MANIPULAO MOLECULAR E BIOTECNOLOGIA EXAME TERICO EM

O DNA complemantar (cDNA) de um gene contm: a) b) c) d) e) Sequencia correspondente aos intres A Sequencia correspondente regio promotora As sequencias correspondentes aos codes Uracilo em vez de Timina Um local mltiplo de clonagem

O rastreio de colnias azuis/brancas baseia-se num fenmeno chamada alfa complementao. Para se poder usar este sistema de rastreio necessrio deispor de uma estirpe especial de E. coli que: a) b) c) d) e) Expresse o fragmento C-terminal da B-galactosidase Expresse o fragmento N-terminal da B-galactosidase Possua o gene lacZ num plasmidio F+ Degrade o substrato X-Gal de modo espontneo Possua o gene CcdB funcional

A presena de IPTG nos meios de cultura para rastreio de colonias azuis/brancas tem como funo: a) b) c) d) e) Inativar o opero lac Inativar a protena repressora do opero lac Produzir uma cor azul ao ser hidrolisado pela B-galactosidase Substituir a funo do X-Gal Inibir a expresso do fragmento N-terminal da B-galactosidase

A tcnica de clonagem conhecida por TA cloning baseia-se: a) Na utilizao de enzimas de restrio mais ligase b) Na propriedade natural dos promotores TATA sofrerem recombinao c) Na propriedade especial da Taq DNA polimerase, que deixa extremidades protuberantes 3-A nos amplificados d) No facto de sequencias ricas em AT poderem ser mais facilmente amplificadas e) Em plasmdeos linearizados que possuem uma timina protuberante numa extremidade e uma adenina protuberante na outra extremidade

A tecnologia de DNA microarrays a) b) c) d) e) Permite deteco e quantificao simultnea de milhares de mRNAs numa amostra S aplicvel a deteco de sequencias especificas de DNA genmico da amostra Faz uso de um s tipo de fluorocromos Baseia-se no uso da Taq DNA polimerase utilizada para transfectar clulas estaminais embrionrias

A mutagnese dirigida sitio especifica pode ser efectuada por PCR. Para isso: a) O programa do termociclador deve ser terminado num perodo de 95C para se obter DNA em cadeia simples b) Os primers incorporam a mutao pretendida c) O resutado da amplificao um produto circular d) Durante a reao de PCR o DNA amplificado tem que sofrer metilao e) A reaco deve conter 3 primers em vez de dois

A tcnica mais habitual para introduzir DNA estranho em plantas baseada em: a) b) c) d) e) Electroporao Acelerao de partculas Infecao via plasmidio TI Microinjeco Lipossomas

Uma biblioteca genmica contm a) b) c) d) e) Todos os genes do organismo Apenas genes expressos Fragmentos do genoma cortados com varias enzimas de restrio Fragmentos do genoma que resulta de uma digesto parcial com uma enzima de restrio Vetores de clonagem que so somente fagos como por exemplo fago EMBL

Clonagem posicional um mtodo que permite a) Clonar regies distantes de um cromossoma por ciclos sucessivos de hibridao b) Clonar regies homologas de dois cromossomas por ciclos sucessivos de hibridao c) Clonar regies prximas num cromossoma utilizando fragmentos de DNA sobreponveis em ciclos sucessivos de hibridao d) Clonar regies trans de um cromossoma por hibridao utilizando sondas de cDNA sobreponveis e) Clonar genes relacionados funcionalmente atravs de hibridaes com sondas de fragmentos de DNA distantes no cromossoma

Na sntese de cDNA a partir de mRNA utiliza-se: a) b) c) d) e) Terminal transferase Transcriptase reversa DNA polimerase I de E. coli T4 DNA ligase RNA polimerase

Uma reao de sequenciao de DNA pela tcnica de cycle sequencing envolva a presena de: a) b) c) d) e) DNA polimerase I Dois primers por reao Um primer por reao Quatro tipos de ddNTPs marcados radioactivamente por reao Quatro tipos de ddNTPs marcados com um fluorocromo por reao

As cadeias de DNA obtidas numa reao de sequenciao so separadas: a) b) c) d) e) Em gel desnaturante de agarose Em gel no desnaturante de agarose Em gel desnaturante de poliacrilamida Em gel no desnaturante de poliacrilamida Em gel de agarose de concontrao mnima

Quais so as molculas de DNA que apresentao uma maior temperatura de desnaturao, Tm? a) b) c) d) e) As molculas com um contedo mais rico nos pares de bases AT As molculas com um contedo mais rico nos pares CG As molculas com menor quantidade de GA As molculas com menor quantidade de CT As molculas com igual contedo de GA e CT

FISH um processo de hibridao que designa a) b) c) d) e) Hibridao in situ com fluorescncia Hibridao intra cadeias de DNA com genes da mesma famlia Hibridao livre (free) in solution Hibridao in state com fluorocromos especficos Todas as alneas esto erradas

A hibridao Northern a) b) c) d) e) Inclui o uso de anticorpos como sonda Permite a determinao do tamanho de um intro Permite a identificao de DNA especifico O tamanho do genoma Permite a determinao do tamanho dum mRNA

Duas cadeias de DNA podem-se manter emparelhadas apesar de pertenceram a organismos diferentes e apresentarem uma percentagem de identidade de sequencia 80%. Isso acontece se as duas cadeias estiverem sobre baixas condies de restringncia. Estas condies de baixa restringncia, relativamente a restringncia elevada, implicam:

a) b) c) d) e)

Uma temperatura dde hibridao maior Uma concentrao maior de um agente desnaturante na soluo de hibridao Ausncia de agente desnaturante na soluo de hibridao Uma menor concentrao de sal na soluo de hibridao Um pH mais bsico na soluo de hibridao

A extrao e purificao de DNA genmico de organismos eucariontes parte sempre de a) b) c) d) e) Homogeneizao das clulas e isolamento dos ncleos Fixao das clulas com glutaraldeido Isolamento dos cloroplastos e mitocndrias Cristalizao do DNA Precipitao com etanol do DNA

No procedimento de purificao com DNA por vezes necessrio extrair o DNA com fenol ou com uma mistura de fenol clorofrmio. A preparao submetida a uma centrifugao para se retirar da soluo a) b) c) d) e) O RNA que se encontra na fase aquosa superior As protenas que se encontram na fase superior fenlica As protenas que esto precipitadas no limite entre a fase fenlica e a fase aquosa O RNA que se encontra na fase inferior fenlica Os glicolpidos que se encontram na fase aquosa

Uma tcnica que permite determinar o tamanho de molculas de DNA especificas : a) b) c) d) e) Western blot Northern blot Eastern blot Southern blot Zoo blot