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4. Escreva a seqüência de bases da fita complementar do DNA dupla fita que apresenta
uma fita simples com a seguinte seqüência: (5') ATGCCGTATGCATTGCATTC (3')
Exprima, em porcentagem, a composição de bases do DNA de fita dupla.
(3') TACGGCATACGTAACGTAAG (5')
Total de bases das 2 fitas = 40
Então, 40 = 100%. Aplicando a regra de 3, teremos:
%Adenina= %Timina
40 - 100% X= 27,5% de cada
11 - X%
Guanina= %Citosina
40 - 100% X= 22,5% de cada
9 -X
6. Uma molécula de ácido nucleico tem a composição de bases abaixo. O que você pode
afirmar sobre esta molécula? C = 24,1% G = 18,5% T = 24,6% A = 32,8%
É uma molécula de DNA fita simples. Como tem timina, é DNA; porém no DNA fita
dupla as quantidades de guanina e citosina e de adenina e timina seriam iguais.
7. Explique por que ácidos nucleicos são desnaturados quando submetidos a alta
temperatura ou pHs extremos. Uma molécula de DNA desnaturada por aquecimento
pode ser renaturada? Como?
As duas fitas da dupla hélice do DNA podem ser reversivelmente separadas por altas
temperaturas ou por exposição a pH elevado (pH 13). Isto porque ocorre ruptura das pontes de
hidrogênio entre os pares de bases. Esse processo é denominado desnaturação. Durante a
desnaturação nenhuma ligação covalente é desfeita, ficando, portanto, as duas fitas de DNA
separadas. Quando o pH e a temperatura voltam ao normal, as duas fitas de DNA
espontaneamente se hibridizam, formando novamente o DNA dupla fita, o que chamamos de
renaturação. Este processo envolve duas etapas: a primeira é mais lenta pois envolve o
encontro casual das fitas complementares de DNA, formando um curto segmento de dupla
hélice. A segunda etapa é mais rápida e envolve a formação das ligações de hidrogênio entre
as bases complementares reconstruindo a conformação tridimensional.
Os agentes desnaturantes têm maior facilidade em romper as duas pontes de
hidrogênio que ligam as bases A e T, do que as três pontes de hidrogênio que ligam as bases
C e G. Portanto, são necessárias temperaturas mais elevadas, pH mais alcalino e maiores
concentrações de agentes desnaturantes para romper as bases C e G, doque as bases A e T.
LISTA 2
1. Cite os principais tipos de RNA encontrados nas células e como eles se diferenciam
quanto à estrutura, tamanho, abundância e função.
tRNA: Aproximadamente 15% do total de RNA celular correspondem aos tRNAs. Para
desempenhar seu papel na síntese de proteínas, eles ativam os aminoácidos que serão
transportados para os ribossomos e transferem-nos para a cadeia polipeptídica nascente; e
reconhecem a informação contida nos códons (seqüência de três nucleotídeos adjacentes em
um ácido nucléico, que codifica um aminoácido específico) do mRNA, assegurando que o
aminoácido correto seja incorporado à cadeia peptídica crescente. Os tRNAs são relativamente
pequenos. Apresentam uma estrutura secundária semelhante a uma folha de trevo.
rRNA: representa cerca de 80% do RNA presente na célula. É o RNA de maior peso
molecular e constituinte majoritário do ribossomo, organóide relacionado à síntese de proteínas
na célula. Os ribossomos são sempre constituídos de duas subunidades de tamanhos
diferentes. Cada subunidade é formada de uma a três moléculas de rRNA e inúmeras proteínas
diferentes. Os rRNAs possuem estrutura estável devido à associação com as proteínas
ribossomais.
mRNA: são os menos abundantes, entre 5 e 10% do RNA celular total. As seqüências
de bases do mRNA determinarão a ordem dos aminoácidos nas proteínas sintetizadas nos
ribossomos. Apresentam muita variação no tamanho, pois eles codificam proteínas
(determinam a seqüência de aminoácidos nas cadeias polipeptídicas) dos mais diversos
tamanhos. Responsáveis pela transferência de informação do DNA até ao local de síntese de
proteínas, na célula. Durante a transcrição a RNA-polimerase faz a cópia de um gene do DNA
para o mRNA.
2. Após a infecção de E. coli com o bacteriófago T2, quais dos seguintes eventos
ocorrem e em que ordem?
(a) novas proteínas são sintetizadas
(b) novos RNAs são sintetizados
(c) novos ribossomos são sintetizados
(d) novos RNAs se associam a novos ribossomos
(e) novos RNAs se associam a ribossomos pré-existentes
b-e-a
LISTA 3
LISTA 4
3. Visto que U pareia com A tão bem quanto T pareia com A, por que somente T é
encontrado no DNA? Como U é retirado do DNA?
Porque a uridina (nucleotídeo composto de uracila) não é capaz de se ligar à DNA
polimerase, a enzima que constrói as fitas de DNA. Os ribonucleotídeos, inclusive a uridina,
possuem um grupo hidroxila (OH) na posição 2' da ribose, que não está presente nos
nucleotídeos do DNA (conhecidos como desoxirribonucleotídeos). Esse grupo hidroxila a mais
torna a molécula muito grande para se encaixar no sítio da DNA polimerase.
A Timina é praticamente igual a Uracila quanto a fórmula estrutural molecular. Além
disso, Timina, Citosina e Uracila são bases nitrogenadas do tipo pirimidina, sendo muito
parecidas. Se tivesse Uracila no DNA, consequentemente teríamos vários erros durante a
replicação da molécula.
A DNA glicosilase cliva a ligação da base nitrogenada com a desoxirribose, formando
um gap no interior do DNA, A endonuclease reconhece o gap e recruta a fosfodiesterase,
clivando a desoxirribose que o recobre. A polimerase adociona então a base correta e a ligase
une o fragmento pela última ligação fosfodiéster.
5. Explique como algumas cepas da bactéria Salmonella são usadas para detectar
substâncias carcinogênicas. Por que o extrato de fígado de mamífero está envolvido no
teste?
Algumas cepas da bactéria Salmonella mutagênica não produzem a histidina que é
responsável pelo seu crescimento. Por esse motivo, elas são usadas para detectar substâncias
carcinôgênicas. No experimento, adiciona-se à Salmonella mutada concentrações da
substância a ser testada e também de histidina. Se neste primeiro teste não se verificar o
crescimento de Salmonella é adicionado o extrato de fígado. O extrato de fígado está envolvido
por muitas substâncias que ao passar pelo fígado se tornam carcinogênicas devido às diversas
transformações que ocorrem com elas.
6. O que são transposons. Exemplifique algum tipo de alteração gênica que eles podem
causar?
Pedaços lineares pequenos de DNA que se movem de um sítio para outro no DNA
celular ou entre o DNA de bactérias, de plasmídeos e de bacteriófagos. São denominados de
"genes saltadores". Não são capazes de se duplicar independentemente. Codificam enzimas
relacionadas à resistência a drogas e podem causar mutações. Em sua terminação possuem
sequências palindrômicas.
Transposons podem causar mutações gênicas através da inserção (adição) de
nucleotídeo(s).
7. Descreva as condições necessárias para que duas bactérias conjuguem com sucesso.
O que é uma célula Hfr (alta [High] frequência de recombinação)? Qual a diferença entre
fator F e F'.
8. Suponha que uma cepa Hfr de E. coli sensível à estreptomicina (StrS ), capaz de
sintetizar os aminoácidos Leu e His, é misturada em meio de cultura com uma cepa F-
que é resistente à estreptomicina e incapaz de sintetizar Leu e His. Após certo tempo, a
conjugação é interrompida, colocando-se a mistura em um liquidificador e transferindo-
se amostras da cultura para placas seletivas para testar se houve ou não conjugação.
(a) Ocorre algum crescimento bacteriano quando as bactérias são transferidas para um
meio contendo estreptomicina e na ausência de Leu e His? Explique este resultado.
(b) Suponha que você repetiu o experimento com menor tempo de incubação antes de
colocar a mistura no liquidificador. Explique porque agora as bactérias resistentes à
estreptomicina crescem na ausência do Leu, mas necessitam de His.