Aproveitamento das frações sacarínea, amilácea e

lignocelulósica do sorgo sacarino [Sorghum bicolor

(L.) Moench] para a produção de bioetanol

Utilization of saccharine, starchy and lignocellulosic fractions of sweet

sorghum [Sorghum bicolor (L.) Moench] for bioethanol production

Aprovechamiento de las fracciones sacarinea, almidón y

lignocelulosa de sorgo dulce [Sorghum bicolor (L.) Moench]
para la produccion de bioetanol

Carolina Araújo Barcelos

Lidia Maria Melo Santa Anna
Roberto Nobuyuki Maeda
Nei Pereira Junior

Resumo
Dentre as diversas matérias-primas renováveis disponíveis para a produção de etanol, o sorgo sacarino apresenta-se como uma
das opções mais promissoras devido à sua ampla adaptabilidade em diferentes tipos de clima e solo. Além disso, é a única cultura que
fornece colmos e grãos que podem ser usados para a produção de etanol por via enzimática, e a biomassa excedente (resíduo ligno-
celulósico) pode ser utilizada tanto na cogeração de energia, como na produção de etanol de segunda geração. O objetivo deste tra-
balho foi avaliar a produção de bioetanol a partir das frações sacarínea, amilácea e lignocelulósica do sorgo sacarino. A conversão da
fração amilácea contida nos grãos atingiu a produção de 87g.L-1 de etanol, a do caldo sacarino resultou em 72g.L-1, e da fração lignoce-
lulósica do sorgo sacarino foi possível produzir 30g.L-1 e 84,4g.L-1 de etanol das frações hemicelulósicas e celulósicas, respectivamente.
Com este processo foi possível atingir a relação de aproximadamente 160L de etanol/ton de sorgo sacarino como um todo, o que
corresponde a 13.610L de etanol/ha, aproveitando 79,1% do potencial teórico das frações de açúcares do sorgo. Estes resultados
indicam a possibilidade de usar esta cultura excepcional como principal matéria-prima para a produção de etanol e outros bioprodutos
de alto valor agregado em regiões com condições de solo e clima desfavoráveis ao cultivo de cana-de-açúcar e como cultura comple-
mentar na entressafra do cultivo de cana.

palavras-chave: sorgo sacarino fermentação alcoólica pré-tratamentos materiais lignocelulósicos bioetanol

Abstract
Among the various renewable feedstocks available for ethanol production, the sweet sorghum stands out as one of the
most promising due to its wide adaptability to different types of climate and soil. Furthermore, it is the only crop that provides
stalks and grains which can be used to produce ethanol by enzymatic route, and the surplus biomass can be used both for

Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011 29

Aproveitamento das frações sacarínea, amilácea e lignocelulósica do sorgo sacarino [Sorghum bicolor...

power cogeneration, such as second generation ethanol. Therefore, the purpose of this research was to evaluate the bioethanol
production from the sugary, starchy and lignocellulosic fractions. The conversion of starchy fraction resulted in an ethanol
concentration of 87g.L-1. From the sugary fraction (sweet sorghum juice) it was possible to produce 72g.L-1 of ethanol, and
from the lignocellulosic fraction of the sweet sorghum it was possible to produce 30g.L-1 and 84.4g.L-1 from the hemicellulosic
fraction and cellulosic fraction, respectively. From this process it was possible to obtain approximately 160L ethanol/ton of
sweet sorghum as a whole, which corresponds to 13,610L ethanol/ha, utilizing 79.1% of the theoretical potential of the sugary
fractions of the sweet sorghum. These results indicate the possibility of utilizing this extraordinary crop as the main feedstock
for ethanol production and other byproducts with high aggregate value in regions where sugar cane has not been adapted due
to unfavorable soil and climate conditions, as well as an off-season complementary feedstock to sugar cane.

keywords: sweet sorghum alcoholic fermentation pretreatments lignocellulosic raw material bioethanol

Resumen
entre las diversas materias primas renovables disponibles para la producción de etanol, el sorgo dulce se presenta como una de
las mejores opciones debido a su gran adaptabilidad a diferentes tipos de clima y de suelo. Además, es la única cultura que ofrece
tallos y granos que se pueden utilizar para la producción de etanol por medios enzimáticos, y la biomasa excedente (residuo ligno-
celulósico) se puede utilizar tanto en la cogeneración de energía como la producción de etanol de segunda generación. El objetivo
de este estudio fue evaluar la producción de bioetanol a partir de fracciones sacarínea, almidón y lignocelulósica del sorgo dulce.
La conversión del almidón contenido en el grano alcanzó la producción de 87g.L-1 de etanol. A partir del jugo resultó en 77,1gL-1 de
etanol y de la fracción lignocelulósica fue posible producir 30g.L-1 y 84,4g.L-1 a partir de las fracciones de hemicelulosa y celulosa,
respectivamente. Con este proceso es posible conseguir la relación de aproximadamente 160L de etanol/tonelada de sorgo, lo que
corresponde a 13.610L de etanol/ha, con 79,1% de la capacidad teórica de las fracciones azucareras del sorgo. Estos resultados
indican la posibilidad de utilizar esta cultura excepcional como la materia prima para la producción de etanol y otros bioproductos
de alto valor añadido y puede ser uma opción como sustituto o complemento del cultivo de la caña de azúcar en temporada baja.

palabras-clave: sorgo dulce fermentación alcohólica pretratamientos materiales lignocelulósicos bioetanol

Introdução fator para a completa substituição desse tipo de combus­

As reservas de combustíveis fósseis, contrariando as
primeiras previsões, poderão abastecer as necessidades
de energia ainda por longo período. No entanto, as reservas
de petróleo comercialmente exploráveis, crescem a taxas
menores que as do consumo, indicando um descolamento
entre essas duas curvas (reservas e consumo). Além disso,
os custos cada vez mais elevados por constantes crises polí­
ticas e sociais dos países do Oriente Médio, detentores da
maioria das reservas, o aumento da dificuldade de extração
e o crescente uso destes recursos como matéria-prima
para a produção de bens de consumo serão o principal
tível (Oliveira, 2009).
Além das considerações econômicas, outros fatores,
como segurança energética, emissão de gases poluentes e
mudança climática global, estão ajudando a guiar a revolução
bioenergética (Nass et al., 2007).
Sinônimo de combustível renovável, que polui menos
em comparação com os derivados de petróleo, o etanol
voltou a ocupar lugar de destaque no cenário energé­tico
do Brasil e também começou a ser desejado por vários
países. Um reflexo da sua importância é o aumento da

30 Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011


produção mundial, que praticamente quadruplicou nos
últimos dez anos (Jank, 2009).
A cana-de-açúcar se desenvolve bem no trópico úmido,
apresentando altos rendimentos em açúcares por área culti­
vada, enquanto a beterraba açucareira cresce em climas tem-
perados (Lipinski e Kresovich, 1992). O sorgo sacarino se
asse­melha à cana-de-açúcar, uma vez que o armazenamento
de açúcares se localiza nos colmos, além de fornecer grande
quantidade de massa verde (bagaço). Entretanto, ele difere de
maneira acentuada da cana-de-açúcar por ser cultivado a
partir de sementes e apresentar um ciclo vegetativo bem mais
curto, de 90 a 130 dias. Pode ser cultivado em zonas tanto
tempe­radas como tropicais, necessita de 33% a 50% menos
água que a cana, sendo eficiente no uso de água. Ademais, o
sorgo sacarino produz grãos, ricos em amido, que podem ser
utilizados para alimentação animal e/ou produção de etanol em
processo similar ao praticado na produção do etanol de milho.
Atualmente, o sorgo sacarino já é fonte de produção de
etanol em países como Índia, China, Austrália e África do Sul.
Considerado a “cana-de-açúcar” do meio-oeste americano,
o sorgo sacarino é hoje umas das apostas americanas para
substituir o milho na produção de etanol. A Europa realiza pro-
jetos para a produção do etanol a partir do sorgo em diversos
países, tais como Grécia, Espanha, Reino Unido, Portugal, Itália
e Alemanha, visando ao cumprimento da diretriz da comu­
nidade europeia de reduzir a utilização de combustíveis fós-
seis (Lamnet, 2002).
Segundo MyBeloJardim (2011), já existem mais de
12.000ha plantados com sorgo sacarino no Brasil, onde estão
sendo realizados testes com um híbrido comercial. Este híbrido
tem produtividade esperada entre 60t/ha e 80t/ha, 12% de teor
de açúcar, entre 11% e 15% de fibra, além de produzir grãos.
Já a cana-de-açúcar tem produtividade média de 90 t/ha, entre
13% e 14% de açúcar e até 12% de fibras. O rendimento médio
em t/ha da produção de um híbrido de sorgo sacarino produzido
no estado de São Paulo na safra de 2010 foi de 85t/ha de bio-
massa, 30t/ha de bagaço, 45t/ha de caldo, 5t/ha de folhas e pa-
lhas e 4-5t/ha de grãos.
Atualmente, a cana se distingue na produção de etanol como
a matéria-prima que estabelece melhores condições de produ-
tividade, a qual, porém, está restrita ao uso de determinados
Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011
Barcelos et al.
solos e condições especiais de clima. Então, uma vez estabe-
lecido o mercado para o etanol e levando em conside­ração
essas características, o sorgo se insere como uma matéria-
prima bastante promissora para a produção de etanol, princi-
palmente em regiões com condições de clima desfavo­ráveis
ao cultivo de cana-de-açúcar ou na entressafra, utilizando
a mesma estrutura de colheita e processamento da cana,
estendendo o período de colheita por quatro meses, evitando
a ociosidade das destilarias.
Diante do exposto, o presente trabalho objetivou desen-
volver um processo para o aproveitamento integral do sorgo
sacarino para a produção de bioetanol mediante a otimização
das diferentes etapas empregadas para a conversão das fra-
ções (sacarínea, amilácea e lignocelulósica), em substrato,
para a subsequente fermentação alcoólica.
Parte experimental
A parte experimental deste trabalho foi dividida de acordo
com a figura 1.
A caracterização dos grãos de sorgo sacarino quanto
ao teor de amido, lipídeos, proteína, fibra bruta e cinzas
foi realizada de acordo com Barcelos (2012), e a caracte-
rização do bagaço de sorgo quanto ao teor de celulose,
hemicelulose, lignina e extrativos em todas as etapas do
processo da produção de etanol de segunda geração foi
feita de acordo com a metodologia descrita por Sluiter et
al. (2008) e Ververis et al. (2007).
A quantificação dos açúcares redutores (AR) na etapa
de hidrólise enzimática dos grãos de sorgo foi executada
de acordo com a técnica de Somogyi-Nelson descrita por
Southgate (1991). A concentração dos açúcares (glicose,
xilose, celobiose, maltose, frutose, arabinose e sacarose),
etanol, glicerol e xilitol nos processos fermentativos e pré-tra-
tamentos do bagaço de sorgo foi determinada por cromato-
grafia líquida de alta eficiência (CLAE) (Waters, Milford, MA,
USA), equipado com detector de índice de refração (Waters
2.414, Milford, MA, USA). Para a separação usou-se a
coluna de troca iônica HPX-87P Aminex 300. Água milliQ
foi empregada como fase móvel à vazão de 0,6mL.min-1 e
pressão máxima de 1.500psi. A temperatura do detector
31
Aproveitamento das frações sacarínea, amilácea e lignocelulósica do sorgo sacarino [Sorghum bicolor...

Grãos SORGO SACARINO Palha e Folhas

Cominuição Colmos

Moagem Caldo
Hidrólise
Enzimática

Bagaço
Fermentação
Hidrolisado Saccharomyces cerevisiae
Enzimático

Cominuição

Fermentação
Saccharomyces cerevisiae
Pré-Tratamento Celulignina Ácida
Ácido

Pré-Tratamento Alcalino
Hidrolisado
Hemicelulósico

Celulignina Parcialmente
Deslignificada
Fermentação
Scheffersomyces stipitis
CBS5774
Pré-Hidrólise Enzimática

Sacarificação e Fermentação
ETANOL Simultâneas (SSF)
Saccharomyces cerevisiae

Figura 1 - Esquema da produção de etanol a partir do Figure 1 - Diagram of ethanol production from sweet Figura 1 - Esquema de la producción de etanol a partir
caldo, grãos e bagaço do sorgo sacarino. sorghum juice, grains and bagasse. del caldo, los granos y el orujo del sorgo sacarino.

32 Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011


foi de 40°C e a temperatura externa (forno) de 80°C. Para
deter­minar a concentração de furfural, ácido acético e hidro-
ximetilfurfural (HMF) foi utilizada a coluna C18 acoplada a
um detector UV com uso de metanol (25% v/v) como fase
móvel à vazão de 0,6mL.min-1, comprimento de onda 285nm.
Os micro-organismos utilizados neste trabalho foram uma linha-
gem industrial de Saccharomyces cerevisiae e uma linhagem flo-
culante adaptada de Scheffersomyces stipitis (CBS5774).
Hidrólise enzimática dos grãos de sorgo
Na etapa de hidrólise enzimática do amido de grãos de
sorgo, foram empregadas as seguintes condições rea­cio­
nais, previamente otimizadas por Barcelos (2012): relação
sólido/líquido em torno de 1/3 a 1/4g de grão.mL-1); tem-
peratura de liquefação em torno de 90°C; tempera­tura
de sacarifi­cação de 55°C; carga de α-amilase industrial
em torno de 20 a 40μL.g-1 de grão; carga de glucoami­
lase industrial em torno de 40μL.g-1 de grão; tempo de
lique­fação de 30min; tempo de sacarificação de 30min.
O pH para liquefação e sacarificação foi 6,0 e 4,5, respec-
tivamente. A variável de resposta foi a concentração de
açúcares redutores obtida utilizando a carga enzimática e
tempo determinados.
Avaliação da fermentabilidade do
hidrolisado de grãos de sorgo
A avaliação da fermentabilidade do hidrolisado enzi-
mático de grãos de sorgo foi realizada em biorreator ope-
rado no modo batelada, com capacidade nominal de 4L e
com volume reacional de 2L com a linhagem industrial de
Saccharomyces cerevisiae.
Avaliação da fermentabilidade do
caldo de sorgo
O caldo de sorgo foi centrifugado (4.000rpm/15min)
para a separação de sólidos de diferentes dimensões pre-
sentes no caldo após a moagem (palhiço, terra) e esteri-
lizado a 0,5atm por 20min para a eliminação de possíveis
contaminantes. O ensaio foi realizado em biorreator
(Biostat B) sem adição de nenhum nutriente ao meio.
A concentração de levedura para o processo fermentativo
foi de aproximadamente 8g.L-1 (massa seca).
Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011
Barcelos et al.
Pré-tratamento ácido do bagaço de sorgo
As condições reacionais empregadas nesta etapa, pre-
viamente otimizadas por Barcelos (2012), foram: relação
sólido/líquido em torno de 1/4 a 1/5g.mL-1; concen­tração
de ácido sulfúrico em torno de 1,0 a 1,3%v/v e tempo de
expo­sição em torno de 45min. A temperatura foi man­
tida a 120°C. Após o tratamento térmico, a separação
das frações líquida e sólida foi feita por aplicação de
pressão hidráulica.
Avaliação da fermentabilidade do
hidrolisado hemicelulósico do bagaço
de sorgo (fração líquida proveniente
da prensagem)
O processo para a avaliação da fermentabilidade do
hidro­lisado hemicelulósico de bagaço de sorgo foi reali­zado
em biorreator Biostat B (B. Braun Biotech International –
Germany) no modo batelada, com capacidade nominal
de 1,5L e com volume reacional de 0,8L. A concentração
celular empregada neste ensaio foi de aproximadamente
13g.L-1 (massa seca), o pH foi controlado a 6,0 com adi-
ção de NaOH 2M e/ou HCl 2M, a temperatura foram man-
tidas a 30°C. A taxa específica de aeração foi de 0,02vvm,
eator (Betancur, 2010). O bioprocesso foi monitorado, e
os perfis cinéticos de consumo de substrato, produção
de etanol e concentração celular foram construídos com
amostragens durante 40h. Os fatores de rendimento em
etanol (YP/S), eficiência de fermentação (E.F.) e produti­
vidade volumétrica em produto (QP) foram utilizados para
avaliar o desempenho do processo fermentativo.
Pré-tratamento alcalino do bagaço
de sorgo (fase sólida proveniente da
prensagem)
Para o processo de deslignificação do material lignocelu-
lósico, ou seja, remoção parcial da lignina, foi empregada a
técnica de extração alcalina. A celulignina ácida, parte sólida
do pré-tratamento ácido, após a prensagem, foi submetida a
um pré-tratamento alcalino para a remoção da lignina com
uma concentração de hidróxido de sódio em torno de 0,1 a
0,3M , previamente otimizada por Barcelos (2012).
33
Aproveitamento das frações sacarínea, amilácea e lignocelulósica do sorgo sacarino [Sorghum bicolor...

A relação sólido/líquido, a temperatura e o tempo de expo­ ajustou-se a temperatura para 37°C e se adicionou o inóculo
sição foram fixados em torno de 1/21 a 1/25g.mL-1, em torno (8g.L-1 massa seca) para continuidade do processo de saca-
de 120°C durante cerca de 20 a 30min, respectiva­mente, e rificação e inicio da fermen­tação simultâneas.
a massa de celulignina ácida utilizada em cada condição foi
de 50g. Estas condições foram usadas por Vasquez (2007)
para o pré-tratamento alcalino de bagaço de cana-de-açúcar. Resultados e discussão
A condição ótima para o pré-tratamento alcalino foi selecio-
nada em relação à perda de massa e ao teor de celulose pre- A tabela 1 apresenta a composição dos grãos de sorgo, a
sente na fração sólida, denominada celulignina parcialmente qual está de acordo com os valores encontrados por Rooney
desligi­nificada (CPD). e Pflugfelder (1986), em que o teor de amido variou de 70% a
80% em massa seca, e também com os valores obtidos por
Hidrólise enzimática da celulignina Antunes et al. (2007), que realizaram um estudo com 33 genó­
parcialmente deslignificada (CPD) de sorgo tipos de grãos de sorgo, resultando nas seguintes faixas: os
teores de proteínas, fibra bruta e proteínas variaram entre 9,8%
Nesta etapa, as condições reacionais utilizadas, previa- e 18,3%, 0,35% e 6,6%, e 1,03% e 2,24%, respectivamente.
mente otimizadas por Barcelos (2012), foram: relação sólido/ A umidade absoluta dos grãos de sorgo foi de 14%.
líquido em torno de 1/3g.mL-1 e carga enzimática em torno de
30 a 32FPU.g-1 sólido utilizando enzimas celulásicas pré-indus-
Componente % - massa seca
triais. A temperatura foi mantida a 50°C, o pH mantido em 5,0
empregando tampão citrato de sódio 50mM pH 5,0. Amido 79,05 ± 0,62
Umidade 14,03 ± 0,11
Produção de etanol de segunda
Lipídeos 3,37 ± 0,04
geração a partir de bagaço de
sorgo sacarino por processo de Cinzas 1,15 ± 0,04
sacarificação e fermentação Fibra Bruta 1,40 ± 0,03
simultâneas (SSF)
Proteínas 10,06 ± 0,07
Com o propósito de avaliar o potencial do bagaço de sorgo Tabela 1 - Compo- Table 1 - Chemical Tabla 1 - Composición
sição química dos composition of química de los granos
para a produção de etanol de segunda geração, o processo grãos de sorgo. sorghum grains. de sorgo.
de sacarificação e fermentação simultâneas foi realizado com
o emprego de uma linhagem industrial de Saccharomyces
cere­visiae. Como a condição definida na etapa de otimização Avaliação da hidrólise enzimática do
da pré-hidrólise enzimática resultava em um sistema bastante amido de grãos de sorgo
impactado em sólidos, optou-se por operar esta etapa no
modo em batelada alimentada. Durante a pré-hidrólise, Após a avaliação da hidrólise enzimática dos grãos de
foram feitas cinco alimentações. O restante do sólido foi sorgo, objetivando encontrar a maior concentração de glicose
alimentado em 33h de processo (18h após a adição da com a menor carga enzimática nos ensaios de hidrólise, a con-
levedura), completando a relação sólido/líquido definida. centração final de AR na condição otimizada foi de 250g.L-1 e o
O bioprocesso foi conduzido em biorreator Biostat B perfil desta hidrólise está apresentado na figura 2.
(B. Braun Biotech International – Germany) com capacidade
nomi­nal de 1,5L e com volume reacional de 0,8L. Foi utilizado Observa-se que o tempo necessário para se atin-
um meio tamponado com tampão citrato de sódio (pH5,0, gir a temperatura de 90°C foi de 30min, alcançando
50mM), suplementado com os mesmos nutrientes e con- 42,3g.L-1 de açúcares redutores. Após 10min nesta tem-
centrações do meio empregado para a propagação celular. peratura, foram liberados mais 24,4g.L-1 de açúcares. Ao
Decorrido o tempo definido para a pré-hidrólise enzimática, final do processo de liquefação (60min), alcançou-se a

34 Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011


Figura 2 - Perfil cinético
da hidrólise enzimática do
amido de grãos de sorgo na
condição otimizada utilizan-
do α-amilase e glucoamilase
industrial.
Figure 2 - Kinetic profile
of enzymatic hydrolysis of
sorghum grains startch on
optimized condition using
commercial α-amilase e
glucoamilase.
Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011
Figura 2 - Perfil cinético de
la hidrólisis enzimática del
almidón de granos de sorgo
en la condición optimizada
utilizando α-amilasa y
glucoamilasa industrial.
Barcelos et al.
concentração de açúcares redutores de 74,3g.L-1. Após
10min de hidrólise com glucoamilase, a concentração de
açúcares redutores aumentou para 241,1g.L-1, atingindo
250g.L-1 ao final do processo (30min de sacarificação), o
que corresponde a 100% de eficiência de hidrólise.
Avaliação da fermentabilidade dos
hidrolisados enzimáticos de grãos
de sorgo
A figura 3 apresenta o perfil típico de produção de etanol e
consumo de substrato a partir do hidrolisado enzimático de grãos
de sorgo. Neste ensaio, foi feita uma diluição no meio hidroli-
sado, obtendo-se uma concentração de sólidos dissolvidos de
170g.L-1, a fim de conseguir concentrações de açúcares similares
às utilizadas industrialmente para a produção de etanol. Segundo
Zanin et al. (2000), atualmente são utilizados meios que contêm
cerca de 180g.L-1 de açúcares totais, atingindo-se 92% de efici-
ência de fermentação e produzindo-se até 87g.L-1 de etanol.
A glicose presente no meio foi totalmente consumida em
16h de operação, atingindo uma concentração de etanol de
86,7g.L-1, que corresponde a 11% (v/v) de etanol. Comparando
com o ensaio anterior, os valores de fator de rendimento em
etanol por substrato consumido (0,510g.g-1) e produtividade
Figura 3 - Perfil cinético de
produção de etanol e con-
sumo de açúcares de grãos
de sorgo em biorreator
com concentração inicial
de glicose de 170g.L-1,
empregando a linhagem de
Saccharomyces cerevisae.
Figure 3 - Kinetic profile
of ethanol production and
consumption of sugars from
sorghum grains in biore-
actor with a initial glucose
concentration of 170g.L-1,
using an industrial strain of
Saccharomyces cerevisiae.
Figura 3 - Perfil cinético
de producción de etanol
y consumo de azúcares
de granos de sorgo en
biorreactor con concen-
tración inicial de glucosa
de 170g.L-1, empleando
el linaje de Saccha-
romyces cerevisae.
35
Aproveitamento das frações sacarínea, amilácea e lignocelulósica do sorgo sacarino [Sorghum bicolor...

S0 tF P QP Y P/S
Linhagem
(g.L-1) (h) (g.L-1) (g.L-1.h-1) (g.g-1)

Sc 170,0 16 86,7 5,42 0,510

Tabela 2 - Linhagem; concentração inicial de glicose Table 2 - Strain; initial glucose concentration (S0); Tabla 2 - Linaje; concentración inicial de glucosa (S0);
(S0); tempo de fermentação (tF); etanol produzido (P); fermentation time (tF); ethanol concentration (P); tiempo de fermentación (tF); etanol producido (P);
produtividade (QP) e rendimento em etanol (YP/S). volumetric productivity (QP) and ethanol yield (YP/S). productividad (QP) y rendimiento en etanol (YP/S).

volumétrica em etanol (5,42g.L-1.h-1) foram superiores, com A tabela 2 resume as variáveis medidas calculadas do
uma eficiência de fermentação próxima à estequiométrica processo de produção de etanol de hidrolisado enzimático de
(99,8%). No entanto, o gasto de energia nas etapas para sepa- grãos de sorgo.
ração e purificação do produto seria maior em relação ao pro-
cesso com altas concentrações de sólidos dissolvidos, o que Avaliação da fermentabilidade do
resulta em concentrações maiores de etanol. caldo de sorgo sacarino

Adicionalmente, a quantidade de vinhoto gerada nos pro-
cessos com baixa concentração de sólidos dissolvidos também
seria maior, com os consequentes impactos ambientais resul-
tantes da maior geração deste resíduo de fundo das colunas
de destilação. A maltose permaneceu constante ao longo do
processo, pois se sabe que a glicose é metabolizada preferen-
cialmente, e, portanto, a maltose só seria consumida após o
esgotamento da glicose no meio.
O perfil típico da fermentação do caldo de sorgo saca-
rino está apresentado na figura 4. A concentração inicial de
sacarose, glicose e frutose neste ensaio foi de 127,1g.L-1,
22,6g.L-1 e 12,3g.L-1, respectivamente. Observa-se que a
redução percentual de açúcares foi 100% e que a concen-
tração de etanol após 11h de fermentação foi de 71,7g.L-1,
o que corresponde à produtividade volumétrica em etanol
de 6,52 g.L1.h1.

Figura 4 - Perfil cinético

da produção de etanol e
consumo de açúcares em
biorreator, empregando
caldo de sorgo sacarino. X:
concentração celular; tem-
peratura: 37°C; velocidade
de agitação: 200rpm; pH:
4,5; X0: 8g.L-1.

Figure 4 - Kinetic profile

of ethanol production and
consumption of sugars
in bioreactor from sweet
sorghum juice. X: cell
concentration; temperature:
37°C, stirring speed:
200rpm, pH: 4.5; X0: 8g.L-1.

Figura 4 - Perfil cinético de

la producción de etanol y
consumo de azúcares en
biorreactor, empleando
caldo de sorgo sacarino. X:
concentración celular; tem-
peratura: 37°C; velocidad
de agitación: 200rpm; pH:
4,5; X0: 8g.L-1.

36 Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011

 Barcelos et al.

A concentração final de glicerol foi de 6,1g.L-1, e, O tratamento físico consiste na remoção das impurezas
segundo Ingledew (1999), a formação deste subproduto é grosseiras (peneiramento), o tratamento físico-químico, como
comum em até 1% (m/v). Observa-se que a concentração ajuste de pH, propicia a aglomeração das partículas pequenas
celular ao final do processo foi de 17,1g.L-1, o que, conse- em partículas de dimensões maiores, enquanto o tratamento
quentemente, afetou de forma negativa o fator de rendi- térmico tem como objetivo acelerar as reações de coagulação
mento em etanol (0,443g.g-1, que corresponde a 86,7% do e floculação dos coloides e não açúcares proteicos, eliminar
valor teórico), devido ao crescimento celular. microrganismos que podem infectar as leveduras no processo
de fermentação, além de possibilitar a remoção do ar e dos
A tabela 3 resume as variáveis medidas e calculadas gases dissolvidos. Após o tratamento térmico, o caldo passa
no processo de produção de etanol a partir de caldo de pelo processo de decantação (clarificação), que é a etapa de
sorgo sacarino. purificação do caldo pela remoção das impurezas floculadas
nos tratamentos anteriores (Oliveira, 2010). No entanto, neste
De acordo com Zanin et al. (2000), em meios contendo trabalho, o caldo de sorgo passou apenas por uma etapa de
aproximadamente 180g.L-1 de açúcares utilizados para fer- centrifugação para a separação de sólidos (palhiço, terra) con-
mentação alcoólica, a eficiência de fermentação é de cerca tidos no caldo após o processo de moagem e esterilização.
de 92%, produzindo até 87g.L-1 de etanol. Neste trabalho,
a eficiência máxima foi de 87%, provavelmente devido Pré-tratamento ácido do bagaço de sorgo
ao elevado crescimento celular e também à falta de pré-
tratamentos antes do início do processo fermentativo, pois Como o objetivo deste trabalho foi o aproveitamento in-
antes de ser empregado no processo de fermentação, o tegral das diferentes frações do sorgo para a produção de
caldo, comumente, passa por alguns pré-tratamentos. etanol, isto inclui a conversão da fração hemicelulósica em
açúcares fermentáveis. Dentre todos os tipos de pré-trata-
mento ácido, o com ácido diluído é um dos mais utilizados e
Componente Ensaio Fermentativo
amplamente estudados. Além da solubilização da hemice-
Sacarose Inicial (g/L) 127,10 lulose, esta etapa promove a desorganização do complexo
Glicose Inicial (g/L) 22,57 lignocelulósico, tornando-o mais acessível às enzimas na
Frutose Inicial (g/L) 12,30 etapa de hidrólise enzimática. Entretanto, existe o risco
X0 (g/L) 8 da formação de compostos inibidores para o processo de
Suplementação ____ fermentação, como ácidos orgânicos e furfurais. A com-
Tempo Fermentação (h) 11,25 posição do bagaço de sorgo após o processo de lavagem
Etanol (g/L) 71,74 está apresentada na tabela 4.
X (g/L) 17,09
YP/S (g/g) 0,443 Componente % base seca (m/m)
E.F. (%) 86,37 Celulose 40,42 ± 2,62
QP (g/L.h) 6,52 Hemicelulose 20,05 ± 2,48
Tabela 3 - Concen- Table 3 - Initial sugar Tabla 3 - Concen- Lignina 19,79 ± 0,31
tração inicial de concentration; initial tración inicial de
açúcares e células cell concentration azúcares y células (X0), Cinzas 0,49 ± 0,06
(X0), suplementação, (X0), added nutrients; suplementación, tiempo
tempo de fermentação fermentation time (h), de fermentación (h), Extrativos 4,49 ± 0,08
(h), concentração final final ethanol concen- concentración final de
de etanol e células (X), tration; final cell con- etanol y células (X), ∑ 85,24
rendimento em produ- centration (X), product rendimiento en producto
to (YP/S), eficiência de yield (YP/S), fermentation (YP/S), eficiencia de
Tabela 4 - Compo- Table 4 - Chemical Tabla 4 - Composición
fermentação (E.F.) e efficiency (E.F.) and fermentación (E.F.) y
sição do bagaço de composition of sweet del orujo de sorgo
produtiviade volumétri- volumetric productivity productividad volumé­
sorgo sacarino após sorghum bagasse after sacarino luego de
ca em produto (QP). on product (QP). trica en producto (QP).
lavagem. washing. lavado.

Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011 37

Aproveitamento das frações sacarínea, amilácea e lignocelulósica do sorgo sacarino [Sorghum bicolor...

Componente Valores codificados Valores Preditos Valores Experimentais

Rel. Sólido/Líquido (g/mL) -0,60 0,22 (1/4,52) ____
Conc. Ácido (% v/v) 1,36 1,39 ____
Tempo de Exposição (min) 0,56 46,7 ____
Xilose (g/L) ____ 48,23 ± 15,12 47,19 ± 2,20
Ácido Acético (g/L) ____ 10,74 ± 2,73 8,65 ±1,92
Furfural (g/L) ____ 0,15 ± 0,13 0,17 ± 0,03
Tabela 5 - Valores codificados, reais e experimentais para Table 5 - Coded values, real values and experimental values Tabla 5 - Valores codificados, reales y experimentales para
as variáveis do pré-tratamento ácido após a otimização. of the variables of acid pretreatment after optimization. las variables del pretratamiento ácido luego de optimización.

Como em qualquer processo industrial, entre os princi-

pais objetivos requeridos estão um elevado rendimento e alta 100
Bagaço in natura
produtividade em produto. Por este motivo, um planejamento Celulignina ácida
experimental do pré-tratamento ácido foi delineado para a Remoção mássica
obtenção de um hidrolisado com condições apropriadas para a 80
subsequente fermentação, ou seja, alta concentração de açú-
cares e baixa concentração de inibidores (Barcelos, 2012).
60

Após definidas as condições que forneciam a maior concen-

tração de xilose com a menor concentração de inibidores, foi feita
%

40
a determinação da composição química do bagaço de sorgo após
o pré-tratamento ácido, denominado celulignina ácida (CA).
20
Os resultados, apresentados na tabela 5, mostraram que
após o pré-tratamento ácido quase toda a hemicelulose foi
removida, representando apenas 2,53% da composição final 0
na celulignina ácida. Já a celulose e a lignina aumentaram Celulose Hemicelulose Lignina
de 40,42% e 19,79% na composição inicial para 45,78% e
27,79%, respectivamente, após este pré-tratamento, indi- Figura 5 - Composição Figure 5 - Chemical Figura 5 - Composición
cando aumento proporcional destas frações devido à grande química do bagaço in composition of sweet química del orujo in natura
natura e da celulignina sorghum bagasse in y de la celulignina ácida
solubilização da fração hemicelulósica. ácida e remoção mássica natura, acid cellulignin and y remoción másica de la
da celulose, hemicelulose e weight loss of cellulose, celulosa, hemicelulosa y
lignina após o pré-trata- hemicellulose and lignin after lignina luego del pretrata-
Para analisar o efeito causado pelo pré-tratamento ácido mento ácido. the acid pretreatment. miento ácido.
(perda de celulose, hemicelulose e lignina), é conveniente corrigir
as composições obtidas ao final desta etapa com o rendimento
mássico (R) obtido na correspondente, que neste caso foi de No que concerne à celulose, houve solubilização de
66,2%. A figura 5 apresenta os valores percentuais do teor de 25,1% desta fração, mostrando que, além da extensa hidró-
celulose, hemicelulose e lignina no bagaço de sorgo in natura e na lise da fração hemicelulósica, o pré-tratamento com ácido
celulignina ácida, bem como a remoção mássica de cada compo- diluído também hidrolisa uma parte da celulose, sendo prova-
nente macromolecular resultante do pré-tratamento ácido. velmente grande parte de celulose amorfa ou de baixa crista-
linidade, fazendo com que a fração celulósica remanescente,
Observa-se que 91,6% da hemicelulose contida no bagaço ou seja, a fração cristalina seja menos susceptível à ação das
de sorgo in natura foram extraídos, comprovando a eficácia do celulases (Maeda et al., 2011). Embora este pré-tratamento
pré-tratamento ácido. não seja seletivo para a hemicelulose, esta remoção não

38 Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011

 Barcelos et al.

indica necessariamente uma diminuição do rendimento glo- Avaliação da fermentabilidade do

bal do processo de conversão de biomassa a etanol, já que a
maior parte da celulose, hidrolisada à glicose, pode ser trans-
formada em etanol pela linhagem de Scheffersomyces stipi-
tis empregada no processo de fermentação do hidrolisado
hemicelulósico. Observa-se também que após o pré-trata-
mento ácido houve a remoção de 7,1% da lignina presente
no bagaço in natura.
A eficiência de recuperação desta etapa foi de 64,3%,
considerando o volume recuperado após o pré-tratamento
ácido, o qual pode ser aumentado com um eficiente processo
de separação da fração líquida e sólida após o pré-tratamento
ácido. Já se considerarmos a eficiência de pré-tratamento, a
qual se considera a concentração de xilose no hidrolisado
hemicelulósico e a concentração obtenível, calculada a partir
do teor de hemicelulose no bagaço in natura, este valor
aumenta para 97,8%.
hidrolisado hemicelulósico de bagaço
de sorgo empregando a linhagem
Scheffersomyces stipitis CBS5774
Para avaliar o potencial do sorgo sacarino como matéria-
prima para a produção de etanol, um ensaio fermentativo da fra-
ção hemicelulósica do bagaço de sorgo sacarino, obtido após
o pré-tratamento ácido na condição otimizada, foi realizado,
empregando a linhagem Scheffersomyces stipitis CBS5774
como agente fermentativo.
O perfil cinético da produção de etanol e consumo de
substrato em biorreator instrumentado está apresentado
na figura 6. A concentração inicial do hidrolisado hemicelu-
lósico foi (g/L): 47,7 de xilose; 15,3 de glicose; 9 de arabi-
nose; 8,2 de ácido acético; 0,2 de furfural e 0,11 da HMF.
A concentração máxima de etanol foi de aproximadamente

Figura 6 - Perfil cinético do consumo de substrato e
produção de etanol em biorreator, a partir do hidrolisado
hemicelulósico empregando a linhagem CBS5774 de
Scheffersomyces stipitis. Temperatura: 30°C; pH 6,0;
velocidade de agitação: 250rpm; taxa específica de aera-
ção: 0,02vvm; concentração inicial de células: 13,5g.L-1.
Figure 6 - Kinetic profile of ethanol production and
substrate consumption in bioreactor using hemi-
cellulosic hydrolysate and Scheffersomyces stipitis
CBS5774 strain. Temperature: 30°C, pH 6.0, stirring
speed: 250rpm; specific aeration rate: 0.02vvm;
initial cell concentration: 13.5g.L-1.
Figura 6 - Perfil cinético del consumo de substrato
y producción de etanol en biorreactor, a partir del
hidrolizado hemicelulósico empleando el linaje CBS5774
de Scheffersomyces stipitis. Temperatura: 30°C; pH 6,0;
velocidad de agitación: 250rpm; tasa específica de aera-
ción: 0,02vvm; concentración inicial de células: 13,5g.L-1.

Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011 39

Aproveitamento das frações sacarínea, amilácea e lignocelulósica do sorgo sacarino [Sorghum bicolor...
30,0g.L-1 em 23h de processo. Estes valores correspondem
a uma produtividade volumétrica de 1,30g.L-1.h-1 e a um fator
de rendimento de substrato em produto de 0,476g.g1, o que
representa uma eficiência de fermentação de 93,2%.
Antunes (1997) relatou que o sistema de transporte para
glicose é constitutivo e indutivo para xilose, podendo acarretar
repressão do consumo de xilose na presença de glicose, como
observado também por Betancur (2010). No entanto, apesar
de a glicose ter sido totalmente consumida nas primeiras 3h
de processo, não houve repressão no consumo de xilose, visto
que o consumo desta pentose ocorreu concomitantemente ao
de glicose. Embora a xilose e a glicose tenham sido totalmente
consumidas, a arabinose se manteve constante durante todo o
processo, já que esta linhagem não é capaz de produzir etanol
a partir desta pentose, como reportado por Betancur (2005).
Constatou-se acúmulo de xilitol, intermediário do metabo-
lismo da xilose para esta linhagem, que atingiu 4,87g.L-1 em
23h de processo. A concentração celular permaneceu cons-
tante durante a fermentação, em consequência da baixa dis-
ponibilidade de oxigênio, direcionando o metabolismo deste
microrganismo para a produção de etanol (Jeffries et al.,
2007). Apesar de as barreiras tecnológicas serem grandes e
de haver alternativas para a conversão de pentoses em etanol,
esta continua sendo a opção preferencial, já que o mercado de
etanol combustível não tem expectativas de saturação.
Pré-tratamento alcalino da
celulignina de sorgo
O pré-tratamento ácido resultou na remoção da fração
hemi­celulósica, mas a lignina ainda presente na celulignina
ácida impõe restrições estruturais sobre a celulase, já que
possibilita ligações improdutivas que retardam o ataque enzi­
mático. Portanto, como a estrutura da lignina é modificada pela
presença de substâncias alcalinas, realizou-se um pré-trata-
mento com hidróxido de sódio com o objetivo de remover a lig-
nina presente na celulignina ácida, sem causar danos à cadeia
celulósica para posterior utilização. A influência da concen­
tração da solução de hidróxido de sódio foi analisada quanto
à remoção de lignina, visando aumentar o teor de celulose na
amostra. A tabela 6 apresenta a composição média da amostra
na condição otimizada. Observa-se que, após a deslignifi­cação
do material pré-tratado, a hemicelulose remanescente do
40 Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011
Componente % base seca (m/m)
Celulose 45,78 ± 3,13
Hemicelulose 2,53 ± 1,15
Lignina 27,79 ± 0,36
Cinzas 1,03 ± 0,05
∑ 76,10
Tabela 6 - Composição Table 6 - Chemical Tabla 6 - Composición
química da celulignina composition of acid química de la celulig-
ácida (CA). cellulignin (CA). nina ácida (CA).
pré-tratamento ácido foi totalmente removida, assim como o
teor de cinzas. Houve um aumento no teor de celulose após a
deslignificação, decorrente da remoção da lignina.
Juntos, os pré-tratamentos ácido e alcalino contribuíram
para se obter um material com alto teor de celulose (78,9%)
e baixos teores de lignina (5,1%) e hemicelulose (0%), contri-
buindo significativamente para a etapa de sacarificação enzi­
mática da celulose, já que tanto a hemicelulose quanto a lignina
formam uma camada protetora ao redor da celulose, reduzindo a
eficiência do ataque enzimático (Öhgren et al., 2007).
O rendimento mássico global para celulose, após os pré-
tratamentos ácido e alcalino, foi de 73,2%. Se considerarmos
que toda a glicose presente no hidrolisado hemicelulósico é
proveniente da fração celulósica, temos que 50% da celulose
removida nos dois pré-tratamentos foi liberada na forma de gli-
cose durante o pré-tratamento ácido. Portanto, a perda total
deste componente ao final do pré-tratamento foi de 13,5%.
Esta perda se deve a falhas nos processos de preparação e
recuperação da fração sólida após os pré-tratamentos e tam-
bém indica que os processos de pré-tratamento e deslignifi-
cação ainda foram muito drásticos, acarretando uma perda
substancial de celulose por degradação, o que contribuirá para
a diminuição do rendimento global do processo de conversão
de biomassa a etanol. Da mesma forma que o pré-tratamento
ácido diluído não é seletivo para a hemicelulose, sendo que há
degradação de celulose, o processo de deslignificação alca-
lina também não é seletivo para a lignina, sendo que os car-
boidratos, incluindo a celulose, podem ser degradados neste
processo (Fengel e Wegener, 1989).

Pré-hidrólise enzimática do bagaço
de sorgo submetido a diferentes
pré-tratamentos
Para comparar o efeito do pré-tratamento ácido e alca-
lino na hidrólise enzimática do bagaço de sorgo, fez-se um
ensaio nas condições otimizadas, empregando bagaço de
sorgo in natura e celulignina ácida. Estes experimentos
foram realizados juntamente com o ensaio para a validação
da otimização da pré-hidrólise enzimática. Em virtude da
impossibilidade de quantificar a concentração de glicose nos
ensaios com o bagaço de sorgo in natura e com a celulignina
ácida, devido à ausência de água livre, os resultados destes
ensaios estão apresentados na forma de figuras (fig. 7).
Nota-se uma diferença entre a coloração do material in
natura e a do material pré-tratado com ácido. Curreli et al.
(2002) relataram um escurecimento da palha de trigo pré-
tratada com ácido sulfúrico, o que provavelmente pode estar
associado à catálise ácida das ligações do complexo lignina-
carboidrato, bem como à formação de produtos da degradação
de carboidratos.
Com base nesta figura, fica evidente a imprescindibi-
lidade tanto do pré-tratamento ácido quanto do alcalino,
visto que, no ensaio com o bagaço de sorgo in natura, em
que a fibra de celulose está protegida pela hemicelulose e
lignina, e no ensaio com a celulignina ácida, em que a celu-
lose está praticamente envolvida somente pela lignina, não
houve quebra da cadeia de celulose, uma vez que o mate-
rial nos dois experimentos não apresentou alterações no
aspecto ao final do experimento.
Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011
Barcelos et al.
Produção de etanol a partir da
celulignina parcialmente deslignificada
de sorgo sacarino empregando
o processo de sacarificação e
fermentação simultâneas (SSF)
A fim de analisar a produção de etanol pelo processo de
sacarificação e fermentação simultâneas (SSF), foi realizado
um ensaio empregando celulignina parcialmente deslig-
nificada nas condições definidas anteriormente e a linhagem
industrial de Saccharomyces cerevisiae como agente fer-
mentativo (fig. 11).
Este ensaio foi executado em biorreator, com uma re-
lação sólido/líquido em torno de 1/3g/mL e uma carga
enzimática de 32,8FPU/g sólido. O meio reacional foi suple-
mentado com ureia, KH2PO4, extrato de levedura e solução
de sais minerais e ácido cítrico na mesma concentraçao em-
pregada no meio utilizado para o crescimento celular. Devido
à imcompatibilidade da temperatura ótima para sacarificação
e fermentação, a CPD foi submetida a uma pré-hidrólise enz-
imática por 15h a 50°C. Para reduzir problemas relacionados
às limitações difusionais à transferência de massa e calor, a
pré-hidrólise enzimática foi operada em batelada alimentada,
proporcionando uma hidrólise gradual das fibras de celulose.
A carga inicial de sólidos foi de 42% (volume de 560mL de
meio reacional), e a enzima foi alimentada no início da etapa
de pré-hidrólise. À medida que o meio se tornava liquefeito,
foram realizadas alimentações de 25g (massa seca) de CPD,
completando a relação sólido/líquido definida na etapa de
otimização (1/3,33g/mL). Decorridas as 15h de pré-hidrólise,
a temperatura foi ajustada para 37°C, e uma concentração
Figura 7 - Hidrólise enzimática do bagaço de sorgo in
natura (a), celulignina ácida (b) e celulignina parcial-
mente deslignificada (c).
Figure 7 - Enzymatic hydrolysis of sweet sorghum
bagasse in natura (a), acid cellulignin (b) and partially
delignified cellulignin (c).
Figura 7 - Hidrólisis enzimática del orujo de sorgo in na-
tura (a), celulignina ácida (b) y celulignina parcialmente
deslignificada (c).
41
Aproveitamento das frações sacarínea, amilácea e lignocelulósica do sorgo sacarino [Sorghum bicolor...
de 8g.L-1 da linhagem industrial de Saccharomyces cerevisiae
foi adicionada ao processo.
A figura 8 apresenta os perfis de produção de etanol e
consumo de glicose e celobiose durante o processo SSF
em batelada alimentada. A faixa vertical indica a fase de
pré-hidrólise enzimática (15h), após a qual teve início a fase
de sacarificação e fermentação simultâneas. As setas indi-
cam o ponto de perturbação do sistema com alimentação
de CPD (massa seca). Ao final da pré-hidrólise, a concen-
tração de glicose foi de 101,9g.L-1, o que corresponde a uma
eficiência de hidrólise de aproximadamente 41%, enquanto
no ensaio em frascos agitados a eficiência de hidrólise foi
de 33,1%. Este aumento deve-se à redução na limitação
difusional à transferência de massa no experimento em que
a pré-hidrólise enzimática foi conduzida no modo batelada
alimentada, possibilitando maior conversão.
Quanto à etapa de sacarificação e fermentação simul-
tâneas (SSF), uma produção de 84,4g.L-1 de etanol em 36h
de processo (21h de SSF) foi atingida. Esta concentração
corresponde à produtividade volumétrica de 4,02g.L-1.h-1
e a uma eficiência de conversão de celulose em etanol
de 63,4%. Com relação ao perfil de celobiose durante
o SSF, a concentração deste dissacarídeo permaneceu
constante e na ordem de 2g.L-1. Ao longo do processo
fermentativo, nota-se a redução da produtividade volu-
métrica em etanol (QP). Se observarmos a produtividade
42 Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011
Figura 8 - Processo de sacarificação e fermentação
simultâneas (SSF) da celulignina parcialmente deslig-
nificada de bagaço de sorgo.⟶alimentação de 25g
de sólidos; ⟶ alimentação de 10FPU.g-1 celulases.
PHE: pré-hidrólise enzimática; SSF: sacarificação e
fermentação simultâneas.
Figure 8 - Simultaneous Saccharification and Fermen-
tation (SSF) of partially delignified cellulignin of sweet
sorghum bagasse. PHE: Pre Enzymatic Hydrolysis, ⟶
solids feed 25g; ⟶ cellulases feed of 10FPU.g-1.
Figura 8 - Proceso de sacarificación y fermentación
simultáneas (SSF) de la celulignina parcialmente deslig-
nificada de orujo de sorgo. ⟶ alimentación de 25g
de sólidos; ⟶ alimentación de 10FPU.g-1 celulases.
PHE: pré-hidrólisis enzimática; SSF: sacarificación y
fermentación simultáneas.
nas primeiras 12h de fermentação, fase em que a glicose
está prontamente disponível, o valor deste parâmetro
variou de 6g.L-1.h-1 a 8g.L-1.h-1, ou seja, os mesmos ve-
rificados em fermentações industriais de etanol a partir
do caldo de cana no Brasil, que variam entre 5g.L-1.h-1 e
8g.L1.h1. A partir de 12h de fermentação, a taxa de forma-
ção de etanol diminuiu consideravelmente, sendo limitada
pela taxa de hidrólise enzimática, já que a concentração
de glicose foi mantida em níveis baixos. A partir de 54h
de processo (29h de SSF), não houve aumento significa-
tivo na concentração de etanol, sendo que, a maior con-
centração de etanol foi atingida em 70h de processo (55h
de SSF), no valor de 94g.L-1, que corresponde à produti-
vidade volumétrica de 1,71g.L-1.h-1 e a uma conversão de
celulose a etanol de 70,6%.
Estes resultados apresentam um acréscimo de apenas 11%
na concentração de etanol, quando comparados com o resul-
tado obtido em 21h de SSF. Como as velocidades das reações
enzimáticas são influenciadas pela concentração de substrato,
é natural que a velocidade da hidrólise diminua consideravel-
mente à medida que a CPD é consumida. Em decorrência do
consumo de substrato, tem-se o aumento do teor de lignina
no meio reacional, provocando ligações improdutivas entre
este composto polifenólico e as enzimas do complexo celulá-
sico (Maeda, 2010). Para investigar este fato, foi realizada uma
perturbação no sistema, com a adição de uma carga enzimática
de 10FPU.g-1 sólidos (calculada em relação à carga total de CPD

alimentada no processo) em 77h de processo (62h de SSF).
O aumento na concentração de glicose demonstra que a taxa
de hidrólise anterior à alimentação de enzima estava baixa pro-
vavelmente devido às ligações impro­dutivas lignina-enzima.
Também foi possível observar que, mesmo com o aumento
da disponibilidade de glicose no meio reacional, resultante da
hidrólise da celulose, a concentração de etanol permaneceu
estacionária até o final do ensaio. Este fato deve-se provavel-
mente à falta de nutrientes essenciais à levedura, já que, nos
ensaios discutidos anteriormente com esta mesma linhagem,
foi possível constatar maior tolerância desta levedura em rela-
ção à concentração de etanol.
Com base nestes resultados, pode-se alcançar uma mel-
horia no processo com a alimentação de uma carga extra de
enzima quando observada uma redução na taxa de fermen-
tação (consequência da redução da taxa de hidrólise). Outra
alternativa seria incorporar ao meio reacional compostos
adsorventes à lignina, os quais se ligariam a esta, reduzindo
os locais em que as enzimas se ligariam à lignina.
Podemos concluir que são necessárias melhorias em ter-
mos de diminuição da carga enzimática e aumento da conver-
são de celulose a etanol. No entanto, os resultados obtidos neste
estudo, utilizando processo SSF alimentado, são bastante promis­
sores e indicam o grande potencial do bagaço de sorgo sacarino.
Além disso, uma alta concentração de etanol foi obtida conco-
mitantemente a uma alta produtividade volumétrica, requisitos
imprescindíveis à viabilidade econômica em processos que en-
volvam produtos de baixo valor agregado.
Considerações finais
Com base nos resultados obtidos neste trabalho, em
todas as etapas, foi realizado um balanço material para
avaliar o potencial do sorgo sacarino para a produção de
etanol e a determinação do rendimento em etanol a partir
das frações sacarínea, amilácea e lignocelulósica do sorgo
sacarino. Para o cálculo do potencial teórico do sorgo saca-
rino para a produção de etanol, foi considerada uma eficiên-
cia de 100% em todas as etapas (sem perdas). Em relação
ao potencial dos grãos de sorgo para a produção de etanol,
podemos concluir que, a partir de 1ton de grãos, com teor
Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011
Barcelos et al.
de amido de 68% (massa úmida), é possível produzir 480L
de etanol. Portanto, nas condições empregadas neste es-
tudo para a produção de etanol a partir dos grãos de sorgo,
foi possível obter uma eficiência global de 99%.
Analisando-se o balanço material para a produção de
etanol a partir do caldo de sorgo sacarino, conclui-se que
com 1ton de caldo foi possível produzir 85L de etanol.
Em relação ao potencial do caldo de sorgo para a produção
de etanol, podemos concluir que com 1ton de caldo, com
uma concentração total de açúcares de 162g.L-1, é possível
produzir 98L de etanol. No entanto, se enzimas amilolí­
ticas forem adicionadas ao caldo de sorgo, a concentração
de açúcares aumentaria para 189g.L-1. Portanto, o poten-
cial para a produção de etanol seria de 113L de etanol.ton-1
caldo de sorgo. Desta forma, as condições aplicadas neste
trabalho resultaram em 87,5% do máximo obtenível.
Em relação ao potencial do bagaço de sorgo para a pro-
dução de etanol, constata-se que com 1ton de bagaço é pos-
sível obter 288L de etanol a partir da fração celulósica e 142L
de etanol a partir da fração hemicelulósica. O rendimento
em etanol obtido neste trabalho foi de 160L/ton de sorgo
sacarino, totalizando 13.600L de etanol/ha.safra. Este valor
corres­ponde a 79,1% do potencial teórico.
Não há dúvida de que a produção de etanol a partir
de cana é um complexo produtivo impressionante, porém
com a matriz energética centrada apenas em uma cultura.
Portanto, é preciso buscar outras fontes de matérias-
primas para produção de etanol, visando à sustentabi­
lidade e à consolidação do conceito de energia renovável.
O Brasil, além de concentrar grande número de pequenos,
médios e grandes produtores, apresenta uma diversidade
de condições ambientais que permitem, ao se explorar o
potencial de matérias-primas renováveis e com aptidão
regional, promover a descentralização da produção de etanol.
Altas concentrações de açúcares foram obtidas no processo
de hidrólise enzimática do amido dos grãos de sorgo, empre-
gando baixas cargas enzimáticas e tempos de hidrólise menores
do que aqueles reportados na literatura. Além disso, a produção
de bioetanol de material amiláceo (milho) também é um pro-
cesso maduro e dominado na indústria de produção de etanol
em outros países. Sua similaridade com o processo de produção
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Aproveitamento das frações sacarínea, amilácea e lignocelulósica do sorgo sacarino [Sorghum bicolor...
de etanol de sorgo permite que seja implantado nas usinas bra-
sileiras sem necessidade de grandes adaptações nas plantas
industriais, particularmente em períodos de entressafra.
O mesmo se aplica ao caldo de sorgo, visto que a concentração
deste é bastante similar à do caldo de cana-de-açúcar.
As concentrações de etanol atingidas na fermentação das
frações hemicelulósicas e celulósicas sinalizam uma possível
utilização deste material para produção de etanol de segunda
geração em escala produtiva. No entanto, devem-se buscar
melhorias para aumentar o rendimento final, com o uso de um
eficiente processo de separação da fração líquida e sólida após
os pré-tratamentos.
O sorgo sacarino possui alto potencial, dos pontos de vista
agronômico e industrial, como produtor de energia reno­vável,
devido a sua alta produtividade de biomassa por hectare e
Referências Bibliográficas
n ANTUNES, J. G. Bioconversão de D-xilose a etanol por células de
Pichia stipitis. 1997. Dissertação (Mestrado) – Escola de Química,
Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 1997.
n BARCELOS, C. A. Aproveitamento das frações sacarínea,
amilácea e lignocelulósica do sorgo sacarino [Sorghum bicolor
(L.) Moench] para a produção de bioetanol. 2012. 334 p. Tese
(Doutorado) – Escola de Química, Universidade Federal do Rio de
Janeiro, Rio de Janeiro, 2012.
n BETANCUR, G. J. V. Avanços em biotecnologia de hemicelulose
para produção de etanol por Pichia stipitis. 2005. Dissertação
(Mestrado) – Escola de Química, Universidade Federal do Rio de
Janeiro, Rio de Janeiro, 2005.
n BETANCUR, G. J. V. Otimização do pré-tratamento ácido de bagaço de
cana-de-açúcar e avaliação da fermentabilidade do hidrolisado hemice-
lulósico para a produção de etanol de segunda geração. 2010. 174 p. Tese
(Doutorado) – Escola de Química, Universidade Federal do Rio de Janeiro,
Rio de Janeiro, 2010.
n CURRELI, N.; AGELLI, M.; PISU, B.; RESCIGNO, A.; SANJUST, E.; RINALDI,
A. Complete and efficient enzymic hydrolysis of pretreated wheat straw.
Process Biochemistry, Amsterdam, v.37, n. 9, p. 937-941, Apr. 2002.
44 Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011
crescimento em regiões com diferentes condições climáticas.
Além disso, as culturas de milho e cana-de-açúcar causam
mais erosões ao solo (Pimentel, 2003).
A produção de etanol celulósico com alta eficiência e sus-
tentabilidade não será tarefa de poucos, mas resultará da inte­
gração entre diversos grupos de pesquisa especializados em
diferentes áreas da Fisiologia, Ecologia, Bioquímica, Genética,
Enzimologia, Física e Engenharia, entre outras.
O Brasil está diante de uma mudança no modo de produção
rara ou talvez inédita na história. Podemos desenvolver uma tec-
nologia de alto valor agregado e ao mesmo tempo usá-la para
recuperar a biodiversidade, integrando sustentabilidade e desen-
volvimento tecnológico.
n FENGEL, D.; WEGENER, G. Wood: chemistry, ultrastructure and reactions.
Berlin: Walter de Gruyter, 1989. 613 p.
n JEFFRIES, T. W.; GRIGORIEV, I. V.; GRIMWOOD, J.; LAPLAZA, J. M.; AERTS,
A.; SALAMOV, A.; SCHMUTZ, J.; LINDQUIST, E.; DEHAL, P.; SHAPIRO, H.;
JIN, Y. S.; PASSOTH, V.; RICHARDSON, P. M. Genome sequence of the ligno­
cellulose-bioconverting and xylosefermenting yeast Pichia stipitis. Nature
Biotechnology, London, v. 25, n. 3, p. 319-326, Mar. 2007.
n INGLEDEW, W. M. Alcohol production by Saccharomyces cerevisiae: a yeast
primer. In: JACQUES, K. A.; LYONS, T. P.; KELSALL, D.R. (Ed.). The alcohol text-
book. 3. ed. United Kingdom: Nottingham University Press, 1999. p. 49-87.
n LAMNET, J. Global multi-stakeholder networks linking knowledge and policy
in support of sustainable development. In: JOHANNESBURG SUMMIT, 2002,
Johannesburg. Position paper… Sweden: CARENSA, 2002.
n LIPINSKI, E. S.; KRESOVICH, S. Sugar crops as a solar energy converters.
Experimentia, Germany, v. 38, n. 1, p. 13-18, Jan. 1982.
n MAEDA, R. N. Produção de celulases por Penicillium funiculosum em
fermentação submersa de bagaço de cana pré-tratado e sua aplicação
na produção de etanol de segunda geração. 2010. Tese (Doutorado) –
Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2010.

n MAEDA, R. N.; SERPA, V. I.; ROCHA, V. A. L.; MESQUITA, R. A.
A.; SANTA ANNA, L. M. M.; CASTRO, A. M.; DRIEMEIRD, C. E.;
PEREIRA JR., N.; POLIKARPOV, I. Enzymatic hydrolysis of pretreated
sugar cane bagasse using Penicillium funiculosum and Trichoderma
harzianum celulases. Process Biochemistry, Amsterdam, v. 46, n. 5,
p. 1196-1201, May 2011.
n NASS, L. L.; PEREIRA, P. A. A.; ELLIS, D. Biofuels in Brazil: an overview. Crop
Science, Madison, v. 47, n. 6, p. 2228-2237, Nov. 2007. Special report-biofuels.
n ÖHGREN, K.; BURA. R.; SADDLER, J.; ZACCHI, G. Effect of hemicellulose
and lignin removal on enzymatic hydrolysis of steam pretreated corn stover.
Bioresource Technology, Amsterdam, v. 98, n. 13, p. 2503–2510, Sept. 2007.
n OLIVEIRA, L. C. Indústria de etanol no Brasil: uma estrutura de
mercado em mudança. 2009. 182 p. Dissertação (Mestrado) – Setor
de Ciências Sociais Aplicadas, Universidade Federal do Paraná,
Curitiba, 2009.
n PIMENTEL D. Ethanol fuels: energy balance, economics, and envi-
ronmental impacts are negative. Natural Resources Research, New
York, v. 12, n. 2, p. 127-134, June 2003.
n ROONEY, L. W., PFLUGFELDER, R. L. Factors affecting starch digestibility
with special emphasis on sorghum and corn. Journal of Animal Science,
Champaign, v. 63, n. 5, p. 1607–1623, Nov. 1986.
n SLUITER, A.; HAMES, B.; RUIZ, R.; SCARLATA, C.; SLUITER, J.;
TEMPLETON, D.; CROCKER, D. Determination of structural carbo-
hydrates and lignin in biomass: laboratory analytical procedure.
Webgrafia
n EMBRAPA. Sorgo Sacarino: uma alternativa doce na controvérsia de
alimentos versus combustíveis – Parte II. Rio de Janeiro: Embrapa, 2011.
Disponível em: <http://mybelojardim.com/sorgo-sacarino-uma-alternativa-
doce-na-controversia-de-alimentos-combustiveis-%E2%80%93-parte-ii/>.
Acesso em: 14 out. 2011.
n SORGO Sacarino: uma alternativa doce na controvérsia de alimentos ver-
sus combustíveis - Parte II. MyBeloJardim - Conhecimento Sustentável.
Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011
Barcelos et al.
Colorado: National Renewable Energy Laboratory, 2008. Technical
Report. NREL/TP-510-42618. 18 p.
n SOUTHGATE, D. A. T. Determination of food carbohydrates. London:
Elsevier Applied Science, 1991. 177 p.
n VÁSQUEZ, M. P. Desenvolvimento de processo de hidrólise enzimática e
fermentação simultânea para a produção de etanol a partir de bagaço de
cana-de-açúcar. 2007. Tese (Doutorado) – Escola de Química, Universidade
Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2007.
n VERVERIS, C.; GEORGHIOU, K.; DANIELIDIS, D.; HATZINIKOLAOU, D. G.;
SANTAS, P.; SANTAS, R.; CORLETI, V. Cellulose, hemicelluloses, lignin and
ash content of some organic materials and their suitability for use as paper
pulp supplements. Bioresource Technology, Amsterdam, v. 98, n. 2,
p. 296-301, Jan. 2007.
n ZANIN, G. M.; SANTANA, C. C.; BOM, E. P. S.; GIORDANO, R. C. L.; MORAIS,
F. F.; ANDRIETTA, S. R. Brazilian bioethanol program. Applied Biochemistry
and Biotechnology, Bourns Hall, v. 84-86, n. 1-9, p. 1147-1161, Mar. 2000.
n ZHANG, X.; SHEN, Y.; SHI, W.; BAO, X. Ethanolic cofermentation with glu-
cose and xylose by the recombinant industrial strain Saccharomyces cere-
visiae NAN-127 and the effect of furfural on xylitol production. Bioresource
Technology, Amsterdam, v. 101, n. 18, p. 7093 – 7099, Sept. 2010.
n ZHOU, G., KRESTA, S. M. Correlation of Mean Drop Size and Minimum
Drop Size with the Turbulence Energy Dissipation and the Flow in
Agitated Tank. Chemistry Engineering Science, Amsterdam, v. 53,
n. 11, p. 2063-2079, June 1998.
2011. Disponível em: <http://mybelojardim.com/sorgo-sacarino-uma-al-
ternativa-doce-na-controversia-de-alimentos-combustiveis-parte-ii/>.
Acesso em: 14 out. 2011.
n JANK, M. S. A competitividade do etanol brasileiro. São Paulo: UNICA -
União da Indústria de Cana-de-Açúcar, 2009. Disponível em: <http://www.
senado.gov.br/sf/comissoes/ci/ap/AP20090831_Comissao_Infraestrutura_
Marcos_20_Jank_(res).pdf>. Acesso em: 07 fev. 2012.
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Aproveitamento das frações sacarínea, amilácea e lignocelulósica do sorgo sacarino [Sorghum bicolor...
Autores
Carolina Araújo Barcelos
Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)
Escola de Química
ninabarcelos@hotmail.com
Carolina Araújo Barcelos possui graduação em Engenharia
Química pela Universidade Federal de Uberlândia (UFU), em
2007 e recebeu o título de Doutora em Tecnologia de Processos
Químicos e Bioquímicos pela Universidade Federal do Rio de
Janeiro (UFRJ), em 2012. Atua na área de Desenvolvimento
de Bioprocessos e Bioprodutos, com ênfase em conversão de
Biomassa (sacarínea, amilácea e lignocelulósica) segundo a
plataforma bioquímica do conceito de Biorrefinaria.
Lidia Maria Melo Santa Anna
Centro de Pesquisas da Petrobras (Cenpes)
P&D de Gás, Energia e Desenvolvimento
Sustentável
Gerência de Biotecnologia
lidia@petrobras.com.br
Lidia Maria Melo Santa Anna, consultora sênior em
Biotecnologia do Cenpes, atua na Empresa há 34 anos,
na área de Bioprocessos em Biodegradação de Óleos
e Combustíveis, Fermentação Alcoólica e Produção de
Bioprodutos, como Bioetanol, Biossurfactantes, Enzimas,
Ácidos Orgânicos e Biossolventes. Mestre em Ciências
Farmacêuticas pela Universidade Federal do Rio de Janeiro
(UFRJ), em 2000 e Doutora em Tecnologia de Processos
Químicos e Bioquímicos pela mesma instituição, em 2005.
Coordena e pesquisa há oito anos projetos de P&D voltados
para a área de Produção de Etanol de Segunda Geração via
Bioquímica e ampliou o conceito de Biorrefinaria de Segunda
Geração a novos produtos químicos, atendendo a diferentes
segmentos da Companhia.
46 Boletim Técnico da Petrobras, Rio de Janeiro, v. 54, n. 3, p. 29-46, dez. 2011
Roberto Nobuyuki Maeda
Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)
Escola de Química
rmaeda76@gmail.com
Roberto Nobuyuki Maeda concluiu o doutorado em Tecnologia
de Processos Químicos e Bioquímicos pela Universidade Federal
do Rio de Janeiro (UFRJ), em 2010; mestrado em Ciência de
Alimentos pela Universidade Federal do Amazonas (UFAM), em
2004. Publicou artigos em periódicos especializados e trabalhos
em anais de eventos. Possui dois produtos tecnológicos e dois
processos patenteados. Participou de eventos no Brasil. Orientou
trabalhos de iniciação científica na área de Ciência e Tecnologia
de Alimentos e Desenvolvimento de Bioprocessos. Recebeu
prêmios e/ou homenagens. Atua na área de Desenvolvimento de
Bioprocessos para Produção de Enzimas Microbianas e Bioetanol.
Nei Pereira Junior
Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)
Escola de Química
nei@eq.ufrj.br
Nei Pereira Junior é professor da Escola de Química da UFRJ,
onde se formou em engenheiro químico em 1977, Mestre em
Tecnologia de Processos Bioquímicos em 1982 e Doutor em
Biotecnologia (The Victoria University of Manchester, UK), em
1991. Ingressou como docente na Escola de Química da UFRJ
em 1978, na qual atua no ensino de graduação, pós-gradua-
ção, pesquisa e extensão. Coordena trabalhos de pesquisa aca-
dêmica e tecnológica nos Laboratórios de Desenvolvimento de
Bioprocessos e Bioprodutos do Departamento de Engenharia
Bioquímica, em temáticas variadas. Possui diversas publicações
em periódicos científicos internacional e nacional e patentes.
Foi agraciado com os prêmios: Petrobras Inventor 2005, 2006,
2007, 2009 e 2011; Tese Ouro (2006) e Tese Diamante (2010);
Prêmio Abiquim Pesquisador de Destaque 2006 e Cientista do
Nosso Estado (Faperj, 2007 e 2008).