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CRATO CE
2010
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Stricto
Sensu
em
Bioprospeco
Crato CE
2010
6
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS
A Deus, luz da vida que nos conduz pelos caminhos da sabedoria, pela sua presena viva em
minha vida e por sempre me estender a mo em todos os momentos.
A minha maravilhosa irm, Nayaana Karina Oliveira Nobre, pela grande fora, pelas
palavras de otimismo nos momentos difceis; amor incondicional.
Ao meu pai, Fernando Jos de Oliveira, pelo amor e carinho, amo muito o senhor.
Ao meu companheiro, Rhavell Lima Costa, pela cumplicidade, confiana e pacincia.
Ao meu cunhado, Michel Nobre de Melo, pelo apoio e sincera torcida para a realizao desse
trabalho.
7
AGRADECIMENTOS
Ao meu orientador, Prof. Dr. Irwin Rose Alencar de Menezes, por acreditar nesse trabalho,
compartilhar seus conhecimentos e sua experincia. Muito obrigada pela parceria.
A minha co-orientadora, Prof. Dr. Marta Regina Kerntopf, pela sua sabedoria, fortaleza e
grande generosidade. Muito obrigada pelo enorme apoio.
Aos meus grandes parceiros (amigos), colegas de luta, Francisco Elizaudo de Brito Jnior e
Elizngela Beneval Bento, vocs foram imprescindveis para a realizao desse trabalho, muito
obrigada.
Aos Professores Dr. Henrique Douglas Melo Coutinho, Dr. Ccero Francisco Bezerra
Felipe, pelo apoio e valiosa contribuio para o trabalho.
A todos os professores do Programa de Ps-Graduao em Bioprospeco Molecular da
Universidade Regional do Cariri - URCA.
Aos colegas do Laboratrio de Farmacologia e Qumica Molecular da Universidade Regional
do Cariri URCA, Norma, Helosa, Laura, Paula, Mariana, Daniele, Andreza, Alaiane, Mrcio e
todos que contriburam direta ou indiretamente para a consolidao desse trabalho.
Aos meus colegas professores do Departamento de Enfermagem da Universidade Regional do
Cariri URCA, especialmente, a Prof. Maria de Ftima Esmeraldo Ramos de Figueiredo, pelo seu
carinho e compreenso.
Aos colegas do Mestrado em Bioprospeco Molecular da Universidade Regional do Cariri
URCA.
Aos colegas do Laboratrio de Pesquisa de Produtos Naturais da Universidade Regional do
Cariri URCA pela importante contribuio.
secretria do Programa de Ps-Graduao em Bioprospeco Molecular da Universidade
Regional do Cariri URCA, Anderciele, pelo carinhoso apoio.
8
RESUMO
9
ABSTRACT
The Stryphnodendron rotundifolium Mart., Popularly known as "barbatimo", is a native species of the
Cerrado area of Northeast Brazil used by traditional communities for a variety of diseases, such as
inflammation, infection and gastritis. The present work investigated the bioactive properties
(antimicrobial and antiulcer activities) and also carried out a Ethnopharmacological survey
and
determinated the acute toxicity by oral and intraperitoneal administration of hydroalcoholic extract of
Stryphnodendron rotundifolium Mart. - EHSR obtained from the bark of the species. To do so, was made
a ethnopharmacological research was developed with residents of the Araripe Plateau; Hippocratic test of
acute toxicity in mice, determination of minimum inhibitory concentration - MIC of EHSR and its
potentiator effect on antimicrobial activity, antiulcer activity, against gastric lesions, induced by the
administration, oral and intraperitoneal, of absolute ethanol , oral administration of acidified ethanol and
indomethacin in mice and study of the involvement of nitric oxide, of the prostaglandin, of the receptors
noradrenergic alpha2, of K + channels ATP-dependent and a combination of EHSR to capsaicin, and, was
determined the effect of EHSR on intestinal motility were assayed. It was observed the popular use of the
species for various health disorders, especially of their barks in the form of immersion in water for
infectious and inflammatory processes. As for the bioassays, it as observed a low acute toxicity in oral
administration of the extract, which did not occur with intraperitoneal administration. It was determined a
MIC512g/mL and a promising effect on potentiation of antimicrobial activity. The EHSR showed
significant gastroprotective action against all types of gastric ulcer evaluated and the results suggest that
this action probably involves the participation of nitric oxide and endogenous prostaglandins but also was
able to potentiate the gastric cytoprotective action of capsaicin. The EHSR did not alter intestinal motility
in mice. The results indicate that the species Stryphnodendron rotundifolium Mart. represents a promising
natural source with significant biological potential and justifies some of its uses in popular medicine.
Descriptors: Stryphnodendron rotundifolium Mart.; Bioprospecting pharmacology; gastroprotection;
antimicrobial activity.
10
LISTA DE SMBOLOS, SIGLAS E ABREVIATURAS
Mais ou menos
<
Menor
>
Maior
Grau Centgrado
Percentagem
Alfa
Beta
et al.
e outros
Micrmetro
ANOVA
Anlise de Varincia
ANVISA
ATP
Trifosfato Adenosina
CE
Cear
CEPA
cm
Centmetro
COBEA
COX
Ciclooxigenase
COX-1
Ciclooxigenase do Tipo 1
COX-2
Ciclooxigenase do Tipo 2
DAINE
DL50
EHSR
E.P.M.
Etanolabs
Etanol absoluto
FMJ
FL
GSH
Glutationa reduzida
Grama
h
H
Hora
+
on Hidrognio
H2
HCl
+
cido Clordrico
+
H /K ATPase
Bomba de Prtons
i.p.
Intraperitoneal
K+
on Potssio
KATP
Kg
Quilograma
11
LFQM
L-NAME
NG-nitro-L-arginina-metilester
LPPN
M1
M3
mL
Mililitro
Nmero
NO
xido Ntrico
NOc
NOe
NOi
NOS
OMS
pH
Potencial de hidrognio
PGE2
Prostaglandina Tipo 2
PGI2
Prostaciclina Tipo 2
RFC
URCA
v.o.
Via oral
vs
Versus
12
LISTA DE FIGURAS
FIGURAS
FIGURA 1
PGINA
Mecanismos
envolvidos
na
regulao
da
secreo
gastrintestinal..........................................................................
FIGURA 2
Mecanismos
envolvidos
na
leso
30
mucosa
gstrica....................................................................................
FIGURA 3
Estrutura
qumica
do
33
cido
glico.......................................................................................
FIGURA 4
Exsicata
da
espcie
Stryphnodendron
39
rotundifolium
Mart.........................................................................................
FIGURA 5
45
da
Chapada
do
Araripe,
Nordeste,
Brasil.......................................................................................
FIGURA 6
46
Mart.
EHSR.......................................................................................
FIGURA 7
47
induzidas
por
etanol
absoluto
em
camundongos..........................................................................
FIGURA 8
70
etanol
absoluto
em
71
camundongos...........................................................................
FIGURA 9
gstrica
induzida
por
etanol
72
absoluto....................................................................................
FIGURA 10
FIGURA 11
73
gstrica
induzida
por
etanol
74
acidificado................................................................................
FIGURA 12
em
camundongos............................................................................
FIGURA 13
gstrica
induzida
por
(indometacina)..........................................................................
FIGURA 14
75
DAINE
76
13
modelo de leses gstricas induzidas por etanol absoluto em
camundongos.......................................................
FIGURA 15
FIGURA 16
78
leses
gstricas
induzidas
por
etanol
absoluto
em
79
camundongos......................................................................
FIGURA 17
FIGURA 18
80
camundongos............................................................................
FIGURA 19
receptores
noradrenrgicos
82
alfa2...........................................................................................
FIGURA 20
camundongos............................................................................
FIGURA 21
Canais
de
K+
dependentes
de
ATP
..................................................................................................
FIGURA 22
84
gstricas
induzidas
por
etanol
absoluto
em
camundongos............................................................................
FIGURA 23
185
FIGURA 24
Efeito
do
EHSR
sobre
motilidade
intestinal
camundongos............................................................................
86
em
88
14
LISTA DE TABELAS
TABELAS
TABELA 1
PGINA
Massa seca e rendimento do extrato hidroetanlico bruto liofilizado das
cascas (g).........................................................
TABELA 2
Origem
Bacteriana
44
Perfil
de
Resistncia
a
53
antibiticos................................................................................
TABELA 3
de
Stryphnodendron
rotundifolium
Mart.........................................................................................
TABELA 4
62
TABELA 5
63
Crato
Santana
do
Cariri
CE..............................................................................................
TABELA 6
64
TABELA 7
65
TABELA 8
65
TABELA 9
Mtodos
de
aplicao
medicinal
da
espcie
Stryphnodendron
rotundifolium Mart..................................................................
TABELA 10
66
S.
rotundifolium
Mart..........................................................................................
TABELA 11
67
TABELA 12
66
67
TABELA 13
TABELA 14
69
128
129
15
TABELA 15
por
etanol
absoluto
em
camundongos............................................................................
TABELA 16
Etanol
absoluto
(via
intraperitoneal)..........................................................................
TABELA 17
131
em
camundongos............................................................................
TABELA 18
132
Etanol
acidificado
(via
133
oral)...........................................................................................
TABELA 19
TABELA 20
134
TABELA 21
135
camundongos.......................................................
TABELA 22
gastroprotetor
do
EHSR
(via
137
oral)...........................................................................................
TABELA 23
leses
gstricas
induzidas
por
etanol
absoluto
em
camundongos.......................................................................
TABELA 24
138
gastroprotetor
do
EHSR
(via
oral)...........................................................................................
TABELA 25
139
TABELA 26
140
alfa2
no
efeito
gastroprotetor
do
EHSR
(via
141
oral).........................................................................
TABELA 27
TABELA 28
142
ATP
no efeito
gastroprotetor
16
oral)....................................................................................
TABELA 29
induzidas
por
etanol
absoluto
em
144
camundongos............................................................................
TABELA 30
TABELA 31
Efeito
do
EHSR
sobre
motilidade
145
intestinal
em
camundongos.............................................................................
TABELA 32
146
147
17
SUMRIO
RESUMO
ABSTRACT
LISTA DE FIGURAS
LISTA DE TABELAS
LISTA DE SMBOLOS, SIGLAS E ABREVIATURAS
1. INTRODUO..................................................................................................
1.1. Apresentao..............................................................................................
1.2.
Perspectiva
Histrica
sobre
o
Uso
de
Plantas
Medicinais...........................................................................................................
1.3. Consideraes sobre a Famlia Fabaceae, o Gnero Stryphnodendron
e suas Propriedades Bioativas..........................................................................
1.4. O Trato Gastrintestinal..............................................................................
1.4.1. Fisiologia da secreo gstrica.......................................................
1.4.1.1.Fatores agressores da mucosa gstrica...........................
1.4.1.2.Fatores
protetores
da
mucosa
gstrica.............................................................................
1.5. A Doena Ulcerosa Pptica.......................................................................
1.5.1.
Consideraes
gerais
sobre
a
inflamao..................................................................................................
1.5.2. A lcera Pptica e os Protocolos Experimentais
...................................................................................................................
1.5.3. Teraputica Antilcera....................................................................
1.6.
A
Farmacognosia
e
a
Importncia
dos
Metablitos
Secundrios.............................................................................................................
1.6.1. Os Taninos.......................................................................................
1.6.2. Os Flavonides................................................................................
1.7. Justificativa......................................................................................................
2. OBJETIVOS.......................................................................................................
2.1. Objetivo geral ............................................................................................
2.2. Objetivos especficos...................................................................................
3. MATERIAIS E MTODOS..............................................................................
3.1.Materiais.....................................................................................................
3.1.1.Material Botnico (origem e obteno do extrato
vegetal).........................................................................................
3.1.2. Drogas e reagentes........................................................................
3.1.3.Material permanente e equipamentos utilizados............................
3.2.Prospeco fitoqumica....................................................................................
3.3.Aspectos ticos do estudo.................................................................................
3.4.Animais..............................................................................................................
3.5.Mtodos.............................................................................................................
3.5.1.Tipologia do estudo.........................................................................
19
19
22
23
27
28
30
30
32
34
35
36
37
37
40
41
43
43
43
44
44
44
48
48
49
50
50
51
51
18
3.5.1.1.Pesquisa Etnofarmacolgica..............................................
3.5.2.1. Investigao da Toxicidade Aguda do Extrato e
screening hipocrtico....................................................
3.5.2.2.Investigao
da
Atividade
Antibacteriana...............................................................
3.5.2.3. Investigao da atividade gastroprotetora.......................
a) Leso gstrica induzida pela administrao oral de etanol
absoluto...................................................................................
b) Leso gstrica aguda induzida por etanol acidificado............
c) Leso gstrica aguda induzida por indometacina...................
d) Estudo dos possveis mecanismos envolvidos na atividade
gastroprotetora do EHSR......................................................
Avaliao
do
envolvimento
do
xido
ntrico...........................................................................
Envolvimento dos Canais de K+ dependentes de
ATP..............................................................................
Estudo do envolvimento das Prostaglandinas..............
Envolvimento dos Receptores noradrenrgicos
alfa2....................................................................................................................
Efeito
do
EHSR
em
Associao
Capsaicina....................................................................
3.5.2.3. Determinao da motilidade intestinal.............................
3.5.3.
Expresso
dos
dados
e
anlise
estatstica.......................................................................................
3.6. Instituies parceiras e financiamento...................................................
4.RESULTADOS....................................................................................................
4.1. Prospeco Fitoqumica...........................................................................
4.2. Dados da Pesquisa Etnofarmacolgica...................................................
4.3. Dados sobre a Toxicidade Oral e Intraperitoneal Aguda do
EHSR.........................................................................................................
4.4. Atividade Microbiolgica do EHSR.......................................................
4.5. Dados sobre o efeito antiulcerognico e mecanismos de ao
gastroprotetora do EHSR........................................................................
4.5.1. Efeito da administrao intraperitoneal do EHSR em leses
gstricas induzidas pela administrao oral de etanol absoluto
em camundongos............................................................................
4.5.2. Efeito da administrao oral do EHSR em leses gstricas
induzidas pela administrao oral de etanol absoluto em
camundongos..................................................................................
4.5.3. Efeito do EHSR em leses gstricas induzidas por etanol
acidificado em camundongos.........................................................
4.5.4. Efeito do EHSR em leses gstricas induzidas por DAINE
(indometacina) em camundongos...................................................
4.5.5. Papel do xido ntrico (NO) no efeito gastroprotetor do EHSR
em leses gstricas induzidas por etanol absoluto em
camundongos..................................................................................
4.5.6. Papel das prostaglandinas no efeito gastroprotetor do EHSR m
modelo de leso gstrica induzida por etanol absoluto em
camundongos..................................................................................
51
52
53
54
54
55
55
56
56
56
57
58
58
59
59
59
61
61
62
68
68
69
69
70
73
75
77
79
19
4.5.7.
81
83
85
87
89
104
106
127
20
1. INTRODUO
1.1 Apresentao
A perspectiva histrica sobre o emprego de plantas para o tratamento e a cura
de doenas evidencia que esta prtica (medicina popular) acompanha a humanidade
desde seus primrdios. Soma-se a este fato, o entendimento de que para parte
significativa da populao mundial e em nosso pas, particularmente, o emprego de
plantas para fins medicinais o nico recurso teraputico encontrado (DI STASI, 1996;
HEIDELBERG, 2001).
A fitoterapia, que implica na utilizao de plantas com a finalidade
teraputica, acompanha a histria da cincia farmacolgica pela justificativa de que at
o sculo passado, a produo de medicamentos era eminentemente baseada na extrao
de princpios biolgicos obtidos de plantas (FERRO, 2006).
No aspecto cronolgico, tem-se a informao de que os primeiros achados
sobre a cura alternativa de doenas, esta atravs das plantas, data de mais de sessenta
mil anos, onde as descobertas se deram por meio de pesquisas arqueolgicas no Ir. No
Brasil, essa prtica tem origem com as comunidades indgenas e a participao das
culturas negra e europia, perodo este em que o acesso aos cuidados mdicos, por
profissional habilitado, era restrito s classes mais privilegiadas, sendo, portanto, o
cuidado emprico, a prtica das populaes menos abastadas (REZENDE; COCCO,
2002).
Paulatinamente o saber popular foi cedendo espao ao conhecimento mdicocientfico, em uma concepo mecanicista ou cartesiana inicialmente, mudana esta
observada a partir dos sculos XVI e XVII, e caracterizada por uma fragmentao da
assistncia sade (SIQUEIRA et al., 2006). Este marco vem acompanhado de uma
substituio gradativa do emprego de plantas para a produo de medicamentos, pelas
drogas sintticas, fato observado entre as dcadas de 1950-1970 (FERRO, 2006), muito
embora, prevalea at os dias atuais, sobretudo, nas regies mais pobres do nosso pas, a
utilizao e a comercializao de plantas medicinais em feiras livres, mercados
populares, prtica esta que funciona como tratamento alternativo pela carncia de
recursos e at mesmo, fonte de renda para estas comunidades (MACIEL; PINTO;
VEIGA JNIOR, 2002).
21
Nesse contexto, importante salientar uma retomada, ainda que tmida, pela
valorizao do saber popular a partir inclusive, da perspectiva da Organizao Mundial
da Sade OMS de que o fortalecimento dessas prticas populares, pela validao
cientfica das propriedades farmacolgicas das plantas, possa contribuir para a melhoria
da situao de sade em todo o mundo. Enfatize-se ainda que, h estimativas de que 80
a 85% da populao mundial emprega o conhecimento sobre as plantas na produo de
seus medicamentos (FERRO, 2006). Para a OMS, a fitoterapia representa uma
alternativa vivel e significativamente relevante de contribuio populao no geral.
Acrescente-se a isso, que embora no Brasil, j mais de 350 mil espcies de
plantas foram identificadas, um nmero no superior a dez mil apenas tm alguma
propriedade medicinal conhecida (REZENDE; COCCO, 2002), o que certamente,
reafirma a necessidade de investimento em pesquisas nessa rea. sabido ainda, que o
Brasil detm cerca de 10% de toda a flora mundial e apesar de suas valorosas
colaboraes, tendo-se como exemplos a emetina, a pilocarpina, entre outros, constituise em um verdadeiro potencial para o desenvolvimento nesse ramo da cincia, em que
pese por apenas 1% de suas variedades vegetais ter recebido o olhar cientfico, sob o
ponto da investigao farmacolgica e fitoqumica (REZENDE; COCCO, 2002).
A cultura medicinal e a riqueza nacional em biodiversidade vm despertando o
interesse
de
pesquisadores
para
realizao
de
estudos
abrangendo
22
teraputico em quatro municpios nessa regio, no qual o Barbatimo (conforme
conhecimento popularmente) referido no presente estudo e ainda, atribui-se ao mesmo
o uso em lceras, impigem e como depurativo (OLIVEIRA; CARTAXO; SILVA,
2007).
Compreende-se, portanto, que ao conjunto complexo formado por todas as
formas de vida de dada regio, d-se a denominao de Biodiversidade. A Chapada do
Araripe, segundo Relatrio apoiado pela Fundao Araripe, rea delimitada entre trs
Estados do Nordeste Brasileiro (Cear, Piau e Pernambuco), que apresenta uma riqueza
inestimvel em seu ecossistema com caractersticas geolgicas, geomorfolgicas,
pedolgicas, climticas, hidrogrficas/hidrolgicas e de vegetao, bastante peculiares.
A Regio do Cariri, localizada ao Sul do Estado do Cear tem seus aspectos geogrficos
intimamente marcados pela configurao da Chapada do Araripe. Resumidamente, as
formaes florestais da Chapada do Araripe esto representadas por: formaes
estratificadas em mata mida, cerrado, cerrado, caatinga e carrasco (AUGUSTO;
GES, 2007).
O mesmo relatrio contextualiza ainda a utilizao dos mais diversos recursos
(madeira, produo de frutos e produtos de espcies no madereiras) oriundos da
Chapada para a garantia da subsistncia das comunidades que residem na Regio,
enfatizando, portanto, o valor econmico e cultural que esta rea representa populao
(AUGUSTO; GES, 2007).
Nesse universo da biodiversidade local possvel encontrar, como tem sido
foco de estudo de pesquisadores da Regio, o uso de plantas com a finalidade de
tratamento cura de enfermidades humanas. Dentre as espcies vegetais empregadas com
a finalidade curativa pelas comunidades residentes na rea de cerrado da Chapada do
Araripe, evidencia-se o Barbatimo, como mencionado popularmente, pertencente ao
Gnero Stryphnodendron, Famlia Fabaceae.
A pesquisa buscou investigar as propriedades biolgicas da espcie
Stryphnodendron rotundifolium Mart. e realizar um levantamento etnofarmacolgico
junto a comunidades locais. Justifica-se a abordagem desta espcie na Chapada do
Araripe, tendo em vista a realizao de estudo recente por pesquisadores da URCA com
esta, o qual se deteve investigao sobre as atividades antimicrobianas e
antiulcerognicas dos extratos etanlicos liofilizados das cacas secas do caule da planta.
Estudo este que evidenciou a proteo gstrica contra danos causados mucosa
induzidos pelo uso do etanol em modelos animais, e ainda, a inibio bacteriana
23
atribuda classe de metablitos secundrios (taninos, especialmente), em destaque na
planta (RODRIGUES et al., 2008).
importante elucidar que o trabalho acima mencionado representa o nico
encontrado na literatura abordando a espcie Stryphnodendron rotundifolium Mart, isso
pode ser afirmado com preciso aps ampla busca em sites oficiais e base de dados de
pesquisas na rea da bioprospeco de plantas e outras reas relacionadas (Pubmed,
Medline, Lilacs, Scielo, Scholar Google), com os descritores: Stryphnodendron,
Barbatimo, casca da mocidade, casca da virgindade, barbatimo vermelho, como
conhecido na linguagem popular.
1.2 Perspectiva Histrica sobre o Uso de Plantas Medicinais
24
dessas prticas, tem-se ainda, a contribuio dos escravos africanos com o emprego de
plantas medicinais na frica (WAGNER; WISENAUER, 2006).
Quanto cronologia da evoluo da Fitoterapia, observa-se nos relatos, que o
primeiro manuscrito a respeito das plantas medicinais data de 1500 a.C., denominado
Papiro de Ebers (na civilizao egpcia), este tratava de frmulas (mais de 800) de
preparo e ainda, sobre em torno de 700 drogas nativas e exticas O perodo de
Hipcrates (considerado o pai da medicina) tem incio com a publicao Corpus
Hippocratium que consolida a terapia a partir dos vegetais (FERRO, 2006).
O perodo de dominao do conhecimento cientfico exclusivamente pela
Igreja, na Idade Mdia (476-1453 d.C.), restringe o uso das plantas somente aos
religiosos, coibindo qualquer outro tipo de utilizao. Enquanto que o chamado perodo
do Renascimento, marcado pelas viagens para as Amricas e para as ndias permitiu a
prtica das terapias medicinais e a difuso de novos frmacos (FERRO, 2006).
Fazendo aluso ao Brasil, as referncias apontam que at o sculo XX, pelo
seu carter eminentemente rural, este era marcado pelo amplo uso das plantas
medicinais. Os processos de industrializao e conseqente, urbanizao so
responsveis pela introduo dos medicamentos sintticos em substituio aos
fitoterpicos (LORENZI, 2002). Muito embora, sabe-se que os medicamentos vegetais
tenham ampla aceitao na populao em geral.
O ressurgimento da Fitoterapia se deu pela preocupao crescente com a
biodiversidade e a preservao desta, com o uso sustentvel dos recursos naturais,
despertando o interesse de pesquisadores brasileiros e do mundo inteiro pela temtica
(LORENZI, 2002).
E nesse contexto, admite-se a relevncia das pesquisas multidisciplinares
envolvendo as cincias da qumica, botnica, farmacologia, cincias humanas e outras,
para a descoberta de novos saberes cientficos e tecnolgicos (DI STASI, 1996).
Entende-se que estes devem ser direcionados a uma melhoria das condies de
vida e de sade de populaes, sobretudo, que j se utilizam dos recursos vegetais para
garantia de suas subsistncias.
25
A famlia Fabaceae cosntitui uma das maiores famlias botnicas, tambm
conhecida como Leguminosae, possuindo ampla distribuio geogrfica. Quanto s
caractersticas botnicas, tem-se que o fruto do tipo legume, tambm conhecido como
vagem, e a mesma se apresenta subdividida em trs subfamlias: Faboideae,
Caesalpinioideae e Mimosoideae (ou Mimosaceae). ainda, a terceira maior famlia de
Angiospermae, compreendendo 727 gneros e 19.325 espcies, sendo apontada como
de maior riqueza de espcies arbreas nas florestas neotropicais. As espcies dessa
famlia so exclusivas de determinados ambientes brasileiros (WATSON; DALLWITZ,
1992).
importante mencionar que espcies pertencentes famlia Fabaceae so
empregadas para diversas finalidades medicinais, a exemplo, dos usos para: problemas
estomacais, diabetes, leucorrias, processos inflamatrios, menorragia, pneumonias,
problemas cardacos, dermatoses, dor, laxativo e infeces (MOREIRA et al., 2002;
UPADHYAY et al., 2010).
O Gnero Stryphnodendron, famlia Fabaceae, subfamlia Mimosoideae, inclui
cerca de 48 espcies, sendo todas nativas de Cerrado do Brasil, conhecidas
popularmente por barbatimo. As pesquisas realizadas com as espcies confirmam a
presena de at 20% de taninos, sendo que os extratos das cascas so amplamente
empregados na medicina popular para a cicatrizao de feridas, sendo atribudas
propriedades antioxidantes (CRONQUIST, 1988; SANTOS et al., 2004).
A litertaura reporta para a espcie Stryphnodendron barbatiman Mart. os
seguintes constituintes qumicos: taninos condensados, substncias monomricas
(flavan-3-is) e proantocianidinas, substncias tnicas (20 a 30%), taninos (18 a 27%),
alcalides no determinados, amido, matrias resinosas, mucilaginosas, matria corante
vermelha,
cido
tnico,
estrifno,
acar
solvel,
flavonides,
flobafenos
(PLANTAMED, 2010).
E ainda, que as plantas do Gnero Stryphnodendron, a exemplo das espcies
Stryphnodendron adstringens Mart. (espcie com maior nmero de investigaes
cientficas), Stryphnodendron polyphyllum Mart. e Stryphnodendron obovatum Benth,
so utilizadas por comunidades tradicionais para fins medicinais e que estas crescem
com abundncia em reas de Cerrado do Brasil. mecionado tambm, que a
26
composio qumica dessas espcies, presente nas cascas, sementes e folhas, revela a
presena de flavonides (PEREIRA; ANDRADE; PIL-VELOSO, 2002) e taninos
(MELLO; PETEREIT; NAHRSTEDT, 1996; SANCHES et al., 2005).
Desse modo, o levantamento sobre o significado da denominao
Stryphnodendron revela que a palavra no grego, refere-se a Strypns (duro) e dendron
(rvore). Em termos genricos, rvore dura. J a expresso Barbadetimam, de origem
indgena, ib-timo que tem o significado de rvore que aperta, a qual se daria pela
adstringncia. As espcies se destacam pela presena de compostos tnicos nos extratos
obtidos a partir das cascas, entre 25-30% (SILVA, 2007).
A literatura faz referncia, dentre as espcies pertencentes ao Gnero
Stryphnodendron, sobretudo, espcie Stryphnodendron adstringens Mart. Coville,
especificando que a mesma uma:
... rvore decdua, de copa alongada, de 4-5cm de altura, com
tronco cascudo e tortuoso, de 20-30cm de altura, nativa dos
cerrados do Sudeste e Centro-Oeste. Folhas compostas bipinadas,
com 5-8 jugas; fololos ovalados, em nmero de 6-8 por pina
(juga). Flores pequenas, amareladas, dispostas em racemos
axilares. Os frutos so vages cilndricas, indeiscentes, de 6-9cm
de comprimento, com muitas sementes de cor parda....
(LORENZI, 2002, p. 296).
Quanto s propriedades biolgicas relacionadas ao Gnero Stryphnodendron,
estas estiveram, nos trabalhos encontrados, sempre atribudas aos extratos obtidos a
partir da casca do caule da planta, e nesse sentido, tem-se um estudo realizado por
pesquisadores da Universidade Estadual Paulista UNESP em 2007, sobre a
bioprospeco de atividade antioxidante e antimicrobiana da casca de Stryphnodendron
adstringens sendo possvel verificar a presena de atividade antioxidante bem como
antimicrobiana, ambas propriedades foram associadas pelos pesquisadores, presena
de compostos fenlicos totais, como taninos e flavonides (SOUZA et al., 2007).
Outros trabalhos com a espcie Stryphnodendorn adstringens Mart. descrevem
propriedades bioativas, como antifngica e antimicrobiana para Pseudomonas
aeruginosa e Staphylococus aureus (SILVA, 2007), e ainda, que esta tem suas cascas na
forma de decocto, utilizadas amplamente na medicina popular para o tratamento de
leucorrias, diarrias e outras infeces ginecolgicas (SANTOS; TORRES;
27
LEONART, 1987). Estudos comprovam que extratos aquosos dessa espcie possuem
importante atividade cicatrizante (NEVES et al., 1992), antiinflamatria, analgsica e
protetora da mucosa gstrica (AUDI et al, 1999; BERSANI-AMADO et al., 1996;
LIMA; MARTINS; SOUZA, 1998). Somado a essas propriedades, fraes de extratos
de Stryphnodendorn adstringens Mart. tambm demonstraram atividade antiprotozoria
contra Leishmania amazonensis, Trypanosoma cruzi e Herpetomas samuelpessoai,
tendo-se as cascas da espcie riqueza de taninos condensados (MAZA et al., 2003;
LUIZE et al., 2005).
Outro estudo, este pela Universidade Federal de Gois, sobre a composio de
taninos em espcies de Barbatimo revelou tambm atividade antioxidante relacionada
presena de taninos condensados, em torno de 20%, e ainda, atividade antiviral
(SANTOS
et
al,
2002).
Adicionalmente,
anlises
fitoqumicas
da
espcie
28
adstringente. Recebem a classificao qumica em dois grupos, os taninos hidrolisveis
e os taninos condensados (SILVA, 2007).
Encontra-se ainda que em pesquisa vinculada Universidade Estadual de
Maring PR, a qual realizou estudo fsico-qumico e biolgico dos extratos das cascas
do Stryphnodendron polyphyllum, verificou-se atividade antimicrobiana (LOPES et al.,
2003).
Um estudo comparativo do efeito da Calendula officinalis, do Symphytum
officinale e do Stryphnodendron barbatiman em cicatrizao por segunda inteno em
equinos revelou que o Barbatimo facilitou o processo de fibroplasia, aes atribudas
propriedade adstringente dos taninos com a formao de crostas espessas e ressecadas,
acumulao de fibrina e migrao centrpeta, diminuindo, portanto, o leito da ferida. E
ainda, reduo da vascularizao e do edema. Um dos aspectos mais relevantes da
pesquisa a ser considerado nessa abordagem, o tempo mdio, em dias, da cicatrizao
das feridas com o uso tpico do Barbatimo, quando comparado aos outros agentes, 21
dias para o Barbatimo, 26,1 para a Calndula e 21,6 para o Confrei (MARTINS et al.,
2003).
A utilizao de extrato aquoso de Barbatimo (Stryphnodendron barbatiman
Mart.) demonstrou acelerao do reparo de feridas cutneas em camundongos pela
diminuio de exsudato por formao de crosta (cicatrizao subcrostal), no 7 dia de
tratamento houve evidncia de polimorfonucleares, colgeno e tecido de granulao,
sendo as feridas cicatrizadas em 19 dias de terapia tpica (EURIDES et al., 1996).
Enfatize-se tambm um estudo se utilizando do extrato aquoso do Barbatimo,
sem referir a espcie, para a cicatrizao de feridas cirrgicas em tecido cutneo de
gatos, no qual nove animais foram tratados com Barbatimo (soluo aquosa) e nove
gatos tratados com soluo base de Iodo a 10%. Para fins de comparao foram
selecionados os dias 1, 3, 7 e 10 com os critrios de avaliao: presena de exsudato
e sinais flogsticos. Nas feridas tratadas com Barbatimo, observou-se que no 7 dia
havia se formado uma espessa crosta sem exsudato e no 10, houve a consolidao da
ferida. Embora as feridas tratadas com Iodo tambm tenham sido consolidadas no
mesmo perodo, o estudo constatou que as feridas tratadas com Barbatimo tiveram
melhor fibroplastia (SILVA, 2007).
29
A partir dos dados expostos evidente que algumas espcies do Gnero
Stryphnodendron apresentam notveis e diferentes atividades biolgicas importantes
para o emprego medicinal e foi a partir dessa perspectiva, que se desenvolveu o presente
estudo enfatizando-se as provveis atividades bioativas vinculadas ao Stryphnodendron
rotundifolium Mart.
30
gastrintestinal extrnseca. A estimulao de receptores - e -adrenrgicos resulta em
inibio de contraes (GANGAROSA; SEIBERT, 2005).
O sistema gastrintestinal responsvel pela digesto e absoro dos alimentos
sendo um dos mais importantes sistemas endcrinos do nosso organismo. As principais
funes do trato gastrintestinal relevantes para a farmacologia so a secreo gstrica, a
mese, a motilidade intestinal, a eliminao fecal e a formao e eliminao da bile
(RANG et al., 2004).
31
No Sistema Nervoso Central SNC, as estruturas mais envolvidas na
secreo cida gstrica so o ncleo motor dorsal do nervo vago, o hipotlamo e o
ncleo do trato solitrio. A liberao de acetilcolina das fibras vagais estimula
diretamente a secreo de cido atravs dos receptores muscarnicos M3. A acetilcolina
provoca efeito indireto sobre as clulas parietais aumentando a liberao de histamina e
de gastrina (KATZUNG, 2007; GUYTON; HALL, 2006).
Os mediadores mais essenciais da secreo gstrica so a gastrina (hormnio),
a acetilcolina (um neutransmissor) e a histamina (hormnio local). A secreo de cido
estimulada pela histamina por meio dos receptores H2, pela acetilcolina pelos
receptores muscarnicos M3, e pela gastrina, provavelmente pelos receptores de gastrina
presentes nas membranas das clulas parietais (GANONG, 2000), conforme pode ser
observado na Figura 1.
A gastrina e a histamina participam da estimulao das clulas parietais para a
secreo de cido clordrico, exercendo forte efeito sobre esta. A acetilcolina estimula
as clulas produtoras de muco, clulas ppticas e parietais para a secreo de cido. Esta
favorece tambm a secreo de gastrina pelas clulas G das glndulas pilricas que
estimula por sua vez, a secreo gstrica cida. A secreo cida inibida pelas
prostaglandinas E2 e I2, as quais tambm estimulam a secreo de muco e bicarbonato.
A gastrina produzida pelas clulas G do antro, sendo um potente indutor da secreo
cida. Sua liberao estimulada por diversas vias, incluindo a ativao do Sistema
Nervoso Central SNC. A somatostanina (SST) produzida pelas clulas D do antro e
inibe a secreo de cido (CARVALHO, 2006; SCHELLACK, 2005; EKBLAD; MEI;
SUNDLER, 2000).
32
exercem
efeito
agressor
ao
estmago,
sendo
responsveis
pelo
33
1.4.1.2 Fatores Protetores da Mucosa Gstrica
34
antiinflamatrias no-esteroidais. Nesse contexto, destaca-se um estudo pioneiro de
Robert et al., 1979, o qual pode demonstrar a proteo do estmago exercida pelas
prostaglandinas. Posteriormente, foi demonstrada proteo gstrica exercida pela
capsaicina atravs da estimulao de neurnios aferentes sensveis a essa substncia,
efeito parcialmente dependente das prostaglandinas endgenas (TAKEUCHI et al,
2002).
Desse modo, a integridade da mucosa gstrica determinada em grande parte
pela ao da prostaglandina E2 (PGE2) e da prostaciclina (PGI2), as principais PG
produzidas pela mucosa gstrica. A atuao de defesa gstrica se d atravs do receptor
prostanide EP3 das clulas parietais, e estimulao da via G inibitria (cAMP) com
conseqente, reduo da secreo cida gstrica. Logo, a supresso da sntese de
prostaglandina resulta em maiores possibilidades de injria mucosa gstrica,
especialmente, se decrescida a sntese de NO (ATAY; TARNAWSKI; DUBOIS, 2000).
Os compostos sulfidrlicos tambm participam da manuteno da integridade
gstrica, sobretudo, em leses resultantes de estresse oxidativo. Nesse aspecto,
importante enfatizar que a glutationa reduzida (GSH) auxilia na eliminao de
hidroperxidos, atuando na remoo de radicais livres e, portanto, favorece a ao
fisiolgica das protenas sulfidrlicas (SHIRIN et al., 2001).
O bicarbonato, secretado a partir das clulas epiteliais gstricas, exerce
importante efeito gastroprotetor contra os efeitos deletrios do cido. Este regulado
pela ao de diversas substncias, como as prostaglandinas, o xido ntrico, os
neurnios aferentes sensveis capsaicina, peptdeos e outros fatores neurais (AIHARA
et al., 2007).
35
agentes antiinflamatrios no-esteroidais e infeces provocadas pelo Helicobacter
pylori (TOMA et al., 2002).
Segundo Abitol (2005), as lceras localizadas no estmago e no duodeno
recebem a denominao de lceras ppticas. Ocorrem mais frequentemente no duodeno,
cerca de cinco vezes mais, sendo que em torno de 90% esto localizadas na juno
pilrica. Quanto s lceras de localizao estomacal, 60% ocorrem no antro. doena
recidivante, mais incidente na populao masculina, podendo se d em qualquer faixa
etria, porm, mais prevalente entre 30 e 55 anos (lcera duodenal) e de 50 a 70 anos
(lcera gstrica).
A lcera pptica representa, portanto, uma desordem da mucosa gstrica e
duodenal causada pela acidez da secreo gstrica, de ocorrncia mundial, a qual
acomete milhes de pessoas, cujos gastos com tratamento e suas complicaes esto
situados em torno de bilhes de dlares. Constitui-se ento, em uma doena crnica, de
carter recorrente, bastante prevalente dentre as doenas gastrintestinais. Geralmente,
est associada a desequilbrios entre os fatores protetores (secreo de muco e
bicarbonato e produo de prostaglandinas) e agressores da mucosa (BIRDANE et al.,
2007; FALCO et al., 2008).
Diferentes aspectos parecem estar envolvidos em sua ocorrncia, muito
embora, nenhum agente isolado parea ser o responsvel. Dentre eles, tm-se a prpria
secreo cida gstrica, a pepsina, alimentao, drogas esteroidais e no-esteroidais,
lcool, tabagismo, stress, traumas, infeco pelo Helicobacter pylori (DURSUN et al.,
2009), conforme esquematizado na Figura 2.
36
37
processo inflamatrio na mucosa intestinal representa um elemento chave para a defesa
dessa. A resposta inflamatria adequada conduz ao reparo da mucosa, enquanto que o
comprometimento ou prolongamento desse processo, pode levar ao agravamento de
leses. Nesse sentido, a inflamao e a resposta imune secundrias exposio a
agentes nocivos, alteram a funo motora do trato gastrintestinal, o que importante
para a compreenso de diversas teraputicas. Nesse contexto, a microcirculao
representa o principal componente de defesa da mucosa gstrica contra processos
danosos, sendo modulada pelo sistema nervoso intrnseco e extrnseco. A importncia
da circulao para a proteo gstrica pode ser evidenciada a partir de experimentos
envolvendo os nervos aferentes sensveis capsaicina, sendo que emprego de
substncias que antagonizem a substncia P e o peptdeo calcitonina promovem
suscetibilidade da mucosa gstrica a danos (MARTIN; WALLACE, 2006).
Define-se a inflamao a partir de um processo complexo reacional a vrios
agentes nocivos, como os microrganismos e clulas danificadas, geralmente necrticas,
que consiste de respostas vasculares, migrao e ativao de leuccitos e reaes
sistmicas. A principal caracterstica da inflamao a reao dos vasos sanguneos,
que conduz ao acmulo de fluido e leuccitos nos tecidos extravasculares. A inflamao
pode ser aguda ou crnica. A primeira tem incio rapidamente e sua durao
relativamente curta, enquanto que a crnica, tem uma durao maior e est
histologicamente associada presena de linfcitos e macrfagos. As reaes
inflamatrias so desencadeadas por infeces e toxinas microbianas, traumas, agentes
fsicos e qumicos, necrose tissular, corpo estranho e reaes imunolgicas (KUMAR;
ABBAS; FAUSTO, 2005).
O processo inflamatrio regulado pela presena de mediadores inflamatrios
especficos, dentre os quais, destacam-se as molculas vasoativas que atuam
aumentando a permeabilidade vascular; fatores quimiotticos, que recrutam leuccitos.
Esses leuccitos recrutados, por sua vez, secretam outros mediadores inflamatrios que
incrementam ou inibem a resposta inflamatria (MURPHY; WARD, 2006).
38
comunidades que utilizam os recursos naturais para o tratamento de suas enfermidades
(GILANI; ATTA-ur-RAHMAN, 2005; CARVALHO, 2006).
A semelhana no mecanismo fisiolgico da secreo cida gstrica, a exemplo
do mecanismo de regulao intracelular na concentrao de ons hidrognios pela
bomba de prtons, torna a investigao da atividade antilcera vivel. Aliado a isso, a
literatura refere vrios avanos nos modelos experimentais pela descoberta de novos
recursos para induo de lcera em animais com vistas avaliao de propriedade
gastroprotetora de diversas substncias. No obstante, os protocolos para essa avaliao,
apresentam mecanismos prprios de investigao (BERNE et al., 2004; SAMONINA et
al., 2004).
Entre os modelos para essa experimentao, tem-se: Leso gstrica induzida
por etanol e etanol acidificado (ROBERT et al., 1979; MIZUI; SHIMONO;
DOTEUCHI, 1987); Leso gstrica induzida por estresse (SENAY; LENINE, 1967
apud LAPA et al., 2008); Leso gstrica induzida por indometacina (DJAHANGUIRI;
SCAND, 1979 apud LAPA et al., 2008); Determinao do muco da mucosa gstrica
(CORNE, 1974 apud LAPA et al., 2008); Determinao de grupos sulfidrlicos noproteicos da mucosa gstrica (SEDLAK; LINDSAY, 1968 apud LAPA et al, 2008);
Mtodo da ligadura pilrica (VISSHER e col., 1974 apud LAPA et al., 2008); Leso
gstrica crnica induzida por cido actico (TAKAGI e col., 1969 apud LAPA et al.,
2008), dentre outros.
Para avaliao da atividade gastroprotetora, a leso gstrica induzida por
etanol largamente empregada, sendo que neste modelo, as leses so decorrentes da
depleo de muco e de grupos sulfidrlicos e da formao de espcies reativas de
oxignio e produtos secretados pela ao dos mastcitos. J as leses decorrentes da
administrao
de
indometacina,
so
secundrias
reduo
substancial
de
39
40
1.6.1 Os Taninos
41
formar compostos insolveis em gua com alcalides, gelatina e protenas. Classificamse em taninos hidrolisveis e taninos condensados, sendo os primeiros caracterizados
por um poliol central, cujas funes hidroxilas so esterificadas com o cido glico. Os
taninos condensados so oligmeros e polmeros originados da policondensao de duas
os mais unidades flavan-3-ol e flavan-3,4-diol. So tambm conhecidos por
proantocianidina pela produo de pigmentos avermelhados (SANTOS; MELLO,
2007).
O emprego de plantas ricas em taninos na medicina popular pode ser
encontrado para vrias morbidades tais como, diarria, hemorragias, feridas,
queimaduras, reumatismo, hipertenso arterial, problemas gstricos (a exemplo, lcera
gstrica), doenas renais e processos inflamatrios (SANTOS; MELLO, 2007).
Para Silva e Silva (1999), a produo de altos nveis de fenis pela planta
guarda relao com o processo de cicatrizao. So capazes de formar precipitado com
protenas presentes na pele de animais e assim, inibir o processo de putrefao. E ainda,
os taninos so responsveis pela caracterstica de adstringncia de muitas plantas. Em
complementao, tem-se que as propriedades farmacolgicas do barbatimo se devem
aos teores de taninos na espcie (FONSECA; LIBRANI, 2008).
Os taninos tm propriedades adstringentes fortes, sendo que sua aplicao em
ferimentos causa precipitao protica que torna as camadas superficiais mais seguras e
ainda, retraimento das estruturas causando vasoconstrio capilar. Exercem, portanto,
efeito antiinflamatrio local. No obstante, a ao adstringente, tambm provoca efeito
antibacteriano indireto por inibio do crescimento. Possuem ainda, efeito anestsico
(HEIDELLBERG, 2001).
Os taninos so os compostos prevalentes em espcies do gnero
Stryphnodendron, estando associados ao efeito antimicrobiano atribudos s mesmas.
Quanto ao processo de cicatrizao, os taninos formam um complexo com protenas
levando formao de uma camada protetora sobre o tecido agredido. Este processo
tambm utilizado para justificar o seu efeito gastroprotetor (SOARES et al., 2008).
Nesse contexto, investigaes sobre o teor de taninos nas espcies: Stryphnodendron
adstringens, Stryphnodendron polyphyllum e Stryphnodendron obovatum demonstraram
na anlise quantitativa das trs espcies, que existe similaridade no teor de
galocatequina (Flavan-3-is), sendo que a espcie S. adstringens possui cido glico
(Figura 3) em uma proporo superior a 60% em relao s outras duas espcies
(LOPES et al, 2009).
42
1.6.2 Os Flavonides
43
considerando que as propriedades farmacolgicas apontadas para a espcie
Stryphnodendron rotundifolium Mart. esto relacionadas em sua maior parte, presena
de taninos e tambm flavonides, julgou-se importante efetuar algumas consideraes
sobre esses compostos.
Assim, representam uma importante classe de polifenis sendo abundantes
entre os metablitos secundrios, podendo ser encontrados em diversas formas
estruturais, sendo que a maioria possui 15 tomos de carbono em seu ncleo
fundamental. So atribudas diversas funes a essa classe de metablitos dentre as
quais podemos citar: proteo dos vegetais contra raios ultravioletas, insetos, vrus e
bactrias, inibio enzimtica, alelopatia e ao antioxidante. So reconhecidas ainda,
capacidades farmacolgicas importantes para esse grupo de compostos como efeito antifngico, antioxidante e cicatrizante (ZUANAZZI; MONTANHA, 2004).
Nesse aspecto, tem-se um amplo emprego teraputico dos flavonides, sendolhes tambm atribudas propriedades antioxidantes as quais seriam responsveis pela
capacidade desses de inibio da peroxidao lipdica e agregao plaquetria. Tambm
so reconhecidos seus potenciais anti-lcera, antidiarrico, antifngico, hepatoprotetor,
antiviral, antinociceptivo e antitumoral (CHANG; KINGHORNE, 2001; RAO et al.,
2004; MIZUI; SHIMONO; DOTEUCHI, 1987; BRODY, 1994).
Adicionalmente, esses metablitos teriam atividade antiinflamatria, a qual
explicada em parte, pela inibio da COX e tambm, ao hormonal, sendo que estudos
j demonstram preveno da fragilidade ssea e aumento da densidade ssea
(ZUANAZZI; MONTANHA, 2004).
Com efeito, os flavonides possuem potencial antiulcerognico envolvendo a
participao das prostaglandinas, do xido ntrico e dos nervos sensoriais contra leses
gstricas induzidas por etanol em roedores (BRZOZOWSKI et al., 2005).
44
1.7 Justificativa
45
desenvolvimento da Regio do Cariri, tornando-se realidade, sobretudo, por meio das
pesquisas vinculadas ao Programa de Mestrado em Bioprospeco Molecular, tem o
objetivo principal e norteador de investigar possveis propriedades bioativas da espcie
nativa da Regio, o Stryphnodendron rotundifolium Mart, aludas por analogia a outras
espcies do Gnero Stryphnodendron que demonstraram propriedades biolgicas,
conforme evidenciado atravs de estudos exposto j no presente trabalho.
Espera-se dessa maneira, que os resultados possam satisfazer a uma demanda
acadmica e sociedade caririense ao passo em que no se poderia esquecer o mrito
pretendido pelo carter inovador do estudo, desconhecendo-se a existncia de pesquisas
semelhantes abordando as propriedades avaliadas.
46
2. OBJETIVOS
47
Avaliar o efeito antiulcerognico do EHSR em modelos de leses gstricas induzidas
por etanol absoluto, etanol acidificado e indometacina, e investigar possveis
mecanismos de ao do extrato;
Determinar o efeito do EHSR sobre a motilidade intestinal em camundongos.
48
3. MATERIAIS E MTODOS
3.1 Materiais
Stryphnodendron
Solvente
Cascas
Extrato Bruto
Massa
Rendimento
3710,5g
627,8g
rotundifolium Mart.
EHSR Extrato Hidroalcolico de Stryphnodendron rotundifolium Mart.
49
50
51
52
3.1.2 Drogas e reagentes
SUBSTNCIA
ORIGEM
Sigma, U.S.A.
Amicacina
Atropina
Sigma, U.S.A.
Capsaicina
Sigma, U.S.A.
ter etlico
Sigma-Aldrich, U.S. A.
Formalina
Fluka, Alemanha
Gentamicina
Glibenclamida
Sigma,U.S.A.
Indometacina (Indocid)
Ioimbina
Sigma, U.S.A.
Canamicina
L-Arginina
Sigma,U.S.A.
Misoprostol
Neomicina
N-nitro-L-arginina-metilestar (L-NAME)
Sigma, U.S.A.
FARMACE, Brasil
53
Pipetas automticas (Maxipette)
Rotaevaporador (Fisatom)
Seringas estreis (1 mL, 3 mL e 5 mL)
Tubos Eppendorffs
Vidrarias gerais
3.2 Prospeco Fitoqumica:
54
homogeneizao e repouso em funil de separao, coleta da fase clorofrmica em
Bquer, evaporao do solvente, adio de cido clordico a 1%, homogeneizao,
aplicao sobre uma lmina, aplicao de uma gota de reagente Draggendorff;
Teste para Esterides e Triterpenides ocorreu a partir da diluio de frao dos
extratos hidroalcolicos liofilizados obtidos das cascas (0,3g) em 06ml de soluo de
clorofrmio, filtrao com algodo coberto com sulfato de sdio, passagem do material
para um tubo de ensaio, adio de 01ml de anidrido actico e de trs gotas de cido
sulfrico.
3.4 Animais
55
primeiro, e ambos sexos para a avaliao da segunda atividade, com mdia de peso
entre 20-30g. Os animais foram conduzidos para a sala de experimentao dois dias
antes dos ensaios e mantidos em rotatividade de ciclo claro e escuro de 12:00h, sendo as
luzes ligadas as 07:00h, mantidos com gua comum e rao ad libitum. Um dia anterior
aos testes os animais foram marcados e acondicionados em caixas em cama de
maravalha, a rao foi retirada 15:00h antes dos ensaios, sendo a gua sempre mantida.
O peso de jejum foi determinado.
3.5 Mtodos
56
O perodo de estudo compreendeu os meses de junho e julho de 2009, no qual
foram realizadas entrevistas semi-estruturadas com os informantes. Para fins de
composio de amostra foi empregada a tcnica de amostragem por saturao de dados
(POLIT; BECK; HUNGLER, 2004). A anlise dos dados ocorreu atravs da estatstica
descritiva (frequncia simples e percentual), abordando-se o uso medicinal das espcies
(modo de preparo e administrao, partes utilizadas da espcie, a durao do tratamento
e a frequncia das doses e restries ao uso); o ndice de Fidelity Level (FL) Nvel de
fidelidade, proposto por Friedman et al., (1986) apud Albuquerque; Lucena; Cunha,
(2008), conforme a frmula: FL= Ip/IuX100%, onde: Ip= nmero de informantes que
sugerem o uso de uma determinada espcie para uma proposta principal; Iu= nmero
total de informantes que citaram a espcie para qualquer finalidade e da Relative
Frequency of Citation (RFC) - Frequncia relativa de citao, obtida a partir da razo
FC/N, onde FC representa o nmero de informantes que mencionaram o uso da espcie
e N, o nmero total de informantes do estudo (TARDIO; PARDO-DE-SANTAYANA,
2008).
b) Procedimento Experimental
57
aps a observao por 24h, dada a no ocorrncia de bito nas doses anteriores,
realizou-se a adminsitrao oral de 5000mg/Kg (v.o.). Efetuou-se ainda, a avaliao da
toxicidade intraperitoneal do EHSR atravs da administrao tambm em doses
individualizadas, nas concentraes de 17.5, 36, 55, 175, 500 e 2000mg/Kg, sendo que
o volume administrado foi de 0,1ml/10g de peso corporal por animal. Os animais foram
observados por 14 dias (OECD, 2008).
Os animais foram observados quanto atividade locomotora, frequncia
respiratria, piloereo, perda do reflexo corneano, movimentos esteriotipados
(tremores, bater a cabea e morder-se), e ainda, quanto a morder a cauda, coar o
focinho e lamber as patas; sialorria, contores, a rigidez muscular, tremores finos e
grosseiros, ocorrncia de convulses, sedao/letargia e alteraes na mico - aumneto,
diminuio e alterao na cor - e na eliminao fecal diarria - (OECD, 2008). Esses
parmetros foram avaliados hipocraticamente nas primeiras 24 horas da administrao
seguida da observao a cada 24:00h e registro sistemtico. A dose letal mdia
DL50% foi calculada atravs do Programa LC50 Moden System (HAMILTON;
RUSSO; THURSTON, 1977).
Origem
Perfil de Resistncia
Ferida
Ast, Ax, Amp, Ami, Amox, Ca, Cfc, Cf, Caz, Cip, Clo, Im,
cirrgica
E. coli 27
58
Ferida
S. aureus 358
Oxa, Gen, Tob, Ami, Can, Neo, Para, But, Sis, Net
cirrgica
59
Para fins desse teste foram utilizados camundongos Swiss, divididos em grupos
(n=6), seguindo-se o protocolo experimental: Jejum por um perodo de 15:00h,
obteno do peso e identificao. Realizou-se um screening de doses do EHSR (10, 25,
50, 100, 250 e 500 mg/Kg, para o tratamento via oral, o omeprazol (30mg/Kg, para o
grupo controle positivo), ou o veculo (soluo salina a 0,9%, 0,1ml/10g para o grupo
controle lesionado) 1h antes da administrao do etanolabs (0,2 mL/animal, v.o.).
Decorridos 30 minutos, os animais foram sacrificados por deslocamento cervical, os
estmagos retirados, abertos ao longo da grande curvatura, lavados com salina 0,9% e
comprimidos entre duas lminas, escaneados e digitalizados, com posterior anlise
atravs do software (ImageJ). A rea lesionada foi expressa em termos de percentagem
em relao rea total do corpo gstrico. Empregou-se o programa Software GraphPad
Prism verso 5.0, Teste de Newman-Keuls, para expresso estatstica.
Para avaliao do efeito gastroprotetor do EHSR pela via intraperitoneal,
administrou-se o EHSR nas doses de 5 e 20mg/Kg, i.p.) 30 minutos antes da
administrao do etanolabs. Decorridos 30 minutos do etanol, os animais foram
sacrificados e receberam o mesmo procedimento descrito anteriormente.
60
c) Leso gstrica induzida por Indometacina (DJAHANGUIRI, 1969).
61
minutos deste foi administrado etanolabs (0,2 mL/animal, v.o.). Decorridos 30 minutos
da administrao do etanol, os animais foram sacrificados, os estmagos analisados
como descrito anteriormente. O controle lesionado recebeu soluo salina
(0,2ml/animal) 30 minutos antes da administrao do etanol e aps, 30 minutos, o
sacrifcio. Um grupo de animais recebeu EHSR (100mg/Kg, v.o.) 01:00h antes do
etanol e este, 30 minutos antes do sacrifcio.
Empregou-se ainda, L-Arginina (600mg/Kg v.o.) 01:00h antes do etanolabs (0,2
mL/animal, v.o.) e decorridos 30 min da administrao deste, os animais foram
sacrificados e, prosseguiu-se a anlise dos estmagos. A ao ulcerognica do L-NAME
(atravs da inibio da sntese de xido ntrico) foi testada a partir da administrao
deste, 30 minutos antes do etanolabs (0,2 mL/animal, v.o.) e aps 30 minutos deste
ltimo, procedeu-se ao sacrifcio. Utilizou-se o programa Software GraphPad Prism
verso 5.0, Teste de Newman-Keuls, para expresso estatstica.
62
mg/kg, v.o.), Misoprostol (0,016mg/Kg v.o.) ou veculo (soluo salina a 0,9%,
0,1ml/10g v.o.) 1:00h-2:00h antes da administrao etanolabs (0,2 mL/animal, v.o.).
O envolvimento das prostaglandinas foi avaliado pela administrao do EHSR
(100mg/Kg, v.o. Grupo tratado) 01:00h antes da indometacina (10 mg/kg, v.o.),
sendo que aps 02:00h desta foi administrado etanolabs (0,2 mL/animal, v.o.).
Decorridos 30 minutos da administrao do etanol, os animais foram sacrificados, os
estmagos analisados. O controle lesionado recebeu soluo salina (0,2ml/animal) 30
minutos antes da administrao do etanol e aps, 30 minutos, o sacrifcio. Um grupo de
animais recebeu EHSR (100mg/Kg, v.o.) 01:00h antes do etanol e este, 30 minutos
antes do sacrifcio.
Empregou-se tambm o misoprostol (0,016mg/Kg v.o.) 01:00h antes do etanolabs
(0,2 mL/animal, v.o.) e decorridos 30 min da administrao do etanol, os animais foram
sacrificados e, prosseguiu-se a anlise dos estmagos. O efeito ulcerognico da
Indometacina (atravs da inibio da sntese de prostaglandinas) foi testado a partir da
administrao desta, 2 horas antes do etanolabs (0,2 mL/animal, v.o.) e aps 30 minutos,
procedeu-se ao sacrifcio. Empregou-se o programa Software GraphPad Prism verso
5.0, Teste de Newman-Keuls, para expresso estatstica.
63
- Efeito do EHSR em Associao Capsaicina (MATSUDA; LI; YOSHIKAWA,
1999).
64
O efeito da associao do EHSR atropina foi realizado a partir da
administrao do extrato (5mg/Kg, v.o.) em um grupo, da atropina (0,001g/Kg, v.o.) em
outro, e ainda, da combinao de ambos (EHSR e atropina, nessas doses) em um
terceiro grupo, e aps 01:00h, o carvo ativado a 10% (0,1ml/10g v.o.). Decorridos 30
minutos deste, efetuou-se o sacrifcio dos animais, procedendo-se conforme descrito
acima.
65
4. RESULTADOS
66
TABELA 3. Prospeco Fitoqumica do Extrato Hidroalcolico do Stryphnodendron
rotundifolium Mart. EHSR.
METABLITOS SECUNDRIOS
1 2
EHSR
3 4 5 6
+ -
10
+ + + + +
11 12 13 14 15 16
17
Informantes
67
TABELA 4: Perfil dos informantes da espcie Stryphnodendron rotundifolium Mart.
(Barbatimo) em reas da Biorregio do Araripe, Crato e Santana do Cariri - CE.
Municpio
Localidade
Crato - CE
Stio Matinha
02
6,06
04
12,12
05
15,15
03
9,09
Stio Lrio
02
6,06
Stio Guritiba
17
51,52
23-39
08
24,24
40-59
18
54,55
60-80
07
21,21
Masculino
17
51,52
Feminino
16
48,48
< 5 anos
05
15,15
5 < 10 anos
04
12,12
10 < 20 anos
03
9,09
20 < 30 anos
03
9,09
05
15,15
04
12,12
50 < 60 anos
06
18,19
03
9,09
Agricultor(a)
25
75,76
Motorista
01
3,03
Domestica
01
3,03
Comerciante
02
6,06
Merendeira
01
3,03
Stio
Baixa
Garganta
Santana do Cariri - CE
da
Faixa etria
Sexo
Ocupao
68
Auxiliar de servios gerais
01
3,03
Professora
01
3,03
01
3,03
Sim
10
30,30
No
22
66,67
No informado
01
3,03
69
TABELA 5: Comparao do Fidelity Level (FL) sobre as indicaes medicinais do
Stryphnodendron rotundifolium Mart. (Barbatimo) em reas da Biorregio do Araripe,
Crato e Santana do Cariri CE.
CRATO - CE
SANTANA DO CARIRI - CE
DOENAS
FL
DOENAS
FL
Ferimentos
61.5
Ferimentos
52.6
Inflamao
46.1
Inflamao
42.1
Gastrite
38.5
Inflamao vaginal
Inflamaes do aparelho
reprodutor feminino
21.0
38.5
Gastrite/lcera
21.0
Algias
30.8
Infeco
10.5
Infeco
23.0
Efeito abortivo
5.3
Algias osteomusculares
15.4
Neoplasia
5.3
Doenas da prstata
15.4
Reumatismo
Doena sexualmente
transmissvel
5.3
7.7
Hipertenso
5.3
Dermatoses
7.7
Queimaduras
5.3
Menopausa
7.7
Cicatrizao ps-parto
5.3
Clculo renal
7.7
Gripe
5.3
Doenas pulmonares
7.7
Santana do Cariri
RFC Total
0,42
0,58
1,00
Espcie
Stryphnodendron rotundifolium Mart.
70
Casca
31
86,11
Raiz
11,11
Folha
2,78
Tendo em vista que a grande maioria dos informates utiliza as cascas para fins
medicinais foi invertigado o modo de preparo medicinal dessa parte da espcie
Stryphnodendron rotundifolium Mart., estando o mesmo descrito na tabela 08.
Observou-se que a imerso em gua e decocto com gua representaram os modos mais
prevalentes, estes situados em 53,19% e 27,65%, respectivamente.
Imerso em gua
25
53,19
Imerso em aguardente
4,25
13
27,65
2,12
2,12
Macerao
10,67
71
Os mtodos de aplicao medicinal da espcie foram descritos pelas
comunidades e se encontram reunidos na tabela 9. Desta forma, os modos de aplicao
mais amplamente empregados para as espcies foram a ingesto oral, a aplicao tpica
e o banho, sendo relatado os seguintes percentuais: 48,43, 25,00 e 14,06%
respectivamente.
Oral
31
48,43
16
25,00
Higiene ntima
10,94
Banho
14,06
1,57
72
Tabela 10: Indicao medicinal versus durao do tratamento e frequncia de doses da
espcie Stryphnodendron rotundifolium Mart.
Durao do
Indicao
Gastrite/lcera
Infeco/inflamao
Frequncia da dose
tratamento
10-30 dias
1-3 vezes/dia
3-10 dias
2-3 vezes/dia
7 dias
ferimentos
Infeco vaginal
dia
Dor
Dor osteomuscular
Abortivo
Doenas pulmonares
2-3 dias
2 vezes/dia
Indeterminada
3 vezes/dia
3 dias
2-3 vezes/dia
Indeterminada
2 vezes/dia
Gestao
08
25,00
Em crianas
21,87
Cardiopatias
3,12
Hipotenso
3,12
No apresenta
15
46,87
73
4.3 Dados sobre a Toxicidade Oral e Intraperitoneal Aguda do EHSR
74
antibiticos testados (tabela 12) demonstrou efeito potencializador importante quanto
ao antibacteriana das drogas utilizadas para controle.
SA358
CIM + EHSR
(8 g/mL)
CIM
CIM + EHSR
(8 g/mL)
Gentamicina
2500
19,5
39
2,4
Canamicina
2500
62,5
2500
312,5
Amicacina
156,2
9,7
78,1
9,7
Neomicina
312,5
39
312,5
9,7
75
lesionado, embora tenham apresentado percentuais de reduo de reas ulceradas de
40
30
20
***
***
10
***
20
EHSR(i.p.)
25
***
0
L
mg/kg
EHSR(v.o.)
76
tambm demonstraram reduo significativa nas reas gstricas lesionadas e
significativo percentual de reduo de lceras, sendo estes de 0,800,50% e 96,10%,
25
20
15
10
***
OMEPRAZOL
***
25
0
10
0
***
50
***
25
30
***
10
***
***
50
0
mg/kg
EHSR
77
ASPECTO
MACROSC
PICO
DESCRIO
78
4.5.3 Efeito do EHSR em leses gstricas induzidas por etanol acidificado em
camundongos.
Desse
valores de
30
20
10
***
***
***
***
***
***
***
OMEPRAZOL
50
0
25
0
10
0
50
25
10
30
0
L
mg/kg
EHSR
79
significante quando comparado ao grupo controle lesionado (CL) (ANOVA e Teste de
Student Newman Keuls).
ASPECTO
MACROSCPICO
DESCRIO
80
4.5.4 Efeito do EHSR em leses gstricas induzidas por DAINE (Indometacina) em
camundongos.
valores de
20
15
10
5
***
***
***
***
OMEPRAZOL
50
0
25
0
10
0
30
C
L
mg/kg
EHS R
81
Cada grupo representa a mdia de 6 animais. Na anlise estatstica, foi considerado no
significante p > 0,05 e ***p<0,001, significante quando comparado ao grupo controle
lesionado (CL) (ANOVA e Teste de Student Newman Keuls).
ASPECTO
MACROSC
PICO
DESCRIO
82
4.5.5 Papel do xido ntrico (NO) no efeito gastroprotetor do EHSR em leses
gstricas induzidas por etanol absoluto em camundongos.
40
30
20
b/d
10
a/b/c
a/b/c
L-NAME
L-ARGININA
L-NAME
100
10
0
10
60
0
10
0
C
L
mg/kg
EHSR
mg/kg
EHSR
83
(100mg/Kg, v.o.) tambm 30 minutos antes da administrao do etanol absoluto. Cada
grupo representa a mdia de 7 animais. Na anlise estatstica, foi considerado no
significante p> 0,05 e ap< 0,001 vs CL, bp<0,001 vs L-NAME (10mg/Kg, v.o.),
c
p<0,001 vs L-NAME (10mg/kg, v.o.) + EHSR (100mg/kg, v.o.) e dp<0,05 vs CL
(ANOVA e Teste de Student Newman-Keuls).
ASPECTO
MACROSC
PICO
DESCRIO
84
4.5.6 Papel das prostaglandinas no efeito gastroprotetor do EHSR em modelos de
leses gstricas induzidas por etanol absoluto em camundongos.
25
20
15
10
a/c
a/b
a/b
INDOMETACINA
INDOMETACI NA
100
0
10
10
0,
01
10
0
C
L
mg/kg
EHSR
mg/kg
EHS R
85
esta droga 2 horas antes da administrao do etanol absoluto (0,2 mL/animal). O
misoprostol foi administrado 1 hora antes do etanol e aps 30 minutos deste, os animais
receberam o sacrifcio. Um grupo foi tratado com o EHSR (100mg/Kg, v.o.), 30
minutos antes da administrao do etanol absoluto. Cada grupo representa a mdia de 7
animais. Na anlise estatstica, foi considerado no significante p>0,05 e ap<0,001 vs
CL, bp<0,001 vs indometacina (10mg/Kg, v.o.), cp<0,01 vs indometacina (10mg/Kg,
v.o.) (ANOVA e Teste de Student Newman-Keuls).
ASPECTO
MACROSC
PICO
DESCRIO
86
4.5.7 Papel dos receptores noradrenrgicos alfa2 no efeito gastroprotetor do EHSR
em modelos de leses gstricas induzidas por etanol absoluto em camundongos.
40
30
20
10
a/b
a/b
IOIMBINA
IOIMBINA
100
10
0
0
C
L
mg/kg
EHSR
mg/kg
EHSR
87
ASPECTO
MACROSC
PICO
DESCRIO
88
4.5.8 Papel dos canais de K+ dependentes de ATP no efeito gastroprotetor do
EHSR em modelos de leses gstricas induzidas por etanol absoluto em
camundongos.
25
20
15
10
5
a/b
a/b
GLIBENCLAMI DA
10
0
GLI BENCLAMIDA
100
mg/kg
EHSR
mg/kg
EHSR
89
ASPECTO
MACROSC
PICO
DESCRIO
90
4.5.9 Envolvimento do EHSR em associao Capsaicina em modelo de leses
gstricas induzidas por etanol absoluto em camundongos.
40
30
20
***
10
***
***
***
CAPS AICINA
CAPSAICINA
0,
2
0,
2
C
L
mg/kg
EHS R
mg/kg
EHSR
91
receberam do etanol absoluto. Cada grupo representa a mdia de 7 animais. Na anlise
estatstica, foi considerado no significante p>0,05 e ***p<0,001 vs controle lesionado
(CL) (ANOVA e Teste de Student Newman-Keuls).
ASPECTO
MACROSC
PICO
DESCRIO
92
4.6 Dados relativos Atividade do EHSR sobre a Motilidade Intestinal
100
c
80
a/b/d
a/b/d
60
40
20
10
0
0,
00
1
0,
00
1
0,
01
0
C
93
94
5. DISCUSSO
95
antioxidante e antilcera (LOPES et al., 2005; AUDI et al., 1999). Enfatize-se que os
dados etnofarmacolgicos levantados na presente investigao mantm correlao com
esses usos populares descritos na literatura, o que nos faz afirmar a coerncia das
informaes coletadas junto s comunidades tradicionais da Chapada do Araripe (Crato
e Santana do Cariri-CE).
importante considerar que o uso de espcies do Gnero Stryphnodendron para
vrias indicaes medicinais, ainda carente de investigao cientfica. Encontra-se que
a espcie mais estudada o Stryphnodendron adstringens (Mart.) (LOPES et al., 2003)
para a qual so reportadas atividades antiinflamatria, analgsica e protetora da mucosa
gstrica (REBECCA et al., 2002) e ainda, antioxidante e antimicrobiana em extratos
obtidos a partir da casca do caule da planta, propriedades estas aludas presena de
taninos (SOUZA et al., 2007).
96
Conforme elucidado, as propriedades biolgicas observadas nas espcies do
Gnero Stryphnodendron so atribudas em boa parte, aos compostos fenlicos,
incluindo taninos e flavonides, os quais tm seus usos teraputicos como agentes
antiinflamatrios, antifngicos, antioxidantes e ainda, propriedades cicatrizantes
(ZUANAZZI; MONTANHA, 2004).
Nesse contexto, os taninos teriam importante papel antiinflamatrio e por isso, o
uso no tratamento de ferimentos. Os flavonides participariam da ativao de enzimas
nos processos antiinflamatrios (MIDDLETON; KADASWAMI; THEOHARIDES,
2008; OKUDA, 2005). Tambm um estudo realizado com a Aniba Riparia (Nees) Mez
(Lauraceae), a qual apresenta flavonides, em sua composio qumica, foi capaz de
revelar ao antinociceptiva atribuda propriedade antiinflamatria (ARAJO, 2007).
Os taninos promovem a cicatrizao de feridas por ao antioxidante, atuando
como seqestradores de radicais de oxignio, favorecendo o processo de fibroplastia, a
reorganizao do leito capilar, a proliferao de queratincitos e a diferenciao celular
(FERNANDEZ et al., 2000; DETERS et al., 2001).
Adicionalmente, pesquisa etnofarmacolgica envolvendo plantas medicinais
contento taninos e flavonides no Estado de Pernambuco, Brasil, identificou indicaes
teraputicas para gastrite, ferimentos, doenas de pele, inflamao, inflamaes
femininas, dentre outras, relacionadas a espcies que apresentam esses compostos
qumicos (ARAJO et al., 2008).
No obstante, a literatura reporta o uso de espcies do gnero Stryphnodendron
na forma de decocto e infuso das cascas do caule para diversas afeces como,
diarria, leucorrias e distrbios inflamatrios (REBECCA et al., 2002). Assim, os
dados da pesquisa permitem inferir que os constituintes qumicos descritos na literatura
possivelmente esto envolvidos nas propriedades bioativas informadas sobre a espcie
Stryphnodendron rotundifolium Mart..
Evidncias cientficas confirmam o uso das cascas obtidas do caule de espcies
do gnero Stryphnodendron para diversas afeces. Nesse sentido, investigao
avaliando o efeito de extratos de espcies deste gnero, obtidos a partir das cascas do
caule, demonstrou atividade cicatricial por aumento de tecido epitelial em feridas
produzidas em ratos. Fraes dos extratos tambm foram empregadas para identificao
de propriedade bacteriana contra Staphylococcus aureus e bactrias gram-negativas,
demonstrando tambm efeito inibitrio do crescimento e propriedades antioxidantes. As
espcies continham entre 12-19% de taninos nas cascas do caule (LOPES et al., 2003).
97
Tambm h relatos de dados de avaliao de atividades biolgicas atribudas s
sementes da espcie Stryphnodendron obovatum Benth., muito embora, o uso desta
parte da planta no tenha sido referido pelos informantes nessa pesquisa. Assim, o
extrato salino de Stryphnodendron obovatum Benth. apresentou ao antioxidante
(VASCONCELOS et al., 2004).
Na medicina tradicional, o decocto das cascas do caule do Stryphnodendron
adstringens Mart. amplamente utilizado para o tratamento de inflamaes vaginais e
limpeza de ferimentos (NUNES, 2003; MACEDO; FERREIRA, 2004), comprovando,
portanto, os dados apontados nessa pesquisa.
Em relao ao tratamento de feridas, estudo comparativo sobre o efeito da
Calendula officinalis, do Symphytum officinale e do Stryphnodendron barbatiman em
cicatrizao por segunda inteno em equinos revelou que o ltimo facilitou o processo
de fibroplasia, aes atribudas s propriedades adstringentes dos taninos com a
formao de crostas espessas e ressecadas, acumulao de fibrina e migrao centrpeta,
diminuindo, portanto, o leito da ferida. E ainda, reduo da vascularizao e do edema.
Um dos aspectos mais relevantes da pesquisa a ser considerado nessa abordagem, o
tempo mdio, em dias, da cicatrizao das feridas com o uso tpico do Barbatimo,
quando comparado aos outros agentes, 21 dias para o Barbatimo, 26,1 para a Calndula
e 21,6 para o Confrei (MARTINS et al., 2003).
Em parte, o uso tpico relatado pelos informantes, sobretudo, em ferimentos,
guarda correlao com as pesquisas demonstradas. Nesse contexto, para o tratamento de
inflamaes/ferimentos, estudos descritos na literatura com espcies do gnero
Stryphnodendron, demonstraram efeito cicatrizante entre 4-10 dias (LOPES et al.,
2003) mantendo relao com os dados apontados pelos informantes. Tambm o efeito
antinociceptivo agudo da espcie Stryphnodendron adstringens Mart. (administrao
oral nas doses de 200, 400 e 800mg/Kg), extratos das cascas, foi evidenciado em ratos
(MELO et al., 2007).
Com efeito, o uso oral foi predominante entre os informantes, o que pode estar
relacionado baixa toxicidade de espcies do gnero Stryphnodendron, por via oral
(REBECCA et al., 2002; AUDI et al.,1999). Quanto espcie Stryphnodendron
rotundifolium Mart., avaliao da atividade antilcera do extrato etanlico das cascas
em camundongos, nas doses de 200 e 400mg/kg via oral, demonstrou gastroproteo
contra leses induzidas por etanol, sendo que os autores correlacionam essa propriedade
98
presena de taninos e flavonides na espcie. importante mencionar que no foi
relatado ocorrncia de morte nos animais tratados com o extrato (RODRIGUES et al.,
2008).
99
(COUTINHO et al., 2009c), da Momordica charantia L. (COUTINHO et al., 2009a) e
da Turnera ulmifolia L. (COUTINHO et al., 2009b).
Ensaios realizados com extratos de plantas ricas em taninos tm demonstrado
ao bactericida e fungicida (SCALBERT, 1991), antiviral (DE BRUYNE et al., 1999),
e atividade antioxidante (MOURE et al., 2001). Como visto, esses compostos foram
identificados atravs da prospeco fitoqumica do EHSR.
Provavelmente a atividade moduladora do EHSR para os antibiticos
aminoglicosdeos usados no controle, esteja relacionada capacidade atribuda aos
taninos, de formar complexos com protenas, a qual bem aceita como a base para a
proteo contra insetos, fungos e bactrias, bem como, outras propriedades
farmacolgicas aludas a esses compostos. Os mecanismos exatos pelos quais os taninos
exercem atividade antimicrobiana no esto claramente elucidados. Entretanto, so
levantadas trs hipteses. Uma seria a inibio de enzimas de bactrias e fungos e/ou a
complexao de substratos dessas; outro mecanismo estaria representado pela ao
sobre as membranas celulares dos microrganismos, alterando-se o metabolismo; e um
terceiro, seria a complexao com ons metlicos (MILA; SCALBERT; EXPERT,
1996), reduzindo a disponibilidade desses elementos para o metabolismo (SANTOS;
MELLO, 2004, HO et al., 2001, SCHOFIELD; MBUGUA; PELL, 2001).
Considerando que a ao antibacteriana dos aminoglicosdeos se deve
capacidade de inibio da sntese de protenas e reduo da fidelidade do mRNA no
ribossoma (KATZUNG, 2007), possvel que compostos presentes no EHSR possam
estar interferindo na sntese proteica e assim, favorecendo a atividade antibacteriana
dessas drogas.
Compostos fenlicos, incluindo taninos e flavonides tm demonstrado seu
potencial teraputico como agentes antiinflamatrios, antifngicos, antimicrobianos,
antioxidantes e cicatrizantes (ZUANAZZI; MONTANHA, 2004).
Desse modo, observa-se que o incremento na ocorrncia de infeces
multiresistentes tem impulsionado o desenvolvimento de pesquisas para avaliao de
atividades antimicrobianas de produtos naturais (ARANGO; SNCHEZ; GALVIS,
2004). Vrias propriedades biolgicas so atribudas ao gnero Stryphnodendron e
ensaios in-vitro com extratos obtidos de espcies desse gnero tm mostrado atividade
antibacteriana (AUDI et al, 2004; HOLETZ et al., 2005).
Dados da literatura confirmam o uso das cascas obtidas do caule de espcies do
gnero Stryphnodendron para diversas afeces. Investigaes para avaliao do efeito
100
de extratos de espcies deste gnero, obtidos a partir das cascas do caule, tm
demonstrado a presena de taninos e flavonides, seus usos como agente
antimicrobiano (SINGH et al., 2006; LOPES et al., 2003; MATOS, 1997). Fraes dos
extratos tambm foram empregadas para identificao de propriedade bacteriana contra
Staphylococcus aureus e bactrias gram-negativas, demonstrando tambm efeito
inibitrio do crescimento e propriedades antioxidantes (LOPES et al., 2003).
Entretanto, pesquisas empregando-se testes de suscetibilidade pelo mtodo de
difuso, dos extratos aquosos e etanlico do Stryphnodendron adstringens para
Staphylococcus mutans, S. aureus, Actinobacillus actinomycetemcomitans e Candida
albicans revelaram significativa atividade antibacteriana para ambos extratos avaliados,
sendo ainda que para o extrato etanlico, foi possvel identificar tambm ao
antifngica (SANTOS et al., 2009). No entanto, importante mencionar que o mtodo
por microdiluio, empregado na presente investigao, representa na atualidade, a
tcnica mais aceita para este bioensaio (HADACEK; GREGER, 2000).
Outros estudos com fraes de extratos obtidos das cascas do Stryphnodendron
adstringens, pela tcnica de microdiluio, revelaram atividade antifngica contra
Candida spp., atribuda ao teor de taninos presentes na espcie (ISHIDA et al., 2006).
Nesse contexto, avaliao das atividades antioxidante e antimicrobiana das cascas de
Stryphnodendron adstringens, por diluio, pode verificar presena das propriedades
antioxidante e antimicrobiana, sendo que ambas aes bioativas foram associadas
presena de compostos fenlicos totais, como taninos e flavonides (SOUZA et al.,
2007).
Uma variedade de estudos tem demonstrado as propriedades antimicrobiana e
antifngica dos flavonides (RAUHA et al., 2000; SOHN et al., 2004). Esses
compostos qumicos possuem a capacidade de formar complexos com protenas
solveis extracelulares que se ligam parede celular bacteriana (TSUCHIYA et al.,
1996).
No entanto, na presente investigao esses compostos qumicos no parecem
exercer efeito antimicrobiano significativo do ponto de vista clnico, empregando-se a
tcnica de microduio.
Estudos evidenciam que muitos compostos naturais alteram a permeabilidade da
membrana celular, favorecendo a penetrao dos antibiticos A interao com enzimas
bacterianas tambm pode estar relacionada ao mecanismo de sinergismo de produtos
naturais com antibiticos, o qual pode ser obtido a partir de um extrato ou da
101
combinao entre extratos, produtos sintticos e antibiticos e entre produtos naturais
(WENDAKOON;
DOBLE,
SAKAGUCHI,
1995),
HEMAISWARYA;
KRUTHIVENTI;
esse mecanismo
102
intraperitoneal, porm, no foi observada diferena estatstica significativa entre as
doses de 5mg intraperitoneal e oral.
Nesse contexto, observa-se que vm sendo realizados estudos com espcies do
Gnero Stryphnodendron, a exemplo de uma investigao desenvolvida com frao
acetnica do extrato metanlico das cascas do Stryphnodendron adstringens nas doses
de 400 e 800mg/Kg v.o., a qual demonstrou inibio na formao de lceras gstricas
induzidas por etanol (62% e 98%) e estresse hipotrmico (89% e 88%),
respectivamente, em ratos. Os autores atribuem ao extrato capacidade antioxidante.
Contrariamente, o extrato no foi efetivo contra leses gstricas induzidas pela
administrao de indometacina, fato que os autores atribuem inibio da sntese de
prostaglandinas (MARTINS; LIMA; RAO, 2002).
importante considerar tambm a possibilidade de que o efeito gastroprotetor
do EHSR tenha relao com a atividade antioxidante, uma vez que esta referida na
literatura para espcies vegetais que possuem taninos e flavonides em sua composio
qumica (SOUZA et al., 2007).
Outra investigao com a espcie Stryphnodendron rotundifolium Mart. tambm
demonstrou gastroproteo contra leses induzidas por etanol, na administrao oral do
extrato etanlico das cascas nas doses de 200 e 400mg/Kg em camundongos
(RODRIGUES et al., 2008). A ao cicatrizante de extratos obtidos a partir das cascas
das espcies Stryphnodendron polyphyllum e Stryphnodendron obovatum tambm foi
evidenciada para feridas cutneas em ratos (LOPES et al., 2005).
Assim, em se tratando dos diferentes agentes agressores da mucosa gstrica, o
etanol merece destaque como o mais prevalente dentre os fatores incidentes na
populao masculina, sendo que o seu efeito sobre a mucosa gstrica bem relatado na
literatura e seus mecanismos esto relacionados ao desenvolvimento de um processo
inflamatrio aguda, o que aumenta a permeabilidade capilar e o extravasamento de
lquidos, interferindo na funo de barreira da mucosa gstrica (SANTOS; RAO, 2001).
O tratamento oral com etanol comumente utilizado como agente ulcerognico,
o qual provoca depleo do muco gstrico, hiperemia, edema, necrose, hemorragia
submucosa e distrbios circulatrios (SULEYMAN et al., 2001; KINOSHITA;
TSUNEHISA; TAMAKI, 1995; OATES; HAKKINEN, 1988). Esses mecanismos tm
relao com o efeito do etanol sobre a reduo da motilidade gstrica e diminuio do
fluxo sanguneo. Essas aes, por sua vez, resultam em um incremento de Na+ e K+ e
da secreo de pepsina. No obstante, o etanol tambm provoca leso direta clula
103
gstrica, liberao de radicais livres e diminuio da substncia P, envolvida na
proteo da mucosa gstrica (SZABO, 1987; MATSUDA et al., 2003).
Tambm a indometacina, potente droga antiinflamatria no-esteroidal
empregada como agente ulcerognico em leses gstricas produzidas em modelos
animais pela sua capacidade de causar leses gstricas pela supresso da sntese de
prostaglandinas (WALLACE, 2001). Evidncias confirmam que essa droga capaz de
inibir a contrao tissular e provocar um decrscimo na produo de colgeno,
mecanismos que impedem a regenerao celular e inibem a proliferao tecidual.
Contrariamente, as prostaglandinas endgenas contribuem para a manuteno da
integridade e defesa da mucosa gstrica, pois estimulam a secreo de bicarbonato e
muco e regulam a reparao tissular (HAYLLAR; BJARNASON, 1995; OKABE;
AMAGASE, 2005). Portanto, esses mecanismos foram empregados na ulcerognese em
modelos animais, para os quais o EHSR mostrou importante efeito na preveno da
lcera gstrica.
Em relao ao estudo dos mecanismos atravs dos quais o EHSR possivelmente
exerceria sua ao gastroprotetora, demonstrou-se que o efeito do extrato dependente
da presena de xido ntrico e em menor intensidade, da presena de prostaglandinas
endgenas, tendo em vista que a ao protetora gstrica do mesmo foi parcialmente
bloqueada atravs da administrao de substncias antagonistas desses agentes
protetores da mucosa gstrica. Isso nos leva a afirmar que compostos qumicos
presentes no extrato atuam na gastroproteo por meio das vias que envolvem o efeito
citoprotetor gstrico do xido ntrico e das prostaglandinas. Assim, o EHSR poderia
estar favorecendo uma maior disponibilidade de NO por aumento da NOc. Em adio, o
EHSR poderia tambm aumentar a liberao de prostaglandinas e em conseqncia, as
funes protetoras da mucosa gstrica produzidas por essas substncias.
E ainda, possvel correlacionar estudos que demonstram a associao entre
espcies vegetais que apresentam taninos e flavonides em suas composies qumicas
e o efeito gastroprotetor dessas (MARTINS; LIMA; RAO, 2002; ZUANAZZI;
MONTANHA, 2004; RODRIGUES et al., 2008), o que provavelmente tambm, estaria
ocorrendo com a espcie Stryphnodendron rotundifolium Mart..
Nesse contexto, tem-se que o xido ntrico NO est envolvido em uma
diversidade de processos fisiolgicos, incluindo o relaxamento muscular liso,
vasodilatao, controle da presso arterial e inflamao. So reconhecidas trs
isoformas de NOS que utilizam a L-arginina como substrato. O envolvimento do NO na
104
manuteno da integridade da mucosa gstrica bem conhecido e aceito, como um
importante regulador da secreo cida gstrica, de muco e na circulao sangunea
gstrica e ainda, participa na modulao da integridade da mucosa gstrica pela
interao com neuropeptdeos sensoriais e com as prostaglandinas endgenas. Nesse
sentido, os estudos esclarecem que o NO capaz de reduzir efetivamente as leses
sobre a mucosa gstrica decorrentes da exposio a agentes qumicos, efeito observado
em baixas concentraes de NO, entretanto, altas concentraes poderiam favorecer a
formao de radicais de nitrognio com seus efeitos txicos (SHAH et al., 2004;
TEPPERMAN; WHITTLE, 1992; KHALIF et al., 2002; KAWANO; TSUJI, 2000;
CHANDRANATH; BASTAKI; SINGH, 2002).
A eNOS (endotelial) a isoforma responsvel pela regulao da vasodilatao
do trato gastrintestinal. Encontra-se expressa em abundncia nas clulas endoteliais
desempenhando relevantes papis fisiolgicos, a exemplo da funo de barreira
protetora da mucosa gstrica. No entanto, importante salientar que excesso de NO
associado ao estado inflamatrio, desencadeia um aumento na permeabilidade epitelial e
diminuio da funo de barreira (SHAH et al., 2004).
Sabe-se que a integridade da mucosa gstrica depende, substancialmente, da
atividade da prostaglandina E2 (PGE2) e da prostraciclina (PGI). Assim duas
isoenzimas da ciclooxigenase COX convertem o cido araquidnico em
prostaglandina. O cido araquidnico o mais importante dentre os precursores dos
eicosanides. So reconhecidas duas isoformas de COX, sendo a prostaglandina
sintetase-1 (COX-1), uma enzima constitutiva, enquanto que a prostaglandina sintetase2 (COX-2), uma enzima induzvel atravs de estmulos. A COX-1 apresenta funo de
manuteno, a exemplo da citoproteo gstrica, enquanto que a COX-2 produto da
resposta imune e inflamatria. A indometacina, uma droga antiinflamatria noesteroidal, altamente seletiva para a COX-1, alterando, portanto, suas funes
fisiolgicas. Desse modo, o ensaio realizado nesta investigao para atividade
antiulcerognica do EHSR contra leses gstricas induzidas por Indometacina revelou
importante proteo.
Vrias pesquisas tm evidenciado a participao da COX-2 na proteo da
mucosa gstrica e reparo da lcera gstrica. Considerando a necessidade dos processos
de proliferao celular e da angiognese para a cicatrizao das leses ulcerosas,
compreende-se que os agentes seletivos e no seletivos que exervem efeiros inibidores
da COX provocam alterao na fisiologia desse reparo. Nesse sentido, a supresso da
105
sntese de prostaglandina, por DAINES, por exemplo, aumenta a vulnerabilidade da
mucosa gstrica a leses, especialmente, pelo decrscimo na sntese de xido ntrico
(TARNAWSKI; HOLLANDER, 1987; WALLACE, 2005; WALLACE; GRANGER,
1996; ALLEN et al., 1993).
Pesquisas evidenciam que as prostaglandinas exercem o efeito gastroprotetor por
inibio da secreo cida, estimulao da secreo de muco e bicarbonato, inibio da
ativao celular, decrscimo da aderncia leucocitria parede endotelial, inibio da
apoptose, aumento da irrigao sangunea com preveno da isquemia (TARNAWSKI;
HOLLANDER, 1987; WALLACE; GRANGER, 1996). Assim, a ao citoprotetora das
prostaglandinas foi definida por Robert na dcada de 1970 para uma variedade de leses
gstricas provocadas por diversos agentes (aspirina, indometacina) e agentes
necrosantes (etanol absoluto, cido clordrico, hidrxido de sdio). Logo, a formao
contnua de prostaglandinas um processo fisiolgico necessrio manuteno da
integridade gstrica (ROBERT et al, 1997).
Evidncias cientficas esclarecem que em tecidos ulcerados a produo de PGE2
significativamente mais elevada que em tecidos normais, bem como o papel crucial da
COX-2 na cicatrizao de lceras gstricas, tendo em vista que bioensaios a partir da
inibio seletiva da COX-2 provocaram desenvolvimento de leses gstricas,
demonstrando o papel fundamental da COX-2 na regenerao da lcera gstrica
(SHIGETA; TAKAHASHI; OKABE, 1998).
Nessa perspectiva, estudos clnicos tm evidenciado que DAINES inibem a
cicatrizao gstrica, pois exercem mecanismos no seletivos, suprimindo a COX-1 que
tem papel importante na fisiologia. Os experimentos com prostaglandina demonstraram
angiognese em leses provocadas por etanol, enquanto que a indometacina aboliu a
angiognese gstrica. Os mecanismos pelos quais a PGE2 promovem a cicatrizao de
lceras gstricas envolvem a formao de tecido de granulao, a contrao do tecido
ulcerado e a reepitelizao (TARNAWSKI; STACHURA; DOUGLAS, 1991). Logo,
drogas que possuam menor efeito adverso sobre a fisiologia gstrica tm sido uma
preocupao para o tratamento em substituio aos DAINES (HAGIWAMA et al.,
2005).
Reconhece-se que o NO capaz de atuar adicionalmente (modulao sinrgica)
ao efeito gastroprotetor das prostaglandinas, estimulando a vasodilatao, a
permeabilidade vascular e a produo dessas substncias. Em modelos animais de
lcera gstrica, a inibio da xido ntrico sintetase NOS com L-NAME tem
106
provocado o agravamento das leses (KHATTAB; GAD; ABDALLAH, 2001),
enquanto que a administrao do seu precursor (a L-Arginina), tem demonstrado efeito
gastroprotetor contra leses gstricas, por aumento da cicatrizao das lceras e
estimulao da angiognese (KONTUREK et al., 1993; KHATTAB; GAD;
ABDALLAH, 2001).
Nesse sentido, tambm o misoprostol, um derivado da PGE1, uma
prostaglandina citoprotetora, tem sido empregada na preveno da lcera pptica
(FOEGH; RAMWELL, 2005). Estudos apontam que esse frmaco exerce efeito
gastroprotetor atravs da inibio da secreo cida gstrica, aumento da circulao
sangunea e da produo de bicarbonato, sendo til na restaurao da barreira protetora
da mucosa gstrica em pacientes que fazem uso crnico de cido acetilsaliclico ou
agentes antiinflamatrios no-esteroides (SANTOS; SILVA, 2006; RANG et al., 2004).
Na presente investigao, portanto, foi possvel demonstrar a relao entre o
efeito protetor gstrico das prostaglandinas e do xido ntrico, tendo em vista que a ao
gastroprotetora do EHSR foi reduzida quando da administrao da indometacina e
significativamente reduzida na presena de L-NAME, ambos ensaios que bloquearam a
produo dessas substncias com ao gastroprotetora.
O EHSR foi capaz de manter seu efeito gastroprotetor na presena de
glibenclamida e da ioimbina, um agente bloqueador dos canais de K+ dependentes de
ATP e um bloqueador dos receptores noradrenrgicos 2, respectivamente, o que
evidencia que o mesmo no atuaria, em seu efeito protetor sobre a mucosa gstrica,
atravs dessas vias.
Desse modo, a participao dos canais K+ ATP-dependentes se d atravs do
relaxamento da musculatura lisa, causando vasodilatao. Esses canais tambm exercem
efeito sobre a secreo de cido e o fluxo sanguneo do estmago. A literatura reporta
que a Glibenclamida provavelmente exerceria efeito agressor mucosa gstrica atravs
da diminuio do fluxo sanguneo (BEECH et al., 1993; TOROUDI et al., 1999).
E ainda, a modulao da atividade dos receptores 2 perifricos, localizados nos
gnglios parassimpticos intramurais, diminui a descarga vagal da Acetilcolina, o que
conseqentemente, provoca reduo da secreo e motilidade gstrica e aumenta o fluxo
sanguneo. Esses receptores atuam, portanto, na defesa gstrica contra agentes
agressores tais como o etanol (YELKEN et al., 1999). A ioimbina, por sua vez, consiste
em um alcalide indlico que atua bloqueando os receptores 2 pr-sinpticos
(HOFFMAN, 2007),
107
Em relao citoproteo gstrica, reconhece-se o efeito da capsaicina, a qual
consiste em uma substncia obtida a partir da pimenta vermelha Pipper, que em
pequenas doses atua na proteo gstrica a partir dos receptores aferentes sensveis
capsaicina, atuando sobre a microcirculao atravs do xido ntrico (SZOLCSANYI;
BARTHO, 2001). E ainda, essa substncia atuaria na defesa da mucosa gstrica atravs
das prostaglandinas, do aumento da secreo de muco e bicarbonato, da dilatao das
arterolas da submucosa e aumento da vasodilatao. Tambm, a capsaicina promove o
aumento na produo de xido ntrico, via cNO (KATO et al., 2003; SCHUBERT,
2004).
A capsaicina est envolvida na proteo da mucosa gstrica contra agentes
ulcerognicos, atividade esta que envolve neuropeptdeos como a calcitonina. Nesse
contexto, estudos tm evidenciado que a administrao oral de Capsaicina exerce
proteo gstrica contra leses induzidas por etanol (MATSUDA; LI; YOSHIKAWA,
1999; PARK et al., 2000).
Desse modo, o EHSR em associao capsaicina, ambos em baixas doses, foi
capaz de potencializar o efeito gastroprotetor dessa substncia, fato que nos leva a supor
que o extrato pode atuar adicionalmente capsaicina em sua atividade citoprotetora
sobre a mucosa gstrica.
Esse aspecto pode tambm estar relacionado interao dos componentes
qumicos do EHSR com as prostaglandinas endgenas e o xido ntrico, tendo em vista
vez que o bloqueio da sntese desses compostos, pelo emprego de antagonistas
especficos, foi capaz de reduzir de modo significativo, a ao gastroprotetora do extrato
na presena de L-NAME, e diminuir de modo mais discreto o efeito gastroprotetor do
EHSR quando da administrao de Indometacina, evidenciando que o mesmo mantm
uma relao de dependncia desses constituintes para seu efeito protetor gstrico, e
ainda, conforme j mencionado, a capsaicina capaz de aumentar a produo de NO e
ainda, tem sua ao relacionada presena de prostaglandinas, o que nos permite
sugerir que a potencializao gastroprotetora observada do extrato quando da associao
a essa substncia pode ter correlao com a via do NO e das prostaglandinas.
108
nervoso autnomo, plexo mioentrico e neurotransmissores. A Acetilcolina se
caracteriza como um dos neurotransmissores cujo papel se encontra mais amplamente
elucidado, a qual exerce estimulao gastrintestinal. um neutransmissor endgeno das
sinapses e junes neuroefetoras colinrgicas do sistema nervoso central e perifrico,
cujas aes so mediadas por receptores nicotnicos e muscarnicos. Desse modo, os
antagonistas muscarnicos exercem efeitos inibitrios prolongados na atividade motora
do estmago, duodeno, do jejuno, do leo e do colo intestinal, caracterizados pela
reduo do tnus e na amplitude e na frequncia das contraes peristlticas. Assim, a
atopina bloqueia a ao muscarnica da Acetilcolina, pela ao competitiva dos
receptores muscarnicos nas clulas efetoras e nas clulas ganglionares autnomas
(GUYTON; HALL, 2006).
A via colinrgica responsvel pela inervao da camada muscular lisa do trato
gastrintestinal, atravs dos receptores muscarnicos M1 e M3, exerce efeito imperioso
sobre a motilidade intestinal, sendo que a alterao dessa funo est correlacionada ao
aparecimento de distrbios gastroesofgicos. Reconhece-se que a Acetilcolina estimula
diretamente a secreo de cido atravs da ativao dos receptores M3 nas clulas
parietais (HANSEN, 2003).
Assim, a presente investigao demonstrou que o EHSR em dose maior
(100mg/Kg; v.o.) foi capaz de reduzir a motilidade intestinal. Entretando, esse efeito
no foi observado pela adminsitrao de EHSR em baixa dose (5mg/Kg; v.o.). O EHSR
combinado atropina em baixa dose tambm no alterou a motilidade intestinal de
forma significativa, o que nos permite inferir que o extrato no exerce efeito sobre os
receptores muscarnicos M1 e M3, pois no foi capaz de atuar na reduo da motilidade
intestinal em associao com a atropina, antagonista muscarnico.
As evidncias da pesquisa tambm nos levam a crer que provavelmente o efeito
do EHSR, em dose mais elevada, sobre a reduo da motilidade intestinal, tem relao
com o contedo mais acentuado de constituintes qumicos presentes no extrato, no
intestino delgado dos camundongos quando do emprego de maior dose deste.
Nesse contexto, estudos sobre a avaliao do trnsito intestinal em camundongos
demonstraram significativa reduo da motilidade intestinal dos animais aps
administrao dos extratos metanlico e hidrometanlico de Byrsonima cinera, em
doses de 1000mg/Kg, espcie vegetal que apresenta flavonides, aos quais foram
atribudas propriedades anti-diarrica em ratos e redutora da motilidade do trnsito
intestinal de camundongos (GALVEZ et al., 1993; GALVEZ et al., 1996; RAO et al.,
109
1997). possvel, portanto, que a ao do EHSR em dose mais elevada, sobre a
dimunio da motilidade intestinal, mantenha relao com a presena de flavonides em
sua composio qumica.
O estudo das propriedades bioativas atribudas ao EHSR permite afirmar que o
mesmo traz perspectivas reais de utilizao da espcie Stryphnodendron rotundifolium
Mart. como produto natural para descoberta de novas drogas com potencial biolgico,
sobretudo, para as propriedades avaliadas em modelos in vivo (gastroproteo) e in vitro
(importante atividade moduladora de antibiticos aminoglicosdeos), ao passo em que
se espera tambm que a pesquisa possa contribuir para o interesse de pesquisadores da
rea da bioprospeco farmacolgica.
110
6. CONCLUSES
(antilcera
antimicrobiana),
ainda,
desenvolver
levantamento
111
Portanto, a investigao sobre as propriedades bioativas (gastroproteo e efeito
antimicrobiano) do EHSR permite evidenciar que a espcie Stryphnodendron
rotundifolium Mart. representa uma promissora fonte natural para utilizao na
teraputica farmacolgica, sobretudo, considerando-se seu potencial antiulcerognico e
modulador da atividade antibitica para frmacos aminoglicosdeos, sendo importante
nessa perspectiva, investimentos em outros biensaios com a espcie, utilizando-se como
referncia as informaes etnofarmacolgicas e os ensaios pr-clnicos desse estudo.
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133
ANEXOS
134
TABELA 13. Efeito do EHSR no modelo de leses gstricas induzidas por etanol
absoluto em camundongos.
GRUPOS
DOSE mg/kg
REA GSTRICA
PERCENTUAL DE
(via)
ULCERADA (%)
REDUO (%)
20,522,29
30 (v.o.)
0,800,50***
96,10
10 (v.o.)
0,410,16***
98,00
25 (v.o.)
0,200,11***
99,02
50 (v.o.)
0,430,15***
97,90
100 (v.o.)
0,120,62***
99,41
250 (v.o.)
3,320,82***
83,82
500 (v.o.)
0,230,12***
98,87
Controle Lesionado
(veculo soluo salina
0,9%)
Controle positivo
(Omeprazol)
EHSR
135
TABELA 14. Anlise de Varincia (ANOVA) - Modelo de leses gstricas induzidas
por Etanol absoluto (via oral).
Table Analyzed
Data 1
< 0.0001
***
Yes
8
57,21
0,9133
71,41
< 0.0001
***
Yes
ANOVA Table
Treatment (between columns)
Residual (within columns)
Total
SS
2044
194,0
2238
df
7
38
45
q
22,02
3,375
---
MS
292,1
5,105
Significant? P <
0.05? Summary
Yes
***
No
ns
No
ns
--------21,99
-----
No
No
No
No
Yes
No
No
ns
ns
ns
ns
***
ns
ns
------21,79
-----
No
No
No
Yes
No
No
ns
ns
ns
***
ns
ns
-----
No
No
ns
ns
136
EHSR (50mg/kg) vs CL
EHSR (50mg/kg) vs EHSR (250mg/kg)
EHSR (50mg/kg) vs EHSR (100mg/kg)
EHSR (50mg/kg) vs OMEPRAZOL
30mg/kg
OMEPRAZOL 30mg/kg vs CL
OMEPRAZOL 30mg/kg vs EHSR
(250mg/kg)
OMEPRAZOL 30mg/kg vs EHSR
(100mg/kg)
EHSR (100mg/kg) vs CL
EHSR (100mg/kg) vs EHSR (250mg/kg)
EHSR (250mg/kg) vs CL
-20,08
-2,883
-0,6897
21,77
-----
Yes
No
No
***
ns
ns
-0,3617
-19,72
--20,38
No
Yes
ns
***
-2,522
---
No
ns
-0,3280
-19,39
-2,194
-17,20
--20,04
--18,64
No
Yes
No
Yes
ns
***
ns
***
137
TABELA 15. Efeito do EHSR (via intraperitoneal) no modelo de leses gstricas
induzidas por etanol absoluto em camundongos.
DOSE
GRUPOS
REA GSTRICA
PERCENTUAL DE
ULCERADA (%)
REDUO (%)
26,603,43
26,603,43
5(i.p.)
7,131,63***
73,19
20 (i.p.)
9,301,35***
65,04
5(v.o.)
4,311,82***
83,71
25 (v.o.)
0,200,11***
99,24
mg/kg
(via)
Controle
(veculo)
EHSR
Lesionado
138
TABELA 16. Anlise de Varincia (ANOVA) - Modelo de leses gstricas induzidas
por Etanol absoluto (via oral).
Table Analyzed
Data 1
< 0.0001
***
Yes
5
16,96
0,6863
40,03
< 0.0001
***
Yes
ANOVA Table
Treatment (between columns)
Residual (within columns)
Total
SS
3929
1796
5725
df
4
31
35
MS
982,3
57,93
139
TABELA 17. Efeito do EHSR no modelo de leses gstricas induzidas por etanol
acidificado em camundongos.
GRUPOS
DOSE mg/kg
(via)
REA
GSTRICA
ULCERADA (%)
PERCENTUAL DE
REDUO (%)
Controle Lesionado
(veculo soluo
23,193,09
30 (v.o.)
3,580,56***
84,57
10 (v.o.)
6,351,42***
72,62
25 (v.o.)
5,451,50***
76,50
50 (v.o.)
4,341,29***
81,29
100 (v.o.)
1,220,40***
94,74
250 (v.o.)
0,990,30***
95,73
500 (v.o.)
0,360,16***
98,44
salina 0,9%)
Controle positivo
(Omeprazol)
EHSR
140
TABELA 18. Anlise de Varincia (ANOVA) - Modelo de leses gstricas induzidas
por Etanol acidificado (via oral).
Table Analyzed
Data 1
< 0.0001
***
Yes
8
18,70
0,7705
62,21
< 0.0001
***
Yes
ANOVA Table
Treatment (between columns)
Residual (within columns)
Total
SS
3345
996,4
4341
df
7
39
46
MS
477,8
25,55
141
OMEPRAZOL (30mg/kg) vs EHSR (50mg/kg)
EHSR (50mg/kg) vs CL
EHSR (50mg/kg) vs EHSR (10mg/kg)
EHSR (50mg/kg) vs EHSR (25mg/kg)
EHSR (25mg/kg) vs CL
EHSR (25mg/kg) vs EHSR (10mg/kg)
EHSR (10mg/kg) vs CL
-0,7567
---18,85 9,630
-2,010
---1,116
---17,74 9,060
-0,8940
---16,84 8,603
No
Yes
No
No
Yes
No
Yes
ns
***
ns
ns
***
ns
***
142
TABELA 19. Efeito do EHSR no modelo de leses gstricas induzidas por DAINE
(Indometacina) em camundongos.
DOSE
GRUPOS
REA GSTRICA
PERCENTUAL DE
ULCERADA (%)
REDUO (%)
12,613,27
30 (v.o.)
0,400,24***
96,82
100 (v.o.)
0,590,28***
95,32
250 (v.o.)
0,990,39***
92,14
500 (v.o.)
0,670,31***
94,68
mg/kg
(via)
Controle Lesionado
(veculo soluo
salina 0,9%)
Controle positivo
(Omeprazol)
EHSR
143
TABELA 20. Anlise de Varincia (ANOVA) Modelo de leses gstricas induzidas
por Indometacina (via oral).
Table Analyzed
Data 1
< 0.0001
***
Yes
5
16,45
0,7247
47,07
< 0.0001
***
Yes
ANOVA Table
Treatment (between columns)
Residual (within columns)
Total
SS
596,1
226,5
822,6
df
4
25
29
MS
149,0
9,060
144
TABELA 21. Papel do xido ntrico (NO) no efeito gastroprotetor do EHSR em
modelos de leses gstricas induzidas por etanol absoluto em camundongos.
GRUPOS
DOSE mg/kg
REA GSTRICA
PERCENTUAL DE
(via)
ULCERADA (%)
REDUO (%)
20,522,29
10 (i.p.)
28,733,83**
600 (v.o.)
1,470,38***
92,83
13,791,28*
32,79
1,730,63***
91,56
Controle Lesionado
(veculo soluo
salina 0,9%)
Controle Lesionado +
L-NAME
Controle Lesionado +
L-Arginina
EHSR + L-NAME
EHSR
100 (v.o.) +
10 (i.p.)
100 (v.o.)
145
TABELA 22. Anlise de Varincia (ANOVA) Envolvimento do xido ntrico no
efeito gastroprotetor do EHSR (via oral).
Table Analyzed
Data 1
< 0.0001
***
Yes
5
34,18
0,8402
26,49
< 0.0001
***
Yes
ANOVA Table
Treatment (between columns)
Residual (within columns)
Total
SS
3512
667,9
4180
df
4
26
30
MS
878,0
25,69
Mean
Diff.
-27,25
-19,04
13,67
9,550
Yes
Yes
***
***
-12,31
6,175
Yes
***
-0,2976 0,1493
-26,95 13,03
-18,74 9,059
No
Yes
Yes
ns
***
***
Significant? P <
0.05? Summary
-12,02
5,807
Yes
***
-14,94
7,220
Yes
***
-6,728
-8,210
3,252
3,968
Yes
Yes
*
**
146
TABELA 23. Papel das prostaglandinas no efeito gastroprotetor do EHSR em modelos
de leses gstricas induzidas por etanol absoluto em camundongos.
GRUPOS
PERCENTUAL
DOSE mg/kg
REA GSTRICA
(via)
ULCERADA (%)
17,282,70
10 (s.c.)
13,091,92
0,016 ,(v.o.)
0,570,25***
96,70
5,071.07***
70,65
100 (v.o.)
0,590,28***
96,58
DE REDUO
(%)
Controle Lesionado
(veculo soluo salina
0,9%)
Controle Lesionado +
Indometacina
Controle Lesionado +
Misoprostol
EHSR + Indometacina
EHSR
Os animais foram
147
TABELA 24. Anlise de Varincia (ANOVA) Envolvimento das Prostaglandinas no
efeito gastroprotetor do EHSR (via oral).
Table Analyzed
Data 1
< 0.0001
***
Yes
5
18,23
0,7017
37,05
< 0.0001
***
Yes
ANOVA Table
Treatment (between columns)
Residual (within columns)
Total
SS
1688
717,6
2406
df
4
31
35
MS
422,0
23,15
Mean
Significant? P
Diff.
q
< 0.05? Summary
-16,71 9,491
Yes
***
-12,52 7,300
Yes
***
-4,505 2,380
No
ns
-0,02167
---16,69 9,084
No
Yes
ns
***
-12,49 6,968
Yes
***
---
No
ns
-12,21 6,644
Yes
***
-8,011 4,468
-4,196 2,538
Yes
No
**
ns
-4,483
148
TABELA 25. Papel dos receptores noradrenrgicos alfa2 no efeito gastroprotetor do
EHSR em modelos de leses gstricas induzidas por etanol absoluto em camundongos.
GRUPOS
REA
PERCENTUAL
GSTRICA
DE REDUO
ULCERADA (%)
(%)
20,522,29
2 (i.p.)
26,523,75
3,421,19***
88,72
1,120,62***
96,30
DOSE mg/kg
(via)
Controle Lesionado
(veculo soluo
salina 0,9%)
Controle Lesionado +
ioimbina
EHSR + ioimbina
100 (v.o.) + 2
EHSR
(i.p.)
100 (v.o.)
149
TABELA 26. Anlise de Varincia (ANOVA) Envolvimento dos Receptores
noradrenrgicos alfa2 no efeito gastroprotetor do EHSR (via oral).
Table Analyzed
One-way analysis of variance
P value
P value summary
Are means signif. different? (P <
0.05)
Number of groups
F
R squared
Bartlett's test for equal variances
Bartlett's statistic (corrected)
P value
P value summary
Do the variances differ signif. (P <
0.05)
Data 1
< 0.0001
***
Yes
4
26,92
0,8096
12,60
0,0056
**
Yes
ANOVA Table
Treatment (between columns)
Residual (within columns)
Total
SS
2686
631,9
3318
df
3
19
22
MS
895,4
33,26
Newman-Keuls Multiple
Comparison Test
EHSR (100mg/kg) vs IOIMBINA
(2mg/kg)
EHSR (100mg/kg) vs CL
EHSR (100mg/kg) vs IOIMBINA
(2mg/kg)+EHSR(100mg/kg)
IOIMBINA
(2mg/kg)+EHSR(100mg/kg) vs
IOIMBINA (2mg/kg)
IOIMBINA
(2mg/kg)+EHSR(100mg/kg) vs CL
CL vs IOIMBINA (2mg/kg)
Mean
Diff.
-25,39
-19,39
10,28
7,852
Yes
Yes
***
***
-2,299
0,9309
No
ns
-23,09
9,808
Yes
***
-17,09
-6,002
7,259
2,549
Yes
No
***
ns
Significant? P <
0.05? Summary
150
TABELA 27. Papel dos Canais de K+ dependentes de ATP no efeito gastroprotetor do
EHSR em modelos de leses gstricas induzidas por etanol absoluto em camundongos.
GRUPOS
REA
PERCENTUAL
GSTRICA
DE REDUO
ULCERADA (%)
(%)
17,172,44
5 (i.p.)
13,302,25
0,900,25***
93,23
1,770,63***
86,69
DOSE mg/kg
(via)
Controle Lesionado
(veculo soluo salina
0,9%)
Controle Lesionado +
glibenclamida
EHSR + glibenclamida
100 (v.o.) + 5
EHSR
(i.p.)
100 (v.o.)
Os valores esto expressos como mdia erro padro da mdia (E.P.M.) da ercentagem
de rea gstrica ulcerada. Administrou-se tratamento com o EHSR ou veculo
(0,1ml/10g para o grupo controle lesionado) por via oral, 1 hora antes, da glibenclamida
por via intraperitoneal, 30 minutos antes da administrao do etanol absoluto (0,2
mL/animal). Um grupo foi tratado com o EHSR, 30 minutos antes da administrao do
etanol absoluto. Os animais foram sacrificados 30 minutos aps a administrao do
etanol. Foram utilizados 7 animais por grupo. ***p<0,001 vs controle (ANOVA, Teste
de Student Newman-Keuls).
151
TABELA 28. Anlise de Varincia (ANOVA) Envolvimento dos Canais de K+
dependentes de ATP no efeito gastroprotetor do EHSR (via oral).
Table Analyzed
Data 1
< 0.0001
***
Yes
4
19,01
0,7038
25,55
< 0.0001
***
Yes
ANOVA Table
Treatment (between columns)
Residual (within columns)
Total
SS
1334
561,1
1895
df
3
24
27
Mean Diff.
MS
444,5
23,38
Significant? P
< 0.05? Summary
-16,27 8,552
Yes
***
-12,39 7,193
Yes
***
-0,8690 0,4569
-15,40 7,800
No
Yes
ns
***
-11,52 6,395
-3,874 2,150
Yes
No
***
ns
152
TABELA 29. Envolvimento do EHSR em associao Capsaicina em modelo de
leses gstricas induzidas por etanol absoluto em camundongos.
GRUPOS
DOSE mg/kg
REA GSTRICA
PERCENTUAL DE
(via)
ULCERADA (%)
REDUO (%)
23,803,80
4 (v.o.)
1,600,49***
93,27
0,2(v.o.)
6,940,96***
73,78
2,820,87***
89,34
4,311,82***
83,71
Controle Lesionado
(veculo soluo
salina 0,9%)
Controle Lesionado
+ Capsaicina
Controle Lesionado
+ Capsaicina
EHSR + Capsaicina
EHSR
5 (v.o.) + 0,2
(v.o).
5 (v.o.)
153
TABELA 30. Anlise de Varincia (ANOVA) Associao do EHSR Capsaicina
(via oral).
Table Analyzed
One-way analysis of variance
P value
P value summary
Are means signif. different? (P < 0.05)
Number of groups
F
R squared
Bartlett's test for equal variances
Bartlett's statistic (corrected)
P value
P value summary
Do the variances differ signif. (P < 0.05)
ANOVA Table
Treatment (between columns)
Residual (within columns)
Total
Data 1
< 0.0001
***
Yes
5
35,93
0,8569
16,38
0,0026
**
Yes
SS
2235
373,2
2609
df
4
24
28
MS
558,8
15,55
Mean
Significant? P <
Diff.
q
0.05? Summary
-24,86 15,23
Yes
***
-5,339 3,270
-2,706
---
No
No
ns
ns
-1,221
---
No
ns
-23,64 14,00
Yes
***
---
No
ns
-1,485
---22,16 13,12
No
Yes
ns
***
-2,633
---19,52 11,07
No
Yes
ns
***
-4,118
154
TABELA 31. Efeito do EHSR sobre a motilidade intestinal em camundongos.
GRUPOS
Controle (veculo)
DOSE mg/Kg
(via)
DISTNCIA
PERCORRIDA PELO
MARCADOR (%)
82,774,29
EHSR
100; (v.o.)
63,212,60***
EHSR
5; (v.o.)
89,841,77
Atropina
0,01g/Kg; (i.p.)
63,212,05***
Atropina
0,001g/Kg; (i.p.)
76,771,65
0,001g/Kg(i.p.) + 5mg/Kg(v.o.)
85,592,01
Atropina + EHSR
Os valores esto expressos como mdia erro padro da mdia (E.P.M.) da distncia
percorrida pelo marcador. Administrou-se tratamento com o EHSR (5 e 100mg/Kg;
v.o.), atropina (0,01 e 0,001g/Kg; i.p.) ou o veculo (soluo salina, 0,1ml/10g), 01 hora
antes da administrao oral de carvo ativado 10% (0,1 mL/10g, v.o.). Tambm
empregou-se a administrao de EHSR (5mg/Kg; v.o.) em associao atropina
(0,001g/Kg; i.p.) 01 antes do carvo. Os animais foram sacrificados 30 minutos aps a
administrao do marcador. Foram utilizados 6 animais por grupo. ***p<0,001 vs
controle (veculo) (ANOVA, Teste de Student Newman-Keuls).
155
TABELA 32. Anlise de Varincia (ANOVA) Efeito do EHSR sobre a Motilidade
Intestinal.
Table Analyzed
One-way analysis of variance
P value
P value summary
Are means signif. different? (P < 0.05)
Number of groups
F
R squared
Bartlett's test for equal variances
Bartlett's statistic (corrected)
P value
P value summary
Do the variances differ signif. (P < 0.05)
ANOVA Table
Treatment (between columns)
Residual (within columns)
Total
Data 1
< 0.0001
***
Yes
6
20,90
0,7600
6,354
0,2733
ns
No
SS
4267
1348
5615
df
5
33
38
MS
853,4
40,84
Mean
Significant? P <
Diff.
q
0.05? Summary
-26,63 10,91
Yes
***
-22,38 8,902
-19,56 7,496
Yes
Yes
***
***
-13,56 4,956
Yes
**
-1,217 0,4842
-25,42 10,87
No
Yes
ns
***
-21,16 8,762
-18,34 7,295
Yes
Yes
***
***
-12,34 4,665
Yes
**
-13,07 5,074
Yes
**
-8,820 3,333
-5,997
---7,076 2,899
-2,823
---
No
No
No
No
ns
ns
ns
ns
156
(5mg/kg)+ATROPINA(0,001g/kg)
EHSR (5mg/kg)+ATROPINA(0,001g/ vs
EHSR (5mg/kg)
-4,252
---
No
ns
157
MODELO DE FORMULRIO PARA PESQUISA ETNOFARMACOLGICA
SOBRE O BARBATIMO
1.
2.
DADOS DO INFORMANTE:
NOME: _________________________________________________________________
IDADE: _______ SEXO: F ( ) M ( ) NATURALIDADE: _________________________
TEMPO QUE RESIDE NA REA: __________ OCUPAO: ____________________
3.
158
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
DURAO DO TRATAMENTO versus INDICAO:
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
RESTRIES AO USO:
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
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