno e s pe c ial , chamado rrri c r o torno de congela"aa, a qua I possui urn d i.s po s t ti vo que pe r rn it e a manuten"li:o eta pe ca cong e la da , Pode -s e u s a r dar et i la , de ve z em qua ndo , na fac e s upo r i c r do bl o c o pa r- a mantI! -10 congelado.

TIPOS ESPECIAIS DE MICROSc6PIO

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Mi~l'osa6pw de Fase. Bas e ia vs e no faro de que as radia«o ... s

luminosas que atravessarn urn objeto exi bern uma dife r enca de fas e , Neste mtc rcs ccpio, pela pr es enca de pe ca.s e s p ec Ia i s , as diiereno:;:as de fase s~o transformadas em diieren<;:as de amplitude (de i nr ena idade), as quais podem ser distingui;ias pe Io s ol hoa , evidenciando rrre Iho r as estruturas celulares. E especialmente u s a do para observao;;ao de celulas vtvas , as quais nao podem s e r co r a da s ,

Miar08copio de In tel'fel'{!ncia. Tern pr incfptc se me lhanre ao do rn i c z-o s co p io de fa.s e , porem nos eli uma id,:iia da quantidade de materia e e c a. que ha na celula, gra<;as as diferen<;as de ahsor<;ao de luz p e Ia s regioes da ciilula com qu ant i da de s diferentes de material.

Mic!'Osaopio de PUndo Becuro, (Ultramicroscopio). A luz dispe r s a vs e nos lhnites dos di ve r s os materiais, COrn di Ie r ent e s lndice s de refrao;ao. Este tipo de mic ros copio co r r e s ponde a urn micros capzo optico cornum, no qual a condensador rl.um ina oobjeto obliquamente. A luz nao converge dl r enarn e nr e para 0 obJeto, mas l:.ateralmente, ficando 0 fundo e s cu r o , 0 objeto a pa r e c e b r i.lh ant e . . E u s a do para a obs erva<;ao de celulas vi vas.

Miaro8C!opio de Prit.a2'iza9iio. Bas eia- Se na utilizao;:ao de Iu z poIa r i z a.da. ern ve z de ilumina'iao corrrurn , Foi 0 micros copio inidalmente ut.i Li.z a do para 0 estuclo cia ultra -estrutura cia calula. Sa 0

mate rial examinado for isotropo, a propaga<;i!o da 1u2. a e fara com a rn e s rria velocidade, qualquer que seja a dire<;iio do plano da Iuz polarizada. Se 0 materialfor ania 6tropo, a velocidade de propaga<;:10 da Iuz polarizada VaT iara conforme a dtr-e cac que se consider'lr e, nes s e c a s o , t e rrios iridfc ios de urna Or ganizaora:o ultra-estrutural.

MioroolJo6pio E1.etrenico. Bas eia-a e na propaga<;:io de feixe de

e1;;tron5 e nao de fe i.xe s luminosos. A fonte de el€:trons e urn filamento me ta lj co , em g e r af de tungat.ento, 0 feixe de eletrons poasui propriedades s emelhantes as da, Iuz , tendo trajet6:ria Tetil!nea e carater corpuscular e vibrat6rio, mas a Iongttude de radiayao e rrluito pequena. As lentes corn .. s porrde.rn a bob ma s m.agneticas. 0 objeto p r-e pa.r a do , apos fixa\<ao e coloraC;ao, e colocado no vacuo. A imagem forma-se num ecran fotografico, graS'a" '108 eletl'ons que sao de a v i.a.do s a o encontraremobstaclllos naprepara'i-ao. Esses cbs taculos COr respondem aos n~cleo5 dos atomos constituintes do mate rial preparado. Este tipo de m i c r o s copio e extrema mente ilnportante, pois p e rrnite r",solu<;ao c e r c a de .2000 l7~zes maior que a da mt ca-os copra opti.ca. 0 limite de resolu<;1l:o Ii cia ordem de 3 a 5 Angstroms {lA = 10-9 em}.

OUTRAS TtCNICAS COMUNS

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Ha muteos m.hodos que hoje s:1:o aplicados a. citologia. para dif'e r errte s tipos de e s tu do ,

Metodas Citoql4tmic08. Os n".todos de colora\<ao e detec<;ao de

sub"tltncias at r av e s da c or que adquf r e rn ap6s tratamento com. ce r to s co r ant e e es pe cfft co s , sao multo utilizados em cil.ologia. Corrr n rea'iao de Feulgen e Roa s enbe c k , por exemplo, podemos detectar a preseno;"" de DNA. Pironina e urn co r-a nt e que evl de nc ia RNA.

Sao rmrito usados pelos bioqu(micos os metodo8 de fl'Gcionamel'!to aeZul.ar, que cons istern basicarnente na destrui\<ao dos limites c e Iud a r e s po r rrre i o de agentes rn e c ari i co a e qufmicos, separandose diferentes fra.<;oes celulares, g r a ca s '10 seu tama.nho e peso especlfico. Quas e todos o s orgltnulos celulares foram isolados po r meio de s s e s metodo".

O~ metodos aitofotometriaos de abSOl'~i5.0 e espectrofotomitriaos tern tarnb ern grande apttca cao , Atraves do citofotOmetro pode-se determina,· a quantidade de material existente en> certa prepsra'iao. 0 citoiotOmetro bas eia-B e na Int eris tda de com que certas oubst:tncias e.bac r ve m c e rtos cornp:rilnentos de on da , Dependendo do comprirnento de onda absorvido, pode -se r e conhe ce r qual a

substa:ncia em e s tu.do e qual a sua quantidade no inte,rior cia propria ce.lufa , Ja 0 espectroiotOmetro nos mostra qual a aubat anc ia 150. Ia.da da celula e em solu~ao, gra~as tambelTl a ab s 01'"a:o es pec(fica de c e r to s comprirnentos de on da ,

A a:uto-radiOf}"l'qfia tam ben tern grande utilidade para a citologla e baseia-se no fat a de que substa:ncias radiativas impressionarn chapa s fotograficas. Tratamos a celu1a que desejamos es tuda r com pre cur s or e s radioat ivos e, pas t e rio nne nte, pr eparamo 8 lam;na s das rne srna.s , as quais sao cobe r cas com umapeli'culafotografica, senslvel a radiagao. Depois de reveladas, e s s a s laminas n o e mostram onde os precursores 5 e a lojar arn , indicando que ali h ouv e sfnre s e de material (veremos com mais detalhe a pag. 46),

A micromanipu. ~a9ifo e muito importante para 0 e s tudo da 9 prop r i e dade s da s dilulas vtva s , Cons iste na introdugiio de microagulbas , rnt c r opi pe ta s e microeletrodos no inte r-io r da celula, com a ajuda especial de ape r efho s que os fazem mover sob 0 campo de urn mic res copio opti.co composto, at raves do qual a ccrnpanharnos to da s as reao:;i3"es da celula. Pode -8 e corn iS50 efetua r a di s s eco:;ao de celulas, a extra<;ao de algumas de SU.ilS partes, inje'iao de subst~ncias, transplantes de partes de urrra celuia para outra, etc.

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Para as diferentes organulos c e Iu.Ia r e s temos tecnicas citolagicas es pectats de fixa~1ro e colorac;ao. Ergastoplasma e bern evidenciado usando-se como corante 0 azul de Unna, que e bas l co; 0 complexo de Golgi pode ser salientado pelo metodo de for mol uranio de Cajal, ou cromato de prata de Golgl; mitocolldrias saO evidenciadas pelo metoclo de Regaud,

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, ".

COMO TElllA EVOLUIDO A CELULA

Nao varno s discutir aqui 0 problema da ori.gem da d\da, que foi muit o e s pec ul ado pelos aut or e s antigos e ainda boje c e. Sabe s s e que nas condi5i-oes reinantes 'na terra primitiva era pass(vel a pr oducao qufmica de l:iubsUtncias org:inicas simples.· .pl'trt:h de s s as aubst:incias originaram-s e moleclllas rrra i s cornpl exas ca-. pazes de 5e auto ~r eprodllz;r e de muta r , Auto~reproduziarn~s e utilizando os compostos rna i s simples existentes no meio. Muta~ yam por e1'r08 surgidos durante a aut o c r e pr odue ao , Talvez e s s a par tfc ula elementar corresponde s s e ao DNA.

As muta<,;Oes oc o r r idaB deram Origem a uma va r iedade de novas moll'culas t arnbern autove epr odutor as , Algumas s e r epr cdua iarn de modo eficiente e 9<1 'pe r pet uav arn enquanto out r as eram ineficientes e eliminadas. A 5ele~a:o natur-al e a c ons e qlianc ra da variabilidade e joi opera deade que apa r ec e r arn mut anre s , Especulando urn pouco, poder{amos supor que v1'irias part(c'.lLas 8 e reunira1l'l e que em torno delas s e formoll urn envolt6rio pr otetor membranos o , Entao te r farnca as par tfc ul a s mergulhadas nurn l(qllido, provavelmente gelatinoao (coloidal), e pr ot egtdas pel a membrana.

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Evidentemente podemos supo r que muitas outras p a.rHcul aa per~ maneceram Ii vr es , mas que, com coutfnuas altera<;:1)es arnbi entais, a 8 elet;a:o natural agiu, e as pa"uculas com a memb rana, sendo mat s apta s (estavam protegidas), aob r evi ver-e m , A constitui~:;:o da membrana tarnbern pode ter sido mutto va ri ada, em dHerentes condi<;:1)es, mas a que deve ter s i do s e l ec i cria.da, foi a lipo-prot~ica, talvez por tel' propriedades especiais que permitiam boa elasticidade, prote"a:o e pe rrneabtjtda'de ,

Suponhamo a agora que es s a estrutura mai 3 c orrip'l exa, que ainda nao s eria urna c e lul a, tenha c r e s ctdo muito: tanto que a sua 6Uperffcie agora s e r ia pequena em rela<;tto ao s eu volume. Entao, para que pu de s ae receber alirnentos [en corit r a dos no meio) em quantidade aufickente (e os a Iirnentoe cb ega r iam a ela atraves da membranal,precisou e Ia aumentar a sua aup e rHc i e ,emit indo evag ina cfie s . 1580 poda tel' a.c.cnte c ido s orrre rrte a algumas debs. Esta B s e r tam mai 6 a dapta da s que as out r as em que a supe r Ii de nao fo! aurne nta da e , ac reprodu:z.irem-se, s ernp r e teriam evagina"oes.

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•

Fig. 1. (Em: "The Membrane of the Living Cell" de ,r .D. Robertson, Sei; Am. pags. 70-71, abril 1962. Reprodu:dda com auto:1'iza~ao. Direitos resel'vados, ® 1962, pe.La Scientific Amel'io;:an Inc.)

As evagina<;i:les tornar-se-i.am cada vez rria i s proerninentes e i riam envol.vendo a estrutura i ni ci a l, como rno at r a a figura 1.

Agora sera melhor acompanharmos a sua evolus;:to atraves do s ee querna.s . Como s e ve, a e s t r utu.r a basica, a central do esquema, corresponderia ao nueleo, e a rria.i s externa das rnernbr ana s que agora s e dobrararn c o r r eapond erf a it rrrernb r a na pl asmatdc a; Des sa forma, Robertson imaginou uma pos sfvel origem. da me=brana dupla da carioteca, do r etfcu lo endopta smatico e dos diferentes or ganulos ci top laarnaui coa, que seriam resultan.tes do is olamento de porOj.i3es das dobras do reticlJlo endop lae mji ti cc, que posteriormente S ofrerarn algumas out r as trans!orma~3es (difer encia!roes), ad aptand 0 -S6 a realizao;:iio de diferentes fun<;e!es para a celula. 0 espa<;o entre a ca ri oteca e a membrana plasmatica seria 0 hialoplasma. Assim 0 nucleo es - ta ria protegido no interior da c Hula, pres ervando 0 rna t e ri.a I he reditario,e 0 cizopfaarna responsabilizar - se-ia pelo metabollarna d a c hl ula. Note -se que para 0 caao do s p'l'oc(Zl"iontss [s e r es sem urn nucleo definido como eo ca.a o das bacterias -- ver pag. ll-.) esse tipo de et'olu!rao nilo seria vnido. 0 que expus erno s vale ria ap ena s pa ra os eucariontes (s e r ea com u rna c a rioteca de 1i - mitando urn nfic l-eo d efi ni do).

Evidentemente tudo iS60 e extremamente interessante, mas e eapeculatavo, fl e bern que Robertson tenha em s eu apoio dois fatos inegaveis! I) todo sistema membranoso celul a r tem cons tittli ,,!to Ii po=p r ot ei ca; 2) hti realmente inter- r ela cac entr e as rn emb rarras do retlculo endopras mat ico , ca r iote ca e membrana pl.a.s rnat i c a ,

AIem da hip6tese de Robertson. sobre a origem da ce lul.a , Mi. a hip6tese endossimbiOntica desenvolvida por Margulis. A hip6- te s e endo s s irnb ieneica da origem da clHula Burgin ap6s lima s6rie de observa"aes extremamente mt e r e s s ant e s , que fizeram. com que muitos conceitos rnuda s s ern. 0 ex.emplo rna i e particular talveOl seja 0 de do i s pe squtaadc r e s atuando independentemente -_

Grimstone, de Cambridge, e Cleveland. da Georgia. Estes auto re 5 tra ba Iha.rn com 0 protoz.o! ri 0 Myxot1'i cha pa:r'Cldoxa. E s te pro tozoa rio vi v e norma Irrierrte no tuba di ge s rivo de c er to 5 pulg~e 5 que 5:itO paraaitas de certa~ al."vores. No pulg:lo 0 proto:.:;6a.rio e urn sirnbionte, pois utili",a~ s e de aHmento ali exiatente e, por sua ve z , fornece ao pulg:to e n z trria a capazes de digerir fragmeneo s de tna.deiraque 10 ste e retiraln da s 6.rvores. Os pulgl'les n:to pos sue me s eas enzi=as. As.1m.bios'e e perfeita. Par ser urna rela~:\:o har mentca t:\:o interea sante, e que e ste protozoa rio fol muito estudado. Deade h:i muito tem.po, a.'<1. ;:;·a:radoxa. era conaiderada urn prorozoario flagelado e ciliado(Fig. 2). Porern. ap6s oestudo c ufd a do so dos a uto r e s a c i.rna mendonados, ficou c Ia ro que 0 protozoario era UIT> s e r simbionte. Originalmente ele s e r ia urn flagelado que se encontra em e irnbtos e com 3 distintos tipos de bact~l"i.as (espiroquetas grandes, espiroquetas pequenas 10 bacilos (Fig. zj, Estell urn exem.plo curiosa de como 05 ae r e s vivos pode.rn s e relacionar de modo rmrito fntirno. A partir da{, a idha que ria pr6pria origem da cHula tenham ocorrido associaqOes simbiOnticas rouito fntimas, tornou urn grande ilTIpulso. Assim, Ma.rgulis propOs que a cel\lla priITl.itiva po s aa terse reunido si=bianti~a=ente corn outros s e e-e a inde~ pendente s pa ra or iginar c€lulas maL .. c omplexa fl.

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Fig. 2. Esquema em corte tridimensional do organismo unicelular Myxotl'irJIw pcxrado",Cl'" que e urn endossirnbionte r'esul tante d .. r'euni1lQ de UBI protozoa:do flagelado (f); e sp.Iroq LJe to!" gpandes (" e . g. ); espiI'oquetas pequenas (II!. p.) e baCil·QB (b); m ~ fragmentos de madeira.

Alguns auto r e s ruodernos dt scutern a hip6teae de que cartos o r gan i s mo e muito simples do pre-cambriano poderiarn.j~ tel' desenvolvido a capacidade de respirar aerobicamente, enquanto outros, possuindo clorofila poderiarn fazer fot os efnte a e. No primeiro ca ao as organismos seriam semelliantes a certas bact~rias a.er6bicas e. no segundo, serrlelhante B as algas a~uiB. Posteriormente tais organismos poderiam tel' pa s aado a viver em simbiose com out ro s organismos rnaiores por~m n:!:o dotados da capacidade de respira,,:!:o aer6bica e £otos ai'ntese. Alguns desses o1:'ganismos rnaiores teriam s e tornado simbiontes apenas com bacto!irias aar6bicas, e outros, all!m dessa !limbiose, r e afi za r arnvna ta=bern com aquelesorganis:rnos fotossint.etizantes prin1.itivos, tidos como algas a.mia. Quem sabe s e 0 priIneiro tlpo de aimbionte (unicelula.r maia bact~ria aer6bica) tenha sido 0 pre curs 0 r do s animais e 0 outr a (re lac ionadoks algas prjmitivas) te nha side 0 precursor dOB demais vegetais ... (Fig. 3). E muito interessante a compara~:!:o entre a eat'rutur a de urna alga azul corn a do c1oroplasto (cap. 5) e a de urna bact6ria corn a da mitocOndria (cap. 5).

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rig. 3. Esquema mos rr-ando as possibilidades de origero dos di ferentes 1'einos. No"tem que a ol"igem dos anima is (8) 0(;01."l' ""i a no momento da unHio do "unicelular" primi tivo (2) com as bact:!!rias aer6bicas (1), enquarrto na ol."igem do s vegetais (7), alem daquela uniao. ocor-r-er-Ia tambem a uniao com algas primitivas (6).

Algas azuis e bact~rias nilo apre8entamum ntic le o t{pieo. Seu material genetico e constituido de DNA e 0 seu processo de s{ntese proteica (, realizado pelos ribossoTl1oS espalhados nil. massa citoplasrn1i.tica. 0 cloroplasto e a :rnitocOndria, estruturas da. fotoss!ntese e CIa respira-;ll:o aer6bica, tamb€m apre,sentam DNA, all!m de po s aut r-ern um sistema de s!'ntese proteica em sua e m.atrizeB, on de ta=blim pod ern ser observados rtbossomos. Portanto, ha urn grande paralelismo estrutural entre os elementos cornparados, a que favorece a idliia sirnbiOntica. MitocOndrias e cloroplastos poderialU, entlo, tel' s ido , em teITlpOB remotos, organismos !ivrea, como 0 sRo hoje a" bacteria .. e as algas altuis.

Nl10 devernos nos ee que ce r dos vi1'US que, ape sa r de na:o po sBufrern estrutura celular, apresentam uma conBtltui<.ito gen€tica definida. Alguns tipos de virus possuen'l 0 DNA cOYnO rr"aterial heredit'rio, outros 0 RNA, apresentando, portanto, as propriedades de auto-duplica<;lto e muta'i io, cara.cter!aticas e a aenciais para serem cone ide r ado s vivos. Entretanto, as vfr-o.e 56 consegue m 1; .. prod uzir - s e dentro de outro 8 or gani s mos. Da{ sere m exclusiva-rnente parasitas intracelulareB. A e Btrutura simples de urn viruB leva-nos a a.c r ed rta r "In Sua exisU!ncia me5rno antes de s e terem originado o s organisrrlos unicelulares mais simple s , Ap6B 0 aparecimento dest .. s , OB vfr us teriam se tornado parasitas.

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DIFERENyAS ENTRE CELULAS ANn.tAIS E VEGETAIS

As celulas animaia e vegetais slio muito semelhantes, principalmente no aapecto fisie16gico. Evidenteznente n![o ha fotossrntese nOB animais, como nllo h>i. organizao;;110 aernelhante a o tecido nerVOSO nOB vegetai s , Existem algumas difereno;;as morfo- 16 gtcas , mtid as" 0 que e inte res s ante ,Bali enta r,

A membrana na s celulas vegetais ap r es enra s errip r e celulose c orrro camada externa e pectina como cimento entre elas (lamela >nedia). Na s ct!luLas an.iJnais, quando h:!i outras membranas aHlln da pt a s rna ri c a, elas G:io muciLaginoaas ou quitinosas.

No citorfl.asma encontramos murtaa difereno;;as. Asstm, 0 ret{=~o ewiopt.asroatico da celula vegetal e muito maiB rico em va. cuolos que 0 d a s animais; a quantidade de mitoaondl"ias e pibo9somOS em geral e sempre menornas celulas vegetais,se b-ern que as ceIula s me ristematicas ve getais sejam rieas em r-i bo s a orrro e : 0 compl.exo de Got.gi acha-se s ernp r e fragmentado na s cHulas vegetais, na ior,ma de dictiosflomos; nas celulaa vegetais ha oa pZa8tos (as plantas so ao autotrofa s J, or ganulo 5 que nl'! 0 exi stem na s c elula s anin"lais (os anhnais sllo heter6trofos); os cf top la arrra s de celuLaG vegetais vizinhas acham-se geralmente intercorrlunicados pOl' meio

de prolong a rn errtoa que at r aves s am as m.embranas, os plaenodee'~o.r. (Fig. 4), 0 que nao oc o r r e em celulas anirnai.s: aqlli a que pode haver sao des'lIo88omos (Fig. 5), que perrnitem rnai o r uuillo entre as cHulas. Na P1i.toue das c el.ule.s veget:;.is n~o hf.. centrlolo no apa r e lho rnitotico; a c it oc Ine s e eeentri'fuga e, ua metafase, c s eromossomos distribuem - s e ao longo de todo 0 plano equatorial, lormandc urn a ptac a , Nas celulae animais, ao c ont rji r i o, hi c ent rfol c, a

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Fig.~. Esquema mostrando urna celula vegetal com suas ult<'a-estx'uturas e relaqi5es intereell.llares, uu = nucleolo; n = n6cleo, emn

~?-~<_ rela~ao da memb~na externa da r.arioteca com 0 ret1culo endoplasm~tieo; po = per-o da cario'tccO!.; [.,1 = plasto; v =- vacrio Lo (entre as nerabr-anas do reticule); d " dv .. dictiossomo (,"omplexo de Gdgi); er '" e"gOlst<.lpla.5ma· gp " par-t ie uLas de. gordura; i = inclus6es; m = mit<lcondr-La ; mp = membrana i.,lasmB t Ica ; P ; i>laslRode5mO; pe " espa.;;o entre a membr-ana pl.a;;ma-tica e d. ,~e lulos Ica (seg,mdo Ell'!'! r }, (Reprociuzid.) de Bio~ogf_a Ce ~llZ.fa' de Je R,)",er'tis, NOI{ins k: i .. ~ae z , © 1'165, corn a U't(_·-

_"""'~i'K::o" riza~ao des au to!'es e d<l ~,,"a editara "1::1 At enso", PeaTe) G,,~!a s. _~. )

citocinese e centr{peta (estrangulamento), e nilrnetafase OB c r e . rnossomoe ti!m dis tribui«a:o periferica, em c o r oa , Nas ceiiulas vegetaL;; comurnente enconeramos Inc lus ces de minerais, eom Io r rna s multo ti'picas denominadas drnsas, 'l'&fides e cistOUto6 (Fig. 6). Esses elementos n1ro vivos encontrados nas celulas, junta ment.e com ac6.mulos de c e r ta s subsrjlnci as , c ons ri tu ern 0 que s e chama pa-raplasma.

ESTRUTURA DA CE:LULA

Vejamos agora, num plano muito g e r al, as partes Iundamentai s da celula;

A memb-rana pZa$maticra e a envoit6rio p r ot et o r da c etul a . Sua c ompos! ~:lo qui'mi cae lipo - p:rott\ica. El a e res pons a vel p ela c Onten<;t'1o do citoplasma, bern como pela permeabilidade c alula r , E illvisi'vel ao mrc r o scopio optico, mas sua pr es enca pode s e r deduzida at r aves da di£erenc;a entre os i'ndices de refra .. a:o que taxiste~ no c i top l as ma e 0 m ei o c i rcunjac ent e, Nas celulas vcgetais,

T~l~f~

fig. 5. Esquema geral das dife- I':. til' ~ <oJ.

rencia~oes da membrana p1asmaric8 I \\j I

e sua s 1'e1a<;:065 intercelular>e5 ,~:U=~L~l~:::I __ -;:-.}._jU!l_

(segundo ralOcett). A = mic!'ovilo- 'rA-' -t '_ <-

sidade:;) das dHulas Ln t e s t Lna La ; B -- mv = microvilosida.des; til tonofibrilas citoplasmaticas; C e D = d€SIDOSSOmoS em celulas epiteHaie; E "inte<,digita<;:oes entl'e celulas vizinhas; F = sspecializa<;1l.o da base cia c1Hula. consti-

tuindo invagina~ao, ~s vezes com ~C~ ~~~~ ~=-~'_-4

forma de tabiq~es em c~u1as dDs t6bu1oS renals. (Reprnduzido de stotoata Cel.ula» de De Robert is , N<lwin;ki e Sae z , © 1965, corn autoriza9Bo dos autoras e da casa editora "E1 Atene<l", Pedro Garcia S.A. )

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Fig. 6. II esquerda vemos dru:;a:;: incluJ:das na cHula vegetal e, a direi'ta, rafides (:v) (segundo Hegi a Schenk).

al ern da membrana plasmatic a, ha urn segundo envoltorio, que fica por fora dela e e "spes so e bern vislvel: a parede celular.

o oitopZa8llla e toda por~ao celular s i tua da entre a membrana plaamatica e 0 nucieo. it c ona ti tufdo por urrra por<;;iio p ou c o dif er enctada, chamada ci toplaema jUndamenta Z ·OU hia lop ~a8ma> que e ba s ta nt e fluida; urna porr,;:to cons tttufda por o;r>ganuZo8 ou aorpus=Zos aelulares; e ainda pOT varias inclusOes. 0 hta lopl as ma ap r e s enta-se opticamente homo ganeo, A sua zona rnaf a periferica e maia compacta, achando-ae no estado de pZaemageZ, e e qua se d esp rovida de o r ganul.os , E chamada eatoplasma. A zona mai8 I nt e r na , que .. sta em contacto Com 0 nucleo, e rica em orgl1nulos e achaBe num es ta do de plasmasol, Benda rn ai s fluida. E chamada endoplasma. Dentre as dHerencia~5es e organulos encontrados no c itopLas m.a tern os:

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1. Ret{~lo endopl.demat-ioo , E urn c oojunto de rn ernb r a na s reef.cuta r es que delimitam espac,;os e vacfiol oa , Bsta diferencia<;;lto citoplal:imatica e importante no transporte de parti'culas e no. ci r· culac,;lJo intracelular. Ela serve de suporte m ec aru c o para certaB rea~~e .. importantes e data a cetula de urna superffcie interna de euo rrn ee dirnens6ee, em relac,;llo ao s eu p ez'frn et r o ,

2. El'gaatoplaBma. i; a conjunto de regil5es especiais do retIculo, naG quais Sa encontram a n e'xa do s as rn e rn br arra.e griros cnamados r>iboS80Tr10S. Enos ribossom.os que ocorre a Slntese de pz-orefnas no. celula.

3. l>fitoc8ndria8 (Cond;rioma). Sito organoide!! fo r rn ado s p o r du - plaB membranae, s endo a externa lisa e a interna p r ovi da de invaginas:!'Se B. As mt toe find rias eontem todas as en,?imas nee es sari as para 0 processamento da s reac;<5es respirat6rias. :If fundarnentalmente nas mitocOndrias que a substl.ncia energhica da c.slula (ATP) Ii formada.

4. Lis08SO/1I08. 530 pequenos organoides c oris zit'ufdo s po r rn errr'b r a na a simples, no interior da s quai.s s e ericont earn rnu it a s e nzf.rrra s digestiva.B n.ec e s s S rf a.s aoa process os de digestao intracelular.

5. Complea:;o de Go 19i. Sl(O estrutu:ras r etrcul a r e s irregulares, formadas por m ernb r ana s e vacfiolos , Apresenta em geral urna Loc al i aa ca o espedfica na celula. E c on s i d e r-ad o como s endo urna difer"nciao;;ao do retfculo endoplasmatico, e sua fun<;;ao esta. ligada a o a r-ma e enarnent o de secres;ao celular.

6. Centro ceZula1' (Cent:r£oZo). E r ep a-e e erit ad c por urna pequena estrutura, rica em protelnas, que se evidencia durante os pro"

c e 88,0 S de divi 8lla da c ~nula animal, no cu r S 0 dos quai" de a e rrrp enh a importante pape l , poi s as Iibras do Fuao, que distribuemos erom061>0mOS para as duas c el.ul.a s-cfl Iha s , pareeem te r relao;:1io com e s e a e a trutura.

7. PtaSt08. Slio estruturas eneontradas em celula" vegetais, rnut to rica" em pigmento's, s erido 0 mai;B important., deles a cloroiila. Nos plastoB com clorofila tol-orop'laetos l , oeorre a fotos"'ntes e, que e 0 fen~meno fundamental de produ~1I:o de material organieo, a partir de agua e gas c a r-borii co, gra!;as 'It energia luminosa, que e eaptada pela dorofila.

A lem des s as dB e rene j a'S ~ es , pod ernos e fie ont r a r va~o los, que sao zonas de a ernaz.e narne nto de sub stancj aa, bern como incZ1.Iebee minerai.e , que s e apresentam sob as mat s diferentes fo r ma s . Es sea constituintes, ma i s a pa r ede c e lufa r dos ve g etafs e o s produto s secretados pela celula, constituem 0 pal'apZaS!1a, ou c onjunto de substancias mo rta s da cHula.

o nUcleo, em virtude do papel fundamental que apreaenta nos p rocessos biologicos, as sociado a hereditariedade e rno r fo « gi!nes e,. e considerado como urn dos mais importante!! componentes c .. lular es , Os rn ec arri s mo a pel oa quais 0 nucleo e xe r c e sua influineia no metaboliamo ce lu.la r "tem~se tornado ultimamente, em gr and e pa rte, COM e c i dos. E no nUcleo qu e s e enc ontra 0 rnaterisl hereditario dOl. celula, alojado emestruturas especia1s e fila:rne nto s as, que silo o s 07'0III088om08. Os cromos s omos apre s entanl-se em ni'imero, tamanho e forma conatant ea dentro decada e sp eca e, Ahlm do s c,romossomos, e.nc ont r arno s no nucleo os 1'IUO Zeo to:;; , 0 sueD nuele= e a oas-ioeeoa, que eo envoltorio nuclear que 0 separa do citoplasma.

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o esquema da figu r-a 7, a egundo B r a ch e t, pede dar - no a uma idei<\. ge r a l da o.rgani"a~a,o da celula. Evidentemente, para a elabora'iiio dessecsquema f01 necessario r eu ni r dados obtidos mediante 0 emprego de diferentes teeni.cas.

VfRUS

Antes de come'Sar a Ia la r com rna i s detalhe sobre as clif e rent e s pa rt es cons tHui rites da c elula, digamo 5 01.1 guma 5 pala v ra s sobre os vf r us , que s::to s e res vivos nao constitufdoB po r d;!Il)a9 e que talve'jI. s ejarn as e st rutu ras hoje existentes que podem s e r comparadas c om aquela partlcula elementar que s upu s e rno s ser a origem da vida. Os vfrus representam a menor m a s s a viva conhecl da e nila podem viver por si s6s, porque n:to ap r es entam enzimaB neceS'5ariaa para a produ'iao da energia de que p r-e ci s arn , Devern entao ser sempre paraaitaa.

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fig. 7. Esquema ger-a L de urn" oelula, rnostrando todas as estI'utl.lr-as Iltraves dos dados obtidos pe.La reuniao de diferent .. s t.>Cnicas. (El-n: "The Living Cell" de J. Brachet, Sci. 11m. 205, 3, ptlr.- 5~. setembr.o 1"161. Repr-oduzado com autorizll<;~o. Direitos .res~nrad"s, © 1961, pe l,a se ientific American Inc.)

o v{rus e 0 s er vi vo ma i s elemental' qu .. s e c onh e c e. E c ons t de r ado s e r vivo, por ap r e s enta r as prop r te dade s de auto- r ep rodu~llo e mutaorlio,8 e bern que alguns de l e s pas sam s e r c r isra'ri z adcs , fo r rna ndo c r'i sca.i s bastante :regulaTes. A m ato r parte do conhecimento sabre o s vlrus provem do e s tudo daqu e le s que pa-

rasitam e lisam bacterias (virus baateri6fago8, descobertos par D'Herelle).Eles s[o cons tituldos fundamentalmente par um envorrorio pr ot et c o , que contem no S eu interior acido nuclei co, 0 qual pode s e r 0 DNA ou 0 RNA, ou ainda os dois podem a.cha r c s e presentee. Essa composi f';o qu{mica e s ern .. lhante ados CrOnl0SSOInOS, S e b ern que as propor"r.e8 ent.r e as sub,atiinci.as eo a eu a r ranjo S eja.m diferentes. 0 <icido nucl';ico e 0 material hereditado doe virus. Quando h!i DNA, e ele tal material; e, nos casas de vfr us de RNA, e s re 0 sera.

Um v{rus, ac par-as ttaz-urna cetu la, Inj eta nela somente 0 s eu ;icido nuc l et co, ficando 0 ellVoltorio proteico, com 0 qual e Le s e ligara a celula, para fora. No interior da celula 0 ;icido nuc l ei c o s e duplica varias v e z e s , as exp ensa s do material da eeltlla, e forma varias envalt6rios p r ot ei co s., constituindo nOvOS vfrus. A diIul a e Ii sa da (morre) eos vfrus nela [armadas saolibertados, indo parasitar novas celulas , Em alguns casas 0 vfrus fica no interior da cEllula, s em c aus a r -Lh e dana algum. Nesses c a so s ele e cha:mado profago; ou, a s veze8, 0 DNA doviru9 pode-ae Hgar ao CTOmoSao'mo da. celwa, constituindo urn epiosomo:

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o NfiCLEO

D .. "de 1833 0 nric l e o e considerado COOlO elernento constant e cia celula e tern s i do intensamente e st uda do. Durante 08 processos de d iv i s a o celular, 0 noc1eo passa po r urn a curiosa serie de modiI'_ ca";:;e,, de estrutura que prenderarn a ateo,,:to do s c it ot cgf st a a e £izel"arn com que a car-ioloqia [e at u d o do nucleo) s e des envolves s e c on s i de r av-e Irrre ne e antes que 0 e st c do do citoplasma tomasse impul e 0 equivalent e.

Todo ndc l e o e formado pela divisa:o de outro, preexistente.

Na maioria dos casos, mas nem s errrpr e , a multiplicao;:a:o do nuc1eo relaciona-se com a d iv i sa o c e Iu la r , Em muitos pr ot oz oa.r i ce, por e.x e'rm pd.c , 0 nucleo divide-se e a celula n;to, {icando a s a irri multinucleada, A divisa:o do nucleo e acompanhada de processos Complicados nos quais tarnbern entram componentes cltoplasmaticos, Quando 0 ntic l e c na o se esta dividindo recebe ° nome de inte't'ffisico ou metab6l.iao, pois e nessa fase que "1,, se encontra ern grande at i-. vidade £unc i orra.L,

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Alguns or ganistrl os infe riores J "In vez de wn nocleo tfpie 0 e bern deiinido, pos s uero gr~nuios de subst1i:ncia nuclear dispersos no cit oplasma. As bacterias apr es entam os c harnad oa 't1Uol.eoides, que representarn urna zona rne nos opac a dentro do citoplasma. No suco do nucle6ide encontram-se os c r orrro s somos da hacteria. 0 nucleoide n:io a pr e s e nt a uma c a r i ot e c a definida.

Ern grande numero de celulas a forma do nfic l e o e a pr oxlrna , dam e nt e eg{erica, nas celulas fusi!ormes ele e alongado, e is irregular em leuc 6c iros , iniu50rios, c e r ta s g11l:ndulas e etn es pe r « matozoides, 0 tamanho do ntideo Ii va r ia ve i , mas geralm .. nt e "stf< relacionado COrn 0 ta rn a.nh o da celll!a. Em ge r ed , em cel<.llas j ov e na 0 tamanho do nucleo e maior quando comparado com c,HLllas mals velhas. A rela'iiiO ext s ten.te entre 0 volume nuclear e 0 citoplasmatiCo, cb arn.a da re1a<;:::Io nUa~eo-pla,smatica, expr e s sa urn e.qu i.l.Ib r i o qu e e rrra i s OU rri en os C onstante na.e diferentes Cases do c Ic Lo de v rda da Celllla. A rn a i oz-La da s ceLulas if m o nonuc Ie a r , por em lui rnu lt a s binuclear es (c':;lulas hepaticas, carti.lagillosas,

certos pr ot oz oa r i os) e algumas polinuclear es (pcl ica r l Sc lt ca cia m edul a 6s sea, fibras mu s cul a r es , algumas algas, c eJ. ul.a s da placental. A posi".to do mict e e var ia muito de celula para celula, mas e ca r a ct e r fs tt c a para cada tipo particular. Em geral, em c el.ul ae e mbr t ona'r i.as , o cupa posi<;<lo central; naquelas em que hi grande ac6mulo de r e s e r va s , c crn o nas celulas adi posa s enOS OVOS, fica na perHeria; na s celulas g la ndule r e s e basal. 0 peso espec.lio;;o do mic Ie o e maior que 0 do citoplasma. Pal" ultracentd£uga<;lto, s eus c orrrpone nr e s s e a r-r a njarn do polo centrfiugo 210 C entr {peto na s egu int e or de m: nucleolos, cromossomos e su.c o nuc l e a r , A vise os Ida de do nLicle 0 11 muito varia vel, dependendo de s e u estado Fi s ;0- 16glco, e e pas 9 {vel de tixotl'opia (*) qu{rnica OU medi.niea. 0 pH do n6.c1 .. 0 esta ge:ralmente entre 7,6 e 7,8, s e ndo maior que 0 do citoplasma.

A e s t r-ut u r a do I1l1eleo interHLsico varia muito c onf'o r rn c o SeT consideradoe,num rn e s rn o s e r , varia nOB d if e r e nt e s t i po s de celulas e em epoea s d if e r e nt e s da vida de ca da tipo de celula. Dos s e u s crrrrrpcme nt e s, 08 que maia va rlarn BaO o s c r orno s s orn os , que s~o r e pr' e s e nra d o s , no mi c l eo Int e r1';:9ico, por granulos e fllamentos i rr egula r e s de cromatrina, mas, durante a divislio ce Iul a r , a.s s um ern forma e tamanho relativo trpicos.

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A CARIOTECA

A membrana nuclear a pr es enta uma e st r ut ur a definida e pos s ui re s is t ene ia me c3.nlca e ela s tic ida de q ue podern s er Le stada s por m tcr-orna nlpul a cao. Se, com urna microagulha, e xe r'c e rn os pressa:o sobre a c a r i oceca , ve mos que ela resiste 210 rornpimeoto, invaginas e em t or no da agulha e so com 0 aurnent o da pressao s e rompe para nao ma l s regenerar-ge.

Cras:as ao advento de tlicnicas aprimoradas. entre as quais a principal foi a mieroscopia eletrOnica, pede -sedeterminar a estrutura da ca r iotec a, Ela e co mpo ata pz-in c ipa Irnerrte de p r ore.Ina s insoIG.veise Hpldios. Es Bas subst4.n<:ias arranjam-se de ma.ne i ea que formamduas Iarrie Ia s , as quais deixam entre si um espa<;o perinuclear. As Ia me la s 830 interrotnpidas po r descontinuidades circulares (po:t'os), na s borda" da s quais as dua a Ia me Ia s ae une m, 0 e squema da Iigura 8 mostra eOITlO 11 a membrana nuclear. Pda microscopia eletrOnica d e rnorrs t ro uv e e tarnhem que a lamela extez-na da c a r io , tee a relaeiona- s e com 0 retfculo endoplasmatico. As duaB Ia me Ia s

(*) Transforrna<;:lto do estado geZ do coloide citoplasmatico a sol e vice -v e r e a,

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140

._______.

o"Jl

Fig. B. Estl'utUI'Ol dOl caI'ioteca. Esquema mostrando a membran" Gupl" em t:r'Gs dimensoes. Na a1tUI'<l des POI'OS vii-sa (> "annu11i". COv6cito dOl ",nfib Lo segundo A.f z.",lius . )( Repl:'oduz ido de Ci t"Z Of1iQ C.,11.e=!. de De Robertis, Nowinski e Sa .. z , © 1963, com au tor-azacjio dos autoroe,; e da ca sa ed.i tor-a "E.l Ateneo", Pedro Gar'c.l.a S.h.)

COrn a c a v i da d e perinuclear Eu nc i c na rri como urrra cisterna adjacent e a s u pe r ffc i e do ruic l e o. Ea s a continuidade entre a carioteca e as Ia m e l.a.e do r erfc ul o perrnitiria uma c orre1a<;:lo dinamica. e nt r a ,0 ruic Leo e 0 c i t o.pl a s ma ,

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A c a r l ot e c a e permeivel a grande numero de s ubs t anc Ia s , como sais, ao;o.cares, polipeptfdios e p r ot efna s . A demonsr r a~:ro de que a carioteca e permeave1 a protefnas, que sS:o rno1<;cu1a" de grande peso molecular, foi Ie it a principalrnente corn enzirnas. Brachet (1955, 1956) inj etou, no c it opla srna de amebas, ribonuclease {pl' 0_ terna eriz irn at ic a que tem a~;!o "spec (fica sobre 0 RNA, e c ujo PM e 13.000), notando que 0 nudeo ja manifesta aitera<;:1les 15 minutos depois, 0 que evidencia que a e nz irna deve ac ha r c s e no s eu interior. Celulas de raiz de c .. bola t r at ada s com a. rn e s ro a enzima e x ib e rn de sa pa r-ec irn erit o da corabiHdade do nuc.l e ol o (que €: rico em RNA) pela pironina, UlTJa. b or a depois, mostrando que 0 nude- 010 foi alterado e que, portanto, a enzima e nt r ou do cit opl a s rrra pa.'a 0 mic l e o ,

NUCLEOPLASMA

o estudo da e s t r ut u r a bas i c a do citoplasma tern pr og r e di do muito nOS (iltirnos anos, p01:.hn do nuc l eopla srn a qua s e na da foi e srudadc. Is s o esra ligado a o fato de ale nao pas s u i r' elementos altarnente organizados, como poa au.i 0 citoplasma. Geralmente 0 que Be v@ a.o m.icrosc6pioeletrOnico, no nucleo internslco, sa:opequena s granulac;1les entre o s espa~os cromo!lsl'lTnicos. .Pa re ce m

e xj at i r no nuc Ie o pl a sma regioes de mas s a s ma.rs densas entr e outras de rrreno r densi.dade. As granuia9(!es e nc ontradas no nudeoloplasma ae r Iarn talvez rib08S0rnOS nucleares, porem na o s e pode afinnar que s ejarn identicoB aOB c it opka s mat ic oe ,

ESTRUTlJRA DO NUCLEOLO

Na celula viva 0 nucleol0 pode ser facilmente v iat,o, gra<;as a sua alta reiring&ncia. E"sa grande re£ringencia eata ligada a uma grande quantidade de material ne l e presente. 0 nuc Ie'ol o apresentas e c ons cit ufd o principalmente pOl' prote(nas e RNA. Estruturalrnente e Ie parece s e r- eonstiturdo pOl' duas por<;<'Ies blisieas: uma parte amor£a {pars amor£a} e uma iilarnentosa, o nucleolonema. A figura 9 rn o at r a a estrutura donucleolo, segundo Estable e Sotelo, 1951. 0 nucleolonema na o apresenta urn a estrut"ra definida, sendo i s s o a causa da grande varia-r<!o na forma do nuc Ie ol o, A parte amorfa seria talvez; 0 proprio nu<:leoplasma que pe ne t r a r Ia nucleola a dent r o , Ha dados r e c e'nt.e s que parecem mostrar, pelo rn e no s em ov Sc Ieos de anfibiosJ a pr e s e nc a de DNA 110 nuc Ieo lo.

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Fig. 9. Fotografia do nuel eolo, mostrando a sua estrutur'a, segundo Estable e Sotelo. nu ; nucleolonema; ns = pa~te amorfa, (Rep~oduzido de Citolog!a Genera~ de De Rober-t Ls , Nowinski e Saez, © 1963, com autoriza~ao dos autores e da cas a edi tOl'a "£1 Arenec " , Ped~o Garcia S.A.)

o a s peor o da estrutura do nuc l eofo pode a pr e s ent a.r Val' ia<;:a: 0, conforme 0 estado da vida da c e l ul.a , sendo normalmente 0 mesmo para dilulas de um rn e s m o tecido, na mesma f'a.s e do des envotvf,rn e nt o,

Mala recenternente, erotudo6 realizados corn 0 auxilio do rnt-. eroae6pio eletrOnico •. a-p6s a aplica .. «o de t6enieaa :mais so£iatiea~ da s , cone luiu- seq ue 06 nuc l~o 10 6 S lIoe on 6 titul'dos fundamentalmente pOl" quarr c elementos ~ g:ranu~os, fib-riZas (ambos rieos e m prot, e fua e RNA), parte amor fa (rica em prot. .. rnaa) .. ol'(lmat:ina ass(l<liada, que COrl"eaponde a por~l5ea crOffiOSBOmicas desespiralizadas da regilo organ.izadora do nuel6010 (RON) (Fig. 10) .

<,

......... C,.a.

Coot

liON

Fig. 10. Esquema representando a ultraestrutura do nucleolo em correla<;ao cern a sua ROI"- Gl"a. " granules; fil. " fibl"i~ las; p , a. " par-t e amo~'fa; cr-omt , assoc. " cz-omat; ina asoe iada; ero. " cromossorno;cent. " centrrnnero; H.p. " heterocromati~ na prima ria • No mornento que a RON oonderiaa , durante a d ivisao cel u 1a!' (p!'i5f.sse), 0 nuo18010 Ole esbo!'oa.

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Durante a mitos a, proces so de divi66:0 c e.Iu'la r , 01> nuel601oa

pa.ssarn pOl' rnudan<;as tfpioas, des apa r e ce ndo na pr6iase. enquanto

o s c rorno s s orno a s e evtdericta rn, sendo reorganizados no varrrerrte na te16fase, quando 08 oromos 80=08 1'1:1:0 desconde.rl8adol'l (ver mtto ae ), Exil'lte rela~lto entre 0 nucl6010 e certo crornOBBO:m.o. Esse crOmOB- 60mO especial acha-se ligado ao nuel~olo atraves de uma regia:o especial, chamada r'egi£lo organizad.ora de nucleolo (RON). .It a partir dessa zona, d e s e e c:<om0880=0 especia.l. que 0 nucH!=olo se forma na te16fase.

CROMOSSOMO

Os c r OJn'Os B om os, no mic l.e-o em interfase, sao rep. a'S errt a do s

por longes filament os ql1e poss uem es-pea!lura rn u ito paquena, que eata abaixo da visibitidade ao m ic ros c Spi o 6ptico comum .. Porem, em certas ,agiOes, e s .. es Hos achamvs e mais c onde ns a dos , oqut! t oz na -posafve1 a sua deteco;.a:o apo .. colorat;a:o. A esse material eromoss8mico que se v~ na interfase de norn i na'm os c r orriat ina , Durante a d;,visao do nucLeo 05 finos fil,amentoB c r orrios s errri co a e videnciarn - s e, conde» 5 ando - 5 e po r es pi rali.zao;~o, 0 que faz com

que e.l e s s e t or ne rn be m vlslveis. A c ondensa cao emaxima durante a metafase, sendo elisa a melhor fase para 0 estudo dOB c r om os s om os ,

Os c r orn ce s orn os sz o as estruturas r e s pons a've l s pela transm is s.'Io da s cara.cterlsticas he r edirar laa, pois a o Jong o dele 5 enc ont r arn e a e as genes. Na s dilulas do <:orpo de qualquer ser, encontramos urn mirne r o de c r orn o s s crn oa definido e c a r-ac te r Ist ic o da especie, que.§ representado pOl' 2n., e e dito diploid", pOl' e xi s t i r e rn doi a a doi s , pares de cr-om oe s omoa que 5e correspondem, apresentando a mesma seqiiGncia de genes e charnados oromoe-. SO>1!08 nanuflogo8. Para 0 homem 0 numero 2/1. de c r ornoasornos e igual a 46 (Fig. II), para a DztosophiZa melanoqasber (urna das rn os c a s das fr ura s ] e 8, para a cebola e 16. Ease numero Zn. e e nc ont r a do em t oda s &6 celLllas s omat ica s e na.s germinativas que a i nda nao, sofreram rrre i o s e , Estas U1t;rnas c el ul a s por melo do pr oc e s s o de meiose, or igtnarn as gam etas , que a pr e s e nt arn ntim e-. 1'0 c r om os s Sm lc c igual a n, au haploide, havendo ne Le s e orne nte um dos c r om os aom os hom Sl og os de ca.da par. 0 mime r o ha pl Si de de c rorrios s crnos recebe 0 nome de geMma cia e s pec ie , Ent~o, 110 hornem, 0 g enoma e represelltado pOl' 23 c r orn os s om os ; na D. me"lanogast;er-, 4; na cebola, 8. Os gam era s [e s pe r-rna.t oz Srde e ovulo, para os animais), a o se r-e un i r e rn , reconstituem 0 niimero d i pl Si de na c,Hula ovo ou z i got o ,

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o tarna nho dos cromossomos va r i a multo entre os diver- 80S organl8mos, e rn e s m o nurn a umc a celula tern tamanhos di£erentes. A medida dos c r cm os s ornos e s ernpr e fe it.a durante a metafase da m it o s e , quando et e s apresentam 0 s e u maximo de c ond e ns ac a o, a e nd o portanto rna is ev td enr e s , Os c r omos s omos mit6tico.s de D:roosophi La Urn. de 3 a 5lTlicl'OlTletros (1 iJ.m>= 1/ 1000 rnrnJ. Oil do homem em torno de 4 a 10 um, Hoi casos excepcionais em que os cromossomos sa:o muito grandes, recebendo 0 nome de gigantes, como 05 plumul.adoe dos ov6citos de anffbtos , que t~m ate 800 urn de cornprimento. e· os politenioo8 d os d{pteros, que tern de 150 a 250 micr1'imetroll.

Ao conjunto dos da d os r e lat i vos a o ta.ma nho, forma e ntirn e r o de c r-omo s s omoe de um a e s p e ci e , cha marno s de oaPiotipo da e spec ie ,

a) Estr-utura dOll C~omossornos

o c r cm os s orn o Ii 0 e Lern ent o c erula r rrre l h.o.r e s cu da d o e pode s e r definido qufmrca, g enet Ic a e cito16gicamente.

Quimioamente 0 c r crn o s s orn o e c onst itufd o po r <'Icidos nuc l e i - cos e pz ot e Ina s . Os s eu s c orn pone nt.e s rrva i a abundantes sao 0 DNA (icido de s oxt s r ibonucIe tc o) e as pr oeefna s basicas do t i po histona

fig. 11. Em aima: c);'omossomos humanos , de celula de c u Lt.ur-a de leuc6~itos. Coutam-se 22 pares de a~tossomos, urn X e urn Y. Embai$o: cromossomos humanos normais ap6s montagem fotografica mOS"trando juntos 0$ pro va veas par-as de homiSlogos (segundo CestarO.

(as hj s t oria s sao especialmente abundantes durante as Ea s e s de condensa<;ao). 0 RNA (acicio ribonucleicole as prote(nas acidas (protei"na cromoss8mica e residual) e xi st e m em, qua.nr i dade menor e

31

rna is va r rav et , conforme a atividade da c "lula. As proteLnas acidas predominam na intiirfase.

o DNA e 0 constituinte Iundarne nta.l do gene. Ele is fo r rria d o por moleculas de ;icido fodorico, ascucar (a desoxi-ribose, que e uma pentose) e dois tipos de bas e s nitrogenadas: as purlnicas (adenina e guanina) e as pirimidrnicas (citosina e timina). 0 c onjunr o de urna base com 0 a«ucar forma 0 que se chama nuol.ede-ide , 0 nucleoside mais a acido fosi6rico forma urn nucleotide. 0 arranjo estrucur a.l dessas subst:incias (determinado par Watson e Crick, 1953, par meio da aplica<;a:o de rr.etodos de difra<;a:o com Ra i o X) se faz de manetr a que surjam dua s e s pt e a i.s helicoidais, formadas par sequandas de a<;:ucar e lie ido fos£orico. 0 ;icido £05f6r ic o liga dua s m ol eculaa de pentose, de tal mane ira que s e prende no carbono 3 de u rn a e nO 5 da s egu i nt et depois, no carbono 3 desta e no 5 de outra, e as s irn par d ia.nt e , As bases ligam -se a o carbono 1 da pentos e Lat ex a Irn e.nr e , As dua a e s p i r a i a heHcoidais (pentose e a:cidofosforico) poder iam se r c crnpar-ada s ao s corrimoe s de urna, es ca da ern espiral, enquanto os deg'ral,lS S er lam r e pr e s ent a dos pe Ia a bas .. s , As bases ligam-se entre a i por melode pontes de hidrogenio, de tal modo que s e de urn lado da helice t iv e r m oa adanina, do outro teremos timina; s e for g ua m na , do out r o sera citosina. Entao a liga<;:ao entre as

32 h"lices e s ern pr e feita atraves da s bases adenina-timina e c lt o s i « na-guanina. Ao Longo de toda a molecula ha uma c or r es poudancta perfeita entre e s e as ba e e s , A figura 12 Ynostra urn esquema da

f's- .... -n T s-C----n- 1>,

",-Tn

P,S

rig. 12. Esquema da estrutul'OI em dupia helice do DNA, segundo WatsonCrick. S = ac;i'ica,' (desoxirribose); p ; ~cido fosf6rico; A = adenins; T = timina; G ~ guanina; C ~ ci~osina; H = hidrog@nio; PSA = nucleotide; SA " nuc~eoside. (Reproduzido de The ce n de Cal'~ P. Swanson. © 1950. COY'tes:ia de Prentice-Hall, Inc. Englewood Cliffs, Nova Jersey, Estados Unidos , )

mo lecula de DNA. Quando a mol~cula de DNA 6e dupktca , h,{ separa"l'to gradativa das e spl ra Is , que aos poueos 80l vlo novarriente compietando, g l'a'i'as a o s p recur sore" exis terrte a na c Uula (F ig. 13 J. A complernentac;:tto vai-se fazendo obedecendo ao pareamento entre as bases c:orrespondentes (Fig. 14).

rid. 13. Esquema da duplic:ag§o do DNA. A = molecula inicjal do DNA; B = as espirais separam-se gradativamente e as partes simples '1110- se comp1etando (C) , 1igando-sa sempre A aTe C a G, ate surgirem duas novas moleculas (D).

A

3J

T

o

T

OUPliCACAO DO DNA
.T, A A T A T
" A T./ .,-
......
~~' ~" ./
'~T T A T A
T .... v/ A G C G C
G C
r~1 A T A+T A
? -----?-
G C G C G
G C G C G
T A T A T G T

c c

A

A G A

rig. 14. Esquema da duplica~ao do DNA. A ~ adenina; T = tlmlna; C cd tosina; G guan.ina . Notal' 0 par-eemerrto de A com T e de C com G e vice-versa.

A rna ne i r-a pela qual os diferentes componente s do cromosso.rrro s e retmem e s truturalmente (ol'qui'tet;ura ('romosni5miaa) ainda e o bje to do cl6.vida. Muito s e tern di s cuetdo a esse r e s pe i to, e pe- 1a reuniA:o dos da do s bioqu!micos a os achados co:m 0 microsc6pio elehanico puderarn s e r- propostos v.:{rios e aquerna e de como sedam constitu!dos os c r-orrio s s nrrio s , A figura 15 mos tr-a alguns clesses rnocle Io s ,

34

o

rig. 15. Esq uemas moe rr-ando dife(',mtes pcse ibilidade s de aSSOG ia.;ao entre DNA (espire is) e p1'Oteinas na es tl'U t UN do cr-ornos somo (.seg,mdo Taylor). EIo: Sci. Am. pag. 42, jLUlho 1958. Reproduzida com ,1Uto:t'iza<;ao. lJireitos resel'vados> © 1958, pol" Scientific American I'nc •• )

Mais re c enre rnenee , principalmente ap6s os trabalhos do grupo de Du Praw iniciados no firn da d~cada de 60, trnagtnavs e que mesmo nos eucariotos. 0 cromossorno seja constitufdo por urna (tnica =01<;cu1a de DNA, a qual s e ac ha super especializada e anexada a molee u la s de protefnas b~sicaB (hie tona s ), Ver as figuras 16 e 17.

Genetricamentie 0 c r-orno s s orno s e r ia urria suc e s sa c lineal' de geJH~!i, cxj.s ttndo entre dois deles, numa e e r ta regiao, Unl ".mtr(Jmcl'o (ou c i neroc or o}, Admite-se que 0 c e nt r-Brn e r c Loc a l.i z.a s a e s ern pr e entre doi s genes, porque na o se pBdc a irida d ern ons t r a r a sua ext st enc ia na pont a do c r omos s omo, unde existe urn a r eg la o c harna da telBme1'O, a qual impediria que as e xr r errri da de s do c r c» mOS50mo s e fundissern.

Cito"logi.elll7lent;e os c rom os s ornos aa o longos f i l a rrre ntoa , que durante a i nt e r Ia s e s e apresentam distendidos e e rrra r a n ha d o s no

INTERFASE

nucleossomo

Fig. 15. (;.:,n f(1l'm~ "''' 'tN;'b"'l nos d", [~~ !'r\'l'" e Be u g_'PtJpO" e:,5"t('l. ,eo a f:i.gur'a que ;:e oooer·va i.1 .. cromos somos l!let'of§si~cf3. vistas ao J[]j_crosc5p;ic. eletrCllj<: Q ap6::;; mon t,,agem t.:.:.t·=ll d.:JS me·s'm)C, s.~gu i.da por- 1:1'" t.arnarrt o s i6ni:.;os e enzimati\:':J~ esr'_:\ciais. 0 11iam~t'r,:. de fibr .. Fu ndem .. r.;1:al .-j,.

<Ol"omO';;S01Tl'~ (~Llpe.rP.'s pi-

raliza,;;a(» r-are",,,, ,,"'1- de cer-ca .ie 300 A, 'I " h i s tone .

METAFASE

35

dobr arnen+o em aicas

rig, 17. Esquema <'III P<lEls1vel organiza"ao eS'trutural do C:I'Omosscmo, apes", tr",balho de Laenmli (1977).

interior do n(ideo e dificilmente observaveis. ou diferenciados e ev id ent e s (condensados) durante a divf sa o c e luta r , podendo entao extbiv diferentes form as: gntnu1os, oa st onet e s , a1<;as. A condensa<;a'o dos c r orn os e om os durante a divislIO de ve--s e a urn proeesso de espiraliza<;3:o dos filamentos, que ae i n ic i a na s pr lrn e tr-a s f'a s e s de d lv i s a o , eulminando nil. III eta fa" e. Nil. ana£a" e e t e16fas e 0 proc e s s o se i nve r t e e des volrarn a apr esentar - Be como l ong os I'i o s nosnovosnucleos, Ha varies t i po s de e s pi'r a i s que determinam a condensa<;40 dos c r cmos s amos: i) espiral molecular au 6lJtruturaZ. i.nvlervel 11.0 rrdcroacopio co rrrurri, que seria urna consequeneia da estrutura do s c r ornos s o mcs ; il) espiral inte1'1la menol', que s eria a e api r a l respol\savel pel a conde nl:la<;:r:o dos c r o mo s Barnas durante a mitos e; iii) espiraZ int6l'11a maio'!', que existiria ao lado da menor, durante 08 processos mei6tico8 nos quais as c r omos e omos se acham maia c onde naa.dos que nos mitoticos; iv) Bspiral l'el.aaionat, que aparece durante as lases finaiB da profase I da rne'i os e, apos 0 pareamenta doa c romOS1:I0=05 h crnfikc gos , as quaiS Sa asUlo c o nde n.s a.nd o, e e sta espiral faz com que as hcrnfitogc s se enrolem entre si.

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Na o sa:o t oda s as partes do c r om os s om o que se condensam a o rn e szno tempo. Ha: zonas que ja durante a interfase s e a pe e s e nt a rn c on de n s a da s , Em g e ra l "5 sa S Zona s ac harn _Se a o r edor da zona do centr6mero. Es s a c ondansa ca o pr e c oc e foi derrcrn i na da lu>it<ll"opicrIOse, e pa s s ou-cs e a a drn it i r a existencia de dais t ipos de cromatina no c r orno.s s o mot a e!<cromat'ina, que seria aquela com condensac;:ao tardia (durante a divisao), e a hetierooromabina, que e xi , biria a hez e r opic nos e , Hoj e as c onc e it os de e uc r orn at i'na e heterocromatina s ao rnai s ctar-os e r efe r ernvs e ao s rne s rrro s t i pos de estrutura com diferentes g r aus de c ondensa cao. A euc e ornat ina a c ha s s e distendida na intedase e c ond e ns a s s e durante a mitose; a heteroc romatina ac ha s-s e condensada i' nil. interlas e, e durante a mit o s e nlIo s e altera.

b) Centromero ou Cinet6coro

o c e nt r Brn e r o g u rri a regiltodo c r ornoa s orno que em geral s e acha Ioc al iz ada entre dais bl oc os de heterocromatina e que tern gral1- de irnpor tanc ill. durante a mit os e, pais e atralTes do eentr6mer a que os c r om os s orn os s e prendem as fibras do f'us o, Sem centrorn e r o 08 c r om cs s crrros seriam perdidos, durante a divisao, poi s sao as Ei b r a s do [LIsa que as distribuem para as celulas filhas.

Nor ma lrnent e cada c r orn os s orn o apr s senta so urn centr8n,ero, que s e localiza nurna conatr Ic c ao, a qual pade s e r bern observada na metafase; ne s s a oc a s i ao os c r om os s orn os acharrr-e e bern cond e ns a doa , A c on.s t r ic c a c em que ocentrl'lmero s e Ioca It aa chama-se primaria ou centromerica. Em alguns c a s os e>ccepcionais, porem.

pode have>: centr6meros multiplos ou pol ic e nc r Ic os , como ac ont ec e no A.<:::caxois e em c e r t oa he mfpt e r c s ..

Como c a.da. c r-orrrc.s s orrio tern ern g e'r a I urn .. 6 centromero, a sua posi.,.a:o v,ai deterrninar a forma do c r orn oe s orn o ap6s a sua condensa.,.ao, A forma do c.r om oaa om o e definida na rn erafa s e e anafase e pode s e r : metaeentr-toa, quando 0 c e nt r orn e r-c tern posi",a:o central e divide a c r orn o s s orn o em dais b r ac os Ig ua i s; submet=erctrica, quando urn br ac o e longe e outr o cu r t o; acrO<Ji'antricQ, quando 0 centro:rne:1'o e qua .. e ter:rninal (nunca e r e a.l.rn ent e terminal, porque na s e xt.rern i da de.a e at a o as teZ8rnerOfl), ficando 0 c.r orn o s « .s orn o com a forma de urn bastonete (Fig.IB). Ellsas formas dos c'r orn oss orn o s na o aa o fixa5, podendo haver modificaO;<'les cada VeZ que oeorre uma aherra!;a:o cromoss5mica e arr utu'r a l , que pode s e r causada por dtve rs os agentes, como irradia<;1to ou ce rta s sub.stttn~ c ias qui'm Ic a a .

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a

b

Fig. 1 B . Tipos de C1;'omossomos: a := aC1;'ooentroico; b = subme'tacen-tr>ica'; a "metacemtrica. (Reproduzida de 81;0- wgia CeLul.ar: de De Robert is • Nowinski e Saez, @ 1965, com autoriza.;;ao doa autores e de ease editora "Elllteneo", Pedro Garc1a S.A.)

Alr;n;. das constric<;l5es -prima,rias ou centrornericas. encontra ~ mas outras conat'r i c c oe.s a o longo d08 c zo mo eeo rrroa, c'ha.rriad a e s e c u nda r i a.e , que der e r rn i'narn o a pa r ec lrn e nt o de segmetltayao, que quando isoladas ria extrernidade originam 08 chamados sat,H·i·tes. EBsas zonas sarelites sao muito r i ca s em RNA, e e a, partir delas que se formam 05 nucleaias durante a tel6fase; por iSBO, elas sao c ha mada 5 rarnbern z o nas or gani z.a.do r as de nuc Ie 010 s , e a c r 0 ~ mOSS'OmO que as pas sui e 0 c r orrro s s orn.o organizador de nu c Ieo lo .

c) cromonema

Cram anema e o filamento estrutural basico do c r orrio s soma.

Quando 0 c r cro o.ss orn o se ac ha di.stendido na interla SC, a filamento que 0 r e p r e s errta s e r ia 0 c r orn orierna , Tern s i do muito di s cut i do

pe Io s c Itol.og is t as o problema do mim e r o de c r om cnema s que poderia estar pr e s e nt e ern c a da c r orno s s orn c. Para alguns organism o s e s pe cla i s , alguns a ut or e s acham que h<'i s orn ent e urn c r orn one rria por crornossomo, e ness" caso 0 cromonema representaria 0 C .0- rrr c s a orrr o , Mas para out r o s organismol.i pa r ec e m existir dois, 011 q u atr-o , Esse nu.:rnero seria 0 nfirn e e o normal de c r orn onerna s ern dllulas inter£asicas, antes da duplical;a:o do DNA. Ap6s a duplica"ao doDNA, que oc o r r e na interfase, esse nurneroduplica,·ia. Corn o ha varia .. ao no numero de c r orn o ne m a s , conf'o r me a. e s pe c i.e con s cde r a da , pode mcs , para facilidade, falar em urn corn.o mirn e ro oa s i co de c r omone ma s para c rorno s s orn oe , antes da duplica<;;ao do DNA, e em dOis, a.po s a divisao. Nao de ve rno s confun.di r c r orno ne > rna com c:rom&t;ide. Cromatide e 0 novo cromossomo, r ec Sm f or rna do, a partir da dupltc ac ac de out r o, As c r ornat i de s c.a r a ct e r-i z a'rn as novos c r orn oe s orn oe quando el e s a m da s e acham Ligados pe Ia z o na do c e nt r-Brn e r o, Dependendo do numero d", C1"omonemas do crornossomo original, as novas c r orna t i de s t e r a o c ada urna de la s e s s e rnesmo nunlero.

Ern vista dos resultados e conc lu stie s obtidos recentemente(ver Fig. 17), atualmente considera- s e lim 0 nti rne ro de c r ornone ma s do c eornc e sorno ,

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d) Ct'omOmel"'os

No l n fc i o dadivis!to c el ul a r-, quando 0 c r orno s sorno c orrre e a a see 8 piralizar, podemos obse rva r ao longo do IiI amento p equ enas granllla~Oes cromaticas,que sao constantes ern t a rri a n h o e numero para urn mesmo tipo de eelula. Essas granula!r0es sao o s 01'omomeron, que representam pequenas zonas de condensasAo ao longo cia euc r ornat+na , H~ certa tendeneia do s erom8meros para sefundi rem, 0 que t o r-na diffcil a verificao;;!Io de s e u numero exato , Os c):" orn drn e r Os m o s.t r arn -se rna i s e vi de nt e 6 durant e a pr 6fase I da rn e i os e ,

e) Divisi!io Lonaitudina1. doe cvonoeeonos

Mu it o s aut o r e s , por dado s i.nd i r et oa , achavam que a dupl ic ac ao d o s c r om o s s orn os oc or r e r ia na intetfase; out.r oa , ern out ra s Ia s es cia m it o s e . Depois de muita disc us sao, e com 0 ern pr e g o de prec:ursore S r a d i oaf.l v o s , 1Tl o sr r ou -8 e que a duprtc aca o do DNA oc or r e na interfase. Quando a c el ul a val e nt r a r em d iv i sa o, poz-ra nt o , ja se a c harn df vtd i do s longitudinalmente. Para as celulas de raiz de Bel-l.eval ic: (uma r,7:Uacer:), Taylor demonstroll qUE'l 0 perfodo de 'nU" rfa s e e de mais ou rrie no s 20 h or-a s , A interfas e pode r ia s e r d i v i d i da em tres per{odos. 0 primeiro pe r fodo (G,) dura de 6 a 8 h or a s e rre l.a na:o ha s Int e s e de DNA; 0 s e gundo (S) e 0 perfodo de s Int e s e de DNA e dura rrra i s ou menos de 6 a 8 h o r a s : 0 t e rc e i r o (C"->a I dura 6 horas e precede a mitosc.

A ,,{ntesO! do DNA na o (JCO~l"e ao rn e s rn o tempo em tadosos c r omos s ornos , ou s eja , pode "star ocorrendo em alguns e outros ja a have rern tel'"minado,e out r o s a incla n<lo a ha ve r ern ink iado. Em urn mesmo orornossorno ela pode t a rn b-ern va r ia r , podendo ClITl de se us br ac cs ja estar c rn-n pd.e t a.rrj e.nr e du.pl i.c a d o, e n-qu a nt o 0 o.utr o a esta i n icia ndo ,

!) F\moiorUlJ'ltmto Cl'OI'lossomioo

De rnodo ge r ar o.s c r omos s omos 51ioestrutuTas pequenas, 0 que ja torna diHcH 0 seu estudo rncrf'c'log ic o, As unicas va r iar;:Oes noH;: v e i s do s c r om o s S 0 U10S s:to as r elac io na da s C Om o s fe no'i'nH' nos de e s prr al i aa cao e 0 a pa r eoi rn e nto do s nud<€ol06, Existem por e m , dua s exce<;Oes que pe r m it e rn estudo acur ado , na o s6 da morfologia, mas tambern da. fi.siologia. c r orn.oss arnica, Sito os c r ornos » sorrio s gigantc,,: os pl..umukuwe e 05 poZ.itiiniaos.

C r o:mossom.aS plumulados, sao enc cnrr ados nos av6citos de c e r » t o s pe i xe s, anffbios, r6pteis eaves, e em alguns i.nv e r t e b r a do s , Os mais bem estudados si!o os do e ov6citos dos anffbios, S1l:o en· c o nt rado s uos ov6cito.s I, OU s e ja , no final da s fases da pr6fas e 1 da meios ...

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Como sao cromossomos mei6ti.co5. 05 hcrn Sl.og os ac ha m= se pareados, de rnarie i r a que detern1inamo aparecimento de I'm e ixo longitudinal, que passu. c e r t o numero de cromonemas, ao Ion. go dos quais e st ao o s c r am amero'S, partindo de Ie s al<;as latera; s , As al c a s S<IO ern it Ida s em t oda s as dires:oes, dando-lhes 0 a s pe c to da s e s c ova s de Lim par ga.rata s {as quais tl!m urn eix:o central de a r a rri e , do qual p a r t e rn o s fios) (Fig. 19). Os organismos que o s ap r a s e nna.rn d e Io r-rrra rna.i e favoravel para eatudo, gra<;:as a o a eu grande tamanho, .6~O as s al arna.nd'r a s , Em Trit"l"",~ ca:rrtl~f= caJ"ni[ex, 0 maior dos c a-orn os s orno s normais apresenta c e r c a de 30 urn de c orrrp rirri errto rra, Inet~Ha.se da mit o s e , eriqua nt o no ovoc iro tem de 700 a 8001-lm., As al"a!; laterals de ss e s c r-orrro s somas r e s ul ta m da dee e s pi r al Izia c ao 010 nfvel dos c r orn Srn er os , Nessas al~as Ii sintetizado inrensamente 0 RNA. A sfnt es e inicia. se num dos e xt r e rn os da al<;a e prossegue ate 0 out.r o e xt r erno, 0 RNA pr ad UZ ido vai - s e acum ul arrdo em t Or no do e ix'o da a1<; a e, q "a nd 0 a s {ntese tel' mina, e l e ii e l.Irn me do para 0 citoplasma, ond e par ec e est a r relacionado com a s.fnt e se de pr ot e Inas para 0 vitelo. 0 e st u-. do dcsses cr orri os s orn oe mostra de mane; z- a direta 0 r ea ul.t ad o da a<;a:o do s C rom cs s om oa , ou seja, apr odu'i-ao de RNA.

No Hm do s anos 60, Miner e Beatty isolaran1 DNA de micronu,cleolos de ov6cilos de anffbios eO observaram e.m rrrrc r o s c op i.a e letrOnica. E s te t ra.ba.Ihc pos si bHito\l que s e" vis uali za sse a a'i-ffo

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-I., ...... ........ -:~ ..... -:

Fig. 19. Cromossomos plumados. A - fotografia mostrando cromossomo p.Lumul.ado v Ls to COm microscopia de fase.

B - Esquema do cr-omcasomo plumulade com 0 e i.xo cerrt r-aL e as al<;as lateI'ais (segundo J. G • Gall) .

(Desenho r-epr-oduz Ido de Genetics de Robert C. King, ©1965 . Cortesia de Oxford University Pres s , Nova Iorque. N. J ., Estades Unides.)

gl!nica". Em outraa palavraa, pela primeira ve z foi po s s Ive I, em urn eucarioto, a obBerva~ao de urn gene tranacrevendo, assi:rncorno a ebservaC;tl:o dos lirnites de urn gene.

Vejamos 0 procedimento do trabalhode Miller e Beatty. Eles baseararn-se ern trabalhos previoe realizadosprincipalmente com c r orno e s o rno e de bactt;ries, que stl:o l'epresentados po r Ionga s moleculas de DNA, as q ua i s pode m ser observadas transcrevendo. Quando 0 conretido do nueleo dOB ov6citos de T2'ituT'u(l vi1"1:deseer!8 era i.solado e rapidam.ente colocado ern ague destilada, a ca rna'da envolvente dos ouc160109 exer-ac r-omo s s emsco s era d i spe r-e ada , pe r rmttndo que as fibras do envolt6rio nucleolar SOl expandissem. Esse material era fixado ern formalina e poate r-ior me nte colocado sobre as teHnhas do microsc6pi.o eletrOnico, "corado" corn metal pesado para aurne nta r a densidade da s fibras e pennitir a observac;tl:o. Deste modo. 6 po s s fve l observar fibras longitudinais, ao longo das quais flbrila .. menores, perpendiculares a principal, podem ser vistas (Fig. 20). As fibras maiores acham-se dividida s em regiOes onde se encontram fibrila" pe rpendtcutar ea; aque-

r··

slI!''gmtrrlO esp!i'l;:I!ii!:lor

Fig. 20. Es quema do DNA tI'anscrevendo, i"lPOS as t r- abalhos de MilleI' e sew gI'wPQ. A regil:!o de a a b seria 0 gene. enouarito de b a 0 0 segmerrto e spaqador- (intergene). I'lotem que o DNA acha+se com suas helie'ss abertas, urna de La s "silenciosa" eoutra t r-anecr-evendo RNA dea para b, sendo que a enzima RNA PQLi.mera.se (seta) <')stii a t uando e determinando 0 «umento da molikula de RNA. Simul"taneamanta v;:i,.ias moleculas de RNA vao sando sintetizadas. As mais proximas de a enc"n"tI""m~se TI<l' inicio da s intese e as de fJ no f im da s .:lnts se, No plano a Ugura lembrs urns TolM. de5amarnba ii'! (ver- Fig. 22) e no e s ~ pace uma '~17VOl'e de NataJ..

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las r-ec ebern 0 nome de matI'"7;z. Ao longo de e ada fibra Wi v'rias rnatri7.es. 0 tamanho 1n~dio da rna tr'i zli de 2. 4 um, Entre duas m.atrizesexistem .'1~g"lf;mtosespacadG>1'ee (Fig. 20). TratamentoB enzilniticos das fibras mastraram que 0 e ixo principal€ farmada de DNA e prote!nas, enquanto as fibrilas s;Io constltuidas par RNA e pr otefnas. As rno U;culas p recur 50 ras do r RNA ertl. anfi'oio B apresenta.m peso m,olecu.la>: de c e r c a de 2.7 urn de cornpe+rnentc para codific§.·-la. A rnedtda da s matrizes corresponde a 2,4 urn de corn.primento, 0 que I!, bastante pr6ximo de 2,7 urn, Como as nucleotos extracromoss~micos cantem DNA que codi£ica para RNA ribossOm.i.co e desde que na s rnatl"izes hti slntase de RNA, Miller e Beatty" conclufra;m que cada rnatriz e urn gene. Eetea estllo s intetizando RNA precursor de rRNA e cada :Cibrila lateral correaponde ao RNA e m seu proce,sso de si'nteee. Assirn, Be cada :m.at-ri ... e urn gene. po r que ha veria a di£eren<; a de 0, 3 \-1= entre oa 2, 7 ~m e spe radoe e as 2,4 f..lm obe e rvado s ? A explicao;;:Io de s sa di£ereno;;a talvez seja 0 lata de 0 DNA da matriz (gene) e s ta r na lonna de hl'ilice s i mp.Iea, Pela observao;;iio da figura 20 podemos entender 0 local do infda da tranBcrio;;ilo (co;me<;,o dogene)e 0 lo~ cal do termino da rne s rna (1iIn do gene). Entre cada gene (matriz)

h5 un s egmento e s pa .. ador. Ao longo da fibra da matri"" pod erno s obs e r va r gr£nulos bastante e16tron-densos que s:1o as RNA polimerases ern a9ao na transcri<;-9:o (Fig. 20). Elae deslocano-s e

de s de 0 inre 10 do gene a tiS 0 s eu fina 1.

A figura da n,at,.b, observada no plano lembra a de urria Ion>,. composta de samambaia, por~m seus fo lfo lc s estariam ligados em pianos sempre diferentea. No "9pa~0, a imagen s e rf a a de uma a: rvo re de Na tal.

o esquema da figura 21 nlostra uma compara-.fto de como s e « ria obs e r vada a transcri'i-A:o na s bacttil'ias enos eucariotos. Atua.l , rne nte , usando as tticnicas de Miller e seu grupo, varios au.to r e s tI~m mostrado 0 gene em a'i-!lo. E exetnplo 0 trabalho de Arnabis e Nair r 1975), que utilizsram cromossomos de espermat6citos I de J'piahoaia pubeso<ims, urn dfptero Sciaridae (Fig. 22).

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fig. 21. Compara9ao entre II transcri9dO e tradu~ao em bact~ri"s (procarioto) e eucar-fo'tos , Notem que nag cltllula.s de prOCilI'i.()tOS, a medida que 0 RNA val aendo transcrito. ele 'iii pod~ "o'oe9ara ser tNiduzido. Nos eL(oariotos, como h1!i a barre iL'a da ,,"r ioteca, geparando 0 n!lcleo do 0:: i rop Lasna que 15 ., local cnde se acna toda a maquinar:ia da s1ntese pr-ot e Lca , 0 PNA 1:<~m gll., it' do nGcleo ao c Lropj asraa para "qui ocorr-er-, sobr-o QS r-I hos sorsoa , a s1ntese das proteinas.

Cromossomos politenicos. Sao c r crnos s cmos encontrados em certos orga:os (gHtndlllas salivares, intestino, tu.bulos de Malpighil de algons dfpteros, como Chil'onomu3, Drosoptri.la, Bibio, Saio;po;., Rhyncho5c1.aPQ. Foram de sc ober tos em gUndulas s al iva.r e s de Chironomus e r'e c e b e ram 0 rrorrre de c r orn c s aorrroe s a H va r-e a [Ba.l.hi a ni , em 1881). Comosa:oencontradosernv;irios 6rga:as e n:Ios6na gl11:n-

della s al iva r , e como saof or mac oe por rnutt os fios, sao agora cb a-

madoB pol it l'i:nic oa . Estes c r amos s amos apresenlam grande tarne nho lao r e dor de 150 a 250 I-lm de comp>:imento) e possuem fai.xas caracterlaticas ao longo de B eu c orrrpz i rn e nt o , 0 grande tamanho tor navo s e xc e l e nce material para e s t udo s citol6gicos, e at"a",~s de S ua s fah:as c e r ac te r fst ic as pode-se c onet r ui r 0 mapa c ito16gico

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Fig. 22. fotografia de DNA de espermatocitos de- Tr>iehosi<x pW>Ii.lGDenO tr>anscI'a"endo, ~o mi~rosc6pio eletr6nico_ As setas indicam 0 fnicio (a) e 0 fim de urn gene (b) e 0 ,,5Pi.l<;0 ent-17I' elas, 0 segmento 65- pa"ador, a qua l, pode set" vista melhor em B. Em D temos a fo to de a penas urn gene (ccr-tes Ia de I\mab:Ls). As bar-r-as reprasen+am 0,5 u m ,

dos cromossornos, r e lac ionando- se as fa.Ixa.s corri a posi<;lio do s genes (Fig. 23).

Eles slio ob s c r vado s fundamentalmento durante a Ia s e larval desses dfpteros. A gl:lndula salivar, nOB dfpteros, so existe durante 0 e 9 tagio Ia rva1, po r ern pode B er vista ta.rnb ern na s fases de mosca, em orgll:os como intestino e tiibulos de Malpigl1i.

rig. 23. Cromos50mo B de glandula salivaI' de R. anqel.ae , No tar , na base do cromossomo, duas zonas heterocromaticas e, na extremidade, urn pufe.

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0" cromoss omos politenico" originam~s" durante 0 des .. nvolvim ento em b ri oniiri 0 po r urn proc .. 8 so chamado po U tenia. A poU t erd a inicia-se ap66 0 pareamento do s cromoeeomos hom6logos ponto par ponto, cromornero por C1'om0l1'1e1'o. A 8 egul r oc o r r ern divisOes l on - gitudinais dos cromone.rnas, sem que as filament os resultantes s e s e pa r ern , Com esse processo ha v e.r a grande produ<;a"o de c r orn o-. nemas, 0 que £az c am que haja grande a.urrie nt o en1 espes sura. ° comprimento "er' grande, pais, ale'm de o s filamentos s e acharern d.istendidos, hif tambem actirriul o de rnaee r ial no s enticlo longitudi~ na l , Os c ent r am e r oa aeham-se entre a zona het e r cc r crnat ic a , a qual se divide t arnb em , formando grandes z ona s de heterocromiLtina. Metade doa c r orn one.rna.s do crornossomo politll"nico pr ov ern do horn ol og o de origem materna e rn et a de dohom61ogo de origem paterna. Os c r orri Brrre r o s correspondentes, pa r ea dos , or rg tna r a o discos que se justa.pora:o, for ma ndo as Ia i.xa s ou ba nda s , have ndo e nt r e e la.s zonas interer om am €r ic a s , ou Int e r fa i.xa a , au Olinda, interbandas (Fig. 24).

Se uma e s pec i e qua.Ique r tem urn numera c r orrro s s Srrr ic o 2n = 8,

como e a c a s o de Vl'OtilophiZa melanoqaetier-, 0 nurnero de o r orn oa-.

s orn ua politeniCOB de a ua s c Slula e sera igual a 4, pois os hom61ogo5 s e acham pa r ea doa ,

Durante as diferentes fa s e a do c ic l o de vida de s s e s a ni rrra i s , o s c r orn oe s orn o.s politenicos pa s s arn por urrra aerie de altera'iOea noUiveis na sua e at r-ut.u r a , Essas altera<;Oes s a o r e pr e s e nta da s par intumescimentos localizaclos, resultantes da descondensa<;a:o de uma au mais bandas. Esses intumescimentoB Baa denominados puf e s , e indicam urn-a zona de grande atividade funcional (Fig. 25).

A

B

uomon~m.t. ,.., .... rng..

Fig. 24. t;squema da origem des cromossomoa poli~nices:

A - os hom61ogos p"reiam; II - dividem-se longitudinalmente muitas vezes.

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Fig. 25. I::v01 u<;ao do pufe. Na ext~emidade do cromossorno C de R. anqel.ae, 1 mos t r-a as faixas normais da ponta do cr-omossomo , que sa vae modificando (4,5,6) ate formarem 0 pufe (7,8), que depois regride (10), not ando -sa naque La pos i9ao acl1mulo de DNA (segundo Breuer e Pavon).

Os pufes s:!o ricoe em DNA, RNA e protefnae, as quai.s sao intensame ate p roduzt dos ne s sa s re gi<:Se s , Pede - s e de te c tar a sfntes e de sass Bubat:lncias nos pufes pOl' meio de varios rnetod05 de colorao;:ao especiais, COtTlO a reao;:a:o de Feulgen, que e especffica para 0

DNA,ou a pironina, que (i, e s pecff ica para 0 RNA; atraves de e nz lrn aa , como a RNAse ou DNAse, au ainda at r av ds do =etodoauto-radiogrli:fico. Ern linhas gerais este ultimo metodo seria: injetamos no animal precursores ra.dioativos de u.rn do s element09constituint e s do s c r orn os s crn os , como por eocerri pl o a timidina tritiada (com H3 e rn ve a de H normal), que e urn precursor e epe c ff ic o do DNA. Posteriormente detectaremos e a s a s llbstl'i:nc la, cobrindo as ll'i:minas provenientes de material do animal injetado, com urna pelIcula £0- togr:Hica, queser:i impressionada pelas radia~Oes (a no ca s o do tri_ tium) emitidas pelo elemento radioativo. 5e houve r grande incorpora~lI:o do material radioati vo precursor, signifiea que 0 cromos somo e s tava e.m grande atividade: se a incol"pora.~ao for pe que na QU nula, pOll. ra urn rne s mo tempo de c o nta cro com a 8ubst:l.ncia p r ec u z-s ora, 0 c rom o s s orno estava em pequena atividade OU nao estava a i nt et i aa nd o e s s a s ubst$.ncia (Fig. 26).

:,..."". j

-,

Fig. 26. Fotograria de cromossomo politenico de Rhynohoeoi.ara mos rr-ando incorpoI""'o;:ao de ti.l'Lid.:i:m .. 'tl"i t Iada .

Enquanto oc or re a politeni2:a<;a:o do s c r orn os s orno s h& s{utes" do chamado DNA estruturalJ ou s eja , aquele que fa", parte da e et r ut ur a do c r orn os s orn o, E 11 DNA da poHtenia. Nos pufes temas s fnt e s e de DNA diferencial, ou ae ja , aquele que s e reJaciona corn as d ive r aaa funO;;0es do animal, bern como de RNA, que vat funcionar como 0 rne.n s a.ge i r o da Stntes e protei ca. 0 pufe evo lut ate c e rt o ponto m6.xi.mo, Bintetizando muito, a pos 0 que regride,

ficande as bandas correspondenCes corn acG.mulo de DNA, en - quanto 0 RNA e eliminado do c rcrn oe e om o naformade micrOIluclealas. H:i varias evidencias demonstrando que existe grande r eLa~a:o entre as pules e a sec re~lto, 0 que salienta a im port!ine ia funcional dos c r orno s s orn oe, 0 DNA produzido determina a s fnt e s e de certo tipo de RNA, que c a r r ega r a consigo urn c6digo, env ia do pelo DNA ao citoplasma, onde , nos ribossomos, determinara a s Inte s e de urria pr ot efna especi'fica. A exist~neia de pufes mostra que hi urna diferenciac;a:o c r orn os s Brrric a , au seja, eles sofrero va-. r ia c oe s .noriologi.cas durante as diversas fases da vida. Ce rt o pufe e encontrado em certo c r orno s s orno nurn 6r goro; e m outra fase da vida, aque le mesmo pufe pode ser enc cnexado em outro 6rgao. o pufe produz rrruica s in£orma,,(5es para a s Int e s e de m uica s s ub s ; tancias. Quando dat e r m i na da s ub s tz nc ia e necessaria ern cerro orga:o, ale deve Cabriea-la; ent§:o Urn pufe podeda ser f o r rrra do, Em out r a fase 0 mesma pule apa r ec e r ia ern outro orga-o que nessa oca s ia o n.e c e s s it a s s e da s substl;:ncias 'po r ele reg111adas.

Guevara (1971) e Guevara e Basile (1973) analisaram 06 pufes de RNA de 3 diferentes tectdc s de R. anqel-ae (gl!tndula sa Hva r, intestmo e tUbulos de Ma.lpighi) durante 0 desenvolvimento larval e rno atraram que h~ pufes que o co r r ern simultaneamente nos tr@s tecidos, out r os somente am dais deles e outros, aiuda, que s1l:0 es pec ffrco s para UIn s6 tecido. Ls to evidencia que 0 funeionamento de c ertos genes pode s e r 0 mes:rno em tecidos di£erentes, enquanto que out r o s va r iarn de tecido para tecido. as pules comuns a os traa tecidos d av ern s e r responsaveis pe la produ;ao de elementos c orrrun s a.s eelulas do s tres tecidos; aquales que slI:o especfficoB do tecido devem a ata r ligados'a stividade espec!fica desse tecido. Os pufe .. de RNA ~o deter:m.inarn diferencia<;1o estrutural no c r orno e s orno (quando 0 puCe de RNA regride, 0 c r crno s s orric volta a tel' 0 rn e s rno aspecto que tinha a n te s do pule ocorrer) mas SUa ~a:o determina urna difel·encia.r;ltocromossOmica funcional. que pode relacionar-se corn a diferenciay;io cia e~lula que 0 apr es enta ,

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Ce r to s pules, al(!;m de pz oduzf r ern RNA, sintetizan~ uma quantidade adicional de DNA. 0 RNA produzido 6 eliminado do cromos 80- mo, enquanto 0 DNA adicional permanece, modilicando 0 a s pec co da regiiio croInossamica onde 0 pufe ccor r eu, ou s eja , determinando urna dHerencia.r;(I:o e s trutural no Cl;'Om08 soma.

No ca so da Sal"oopnaga bul lata (Whitten, 1965) e de Hyba.s"tara f'r'agilis [Da Cunha, Pavan, Morgante e Garrido, 1969) 0 P.NA a dlc toria l 6 eliminado do c r orno sa o mo para 0 suco nuc1eola r , Este etpo de pufe foi des c r i to pela primeira vez em R. anqe l ae po .. 6r.ill.l.e~ ~ Pavan (J955) e Pavan e Breuer (1955) po r metodos citoloi!'cos. 0

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DNA ad1cionaL foi eonIirmado autoradiograficalnente (Fieq e Pavan, 1957) e citofoto:metricamente (Rudkin e Corlette, 1957). Estes autares ava li.a r-arn que para 0 pufe ZB da gl:!:ndula salivar de R. angela .. a quantidade de DNA adicional representa :menos de 10/. da quantidade total de DNA do nucleo. PosteriorlTIente este DNA adicion.al, pl'oduzido na regiiTo do pufe, foi r ela.cionado a "di£erencia- 9a:o croITlossOrnica" e chamado DNA metab6lico (Pavan, 1958 e 1965 a e b). Seu significado Iunc i ona I s e r Ia perrnitir a celuIa a produ"a:o de maior quantidade de RNA nurri edAgio espec!fieo do desenvokvrrnen.to (vel' Pavao e Da Cunha, 1969a), possibilitando urn passo es p ecrHco da sua. difer encia<;;$o. Mai Ii r ee entemente Guevara (197 1) e Guevara e Basile (1973) desereveram 10 diferentea pU£ea de DNA nos cromosso:moa da gl~ndula sa.Hva r de R. anqel.ae na:o as tendo achado nos outro .. tecidos e8tudados, enquanto MachadoSantelli (1973) deaCTeveu a 11° pu.£e de DNA ern Rhy>zchosaia:ra.

No c a ao dOB ov6citOB de insetos e de a nrfbto s a amplicalSlto gl!lnica ocorre, aurne nta.ndo a transcri>;-:lo, 0 que possibilita grande produs:llo de vitelo. 0 DNA =etab1'ilieo ne aae a Ca.S08 6 expulso do s c rornoae cmo a, rna a sua a'ilto continua no suco nuclear e rne srno no citoplasma. Nos ca ao s de ina etos ern que 05 ov60it08 apresentarn "c61ula nutritiva", nlio se conhecern exemplo s de arnplifica.<;:lto gl1!niea no ov6cito durante a vitelogi!nese, mas e sta ampliiic&l;:~o pode ocorre.:" na (orma. de poliploidia e politenia na s c(:1ulas nutritivas (Bier, 1957; King, Rubinson e SlYlith, 1956; BasHe, 1969). Crouse (1968) relacionou os pules de DNA de Soia~a eoprohi.La com. a rnetarnor roe e do animal de larva .para pupa. Par outro lado, Sa ua.Ia., Laieine e Alves (1971), inibindo as pufes de DNA ern Bradys ia hygida, obti veraln rneta.rno r fo see pr odw;:<'to de aduUo s norrnad s . Pavan, Sa.nders e Richmond (1971) relacionaram os pules de DNA de R. ho l: Z<Z!lndel'i com. a pro d1.Jj'.t 0 de algum rna terial res ponsa: ~ vel pela lise da gl:lndula s a Ii.va.r , que I:i wn 6rgao que desaparece na pupa. Lara e Holl.aender (1967) mos ta-a ram que subsequentelnente ao aparecirnento do s pUles de DNA em glandulas salivares de R. angel-as, a srntese dos precursores do r-RNA € completa.mente inibida. Guevara e Basile (1973), espeeulando sabre estes dados, relacionaram as pules de DNA COIn a produ;a:o de algutna Bubs~ncia r e s pons ave.l pela. inibi«a:o da produr;:to de T- RNA, talvez corrio 0 primeiro pa8S0 para a aut6Use das c€lulas.

H~ urna el!rie d", fatoras Heieos, qufrrri co a e bio16gicos que podem determinar alterao;Oes no padrao dos pules do s c r orrao e s orrro s polit@nicos ou rne arno em toda a sua estrutura e, como ef'e it o, 0 deaenvolvirnento do arnrria l ta.mbem sofre alteT~Oes.

o harmOnio ecdisona (vel' Karlson, 1966) pode induzir pules erri Chi:ronomus tientane {Clever e Karlson, 1960; Clever, 1961, 1963),

em soiaxa oopmphiZa (Crouse, 1968), ern D:t'08ophiZa nydei (Berendes, 1967 e 1968) e D. mel.anoqaetie» (Ashburner, 1972) e e:m RhynmlOBoial'a hoZlaenderi (Stocker, Pavan e Charlton. 1972). Mechelke (1960) tTa.balhando corn Aopiaotipus lUQiduB e Schultz e Kernrer (1964) com D. metanoqaete» mcs tra ram, atrav~s da ana Ii.e e d e abe rr~t:5es c romoe e emtcas nessas eap6cies, que existe rela._a::o entre pu£e e efeito de posi<;l!o. Berendes, Breugel e Holt (1965) obtiveram di£erente padrlio de pufes en .. D. hydei ap6s choque de temperatura. Kroeger (1963) demonstrou que h' necessidade de urm equilibria entre as fons de Na e K no meio para que os pules de Chil'on/JmUB thwnmi ccor rarn norrnahnente. Muita Na+ levaria a urn eoUgio mais jovern de funcionamento enquanto rrrui eo K+ adiantal'ia 0 desenvolvirnento. Ele sugere que a ecdisona regularia 0 equiHbrio Na "/K+. C €=lula 0 de gl8.ndula. sa li va T ern cultul' a in vitro exi bern alterao:;:iIo no padrl!o de pufes em nrosopni.;« (Becker, 1959; Berendes. 1965) e e rri Rhyxchosoia-ra (Shn1'les e Cestari, 1969). Estes tHtimos autores ohtiveram., em cultura, pules em zonas hetel'ocrom.fticas, as quais, in vivo nunca os apresentam, quando 09 a.nimais slto normais. 0 padr."!o de pules pode ae r aHerado tarnbern a tr ave s de implantes de gl:tndulas salivares de larvas de Ulna certa ida de, para out ra s fases do desenvolvi:rnento do ovo (Kroeger, 1960 em D. busonii) au di£erentes idades Ia r-va Ia (A:mabis e Sim15ea, 1971 em R.

angelae) ou ainda pela extirpac;:llo do pJ'ot6rax (Amabis e Cabral, 49

1970). Finahnente, agentes como virus, micrascoporfdeos ou gre-

garinas pode:m determinar alter~"ell drAsticas nos crornossomos

das c elulas de RhYTiohosaiaPa pOl' eles in£ectadas (Diaz e Pavan,

1965; Pavan e Basile, 1966a, 1966b; Rob e r-t a, Kimball e Pavan, 1967;

Diaz, Pavan e Basile, 1969; Pavan, Da Cunha e Moraoletto, 1971;

Sanders e Pavan, 1972), de seiara (Jurand, Sim{les e Pavan, 1967;

Pavan, Perondini e Picard. 1969) e eJTl Trichosia (Da Cunha, Morga.nte, Pavan e Garrido, 1968). Em todos os ca a o s de infec':;1o,

oco r r e aumento da politenia e os cromossomos tornarn-se "super gigantes" (Fig. 27): s::to tamb6mcomuns 06 pufe s na s zonas hetero-

c r orna ttca s . Os virus deterrninam constriifeses especfficas nos cromOB90In08 (Pavan e Basile. 1966a: Pavan, Da Cunha e Morsoletto,

1971) e no caso des microspor!deos, quando a in£ec<;:to est1 muito

a dia ntada , o s c r ornoe e ornoe adquirern aspectos especiais, 08 quaiS

foram designados "pompons" pOl' Pavan e Basile (1966a) (Fig .. 27).

o c ur Io s o da in£ec'i:a:o pOl' microsporideos li que as c(,lulas da gUtn-

dula salivar, que na pupa soio autolisadas, e e infectadas, per sta-

tern, podendo s e r encontradaa nos anirnais adultos (Jurand, Simol!s

e Pavan, 1967). As celulas niIoinfectadas s40 lisadaB e as infecta-

da.s , que estilo com 0 seu controle aiterado, persistem. Varias altera,;"e B na ultrae B true tur a da s c lilu1as infectada s fora m ta rnb li:m descritas (Jurand, Sim1:5es e Pavan, 1967),

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fig. 27, Ct'omossomos politenicos OJ;! celulas muscu.Ler-es de Rhy",,,/w.'wi,at'a mu.L tOOl,umentados como conse,quene i" da infec"ao p,.(. mi.cro spor'ide,Q s (ae taa) . Not ern que 0 padI'80 dO! fa Lxas cl'omot,somica.s, vai d,esa.par'aceudo pc I s O~ c rcuios ecmcs tQJ1Il~JTl-Se hiperativDS (·'poll1pon"). 0 pt'imeir'O do s qua t r-c cI'OmQSSOffiOS a se tct-nar- "pompon" eo X. As zonas heteI'OQvom5ticas Olinda SOl mostram condensadas.

5

CITOPLASMA

o ci topta s rna e a pa rt$l da c eIula que fi ca ent r e 0 nudeo e a membrana plaarrlatica, E no c ibop la.s rrra que c co r r .. a rna Io r i a dos fenornenos metab6licos da dilllia (slntese de substancia s , que bra de o ut r a s , transiorma"a:o de erie r gia, etc.).

Durante muito tempo 0 c irop las ma loi considerade <0 on') 0 hemogenco, rna a heje, gra<;as ao ape rfei"oamento de diferentes tecnicas, s abe- sc que e s s a homogeneidade e somente 6ptica e que ole apres enta es e rutu r a def irrtda ,

A por.~ao rna.l s fluida e opticamente rna is homogSnea do citoplasma con s t.i tu i 0 hiaZ.opl.aama au matl'ill citopZa81ll<ftica. .Esse material c.or r-e s poude ao component e Boluvel do citoplasma [s e r-ia o s obrenadante obt i do apos a cent r ifuga cao}. Apres enta -9 e no e s - tado c ol ot da L, 5 eodo corrs t.i tu Ido fundamentalmente po r mi ceras de p r ot e fna s (fas e di s pe r s a} mergulhadas em agua (fase di s pe r s ant e] , A sua zona perHe rica, au eotoplaema; a ch a= s e num estada mal s dens a (plag magel) e nqua nto a porr;ao proxima ao nuele 0, a endaplaema, f: rna i s Huida (plasmasol), Essa matriz ap r e s errta propriedadee ta i s como e Ia s t i c rda de J COe5 ao, eontractilidade, rigidez e mobilidade intrae e Iu Ia r (ciclose). Todas .. s s as propdedades sao importantes para a eelula, pais permitem sua adapta<;ao as dife r erite a c ondi coc s arnbientais. A c l c lo s e e importante pOl' distribuir as materials de que a c e lufa ne c e s s i ta par toda a cl topl ae ma, s e bern que 0 seu mecanisme ate hoje nao seja bern conhecido.

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Na matriz fi cou demonstrada que ha urn ret{c:ulo de memb ranas lipo-pl'oteicas com di s po s i"a:o irregular I qlle preenche quase todo a citoplasma. .Esa as rrre rn b r aria s mt r a ce lu la e e s constituem 0 que s e chama ret{auZo endoplasmati.co ou sistema. vacuoLar do aitoplaamao 0 retlculo acha-se formada por urn sistema de rnernb r ana s que se Hgam 1. ca r-iote ca (portanto no endoplasma) e a membrana plasmatic.a (portanto no ectoplasma) (Figs. 7 e Z8), Conforme a po s 1<;ao da s rrre rnb t-a na e , podernos dietingui r tUbu ~08 ou c-ietier-: nas, em forma de SQaos au vesiculas aaha.tadas. que podem delimitar !)QcUoz.os. Essa.s membranae at ra.ve s s a.m 0 hi.aloplasma e 0

divide..., ern d ua a fases! urna, inteTna),.8 membranas (que pode c onat it.u i r vaci'iolos) e outra ext er na , que e representada pele h ialopla sma.

52

rig. 28. Microfotografia eletr6niea de e~lula de pancreas de morcego. A membrana nuclear ~ interrompida pOl" por-o s . Os pe quenoa cor-pes esfericos no. eitoplasma sao mitoc:ondrias. As estruturas 'finas e Longas cons t Ltuem 0 ret:tculo endopl.asmatic:o; os pontos pretos rodeendo 0 reticulo sao ribossomos. (Reproduzida de The Cell: Its Organelles and Inel.us-ione de Don W. rawce't't, © 1966. cor-reaae de W.E. Saunders Co., Yiladelfia, Penn., Es'tados Unidos.)

Esse sistema de membranas pode eambern s e r' o bs e r va dc em celulas vivas, gra<;as a o rrri c r os cc prc de fase (Fawcett e Ito), 0 que demonstra s e r realmente urrra e s t rutu r a do citoplasma. e nJo artif(ci.o de tecnica. Foiobserva.do p r trrre i r a.rn e nre e'rn toda s as celulas a.nimais ana.It s a.da s (com exces:ao dos eritrocitos rrra du r o s ) e de po i s tambem em dilulas vegetais, s en do que aqul o s vacuolas sao rrra.i s de s envot vidos , podendo as ve z e s £undir-se e forrnar vacuolos rrru i » to gr ande s , e."l'), que encontramos 0 s u c o c e l uka r , constitufdopor 50- luC;.!to de agua, a<;:ucar, p ig rne.nto a , etc.

Seu aspecto varia rrnri.t o de ciSlula para c~lula. bern como numa rne a rria c~lula, e tarnbEm conforme a fase do desenvolvimento. Acha- s e pou.co desenvolvido nos e spe rmat6citos. na s c!Slulas adiposaS e c~lulas da supra-renal (estas duas ultiTnas ct;lulas apresentam grande ac(imulo de lipl'dios); E muito desenvolvido ern coHulas

corn grande atividade func rona I, como as cfilulas que sintetizarn protefnas (.1cinol! pancre:hicos).

Atrav{,a da obe e r vac ac rnorfo16gica ern diierentes tipos de c!!'lulas, che gouvs e a concluslIo de que 0 retfculo endoplaarnli:ticQ eataria ligado as aeguintes funo;.i5e a:

a) Aurnento da superff'cie intracelular, perrnitindo rnatoz ca:mpo de aC;:lo 'as enzittlas e aesirn facilitando reaeoes me tabol-ioae .

b) As membranas apresentam pl'opriedmies osm6ticas. A sua face interna {, pouco desenvolvida e.m algumas c'lutaae n-.uito em outras, 0 que representa acurnulo de subatllncias nestas.

c) Teria papelna cil"auZar;Zio i.n1;l"aaelulal". As membranae s e inc urn biriarn de dia tr ibuir ma teriai iii pe 10 c i topla s rna, gral< a a a d iferen'ias de gradientes ern diierentes z o.na s de s ua s membranas.

d) Teria papel no -tI'arlBpOY't& de pairid-oul-ae , moltoculas e Cons do exterior para. 0 interior da c~lula e vice-versa, fenOmeno diretamente ligado a pinocitose (vel' p.1g. 83).

ERGASTOPLASMA

o ergastoplasIna (ou I;lubsta:ncia bas6filal I! urn conjunto de zonas do pr6prio ret!culo endopla'nn-'tico, que apl"esentam gr:loa de ribonucleoprote{na (gra':os de Palade ou gr:loB de RNP1, aS60- c ia do s 'as rne rnbza.na s , ou rne rguLhados na :matriz do hialoplasma (Fig. 29}. Esses gr~os s!(o constitutdos de RNA e protefnas e ap r e s errt.azn dimensl!!o da ordem de 100 a LSO,!. Como hi muito RNA nos graos, eles s a o t.arnb ezn charnados l'iDOBSOrrIOB. e conlerem ao c i t op l.e s rn a certa basofilia. Ja se conbeciam corn a rr>icroscopia optica os corplisculos de Nissl, ou substancia tigroide {ba s ofi Ia ), no c Lt op l.a errra da celula nervosa; aintensa bas ofilia do citoplasrna nas ceIuIas de secre",a.o e os acinoa bas6filoB das ciHulas hepaticas. Todas ee s a s zonas que tinham diferentes nom.es correspondem a o ergastoplasma (revelado pelo mic.roscopio eletrOnico). Quando a celula e centrifugada, 0 ergastoplasma se !ragmenta. Ao conjunto de frag.nentos de rrrerrrb r an.aa e deribossamoa c'ha.rn arrroe mic't'08somo8. Com esse eentido, 0 rnicrossomo n:1o e urn constituinte c elutax natural, mas s6 e obtido pOl" centriiuga",iio. Quando a calula e centrifugada, apos a hornogeneiza",ao para a destrui!<l!o dos li=ites celulares, 0 e r ga at op'l.a e rrra s e fragmenta.

A {u.n'r~o basica do ergastoplasma (do gx ego "ergazomai":: el abo r a r l eata ligada a s{utese de protei'nas. Ele e a labrica de protefnas para a celu.la. As ceiulas que apresentam secreglIo intensa possuem ergastoplasma bastaute desenvolvido. POl' meio de di{erentes tecnicas, e entre elas ada auto-radiografi.a (ern que se injeta:rn no animal arnt noa cfdos , unidades da s protei'nas, rnarca-

53

rig. .2 9 . Esq ueme mostraIlclo a es:trutura -tridimensional do ""<'gil stoplal;;ma; no centro. a :fl'a.:;ao micross6micil; em:baixo" uma f'ra<;ao de 11l1:1'acent1'ifuga<;,ao do microssomo. (Reproduzido de CitoZogia General de De Rober-tis, Kowinski e Sae7-, @ 1963, com autoriza<;ao do s autores e da ce sa edi tora llEl P!. t-aneo 11 ')

Pedro Ga\~C ia S. ,II. )

d as com urn e i errre nt o r ad ioaHvo, e Be nota grande inco.rpora<;ao dOH mesmoB ern certas zonas do citoplasma), tinha-se ideia de que havia zona-s especiais do citoplaslUa l'esponsaveis pela s{ntese protHca. A rnicroscopia eletrOnica :';"veioL! que e a s a s zonas C 01'respondem ao e rgastoplasn:ta e , d erit r o dele, ao s ribos 80lnOS, se.ndo que as ribo8sarnos assaciados as membranas sfnt etf z am m ais int ens arnent e que 0 s livre s no hia.lopl aarn a,

54

Vejarnosco mo sed a a pro ce s sod e fa b l"i..c a ",Aa de pl'ote{na.s no c it cp'l a s rrra , As p:rot:efnas Silo compostos o:rgll.nicos que resultam da polirneriza~.ao de::X ~arninoacidas atravQs de Iiga<;;oes pept{dlcas.

Para formal' -se urn dipeptrdeo (liga<,;:;Io de dais arninoacidos) 6., pr ecrs o que estes s e encontrem e na p r s s en ca de certas enzirna" realiz;em a seg'Uinte rea\<."lo:

HNH °

\ D

R-C-C +

I \

H OH

HNH

I _I/O

R' - C ~ C

I \

H OH

HNH ° H

I II I

HeO + R-C~C-N

H I

,~ 0

,r

RT - C - C

H \

OH

~

0. - aminaacido

}

H ... hidrage-.nio do G" do ;iciclo ca rbcxflt co Ii s ub s tat.ufdo pov urn grupamentoerntna. R = radical forInado po r urna cadeia orgli:nica.

Seguindo 0 mesmo modelo, ou s ej a, juntando mais urn aminoacido ac dipeptl'deo, obt.e r errio s urn tripeptldeo, e assim po r di ant e, poderernoB obter polipept{deos, que constituem as protelnas. A rea!j-lio inversa representa a hidr61ise dae protefnas, au seja, a sua fragrnenta<;lio em s ua s unidades, os arninoacidos.

Na alimenta ... a:o 0 organismo r ec eb e prote{nas, que pelo processo da di geatao aao decompostas nos seus ammofictdos , Estes penetram nas celulas e loi se distribuem ca.oticamente no hialoplas ~ rna, para po at e r i or rn ent e serem r eurri do s ordenadamente e originar novas p rot efnae , Alguns d06 arrunoac ldos podem ser iabricados no orga.njsmo, mas outres s6 a dieta pode fornecer.

Urn {ato observado e que prote{.,as diferentes podem dar, por hidrolise, os mesmos arni noacd.do s , e na s mesmas propor!j-!'Ies. Ass Irn, imaginemos du.a s protei'nas, A e B. Por hidrolise, as dua s d~o os aminoacidos a, b; c e d, nas pr opo r ce es de: 0, 3 de a, 0,2 de C, 0, 1 de 0, e 0, 4 de d. Como poderemos ent:to explicar que elas s:to diferentes? Atra viis da s eqli1!nCia dos aminoacicl05 no i nt e rior da :molecula. Imaginemos que as dua s p r ot efnaa s ej am A e B. Po de - rlamos tel' para A a seguinte sequencia: aabcddrodd e para B: abcdddaabd. E evidentemente com es s e s aminoactdos pode r ernos ter

ainda muita .. outras sequencias, porla.nto muitas outras protelnas. 55

Existem 20 arniricfictdo a dilerentes: fenilalanina, c i st efria, valina,

1 eucina, is 01 eucina, ti I' os ina, s eri na, a spar gina, li 5i na, glicina, triptofano, treonina, prolina, alanina, arginina, gl utarni na, aCido

aspartic 0, acido glut~mico, metionina, histidina. E e muito c crrrurn prote;'nas conterem 200 aminoacidosna sua c ad ei a., Entao eles de-

vern repetir-se rnui.ta s v ez es ne s s a cadeia e sua ordem pode va ni a r ,

Irn a gi nern o s entl!o que grande va z-i e da de de proternas pode s e r obtida

atraves de cornhina<;:3es do s 2.0 arni noficido s ,

Que regularia a s e qiienc ia de amtncjictdoa no momenta da slntes e de protetnas?

Ch eg a mo a agora a. urn ponto muito importante. J~ disseITlos que 0 DNA e 0 material da he reditariedade, pais e ele que regula a produ,>l!o da s d ife r en te s prote!nas. Cada e spticf e au rnesm.o indivfd uo s di£erentes a pr e s errta r ao protefnas trpicas, conforms 0 s e u padrlIo heredit;{rio, 0 seu DNA.

Mas Be 0 DNA est:i dentro do nucleo e a s (ntese de protefuas ocorre fundarnenta lrne nte no citoplasma, como pode ele comand:i -ia 7

E aqui que aparece 0 papel do RNA (~cido r ibonuc Iekco). 0 DNA que apresenta 0 c6digo genl\tico envia urna lOlensage,natravl!s do RNA para 0 cteopla sma, onde a afnte se prot€ica oc or r e ra,

Para poder entender bern a s uc e s e ao de ienOrnenos, estudemos urn poueo 0 RNA. Ele tambetn e farmado pela s uc e s s ao de nuc Ie Sti de s , ern que 0 ar;ucar e sempre a ribose e as bases nitrogenadas sao adenina, guantna (purfnicas) e c itosina. e uracila (pirirnidi"nica.s). Entao, ern lugar de timina do DNA, 0 RNA apresenta uracila. A e str utura ainda nao esta categor i c a.rrre nt e detnonstrada, mas pa r e c e ser representada por uma heliee simples.

o RNA ~ pl'oduzido a partir do DNA. Virnas atril.s (pag. Z8) 0 processo de duplica .. ::to do DNA. Quando 0 RNA e pr oduz ido , eLe rarnbe m vai observar a sequencia de bases e s pec If ic a s do DNA. lmaginemos uma rno le c ul a de DNA, com. certa sequencia de bases (certo codigo) duplicando-se (Fig, 14).

Na £arma<;a:oda RNA as e s pi r a.i s do DNA se s e pae a r i.arn ta>nbe m, e os nucleotide s (e on s tit u fdos par ri b 0 s e) s e dis por iam em sequencia, rn aa agora, em lugar da tirnina, e a uracila que pareia corn a adenina (Fig. 30). Silo 05 harmonios OU substaneias indutora s que determinaITl a trans cri"llia de UTTIa certa regHra da rno lecu la de DNA, au seja, 0 gene.

Hli dois t i pos basicos de RNA, ambos produzidos no niic le o, alEfITl do RNA ribossornal;

56

- RNA de cadeia longa, de alto pes 0 molee ul az , c ha rn ado RNA rnerlsageit'o;

,_--1'IIl11C:f!' C:bffiClh!!Met'I''''

_....... ••• , 1JO genp

•• -'." .U!!I(t~ l~lIi ~I'"

.,.. ... -- R'tl~ pol im'f;" .~1iI f 9Cl'II!t)

rig. 3 D . S .intes.. de RNA. " P<lT.'t ir do PN II (fen6meno da t'roanscri<;ao) sob a ac;ao da RNlI polimerase. Motem que apenas urna das he~ 1ice8 do DNA t~anscreve; permanecendo a outra "s ilene iosa n.

_ RNA de cadeia cur ta de baixo peso molecular, chamado RNA tl'l2nsportatio1'.

o RNA mens ageiro e produz!.do no c r omos soma, s ardo nucleo atr aves dos poros da carioteca a val alojar- s e sabre 0 "l"ibos sarno, am sua unidade menor. Ele deposita-se sobre <Un ribossomo au urn conjunto deles forrnando UYn poU-ribo6somO. Esse RNA, na seqdencia de s ua.a bases, contl>tn urria tnensagem ern c6digo, que Ih e fOl dada pelo DNA, na sua forma<;tto.

o RNA transportador qu e se encontra no c rto pra s ma ta.m be m e p r odu.z.rdo nos crornossomos, pa s s a ndo para 0 c i to p l a s rn a , Aqui vamos encontrar os arninoacidos distribu(dos ca.ot i c arrre nt e ,

Cada transportador, conforme uma seql'ii!ncia de bases existent" rrurrra zona e s pe cffi ca., sera c apaz de ligar-se 56 a urn ami"oacido especi'fico. Por exemplo, cligarnos que e I e t<;,nha a sequencia [fAA: entao po de r a ligar-s e ao arni noa c i do no, I; se t i ve s s e s"qii!!ncia ACe', ligar-se-ia a urn aminoacido nO Z, e a s s i rn por diante. Para e Ie conseguir ligar-se a c e r t o arrri noa c Ldo e preciso ae r ativado, ceo ATP (tri£osCato de adenosina) a moleeula energet i ca da celula que s e incumbe de ativa-Io. Alem de ATP, e necessaria a p r e s e nca de enziITlc..s espec{ficas para que certo a m irroa ct do se ligue a s e u t r a ns po r ta.dc e ,

51

o RNA transportador, ligado ao am inoac ido, vai transporta- 10 a.te 0 l'ibosBOrnO. Aqui 0 transportador vai arranjar-se sobre o RNA m_eitsageiro que "sta sobre 0 riboss orno, obedecendo'll s eqiit'!ncia de bas e s complementares de ambos. Como as aminoacidos agora s e a rr an ja rn em 5 eqiiencia, vai formar -s e urna liga'i,[o pept{dica entre e Ie s , grao;as a enzimas existente .. no hialoplasma, e formam.-se as protei'nas (Fig. 31). Agora, as prote(naa desligam-se dos RNA transportadores e e s te s Hearn livres para transp o rt a r novas aminoa.cidos. Atualmente jii silo conhecidos varios c6digos de RNA responsaveis pelo transporte de aminoacidos. Assim, RNA com a sequencia yay codifica a fenilalanina, YUC - Ie uci na, roo - t r e oni n a, UAG - metionina, etc.

o que £oi visto acirna r epr e s enra , em ultima analise, a maneira de a cao do gene. PoderlaITlos resumir dizendo que 0 DNA (ITlolecula da heredita.riedade) pas sui urn c6digo (s equtlncia de basea A-l', C'-C) que e trans£erido para 0 RNA, e neste det e r m lna a sequencia dos arninoacid05 na afnt.e s e de protefnas. De modo geral, todaa as rnanifesta~<:ses fenot{picas (cordos o Ih o s , tipo de cabalo, cor da pele, erc , ) r es uft arn daprodu!,a:o de c e ct a s prater. rra.s enzirnaticas, que irll:o dete r m i na r a produ<r.io de substancias r e s pons av ete pe Io aparecimento das diferentes car acteri'sticas do

DNA

58

o

l'OH

.",klc /

G

~O

I"Jar~o pepHcI'ta

(lniclo Cia s(ntes~ plOte:lca}

I-RNA

rig. 31. Esquema ilustrando a sl':nt",se de pro re fnas sobre 0 RNA mensageiro q~o Se deposita sabre a ~nidade manor dos ribossomos. Notem que 0 RNA rransportador, conform .. a seqUencia de sua tripla de bases (anti-codon), se liga, especificamente, a urn cer-ro aminoacido, 0 qual eo Levado ate 0 s eu codon cOl'''espondente do RNA mensageiro. Ha todD urn ccmp Lexc sistema de enz imas que deterlrlin<l as difel'entes 1iga90es peptidicas. aS$im como as ligaq6es RNA1:-amino-acidos, os giros dos r·ibossomos e 0 reconhecimento codons=arrt i c-codcns .

organismo. No or g arri s rno ha rnu ita s intera,>,oes e nt r e diferentes gent!s, e de sr e s com a meio ambiente, 0 que faz com que c ada reao;a:o completa s ej a representada par grande uUn)ero de pass o s , ate a obter.~:ao de urn p ro dut o final. Se qua.l que r do s alas das reaO;Oes {or quebrada, 0 produto final n§:o s e iormara, Oli sera diferente do normal. 0 Ind ivfduo ne as aa c ondi c oe s sera urn mutante e e s t e pader! s e r ma i s au menos adaptado ao ambient e e rn que vive, podendo s e r , r-e s pe ct i varn cnt e , fixado no ambient", ou elirninado do rne s mo (sele<;ao natural).

COMPLEXO DE GOLGI

E uma e srr utur a que r apr esenta uma diferenc ia<;;:lo especial do sistema v ac uolar, apre s entando interconeXa:O com ale e por-

tanto c orn a carioteca e a rne mbr ana pka a rnzit ic a (Palade e Palay), ao me s mo tempo que t e rn pos tca o definida eonforme 0 tipo e 0 est ado funcional da cHula, E evidenciado par meio de tratamento com s a Is de prata e 65m10 (forma pela qual fOL deacoberto em ceIulas ner vo se s de gatos, par Golgi, ja em 1898, e considerado par alguns como artiIfcio de t€cnica) e tambem at r ave s de mierosc6pio de fa.s e ({Ii l)'!.VO).

Sua forma e e st'r utur a podem var iar conforme a fase da vida da celula. Geralmente, aeha-se r e pr ee ent ado por urn retlculo de membranas dens as , trab6culas anastomos adas , placas ir r e gulares e esferas oc a s , 0 tamanho €i grande em celulaa ne r v o s a s e glandu! a.r es (hi per tr of i.a) e nqua nt 0 e peq ue no em e€i 1ula s mu 5 e \1- lares (hipotrofia), 0 que s ug e r e que, nasprimeiras, t e nha hiperflln<;ll:o e, nestas, hipofun<;ll:o. Ern celulas s e m s e l e de s apa r e c e , Sua c crnpos ic ao qufrrrlc a e lipo-proteica, como os de ma i s orgariu'l o s c e l ul a.r e s , nao po s s ukndo partfculas de RNP.

A eat.rutura do c orrrpl.e xo de Golgt ao rn ic r osc6pio eletronic 0 foi e s clareclda pOl' Dalton e Felix ern c elulas de epidfdimo e depois confirmada em p:lncTeas, eelulas ne r vo s a s e rim. Encont r a rno s i sacoa achatadoe, ou cisternae, pequenae vesiculas (600 .. t) dens as associadas as cisternas e grandee 1)(2aUOz.oS. que resultam do i ntume s cime nt 0 do s sac 0 s, onde hi gr ande a r maze na me nto de rna.s s as de subst!tncias ou gr.1ios (principalmenteem duodena, f{gado e pancreas). De s s e s elementos, 0 rna i s eonstante e apres e nca de s ac o s achatados e, catvea, os demais elementos s e r Larn rnod if ic ac oe a de l e s (Fig. 32).

59

Ern celulas vegetais, em que ate h6. alguns anos pensava-se nao existir a complexo de Golgi, e em invertebradoa, 86 ha peque noe sacos achatadas, de rrcrni na do s dictiosliomoll ou golgiossomos [So s a}, que constituelTlo complexo de Golgi.

Fig. 32. Esquema mostraodo a organiza<;ao do comp.Lexo de Golgi. S = cisternas entre as membranas; a = constric-;ao; a = lIactlo.Los . (Em; "Electron Microscopy of Plant Pr-o-t-o-, plasm" de R. Bll'7at, Intel'>!. Beu, CytoL 1'+, pag. 66, 19&3. Reproduzido com autOl'izaqao da Academic Press Inc., Nova Iorque, N. I.,

Estados Unidos.)

No rrro rn e nt o da divisao celular (mitose), 0 cornplexo de Golgi normal taITlbe= se fragmenta naforma de dictiossornos para que haja urna distribui.,;.ao homogGnea ontre as cBLulas-filhas.

Apesar de ainda nao b e m explicada., a ful19i1o do corn p l e xo de Golgi pareee estar Hga.da a secrer;;ao. Geralinente, em c"lulas secretoras, ele e bastante desenvolvido. Alguns pensam que ele po s s a ter papel ativo na seere<;ao, mas a maioria. dos autores acha que seria urn acumulador de secre<;ao p r o duz i da em outros locais da celllla. Em celulas secretoras de gH!.ndulas, e Ie ap r e> senta uma posir;;ao apical, entre 0 polo excretal' da celula eo nucleo.

Gra<;as principalme.nte a o trabalho de Neut1'a e Leblond do rim da d~cada de 1960, ficou claro que 0 complexo de Golgi, al'm. de a1'rnazenar subst:l:ncias secretadas no ergastoplasma c e.Iu.Ia r , ele pode tarnbe m complexar moMculas proteicas a a~6cares, originando gUcoprote{na8 (Fig. 33). Os auto r e s mj eta r arn glicoae rnarcada corn ia6topo radiatlvo e puderam ac ompauha r 0 s eu percurao no interior da celula, provandoque a s Int e s e de glicop1'ote{nas oc o r r-e no l!tmbito do complexo de Golgi.

so

Fig. 33. Esquema ilus~raDdo 0 expeI,:im<mto de Neutra. e Leblond. Glicose marcada e injetada nos animais e pode sa obo e r-va r- '1ua ela migra, palos canal:ic:ulos do ret1culo endop l.a sma t f co , ate 0 alvel do comp1eXQ de Golgi, cnde sa une as pr'o"teinas a~i acumufadas , "riginando glicopro1:e1nas.

Em e s pe rmatides ela e multo desenvolvido e a.clrrr i t e -sa que tcnha relac;ao com a forrna~ao do a c 1'08 S OTllO C ca.puz do es pel'1na.to:zotde, durante 0 p r o c e s s o de e s pe r rn i o ge ne.s e . 0 g r ano Io preac r oe e orm c o (que e a origem do a c r os s cm o] surge no rnt e r i.o r de urna ve s fcul a do comprexc de Golgi (Fig. 34). Em eelulas do epitelio intestinal, parece haver nele acumulo de ce r ta s e nai ma s (como {oa£atase de alcalina), dar imaginar-se que po s sa tertamb6m papel metab6lico.

MITOCONDRIAS (De Onde Vern a Energ"ia)

Representam urn conjunto de org:1nulos dife"renciados cxistentcs"o c itopta s ena , que podem ap ee e enta r= s e com formas diversas,

A

o

Fig. 34. Esquema mcs-tr-andc a sequencia na fo","""ao do aCJ;'OSS<H1K> iii par1: fr do corup Lexo de Golgi na espermat ide. G " comp'rexo de C:olgi; Gael' = grEinulo pre -acroasomtco no interior de urna ves teula; VOl sAcI' " vesie ura ac;ross6mica; Ac; = acros sono ; Mp = membrana plasmatica (se-, gundo Burgos, a r"weett). (Rapr-cduz i.do de Biotog£a CeZv.Zat' de De Roberti e , NowinsKi e Sae!'., '@ 196'5, com auto!' iza<;ao des a urcr-es ol da case Old i tor-a "£1 A teneo", Pedro Garcia S. A. )

61

como bastonetea. r aquet e s ou pe que na s e sf'e.r-a s , os quais 5 e de s l oc arn com a corrente c itopl as martca (ciclose). Coetumavse larubem chamar a o c onjurrt o des s as unidades c cndr Iorna, Apl'esentam tamanho de rna i s au menos 7j..1ITl de comprimento pOI' ZIJ.lTl de

la rgu.ra , DiBtrib",em~se homogi!neamente pOl' todo0 c i.top la s rna ,

podendo s er observ!veis COm examevital, gra'ias ao empr'ego do verde J'anus .

A compos i'iao qu.irnt ca das mrtocondr ias of ess encialme nte Z.ipo-protd'iaaJ comotodos 0$ a Ls t erna s de membranas de celula& a o lado de uma grande quanti dade de enz tmas , algumas vitaminas (A e C) e urn pou co de RNA. Estruturalmente a rnt c t-cs co p ie t:le~ trOnica r e ve Iou (gra'ias principalmente ao s t r aba.Ih o s de Palade, Sjo st rand e Rhodio) que a m itocond)' Ia e con "titu (cia po r urn s is ~ tema de duplas m ernb rana s , sendo que a membrana trit.e r na emite para 0 interior (na matriz da mitoc3ndria) expans eses. denomina. ~ da s O't'1:.S t:as mi tooondriais (Fig. 3'5 ).

Hoje esta c la r o que a m.itocOndria Ii urn organulo que possu] DNA na sua COInposiS:to qufmrca e que e s te DNA eeoc-ontrada na forma de moUculas circulares as quais se Hgam a membra. na tnte r na da mitOcondria (Fig. 36).

62

rig. 3&. C'ondria las de ligadils tern", •

Esquema de mitomostraado molecuDNA circulares a sua membrana ex-

Fig. 95. E·~que~a mo s tl'<'Indo a eSl:r'utura da m i to,~6nd"ia. (Em: "How CeLls Trans;form Ener-gy" de A. L. Lehllinger, Sci. Ant. 205> 3, "ag. 72> se t embr-c 1%1. Reproduzido c om autoL'iza",,,o. Direi roe r"servado2, 'f! 1961. pela Scientific American Inc.)

Por sua v e z , 0 problema da duplica,,§:o da r:nitocOndJ"ia que por muitos anos fo i muito discutido (pen sava c s e ern tr@s diferentes hip6teses para explicar 0 aurnento do ntirrrez o de rnitoc6ndrias; autoduplicaty.!o, £ormao;;~o do coPpo mi tooondx-ial. ou Nebenkern --0 qual r ep re s enta r-Ia a fusa:o da s rratocendr ia s da c6lula que naS novas cf:.Iula s Jo r ma da s ap65 a rrri tos e e e desagregaria em.novas mitocOndrias-- au produ;;a:o de novo a partir das rriernb r ana s do retfculo endoplasr-nitico), Ern 1969, g r aca s a experilnda de Luck, £icou dernonaera do que a hip6tese cor r eta era ada autodupl.ioacao, TiJU.idina tdtiada. nllo era un1. born rna r ca.do r a.utorTadiogr~£ico. pois a quantidade de DNA mitocondrial (: pequena. Enta:o Luck usou eoUna marcada. Colina ~ urna substlncia que entra. na. constituit;!Io de c e r to s !osfoHptdiOs que fazem parte da estrutura da rneznb r ana rnitocondria.l, As a irn ela io urn precursor hastante espec{fico para a mitoc6ndria. Luck trabalhou corn 0 fungo Neur'oapor>a. corn urn mutants nutricional Inca pa z de produzir colina. Assim 0 fungo .. 6 e e desenvolve em meio no qual a colina aeja adicionada. 0 crc Io mi t6tico cia. Neurospora s e fa III a cada 2 hoz-a s . Ass irn, a p6 s tra ta r a Neurospora corn colina marcada, Luck transferiu-a para urn rrre i.o eOIT} colina fria e a cada 2.horas fixava para microscapia eletr8nica urn c e r to nnme ro de cHulas. Ele pade nota r que a Inco rpor acao de colina rnarcada ia diminuindo acacia ger&<i!:o(Fig. 37), a que =OStrava a autovdup Ircacao da a InitocOndrias,

Durante as procesos de divia.!ro celular (mitose) h.( uma distribuio;:Io rnat s au memos eqtlitativa da mitocOndria entre as clilulas filhas.

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fig. 37. Esquema ilustrando a experiend.a de Luck , o qual clemonstra a au'toouplkac;ao de mitocondl"ias no fungo Neu:rospO'f'a. Acima temos a nl1mel."o relativo de c!\ilulas do fungo, o qual ~ duplicado a c ada 2 hcras , As celulas do fungo, apiSs tratamento com co Lf na milPCada sao co.Iocades em me Lo com co1.ina fr·ia e (j feita autorradiogra.fia par-a mic:r-oscopia eletronica. A incorporaqao obse""vad,, e ;;t: para a h , 1 para 2 h e "i para 4 h.

63

Quanta b fUri'f"ia, as Initoc6ndrias esUo diretamente ligadas a05 pr cc e e s o respirat6rio5 e deaproveitamento de energia para a ct:lula. No seu interior encontramos grande numero de enzirria s respirat6ria.s distribufdas na matrizmitocondrial. as qua.i s a tua rn em certa se'l(1!ncia.. determinando a tranforma<;a:o de 8ub~Uincia5 sabre as crlstas mitocondriais.

A rno Iec u'la altamente energetica da cel.ula Ii 0 trifosfato de adenosina (ATP), au s ej a , umnucleosfdeo de a de nos Ina mais tr@1I radica is fosf6ri cos, que a pr e sentam liga<;6es de alta energia. A sua representay5:o costuma ser feita: A - P - P - P,

Os dois fosfatos da di r e it a estlio unidos por ligas-aes qufrnrca s de alta energia, que, rompidas, Ii bertam urna e ne rgia cor re spondente a 8000 c al o rt a s: a 3' ligar;ao. quando quebrada, Liberta aooo c a l o rf a a ,

Es sa rnoltScula entllo armazena ener gia, que val s e ndo libe.tada a medida que a c~lula nec e s atea, Entao:

ATP (A - P - P ~P) - ADP (A - P - P) + 8000 c ako r l a s

ATP (A - P - P)

- AMP (A - Pl + 8000 ca lo r i as

Evidenternente a energia libertada tara p o r run'tao ativar a produ!rao de s u b s t a.n c i a.s , a quebra de ou t r a s , 0 c r e s ctrrre nto da s ce Iu Ia s , o s s eu s movirn e nto s , 0 s pro ce 56 0 s de dt vis ao,. etc. E s ern e n e r gia a celula rno r reo

Na rrri.to c end ria 0 cor re jus tamente a produ<;" 9:0 de AT P, a pa r ~ til' de ADP e de radicai;! fosfato. A produ<;":to de A TP s e inicia a tra vj!j $ do Pl'O c I! " so de g lic oli lie (quI! I'i hialoplaa:rna tic 0, pOl' tan ~ to extra rrrit o co nd.r-ia I} e Ilegue~"e no interior da s mitocOndrias com 0 cicIo de Krebs e da c.ade.Ia respirat6ria aliada a fo"forila<;:1i:o oxidaHva, Para que tudo lSSO ocerra e necessaria urrra ae.rie de condi"Cles, como; 0", enzimas (citocremooxidase, sucino dehidrogenase, furria r a e e , etc.), coenzirnas (NAD ou Co I, N ADP ou CoIl, e ee, ). Tudo is so s eenc ontra no inte rio l' da s mitocOndrias. Pode mo s aa s Irn vel' urna mtima correla~:!:o entre composi .. a:o qufrntca e fUn,,:!:o de urn orglinulo c e Iu.Ia r ,

64

Mas qual s e ria 0;> s ub scr aco a partir do.qua I as trans£orrna~oes o co r r e r ie.rn para a produ<;:l[o de ATP? 0 alhnento. Fixerno -nos nos h i dr at o s de carbono (H.C.J que, como s a be rno s , sao a.Ii rn ent os granclemente energ.,tic o s , Dent ... o do o r ga.nt a rno o s H. C. slio dige,ridoa, origi.nando em geral gZic:ofl€l (CsH 1 "Os). Partamos da gli<;:ose: e Ia entra para a ce1,,-la,. ap6s ter a i do fosforilada {glicose-6-Pl, graS'as a permeabilidade cia rrrarrrb r ana plasmatica [po r osmose). No hialoplasrna ela passa po ... uma serie de t ... ansforma<i0es ate or ig inar d ua B mol ec ulas de aoido piruviao. A e as e f en6me no c hamarnos gZicoUse. Em cada transforma!;,ao qo.e OCOrI'e hoi quebras nas morec ulas, cia 8 quai s val se ndo li be rtada ener gia. Es 8 a ene rgia e utilizada na rea<;;il.o:

8 ADP + S P

energia

8 ATP

As s i m podem £'ormar-se 8 lnoH5culas de AT?,.

o acido pinJ:vico formado entra a.g oa-a, ria rnitocondria, onde pas5a. por urna seri,e de trans forrna<;:oe 5 ern c a de ra, orlginando na prime:i ra e tapa Acetil Coenzirna A. Esta, depois de urn ciclo ... rrr que se formam 10 s ube ta n c i.a s diferentes, volta a a e r p.roduzida f .. - chanda 0 chamado ",iota de Krebs. Para c a da transforma<;;ao ha ne ce s s idade de uma e nzi rna e todas elas alia e ncont r a.da e na rrra=tri z mi toc ond rial. Em eli! e r-e nt.es eta pas d e a s e c-i c Io o c o r re 1" edu,s:ao de coe nzdrna.s, Io rrn and ov s e co e n zdrrra,s redu"idaB (CaH",). Estas transferem 05 h i dr ogen l o.s r e cebidos (el';:trons) a out r a s c oe nz i rna s atraves da chamada ca de La r e s pi r aeo r-La, Os H;fl: vao sendo levados ate '0 o~, formando-se H20. E,m diferentea nlveis desaaa tl"ansfOrma~5es, Hberta-se energia. qu .. permit .. a reunUio de ATP e P inorg.<lnie 0, formando- SOl ATP (fosforila",ao oxidati va). Cada molecula de acido pinlvico o r i gi na 15 mote cu las de ATP;

C orno cada mole cu la de gli COB e o r i.g ina Z mole culas de a cl do pi nJvi.c o , para ca da molecula de ghcosE', te r e m oa no final 30 moleculas de ATP. COID1l1ais 8 daglicolise, 38. Portanto, 1 molec:ula de glicose produz 38 rnoleculas de ATP, 0 que co r r e sponde a uma e n e r g i a de ap r oxtrnadarne nte 304 000 calorias, e nAo 684 000, como seria de e s pe r a r , pais na a reao;:<:ies intermediarias hi consumo de erie r g ia (55% da e n e r g i a pote n c i aI}. Essa ef'i c i en.c i a de 450/0 £az desse Sistema vivo 0 mais eficaz que s e conh e c e , Nenhuma maquina pos s ut rendimento ene r ge ti c o l;lo e le vado (Fig. 38).

65

F'ig. ~8. :Esquema lIlos'tl'ando a sequencia das transformac;oes da j!;licose ate a obtenc;ao de energia.

Os lipfdioB, a lern de fazerem parte da est rutu r a ce Iul a r, tarnbern sao alimentos ene r get ic os , Eles tarnbe m podem vir a originar acido piruvi.co, 011. deficiencia de H. C., mas com rendirnento menor. Geralmente, depositam-se ria s cUulas (va cdol e a}, sof r e ndo transformaoroes metab61icas rrrai e lentas.

A'l i m erito s como as pr otefna s , 8 ao, ou plastic os, ficando na celula como parte de sua estrutura, au enzimas que c a ta Ii s arn rea<yoes. Na [alta d" alim e nto s energeticos (H. C. e lip{dios), as prate ina s tarc be m podem Iun ci ona r como alimento energetico,

LISOSSOMOS (A Dig e st ao Intrr a.c e.Iu l a r-]

Gra"a'" principalmente "OB t r-a.ba Ih os de De Duve,que de s - cob.iu oa If.aosa amos co,m a t~cnica de fr'acionanleutocelula., e a lltiliza-;;ao de rruc r os c o pi o e1etr60ico (Novikoff), pedemos drz e r que o S Ii S{lS S o mos s:l:o 0 r g81l1.l1 os de peq ue no t amauho (me nOI' que rn ir oc ondria) e xi s t e nt e s nec it oplas rna, de compos io;:lto lipo~pro~ te ic a, formad 08 par urria me m br ana 5 impl e 5, no inter ior da qual s e ac ha grande numero de enzirnas digestivas (Fig. 39). A gr a nde q ua.nt idade de e)1Z i mas exis te nt e s "as te or g:l:n 111" Confer e -Lhe grande peso molecular. Ap6s c entrifuga"ao Ida ordem de 100.000 X g, durante 80 minutos) eo lisossomo 0 organulc q ue ocupa a polo c ent r ifugo,

Encontramos no lisossomo enzimasql.leslIo capazes de dige~ r i r praticamente tOd08 08 compostos qufrnicos existentes na ce~ lula. Ha: ribonuclease (que digere RNA), de s oxfvr Ibonuc Ie a s e (DN A), r o s fa ta s es (es te res losfatados), c ateps ine.s es (pr ot e rnas), glic os i da s e s (poUssaca"rdeos), su1fatases(esteres. s ulf at a d os}, etc, Ho je s.1:o conh e aida s m.a.is de 40 enzim.a.s lis os s fln,ica 5 ,

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A j'url{1Go dos lisossomos esta ligadaadigesUi.ode 8ubst.lincias no interior da celula. As part{culas penetrarn na celula at r a ve a de urna invagin"",:ro d .a, membrana e no seu interior !orlUam 0 fago'i!i~ eomo , .Em s egutda 0 lisossomo s e funde ao fagoss'OlllO e formao vacUoto digestivo. Agora as enzimas atuarn, as aubatanc i aa 5;:(0 digeridas e as r esfduos (c or po re s t duaf) sao e ltrntria do s pOl' urn processo chamado defecfJ.siioC'elut.W' (Fig. 39).

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rig. 39 . Esquema mostrando a digestiio in'tra<eelular a piH''tir de enzimas ",,,istentes no lisossomo. (Em: "The E.,ysa,some" de C. De DIl""" Sd, Am. pag. !iB~69, maio 1953. Reproduz Ido com au"toriza<;ao. Di~ re i tos r-es er-vadcs , ® 1963,. pela Sc ien't i :fic American Lnc . )

Weber de monar rou que, du r-a.nce a metamo:r[ose do s apo j no Cur soda qual a cauda do gi rina val. di'm; mri ndo Ient.arriente , a. medida que surgem o s m eznba-os , desaparecendo quando 0 novo .9,apinho esta fo r rn a do}, a quanti dade de catepsinase dos lisossomo5, na, cauda, aumenta proporciollaLmente, a diminui"a:o da me e ma , Entil'.o have ria 1'ela"a:o entre lisossomos (c atepsinae e) e a dige stllo (autocti ge st§ 0) da cauda, que e funda me ntalrn ente cons ti tuf da por protelnas (Fig. 40).

LISOSSOMOS E DOENyAS

Fig. ~ Q • :r~~ro fic.o moe tr-and,~ a r'eg;r>e,s sao de c a uda de g;~rino a merlida que illJrnel1Ta 1'1 quan t Ld ade de c:a:te5pina~~. {Em: "The [,yso$ome" de c. Je Duve , Se-i , Am, F,<'1g. 70. mal", 1963. Rep:roduzido ('om aulori'~a.~ao ~ Dil""ei tos r-~$ervado s • © 1963, pe La S dentific ~me['i':an Inc.)

61

Hoj e sao c onh ect da s v~riaB doe~a" na e s pec ie humana relacionadas ao mal £uncionamellto d05 Ii s oas ornoe. Ha do enca s que sao a.dqu.i r i da s pOI' in£luencia ambiental (s i Hcc s e do s mineir(8) au que s:'to geneticas (sfndrOlne de Tay Sachs). No c a ao da s i.Hc os e do s rrvrn e i ro s , as partrculao;< de snica chegam a.o a alv60106 pul.rnona.r e e com a in~piralia:o, entram na s cHulas e a e an exam as pa r e d e s do s Li.a o s s orric a , podendo deter=inar 0 seuro'mpimento. Com, b.to a a en..;imas s a: a lib e r ada s, ca u sa ndo a destru~ao da 9 C 61u1a 9 alveo lares. Como COilS eq ii~ncia, as c'Lulas dos h cido s conjunti vas passam a s e dividir inten sarnent e pod.endo o r Ig ina r pr oceas os turnor a i s ..

A sfndromede Tay -Sachs au idiotia amaur6tica infanti1, e uma do erxa heredit<!.ria. r eces etva, causada pela falta de capacidade da produr;a:o cia enz lrna Usos sOmica hexosastini.dase A, a. qual e s ra r elacionada a digestll:o de c e r to s :mucopolis sa.cat'rdeos. E stas subst£ncias nao digeridas an exam- ae As membranae da s c !Hulas neTVO· sas, impedindo a cond~o de impu150s ne r vo s o s , Oeste modo, 0;8 indivfdllos afetados ja nascem s ern movimentos, s<'to c eg oa, mudos e su r doe , tendo portanto urna vida vegetativa que, em g e r a I, s e extingue na prirneira inmnc.ia,

PLASTOS

SliO orga:nulos c rtopka s matfc o s existentes somente na s ceIula s vegetais e diretarnente ligados aos proce s s o s rrie t a b61icos. Aparecern praticamente em todas a s c e Iu la s vegetais. Geralrne nte , nos plastos, e ne ont r a mo s pigmento" (c r orriop las to s I, mas h!i. tarnbe m plastos sem pigmentoe (leucoplas tos), encontradog aernp.r e em celula s sexuais e e rnb r iorra r ia s , Estes, a;; v1zes, s1'[o confundidos com as mitocOndrias. Dentre o s leucoplastos, as amiloplastas elaboram gr1l:os de amido , que e um polissacar!deo da glicose e que constltui subst!lncia de reserva nutriti va da c eIula . Em clH111as meristematicas (e rrib r ion.a.r ia e] e partes de plantas n:!:o expo st ae 'a luz 56 ha leucoplastos.

Dentre o s cromoplastos temos as "~Ol'OpZa8to8 (que contem,clor of i.La , encontrados nas plantas verdes), eri rrop las toe {pt grn e.nto ve r> rne lho , como licopeno do tornate ), xarttopl.as tos (ptgrnento amarelado, do tna:tniio, da c euou ra}, Nas algas ha grande Yariao;:!l:o de cor em vi r tud e dos diferentes pigm.entos existentes em ae us pla ato s.

68

o nurne r o , tarnanho e forma dos pl as tos sao rn a i s au menos conatante s em c etul as de urn m e srno tecido, variando entre caLula s di.ferentes e e s pe ci e s difercntes. Durante a mitose os plastos distribuem-s e entre as celulas -£ilhas, podendo bipat"ti r - s e ,

Vamos deter-nos ·,un POliCO :maie rio estudo do s «loroplaetoe , par estarem diretamente Hgado s a Ienbrnenos metab6licos. S:Io constitu{dos principalmente por p r o te fna.s , lipfdios e cloro£ila. No interior da. mat r-Iz, do c l.o r opta s to, ligadas as membranas do estrama, alto cncontradas mo leculaa circulares de DNA, 0 que £az com que e ate or ga:nulo a p:r e s errte u.rna. grande ca pa cida de de sin tethaI. Este DNA pode pr odual r todo s as tipos de RNA e estes levar ern a e Int.e s e de p r otefne.s especrficas gra<;as ao rnaquinismo enz lma.ti co pr6prio do cloraplasto. EstudoB neste sentido fo ra rn amplamente realizados na alga AaetabuhU"ia. Sua estrutura, bastante hete r ogenea, f,. constitu!da pOT unidades cham.adas "grana", me r gulhada s em um e s tr orna , 05' I grana" s eriaIYl cons titu!do s po r camadas de lipfdios alternados pot" carnada s de protefnas, sendo que a clorofila so depositaria entre as camadaslipfdicas (Fig. 41). Entre os "grana" encontr arnos zonas m.ais de.lga da s, que constituem o s itintergranall•

A f'un¢o dos c lor aplas tos e ext r e rna.rrrerrte importante . po is , gra-

, . ' J

sas a clorofi1a que contem, podern captar ene r gta Iu ro Ino s a t, trans ~

forma-Ia em energia qufmtca , na forma de moleculll.s altamente

energeticas como a glicoae {ve r' ct c Io de Krebs). Esse fenOmeno constitui a fOWB8{nte.8e. Entao, nos cloroplastos, a partir de elementos simples, fornecidos pelo solo e pe Io a r (agua e CO,.) egrao:;:as a clorofila, produz -se materia o r g an i ca (glicos e) que forn e c ed;' o potenc tal ene r g~tico para a c elula. Es 5 e rna te r ia I p r oduz ido pe la fotoss (nteB e na s plantas verdes e que va; s e r queimado nos prOt.asBOS de r e s pi r a .... aO. Hbertando a energiaar:rnazenada n11 forma de liga-

'0'

Fig. ~1. Esquema d~ ultraestruturs do cloroplasto. (a); corte longi~udinal; (h) - corte rridirnensional (segundo Wert stein) . (Reprodu:ddo de Cy to logy de G. B. Wilson e J. H. Morrison. Cortesi" de Reinhold Pubf, , Co" Nova Iorque, N.r., Estados Unidcs.)

69

<;oe9 qu(micas e permiti.ndo a produ<;:to de ATP, que e a m.olecula energetica da celula (vel' fun<;~o da mitocGndria).

Nos cloroplastos, alem de realizar-se a foto s s Irite s e , realizas e ainda 0 c i c Io de Krebs, pois aqui tarn be m ha todas as enzimas necessaria" para 0 e i c Io, Porem aqui , ao inv6s de oeorrer depois do c i c Io fosfo'1'i'lagao OXidat1:VQ, o co r r e fosfol'ilaglio fo toss intet1:Ca , que so Be r ea l'i.z a em pres en<;a cia Iuz , Nas mi toc6ndrias a fo sCorila<;3:o oxt dattva oc o r r e tambem no e s cu r o ,

EnUto, na s pla"tas, materia o r gan i c a e produzida [f ot.o s s frrte s e) e depo i s e transiormada, Irbe r tandc energia (respira<;ao). Nos animais nao ha fotosslll.tcse; eles dependem po r eant o de rnat e r ia org:trri c a produzida pelas plantas. So ha respira<;:to. Dizemos enrao

que o s v e g e tad s SaO (D,I-tot'l'Of08, sao independentes, produzem. 0 s e u

proprio alimento, cnquanto 05 animais sao het.er6trof'o.~, dependendo dOB v e g et aj s ,

6

A MEMBRANA CELULAR E A PERMEABILIDADE

MEMBRANA PLASMATICA

Ao lU 1 eros co pia optl co a me rnb r ana p Ia s m;itlca .::; irrvj s r vel po is Sua espe6sura e da o rde m de D,Ol0t.J.m. Desde c cdo, mesmo s ern que s e pudesse obs e rva-aa, percebeu-se que de ve r t a exts tt r urn "mvoltul'io est rutura.l em t or-n o do c i to p Ia.s rn.a , pols ape,sa 't- de a for. rna, da <:";lu1a poder va rIa r , e s e a varia<;ao e Ii rru.ta da , e s e duas ceIu Ia.s forem pastas em conracto , elas n.3:o s e fundirao.

Sahemos que as ce;lula,5 apresentam compo5i,s;aoqu(mica defint da , na qual os c orrrpone nre S a.p r e s erit.arn p1'opon,;ol' s male au rrre nos COnS ra nne s , confo:nne 0 t i po COnS ide rado. Entao nao ha entrada OU s afda de mate rial da c !flula, de maneir a deserdena da, rna s obe de _ c erido a ce r ta s condi<;i5es. 0 que possibilita a exi s taucta de regu- 1a<;;;;:0 desse fe-n or-n e n o oS II- rn e rnb r ena p Ia s rn at i ca , Ern rnllitos c a.s o s o bs e r va - S c a pr-e s en ca de ca pa s exre rnas, r tja s , que lhe dao maio r r e ~tstancia, "e s t.a s , s;n" po de rn s e r ob s e r vada s no rn i.c r o s c opd o optico. Geralrnente e s 8 a s capas e xce eria e saO con s t itufda s de hidrates de ca r bcno , Em muitos animais, geralmente em artropodes, e Ia e de quitina; no s vegetais e de peatina e aeZuloG!l, se ndo que ern rnu iuo s c a s o a ta mem.brana vegetal apresenta depositos de cutina, s uber ina ou lignina, que represen.tam.adaptao:roes de dire rentcsceIu Ia.s e di!e rentes <:ondio;:o es ambi enta is 1Ft g. 43),

71

No 50rg anismo s pluri celular es, as c elulas acham - s e r eun l da s (ormando' t e c i do s , No c a s o do tecido epitelial, as celu~as tigarn.8 e gra<;;as a uma substltncia cirnentante rnu izo rica em calcio. Na. p r e s en~a de sodio ou pora s s io hi diminuiO;lIo da resistencia dOClrrre n to ,

A membrana plascmAtica apresenta vArias propriedades COInO e La s t i c i da de , coesiio, res istt!ncia mecltnlca, res is U!ncia eletrica, regenera<.<ao, pe rmeabiHdade se Ie trva , ou s eja, P" rmite a entrada ou a sa (da de c ertas S u be ta_nc ias da c:e lula imp edlndo a de au t rae.

Se a membrana (ela e e le t.r Ic arnerite n eg at i va ] for iragmentada, pode ra s e r regenerada des de que no mero am biente haja tons de calcio, po i s hi ne c es sLda de de forma<;."ie de u m proteinate de calcia .. Se 0 trauma for rnu it.o grande, n:;:o ha ve ra r e get1 e I"a<;ao,. 0 cl t o ; plaema extravasal"11e a cclula rn o r r e r a (cit6lise).

c

72

Fig. tj 2 . E"q'~I>Tfla If.O s tel'a ndo 'reforc;os de l.ignina tl11', celulas de vasos co nd rrt-m ... ti!:5 de se iva. J\ ~ B := Vi.l:So.s Lenho sos , C == VrI, so 1 iber'iar.o (co1:"1:e IGn6iT'K'!l'!'1ilU; 0

vaao libet"'i(;:no (cor-t e ,tr:'·i11i~v • .-.'s"l [lei a 1 -t-ur-a <;I" placa c,'ivadil) .

Cornpo!lis:!l:o Qu(mica da Membrana Plasm.atica

A ch a= s e constitui'da por lipfd 105 e protefnas. Ch egoll-s e a es sa

con c Iu s So , inicialrnente, de rria n e ira indireta: ~abi~"'!1 e e E';'; r e La

grandemente pe r m e a ve l a o s lipi'dios, as subs tlincias que dis sol v e rri lipi'dios ou a subs tSncias que s e dis S o l ve m ern lipi'dios, .. possui r c e r t a r e ai s t1!,nc ia el';;trlca. Entlro conclu{u~ s e que c o nt-irrha lipi'dio~. Ap r e se nt a ba rxa tens"o supe rficial, 0 qu,," e c a r a ct,e .[s t i co da pre 9 e n c a de protei'llas, e devi do a ,elas terlamos tamberr>. clast i c ida de , r e s i.s t.en c i ... e coesa;o n<J,. membrana. Hoj e eSB,," C"ompo"i"ao qu.Irrri c a esta confirmada,ll,"ra>;a.s a t"<.:nicas bioqu(micas e ctt.oqufmtcas , C<}mo vemos, rria.i s urria v e z temos grande <:01'rela<;aa entre c orn po s i c ao qu Im i c a '" as p r op r i e da de s a p r e se n ta da s pe la e st r-uru r a ,

Estrutura da Membrana Plasmati.ca

A rnaioria do s dados que temass 0 b rea or ganiza o;:ao da mem b rana plas:rnll.tica Io ra rn fo r-n ec id oe porestudos feitos err>. rrrerrib r-a na de er1:trocit;()s (hernaeias). Como s ab erno a, 0 er'itrociton-ta.duTO de rna » mHero s nito apr ea errta n~cleo. S e for tra ta do peo- so lu "a: 0 hi po tBni ca,

havera entrada de agua ern e xc e s s o para a celula ate 0 rn orn orit o en> que oc o r r e r a cit6lise. Em seguida pr cce s s a c s e a. urna c e nt r if'u » ga<;;a:o e e epa r arnvs e as me rnbr ana s . Estas, isoladas do c itaplasma (que tnte r£eriria nOS resultados, pois 0 plasmag el e s ta intimamente ligado a e la s 1, podem s e r e s tudadas po r mete de diferentes te c ni c a s , como 0 ml c r o s copto de polariza<;;~o pa ra determinar a orienta.,ao do s s eu B cornporren te s. ou 0 le ptos copio , que e urn a par e lho q II e permite determinar a sua espessura.

Reunindo varios dados Danielli, em 1954, pr-ope s urn rrio dc Io para expl i ca r a sua estrutura Inttrna . Segundo Ine, haveria duas eamadas lipidicas ce nt r-a.i s , corn grupos n§:o polares c e nt r ai s e 05 po ra r e s voltados pal-a as rrro l e c u.l.a s de pr otefnas , que e e riarn pe » rHericas a membrana. As proteulas po de r-i a.rri em certas 2;011118 envolver o s lipidios, delimitando a.s s i.rn peqllenos poros(Fig. 43). Entre as lipidios e as prote[na~ teri'amos moleculas de agua.

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Fig. '13. E:sq llama da organ iza<;ao da membrana plasmli.tica, segundo Daniel1i, mostr~ndo a organiza~ao das mole~ulas de lip1dios e pro~e1na. (Reproduzido de Biolog£a Cetutar de De Robertis, Nowinski e Saez, @ 1965, com autoriza~ao dos alltores e cia casa editora uEI Ateneo", Pedro Garc1a S.A.)

Mals recentementeWolpers, ern e s tudos com rnicroscopia eletrOnica, nao demonstrou 11 pres enca de poros na me mb rana e conc1uiu que as moleculas de pr ot efna s e distribuirlam em um reticula de malhas fa cha da s , dete rminando urna arma.,::Lo me c an iea da mem » b r ana , e o s Hpfdro s e s ta r Iarn dt st r'tbufdos entre as ma Iha s , permitindo as s i m grande permeabilidade 11 a olventes de Lipfdtoa .

Observac;;oes com 0 rnt c r-os copto eletrllnico, apos g r aride aprirnoramento na s tecnicas de preparas:ao do material, rrxo s t r arn que a membrana plasmatica em praticamente todos o s t i po s celulares po s s ui uma estrutura cons tttufda po r duas lamelas d errs a.s de 25 A de espessura e entre elas ha urna carnada menos densa da rrae s rrra espessura. EBsaB tr~s camadas da membrana p Ia s rria tt c a reeebem o nome de "unidade de membrana". Foi tambem constatada a presenc;a de paras na membrana em alguns tipos de celulas.

Sa be rno s ainda que a membrana plas:m<l:tica ac ha - se taniliem Ugada diretamente ao ret{cu!o endoplasnmtico (Fig. 7).

Microscopia ElectrOnica da Membrana Plasm'tica

A partir de trabalho de Robertson (1957), pode s e r definitivamente demonstrado que a espessura da membrana plasmitica varia de 75 a 100 A e que ela li constitufda por urna urn-dade de membrana. A unidade de rnembr-ana e definida como 0 conjunto de tres regitles, l1D1.a menos denim, central, e duas lateTais mais densas eletrenicamente (Fig. 44).

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fig. 44. Fotografia da membrana plasma"tiO>l de hem~cea (c) de mamifer'o (hom em) - -un i dade de membrana -segundo Robertson. tiotem que as duas zonas p~T'if;;r-Ices sao bastante eletron-dcnsas, (setRs) • enquant{"J a central e pouco e Le't r-ori=deris.a . '-l 00. OOOx (cortesia do autor).

Ultimatnente. urna tllcnica que tern Bido rnui to us a.da para 0 estudo da organizat;:to da rnernbr ana p la s rnd ti.ca , , a tecnica do "Treeeeetohing" OU cnofr>atUI'a. Esta tllcnica facilita a fixac;i!:o e a inciusi!:o,

de modo a dim.inuir as possibilidades de a r tefa to s, permitindo a ob s e r-va cao da rrrern hr-aria par cirna, au em moldes, s ern que 0 rnaterial s e ja cortado, como s e co stuma fazer na rrricz-o ac apia e Ietrllnica. conv enc lona.I,

Com a utiHz~ao deata t€cnica, Singer e Nicolson, em 197~, lanc;a.ram urn modelo de eatrutura da rriernb'ra na, que pode s e r can. siderado como Ulna alternativa do m.odelo de outros autores. Segundo este modelo, a membrana plasmAtica nlto s e r ia uma estrLltura est2:.vel, r!gida. mas si=flu{da, A matriz da s membranas dupla s seria de lip[dios. na qual e s ta r Iarn adsorvidas mo Iecula s prot~icas. Estas mo16culas rna.nte r= s e-da m a.ds o r-vi da s pOl' fo",!a.s fundarnenta lrnerite polares, podendo rne srno penet.ra r na carna da lip!dica, mantendo contacto direto com a regill:o hidrof6bica da rnernb rana (Fig. 45).

p

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rig, l! 5 . Es q u.ema de como se imagina. a par-t ir- do tl""balho de S inge:ro e Nicolson (:1972) , deva ser- G arrarlj 0 molecular do S lipidios (L) e proteinas (Pl, na organizar,ao estrutul"al da mernhl"ann plasmatica.

Este modelo ~ apota do em va r.ia.s evidi!!ncias exper-imentat.s, podendo explicar v~rios da do s s obr e a fisiologia da membrana. A tecnica da Cl"iof1'4tura evtdenc iou a existi!!ncia de numer oe a s oart!culas de 50 a 85 A de diltmetro, emhebidas na membrana. Q"uando s e observam me=branas ap6s tratamento com agentes proteol!ticos e a t~cnica de criofratura, essas pa r tfeula s nao sao vis ea s , " que fa z crer que elas sejazn constitu!dae por protefnas. As partfculas "protHcastr podern a.tr ave asa r a membrana lipfdica de un lado a outro. Quando Se fa.z em membranae artiIiciais apenas corn f05fo. lip!dioe, as partrculas na:o slto obs e r-vada s , Por ou'tr o lado, quando a e s ta s rnerr.branas £osfolip!dicaE! s e ac r e sc enta a protefna.

rodopsina, as partrculas s.charn , se presentes. 'l'ratando- se as rnernbr-ana s dos erit:r6citos em diferentes pHs, o be e r va mv s e ITIU~ dan<;as na distribui<;:§;O das partfculas, as quais podem se agregar au dcsagregar, indicaodo a possibiUdade delas se rnovtrne nta.r ern no plano cia membrana, grao;as a fluidez de s ta , EXT) pH 7, 0 as partfculas apresentarn uma distribu~ao undfo r rne 01.0 longo da membrana' a.g r ega.ndo v s e quando 0 pH ca i para 5, O.

Diferencia~a:o oa Superf(cie cia Me!nbrana

Gra'ias 01.0 ernp r eg o cia rn i c r-o s copta e l et r erii ca, po de - s e dernonstrar que a membrana p Ia s rria t l ca , na superf[cie de c e r ta s celulas, apresenta varias diferencia-;oes, adaptadas as suas fun'ioes,

Segundo Fawcett (1958), po de r(amos clas s ifica-las em:

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a) E:sp8oiaZizaf'oes da parte livre da ",nul-a. Sao e n co nt r-a da s , po r exemplo, em celulas do epitelio intestinal de abs or~iio do s alim enro s , Elas apresentam em sua supe rifcie g rand e mirn e r-o de microvilosidades, que antig:arnente (ante s da r e solu'ia:o da rn i c r-o s ; copia e.le t i-ont ca) e r a m interpretadas como p eque n o s pe Ic s de superC(cie!3 da s c,flulas, e 0 s e u conjunto rec e beu 0 nome de cut{cu~ la em e s co va (Fig. 5 A e B). 0 intestino ja ap r e s e nta grande numero de vBosidades que t~m por £un"ao aumentar a s up e r Hc i e de absoro;:ao. Com e s s a s microvilosidades da s celulas a aup e rffcie e ainda mais aumentada (uma 136 celula. pade t e r ate 3000 rnicrovilosidades, Po r meio de calculos, corrc Iuj u- s e que em I m2 de intestino podemos ter 200.000.000) permitindo maior aproveItamento dos aHmentos.

b) E8['eau~Ziza;f}es de eoniaato entire as celu Las (desmos s orn o s}, Sao regioes de conta cco entre as celulas a dja cerit e s (prindpaJ.rnellte epitelia is) q\le permitern maio r aderencia entre elas. Ern alguns casos podemas nota r a conve rg ane t a de pequenas fibrilas (tonofibrilas) c it.op.la.s rrrat i c.a s da s duas c e lu la s vizinhas aos de s mo s s orno s (Fig. 5 C, D, E).

c) E8peciaZiaa~fjeB cia base da oelu la, Suo invagina<;oes, as ve z ea em forma de ta bique s , na base de certas celulas como as dos tutmlos renais, que apresentam urn rne ta bo l i.s rn o aquoso intenso. Os tabiques as vez e s parecem dividi.r 0 citoplasma ern zonas nas quais ha grande a c urnu Io de lTlitocan,;h-ias (Fig. 5 Fl. Admite~se que ne s s a s mem.branas haja, enzimas responsaveis pe- 10 transporte de ag\la.

Recentemente a rrric roscopia eletrOnica pOde mas trar a existencia de v~rias outras diferencia<;eles no nfve l da membrana plasm&.-

tic" as quaia nllo discutireUlos "qui, po i s representam. a s aunt o muito especializado que fog ern aos objetivos desta. rnonografia.

PERMEABILIDADE GELULAR

A rne.mb raua celular apz-e s enta estrutura e c ornpc s Ic ao qu{mica que a torns perme!val de modo salativo a varia vel, constituindo urna barrera que isola 0 interior da c~lula e facllita urna inters"lto com 0 anlbiente, destinada a manter tod a s as subst~ncia s num.a margem de concentra<;a:o adequada ~ atividade bio16gica e ape cf'fica.

Di.Ie r-erit e s sesmentos da membrana t~rn as pecificidade qu irru ca diferentc. Enzimas estao locali:z:adas na supe rrfcte da s <;elulas para converter subst.1.ncias que sao insolLiveis na membrana em de r i va.do s e o lu ve i s , capazes de atravessa-la. Determinada moleeula pode penetrar na celula, enquanto outra similar e rn tamanho " propriedades eletricas e 'inc apaz de faze-Io.

E facii dern on st r a r que a membrana plasmatica apresenta permeabilidade, bastando para i550 que Sa tire a c e lu la do meio isot6nico (meio de c onc ent r acjfo igual a sua). A plasm6ZisB, observada ern celulas vegetais quando colocadas nurn mei.o hipart~nieo, determina s a fda de agua da celula, que perde a Sua turgesc~ncia. 0 rnesrno fenl'hneno ocorre com ovos de certos animais marinhos, como o o u r-i c o do mar. Eritrocitos que so£rem citoHs e quando colocados ern urn me to hipotOnico (por entrada de agua, ate o r ornp irne nro da membrana) tam bern demonstram passagem de substancia pcla membrana. Atualmente, ue arn=s e comumente, para demonstra<;;ao da permeabilidade, subst;1ncias que apresentarn urn de s eua atomos r ep r e s entado por Urn isotopo radioativa. EBsas substancias po de rn s e r colocadas no meio, ou na, cornf da , ou injeta da.a no animal, e ern s egu Ida detectadas no interior da celula pelo metodo da auto- radiografia.

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Podemos falar em varias modalidades de permeabilidade cetular. So as presHoes que pe r-rrrit ern a.s su.bstl'l.ncias az r ave s s a r ern a membrana s~o Cornecida8 pelo ambiente em que se encontra a celula, te m.o s o 1;r{lrlspol'te paee-ivo ; Se ha necessidade de energia fornecida pelo pr6prio metaboHsmo da celula, 0 transporte e dito ativO. Se as s ub s txnc i a s sao levadas ao interior da celula pOl' processos tn di r et.o s de ingest.1o,falamos em faqooitos€ e pinoei-to::Ie, palavras ern euja composi'iilo e nt r arn , alern de out r o s , o s elementos gregos phaqein e pinein. que significam comer e beber , respectivarnente. Quando ha p .. cc ee s o de elimina'ia:o de substancias de cHula, designamos cl.asmooctoee,

As for~a6 que ex e r c ern pl:'essao sabre a rrse mb r ana. celular nO trans po r te pa.s sivo SaO: a gradiente de concentl:'a~ao, 0 g radiente de potencial eletrico e a for ... a de arrastarnento do solvente.

A for'S'a gmdien-te de aC»JcentragZio e 0 resultado do movimento ao a.c a s o da s partt'cwaa {{sicas que tende a dt s pe r s a s Lae uni1orrnernente. Quando entrarn em contaeto duas 601u<;oe8 da mesma II uba t§.ncia, mas de conce;ntrao;;!5e5 diferentes, a subs eancta disolvida [e o luto] e e di£unde da regUto mais concentrada para amenos cone entrada ate restabeleeer igualdade de con ce nt r aqa c. Is so a corrte ce ra ai nda que as duassolu\<eles estejam s epa r-ada.s po r uma membrana pe rrneavel ao soluto (dialise). Quando a membrana so e pe rrne ave l ao s okvenre (osmose) e nao ao soluto, 0 gradient e de concentra<rao determina a fOr><;a. de oornase: 0 solvente tnove-se atrave8 da rn ernb r a.na , da regi§:o de "oncentragao rrrerio r (h,potOnica) para a de coneentra'iao maior (hipertOniea) ate restabelecer a isotonia - -igualdade de pres" 15e" osmoticas.

If: a perrneabLlidade seletiva da membrana que reg ula a passagem de e ubs tanci.as pelas £or<ra5 de transporte passivo.A permeabilidade varia de mo16cula a mol~cula em fun.;;a:o de sua cornpusi;a:o qufmfca e do aeu tamanho, sendo urnas exe lufda s e outras mats OU rnenoa permeAveis.

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Sa as moleculas do soluto s e dies oeiam ern {ons, entra em jogo urns nova for<;a de transporte pas s lvo: difercmqa de potencial elet1>ico at rave s da membrana c e lu Ia r , entre 0 'interior e 0 exterior da celula. Tal dtfe r en ca cria urn g r adte nt e de potencial eletrico entre os (ons negativos e positivos, decorrente das suas concerrtragoes diferentes de um lado e outro da membrana: o c c r r e mi.gra\<ao de Iona. 0 eqo.i Hb r io de Donnan, descrito a.badxo , e 0 c a.s o particular de estabelecitnento de gradiente de potencial quando urn ou mais tons nao sao pe,rlTleaveis.

Equi1(brio de Donnan. Imaginernos urn meio (I) com 501u~ao de cloreto de sodio (Na f Ct-) e eparado de nut r o meio (II), que contern um sal organ ieo [p rot einato de 5 odio, po r exem pio, N a + R -) , pOl' melo de uma membrana s erntpe r me ave l (permite a pas sag em de Na+ e de Cl-, mas naO de R-). Imaginemos que em cada me io haja res pectivamente os namel'os a e b de {ons. Ter{arnos!

a

Na+

H

b

a

b

Al; s i m s ewdo , 08 [ons N a + e Ct." atravessariio a membrana nos dais B entido~ (I - II e II - I): teremos eqnilibrio, quando as vaIo c l da de s de difusao nos dais sentidos Iorern tguats , Nessa o ca-. SUlO, no meio H, t.e r e rn o s , al"m. do numero b de (ons, mat s urna quantidade x, que ve io do meio I, enquanto no meio I teremos a quantidade a menos x. 19'10 porque os lons R- nao slio d ifu s Ive i s e "seguram" Na+ no ro eto 11. No e qu+Hb r i.o terem.os:

(b +x) Na+

(tl - x) C'l"

A velocidade d e difusao de 1 - 11 e proporcional a concentra<;;ao de Na'" e Cl- do meio I; entao poder[arnos e xpr-e s sa -Ja como: (a _ =: (a - x) '"' (a _ X) "'. Do TTIe s rn o modo, a velocidade de difusao de II - 1 a proporcional ao produt o das cou ce nt r ac de s de Na + e C'l " (lons difuslveis) corn ° meio II. Ter(amos aqui (0 +x},»,

C OTTIO 0 equil ibr;o e a.Ic anc ado quando as velacidades de difusa:o se i g ua la m nos do is s ent l do s , podemos e xpr e s s a.rl o (equiUbriode Donnan):

19

II

{b +x)z

cu s cj a: (a - x)" '" (b + x)x.

Suporiharrio s que no m Ic io , antes do equilibria, tivessemos que em I a Ios ae igual ale b no meio II, tamb&m igual a 1.

No equillbrio t er ernos:

(a - X)'" '" (b + x)x ( 1 - x)'" = (1 + xlx

- Z.x + x~ = Ix + x'"

1 - Zx = Ix

I '" ZX + Ix

'" 0, 33

Po r ran to pa.s sa r-arn a cr av e s da membr-ana 0, 33 de (ons di Iu s Ive i s, Enti!o no equilibrio t.e r emos:

quarat'i da d e de Na+ e Cl- no meio I = (a - x) '" (1 - 0, 33) '" 0,. 67;

qu arrt.i d.a.d e d e Na+ em 11 = (b ... x) = (l ,.. 0., 33) '" 1,33;

quantidade de cr em II '" x '"' 0,.33.

De e t e e qui Hb rf o de Donnan podemos c onc Iui r que:

As concentragl':ies de ions de Na+ e CC ern I 530' l guai.s , A c onc e nt'r a cao de :fons de Na'" e rnato r ern 11 que em 1. A cone entral;:Jo de Gl- e maior em I qLH~ em 11.

- A c onc ent r a cao de Na+ em 11 e rrra.i o r- que a de C'J~ .

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Com i s s o vernos qu e , ap es a r de as co nc entra,,1)es dos Ions serem diferentes nos dais rn e io s, ba e qu i Ifb rio e n:io hit ma.rs pa ssa g en s dt!tivas (pot s agora pa s s a r ao de r'" II as m e s ma s quant idade s de rons). 0 que DOl;nan e xpl ic ou inicialmentecom e s s e rnorte lo flsico pode s er apl rcado par a as c e iulas ,

Br ooks admitiu a existen<:· La de pequenos paras [e s pa c os e nt r e rn ol ec u'l a s ] e i et ri c arn ent e c a r r e g ado s com c arga poe it iv aou ne-g ar iva (gra<;as ao s r ad ica i s das pr ot e fna s J ccuat ltu mte s da m e rnb r a na] que at r a ir jam r e s pe ct ivarn e nte arifon s ou catlo·ns.

Urna t e r ce i r a for«a de t r a n s po r t e pa s s i v c e a fol'qa de at'l'astamentoao soZvente, que s e e xe r c e s o br e part{c:ulas que s e difundem no me s rn o s e nt Ido do e s c oa rne nt o e par is so com v el oc i da de au rne ntada em rela<;uoa", pa r t fc ul a.s que s e rriov e rn ,HI s e nr i do c ont r a rto ao de solveote.

Q..,."r atu erri is o l a da rn e nt e ou con c or'n i tan t arrs e n t e J as t r es for <;: as e'nurneradas., de t r a.n s po r te pa ss iva ,sernpre a t u.a rrt II rrro r r 0 a ba i xc!", para us a r a expr e a s ao c orrrurri cia t e r rrio d'i na rrri c a , .d e a e rrrp.c rab a n d c a membrana me r o papel de b a r r e i r a passlva, com 0 s eu c a r ate r i rre r e rit e de seletividade.

Ac ont.e ce , porem, que varies s aD o s exemplos e m qUE' Sllbstlincias tern de" s ubt r mo rro" J contra a.s for «as do tra ba Ih o pa ssi vo , de s-

pendendo energia do proprio rn et abofi s rno ce l.ul.a r , Estamos em face de urn cranepovee ativo,o;m que a membrana de ixa de s e r passiva e p a s s a a e xe r c e r funt;1l:o esseneialmente din~mica,

o citoplasrna de muitas cHuJas cantem rnui tc rnai s potassio que s6dio ern re1a<;:110 a o meio em que e l a s vivem. o plasma sangulneo tern 20 Vezes mate s6dio que pota s s io, enquanto a he m ac i a cont~m lO vezes rn at s pot.assio que s6- dio. A membrana possui permeabilidade pas s iva a ambos as fans, e s e e s sa permeabilidade pass iva s e manHe s tas se, pe » netraria s Sdto na celula e s a i r ta pota s s io , Para manter a dtfe r e nca de concentl'at;aO 'iOnica, a celula. tern de fc r ne ce r e ne r gi a para par em funcionamento uma especie de "bomba" a fim de e xpe Ii r 0 S odio as sim que ele s u'rj a no se II interior pe Ia a'tao do gradiente eletroqui'mico, A dernons t r acno do bombeamento dos lons de sodio foi efe tuada na fibra ne r voe a gigante,du rrro Iu s c o Lu La , que POS"Ul J millmetro de dia.rne t r-o , pode ndo - s e S ogui r facilrnente 0 movimento do s lons s6dio e potfi s si o par rrie i o de is otopos radiativos. A membrana da Hbra s epa r a duas soluy<'les aquos a s COrn iguais ca r-acte rfa erc a s de condutores el€itriCos e que c orit e m apruxi.madamente 0 rrie s m o numero de Ions , Mas a c ornp os i ca o qufrrri c a de ambas e di.fe r e.nte , Na solut;lro exte rna, rrin i e de 900/0 da s part{culae carre gadas positi varrie nte sao fons de sodio e, negativamente, 10ns de cloro. Nointerior da celula estes lons est.lio p r-e s e nte s numa mesma concentra<;l1oinferior a 10'7. dOB a olutos: af 0 principal {on positi vo e a potassio e os 10ns negativos sao Ions or gaui c oa grande 5, que nao se difundem facilmente atraves da membrana. A eoncentra<r!io de sodio e ce r ca de 10 ve ee e maior no meioexte:rio1.·dafibraeaconcentl'a~1l:o de potassio e 30 veze s maior no interior cia fihra. A permeabilidade d a membrana is aqui altamente seletiva, rnc vendo vae 06 Ions K" e Cf" com muito rnat s :facilidade que os Ions de Na.+ e oe rOllS orgltnicoe. IS80 ocas iona uma quad a de voltagem de 60 a 90 milivolts atraves da meznbrana, ficando 0 interior da c"1u1a negati va e rn rela<rlto ao exterior. Hodgkin e Huxley rn c st r a r arn qlle, quando a diferen\ra de voltagern at r ave a da mem b rana e abaixada a r ti £i r ialmente, 0 eIei to ime di ato e a urnenro de sua perrneabilidade ao sodio, determinando maior entrada. Quando 0 nun'lero de 10ns sodio e 5uficiente para rnuda r o potencial i nto r no, de negativoa positivo, oeorre o Irnpul s o ne r vos o ou potencial de ao;;Ao.

Uma das hip6teses propostas para explica<;lI:o do transporte ativo nos exemplos a.p1'esentados admite a e xi s te nc ra de moleculas transportadoras dos IOus K+ e Na+ • Nomodelo de Shawe e xpti cado o rnovimento de Na+ e K". atraves da membrana e a liga<;i1o existent e entre ambos. Os {ons K' e Na+ seriam transportados at rave s da membrana par carregadores lipido-soluveis X e Y, especHicos para os dois Ions. Yo e Y 56 e e movem at r ave s cia membrana quando

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esta:o cornbfria do e aos rona sob a forma des compostos %K e YNa. Na superfrcie interna XK da 0 ~ parao interior dac'lula e recebe energia provavelmente atraves do ATP. Com a energia recebida, o carregador passa a transportadorde Na+ que nao pO de cruzar a membrana ate 0 momento de sua un iao c om 0 Na+. Un,,, v e z comb ina.do ao Na +, corne ca a s e difundir e a 0 ch e ga r a superflc ie emerna, dele s e des liga, perde e ne r gia e conve e te -5 e em <!Ill'l'egador de K+. Este un e s s e ao pot a s s io , migra para a $uperClcie interna e renova ° p roc e s ao operatorio contra as gradientes de concentra~l1o de sodio no exterior e de p otji s ai o n.o inte1:"ior da celula.

Super£lcie interna

XI{ X + K"

X + energia { ~ 1 - X

+ Na

YNa

Superfi'cie e xt e r na

82

YNa - X + Na+ + e ne r gia

X + K ~ XK (renova-se .0 pr oc e s s c),

A permeabiUdade das moZ..fcu'ta8 varia muito, c o nfo r me 0 tipo de malecula c onsiderada. Ass Irn , os Iipldio5 pe net r arn facilmente, pais a membrana c ont em urna c arnada de lipfdios; a agua, a«(icare!! (gHeose, frutose, s ac ar os e}, penetram at.r-ave s dos e spac o s entre as moleculas das membranas. Normalmente, as de grande pe s o mol ec alar pe net r arn com mai.or dific uldade qUI:! as de pe que.no pe s o molecular. Mas ha tambem urn [ato interessante: se a celula rre « cessita mais de urna certa aub st anc ia, mesmo que 0 s eu PM s ej a alto, ela penetra rn a i s rapidarneote do que as de pequeno PM, que no momento nao sllo tao necessarias. lS50 evidencia que a process 0 de penetra~1(o de s ub s ta nc ia s tern rE'la<;l(o com Pl'OC ess o s fisiologiCos da celula. Cb arnar Ia mos a isso permeabiZidade fisioUigica. Enzirnas que s e lac ali zariarn sob a rrxe rnb r a n a da a c eluias diasolvedam certas zonas da membrana para permitir a entrada de protelnas. Entao, t e r Ia rrro s e.nz i ma s (permease) influenciando a permeabilidade.

A penetra~ao de par-t Ic ul a s solidas e e faz gra<;;as a e rn i s s a o de pa eUdopodea, que envolvern a particula e a i rnpe Iern para 0 inter ior da c~lula. Esse fenemeno e chamado fagocitose e e muito c ornu m e rri protoo:oari09 (pdncipalmente amebas), COlTlO tambem em g16- hulos brancos que fagocitam 6ubst~ncias estranhas ao organismo, defendendo -0 <las me smas .

A peu et r a<rao de partie ul a s muito pcque na s ou de lIquidos (pr inc ipalmente lipidios e pr ot e Ina s} s e faz pOl' pinoeitose. Esse fenorneno e explicado par meio de urn crescirnento da membrana, na zona de c ont ac t o com a s ub st.Snc i.a a ser englobada, Esse crescimento vai f'a z e r com que haja urna invagina",a:o da membrana ne s s a zona (de nfvel ultramic rosc6pic 0- -es sa invagina<;:Io s 6 e vista ao microsc 6pio eleetr onico), As membranas que vao ficando i nt e e na s passam agora a fazer parte do retfculo e.ndopl as rnat tc o e na superffcie a membrana se reorganiza (Fig. 46).

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Fig. 46, fagocitose e pinocitose em ameba. No alto! oanais de pinee itose. No centro: aama,ba f'agoc f t ando um organismo pluricelular (Rotifero). El:,baixo: eompara<:;ao entre a pinocitose (invagina<:;ao) e a fagocit0SG (evaginaqao). Os "3M,is de pinocitose sao ultramicroscapicos. A dire-ita versos U111 vacuole de fagoci tose com urn Pax-ameaium englobado. (E'm: "How Things Get Into Cells" de H. Holter, Sci. Am. 20'>, 3, pigs. 172-173, setembro 1961. Reprodllzido com autorizaqao. Direitos r'eservados, ©1961, pe La Scientific American Inc.)

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88 ®.® .®.®

Fig. 4-7. Esquema representando a hip5tese do fluxo das mernbr-ana s , 2. u... a par" f terS:a-mos a entrada de material pOI' veeic • .1laq1'io d .. membrana e de f pap" a, a sa :ida ( s egundo Bennet). (Rapr-od uzd.do d" Biologia Cel.ul.ar de Ile P.obertis, Nowinski e Saez, © 1965, COm au- 1:01'1Z11,,';:;:0 dos aut or-es e da casa editora "El Ateneo", Pedro C;"rcia S.lI.)

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A elasmatoee e o ienomeno inverso a p i.no c it o s e , au s e ja , a ellmina<;;ao de gatfculas 1 i'quidas all peql1.enas part(c ul a S siilidas atr av es cia membrana no reticulo e nd opl a s mat ic o que se a ne xa a membrana pfa s n1.hicil, Cundindo- s e con, ela e elirninando a part,. c ul a., A e s s a entrada e s a fda de materl.al, can> auxfl Io da s rrre rn-. b rana s do r et Ic ulo e ndcpl a s mat ic 0 (t r ans po e t e por vesicuJa.,.iio das rne mbr ana s}, Bennet chama ftuxo dae membranas (Fig. 47).

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MITOSE E MEIOSE

MtTOSE

Mit o s .. e 0 pr oc ""58 0 de d iv i s ao c elular. A partir de urna cHula Io r rna m - s e .d u a a , apres entando c a da urna de la s 0 mesmo num e r o de c r-orn oe s orn os da cehlla i n ic Ia I, At r av e e da mitase oeorre 0 cresc Irrre nt c dos indi v Idu as plur ic etuta " es, poi s hav e r a a urri e nt o do s e u ruirn e r o cle celulas. E"te tipo de div i s a o oc o r r e na s ceLulas qu e constituern 0 carpo, tan,bem charnadas somatic as, e, arnda emcelulas ge r rni nat i va.s , durante a fase de multiplicao;;a:o, que antecede a rn e ros e , Durante a mitose notamos inicialmente a divisa:o do nucleo {c a r ioc i nes e] , seguida da divisa:o do eitoplasma(citocinese}. Os fatares que Le varn urna celula as e dividir nao sllototalmente c onhec idcs , mas ha urn a serie de hip6teses que podem ser Leva da s emeonta,

como, por exern.plo: urn des equili''brio na rela'iao nuc Ie opl.a s m ic a s "ria 85

e s t frn ul o pal'a a div+s a o; c orn o ° aurnento de volume da celula, com

o c r e s c irri e nt o, e e dol: com 0 cuba, e 0 aurn ent o da auper ffc t e com 0 quadrado, a s upe r ffc ie cresccria pouc 0 em r e la 'i:! 0 ao aument 0 do volume, e entao nao pcde r ia rn a i s reg .. r n or rraa.Irn e nt e as t r oc a s entre

celula" e rrre i o , obrigando-a a s e di vi d i r , 'I'a.Lve e po s s a.m e xi s t i r fato-

res geneticoa qLH!; de t e r rrri ne rra 0 momenta da divisa:o; como a dupH-

ca ca o tio DNA o co r r e na intlrfase, catv e a ela fosse urn esti'mulo para

a d iv i s a o , po r ern nos casas de po l i.t.e rri a hi aurn e nt o de DNA e na o

OC orr" mitos e.

Ja vimos as caracterfsticas de uma c,Hula em interfase.

Durant" a m.itose oc or rem varios fenomenos auc e s s i vos que alteram o s e u aspecto, ate o ap a.r ec irrie nto de duas celulas-filhas. 0 pr oc cs s o e c ont fnu o e sua dura!i'a:o e va r Iaver --em media, de e ma a 24 horas - - c onforme 0 tipo de c e lul a, Castuma -se dividir a rrri t.o s e em po r fodo s ca.r-ac t e r fst ic os , sendo que ea.da serie de Je ne me no s s e enqua d r a ern uma fase especial. Assirn ternoa;

I. Pr6fase

Corresponde a o ini'cio da mitose. 0 citoplasma torna-se rn ai s viscoso pOI' ceder agua ao rui cte o, as centri'olos que ja s e achavam duplicados de s de a telofase a nte r i o r iniciarn urn p r o c e s s o de migra.. ao para. os polos da eelula (Fig. 48 - 1). Cada c ent r-Io lo e farmado

Fig. 48. Esq~ema dam diversaS f~ses da mitose. 1 @ 2:

Pr6fase; 3 .. Pt: Fr-ometiHa~e; 5: Metaifase; 6: Aniifase; 7:

Te~Qfase; 8: Ci. tOG iue Sa (segundo Mada). (Repr-od u ddD de Biologf.a Cel.ul.ar de De Robertis, Now ins"ki e Saez, @ 1955, com au1:orize<;ao do s au+or-e s e de ce s .... ditoI'''' "EI Ateneo", Pedro Ga"'cis S. p._,. )

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po r dois feixes de rrrat e r ia I prot,ho;;o dt s pe st os pe r pe ndl cul.a r m.e nt e , A rraic eo s co pja, eIetrOn'ca revelou que ca da po ... ",ao do cerit r i oko e <:onstitu[da, em geral, pOl' urn cilindro £ormado por rro v e £ e ixes duplcs de prote(na com p05i<;ao periferica, ah~m de ou t r o Ee i x e du » plo central. A rn e di da que mig,·am, t or na m -5 e rna 1,8 c ornpl ex os ,

or-gantz andovs e em tor n o d e l e s moleculas de p rot e irra em carnadas ,

Entre el e s vZo-se or ga n i z arrdo nbras de pr ot e Ina , c uja s moHk:ulas ,se acham tigadas entre s i pal" pontes S-S 00.1 SH-SH. As fi.bras a},ongam-se com 0 a urrre nt o cia disUi.ncia entre os c e nt r Fo l o s , Ocon., junto des s a s fibras forma 0 que s e chama [ueo de divislto o u [ueo aC!'Of1I!itico. pois s ua e fibras na:o 111m afinidade par c: orantes. 0 conjunto dos c e nt r {olos mats " fL!s" de div is:Jo forma. 0 ap=e~ho mitotico aC1'Omatico (Fig. 48-2), 0 qual tera papel m uito atnvo na diviSJo. No cas 0 dos vegetais super Iore s nao foi constatada a pre. senr,;:a de centriolos, e c catumavs e dl.z e e que as fibras do fU50 ccnve rg em para as polos da celula.

Enquanto is so oc o r r e no C it o pl.a s rn a , no nucleo rnu it os outros fenomenos estao ocorrendo, Ele aumenta de volume e t or na vs e m erros viscoso, pois recebe agua do citopla.sma. Os cromOS80m05 (ja divididos Iougttudtnatrnente durante a interiase) comer;am a se evidenciar, condensar, gra.r;as aos p r o ce s s o s de espiralizao;ao, a chau dc c s e ainda. pr e s os pela zona do centrornero. Enquanto 05 c rorn oa s orn oe s e c cmd e n aa.rn (tornam-ae melhor ob ae r vav e i s , pot s agora podem ja s e r bern corados), os nuc l eol os corneliam a s e t or na r menos evident e s , au s eja , come!;3-m a de s a par ec e r (Fig. 48-3),

II, Prometafaae

05 nuc Le nl o s ja nao sao oba e r vaclos , Os c r orrroe s orn oe acham -Be mais c onde ns ad o s e a cari.oteca desaparece, As fibras do fuso que agora sa ach arn formadas pa s aarn a ocupar a parte axial da c e luta , Os cromossornos, bern condens a dos , Hearn mergulhados na ca r io , lin£a, que SOl rm s tu r a corn a citoplasrna, e pa s s a rn adlrigir-separa a zona equatorial da cHula (Fig. 48-4),

Ill. MetMas e

Os crornossomos apresentam-se no maximo de c onde nsa e a o,

sendo e s ta a fase ideal para estuda-los, E durante a mettifase que 87

se c os t urn a a.nalisar os c r orn os s cm cs quanta a sua forma, tamanho

e mhnero (cari6tipo). Como a carioteca desapareceu, 08 CrOrnoSSo-

mos estarao livre" e ocupa.rxo a pOBis::tO equatorial da celula. Elea ligar-se-a:o as chamadas fibras cr omos s emtc as (que vao dos cen-

t r fokos a os c r om os s orno s] at raves de s eus centromer08. i s6 na

regia:o dos c ener eme.r os que as cromatides ainda se lnantem l iga da s ,

o c e nt t-Brrae r o liga-se realmente a dua s fibras c r ornoe s Sm i ca e , uma

que se prende a u.rn c ent r Ic-lo B out r a que se prende ao outro (Fig. 48 -5).

A g fibras do fu s o que vao de c ent r foro a c entz fol o s:io charnadas [i-

bras c ont Inua s , Nesta ocasiao oeorre a separa~:io na z ona dos

c e nt r Srn e r os e asslm os cromossomos-filhos isolam-se.

IV. Anatase

Apo s a separa'i§:o do s c r orno seomoa-Hlhoe, cada nova metade migra para urn do s polos da celula, gra~a9 ao encurtamento das fibras do fuso. A medida que as fibras c r orrio s s drrri ca s s e encurtarn, levando as c r orno s s omos para os palos, as !ibras c ont Inua.s pa r e c erri a l o nga r-c s e , 0 encurtarnento das fibras cromossOmicas estii ligado a. perdu de rno l e cu Ia s de prote{na, que oco:rreria po r que br-a s das liga'i'0es SH-SH; ta Ive z 0 alongarnento da s fl br a s contfnuas 9 e de po r anexa,<:io de certo numero daquelas moleculas a estas frb r as (Fig, 48-6).

V. Telofase

Agora que as c r omcs s om os s e d.i s t r-i.buf r arn equac iona Ime nre entre as doi s polos, notamos urna serie de {enameno!; que slio opos t os aqual"s que o c o r r e r a rn no i,,(cio da d iv i a a o , Os cromossomos com ec.arn a desespiraLizar-se,05 nucleoloa voltam a apa r e ce r g r a ca s <l08 c r am as s am 08 or ga ni z.ad or e s de nuc leal os, e a car iot ec a a nova m ente Or ga ni z aria , Nito 5 e sa be a irida sa a car iot ec.a SI;> forma totalmente "de novo", au a e gOO r-e or ga n i z a a partir de fragmentos da antiga ca ri ot e ca (Fig. 48-7-8),

De s s a mane ira, cornpleta-se a earioeinese e Io r rna m c s e as dais riov o s nucleos. T eremos agora a citoe inee e. No c as a das e,Hulasanimais a c it oc i ne s e oc cr r c po r e ar r a ng ula m enr o , ou s ej a , de fora para dentro, enquanlo na s dllulas ve g eta is fOI'ma-se a lamela media, que e uma membrana pr e c i pit a da de de nt r o para fora, entre os dor s nov o s nucleos. Durante a ctro ctrie s e as e l e'rn e nt o s c it opl.a arriat ic os , c orrto lTlitocBndTiae, cornplexo de Golgi, 1;50550- mos, plastos (ern c e lu la s vegetais), sao dtat.r-i bufdos i g ua Im ent e e nt r e as celulas '-filhas. No c a s o do c ornpl e xo de Golg; de c elulas a nirna is , onde ele if pol.a r i aa do, oc cr r e antes a sua fr-a grn ent a c ao em urri da »

de s menores, c h.a rn a da s d i c t i cis s orrro s • .Na a c¢lulas v e ge ea l s i s s o

88 nao e nec e s sa r io porque <> c orn pl e xo de Golgi ja if r e pr e ae nt a do pe l o s d ic t.i.os s orrro s .

As dua s novas c~H(llas pe.s e a r a o pOl' urn perfoda de intcrfase, e em seguida,dependendo do tipo de ciilula ou do t i po do d ife r e nc i a-, "ao, dividir-se-ao novam ent e ou nao.

Vimos que a melhor fase para 0 estudo do s c r orn os s orn os e a metafase. Foi d e s c obe r ta urn a s ubsuanc ia , a oolotriaina, que e c a pa a de tm pedrr que se de a Iorma<;:to do fuso, bloqueando a mitose na metafase. Com esse a rtif{ci 0, pcde-is e obte r grande numero de metafases, 0 que nOs permite analisar e e.at uda r mutt o bern 06 c r o-. rn os s orn os e c on s t r u i r ca r i St i po s ,

MEIOS!:

Vimos que as eelulas somatic-as a pr e s e nt arn urn ntirn e r o Zr. de c r ornoae cm os , que s e rn ant ern constante, nos organisrnOs de urna. rn e s rna e s pecie, 0 fen8m e no que garante a const;!tncia do nCirne I'O de c r orno a a orn oa da especie Ii a r-n ei o s e , Com e is a pa r ec ern ,,,Hulas haploides (71,), que sao o s garne ta s (espermatozoide e ovulo para os animais). Estes s e r e iinern (fertiliza~i'lo) e r ec on st iruern 0 rnirn e r o l1). no avo (:r;igoto).

A rriedo s e pede 6 er definida COlT1.0 S endo \1= proeee so de divisa:o em que oc o r r e urna 86 divisao c r orrios s Srru ca para dua s divi5e;es nuelea res. EntiIo pa r t rrrio s de urn n<icleo In, e ap6s dua.s divisCles

su ce s s ivas ch ega r erno s a quatro nucleos n.. A rrie i os e nos animais erri geral, o co r r-e rio e m a.Irrre nt.e na s celulas que vao fa rrnar os gametas, como acontece com o s gamet6citos 1. Sua dura<;ao geralmente e multo maior que a da mtros e ,

Tal como a rrrlt oe e , a rne i os e tamb ern e dividida em Ia s e s , por ern o processo e c oncfnuo, Como temos dua s divis6es s uc e s s j va s , a primeira delas ,; c harna da divisao 1 e a segunda, divisao II.

A duplica<;lfo do DNA no processo TTlei6tico. COTTlQ no mit6tico, precede 0 rne e.mo , Ou s eja , ela ooo r r e durante a fase pr«i-leptotf!cnica.. Iss 0 £icou bern demonstrado ap6s as trabalho9 de Stern e s eu grupo, nos fins dos anos 60. 0 grl1fico da rigura 49 Hustra o que afirmamos. Este me arno grupo de pesquiBa mostrou que uma pequena quantidade do DNA, 0, 3,., pode s e r sintetizada nos e9~gioe de zig6teno(Z-DNA) oupaqufteno (P-DNA).

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fig. I"L Gra£ico ilu,;'trando as quant:idades rela'tivas de DNA Duma ceIula 2n (2C de DNA) que vai sofrer meiose. Notell) que no final do pr-ocee se teremos qua+ro ntlc.reo s hap16ides (n), marrt endo cada urn deles C de DNA.

Pr6fase I

E a fas e rria i s longa e rria.i s c ornp l exa da meiose, em que oeorre urna aerie de ienOmen06, prin.cipalmente nos c r orrro a s orrro s , e par Is s o costuma s e r dividida em aubfa s e s , AS8im, temos:

a) Leptotene . Cor responde a.o infcio da. me ios e. Aq ui as c r c-. mo s somoa, ja duplicado s, acham- s e rep".e s en ta do s pelos c romon e.rrta s distendidos (desespiralizados) e, ao Iong o dele s, podem observar-se os cromOmeros. Esta «i a fa.se Ind ic ada pa r-a observ'''.;io de cromOmeros. Em certos organismos as bases d06 crornosso- 17108 acham-se voltadas para umazonada el!lula. lembrandO 0 conjunto 0 aspecto de urn "bouquet" {Fig. 50A). 0 nucleolo pode s e r bem notado ainda. no infcio do seu processo de regress.!!o.. A e s - piTali:>:a<,;ao dos c r ornoe eornoe inicia.-6e. sendo que aqui rerrro s espi ... al rrie.no r , A espira.l maior s6 e observada na d ia.c i.n e e e , Ha aqur portanto urna condensac;;:to maior que durante a mitose.

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IJ) Zigot~n". Os cromossomos estao ma ie condene a dos e 0 nucleolo menes evidente. A celula que esta iniciancio 0 processo de rne io s e e 2n; entao teremos n. pares de c:romossomos. Cada par e formada pOl' cromossomos horno'logc s , que sao 08 c romo s s omos que carregam genes que se correspondem locus par locus. As s Irn , se em certa local de urn deles h§. certo gene, por e xe rnpl o, para cor de o lho s , no outro, na mesma zona, have rd tamb~mumgene para cor de olhos. Esses genes que ocupam o s rne arno s locus em c eomos - somos hom61ogos sl[o as genes a.Ie lo s (ou alelomorios). Durante 0 :z.igoteno, os c r orno s s o mos hom61ogoB sofrem urn proceaso de pareamento (sinapse J, ponto por ponto, locus por locus, gra.,.as a Ulna atra'i~o especial entre e s s e s poneo s , Esse pareamento pode iniciar-se poz qualquer ponto, OU pOl' v{rios ponto s ao rne a rno tempo, continuando em s egutda atl! a sua cornplementa"ao (Fig. 50B).

0) Pa:quiten.o. As s irn que t e r rrri n a 0 zigoteno, c orn o o s horno.logos pa r ea ra m, te r erno s a impress.'Iodeque 0 numero de c r om cs s cmos e igual an. Cada par de hom61ogos pa r ea d o s r ec eb e agora 0 nome

de: bivll;Zente. 'I'e r ern os enta o n biva l ente s , No paqutt erio, 0 g r au

de condensay3'o dos crornossomos a urn enta muito.

Note-se que ape sal' da divis:io cromosB3micaj>iter-seprocessado Olinda as centr3meros permanecem ligados. Enta:o, em cada biva.lente, varnos encontrar 4 crom>itides (tetrades){Fig. SOC j: as proveniente5 da divi sao de urn mesmocromossomo 93:0 chamada s cromabide« 1_!"'1QS> enquanto s~o horno'loga a as r esultantes de urn CrOITl.08 soma. com as resultantes de outro. Nesta fa s e, em Vez de termos somente e s prr a l m.eno r , teremos tarribern a espiral r elacional. a nuc Ieo lc j.i e dificilrnente visto.

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d) DiplotelO(). Ap6s 0 pa.rearnento e a. div is a 0 l cng it.udrna l , as c r orn os s crn os tendem a s e separar {ha agora um a r e pul sa o entre e1es}, mas ha resisU!ncia. pois se a.c ha.rn ligados, em ce r-to s pontos, pel os quiasmas. Expliquemos 0 que ac onrece realmente. Nesta fa s e , c ost urnarn oc cr r e r quebr a s na s c r omdr ide a hom61ogas, nos mesmos pont os, s endo que pc st e r i or me nt e e las podem 8 ol.d a r » s e a o pe da e o de outro hom61ogo (Fig. SOD). Evident e m ente , oc or r e m t arn bern quebras e trocas de pe daqo s entre c romattdes i.rmii:s, ma s os "novoS" c r orn os s orn o s ~ crao idlinticos aos prim ,,1 r os , Es sa s t r oc a s de pe da co entr e c r omat ide s hom61ogas recebem 0 nome de pe r mut a (permuta<;ao, recombina<;ao ou "crossing-over").

A causa cia quebra das crornhides e ainda muito dis cut lda , Alguns acharn, como Darlington, que e um £enOlOeno puramente rne carrlc o , po i s com a grande espiralizac;:ii:o (espiral rela.cional) a tens ao seria muito elevada e determinaria quebra em certo ponto de uma cromiitide. Apos a que b r a, e s s a regUlo ficaria m eno s resistente, e po de r-Ia haver quebr a de out ra c r ornat.i de no rne s mo ponto.

Como as cromatides es tao t c r c i da s , a s of da ge rrrp ode r f a fazer-se entre do i s peda<;;os de cromatides homologas. Ou tr c s admite:m que urn a po s s (vel causa da quebraseria uma dl visao nao s iml1lt:tnea entre zona e u C roma ti cae hete roc r omati ca. Como nada e a In da confi r rn a 'do, irnaginernos que as que br-a s oc o r r a rn , Supondo Clue numa da s cr orna ti.de a temos as genes A e E e na sua homologa a e b, havendo quebra e nt r e a locus Ae 0 B, e tr o ca de pe da co s , te r erno e agora dua.s c r-o rna t i de s iguais as originais (AEe a.b) e dua s "novas", r e-. c orrrb iua.nt e a (Ab e aE). Se rn a permuta, as qu at r o crom,hldes continuariam Lgua i s (com 05 me smo s genes). 0 "crossing-over" e urn Ceni"imeno e:x:tremamente importante, pois pe r-rni t e maior variabi Lidade de gametas, 0 que r ep e eae nta urn grande pape l na e vo lucs.c 01'ga:nica. Como consequencia do" eros sing-over" apa r ece a q ui.a s rrra .

Recentemente ha novas hip6tes e s t errta ndo explica r a ocorl"en~ cia do fen5men'o do "crossing - over", a.Ig uma s da s quais usaIll 0 Z-DNA 01.1 0 P~DNA como elementos de ligat;3"o das o:romatides iragrnentada. 8. Outros t enta rn us a r 0 oompt.eeo sina,r:>ton8.mi eo como elemento r-e la c iona.do com a reco=bi,na.;;aio ou "c.os sing -ove r'! , 0 cornptexe sinapton@:rnico e urna estrutura que s e desenvolve entre 05 horn61ogo 5 empa. r e lha.dos durante 0 s est.1gio 5 d ezig 6 teno e pa . qufteno. Esta estrutura 56 pode s e r observada. a.o microsc6pio e Ie .

92 tr3nico. s erido constituJda de tTas e lerrien tos , dais laterais, r-i co s e111 protefnas e. DNA, em contacto com oa cromossomos e urn central eS5encial:inente protHeo (Fig. 5U.

"fig. 5J.. Esquema de campJ.ey.o s inap"i:c)nemico (CS), estrutura encantr'1da entre as c:r'omosscmos hom61ogos (era.) empa re Lhado s no .:ig6teno e paqu.i"t"!lo. 0 CS apre~ell"t<o-se 00(1.<;1- t h u 'ida per- tr@s e.Lemerreoe (5e. ob"lct"vfiive is com micl'Oscopi'} eletronica), s endo O'"i8 latel'ais ("EL) cons t Lt u Jdo s de prote:lna'·o DNA e baS1:anteeleT.ro!l-densos ,e urn centrral: {EC'l po uco ci,e troll-dellsa com uma faixa c en"tr'al ma is eletron-densa, exclwsiva.mente ;_n'o'tei,~a.

Podemos irna g ina r pa.ra urn rn e s rn c par de lwm610go$ d o i a ou mai s "c ross ing~ove r", 0 que dete r rn iria va r i e dades atnda maio res .