Procedimento para uso de Alpiste como bolo para inoculação

1. O procedimento pode ser realizado com qualquer quantidade de alpiste. Foi utilizado
uma embalagem de 250 gr, comprada em agropecuária.
2. Comprei também 1 pastilha de tricloro para fazer a esterilização, apenas para
prevenção, a organismos que possam sobreviver ao processo de esterilização por
temperatura.
3. Numa panela, adicionar água necessária para cobrir todo o alpiste. Devido ao alpiste
ser muito pequeno e de fácil dispersão, eu coloquei todo o conteúdo da embalagem
(250g) dentro de uma fronha, fechei a boca com elástico. Quando a água começar a
ferver, adicionar uma pequena pedra de pastilha tricloro (1cmx1cm
aproximadamente), quando a água começar a ferver, adicionar a fronha com os
alpistes e deixar submerso na água fervente por aproximadamente 20 minutos no
mínimo, enquanto a panela ainda está com o fogo ligado.
4. Após decorrido 20 minutos, retirar a fronha com os alpiste da água fervente e deixa
resfriar em ambiente natural, colocar num local onde a água possa escorrer, como por
exemplo, um escorredor de macarrão.
5. Após a água escorrer, abrir a fronha, e passar todo o alpiste para uma embalagem
previamente esterelizada, para que possa ser levado ao freezer. Recomendo embalar a
embalagem com plástico tipo filme, para que o alpiste não absorva odor nem sabores
que possam estar presente na geladeira.

Figura 1 - Alpiste conservado no freezer.

6. Deixar descansar no freezer por pelo menos 24 horas.

7. No dia seguinte, pegar a panela novamente, encher com água e deixar ferver. Quando
a água estiver fervendo, retirar o alpiste do freezer, colocar dentro da fronha, amarrar
a boca com elástico e jogar imediatamente na água fervente. Desta forma, com o
 choque térmico garantiremos que todas as bactérias que sobreviveram ao tricloro,
sejam efetivamente eliminadas. Deixar na água fervente por 1 hora.
8. Após decorrido 1 hora, deixar a fronha com o alpiste escorrer, e quando estiver quase
enxuta (aproximadamente 1 hora), abrir a fronha e despejar no pote que q será
utilizado para a inoculação. Lembrando que o pote que será usado para inoculação,
deve ser esterilizado, no meu caso, fiz o processo no dia anterior e deixei o pote e as
tampas em molho no tricloro.
9. Colocar o alpiste no vidro esterilizado, tampar com microporo. No meu caso, estou
utilizando uma microporo que tem largura de 10cm, o suficiente para cobrir toda a
boca do vidro. Por segurança, adicionei mais uma camada de micriporo, na direção
oposto, formando um “X”. Lembrando que todo o manuseio foi realizado com luvas
cirúrgicas embebidas em alcool 70.
10. Para que a micropora não absorva água durante o ultimo processo de esterilização na
panela de pressão, eu cobri toda a tampa do vidro com folha de alumínio.
11. Colocar um pano no fundo da panela de pressão, para que o calor não entre em
contato diretamente com o vidro. Adicionar água para cobrir parcialmente o vidro.
Tampar a panela de pressão, e deixar por 2 horas.
12. Após o término das 2 horas, desligar o fogo e deixar que a panela perca a pressão
naturalmente. Se for o caso, deixe de um dia para outro.
13. Agora o vidro está lacrado, esterilizado e livre de contaminantes. Com o vidro frio, e
descansado, pode ser feito a inoculação dos esporos, utilizando uma seringa. Para isso,
retirar o alumínio, e furar com a agulha da seringa em 4 posições, depositando o
esporos na lateral e no centro. Antes de furar, esterilizar a agulha, com uma chama de
maçarico ou isqueiro. Não balançar o vidro após a inoculação.
14. Após a inoculação, conservar no escuro em temperatura entre 26 °C á 29°C.
15. O tempo de incubação pode chegar á 20 dias, para colonização total.

Figura 2 - Bolo após 15 dias de inoculação.