Estrutura e classificação dos

cromossomos

Prof.: Ana Carolina Proença da Fonseca

Genética e Evolução (XGB230)

 Estrutura da aula

❖ Conceitos iniciais
❖ Compactação do DNA
❖ Estrutura dos cromossomos
❖ Classificação dos cromossomos
❖ Metodologias para o estudo dos cromossomos
❖ Aplicação das metodologias
Conceitos iniciais

Citogenética

Noções de citologia + genética

 Conceitos iniciais

O que é um cromossomo?

• Uma única e longa molécula de

DNA helicoidizada;

• Composto por DNA, proteínas

histônicas e não-histônicas;

• Compactação máxima atingida

durante a divisão celular.

1 molécula 2 moléculas
de DNA de DNA
idênticas
Compactação do DNA
 Compactação do DNA

Unidade estrutural básica

Nucleossomo
+

Histona H1

-
8 histonas

H2A
2 de
cada
H2B
H3
H4

147 nucleotídeos dão 1,7 voltas ao redor do octâmero de histonas

 Compactação do DNA
Fibra da cromatina Cromátide do cromossomo metafásico
(solenoide)

Nucleossomos Fibra
 Compactação do DNA

http://youtube.com/watch?v=gbSIBhFwQ4s
 Grau de compactação

Regiões com menor

atividade gênica

Heterocromatina: Cromatina mais condensada.

Eucromatina: Cromatina mais distendida.

Regiões com possível

atividade gênica
 Grau de compactação

❖ Heterocromatina constitutiva

É a porção da cromatina permanentemente condensada e em todas as células

do mesmo organismo. São regiões de DNA repetitivo.

Região centromérica e telomérica

 Grau de compactação

❖ Heterocromatina facultativa

É a porção da heterocromatina que, num mesmo organismo, se apresenta

condensada em algumas células e em outras não.
 Estrutura do cromossomo

Braço Curto (p)

Constrições
Secundárias Centrômero

Constrição
Primária
Braço Longo (q)

Cromátide
Telômeros
 Estrutura do cromossomo

❖ Centrômeros
 Estrutura do cromossomo

❖ Centrômeros

DNA satélite, DNA satélite

alfa ou alfoide
 Estrutura do cromossomo

❖Telômero

Sequência repetida:
TTAGGG

Função:
✓ Estabilidade das extremidades.
✓ Sinalização para o pareamento correto
durante a divisão celular
 Estrutura do cromossomo

❖Telomerase

Apoptose
 Estrutura do cromossomo

❖Telomerase
 Estrutura do cromossomo

❖Telomerase

https://www.youtube.com/watch?v=2NS0jBPurWQ
 Estrutura do cromossomo

❖Constrição secundária
Regiões organizadoras de nucléolos

Constrição ✓ Genes de RNA ribossômico

secundária ✓ DNA moderadamente repetitivo

Nesta região, estão localizados os genes

responsáveis pela produção de RNAs ribossômicos, os
quais constituem parte do nucléolo. A sua importância
está em produzir e processar os rRNAs necessários para
sintetizar todas as proteínas da célula.
 Cariótipo

✓ Conjunto de todos os cromossomos.

✓ Arrumação deles de acordo com o

centrômero.

✓ Doenças são investigadas pelo

cariótipo.

Cariótipo
Constituição cromossômica

Vs

Cariograma
Organização cromossômica
 Cromossomos Humanos
Autossomos

Sexuais

Autossomos: 1 – 22
Cromossomos Sexuais: X e Y
 Cromossomos Humanos

Gene A

Alelos

Gene B

Cromossomos homólogos
 Classificação dos cromossomos

International System for Human Cytogenetic

Nomenclature (ISCN 1978)

❖Tamanho 50 a 250 Mb
❖Posição do centrômero
❖Padrão de bandeamento
Tamanho

Cromossomos sexuais

X – tamanho médio
Y – similar ao 22
 Tamanho

A B

D
E

F G
 Posição do centrômero

Metacêntrico Submetacêntrico Acrocêntrico Telocêntrico

2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 13, 14, 15, 21
1, 3, 16, 19, 20
10, 11, 12, 17, 18, e 22
XeY
 Posição do centrômero

Metacêntrico Submetacêntrico Acrocêntrico Telocêntrico

2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 13, 14, 15, 21
1, 3, 16, 19, 20
10, 11, 12, 17, 18, e 22
XeY
Posição do centrômero
 Tamanho e posição do centrômero
Grupo B
Grupo A Maiores submetacêntricos
6 maiores cromossomos após o 2 (pares 4 e 5)
1 e 3 – metacêntricos
2 - submetacêntrico

Grupo C
Cromossomos médios e
submetacêntricos
(pares 6- 12)
Grupo E
Grupo D Cromossomos pequenos
Cromossomos médios e B B 16 – metacêntricos
acrocêntricos 17 e 18 - submetacêntricos
(pares 13 - 15)
B B

Grupo F Grupo G
Cromossomos pequenos Cromossomos pequenos
e metacêntricos e acrocêntricos
(pares 19 e 20) (pares 21 e 22)
Padrão de bandeamento

Diferenças de
condensação do DNA
 Padrão de bandeamento

Cromossomo Braço Região Banda Sub-banda

 Padrão de bandeamento

1p22.2

Cromossomo 1
 Padrão de bandeamento

Cromossomo: 1
Braço: curto
1p22.2 Região: 2
Banda:2
Sub-banda:2

Cromossomo 1
 Padrão de bandeamento
Resolução do cromossômica

Baixa Alta Altíssima

• 400 • 850 • 2.000
bandas bandas bandas
(regiões (regiões, (regiões,
e bandas bandas,
bandas) e sub- sub-bandas
bandas) e sub-sub-
bandas)

Baixa resolução Alta resolução

Metodologia para o estudo dos cromossomos

Citogenética clássica Citogenética molecular

Bandeamento G FISH

Bandeamento R SKY

Bandeamento C

Bandeamento NOR

Bandeamento T
 Bandeamento cromossômico

Primeira técnica de bandeamento nos anos 70.

Distribuição de DNA repetitivo

Composição das bases nitrogenadas
Depende de
Composição proteica
Grau de empacotamento do DNA

Heterocromatina e
eucromatina

Formação de bandas claras, escuras ou coloridas,

evidenciando estruturas entre 1 e 10 Mb
Bandeamento cromossômico

Fitohemaglutina

Colchicina

Cromossomo
duplicado

(Bertuzi, 2012)
Bandeamento cromossômico
Bandeamento cromossômico
 Bandeamento G

✓ Enzima: Tripsina

✓ Corante: Giemsa

✓ Discrimina segmentos cromossômicos

Cromossomo 6

Bandas
• regiões ricas em AT (heterocromatina)
escuras

Bandas
• regiões ricas em CG (eucromatina) Cromossomo 11
claras
 Bandeamento R

✓ Desnaturação por calor e em solução salina

✓ Corante: Giemsa

✓ Bandeamento inverso ao de banda G

Cromossomo 6

Banda R
• Banda G clara
escura

Banda R
• Banda G escura Cromossomo 11
clara
 Bandeamento R

Bandeamento G Bandeamento R

Cromossomo 6 Cromossomo 6
 Bandeamento C

✓ Desnaturação com Hidróxido de bário e HCl.

✓ Corante: Giemsa.
Cromossomo 21
✓ Discrimina as regiões com heterocromatina
constitutiva.
 Grau de compactação

Heterocromatina constitutiva Heterocromatina facultativa

É a porção da cromatina É a porção da heterocromatina que, num

permanentemente condensada e em todas mesmo organismo, se apresenta condensada
as células do mesmo organismo. São em algumas células e em outras não.
regiões de DNA altamente repetitivo.

Região centromérica e telomérica

 Bandeamento NOR

✓ Corante: Nitrato de prata.

✓ Discrimina as regiões organizadoras

de nucléolo.

Cromossomos acrocêntricos
 Bandeamento T

✓ Desnaturação por calor intenso

✓ Corante: Giemsa

✓ Detecta as regiões teloméricas

 Bandeamento Q

✓ Corante: Quinacrina.

✓ Bandas brilhantes e opacas.

Bandas
brilhantes Regiões ricas em
AT
Corresponde as
bandas G escuras
Aplicação do Bandeamento

47, XX, +21

Aplicação do Bandeamento

45, X
Aplicação do Bandeamento

46, XX, -5p

 Hibridização in situ por fluorescência (FISH)

É uma técnica de mapeamento físico do DNA, no qual uma sonda de DNA

marcada com fluorocromo se liga ao cromossomo.

(Kliegman et al., 2013)

 Hibridização in situ por fluorescência (FISH)

✓ Sondas altamente específicas.

✓ Custo elevado.
✓ Necessidade de equipamento especial.

Tipos de sondas
 Aplicabilidade do FISH

✓ Enumeração de cromossomos;
✓ Identificação de alterações numéricas e estruturais;
✓ Deleções e perdas teloméricas;
✓ Deleções e duplicações gênicas;
✓ Fusão cromossômica.

Sonda para gene específico

Sondas para todo o cromossomo

Sondas para todo o cromossomo

 Aplicabilidade do FISH

Sonda Centromérica

Sonda Telomérica
 Cariótipo Espectral (SKY painting)

✓ Variação da técnica de FISH.

✓ Utiliza sondas heterogêneas que permite rastrear o genoma inteiro.
✓ Aplicabilidade: rastrear novos genes até diagnóstico de alterações.
 Aplicabilidade do SKY

Paciente com deficiência intelectual

Translocação do cromossomo 1 com o 11

Cariótipo normal
Paciente com ataxia
Inserção de segmento do cromossomo 4 no 12

( Schröck et al., 1996)

 Array CGH
(Hibridização Genômica Comparativa)

Método com potencial de detectar

desarranjos cromossômicos
anteriormente inacessíveis.

Alterações submicroscópicas
 Aplicações da Citogenética Molecular

✓ Identificação de genes e sequências gênicas;

✓ Identificação de alterações estruturais e numéricas;

✓ Estrutura e organização do cromossomos;

✓ Monitoramento de indivíduos expostos à agentes mutagênicos;

✓ Identificações de alterações cromossômicas no espermatozóide;

✓ Diagnóstico pré-natal e pré-implantação.

Proporção de aneuploidia
30% vs 19%
 Aplicações da Citogenética Molecular

• Falha de implantação repetitiva

2008 • Aborto recorrente
amostras • Parâmetros prejudicados
• Causas mistas

Quantidade de Aconselhamento genético e a

Anormalidades opção de testes genéticos pré-
espermatozoide
implantação
 Aplicações da Citogenética Molecular

40 casos
50 amostras
10 controles

Megaesôfago Câncer de
chagásico esôfago

A – perda CDKN2A/ CEP9

B – perda EGFR/ CEP7
C- perda FHIT/ CEN3
D- ganho TP63/ perda PIK3CA
 Resumo

❖ Definição dos cromossomos

❖ Compactação do DNA
❖ Estrutura dos cromossomos

❖ Cromossomos humanos

❖ Parâmetros para a classificação

❖ Metodologias de Citogenética clássica

❖ Metodologias de Citogenética Molecular

❖ Aplicações da metodologia