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Cap.

8 Biorreatores

Biorreatores so reatores qumicos nos quais ocorrem uma srie de reaes qumicas
catalisadas por biocatalisadores.
Esses biocatalisadores podem ser enzimas ou clulas vivas (microbianas, animais ou
vegetais). Assim, logo de inicio, pode-se classificar os biorreatores em dois grandes grupos:
Grupo 1 Biorreatores nos quais as reaes ocorrem na ausncia de clulas vivas, ou seja,
so tipicamente os reatores enzimticos; Grupo 2 Biorreatores nos quais as reaes se
processam na presena de Clulas Vivas.
O segundo grupo, so amplamente mais conhecidos, so usados desde a dcada de 1940
para a produo industrial de grande variedade de produtos como enzimas, antibiticos,
vitaminas, cidos orgnicos, solvente, ou ainda no tratamento de resduos orgnicos
industriais ou domsticos.
Reatores que empregam clulas animais ou vegetais possuem vrias particularidades, tendo
em vista as diferentes caractersticas apresentadas por este tipo de clula em relao s
clulas microbianas, destacando-se entre elas a elevada sensibilidade ao cisalhamento,
caracterstica que, em casos extremos, leva necessidade da utilizao de biorreatores
no-convencionais, como reatores air-lift, ou ainda reatores com membranas, nos quais
no se tem agitao mecnica e , consequentemente as tenses de cisalhamento so
menores.

Classificao dos biorreatorFes:


1) Reatores em fase aquosa (fermentao submersa)
1.1 Clulas / enzimas livres
Reatores agitados mecanicamente (STR stirred tank reactor)
Reatores agitados pneumaticamente : coluna de bolhas ( bubble column
/ Reatores air-lift
Reatores de fluxo pistonado (plug-flow)
1.2 Clulas / enzimas imobilizadas em suportes
Reatores com leito fixo
Reatores com leito fluidizado
Outras concepes
1.3 Clulas/enzimas confinadas entre membranas
Reatores com membranas planas
Reatores de fibra oca (hollow-fiber)
2) Reatores em fase no-aquosa (fermentao semi-slida)
Reatores estticos (reatores com bandejas)
Reatores com agitao (tambor rotativo)
Reatores com leito fixo
Reatores com leito fluidizado gs-slido

90% do total de biorreatores utilizados industrialmente so os reatores agitados


mecanicamente (STR) .
A finalidade bsica do emprego de clulas imobilizadas num biorreator a manuteno de
elevadas concentraes celulares, podendo-se atingir, consequentemente, elevadas
produtividades no processo em questo.

O biorreator pode ser operado das seguintes formas:


-Descontnuo (com um inoculo por tanque / Com recirculao de clulas)
-Semicontnuo (sem recirculao de clulas / com recirculao de clulas)
-Descontinuo alimentado (sem recirculao de clulas / com recirculao de clulas)
-Continuo (executado em um reator, com ou sem recirculao de clulas / executado em
vrios reatores, com ou sem recirculao de clulas)

Cap.16 Reatores com clulas imobilizadas


Caracterstica do uso de alguma estrutura fsica de confinamento que obriga as clulas a
permanecerem em uma regio particular de um biorreator. Principais vantagens dos

sistemas com clulas imobilizadas: 1) Possibilidade de utilizao de altas concentraes


celulares no volume reacional, implicando em maiores velocidade de processamento. 2)
Operao de sistemas contnuos vazo especfica de alimentao acima da velocidade
especifica mxima de crescimento ,
max,caracterstica da celula no imobilizada. 3)
eliminao de problemticos reciclos externos de clulas atravs do uso de sedimentadores,
filtros e centrifugas. 4) Provvel obteno de maiores fatores de converso de substrato ao
produto desejado. 5) Possibilidade de utilizao de projeto de biorreatores mais adequados
cintica do sistema biolgico utilizado. 6) Maior proteo ao sistema biolgico em relao
ao estresse ambiental, ocasionado por elevadas concentraes de substratos, pH e
cisalhamentos.

Principais caractersticas de um suporte para a imobilizao de clulas vivas: 1) no toxidez


s clulas. 2) alta capacidade de reteno 3) resistncia ao ataque qumico e microbiano. 4)
pouca sensibilidade s possveis solicitaes mecnicas, seja de compresso por peso, de
tenses de cisalhamento ou eventuais presses internas e externas de gases. 5) alta
difusividade de substratos e produtos.
Principais suportes utilizados para imobilizao de clulas: K-carragena, Agar, pectina
(polmeros naturais), poliacrilamida, cloreto de polivinila, poliestireno (polmeros sintticos)
e Alumina, Silica, Zirconia, vidro (materiais inorgnicos)
Existem 3 metodos de imobilizao de clulas:
- Adsoro: interaes eletrostticas entre cargas opostas da parede celular e superfcie
do suporte. Esta tcnica possui limitaes como a influencia bastante acentuada das
condies ambientais promovidas pelo meio de cultivo na capacidade de reteno das
clulas no suporte.(concentrao inica, pH, idade da populao celular que se deseja
imobilizar). Os matrias mais utilizados so os inorgnicos e os polmeros sintticos.
- Ligao covalente: Os suportes so funcionalizados para conter um grupamento
qumico, que ser responsvel pela imobilizao da clula ao suporte. Principal tcnica
utilizada a silanizao de esferas de vidro, seguida de reao de glutaraldedo. Principal
limitao a toxicidade do sistema, conferido pela presena do glutaraldeido.
- Envolvimento: mtodo mais utilizado pela facilidade, baixssima toxicidade e alta
capacidade de reteno celular. Consiste no confinamento fsico de uma populao
celular em uma matriz polimrica formadora de um gel hidroflico. Os poros da matriz
formada so menores que as clulas contidas em seu interior. H um estabelecimento de
um fluxo de substratos para dentro das partculas de gel, onde so consumidos pela
populao imobilizada. Os produtos formados no interior da matriz, difundem-se
atravs do gel e se acumulam no meio de cultura. Os materiais mais utilizados so os
polmeros naturais: aga, k-carragena, alginato e pectina. A principal desvantagem desse
mtodo a limitao imposta pela difuso intraparticular de substratos e produtos
metablicos. O tamanho da partcula, a difusividade das espcies atravs da matriz
polimrica e a concentrao celular na partcula devem ser otimizadas, no sentido de se
minimizar esses efeitos.
Captulo 9 Fermentao DesFcontnua

o mais utilizado na industria de alimentos e alguns exemplos de alimentos que so


produzidos por esse processo fermentativo so: iogurte, chucrute, picles, cerveja,
vinho, etc..
Inculo So microrganismos de concentrao adequada capaz de garantir, em
condies econmicas, a fermentao de um dado volume de mosto. necessrio
conservar a cepa vivel e com capacidade produtiva, mantendo-a, portanto, dentro do
possvel, com mnimo de divises celulares para que no ocorram mutaes. Algumas
das tcnicas: conservao em Agar inclinado, liofilizao e congelamento em
congeladores ou em nitrognio liquido.
A tcnica de preparo do inoculo feita em 2 fases: a de laboratrio e a industrial.
Mosto Cada microrganismo possui condies timas de crescimento tais como:
temperatura, pH, nvel de oxignio, entre outras. O meio de cultivo tem influencia
marcante nesse processo. Em microbiologia chamado de meio de cultura, na rea de
fermentaes industriais chamado de mosto ou meio de fermentao. O mosto deve
possuir nutrientes requeridos para o crescimento celular.
Classificao grupo 1: Consiste na inoculao de uma dorna com um microrganismo
que foi propagado a partir de uma cultura pura. Oferece poucos riscos de contaminao
se a propagao do inoculo foi feita em boas condies de assepsia. Nas fermentaes
em que o meio rico e o microrganismo altamente susceptvel a contaminao, a
utilizao desse processo indicada, a menos que o substrato adicionado de uma s vez
no inicio da fermentao leve a resultados insatisfatrios. Grupo 2: Processo com
recirculao do microrganismo. Reaproveitam como inoculo o microrganismo da
batelada anterior. Ou o microrganismo sedimenta no fermentador ou centrifuga-se o
meio fermentado, separando-se as clulas e reutilizando-as. Muito utilizadas em
destilarias de lcool. Como h tendncia de contaminao a cada nova batelada, o
fermento a ser recirculado sofre tratamento. Grupo 3 Processo por meio de cortes. Os
cortes podem ser feitos na fase de crescimento mais intenso ou aps o termino do
processo fermentativo. A sucesso de cortes pode acarretar srias quedas no
rendimento, principalmente quando se trabalha com meio no esterilizado.
**APRENDER AS CONTAS**
Cap. 10 Fermentao Descontnua Alimentada
Uso na produo da
Sacchoromyces cerevisiae.
Definido como uma tcnica em processos microbianos, onde um ou mais nutrientes so
adicionados ao fermentador durante o cultivo e em que os produtos a permanecem at
o final da fermentao. A vazo de alimentao pode ser constante ou variar com o
tempo, e a adio do mosto pode ser de forma continua ou intermitente.
Algumas finalidades ao se empregar as fermentaes descontnuas alimentadas:
1 Minimizao dos efeitos do controle do metabolismo celular: manter baixo o nvel de
glicose na fermentao pode aumentar a eficincia de transformao da fonte de
carbono em clulas (em vez de etanol)

2 Preveno da inibio por substratos ou precursores: O controle da vazo de


alimentao permite que se evite o trabalho em condies inibitrias, melhorando a
produtividade e/ou rendimento desses processos fermentativos.
3 Minimizao da formao de produtos de metabolismo txicos: O controle da
velocidade de fornecimento de substrato ao sistema permite que se mantenha a
velocidade de crescimento celular em intervalos desejados e/ou minimize a formao de
produtos txicos para as clulas, possibilitando que se consiga altas concentraes
destas e, tambm, aumento na quantidade de produto formado.
4 Superao de problemas freqente de estabilidade em processo continuo: Problemas
como contaminao, mutao e instabilidade de plasmdeo, tem como soluo adota o
processo descontinuo alimentado.
5 Adequao do processo fermentativo a condies operacionais: Estudos mostram
que vazes decrescentes de enchimento de dornas leva a maiores produtividades e
minimizam problema com espuma, pois a velocidade de adio de acar mxima no
inicio, quando se tem menores volumes de meio em fermentao e ainda no h inibio
por etanol, e mnima no final.
6 estudo de cintica de processos fermentativos: Permite a manuteno de baixos
nveis de substrato por longo perodo de tempo, permite manter a concentrao celular
constante e controlar velocidade de crescimento em condies transientes.
Mximas velocidades de alguns processos podem ser encontradas somente nessas
condies.
Classificao:
Processo descontnuo alimentado repetitivo Uma frao constante de volume de
cultura removida a intervalos de tempo fixos, podendo ser mantido indefinidamente.
Esse tipo de processo tem sido utilizado industrialmente para produo de leveduras e
antibiticos, com o intuito de aproveitar como inoculo o microrganismo que est
crescendo com alta velocidade e de trabalhar com clulas que esto na fase produtiva
por mais tempo, respectivamente, levando ao aumento de produtividade do sistema.
Processo descontnuo alimentado estendido Modo de operao em que a
concentrao de substrato limitante mantida constante no meio em fermentao pelo
suprimento contnuo de nutriente. Tem como objetivo estender o perodo de
fermentao, mantendo os nveis de concentrao de substrato no reator adequados
para que as clulas continuem com atividade fermentativa direcionada para a formao
do produto desejado.
O processo descontnuo alimentado pode ser dividido em dois grupos baseados no fato
de adio de substrato ser ou no controlada por um mecanismo de retroalimentao.
No caso com controle por retroalimentao (controle direto e controle indireto). Por
outro lado, o suprimento de substrato feito de forma intermitente ou de forma
ininterrupta para processos sem controle por retroalimentao.

Ambos os modos de operao visa otimizar valores de concentrao de substrato no


fermentador, aumentando o rendimento e/ou produtividade do processo fermentativo.
Cap. 11 Fermentao semicontnua
Usado no antigo processo de fabricao de vinagres a partir de vinho.
O processo fermentativo semicontnuo o mtodo quando, uma vez colocados no reator
o meio de fermentao e o inoculo, as operaes que se seguem obedecem seguinte
ordem:
1) Aguarda-se o trmino da fermentao;
2) Retira-se parte do meio fermentado, mantendo-se, no reator o restando do mosto
fermentado;
3) Adiciona-se ao reator um volume de meio de fermentao igual ao volume de meio
fermentado retirado na segunda operao.
Essa sequencia de operaes repetida at quando no houver queda de produtividade do
processo.
O processo de fabricao de vinagres a partir do vinho um exemplo tpico de processo
semicontnuo.
Vantagens: Possibilidade de operar o fermentador por longos perodos (s vezes, alguns
meses) sem que seja necessrio preparar um novo inoculo. Possibilidade de aumentar a
produtividade do reator apenas modificando-se o cronograma de trabalho. Possibilidade de,
uma vez conhecidas as melhores condies de operao, conseguir produtividade
significativamente maior do que a obtida em processo descontnuo.

Cap.12 Fermentao Contnua


Mais utilizados em bancada para desenvolvimento de processos, no so muito usados
industrialmente So mais usados no tratamento de resduos onde no h preocupao
com contamina.
Caracteriza-se por possuir uma alimentao contnua de meio de cultura a uma determinada
vazo constante, sendo o volume de reao mantido constante atravs da retirada contnua
de caldo fermentado.
Vantagens: 1) Aumento da produtividade do processo, em virtude de uma reduo dos
tempos mortos ou no-produtivos. 2) obteno de caldo fermentado uniforme, o que facilita
o projeto das operaes de recuperao do produto de interesse (downstream). 3)
Manuteno das clulas em um mesmo estado fisiolgico, o que torna o processo contnuo
uma excelente ferramenta para estudos de mecanismos de regulao metablica ou ainda,
para estudos de otimizao da composio de meio de cultura. 4) possibilidade de
associao com outras operaes contnuas na linha de produo; 5) maior facilidade no
emprego de controles avanados; 6) menor necessidade de mo-de-obra.

Desvantagens: 1) maior investimento inicial na planta; 2) possibilidade de ocorrncia de


mutaes genticas espontneas, resultando na seleo de mutantes menos produtivos. 3)
dificuldades de manuteno de homogeneidade no reator, quando se trabalha com baixas
vazes, ou quando o caldo adquire comportamento pseudo-plstico, como o caso do
cultivo de fungos filamentosos. 4) Dificuldades de operao em estado estacionrio em
determinadas situaes (formao de espuma, crescimento do microrganismo nas paredes
do reator, ou ainda, nos sistemas de entrada e sada de lquido)
O processo de fermentao contnua normalmente tem incio em um processo descontnuo,
Aps algum perodo de operao descontnua, inicia-se a alimentao de meio de cultura e
retirada do caldo, dando-se inicio ao processo contnuo. Recomenda-se que se inicie a
alimentao com o cultivo em fase exponencial, e contendo uma concentrao celular a mais
elevada possvel.
Existem vrias possibilidades de operao com sistema contnuo:

Contnuo em um nico estgio (um nico reator): Com reciclo de clulas / Sem
reciclo de clulas
Contnua em mltiplos estgios ( n reatores em srie): Com uma nica
alimentao (com ou sem reciclo de clulas) / Com mltiplas alimentaes ( com ou
sem reciclo de clulas)

Cada uma dessas diferentes opes ir resultar em distintos comportamentos das variveis
de estado (concentrao de clulas, de substrato e de produto) nos diversos estados
estacionrios possveis, podendo-se assim, definir faixas ideais de operao do sistema,
tendo como objetivo bsico a obteno de elevadas produtividades do processo.

Quimiostato um reator contnuo operando na regio de valores de D para os quais X


varia pouco, processo onde a composio qumica mantida constante, atravs da
introduo de substrato pela alimentao.
Turbidostato Processo contnuo operando na regio de grande variao de X, na regio de
D prximo a max. Ajusta-se a vazo da alimentao de forma a manter X constante, o que
pode manter a turbidez do meio constante.

O Brix do caldo, para ser fermentado, dever ser de 15, para que a fermentao seja
completada em um perodo de tempo de 24 a 36 horas. Mas, como as leveduras no
suportam teores alcolicos elevados, se o Brix for superior a 15 (neste caso haver uma
maior produo de lcool), o tempo necessrio para a fermentao se completar passa a ser
superior a 36 horas, e, mesmo assim, a fermentao acaba ficando incompleta.
Para a determinao de max pelo mtodo dinmico: Coloca-se um valor de D maior que de
max de modo que haja um arraste de clulas do reator. Plotando-se ln (X/Xi) em funo do
tempo, obtm-se uma reta na qual o coeficiente angular igual a max D. Como D um
valor conhecido, calcula-se o valor de max.