Minhocas construindo a microbiota do solo, uma revisão

Resumo: O efeito positivo das minhocas nos processos do solo e no crescimento das plantas
tem sido amplamente estudado. A capacidade das minhocas de decompor a matéria orgânica
foi atribuída às comunidades microbianas que habitam seu trato digestivo ou às estruturas que
elas constroem, as quais, por sua vez, contribuem para formar a drilosfera, um ponto de acesso
para a atividade microbiana. No entanto, ainda não está claro como as minhocas modificam a
estrutura das comunidades microbianas do solo e como essas mudanças afetam os processos
microbianos do solo. As minhocas reduzem a abundância e a atividade microbiana porque se
alimentam de microorganismos ou selecionam e estimulam grupos microbianos específicos?
Nossa hipótese é que “o efeito das minhocas na ciclagem de nutrientes e no crescimento das
plantas não é apenas um efeito direto, mas é principalmente mediado indiretamente, através de
modificações da comunidade microbiana.” O objetivo desta revisão é sintetizar a literatura
existente sobre a influência das minhocas sobre a estrutura e função das comunidades
microbianas do solo, bem como entender como as alterações induzidas por minhocas na
microbiota do solo afetariam os processos do solo, particularmente aqueles que ocorrem na
rizosfera e envolvidos no crescimento e na saúde das plantas. Relatórios recentes mostraram
que grupos bacterianos específicos aumentam consistentemente nos solos onde as minhocas
estão presentes, independentemente do grupo funcional das minhocas. A extensão desse
aumento parece depender do tipo de substrato em estudo. Nossa síntese também revela que as
minhocas endogênicas e anécicas induzem regularmente um aumento nos nutrientes do solo,
enquanto esse efeito positivo não é tão evidente na presença de minhocas epigênicas. O efeito
das minhocas na ciclagem de nutrientes foi investigado com genes funcionais microbianos,
embora os relatórios existentes se concentrem amplamente na ciclagem de nitrogênio. As
minhocas parecem melhorar a desnitrificação, provavelmente através do aumento de compostos
orgânicos devido à decomposição da matéria orgânica. Ao aumentar a disponibilidade de
nutrientes no solo, as minhocas promovem indiretamente o crescimento das plantas, o que
também foi atribuído à indução de moléculas de sinal. No entanto, nenhum experimento até o
momento foi capaz de provar uma relação causal direta entre moléculas de sinal específicas,
minhocas e promoção de crescimento de plantas. Finalmente, propomos uma estrutura para
interações minhoca-microbiota e recomendamos mais pesquisas.
INTRODUÇÃO
As minhocas são consideradas engenheiros do ecossistema que desempenham um
papel importante na modelagem da estrutura do solo e na ciclagem de nutrientes (Blouin et al.,
2013). As minhocas promovem a decomposição da serapilheira, a mineralização de nitrogênio
(N) e a infiltração de água, como resultado de seus hábitos de alimentação e escavação (Baker,
2007) e, portanto, afetam profundamente as propriedades do solo (Hättenschwiler e Gasser,
2005). Elas também desempenham um papel crucial na prestação de serviços do ecossistema
do solo (Lavelle et al., 2016). O volume do solo diretamente influenciado pelas minhocas,
conhecido como drilosfera (Bouché, 1977; Lavelle, 2002), é uma importante região funcional
do solo, produzida pela comunidade de minhocas e pelas estruturas que cria: intermediários,
tocas, túneis e moldes. As minhocas são, assim, construtoras de habitats para outros organismos,
o que as estabelece como engenheiros físicos ou alogênicos (Jones et al., 1994; Lavelle et al.,
1997, 2016). Além disso, essas atividades construtivas constituem um insumo de matéria
orgânica no solo e um caminho para a estabilização do carbono orgânico do solo (Corg) através
da formação de agregados organomineral (Deeb et al., 2017). Esse enriquecimento em matéria
orgânica resulta principalmente da escolha dos alimentos das minhocas (Curry e Schmidt,
2007), de sua digestão e excreção de muco intestinal ou cutâneo que pode ser cimentado
(Shipitalo e Le Bayon, 2004) ou usado como fonte de energia (Lavelle et al. 1995). Portanto,
além de moldar a estrutura do solo, as minhocas também têm um impacto importante na
dinâmica da matéria orgânica e nos microorganismos do solo em seus intestinos, moldes e
drilosfera (Andriuzzi et al., 2016) e também são identificados como bioquímicos (Lavelle et al.,
2016) ou engenheiros de ecossistemas autogênicos (Lawton e Jones, 1995).
As minhocas são divididas em três grupos funcionais principais ou categorias
ecológicas, que determinam como elas influenciam o compartimento do solo e suas
comunidades microbianas (Thakuria et al., 2010): (1) as minhocas epigênicas vivem na
superfície do solo e se alimentam da serapilheira; (2) as minhocas endogênicas vivem no solo
e produzem túneis horizontais, enquanto se alimentam de solo mineral e material parcialmente
decomposto, sendo então geofágicas; (3) as minhocas anécicas produzem tocas verticais
permanentes e se alimentam da serapilheira que arrastam para suas tocas para serem pré-
decompostas por microorganismos, enquanto depositam seus moldes na entrada da toca
(Bouché, 1977; Lavelle, 1981; Lee, 1985).
As minhocas são consideradas mediadores ecológicos chave que têm a capacidade
de afetar as funções do solo e atividades microbianas (Binet et al., 1998; Lavelle et al., 2016),
produzindo um muco rico em energia que ativa microorganismos através de um efeito primário
(Jenkinson, 1966) e moléculas de sinal que têm efeitos semelhantes a hormônios e influenciam
a expressão gênica de plantas (Puga-Freitas e Blouin, 2015). A interação mutualística existente
entre as minhocas e a microbiota do solo foi denominada "Paradoxo da Bela Adormecida"
(Lavelle et al., 1995; Brown et al., 2000), onde microrganismos do solo adormecidos,
aguardando condições ambientais adequadas, são ativados pelo beijo de a minhoca feita de
glicoproteínas facilmente assimiláveis presentes na drilosfera na forma de muco intestinal ou
cutâneo, como já mencionado. Isso aciona a aceleração dos processos microbianos por um curto
período de tempo ("momento quente") e em um espaço limitado do solo ("ponto quente"), na
microescala de um bioporo ou agregado (Kuzyakov e Blagodatskaya, 2015) que reverbera em
uma escala maior, nos níveis da drilosfera e do solo (Brown et al., 2000; Hoang et al., 2016;
Lipiec et al., 2016).
As minhocas têm um efeito direto e importante na microbiota do solo através de
sua nutrição. Esse efeito pode depender da preferência, seleção, taxa de ingestão, digestão e
assimilação dos alimentos, conforme mencionado por Curry e Schmidt (2007). As minhocas
podem digerir microorganismos (Brown, 1995; Chapuis-Lardy et al., 2010), diminuindo assim
a biomassa microbiana, especialmente a de fungos (Shan et al., 2013). Eles também podem
selecionar ou estimular os micróbios do solo (Khomyakov et al., 2007; Nechitaylo et al., 2010)
que os ajudam a digerir a matéria orgânica do solo, uma vez que o intestino da minhoca
geralmente não possui enzimas suficientes para fazê-lo (Lattaud et al., 1997, 1998; Fujii et al.,
2012). Esse processo pode enriquecer o solo em certos táxons bacterianos, por exemplo, em
bactérias capazes de decompor a matéria orgânica que as minhocas alimentam ou em bactérias
desnitrificantes capazes de sobreviver nas condições reduzidas de oxigênio do intestino das
minhocas (Drake e Horn, 2007; Hong et al. al., 2011).
A fisiologia, morfologia e comportamento das minhocas é essencial para entender
seu efeito nas funções do solo (Figura 1, seta 1). No entanto, existem evidências crescentes de
que o efeito das minhocas nas funções do solo pode ser mediado pelas comunidades
microbianas do solo (Figura 1, seta 2). Ainda não está claro como os diferentes grupos
ecológicos podem promover ou selecionar microorganismos do solo e existem muitos
resultados contraditórios sobre o efeito das minhocas nas comunidades microbianas do solo
(Byzov et al., 2015). No entanto, a drilosfera é geralmente reconhecida como um hotspot do
solo com um efeito positivo nas funções do ecossistema, como ciclagem de nutrientes e
crescimento das plantas (Brown et al., 1999; Scheu, 2003; Van Groenigen et al., 2014).
 Considerando que o envolvimento de microrganismos nessas funções é
fundamental, é necessário considerar as comunidades microbianas e como elas são
influenciadas pelas minhocas, a fim de entender e prever o efeito das minhocas nas funções do
ecossistema. E nossa hipótese que “o efeito das minhocas na ciclagem de nutrientes e no
crescimento das plantas não é apenas um efeito direto, mas é principalmente mediado
indiretamente, através de modificações na comunidade microbiana” (Figura 1). Assim, os
objetivos desta revisão são dois. O primeiro é determinar se alguns padrões podem ser extraídos
da literatura existente sobre o efeito dos diferentes grupos funcionais de minhocas (epigênica,
endogênica e anécica) na abundância, estrutura e diversidade de microrganismos do solo
(bactérias, arques e fungos) nos diferentes locais (tripas de minhocas, moldes, tocas, solo a
granel, rizosfera, outros). Os métodos analíticos utilizados também são considerados [Gram +/–
, impressão digital, ácidos graxos fosfolipídicos (PLFA), sequenciamento]. O segundo é
estabelecer o impacto das minhocas nos processos microbianos envolvidos na ciclagem de
nutrientes, na produção de moléculas de sinal e, como consequência, na promoção do
crescimento das plantas. A literatura selecionada foi escolhida principalmente a partir de
estudos que lidam com minhocas e interações microbianas (microorganismos, microbiota) e
ciclagem de nutrientes (nitrogênio, fósforo) entre 1980 e 2018; no entanto, para tópicos
específicos, usamos a Web of Science (WOS) com palavras-chave precisas (veja a legenda nas
Figuras 4-6).
Por fim, propomos uma estrutura para interações entre minhoca e microbiota do
solo e recomendamos a realização de mais pesquisas para elucidar os processos microbianos
que ocorrem na drilosfera.
O IMPACTO DAS MINHOCAS SOBRE A ABUNDÂNCIA E ATIVIDADE
DOS MICRORGANISMOS DO SOLO
O efeito das minhocas nas comunidades microbianas do solo é crítico, pois são um
dos grupos de fauna mais importantes nos solos, em termos de número e biomassa (Blouin et
al., 2013). Além disso, as minhocas podem ter uma taxa muito alta de ingestão de substrato ou
solo. As minhocas epigênicas podem ingerir de 3 a 50 mg (matéria seca) de esterco ou qualquer
outro tipo de lixo por grama de minhoca por dia e os vermes geofágicos de 200 a 6.700 mg
(matéria seca) de solo por grama de minhoca por dia (Curry e Schmidt, 2007). Nesta seção,
sintetizaremos as informações disponíveis sobre como as minhocas influenciam a abundância
ou a atividade dos microrganismos do solo, dependendo de seus grupos funcionais.
As epigênicas
As consequências da presença de minhocas epigênicas na abundância microbiana
do solo são variáveis (Figura 2). A literatura mostra que elas podem provocar uma diminuição
ou um aumento na biomassa microbiana. Menos frequentemente, os relatórios mostram que o
número de microrganismos permanece inalterado por sua ação. A maioria dos estudos
encontrados na literatura é realizada em condições artificiais de laboratório e utiliza as espécies
de minhocas epigênicas Eisenia andrei e E. fetida, cultivadas em diferentes matérias-primas
(esterco, subprodutos da agricultura e misturas de matéria orgânica e solo). Esses estudos
relatam que essas espécies induzem um aumento da biomassa microbiana no substrato
transformado, formado principalmente por moldes, embora a magnitude desse efeito varie em
diferentes escalas de tempo. A atividade e o número de microrganismos têm um pico no início
da digestão, que dura no máximo algumas horas no intestino (Brown et al., 2000) e um pouco
mais nos moldes frescos, sendo esses “pontos quentes” e “momentos quente”. Após alguns
meses (3–4), há uma diminuição da atividade microbiana e dos números nos moldes ou
vermicomposto e, em seguida, há uma estabilização de ambos (Yakushev et al., 2009) Koubová
et al. (2015) indicaram que a biomassa microbiana medida por PLFA era 2 vezes maior no
intestino de minhoca do que no substrato não ingerido e que a biomassa também era maior em
moldes do que no substrato circundante, embora esse aumento fosse menos importante do que
no intestino. Yakushev et al. (2009) mostraram um aumento na biomassa microbiana de 2,7
vezes nos modelos de E. fetida e evidenciaram que o crescimento microbiano em um período
de 9 h foi 124 vezes maior no vermicomposto do que no composto. Em uma mistura de esterco
de porco e solo, a biomassa microbiana foi 1,3 vezes maior na presença de minhocas (Aira et
al., 2007). Toyota e Kimura (2000) descobriram que a biomassa bacteriana, avaliada pela
contagem de unidades formadoras de colônias (UFC), aumentou de 3,2 × 104 UFC g-1 no esterco
de curral para 1,3 × 107 UFC g-1 no vermicomposto com E. fetida.
Embora outros estudos mostrem que as minhocas epigênicas não têm impacto na
abundância microbiana no solo, esse efeito parece depender do tipo de matéria-prima avaliada.
No composto foliar de amieiro, salgueiro e bétula com C / N = 19,2, a presença de E. fetida /
E. andrei induziu um grande aumento no número de microrganismos, enquanto o
vermicomposto produzido a partir de esterco bovino (C / N = 15,4) não apresentou diferenças
com seu respectivo composto de controle sem minhocas (C / N = 16,5) (Yakushev et al., 2009).
Sheehan et al. (2008) usando mesocomposto mostraram que, além da influência do suprimento
alimentar, o efeito das minhocas epigênicas na abundância de microrganismos também depende
da camada de solo em estudo e relatou um aumento maior da biomassa microbiana nas camadas
superiores (0 –7 cm) do que nos mais profundos (7–14 cm).
Por outro lado, vários estudos demonstraram que os vermes epigênicos podem
diminuir a biomassa microbiana em seus moldes ou no substrato em que vivem (Figura 2).
Medindo o PLFA total, Gómez-Brandón et al. (2012) e Aira et al. (2002, 2006) encontraram
menos biomassa microbiana em E. andrei vermicomposto de bagaço de uva e em E. fetida e
Eudrilus eugeniae vermicomposto de estrume de porco do que em substratos sem minhocas,
embora esse efeito parecesse depender da densidade de minhocas (Aira et al. 2002). No geral,
os achados da literatura mostram que nenhum efeito claro de minhoca epigênica pode ser
detectado na biomassa microbiana, nem na taxa de crescimento de populações microbianas.
Discrepâncias podem ser atribuídas às diferentes espécies ou substratos estudados, bem como
aos diferentes métodos analíticos implementados (Yakushev et al., 2009; Gómez-Brandón et
al., 2012; Koubová et al., 2015).
As endogênicas
Embora as minhocas endogênicas tenham sido menos estudadas, os resultados
mostram efeitos contrastantes sobre a abundância microbiana, em comparação com as
epigênicas (Figura 2). Para endogênicas, a maioria dos trabalhos que observam seu impacto no
microbioma é feita comparando solos com e sem minhocas. Há menos estudos sobre os "pontos
quentes" (intestinos e novos modelos). Em mesocompostos com solo de campos aráveis (3,8%
de matéria orgânica) e resíduos de batata na superfície, a Aporrectodea caliginosa endogênica
não afetou a biomassa microbiana do solo, obtida a partir do biovolume de números bacterianos
medidos por microscopia de varredura a laser confocal (Postma-Blaauw et al., 2006). Em
contraste, Chang et al. (2016) encontraram um aumento na biomassa bacteriana de um solo de
floresta misturado com lixo, medido através de PLFA, na presença de Octolasion lacteum.
Achados semelhantes foram relatados para um experimento em vaso por Braga et al. (2016),
que detectaram aumentos na abundância bacteriana do gene 16S rRNA em solos com a minhoca
tropical Pontoscolex corethrurus, em comparação com solos sem minhocas. Em outro estudo,
a atividade microbiana aumentou 6 vezes no intestino de P. corethrurus e 1,6 vezes em seus
moldes, em comparação com o vertisol circundante; mais UFC também foram observados nos
modelos por contagem de placas (Barois e Lavelle, 1986; Barois, 1987). Contrastantemente,
também foi demonstrado que a biomassa microbiana do solo diminui com o aumento da
biomassa endogênica de minhoca (Scheu et al., 2002). Chapuis-Lardy et al. (2010) verificaram
que a biomassa fúngica e bacteriana diminuiu significativamente (2 vezes) nos modelos de P.
corethrurus quando comparados ao solo original, embora a razão fúngico / bacteriana não tenha
sido modificada pela atividade de fundição de minhocas. O efeito das minhocas endogênicas
na biomassa microbiana do solo também pode depender da profundidade do solo: diminui com
a profundidade do solo (Sheehan et al., 2008).
As anécicas
Os vermes anécicos se alimentam da superfície e constroem túneis permanentes que
lhes permitem misturar os diferentes horizontes do solo. Eles formam intermediários na
superfície do solo, na entrada de suas tocas, que contêm peças visíveis de matéria orgânica e
moldes, que também são excretadas no perfil do solo.
O impacto das anécicas no solo pode atingir todo o perfil do solo e esse não é o caso
dos outros grupos funcionais. A maioria dos relatórios mostra que as minhocas anécicas têm
um impacto positivo ou neutro na abundância microbiana no solo (Figura 2), embora isso possa
ser enviesado pelo fato de a maioria dos estudos serem realizados em regiões temperadas,
usando Lumbricus terrestris como espécie modelo. Como mostra a Figura 2, muito poucos
relatórios estão disponíveis para anécicos em regiões tropicais.
Devliegher e Verstraete (1997) mostraram que o número de UFC na camada
superficial do solo (0–5 cm) era 60-320 vezes maior nos modelos de L. terrestris, alimentados
com alface, do que no solo circundante. Em uma camada mais profunda (5 a 22 cm), a
magnitude do aumento foi menor, mas ainda significativa, com 6 a 32 vezes mais UFC
bacteriana na drilosfera do que no solo. A influência da profundidade do solo foi ainda
corroborada por Sheehan et al. (2008), que observaram um impacto diferencial dos vermes
anécicos Lumbricus friendi e Aporrectodea longa na biomassa microbiana, dependendo do
horizonte do solo em estudo. Em um experimento de microcomposto usando solo e serapilheira
da cal (Tilia cordia), a L. terrestris anécica induziu biomassa microbiana no solo recuperado de
suas paredes de escavação, em comparação com o solo circundante (Tiunov et al., 2001). No
entanto, esses resultados parecem depender da fonte de serapilheira e do teor de Corg e N do
solo, pois o mesmo experimento repetido com o solo de serapilheira (que tem três vezes mais
Corg e N do que o solo de serapilheira) mostrou um aumento menor no tamanho microbiano
da toca. Stromberger et al. (2012) também evidenciaram uma abundância maior de
microrganismos medidos por PLFA nas paredes da cova de L. terrestris quando comparados
com o solo a granel (89,4 e 56,7 nmol g-1 de solo, respectivamente). Resultados semelhantes
medidos também com PLFA microbiano foram encontrados por Sampedro e Whalen (2007) no
intestino de L. terrestris e por Aira et al. (2009) em intermediários. No geral, a maior parte da
literatura aponta para um efeito positivo da biomassa microbiana em suas tocas, meios ou
moldes, embora alguns relatos tenham observado efeito neutro (Postma-Blaauw et al., 2006)
ou efeito negativo (Zhang et al. , 2000; Yu et al., 2008).
Embora a maioria dos estudos se concentre no efeito de uma espécie de minhoca
ou da mesma categoria ecológica na biomassa microbiana, é importante lembrar que todos os
três grupos funcionais coexistem em condições naturais. Investigar o impacto das minhocas nos
microrganismos do solo deve, portanto, integrar toda a comunidade das minhocas. Poucos
estudos levaram esse ponto em consideração, com exceção de Postma-Blaauw et al. (2006), que
mostraram que, embora L. terrestris (anécica) não tenha efeito sobre os microrganismos do
solo, a presença combinada de L. rubellus (epigênica) e L. terrestris induziu um aumento na
biomassa microbiana. Esses autores também observaram um aumento menor da biomassa
microbiana quando L. rubellus e A. caliginosa (endogênica) foram testados juntos, e uma
diminuição da biomassa microbiana quando todos os três grupos funcionais foram combinados
(Figura 3). A importância de investigar o efeito combinado de diferentes grupos funcionais de
minhocas foi confirmada por Scheu et al. (2002) que determinaram, em um experimento de
mesocomposto, que quando epigênicos (três espécies) e endogênicas (três espécies) foram
reunidos, a biomassa microbiana do solo foi maior do que a observada quando cada grupo de
minhocas foi estudado independentemente. Finalmente, deve-se considerar que a avaliação da
biomassa microbiana do solo como um todo pode ocultar a heterogeneidade espacial do efeito
das minhocas. Isso poderia aumentar a abundância microbiana apenas em pontos quentes e
diminuí-la no solo a granel, com o efeito resultante dependendo da taxa de ingestão do solo,
densidade de minhocas e presença dos grupos funcionais (Sheehan et al., 2008). Considerar a
abundância microbiana como um todo também pode impedir a detecção do fato de que alguns
taxa microbianos específicos podem ter sido promovidos, enquanto outros dificultaram.
Portanto, é importante observar como as minhocas modificam a estrutura da comunidade
microbiana.
IMPACTO DAS MINHOCAS NA COMUNIDADES MICROBIANAS E NA
ESTRUTURA DO SOLO
Alimentando-se do solo e influenciando fatores do solo, como porosidade, conteúdo
de água, N mineral (NO-3, NH+4) ou conteúdo de matéria orgânica, as minhocas modificam os
habitats do solo e suas comunidades microbianas residentes. Nesta seção, disponibilizaremos
informações sobre o impacto das minhocas na estrutura e diversidade das comunidades
microbianas do solo e determinaremos se as alterações resultantes são consistentes entre os
grupos funcionais das minhocas.
Minhocas modificam a diversidade de comunidades microbianas do solo
O efeito das minhocas na riqueza e diversidade das comunidades microbianas pode
ser neutro, negativo ou positivo, dependendo das espécies de minhocas e do “microhabitat”
considerado, isto é, se o estudo se concentra no intestino, no molde ou no ambiente
circundantedo solo. Os efeitos neutros das minhocas nas comunidades bacterianas do solo
foram relatados por de Menezes et al. (2018), que mostraram que a introdução do Aporrectodea
trapezoides endogênica não influenciou o número de OTUs bacterianas (Unidades
Taxonômicas Operacionais) nem o estimador de comunidade Chao1 de todo o solo. Por outro
lado, Hoeffner et al. Observaram efeitos positivos na riqueza e diversidade bacteriana. (2018)
nas tocas criadas por quatro espécies epi-anecicas do gênero Lumbricus, comparadas ao solo a
granel. Esses autores, no entanto, mostraram que a diversidade de fungos permaneceu inalterada
pelas minhocas. O impacto que as minhocas podem ter na diversidade microbiana do solo
também foi investigado através do estudo do processo de vermicompostagem. As minhocas
epigênicas Eudrilus sp. ou E. fetida aumentaram a diversidade bacteriana no substrato, pelo
menos durante os primeiros estágios de sua vermicompostagem (Vivas et al., 2009; Gopal et
al., 2017), o que mostrou a importância de considerar diferentes escalas de tempo no estudo de
bactérias na melhoria da diversidade.
Resultados contrários foram observados ao se considerar o intestino e o molde de
minhoca. Efeitos negativos das minhocas sobre a comunidade bacteriana foram encontrados no
intestino e nos moldes de minhoca por Koubová et al. (2015), que mostraram que a comunidade
de espécies bacterianas (estimada a partir de bactérias cultiváveis) diminuiu durante a passagem
pelo intestino epigênico de Eisenia. Também foi relatado que a ingestão de solo por minhocas
epigênicas diminui a diversidade microbiana, como observado no intestino de Eudrilus sp.
(Gopal et al., 2017) e em modelos de L. rubellus (Furlong et al., 2002). Essa diminuição na
diversidade microbiana após a ingestão do solo foi atribuída à maior dominância de vários
grupos bacterianos nos moldes de minhocas, mais especificamente ao enriquecimento de táxons
bacterianos capazes de degradar compostos benzoicos e aromáticos (Furlong et al., 2002; Gopal
et al. 2017). Estudos posteriores evidenciaram que o tipo de alimento ingerido pelas minhocas
parece ter pouca influência na diversidade de comunidades bacterianas nos modelos, como
mostra Aira et al. (2016) na epígrafe E andrei.
No geral, esses estudos mostram que a influência das minhocas nas comunidades
microbianas varia entre os microhabitats, embora Egert et al. (2004) encontraram apenas
pequenas diferenças entre a estrutura da comunidade de bactérias e archea no intestino, os
moldes e o solo circundante no caso da minhoca anécica L. terrestris. Por outro lado, para a
mesma espécie, Sampedro e Whalen (2007) descobriram que o microbiota de seu intestino era
diferente do solo a granel. Os achados contrastantes destacados aqui podem ser parcialmente
explicados pelos diferentes métodos empregados no estudo da diversidade microbiana. Embora
vários resultados tenham sido obtidos usando o polimorfismo de comprimento de fragmento de
restrição terminal (T-RFLP) (Egert et al., 2004; Hoeffner et al., 2018) ou bibliotecas de clones
do gene bacteriano 16S rRNA (Furlong et al., 2002), outros estudos usaram o sequenciamento
de próxima geração (NGS) para aumentar a resolução das estimativas de diversidade (Gopal et
al., 2017). O efeito geral das minhocas na comunidade microbiana do solo também depende das
condições do solo, principalmente do conteúdo de nutrientes. Koubová et al. (2015) mostraram
que o efeito da minhoca epigênica E. fetida na biomassa e composição da comunidade
microbiana do solo, avaliada através de PLFA e contagens bacterianas cultiváveis, foi mais
forte em habitats pobres em nutrientes, onde a estimulação do crescimento bacteriano no
intestino de minhoca foi mais perceptível.
Minhocas modificam a abundância de taxa específica na comunidade
microbiana
Foi relatado que a passagem do solo pelo intestino de minhoca aumenta
consistentemente a abundância de grupos bacterianos específicos dentro da comunidade
microbiana, como a de Flavobacterium (Schönholzer et al., 2002), Actinobacteria (Furlong et
al., 2002; Rattray et al., 2010; Aira et al., 2016; Gopal et al., 2017; Ma et al., 2017), Firmicutes
(Furlong et al., 2002; Rattray et al., 2010; Singh et al., 2015; Gopal et al. ., 2017; Ma et al.,
2017) e g-Proteobacteria, em particular membros do gênero Pseudomonas; (Furlong et al.,
2002; Aira et al., 2016; Ma et al., 2017). As minhocas geralmente promovem o crescimento de
bactérias de rápido crescimento, como as g-Proteobacteria, devido aos substratos lábeis de
carbono que produzem (Braga et al., 2016) no intestino ou na pele, o que leva a aumentos na
proporção de Proteobacteria: Acidobacteria (Gong et al., 2018). Também demonstrou-se que
grupos funcionais específicos são aprimorados pela presença de minhocas, como
desnitrificadores (Ihssen et al., 2003) ou utilizadores de celobiose (Karsten e Drake, 1995).
Sampedro e Whalen (2007) também encontraram mudanças significativas nos perfis de AGPD
do solo e do intestino, derivados de microorganismos, e descreveram que a passagem do
intestino aumentou significativamente a concentração de biomarcadores indicativos de
bactérias aeróbias, microeucariontes e fungos.
O advento do sequenciamento de alto rendimento dos ampliadores do gene 16S
rRNA nos permitiu confirmar e refinar esses resultados. A presença de minhocas endogênicas
(A. trapezoides, Metaphire guillelmi ou P. corethrurus) está associada a aumentos de Bactérias
(especialmente em Flavobacteriaceae e Sphingobacteriales), b-Proteobacteria (especialmente
em Rhodocyclaceae), Firmicutes (especialmente em Paenibacillaceae), Verrucomicose e
Verrucomicose. Nitrosovibrio oxidante de amônia no solo (Bernard et al., 2012; de Menezes et
al., 2018; Gong et al., 2018). O enriquecimento observado nesses táxons bacterianos é
geralmente atribuído a um aumento na mineralização de resíduos orgânicos (Bernard et al.,
2012). Bernard et al. (2012) e de Menezes et al. (2018) também encontraram uma promoção de
taxa bacteriana quitinolítica por P. corethrurus e A. trapezoides, respectivamente, como
Chitinophagaceae, Cytophagaceae, Neisseriaceae e Microbacteriaceae. A liberação de quitina
no solo, seja pela produção de quitinase por minhocas ou pela degradação de hifas fúngicas
durante a passagem do intestino, pode ser responsável por esse aumento nas bactérias
quitinolíticas. Em geral, as bactérias intestinais das minhocas anécicas e endogênicas pareciam
ser determinadas, em ordem decrescente de importância, por grupo ecológico, habitat e espécies
de minhocas (Thakuria et al., 2010).
Nas minhocas epigênicas E. fetida e Perionyx excavatus, as comunidades
bacterianas intestinais mostraram-se dominadas por Proteobacteria, Actinobacteria e
Firmicutes, com diversas diferenças de acordo com a espécie. Verrucomicrobia e Chloroflexi
foram abundantes no intestino de E. fetida enquanto ausentes no de P. excavatus. Pelo contrário,
Spirochaetes eram abundantes em P. excavatus, mas não em E. fetida (Singh et al., 2015). O
trato intestinal de minhoca constitui um ambiente enriquecido em C, N e água e empobrecido
em oxigênio quando comparado ao solo circundante (Barois e Lavelle, 1986). Portanto,
demonstrou-se consistentemente favorecer a ocorrência de bactérias e arcadas anaeróbias ou
facultativamente anaeróbicas (Barois et al., 1987; Horn et al., 2003; Koubová et al., 2015). Os
gêneros bacterianos como Aeromonas, Bacillus, Clostridium, Paenibacillus,
Propionibacterium ou Staphylococcus mostraram-se abundantes nos intestinos das minhocas
epigênicas de Eisenia (Toyota e Kimura, 2000; Shin et al., 2004; Koubová et al., 2015). König
(2006) relatou que Bacillus e Paenibacillus, em particular, eram comumente detectados no
intestino de minhocas e eram especialmente relevantes, pois eram capazes de degradar
compostos aromáticos sob condições limitantes de oxigênio.
Embora padrões consistentes possam ser observados, o efeito das minhocas na
composição da comunidade bacteriana do solo parece depender principalmente do tipo de
substrato em estudo (de Menezes et al., 2018). Isso foi demonstrado por Gopal et al. (2017),
que mostraram que a estrutura da comunidade bacteriana mudou ao longo do processo de
vermicompostagem, à medida que a dinâmica dos nutrientes foi modificada. Gong et al. (2018)
relataram uma diminuição na abundância relativa de Cloroflexi e Fibrobacteres pelo M.
guillelmi anécico em campos de arroz onde a cobertura foi aplicada, enquanto sua dominância
aumentou em campos de arroz onde a palha foi incorporada. Esses autores também relataram
uma mudança nos taxa de distorção na comunidade microbiana do solo, que dependia da
alteração orgânica aplicada. Esses achados foram consistentes com os descritos por Koubová
et al. (2015), que registraram mudanças distintas nos táxons microbianos, dependendo do
ambiente em estudo. Os excrementos de minhocas (Eisenia spp.) Foram enriquecidos em
Actinobacteria na pilha de composto (restos de plantas), enquanto foram enriquecidos em
Firmicutes em planta de vermicultura em larga escala (esterco bovino e resíduos agrícolas) e
solo da floresta. Por outro lado, foram detectados aumentos de Gammaproteobacteria no
intestino de minhocas. Aumentos nas gammaproteobactérias também foram encontrados por
Fjøsne et al. (2018) no solo quando a minhoca epigênica Dendrobaena veneta estava presente.
Esses autores observaram consistentemente aumentos em Kluyvera cryocrescens e
Pseudomonas putida, independentemente da composição inicial da comunidade microbiana do
solo.
Para sintetizar as informações disponíveis, analisamos com que frequência os filos
microbianos eram encontrados em solos ou substratos influenciados por minhocas pertencentes
a diferentes grupos ecológicos. A Figura 4 mostra que Proteobactérias, Actinobactérias,
Firmicutes, Acidobactérias, Planctomycetes, Bacteroidetes, Nitrospirae e Chloroflexi têm a
maior abundância relativa em solos onde estão presentes minhocas, independentemente da
categoria ecológica a que pertencem. Embora as minhocas epigênicas pareçam induzir uma
diversidade microbiana mais alta que as minhocas endogênicas e anécicas, estas podem
impactar a comunidade bacteriana do solo de maneira mais consistente, como mostra uma
menor proporção de filos raros (Figura 4). Uma análise de rede (Figura 5) confirmou que os
oito filos acima mencionados formam o núcleo da rede enquanto interagem ou são promovidos
pela maioria das espécies de minhocas. Também revelou que as minhocas epigênicas
promovem mais filos raros de bactérias (sete filos) do que as minhocas endogênicas (dois filos).
No total, essas descobertas sugerem que alguns táxons bacterianos respondem de maneira
consistente à presença de minhocas e podem constituir bons indicadores para prever o impacto
das minhocas nos ecossistemas do solo.
O IMPACTO DAS MINHOCAS NA CICLAGEM DE NUTRIENTES
ATRAVÉS DA MODIFICAÇÃO DAS COMUNIDADES MICROBIANAS DO SOLO
As minhocas são decompositores que se alimentam de matéria orgânica, liberando
nutrientes através da digestão e excreção, com consequências diretas no crescimento das plantas
(Figura 1, seta 1). Eles também têm um impacto importante nas comunidades microbianas que,
por sua vez, afetam a ciclagem de nutrientes e o desenvolvimento das plantas através de suas
interações (Figura 1, setas 2a e 2b). Em um estudo recente, Braga et al. (2016) mostraram que
a introdução do P. corethrurus endogênico no solo alterou significativamente cerca de 70
funções microbianas no solo a granel e na rizosfera, as quais estavam relacionadas
principalmente à biossíntese e simbiose planta-micróbio. A presença de minhocas também
modificou as interações ecológicas entre as funções microbianas. Como mostrado na seção
anterior, as minhocas estimulam certos táxons microbianos e, ao fazê-lo, aumentam a
importância das funções trapezoidais (Braga et al., 2016). Nesta seção, resumiremos as
principais conclusões sobre o impacto das minhocas nas funções microbianas, enfatizando
como as informações sobre as comunidades microbianas associadas à terra precisam ser
integradas para melhorar o conhecimento da influência das minhocas na ciclagem de nutrientes.
Minhocas aumentam a mineralização de nutrientes no solo
Sabe-se que as minhocas, em particular as minhocas geofágicas endogênicas,
promovem a mineralização de C e N no solo (Lavelle et al., 1998; Araujo et al., 2004; Coq et
al., 2007; Gopal et al., 2017), a maioria provavelmente através de um efeito de priming que
afeta as taxas de decomposição da matéria orgânica do solo (MOS) (Barois et al., 1987; Bernard
et al., 2012). Espera-se que este efeito de priming positivo promova a reciclagem de nutrientes,
especialmente de N e P orgânico, no MOS (Kuzyakov et al., 2000; Bertrand et al., 2015). Isso
foi demonstrado para P. corethrurus em vários estudos, resumidos na recente revisão de Taheri
et al. (2018). Aumentos de duas a três vezes no C mineralizado também foram observados em
modelos da A. caliginosa endogênica, em comparação com o solo circundante, o que é atribuído
ao efeito de priming causado pela digestão da terra (Abail et al., 2017). Minhocas epigênicas
como E. fetida e P. excavatus também foram relatadas para aumentar as taxas de decomposição
da matéria orgânica (Singh et al., 2015).
O aumento da mineralização da MOS em moldes de minhocas, comparado ao solo
circundante, está associado a um enriquecimento de compostos lábeis e a um aumento
subsequente da atividade microbiana (Barois e Lavelle, 1986; Coq et al., 2007; Abail et al.,
2017), que pode ser atribuído à digestão da minhoca e à influência do microbioma intestinal. O
aprimoramento de bactérias estrategistas r com taxas de crescimento rápidas e capacidades
catabólicas especializadas (Bernard et al., 2012), que se acredita serem responsáveis pelo
aumento observado na mineralização de MOS por minhocas, foi definido por Lavelle et al.
(1995) como o paradoxo da "Bela Adormecida". Como descrito anteriormente, a promoção de
bactérias de rápido crescimento (g-proteobactérias, por exemplo) pode ser impulsionada pelo
muco intestinal rico em N, alterações nas características físico-químicas do solo ou degradação
da biomassa fúngica durante o trânsito intestinal, através das quais as minhocas pode produzir
substratos lábeis C (Brown, 1995; Brown et al., 2000; Braga et al., 2016). A indução de um
efeito de priming pelo trânsito intestinal das minhocas é ainda confirmada por observações que
mostram que as taxas de mineralização da MOS são mais baixas nos modelos antigos do que
nos recentes (Pulleman et al., 2005; Bertrand et al., 2015).
Embora o efeito das minhocas na dinâmica do N do solo possa variar dependendo
das espécies consideradas (Clause et al., 2014; Groffman et al., 2015), o aumento do N mineral
nos moldes de minhocas dos diferentes grupos funcionais tem sido consistentemente observado
(Decaëns et al., 1999; Aira et al., 2005; Clause et al., 2014). As concentrações de N mineral
foram medidas como cinco vezes nos modelos de P. corethrurus quando comparadas com as
do solo circundante (Lavelle et al., 1992). Aumentos de 31 e 4% no NO-3 – N e NH+4 – N,
respectivamente, também foram observados em solos com a presença de A. caliginosa
(McDaniel et al., 2013). O E. fetida epigênico também aumentou a mineralização orgânica de
N na rizosfera de Phormium tenax, uma planta perene lilás da Nova Zelândia (Zhong et al.,
2017). O efeito positivo geral das minhocas na mineralização de C e N na rizosfera foi
demonstrado por Wu et al. (2017) que demonstraram que P. corethrurus afetou os processos C
e N e a comunidade microbiana do solo em parcelas em que plantas vivas estavam presentes,
em contraste com parcelas em que plantas artificiais foram usadas como controle. Isso foi
confirmado ainda por Athmann et al. (2017) que evidenciaram um efeito positivo dos bioporos
das raízes e das minhocas (L. terrestris), em comparação com o solo a granel, na atividade de
várias enzimas envolvidas no ciclo C e N, resultando em um aumento na mobilização de
nutrientes. Essas descobertas apontam um efeito de interação positivo na mineralização de
nutrientes nos níveis de drilosfera e rizosfera, dois pontos críticos de atividade microbiana no
solo. Como destacado recentemente por Bray et al. (2019), há um efeito estimulador das
minhocas e de outras macrofaunas do solo nas comunidades microbianas da rizosfera e nos
processos mediados por micróbios, particularmente na mineralização de N e formação de MOS.
O aprimoramento da mineralização de C e N pela microbiota associada a minhocas
é mediado por uma atividade enzimática crescente. Alguns dos táxons bacterianos que podem
ser promovidos por minhocas, como Pseudomonas spp., Têm sido associados à produção de
enzimas envolvidas na degradação de moléculas orgânicas complexas, o que poderia favorecer
a decomposição da MOS (Bertrand et al., 2015; Fjøsne et al., 2018). As enzimas produzidas
pela microbiota associada a minhocas também são responsáveis pelos aumentos relatados no
solo NO-3 -N e NH+4 -N na presença de minhocas. Por exemplo, demonstrou-se que a atividade
da enzima do solo bN-acetilglucosaminidase é promovida na presença de P. corethrurus, o que
resultou em "pontos quentes NH+4 -N" que podem ser acessados por fungos micorrízicos
arbusculares (Quadro 1), fornecendo, portanto, benefícios para o crescimento das plantas (He
et al., 2018). Aumentos na atividade da fenol oxidase e glucosidase pelas minhocas e outros
macrovertebrados também foram observados na rizosfera de Festuca arundinacea (Bray et al.,
2019), e foram atribuídos à ingestão de raízes finas e à estimulação da atividade microbiana
durante a passagem do intestino.
A redução da imobilização microbiana tem sido sugerida como outro fator de
mineralização aprimorada de N por minhocas, o que pode levar a um aumento na lixiviação de
NO-3-N (Domínguez et al., 2004). Alguns autores, no entanto, não detectaram nenhum efeito
de minhoca no N potencialmente mineralizável (Fonte e Six, 2010) ou, pelo contrário,
evidenciaram uma diminuição na mineralização do N pelas minhocas (Groffman et al., 2015),
provavelmente devido a uma aumento da imobilização microbiana que fez com que o N total
do solo diminuísse 90 g N m−2 na presença do L. rubellus epigênico. Uma possível explicação
que vários autores propuseram é que o N mineralizado por minhocas e seus microrganismos
associados podem ser mais facilmente utilizados pelas plantas, mascarando um aumento nas
concentrações de N disponíveis no solo (Pashanasi et al., 1996; González e Zou, 1999; Wu et.,
2017). Da mesma forma, a quantidade de fósforo (P) prontamente disponível demonstrou ser
afetada por minhocas, sendo os níveis de P disponíveis mais altos nos modelos (Jiménez et al.,
2003; Kuczak et al., 2006; Vos et al., 2014; Ros et al., 2017) ou em bioporos formados por L.
terrestris (Athmann et al., 2017) do que no solo a granel. Foi relatado que as concentrações de
P extraível com água nos modelos da minhoca anécica L. terrestris são 30 a 1000 vezes maiores
do que as encontradas no solo a granel (Ros et al., 2017). Esses “pontos quentes P” induzidos
por minhocas dependem das espécies de minhocas e demonstraram ser maiores para o L.
rubellus epigênico do que para o L. terrestris ou o A. caliginosa endogênico (Vos et al., 2014).
A influência das minhocas no P disponível é particularmente relevante na rizosfera, onde as
minhocas podem interagir com os fungos micorrízicos arbusculares para aumentar a
solubilidade do P e transferir para a planta (Milleret et al., 2009; Cao et al., 2015a) (Quadro 1).
Foi relatado que o P disponível no solo aumenta na presença da minhoca endogênica P.
corethrurus (Lopez-Hernandez et al., 1993; Chapuis-Lardy et al., 1998; Patron et al., 1999) ou
da epigênica E. fetida (Cao et al., 2015a), que tem sido associada à melhora atividade
microbiana durante a ingestão de solo ou em moldes de minhocas, embora a magnitude do
aumento do P disponível possa diferir dependendo dos grupos funcionais das minhocas (Wan
e Wong, 2004; Bernard et al., 2012; Vos et al., 2014).
Nossa síntese da literatura nos últimos 15 anos revelou que as minhocas
endogênicas e anécicas induzem um aumento nos nutrientes do solo em cerca de 70% dos
estudos consultados; as minhocas epigênicas, no entanto, apenas induziram um aumento nos
nutrientes do solo em 43% dos estudos relatados (Figura 6A). Ao analisar os efeitos dos
diferentes grupos funcionais de minhocas em determinados nutrientes (C, N e P), surgiram mais
diferenças. Foi relatado que as minhocas epigênicas aumentam os níveis de P no solo ou
substrato em estudo com mais frequência do que o esperado sob a hipótese nula, enquanto a
endogênica foi associada a aumentos de N no solo com mais frequência do que os outros dois
grupos de minhocas (Figura 6B). Vale ressaltar que os aumentos relatados nos nutrientes do
solo por minhocas raramente estavam relacionados a alterações na comunidade microbiana do
solo (Figuras 6C, D); além disso, quando foram investigadas alterações nas comunidades
microbianas induzidas por minhocas, a maioria dos estudos (82%) não relatou alterações
associadas no conteúdo de nutrientes do solo (Figura 6D). Considerando os grupos funcionais
dos filos bacterianos promovidos pelas minhocas (principalmente Proteobacteria,
Actinobacteria, Firmicutes e Acidobacteria), espera-se que as alterações observadas na
disponibilidade de nutrientes associados às minhocas sejam pelo menos em parte causadas pela
atividade metabólica das bactérias e não por efeitos diretos das minhocas. Isso exige mais
estudos integrando os efeitos das minhocas nas comunidades microbianas do solo em nível
taxonômico e funcional, para desvendar o vínculo entre a diversidade microbiana e as funções
do ecossistema.
MINHOCAS AFETAM GENES FUNCIONAIS MICROBIANOS
ENVOLVIDOS NO CICLO DE NUTRIENTES
A influência das minhocas na ciclagem de nutrientes não se restringe ao seu impacto
na mineralização da MOS através de um efeito primário induzido. Vários estudos também
demonstraram um efeito direto na expressão de genes bacterianos envolvidos no ciclo N. As
transformações de N do solo e, portanto, a fertilidade do solo, têm sido frequentemente
investigadas através do estudo de genes funcionais microbianos, que enfatizam sua importância
como marcadores genéticos funcionais (Hosseini Bai et al., 2015; Ribbons et al., 2018).
Geralmente, a presença de minhocas tem sido associada a um aumento na
desnitrificação. Foi demonstrado que a presença do P. corethrurus endogênico aumenta a
abundância de genes funcionais bacterianos relacionados à desnitrificação (nirK e nosZ) no
solo e na rizosfera (Chapuis-Lardy et al., 2010; Braga et al., 2016). Achados semelhantes foram
encontrados por Nebert et al. (2011) para o epigênica L. rubellus. A expressão do gene nosZ,
que codifica a óxido nitroso (N2O) redutase, está diretamente ligada à quantidade de N2O, um
importante gás de efeito estufa (GEE), do qual se pensa que as minhocas são promotoras (de
Menezes et al., 2018 ). Um aumento na abundância do gene nosZ na presença de minhocas
pode indicar a presença de comunidades bacterianas desnitrificantes maiores (Reverchon et al.,
2015), que são conhecidas por serem influenciadas pela quantidade e composição de compostos
orgânicos resultantes da decomposição de resíduos orgânicos (Kandeler et al., 2006). As
minhocas e sua microbiota associada, ao promover a decomposição da MOS, poderiam,
portanto, criar condições de solo capazes de sustentar comunidades desnitrificadoras mais
abundantes. Horn et al. (2003, 2006) indicaram que o intestino de minhoca é um microambiente
ideal para bactérias produtoras de N2O e que os desnitrificadores do intestino são
provavelmente derivados do solo. No entanto, aumentos nas emissões de N2O e na abundância
do gene nosZ parecem ser dependentes da espécie, pois nenhum efeito do A. caliginosa
endogênico foi detectado nos genes de desnitrificação (Nebert et al., 2011). Isso também é
consistente com os resultados de Depkat-Jakob et al. (2010), que descobriram que os táxons
contendo nosZ não eram estimulados de maneira uniforme nos intestinos de vermes de
diferentes guildas alimentares. Por outro lado, a minhoca anécica Maoridrilus transalpinus
mostrou reduzir as emissões de N2O quando associada a bactérias rizóbias, provavelmente
devido às condições aeróbias criadas pela escavação, que são prejudiciais à desnitrificação
(Kim et al., 2017). Esses achados contrastantes podem ser devidos às diferentes configurações
experimentais implementadas para estudar o efeito das minhocas nas emissões de N2O. Lubbers
et al. (2013), por exemplo, realizaram uma meta-análise mostrando que as minhocas aumentam
as emissões de GEE, nas quais a maioria dos estudos referenciados se baseia em configurações
experimentais muito curtas e simplificadas, nas quais não existem plantas para absorver o N
mineralizado, o que poderia realmente favorecer a emissão de N2O. A complexificação de
configurações experimentais para uma integração de interações complexas entre plantas,
macrofauna e microorganismos é, portanto, necessária para elucidar se a presença de minhocas
aumenta ou diminui a emissão de GEE a longo prazo.
Outros processos microbianos também foram relatados como afetados
positivamente por minhocas. Genes funcionais associados ao metabolismo de carboidratos e
lipídios, vias Biosintética, processos de tradução, redução-oxidação e proliferação celular foram
mais abundantes no solo quando P. corethrurus estava presente (Braga et al., 2016). A
introdução de P. corethrurus também promoveu funções microbianas associadas à simbiose
planta-micróbio na rizosfera da cana-de-açúcar, como colonização de células vegetais por
bactérias fixadoras de N ou regulação do crescimento de plantas (Braga et al., 2016).
Finalmente, apesar do efeito relatado das minhocas na mobilização de P, nenhum estudo ainda
investigou, até onde sabemos, como as minhocas podem alterar os genes funcionais
microbianos associados ao ciclo P.
O IMPACTO DAS MINHOCAS NAS MOLÉCULAS DE SINAIS
PROMOVENDO O CRESCIMENTO DE PLANTAS
Sabe-se que os efeitos positivos das minhocas no crescimento e no rendimento das
plantas estão relacionados à melhoria das variáveis físico-químicas do solo, pois as minhocas
facilitam a penetração das raízes no solo, a absorção de nutrientes e a troca de gases (Figura 1,
seta 1). Recentemente, esses efeitos positivos também foram atribuídos à microbiota do solo
(Figura 1, setas 2a e 2b), através da ativação de microrganismos produtores de moléculas de
sinal.
Apesar de toda a literatura documentar a co-ocorrência entre mudanças no ciclo N
por minhocas e seu efeito positivo no crescimento das plantas (Van Groenigen et al., 2014),
alguns estudos sugerem que um aumento da mineralização de nutrientes não é suficiente para
explicar o efeito de minhocas no crescimento das plantas por si só (Blouin et al., 2006; Laossi
et al., 2010). Existem outros mecanismos concomitantes, especialmente a emissão de moléculas
de sinal (MS) na presença de minhocas, envolvidas no efeito das minhocas no crescimento das
plantas (Puga-Freitas et al., 2012b) e ajudam a explicar os efeitos positivos das minhocas. MS
são moléculas com fortes efeitos na fisiologia das plantas, apesar da presença em baixa
concentração e geralmente estão associadas a alterações qualitativas. Por exemplo, MS são os
principais fatores que impulsionam o desenvolvimento e a imunidade das plantas (Taiz e Zeiger,
2010). Por sua vez, essas mudanças qualitativas podem induzir mudanças quantitativas (por
exemplo, crescimento). É importante notar que a MS difere dos nutrientes constitutivos da
biomassa, geralmente presentes em concentrações relativamente altas e principalmente
responsáveis por alterações quantitativas.
É amplamente aceito que a MS não é produzido exclusivamente pelas plantas. Eles
também são produzidos por quase todos os organismos do solo, incluindo a fauna e os
microorganismos do solo (Brito-Vega e Espinosa-Victoria, 2009; Puga-Freitas e Blouin, 2015).
Vários compostos orgânicos estão incluídos no MS, como açúcares, ácidos orgânicos e
vitaminas; esses compostos estão frequentemente envolvidos no início de vias de sinalização
que levam à produção de fitohormônios (auxinas, giberelinas, citocininas, etileno e ácido
abscísico), bem como metabólitos secundários ou compostos voláteis que ativam o sistema
imunológico da planta ou regulam seu crescimento e desenvolvimento. Até o momento, não
está claro se a fauna do solo é capaz de produzir esses MS por si só ou se ativa os
microrganismos que os produzem. No entanto, Puga-Freitas et al. (2012a) revelaram que
microrganismos cultiváveis extraídos de solos cultivados com minhocas produzem mais ácido
indolacético (IAA) (+ 46%) em comparação com um solo controle sem minhocas, o que apoia
a segunda hipótese de estimulação de bactérias (provavelmente Crescimento Vegetal
Promovendo bactérias, ou PGPB) por minhocas.
Ácidos húmicos, IAA, aminociclopropano-1-carboxilato (ACC), bem como
moléculas provisoriamente identificadas como auxinas e etileno foram relatados como MS
produzidos na presença de minhocas, usando métodos indiretos, como colorimetria. Em muitos
casos, sua presença foi deduzida a partir de observações em plantas semelhantes aos resultados
observados na presença de aplicação exógena de MS. No entanto, evidências recentes mostram
que a MS foi inequivocamente identificada por um sistema de cromatografia líquida de alta
resolução (UPLC) de fase reversa, acoplado a um analisador de espectrometria de massa com
triplo quadrupolo, o que permitiu determinar a presença de salicílico (JA) jasmônico (JA) ) e
ácido abscísico (ABA) no vermicomposto de E. fetida (Hernández, 2019). No entanto, o
envolvimento de microrganismos na secreção dessas moléculas não foi elucidado, com exceção
de Pathma e Sakthivel (2013), que identificaram bactérias de moldes de E. fetida. A maioria
dos estudos que investigaram a composição química da MS em moldes de minhocas foi
realizada em minhocas epigênicas, particularmente em E. fetida, enquanto um único estudo
estudou as espécies endogênicas Aporrectodea caliginosa (sinônimo Nicodrilus caliginosus) e
Aporrectodea rosea (sinônimo Allolobophora rosea). Por fim, todos os estudos foram
relacionados apenas aos modelos de minhocas (Tabela 1). Até o momento, não existem
publicações que confirmem o isolamento e quantificação inequívoca de compostos como
auxinas ou giberelinas e a identidade dos microrganismos associados a essas moléculas. Apenas
dois estudos, com intervalo de 17 anos (Canellas et al., 2002 e Hernández, 2019), forneceram
uma identificação inequívoca de MS (ácidos húmicos com ABA, SA e JA).
À luz da nova era da tecnologia para a análise e quantificação de moléculas
orgânicas, um novo panorama se abre para entender "o universo da diversidade de moléculas"
do solo. São necessárias mais pesquisas para elucidar os métodos de extração mais eficientes e
a identificação dessas moléculas em minhocas ou em seus moldes. As abordagens
transcriptômicas também podem ajudar a desvendar o impacto microbiano das minhocas no
crescimento das plantas (Puga-Freitas et al., 2012b). Além disso, considerando as crescentes
informações disponíveis sobre as comunidades microbianas associadas a minhocas, é
necessário realizar pesquisas mais sistemáticas sobre a MS produzidas por microorganismos
detectados em tratos digestivos, moldes e túneis de minhocas. Pseudomonas spp., Por exemplo,
foram detectados no intestino de E. fetida (Pathma e Sakthivel, 2013). Desde Pseudomonas
spp. demonstrou-se frequentemente emitir MS que pode promover o crescimento das plantas,
por exemplo, através da indução de resistência das plantas a patógenos (Bloemberg e
Lugtenberg, 2001; Pieterse et al., 2009; González et al., 2017); a combinação do
sequenciamento de próxima geração com as ferramentas metabolômicas de ponta pode ajudar
a entender o efeito conjunto das minhocas e PGPB no crescimento das plantas.
Em relação à resposta das plantas as MS na presença de minhocas, muitas
observações do "efeito semelhante ao hormônio" foram feitas com referência ao
vermicomposto, por exemplo, aumento do crescimento e rendimento, desenvolvimento de
flores e frutos e outros processos relacionados à tolerância aos bióticos estresses abióticos
(Tabela 1). Em geral, E. fetida, A. caliginosa e A. rosea são as espécies de minhocas que
apresentaram maiores efeitos positivos nas plantas, o que foi atribuído à presença de IAA, ACC
e ácidos húmicos produzidos por suas bactérias associadas. Os ácidos húmicos são extraídos
MS do vermicomposto produzido a partir de esterco bovino que também aumentou o
crescimento radicular e o número de locais de emergência radicular lateral em filhotes de milho
(Zea mays); essas moléculas também mostraram ser responsáveis por uma estimulação da
atividade da membrana plasmática H+- ATPase (Canellas et al., 2002). Quaggiotti et al. (2004)
relataram um acúmulo de transcritos do gene H+-ATPase nas raízes e um aumento dos
transcritos do gene transportador de nitrato nas brotações de plantas expostas a substâncias
húmicas que produzem minhocas. Usando uma abordagem transcriptômica para o rastreamento
da expressão gênica em Arabidopsis thaliana, Puga-Freitas et al. (2012b) encontraram um
acúmulo de transcritos de 57 genes, a maioria dos quais é induzida por elicitores ormicrobianos
de aplicação de hormônios exógenos. Eles também mostraram a reversão do fenótipo de um
mutante de A. thaliana para o transporte de IAA na presença de minhocas, sugerindo que as
minhocas estavam compensando o baixo nível de auxina nas células da raiz, produzindo
compostos semelhantes a auxina no solo, capazes de penetrar nas raízes das plantas (Puga-
Freitas et al., 2012b). Estudos transcriptômicos e exploração de vias de sinalização de plantas
usando mutantes podem ser desenvolvidos para diferentes estágios de desenvolvimento da
planta, a fim de caracterizar melhor a resposta da planta à presença de minhocas.
Foi apresentada uma hipótese de que a atividade das minhocas tem um impacto
positivo no crescimento das plantas através da MS liberada no solo. No entanto, a literatura é
composta de muitos "capítulos" (relatados na Tabela 1), que se baseiam em mudanças na
comunidade microbiana do solo, em um aumento ou diminuição da MS ou em modificações no
desenvolvimento ou imunidade das plantas. Isso se deve principalmente aos numerosos
conhecimentos científicos necessários em química do solo, microbiologia, fisiologia das plantas
e ecologia do solo. Portanto, atualmente não existe um estudo único que integre todos os
capítulos de uma história completa.
CONCLUSÃO
Sabe-se que as minhocas desempenham um papel crítico nos processos ecológicos,
através da melhoria da estrutura do solo, ciclagem de nutrientes e crescimento das plantas. As
evidências também mostram que as minhocas contribuem para a estruturação das comunidades
microbianas do solo, diretamente através da ingestão ou indiretamente através de um efeito de
priming resultante de um aumento das substâncias lábeis disponíveis. No entanto, poucas
investigações combinaram dados sobre interações entre microrganismos e minhocas com
estudos sobre ciclagem de nutrientes do solo, especialmente sobre ciclagem de P ou produção
de moléculas de sinal, o que nos impede de entender completamente os mecanismos subjacentes
ao efeito de pontos quentes microbianos na drilosfera no solo funcionando. Nossa hipótese “o
efeito das minhocas na ciclagem de nutrientes e no crescimento das plantas não é apenas um
efeito direto, mas é principalmente mediada indiretamente, através de modificações da
comunidade microbiana” é amplamente verificada na pequena escala espacial e no curto espaço
temporal (tripa, moldes, tocas e túneis).
As minhocas influenciam a biomassa microbiana e a atividade no solo, mas
resultados contrastantes podem ser encontrados na literatura em relação à direção desse efeito.
Isso pode ser devido à natureza das minhocas de matéria orgânica que se alimentam,
principalmente no caso de espécies epigênicas ou do substrato em que vivem. Isso também
pode estar relacionado a condições experimentais, uma vez que os efeitos mais variáveis sobre
a abundância microbiana foram observados em laboratório. Estudos e aumentos consistentes da
abundância microbiana por espécies endogênicas foram observados em campo (Figura 2). No
entanto, o efeito nas comunidades microbianas é menor ou neutro quando a matéria-prima ou
o solo em que se alimentam é rico em matéria orgânica assimilável, independentemente do
grupo funcional. No entanto, um resultado recorrente de nossa revisão é a relevância de
considerar a categoria ecológica de minhoca (epigênica, anécica ou endogênica) para destacar
algumas tendências no efeito das minhocas na estrutura e na função das comunidades
microbianas. A complexificação do delineamento experimental, com interações entre grupos
ecológicos de minhocas e a presença de plantas, deve, portanto, ser considerada em estudos de
mesocompostos, a fim de imitar melhor as condições naturais e evitar artefatos experimentais.
Embora ainda não haja clareza no entendimento de se as minhocas têm seu próprio
microbioma intestinal ou se provêm do solo, a maioria das informações diz que provém do solo.
No entanto, podemos enfatizar alguns padrões gerais: taxa como Flavobacterium,
Actinobacteria, Firmicutes e g-Proteobacteria são consistentemente relatados como promovidos
pelo trânsito intestinal e, portanto, podem constituir bons indicadores para prever o impacto de
minhocas nos processos do solo. O crescente uso das tecnologias de Nova Geração de
Sequenciamento (NGS) no estudo das comunidades microbianas do solo e sua diversidade
ajudará a refinar nossa compreensão de como as minhocas podem moldá-las. Também são
necessárias informações críticas sobre o papel das minhocas como potenciais impulsionadores
da composição e estrutura das comunidades de fungos, principalmente os fungos micorrízicos,
devido à sua interação direta com as plantas (Quadro 1). Por outro lado, fungos saprotróficos,
como muitas bactérias, são os principais impulsionadores da biogeoquímica do solo, mas seus
papéis foram amplamente negligenciados, especialmente em suas interações sinérgicas ou
antagonistas com as minhocas.
As minhocas promovem a mineralização de N e P e alteram os genes funcionais
microbianos que modificam as funções do solo. São necessárias mais informações para
entender quais microorganismos e genes microbianos são ativados por minhocas, especialmente
no ciclo P.
Finalmente, as consequências dessas mudanças induzidas por minhocas no
funcionamento do solo no crescimento das plantas não podem ser totalmente compreendidas
sem o estudo da MS, produzido pelas minhocas ou provavelmente pelos microorganismos
criados pela atividade das minhocas. O envolvimento de táxons microbianos específicos na
secreção dessas moléculas precisa ser elucidado e isso exige um esforço colaborativo de
disciplinas como metabolômica, microbiologia, transcriptômica e bioquímica, a fim de
identificar inequivocamente a MS em minhocas ou em seus moldes.
Para plagiar Aristóteles, as minhocas são realmente o intestino da Terra, com sua
microbiota específica, o que nos leva a uma grande escala espacial e temporal. Este intestino é
complexo de entender devido à sua dinâmica associada à atividade de minhocas, outros
organismos do solo e raízes de plantas. No entanto, temos que considerar esses efeitos
complexos das minhocas nas comunidades microbianas para entender o efeito das minhocas na
ciclagem de nutrientes e no crescimento das plantas, promovendo a MS e, finalmente, prever
interações planta-solo, especialmente se as minhocas ingerirem centenas ou milhares de
toneladas de substratos ou solo por hectare e por ano.
 CAIXA 1 | MINHOCAS INTERAGEM COM FUNGOS MICORRÍZICOS
Além das bactérias do solo, os fungos são organismos-chave na dinâmica da
biogeoquímica do solo e seu efeito final no crescimento das plantas. Ao contrário das bactérias,
há muito menos informações disponíveis sobre suas interações com as minhocas e o resultado
dessas interações. A maior parte da atenção, se não todas as interações fungos-minhoca, foram
focadas em fungos micorrízicos arbusculares. De maneira semelhante à interação com
bactérias, as interações entre minhocas e fungos micorrízicos, particularmente fungos
micorrízicos arbusculares, modificaram a química do solo (Zhang et al., 2016, 2018) e a
disponibilidade de nutrientes do solo (Milleret et al. , 2009; Xiang e Li, 2014) e, criticamente
importante, a absorção de nutrientes pelas plantas (Milleret et al., 2009; Li et al., 2012, 2013a,
b; Aghababaei et al., 2014) e a composição e abundância de comunidade de fungos (Gormsen
et al., 2004; Dempsey et al., 2013; Cao et al., 2015a, b, c, 2016, 2018; Zhang et al., 2016).
Embora o entendimento das interações entre minhocas e fungos micorrízicos não tenha sido o
foco principal da maioria dos trabalhos publicados, há uma quantidade considerável de dados
que nos permitem obter algumas ideias sobre essas interações e seus efeitos sinérgicos no
desempenho das plantas (Wurst et al., 2004; Yu et al., 2005; Zaller et al., 2011; Li et al., 2013b).
O interesse científico nas interações entre minhocas e fungos micorrízicos data de
quase 30 anos e abordou a questão fundamental de como a atividade trófica das minhocas afeta
a disponibilidade de unidades infectantes de fungos micorrízicos. Embora todos os estudos
tenham se concentrado na abundância de esporos de fungos micorrízicos nos modelos de
minhocas, a densidade de esporos nos modelos foi em média 66% maior do que no solo
processado que não é de minhoca (Gange, 1993; Harinikumar e Bagyaraj , 1994; Lee et al.,
1996) e permaneceram viáveis por até um ano (Reddell e Espanha, 1991). Outra investigação
não encontrou efeito de minhocas na dispersão eficaz das unidades infectantes de fungos
micorrízicos (Pattinson et al., 1997). No entanto, deve-se notar que a única investigação sobre
a dispersão de unidades infecciosas micorrízicas por minhocas usou uma espécie diferente de
minhoca (a A. trapezoides endogênica) em comparação com muitos estudos em que a
concentração de esporos nos moldes de diferentes espécies foi medida (o L. terrestris e o
anécico P. corethrurus, Ochochaetona phillotti e Lampito mauritii). Como uma variação
considerável foi relatada entre espécies de minhocas em sua capacidade de concentrar unidades
infecciosas de fungos micorrízicos, o reconhecimento de apoio à capacidade das minhocas de
dispersar as unidades infecciosas de fungos micorrízicos deve ser tomado com cautela até
investigação adicional, incluindo as três funções funcionais dos grupos de minhocas (anécicas,
endogênicas e epigênicas) são realizados.
Mais de 60% dos casos revisados relataram que as atividades de minhocas
aumentaram a colonização radicular por fungos micorrízicos, enquanto 25% relataram uma
redução na colonização radicular. Vale ressaltar que, para as minhocas anécicas e epigênicas, a
proporção de efeitos positivos e negativos e neutros na colonização radicular por fungos
micorrízicos foi de 3: 1 e 4: 1, respectivamente, para espécies endogênicas invertidas para 1: 2
proporção. Os mecanismos que podem afetar diferencialmente a colonização radicular por
fungos micorrízicos ao interagir com minhocas anécicas / epigênicas e endogênicas são pouco
compreendidos. A perfuração por minhocas pode danificar as redes hifais e as raízes das plantas
(Gange e Brown, 2002; McLean et al., 2006). A perfuração horizontal de espécies endogênicas
pode causar uma ruptura mais extensa do micélio extraradical em comparação com a escavação
vertical de espécies anécicas e isso pode afetar a capacidade dos fungos de colonizar as raízes.
Depósitos fundidos na superfície do solo, realizados por espécies epigênicas e anécicas, podem
favorecer a dispersão das unidades infecciosas micorrízicas e, por sua vez, favorecer a
colonização das raízes. A investigação exclusiva que abordou a questão das minhocas como
agentes de dispersão das unidades infecciosas micorrízicas mostrou resultados negativos e foi
realizada de forma concordante com espécies endogênicas, que frequentemente relatam
diminuir a colonização radicular por fungos micorrízicos. Uma provável explicação é que os
fungos são frequentemente considerados como alimento de minhoca (Curry e Schmidt, 2007;
Shan et al., 2013). Não existem dados sobre a efetividade de espécies anécicas e epigênicas na
dispersão de propágulos infecciosos de fungos micorrízicos. Portanto, é necessário um estudo
comparativo de minhocas com diferentes ecologias como agentes dispersantes de unidades
infecciosas micorrízicas. Além disso, as minhocas podem favorecer a colonização radicular por
fungos micorrízicos indiretamente, promovendo grupos específicos de microorganismos do
solo que podem cooperar com fungos micorrízicos (Zhang et al., 2016). Se minhocas de
comportamentos diferentes podem favorecer a proliferação de grupos microbianos específicos
que, por sua vez, facilitam a interação entre fungos micorrízicos e raízes de plantas é uma área
totalmente inexplorada, embora alguns esforços relatem alterações correlativas de bactérias
Gram-positivas juntamente com fungos micorrízicos (Dempsey et al., 2013).
Uma grande desvantagem na investigação da interação entre minhocas e fungos
micorrízicos é que apenas um punhado de espécies de fungos foi usado na experimentação
(intradícios de Rhizophagus, Rhizophagus irregularis, Funneliformis mosseae, Glomus
geosporum, Glomus caledoniun, Glomus caledoniun, Glomus etunicatum, Claroomoglia, e
Acaulospora sp.), todos da Glomeraceae. Isso significa que nosso entendimento dessas
interações é bastante parcial e é necessário envidar esforços para entender a dinâmica dessas
interações com uma gama maior de espécies de fungos de famílias diferentes, pois é sabido que
há diferenças marcantes nas taxas de colonização, crescimento de micélio extra-radical e
capacidade de mover nutrientes do solo para as plantas hospedeiras. Surpreendentemente, não
temos conhecimento de nenhum estudo documentando o papel das minhocas como potenciais
impulsionadores da composição e estrutura das comunidades micorrízicas. Experimentos
simples de pote e mesocomposto com composição inicial conhecida de comunidades
micorrízicas adicionadas com e sem minhocas ajudarão a avançar nesse campo. Isso é
importante, pois muitos esforços estão sendo feitos para incluir minhocas e fungos micorrízicos
em práticas agrícolas sustentáveis e precisamos entender suas interações e resultados
fundamentais.