Mecanismos de insuficincia renal aguda induzida por carambola

Hua-Chang Presa a, c, Po-Tsang Lee a, c, Pei-Jung Lu b, Chien-Liang Chen a, c, Tsu-Yuan Chang uma, Chih-Yang Hsu a, c, Hsiao-Min Chung uma, c, Kang-Ju Chou a, c, * uma Diviso de Nefrologia, Kaohsiung Veterans Hospital Geral, 386 Ta-Chung 1 Road, Kaohsiung 813, Taiwan b Departamento de Educao Mdica e Pesquisa, Kaohsiung Veterans Hospital Geral, Kaohsiung, Taiwan Faculdade de Medicina, Departamento de Medicina, Taipei, Taiwan Universidade Nacional Yang-c Ming Recebido 26 de junho de 2007, aceito 09 de janeiro de 2008 __________________________________________________________________________ Resumo Ns j descobrimos que carambola pode induzir insuficincia renal aguda oligrica . Para investigar os mecanismos de caramboleira - ciado - asso nefropatia por oxalato aguda, o efeito nefrotxico da carambola foi examinado em ambos os experimentos celulares e modelos animais. Foi avaliada a funo renal , alteraes patolgicas em tecidos renais e efeitos apoptticos usando transferase deoxynucleotidyl terminal de nick -end rotulagem ( TUNEL) ensaio em quatro grupos de ratos - um grupo controle (GC) , alimentado com gua da torneira (1 ), um grupo de carambola ( SG ) , alimentado com sumo de fruta natural estrela contendo 0,2 M de oxalato ( 2 ) , e grupos de oxalato ( OXG ) , alimentada com 0,2 ( 3 ) M ou 0,4 M ( 4 ) soluo de oxalato . Os efeitos de ambos suco carambola e oxalato em clulas MDCK tambm foram analisadas por citometria de fluxo . Descobrimos que a depurao mdia de creatinina foi significativamente menor no SG, 0,2 M e 0,4 M OXG OXG . Efeitos de apoptose dependente da dose eram evidentes a partir do ensaio de TUNEL e citometria de fluxo de clulas MDCK tratadas mostraram -dose e efeitos dependentes do tempo . Os nossos resultados sugerem que o sumo de fruta de estrela produz leso renal aguda , no apenas atravs do efeito obstrutivo de cristais de oxalato de clcio , mas tambm atravs da induo de apoptose de clulas epiteliais renais , que podem ser causadas pelos nveis de oxalato no fruto . 2008 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados . Palavras-chave: Apoptose ; Estrela fruto; oxalato , insuficincia renal aguda _________________________________________________________________________ 1 . introduo Em um estudo recente observou-se que carambola pode induzir insuficincia renal aguda oligrica , e os achados patolgicos das sees renais revelaram alteraes tpicas de dano tubular aguda com oxalato de deposio difusa ( Chen et al, 2001 ; . . Fang et al, 2001) . Fruta de estrela , um membro da famlia Oxalidaceae , popular em muitos pases tropicais e contm nveis elevados de oxalato ( Chen et al . , 2001) . Assim , nefropatia aguda oxa - final , embora previamente relatada como resultando principalmente da ingesto de etileno glicol , macio administrao de cido ascrbico , ou de anestesia de metoxiflurano ( Hollen - berg et al , 1972; . .

Lawton et al , 1985; Jacobsen et al , 1988. ; Sarica et al , 2001; . . Corley et al , 2005) , pode ser causada pela grande quantidade de oxalato contido no carambola . No entanto , os efeitos citotxicos de oxalato em clulas epiteliais renais predominantemente foram investigados em clculos renais mal-estar crnica ( Khan e Thamilselvan , 2000; Jonassen et al , 2003. ) . Apesar de muitos estudos tm descrito a morfologia renal e bioqumica urinria aps hyperoxalu -ria aguda ( Khan et al . , 1982, 1989 , 1992) , na maior parte destes estudos , hiperoxalria foi induzida pela administrao intraperitoneal de oxalato ou por sonda esofgica de diferentes agentes hyperox aluric , por exemplo , etileno glicol (EG) , que so as toxinas conhecidas . Permanece por esclarecer se ou no um elevado teor de oxalato de alimentos ingeridos por via oral em poderia induzir a nefropatia por oxalato agudo , em particular , a quantidade de oxalato de dieta que aparece na urina ainda debatido ( Laker , 1983; . Holmes et al , 2001) . Embora tanto apoptose e necrose foram observadas em clulas epiteliais renais cultivadas tratadas com oxalato ( Khan et al , 1999; . . Miller et al , 2000) , a relao entre o nvel srico de oxalato e funo renal ou descobertas de caminho - ological nunca foi explorado . Neste estudo, ns investigamos os mecanismos da estrela associada ao fruto nefropatia por oxalato aguda. 2 . Materiais e mtodos 2.1 . Suco de fruta Star e soluo de oxalato de preparao Tipo Sour carambola foram coletados a partir de uma fazenda local e homogeneizado . Resduos insolveis foram removidos por passagem da mistura atravs de um filtro de papel de um tamanho de poro de 0,22 lm , e o suco carambola transparente obtida foi armazenada a 20 C at sua utilizao . O suco de carambola foi submetido a eletrlitos ( sistema de gs 288 Sangue e 664 4 Sistema Rpido ; Ciba Corning Diagnostics Corp , Medfield , MA, EUA) e pH (U 72 Medidor de pH ; Beckman , Fullerton , CA , EUA), medio e o oxalato de concen -trao foi medida tal como descrito abaixo . O oxalato naturais concentrao de suco de carambola foi de 0,2 M, concentrao de clcio foi inferior a 0,25 mEq / L, a concentrao de potssio foi de 30 mEq / L, eo pH foi de 2,1 . As solues de oxalato de 0,2 M e 0,4 M foram preparadas usando oxalato de sdio em p ( Sigma , St. Louis , MO , EUA ) . O valor final de pH e concentra-es de electrlitos do meio de cultura , aps adio de sumo de fruta estrela e vrias concentraes de soluo de oxalato so mostrados na Tabela 1 .
O pH final e concentraes de eletrlitos dos meios de cultura aps a adio de solues de suco de carambola e de oxalato de vrias concentraes
Control Na (meq/l) K (meq/l) Cl (meq/l) Ca (meq/l) pH 136.3 5.0 121 2.6 8.0 Star fruit 1/10 128 7.1 110 6.6, 1/100 134.7 5.3 120 7.9 1/1000 135.9 5.1 121 2.6 8.3 Oxalate solutions 0.5 mM 136.7 5.1 121 2.4 7.9 1 mM 133.3 4.9 119 1.2 8.0 2 mM 137.0 5.0 121 7.8

2.2 . As culturas celulares Clulas MDCK foram comprados da coleo Bioresources e Centro de Pesquisa , Taipei , Taiwan. As clulas foram cultivadas em meio alfa meio essencial mnimo ( um - MEM), com 10 % de soro fetal de vitelo ( FBS ) e 5 % de CO2 a 37 C. Em resumo , o a- MEM foi adicionado a 50 mL de FBS e 5 mL de 10 penicilina / estreptomicina . O meio de crescimento foi aquecida a 37 C em um banho de gua antes da sua utilizao . Aps duas passagens , as clulas MDCK em

60-70 % de confluncia foram utilizadas para as experincias descritas abaixo . 2.3 . Animais Este estudo foi realizado com 8-10 semanas de idade ratos Sprague -Dawley (National Melhoramento Animal de Laboratrio e Centro de Pesquisa , Taipei, Taiwan ) . O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comit de Kaohsiung Veterans Hospital Geral Animal Care e Use . Os animais foram alojados em gaiolas individuais , mantidos em um horrio de 12 h claro / escuro ( luzes acesas s 07:00 ) , e desde que com comida e gua ad libitum. As temperaturas ambientes foram mantidas a 72 graus Fahrenheit . A humidade foi mantida dentro do intervalo de 30% a 70 % . Ratos com um peso mdio de 209 14 g foram distribudos em quatro grupos de oito : um grupo controle (GC) , alimentado com gua da torneira , um grupo de carambola (SG) , alimentado com suco de carambola naturalmente contendo 0,2 M de oxalato e dois grupos de oxalato ( OXG ) alimentado com uma soluo de oxalato de 0,2 M ou 0,4 M . Aps jejum durante a noite, o alimento adequado As solues foram administradas atravs de um tubo oro- gstrico de metal, a uma dose de 2 mL/100 g de peso corporal . As amostras de sangue foram obtidas via veia caudal amostras de puno e de urina foram coletadas 6 h aps a alimentao atravs de um metablico gaiola. As amostras de urina foram centrifugados a 2000 g durante 10 min para eliminar detritos , a qual foi em seguida recolhido para investigar a presena de clcio cristais de oxalato por microscopia polarizada . Os sobrenadantes foram utilizados para determinar o pH urinrio e os nveis de oxalato . Os rins foram imetamente removido 24 horas aps a alimentao , enquanto os ratos estavam sob anestesia profunda tesia , e foram prontamente colocado inteiro em fixador para facilitar exame patolgico. Amostras de sangue foram coletadas no momento. Para examinar as anteriores alteraes patolgicas , tambm colheu os rins de um outro grupo de ratos com 6 e 12 h (n = 3 para cada ponto de tempo ), aps alimentao com carambola . 2.4 . Creatinina e de oxalato de medies Nveis de creatinina plasmtica e de urina foram determinados de acordo com as instrues do fabricante do equipamento ( sistema Express Plus ; Chiron Diagnostics , Emeryville , CA, EUA) . Nveis de oxalato de plasma e urina foram medidos . Para eliminar as protenas e macromolculas para medies de oxalato , 1 ml de plasma e urina fresca foram transferidos para dentro do reservatrio de amostra de um filtro centrfugo ( microcontrolador YM -10, Corte 10.000 D; Millipore, Belford, MA, EUA ) . A ultrafiltrao foi realizada a 14.000 g durante 60 min a 4 C. Para evitar a converso espontnea de cido ascrbico a oxalato , 5 IL de 1 M de cido clordrico foram adicionados ao tubo interno da ultrafiltrao tubos contendo plasma ou urina . O ultrafiltrado de sangue e de urina foi congelado a 20 C at anlise. As medies da concentrao em oxalato o sangue e urina foram realizadas utilizando um mtodo modificado descrito por Petrarulo et al . (1994 ) , o limite inferior de quantificao de 0,6 lM , com um coefficiency de variao de 20 % . Resumidamente, 750 lL de plasma e na urina filtrado foi misturado com 600 lL 25 mM de 3 - metil - 2 - benzothiazolione hidrazona hydrochloride/8.2 mM de cido 3 - metilaminobenzico ( Sigma , St. Louis , MO , EUA ) e 150 lL de 1000 U / mL de peroxidase ( rbano

peroxidase, Sigma , St. Louis , MO , EUA ) e incubou-se a temperatura ambiente ratura de 30 min. Cento e quarenta microlitros de 3,3 U / mL oxalato oxidase ( Sigma , St. Louis , MO , EUA ) foi ento adicionada a 700 de IL a mistura anterior e incubou-se durante 60 minutos temperatura ambiente . A absorvncia a 590 nm foi medida usando um espectrofotmetro ( DU - 640 ; Beckman , Fullerton , CA , EUA ) . 2.5 . Determinao de enzimria As amostras de urina foram colhidas antes e s 6 , 12 e 24 h aps a alimentao com sumos de fruta estrela para a medio de lactato desidrogenase ( LDH ) , c - glutamil transpeptidase ( GGT ) e fosfatase alcalina ( ALP ) . As amostras foram processadas como descrito anteriormente e os sobrenadantes foram mantidos em gelo antes do ensaio . Todas as medidas foram realizada por mtodos laboratoriais padro usando um Vitros 5,1 multianalyzer (Johnson Johnson, Clinical Diagnostics Inc.). 2.6 . A citometria de fluxo A citometria de fluxo foi usada para examinar os efeitos de apoptose in vitro de preparaes contendo oxalato em clulas MDCK . Resumidamente, as clulas MDCK com 70 % de confluncia foram tratadas com vrias preparaes para diferentes perodos de tempo antes da colheita utilizando procedimentos padro . As clulas sinized - Tryp foram lavadas com uma soluo salina tamponada com fosfato ( PBS), vrias vezes , seguido de ressuspenso em etanol a 100 % . Aps a lavagem , o ADN das clulas tratadas com tripsina foi corado com iodeto de propdio ( 0,32 g / L ) para 10 minutos e as clulas foram subsequentemente submetidas a anlise por citometria de fluxo ( FACS Calibur , Becton Dickinson , Mountain View , CA , EUA ) . Os perfis do ciclo celular foram analisados usando WinMDI 2.6 ( J. Trotter, do Scripps Research Institute , La Jolla , CA , EUA). 2.7 . O exame anatomopatolgico de rins Amostras de rins foram colocados em 10% formalina tamponada neutra para fix- o e depois foram submetidos a colorao hematoxilina-eosina ou ensaio TUNEL . O kit de deteco de apoptose de TUNEL ( ApoAlert ADN fragmentao Assay Kit , BD Biosciences Clontech , Palo Alto , CA , EUA ) foi utilizado para deteco de apoptose em tecido renal de acordo com as instrues do fabri -cante . As seces de parafina foram desparafinizadas usando zylene e descidas de etanol , fixas com formaldedo a 4% / PBS durante 30 min a 4 C , permeabilizadas com proteinase K temperatura ambiente, durante 15 min e 0,2 % de Triton X-100/PBS para 15 min a 4 C , em seguida, incubadas com uma mistura de nucletidos e enzima TdT durante 60 minutos a 37 C. A reaco foi terminada com 2 citrato de sdio padro . As sees foram ento 2.8 . estatstica Todos os parmetros contnuos so expressos como mdia SEM, enquanto que as variveis nominais usar a expresso proporcional. Teste exato de One-way ANOVA ou Fisher foi usado para medir as diferenas entre os grupos, quando apropriados e medidas repetidas ANOVA foram realizadas para anlise dentro do grupo . Foi realizado o teste de Bonferroni para mais comparao de pares para a anlise post hoc . Os resultados com a proba -bilidade de menos de 0,05 foram considerados significativos .

3 . resultados Nenhum dos ratos em qualquer grupo morreu ou apresentou desordens movimento antes do sacrifcio , durante este estudo. Fraqueza e diarria foram observados nos grupos alimentados com suco de carambola e soluo de oxalato , mas no no controle tabela 2

Fig . 1 . ( A) A depurao da creatinina s 24 h , ( B ) no plasma , e ( C ) os nveis de oxalato na urina em 6 horas aps a alimentao com gua da torneira , sumo de fruta estrela , 0,2 M de soluo de oxalato de e 0,4 M soluo de oxalato a uma dose de 2 ml / 100 g de peso corporal . A excreo urinria de (D) LDH , (E) e GGT ( F) ALP nos ratos alimentados com suco de carambola . Cada grupo composto por oito ratos. * p < 0,05 comparado ao grupo controle. # p < 0,05 em relao ao grupo controle e carambola grupo . As folgas de creatinina mdia de GC, SG , 0,2 M e 0,4 M OXG OXG s 24 h aps a alimentao foram 1,67 0,12 , 0,78 0,05 , 0,76 0,08 e 0,37 0,08 ml / min , respectivamente (Fig. 1 ) , mostrando significativamente mais baixa Val UEs na SG , 0,2 M e 0,4 M OXG OXG ( p < 0,05 ) . o os nveis mdios de oxalato de plasma do GC , SG, 0,2 M e OXG 0,4 M OXG s 6 h aps a alimentao foram de 4,6 1,5 , 14,6 2,4,17,1 2,7 e 25,2 4,5 mm , respectivamente (Fig. 1B) , e foram maiores nos grupos experimentais do que no GC (p < 0,05). Os nveis de oxalato mdia de urina do GC , SG ,0,2 M e 0,4 M OXG OXG s 6 h aps a alimentao foram 0,14 0,07 , 0,81 0,12 , 1,01 0,21 e 1,93 0,41 mM , respectivamente ( Fig. 1C) , eles foram maiores nos experimentos. Tal grupos do que no GC (p < 0,05) e aumento

Fig. 2. Sees patolgicas Representante rins de ratos realizada 24 horas aps a ingesto de vrias preparaes contendo oxalato: grupo de controle na coluna da esquerda, microfotografias (A), (D) e (G); grupo carambola ou 0,2 grupo M oxalato na coluna do meio, (B), (e) e (H) e 0,4 M grupo oxalato na coluna da direita, (C), (F) e (I). Linha superior, hematoxilina-eosina, 200; linha do meio, luz polarizada, 40; menor fila, ensaio de TUNEL, fluorescena, 400.

Fig. 2 . (continuao)

proporcionalmente com a quantidade de oxalato ingerida . Comparado com o grupo controle, uma intensidade cada vez maior de cristalria foi encontrado no SG, 0,2 M e 0,4 M OXG OXG (Tabela 2) . A LDH enzima citoslica urinrio foi encontrado para ter um aumento significativo na atividade em 6 h aps a alimentao com suco de carambola e permaneceu mais elevada para 24 h ( Fig. 1D) . A atividade de enzimas marcadoras de escova de fronteira , GGT (Fig. 1E) e ALP (Fig. 1F ) foi dramaticamente ele- vado 6 h aps a alimentao com suco de carambola , ento, gradualmente diminuiu, mas permaneceu significativamente maior do que a atividade da linha de base . Em adio , o sangue e urina pH da CG , SG , 0,2 M e 0,4 M OXG OXG s 6 h aps a alimentao foram 7,40 0,04 , 7,38 0,03, 7,39 0,03 e 7,38 0,02 (pH do sangue) e 6,5 0,3 , 6,0 0,2 , 6,1 0,2 e 5,9 0,3 ( o pH da urina ) , respectivamente . Sees patolgicas Representante rins de ratos , tomadas 24 h aps a ingesto de vrios contendo oxalato de prepaes , so mostrados na fig. 2 . As seces patolgicas de SG ou 0,2 M OXG , mostrado na fotomicrografia (B) , exibido mudanas moderadas na dilatao renal tbulos e deposio de clcio cristalino de oxalato como comparado com a estrutura normal do rim do CG , mostrado no pho tomicrograph ( A) , enquanto que as alteraes difusas pode ser visto nas fotomicrografia ( C ) , que mostra os resultados para o 0,4 M OXG . A intensidade da deposio de clcio cristalino de oxalato de -

o claramente visvel com uma ampliao menor de 40 sob luz polarizada , como mostrado na fotomicrografias (D ) , ( E) e ( F ) . Cristais de oxalato de clcio , observados como refractrios parti -gos , pode ser visto para ser distribudo extensivamente photomi - crograph ( F ) do 0,4 M OXG e moderadamente na fotomicrografia ( E) do SG ou 0,2 M OXG , enquanto fotomicrografia ( D ) do CG no mostra cristais de oxalato de clcio. Fotomicrografias ( G ) , ( H ) e (I ) mostram as seces de caminho - ological com TUNEL examinados atravs de um filtro de fluorescena . As clulas apoptticas foram coradas amarelo , e so vistos para serem distribudos de forma difusa em fotomicrografia ( I) do 0,4 M OXG . A distribuio menos extensa, fotomicrografia (H) da SG ou 0,2 M OXG , e quase inexistente na fotomicrografia (G) da CG . Uma avaliao quantitativa das clulas TUNEL positivos foi realizada ( fig. 4 ) . As porcentagens de clulas em apoptose no GC , SG, 0,2 M e 0,4 M OXG OXG foram de 2,1 1,3% , 14,3 7,8 % , 20,1 5,2 % e 56,9 5,1 % , respectivamente , indicando uma intensidade de dose-dependente da apoptose , aumentando - o do GC para o 0,4 M OXG . As alteraes patolgicas anteriores nos rins de ratos aps a alimentao com suco de carambola so exibidos na figura . 3 . Note-se que os cristais de oxalato de clcio esto espalhadas no lmen tubular e que o tubular epi- endotlio era geralmente intacto nas sees renais tomadas na 6 h (A) aps a alimentao. Nas seces tomadas a 12 h ( B) e

Fig. 3. Mais cedo mudanas patolgicas nos rins de ratos, em 6 h (A), 12 h (B) e 24 h (C) aps a alimentao com suco de carambola (hematoxilina-eosina, ampliao original 200); ensaio TUNEL em 6 h (D) , 12 h (E) e 24 h (F) aps a alimentao com suco de carambola (400).

24 h (C) aps a alimentao, focos de tbulos simplificados e epitlio tubular flat-tened com lmen dilatados podia ser visto. Alm disso, a apoptose foi observada ter desenvolvido no ensaio de TUNEL de 6 h (D) aps a alimentao, e foi considerado como tendo progredido em 12 h (E) e 24 h (F) seces. Citometria de fluxo de clulas MDCK tratadas com veculo, sumo de fruta estrela diludo (1/1000, 1/100 e 1/10, igual a 0,2 mM, 2 mM e 20 mM de oxalato, respectivamente) e 0,5 mM, 1,0 mM e 2 mM de solues de oxalato 16 h, mostrado na fig. 5. Estas concentraes de aproxiacasalado as concentraes na urina de oxalato que observamos 6 h aps a alimentao oral com carambola, 0,2 M ou 0,4 M oxalato. Um aumento dependente da dose na percentagem de clulas de fase subG1 foi observada aps tanto suco de carambola e soluo de alimentao de oxalato. Alm disso, a fig. 6 mostra a anlise de citometria de fluxo de clulas MDCK tratadas com 1/100 diluda fruta estrela (A) e 1,0 mM de oxalato de solu-o (B) a vrios intervalos de tempo. Foi observado um aumento dependente do tempo na porcentagem de clulas subG1 de fase com tanto suco de carambola e soluo de oxalato.

Fig. 4. As porcentagens de clulas em apoptose rotulados por terminais deoxynu-cleotidyl mediada-transferase dUTP nick-end rotulagem (TUNEL) ensaio em sees patolgicas nos rins de ratos. Cada grupo composto por oito ratos. * p <0,05 comparado ao grupo controle. # p <0,05 em relao ao grupo controle e carambola.

Fig. 5. A citometria de anlise de clulas MDCK tratadas com veculo, o sumo de fruta de estrela (1/1000, 1/100, 1/10), 0,5 mM, 1,0 mM e 2 mM de soluo de oxalato durante 16 horas diluda. A concentrao de oxalato de suco de carambola 0,2 M. Cada grupo contm 8-10 experimentos. * p <0,05 comparado ao grupo controle.

4 . discusso

Fig. 6. Citometria de fluxo de clulas MDCK tratadas com (A) de suco de 1/100 estrela diluda fruta e (B) 1,0 mM de soluo de oxalato em vrios intervalos de tempo. A concentrao de oxalato de suco de carambola de 0,2 M. Cada grupo contm 8-10 experimentos. * p <0,05 comparado com o grupo 2-h.

Carambola nefrotoxicidade com insuficincia renal aguda , como foi demonstrado nos relatrios anteriores ( Chen et al . , 2001; fang et al , 2001) . . O grande contedo de oxalato em carambola e as sees patolgicos ( obtidos de pacientes e animais de experimentao ), mostrando a deposio de oxalato de clcio difusa sugerem que nefropatia por oxalato aguda responsvel por carambola nefrotoxicidade. Dado que as alteraes morfolgicas observadas , tais como cl-cio por deposio de cristais de oxalato nos tbulos renais dilatados , parece razovel especular que a obstruo dos tbulos renais por estes cristais o mecanismo pelo qual o dano causado tubular . No entanto , a dilatao tubular era muito mais extensa do que a deposio de cristais observados , especialmente em casos humanos , ea deposio de cristais tubular focal no era compatvel com a profunda perda de taxas de filtrao glomerular ( Chen et al, 2001 . ) - Para o qual hemodilise temporria pode ser necessrio ( Chen et al . , 2001) . Seja ou no , para alm do efeito obstrutiva dos cristais de oxalato de clcio , oxalato sozinha pode actuar como uma toxina celular capaz de produzir o dano celular aguda , o que piora a perda aguda da taxa de filtrao glomerular , ficaram por resolver . Embora os estudos anteriores demonstraram os efeitos directos txicos de oxalato e cristais de oxalato de clcio ( Hackett et al , 1995; . . Khan et al , 1999; Khan e Thamilselvan , 2000 ; de Miller et al , 2000; . . Sarica et al , 2001 ; Jonassen et al. , 2003) , esses estudos predominantemente investigou a patognese da pedra renal forma -o , uma doena crnica. Neste estudo , verificou-se que a administrao oral aguda de carambola ou soluo de oxalato pode causar diretamente a apoptose celular tubular renal , que leva clinicamente a paralisao renal aguda. O modo de morte celular causada por oxalato pode envolver a necrose e apoptose ( Miller et al . , 2000) . A leso tecidual em que ou necrose ou apoptose domina depende de vrios fatores ,

incluindo a concentrao local de oxa- final , o modo de exposio ( administrao aguda ou crnica ) e diferenas na susceptibilidade do tecido ( Wyllie , 1987; . Hale et al , 1996; Lieberthal e Levine , 1996) . Muitos tecidos apresentam a morte celular por apoptose em concentraes mais baixas de toxina e a morte celular por necrose , em concentraes mais elevadas ( de toxina Wyl lie , 1987 ) . Aqui , uma predominncia de apoptose foi observada na insuficincia renal induzida por estrela fruta aguda , como evidente a partir das alteraes morfolgicas , tais como as clulas epiteliais tubulares achatadas com ncleos densos colorao com hemotoxilina e eosina , mas no a clula inchao . Alm disso , tanto no ensaio de TUNEL, in vivo e em citometria de fluxo in vitro anlise mostrou dose depen dent efeitos de apoptose que resultam em mais clulas apoptticas em grupos de maiores concentraes de toxina . Isto sugere que , dentro da gama de concentraes de oxalato causadas pela administrao oral do sumo de fruta ou uma soluo de oxalato de estrela para simular a condio clnica , a morte celular por apoptose foi a apresentao predominante dos efeitos citotxicos do oxalato e carambola . A concentrao plasmtica de oxalato no nosso estudo era entre trs e cinco vezes maior do que a concentrao nos controlos e era um vigsimo da concentrao de 0,5 mM, a qual os efeitos apoptticos comearam a ser detectados em clulas MDCK (Fig. 5 ) . No entanto , a concentrao de oxalato pode chegar a um nvel to elevado quanto de 1-3 mM na urinria do compartimento ( Figura 1C ) , o que poderia causar a apoptose significativa . Como oxalato altamente concentrada na urina , no s por ser filtrada livremente atravs dos glomrulos , mas tambm por secreo activa dos tbulos proximais ( Pinto et al , 1974; . . Pr - nen et al , 1981) , o efeito da concentrao de oxalato na urina do factor-chave que faz com que as concentraes locais de oxalato de ser alto o suficiente para induzir a apoptose e leso renal . Embora o cido tambm podem induzir a danos celulares , a carambola ingerido ou oxalato foi absorvida pelo trato gastrointestinal e no estava em contato direto com as clulas epiteliais renais. Alm disso , o pH do sangue arterial no exibir acidose metablica significativa e o pH da urina foi dentro da variao normal de dieta normal , indicando que era pouco provvel que o cido de oxalato induziu apoptose . Os mecanismos subjacentes aos efeitos apoptticos de oxa - atrasado em clulas epiteliais renais foram parcialmente investigados anteriormente ( Cao et al , 2001; . . Koul et al , 2003; . Wiessner et al , 1999) . Atravs redistribuindo fosfatidilserina e activando vias de sinalizao de lpidos , danos de oxalato a membrana celular , provoca a morte celular programada e a proliferao de reparao para a substituio de clulas de avaria ( Wiessner et al , 1999; . . Cao et al , 2001; . Koul et al , 2003) . Embora a terapia anti-oxidante pode ser til para pr - ventilao associado - oxalato de leses dos radicais livres e apopto - sis , este efeito apenas foi observado em linhas celulares ou em modelos animais de hiperoxalria crnica ( Thamilselvan et al . , 2000, 2003 ; Ribeiro et al , 2004; . Thamilselvan e Menon , 2005; Huang et al , 2006) . . Portanto, clinicamente , solidrio cuidados se a pedra angular do tratamento para a carambola insuficincia renal aguda induzida . Em concluso, a ingesto de suco de carambola pode pro duzir leso renal aguda , no s atravs da obstrutiva efeito de cristais de oxalato de clcio , mas tambm induzindo apoptose de clulas epiteliais renais, as quais podem ser causadas pela abundncia de oxalato de carambola .