Abatacept ( CTLA - 4 - Ig ) um inibidor da molcula co-estimuladora de clulas T

B7-1
( CD80 ) . B7-1 induzida em podcitos em vrios modelos animais de proteinria .
Expresso podocitria de B7-1 no evidente em podocitos nos rins humanos
normais, mas
encontrados em doentes com algumas doenas glomerulares . Porque observamos
B7-1 imunocolorao
em 13 dos 21 selecionados aleatoriamente amostras de bipsia de rins nativos
de pacientes com doena renal proteinrica , incluindo GESF primrias , deduzimos
B7-1 que tinha sido induzida durante a doena . Observamos tambm colorao B71
em cada amostra de bipsia de pacientes com GESF recorrentes que examinamos .

A motilidade celular
O aumento da migrao podocyte in vitro um substituto marcador de
proteinria in vivo. Determinar se abatacept pode agir diretamente sobre
podocytes, realizamos ensaios de migrao celular com podocytes
expressando estavelmente B7-1 ou B7-1 um truncada
construir - isto , uma construo que falta o citoplasmtica tail (B7-1tail)
(Fig. S4D no Suplementar Apndice).A activao 1-integrina e o
espalhamento das clulas.Investigou-se o efeito de B7-1 e do seu
inibidor,abatacept, na activao 1-integrina em podcitos por meio de
microscopia confocal de fluorescncia ou activada separao de clulas,
como pormenorizado no Apndice Suplementar. Ns usamos miristato de
forbol espalhamento de no aderente induzida por acetato Clulas K562
como um teste independente, funcional
os efeitos de B7-1 e abatacept sobre 1-integrina activao.
Deteco B7-1 em Bipsia Renal Amostras B7-1 imunocolorao foi
realizada em seces de bipsia de rim congelado com o uso de cabra antihumano B7-1 (CD80) anticorpo (R & D Systems).
Migraes podocyte
A adio de lipopolissacrido para o meio de cultura B7-1 induziu a expresso da
protena em podcitos
(Fig. 1A). Constitutiva expresso da protena de B7-1 foi encontrada em 3
integrina-knockout (3 - / -)
podcitos (Fig. 1B). Abatacept bloqueados induzida por lipopolissacrido B7-1 ou
induzida por migrao podocyte (Fig. S3A no Apndice Complementar).
Silenciamento do gene B7-1 ou expresso do truncada construir (B7-1tail)
podocyte tambm suprimiu
migrao (Fig. S3A e S3B no Suplementar Apndice). Tratamento com abatacept ou
gene B7-1
silenciando 3 revertida - / - podocyte motilidade linha de base nveis (Fig. S3C no
Apndice Suplementar).A Figura 1C mostra os efeitos de quantificados abatacept
sobre a migrao podocyte.
Anlise bioqumica de B7-1 vinculao a 1 Integrin Porque abatacept inibiu a
migrao de 3 - / -podocytes, a hiptese de que modula B7-1 funo integrina.
Coimmunoprecipitation endgeno
Estudos mostraram que interagiram com 1 5 e aV integrinas em normal e 3 - / podocytes
(Fig. S4A no Apndice Complementar), sugerindo que 5 e aV so os parceiros de
cadeia de 1 na ausncia de 3. Observamos co-localizao de B7-1 com vinculin
em contatos focais (adeses clula-matriz que contm integrinas) de 3 - / -.
podocytes (Fig S4B no Suplementar Apndice) e observou-se uma especfica
interaco entre B7-1 endgeno e 1 integrina em 3 - / -. podocytes (Fig S4C no
Suplementar Apndice). Mapeamento de domnio e suspenso Estudos com
protenas purificadas recombinantes (Fig. S4D, S4E, e S4F no Suplementar
Apndice) revelou uma interao direta entre
as caudas citoplasmticas de B7-1 e 1, sugerindo que esta interaco
fundamental para o efeito de

B7-1 em funo 1-integrina. Para testar se o interaco observada era especfica

para B7-1 e 1, realizamos uma srie de coimmunoprecipitation estudos de clulas
HEK293 transfectadas. Obrigatrio
de talina, que conhecido por interagir com as integrinas , 7 a 1 ou 3 integrina
serviu como uma positiva controle. Alm 1, B7-1 tambm interagiu com 3
integrina (Fig. S5A no Apndice Suplementar) atravs de ligao directa entre as
duas protenas (Fig. S5B no Apndice Complementar). Em contraste, B7-2 (CD86),
9, que no expresso em podocytes, 4 no interagir com 1 ou 3 integrina
(Fig. S5A no Apndice Suplementar).

B7-1 so protenas presentes nas clulas apresentadoras de antgeno(APC)

que se ligam a CD28(presentes na superfcie de membrana dos Linfcitos T)
e essa interao resulta na induo e proliferao dos linfcitos T
CTLA-4antgeno 4 do linfcito T citotxico
A CTLA-4* homologa a CD28, competindo pela ligao com a B7.1 e a B7.2
e isso diminui a ativao das clulas T e consequentemente diminui a
resposta inflamatria causada nos glomerulos