PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO – POP POP

COLORAÇÃO METODO DE GRAM N° 001

ELABORADO POR: APROVADO POR: REVISÃO:
ALEXANDER
MARTINS LUCIENY FARIA VERSÃO: 01 01.
JORGE GUERRA SOUZA 01.
JOSILENE SILVA
MICHELLE RUSSEL 01.
TATIANE GIL 01.
DATA: 14/04/2020 DATA: PÁGINAS: 1/4
01.
01.
SUMÁRIO

Sumário
01. SUMÁRIO..............................................................................................................................................1
02. OBJETIVO..............................................................................................................................................2
03. COMPETÊNCIAS E RESPONSABILIDADES....................................................................................2
04. DEFINIÇÕES.........................................................................................................................................2
05. SIGLAS...................................................................................................................................................2
06. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS.......................................................................................................2
6.1 Materiais...................................................................................................................................................2
6.2 Reagentes.................................................................................................................................................3
6.3 Equipamento............................................................................................................................................3
0.7 PROCEDIMENTOS....................................................................................................................................3
7.1 Desinfecção da bancada com álcool 70%................................................................................................3
7.2. Preparação do esfregaço da cultura bacteriana em meio líquido............................................................3
7.3. Preparação do esfregaço da cultura bacteriana em meio sólido..............................................................3
7.4 Coloração de Gram..................................................................................................................................3
07. RESULTADO ESPERADO...................................................................................................................4
08. REFERÊNCIA........................................................................................................................................4

ELABORADO POR: JORGE GUERRA REVISADO POR: APROVADO:

DATA: 14/04/2020 DATA; DATA:
RUBRICA: RUBRICA: RUBRICA:
Av. Dr. Mario Guimarães, 894 - Centro, Nova Iguaçu - RJ, 26255-230 – TEL: (21-3219-4040)
 Microbiologia, Imunologia e Parasitologia Geral - UNIGRANRIO
CÓDIGO DO VERSÃO ARQUIVO PÁGINA MANUAL
DOCUMENTO 01 ELETRONICO 02/04 SEÇÃO 01
POP NI 000 POP NI 000.PDF REQUISITO 4.2
ELABORAÇÃO DE MANUAIS, PROCEDIMENTOS OPERACIONAIS PADRÃO E INSTRUÇÃO DE TRABALHO.

02. OBJETIVO
Este POP estabelece critérios e procedimentos cuja finalidade seja aplicar a técnica de
coloração de Gram para a identificação taxonômica e morfológica de espécies bacterianas.

03. COMPETÊNCIAS E RESPONSABILIDADES

ESTE PROCEDIMENTO TEM COMO RESPONSÁVEIS OS ALUNOS DO 3° PERÍODO DO CURSO
DE FARMÁCIA E NUTRIÇÃO:
ALEXANDER SILVA MARTINS – 4207993
JORGE FERNANDO CABRAL GUERRA – 4207990
JOSILENE SOARES SILVA - 4903735
MICHELLE RUSSELL - 4208063
TATIANE CARVALHO - 4208020

04. DEFINIÇÕES
A técnica de coloração de Gram é baseada em uma coloração diferencial que permite
distinguir os dois principais grupos de bactérias por microscopia óptica. Esta técnica permite
a distinção entre bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Esse método se refere às
diferenças na composição e espessura da parede celular de bactérias. As Gram-positivas
apresentam uma espessa camada de peptidoglicano formando uma estrutura rígida. As Gram
– negativas apresentam uma fina camada de peptidoglicano. Dessa forma as bactérias Gram-
positivas retêm o complexo cristal-violeta-iodo devido a maior espessura da parede celular e
as bactérias Gram-negativas não retêm o complexo devido a parede celular ser delgada.
Essas características determinam e direcionam a classificação das espécies bactérias.

05. SIGLAS
POP – PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO

06. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

6.1 Materiais
- Alça de níquel cromo
- Cabo de Koller
- Lâminas para microscópio óptico
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- Bico de Bunsen
- Lápis marcador

6.2 Reagentes
- Água
- Cristal violeta
- Fucsina ou safranina
- Lugol
- Álcool- acetona
6.3 Equipamento
- Microscópio óptico

0.7 PROCEDIMENTOS
7.1 Desinfecção da bancada com álcool 70%

7.2. Preparação do esfregaço da cultura bacteriana em meio líquido

 Realizar a técnica em condições assépticas

 Transferir de duas a três alíquotas de cultura bacteriana do meio líquido

 Espalhar as alíquotas sobre a lâmina com movimentos circulares

 Secar o esfregaço em temperatura ambiente

 Fixar o esfregaço na chama do bico de bunsen

7.3. Preparação do esfregaço da cultura bacteriana em meio sólido

 Realizar a técnica em condições assépticas

 Coletar de duas a três colônias do meio de cultura sólido

 Dissolver o inóculo numa gota de água na lâmina de microscopia

 Secar o inóculo em temperatura ambiente

 Fixar o esfregaço na chama do bico de bunsen

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7.4 Coloração de Gram

 Cobrir o esfregaço com cristal violeta por 60 segundos

 Lavar em água corrente

 Cobrir com lugol por 60 segundos

 Lavar em água corrente

 Cobrir com álcool –cetona por 10 a 20 segundos

 Lavar em água corrente

 Cobrir com fucsina ou safranina por 60 segundo

 Lavar em água corrente

 Secar a lâmina em temperatura ambiente

 Observar em microscópio óptico

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07. RESULTADO ESPERADO

Esta instrução se aplica na área de bacteriologia para determinar e identificar grupos de
bactérias em Gram-positiva e Gram – negativa.
 Resultado coloração roxa ou violeta – Bactérias Gram-positivas
 Resultado coloração vermelha – Bactérias Gram-negativas

08. REFERÊNCIA
https://amazonia.fiocruz.br/doc/gq/ilmd_scol_pop_001.pdf