CLARETIANO - CENTRO UNIVERSITARIO

CURSO DE GRADUACAO EM BIOMEDICINA - BACHAREL

PROFESSOR: CÁSSIO MEIRA ALENCAR
ALUNOS: BRENNA LOPES SILVA - 8033908
IAN HENRIQUE ANDRADE CARAGEORGE - 8027396

RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA DE HEMTOLOGIA CLÍNICA E

IMUNOLOGIA CLÍNICA: ELISA CHIKUNGUNYA

BOA VISTA-RR
2019
 BRENNA LOPES SILVA

IAN HENRIQUE ANDRADE CARAGEORGE

RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA DE HEMTOLOGIA CLÍNICA E

IMUNOLOGIA CLÍNICA: ELISA CHIKUNGUNYA

Relatório da aula prática da disciplina

de Imunológia Clínica e Hematologia
Clínica do curso de Biomedicina do
Centro Universitário Claretiano.

BOA VISTA-RR

2019
RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA DE HEMTOLOGIA CLÍNICA E
IMUNOLOGIA CLÍNICA: ELISA CHIKUNGUNYA (IgM)

Objetivo: A aula prática visa ensinar e demonstrar a técnica de Elisa, tendo em

vista que houve uma troca no tempo que de 60 minutos foi para 30 minutos,
dessa forma o resultado é apenas para demonstração didática no laboratório.

Material Utilizado
- Microplaca
- Kit Chikungunya para Elisa IgM
- Pipeta volumétrica
- Pipeta multicanal
- Ponteiras
- Luvas
- Tubos

Preparação da amostra

Foi utilizado 1ml de diluente para 10μl de amostra do paciente (soro),

homogeneizar logo após a técnica foi realizada antes do inicio da aula pelo
professor ( Paciente 1- 3 alíquotas e o Paciente 2- 2 alíquotas). Logo em
seguida os poços da microplaca foram preenchidos com 100μl com a pipeta
multicanal conforme a tabela dada pelo professor, logo após o preenchimento
foi colocada uma fita para evitar a evaporação da amostra, em seguida foi
levada por 30 minutos a 37º C na incubadora (conforme a bula o tempo
determinado é de 60 minutos, mas como na aula o objetivo era demonstrar a
técnica de Elisa e ensinar como realizar esse procedimento, além do tempo ser
muito pouco, foram apenas 30 minutos, como consequência a titulação fica
mais baixa). Após o cumprimento dos 30 minutos a película protetora foi
retirada e os poços foram esvaziados e lavados 3x, utilizando para cada
lavagem 300μl de tampão de lavagem pronto.
A lavagem foi realizada conforme o indicado na bula pelo fabricante foi
colocado o tampão nos poços durante 30 segundos, em seguida todo líquido
(tampão) foi desprezado e depois a microplaca foi batida em um papel
absorvente para remover todo resíduo do tampão. Depois de completar as três
lavagens foi pipetado 100μl do conjugado em cada poço da microplaca, em
seguida encubada por 30 minutos em temperatura ambiente e depois lavar
novamente conforme a lavagem anterior, o passo seguinte é pipetar 100μl da
solução substrato/cromógeno em cada um dos poços da microplaca e encubar
por 15 minutos em temperatura ambiente, protegida da luz direta. Ao finalizar
os 15 minutos foi pipetado 100μl de solução de parada em cada um dos poços
da microplaca na mesma ordem e na mesma velocidade que a solução
substrato/cromógeno foi induzida. E como último passo levar as amostras para
realizar a leitura no aparelho.

Tabela com os resultados obtidos após a leitura da amostra pelo

aparelho.
Resultado 1
Cal A 0,576
Negativo B 0,338
Positivo C 0,823
Paciente 1 D Negativo 0,329
Paciente 1 E Negativo 0,302
Paciente 1 F Negativo 0,243
Paciente 2 G Negativo 0,359
Paciente 2 H Negativo 0,264

Cálculos para a obtenção do resultado manualmente

CAL 0,576
X por 1,1 obtém o resultado positivo (+)
X por 0,8 obtém o resultado negativo (-)

- 0,576 x 1,1 = 0,633 (valores maiores que 0,633 são +)

- 0,576 x 0,8 = 0,460 (valores menores que 0,460 são –)
Os valores entre 0,460 e 0,633 são considerados indeterminado.
Dessa forma, os resultados dos pacientes foram negativos, pois todos estão
abaixo de 0,460.