PROJECTO AGRA FERTILIZER

Protocolo de análise de nutrientes

1. Determinação de pH do solo

Princípio do método

O pH do solo é determinado com recurso ao potenciómetro na suspensão de solo/água (1:2.5)

e na suspensão de solo/cloreto de potássio 1 N (1:2.5).

Material necessário

 1 Frasco de 50 mL com tampa

 1 Pipeta automática de 25 ml
 1 Potenciómetro com eléctrodo combinado

Reagentes

 Água destilada com um pH entre 5.6 a 7.0;

 Cloreto de potássio (KCl) 1N – Pesar 74.56 g de KCl e transferir para um balão
volumétrico de 1000.00 mL, dissolver, perfazer o volume com agua destilada e
homogeneizar;
 Solução tampão de pH 4.00* (KHC8H4O4 à 0.05 M) – Secar uma quantidade
conveniente de biftalato de potássio (KHC8H4O4) na estufa a 105 oC durante duas
horas, esfriar no dissecador. Pesar 10.21 g de biftalato de potássio, transferir para um
balão um balão volumétrico de 1000.00 mL. Dissolver e completar o volume com
água destilada. Para preservar a solução, juntar algumas gotas de clorofórmio. A
solução mantém pH 4.00 entre 15 e 30 oC;
 Preparação da solução padrão de pH ± 7,00* (KH2PO4 à 0.025 M e 1Na2HPO4 a 0.025
M) - Secar quantidades convenientes de dihidrogenofosfato de potássio (KH 2PO4) e
de hidrogenofosfato de sódio (Na2HPO4) na estufa a 105oC, durante duas horas, e
esfriar no dissecador. Pesar 3.44 g de dihidrogenofosfato de potássio e 3.53 g de

1
Em caso de falta de Na2HPO4 pode-se utilizar Na2HPO4.2H2O. A água perde-se durante a secagem.

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 hidrogenofosfato de sódio, transferir para um balão volumétrico de 1000.00 mL,
dissolver e completar o volume com água destilada. Juntar algumas gotas de
clorofórmio. A solução tem:

o
C pH
15 6.90
20 6.88
25 6.86
30 6.85

 Preparação da solução padrão de pH ± 9.20*2 (Na2B4O7.10H2O a 0.01 M) – Pesar

3.81 g de bórax (Na2B4O7.10H2O) e transferir para um balão volumétrico de 1000.00
mL, dissolver e completar o volume com água destilada e homogeneizar. Juntar
algumas gotas de clorofórmio. A solução tem:

o
C pH
15 9.28
20 9.23
25 9.18
30 9.14

Procedimentos

a. Pesar 10.00 g de solo seco (tamanho < 2mm) num frasco de 50 ml. Adicionar com
uma pipeta automática 25 ml de água destilada (rácio solo : agua / KCl 3 deve ser de
1:2.5);
b. Fechar bem os frascos e agitar bem com um agitador durante 1 hora. Deixar decantar
a suspensão por 30 minutos
c. Colocar o eléctrodo na suspensão e garantir que a parte porosa do eléctrodo esteja
imerso na parte clara da suspensão e proceder à leitura de pH (Fig. 1);

2
Usar água destilada de pH 7, o que quer dizer água fervida
3
[KCl] = 1 N

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d. Antes de medir o pH do solo, calibrar o potenciómetro (pH – meter) com a solução
tampão de pH 4.00, 7.00 e 9.00 respectivamente. Calibrar o aparelho num intervalo de
leitura de 15 amostras;
e. Após cada medição lavar o eléctrodos de vidro com água destilada e limpar com um
papel absorvente.

Fig. 1: Posição recomendada dos eléctrodos

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2. Determinação da condutividade eléctrica no solo

Princípio

Numa solução solo/água (1:2.5) a condutividade eléctrica (CE) é medida pela ponte eléctrica
em mS/cm a 25oC.

Material necessário

 1 frasco de 50,00 mL
 Condutivímetro

Reagentes

 Água destilada

Procedimento

 Pesar 10.00 g de solo e transferir para um frasco de 50 ml. Adicionar 25 ml de água

destilada, agitar durante 1 hora;
 Deixar decantar por 30 minutos a suspensão e proceder à leitura de CE com um
condutivimetro.

3. Carbono orgânico facilmente oxidável (COFO)

Princípio

O método segundo Walkley and Black é baseado na oxidação da matéria orgânica com
dicromato de potássio, num ambiente ácido:

2Cr2O72- + 3C +16H+ 4Cr3+ +3CO2 +8H2O

Depois da reacção, o excesso de Cr2O72- adicionada, é determinado por titulação com sulfato
ferroso amoniacal, Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O), 0.25 N.

A quantidade de carbono que reagiu com o dicromato de potássio, pode-se calcular como a
diferença entre a quantidade inicial e final (o excesso) do dicromato de potássio.

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Materiais necessários

 Erlenmeyers de 250 - 500 mL (lavados com ácido crómico);

 Bureta para a solução de dicromato de potássio a 1.000 N;
 1 bureta semi-automática para a solução de sulfato ferroso amoniacal;
 1 almofariz de ágata;
 1 crivo de 0.5 mm de malha.

Reagentes

 Ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado;

 Solução de dicromato de potássio (1.000 N) – dissolva 49.04 g de K 2Cr2O7 (seco à
105o C, durante 6 horas) na água num balão volumétrico de um litro e encha até a
marca;
 Solução de sulfato ferroso amoniacal (0.25 N) – dissolva 98.04 g de
FeSO4(NH4)2SO4.6H2O em água num balão volumétrico de um litro, adicione água até
cerca de 700 mL e agite até o sal estar completamente dissolvido. Adicione 20 mL de
ácido sulfúrico, deixe arrefecer e perfaça o volume até a marca;
 Indicador ferroína: pesar 1.5 g de O-fenantroline (Cloridrato) monohihidratado
(C12H9ClN2.H2O) e 0.70 g de Sulfato ferroso (FeSO 4.H2O). Dissolver em 100 mL de
água destilada e homogeinizar.

Procedimentos

a. Retire uma quantidade suficiente da sua amostra (seca ao ar, tamanho < 2 mm) e coloque-
a no almofariz. Moa a amostra e passe-a pelo crivo de 0.5 mm;

b. Pese uma quantidade entre 0.100 e 0.500 g das amostras de solo (dependendo do teor
aparente da MO) para balões de erlenmeyer de 250 mL;

c. Adicione exactamente 5.00 mL de dicromato de potássio a 1.000 N, medidos com

dispensador.

d. Adicione 10 mL de H2SO4 concentrado, usando um dispensador (com cuidado!) e agite

durante 1 minuto (a temperatura de reacção é ~ 120 oC).

e. Deixe em repouso por 30 minutos.

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 f. Em simultâneo com a amostra, prepare dois ensaios em branco da seguinte maneira: Junte
exactamente 5.00 mL de dicromato de potássio (1.000 N) em balões erlenmeyer e junte 10
mL de H2SO4 concentrado. Trate os ensaios em branco como as amostras.

g. Deite 80 mL de água destilada nas amostras e ensaios em branco e adicione 2-4 gotas do
indicador. Misture bem.

h. Titule primeiro os ensaios em branco com sulfato ferroso amoniacal. No fim da titulação
forma-se uma cor verde e no ponto de equilíbrio muda para vermelho acastanhado. Anote o
número de mililitros gastos na titulação, e guarde a solução de sulfato ferroso amoniacal para
a determinação da normalidade exacta da mesma.

i. Faça a titulação das amostras com sulfato ferroso amoniacal. Caso as amostras gastem
menos que 5 mL de solução de sulfato ferroso amoniacal, repita o ensaio com uma menor
quantidade da amostra.

j. Determine a normalidade exacta da solução de sulfato ferroso amoniacal

(FeSO4(NH4)2SO4.6H2O) da seguinte maneira: adicione aos ensaios em branco, depois da
titulação, 5.00 mL de dicromato de potássio com o dispensador e titule novamente com
sulfato ferroso amoniacal.

Cálculos

Durante a reacção assume-se que o oxigénio consumido é proporcional ao carbono titulado

na base teórica de 1 mL de 1 mol (e) L-1 de solução de dicromato oxida 3 mg de C, isto é,
corrigido pelo coeficiente (1.3 = 100/76) de ataque = 3.9 mg C. Assim o coeficiente de ataque
modulado como função da forma de C e comparado com medições na combustão seca:

3.9 ×(10−0.5 ×V )
Carbono orgânico total, g kg-1 do solo seco à 105oC, COFO=
P

P – peso de amostra em gramas; V – volume (mL) de solução Fe 2+ na concentração de 0.5

mol L-1 (substituir 0.5 com a concentração exacta se não for exactamente 0.5) e a quantidade
de solução de dicromato é 10 mL.

Matéria orgânica total, g kg-1 = COFO x 1.724

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4. Determinação de N-Disponível (NO3- / NH4+)

Princípio

O procedimento para determinação de amónio (NH4+) e nitrato (NO3-) trocáveis envolve a

destilação por arraste de vapores de soluções contendo estas formas de nitrogénio inorgânico,
MgO e liga de Devarda. Em meio alcalino forte, criado pela adição de MgO, o NH4+ é
convertido em NH3, que é arrastada por vapores, condensada e depositada em solução
avermelhada de acido bórico. A utilização de liga de Devarda tem por finalidade reduzir o
nitrato e amónio que são convertidos em NH3. A quantificação de N nas formas de amónio e
nitrato é feita Indirectamente por titulação (H2SO4 0.005M), via restituição do acido bórico
utilizado na formação de borato de amónio composto que confere a cor verde-azulada à
solução condessada.

Equipamentos e reagentes

Equipamentos

 Destilador de arraste de vapores

 Agitador de mesa horizontal com garras para erlemeyer de 125 mL
 Garras para tubos de destilação
 Balança de precisão
 Tubos de digestão

Reagentes

 KCl (1M) – dissolver 74.5 g de KCl com baixíssimas concentrações de nitrogénio em

1 L de agua destilada;
 Acido bórico 2% - Pesar 40 g de H3BO3 para um beaker de 2 L, adicionar 1.6 L de
agua destilada, aquecer e agitar até a dissolução do acido bórico. Adicionar 200 mL
de solução indicadora, preparada pela dissolução de 0.132 g de verde-de-bromocresol
e 0.066 g de vermelho de metil em 1 L de etanol (95%). Esfriar a solução e em balão
volumétrico completar o volume até 2 L com etanol (95%);
 MgO para liga de Devarda
 H2SO4 (0.004 N) – Obtida pela dissolução em agua de 10 vezes de solução de
H2SO4 (0.05N). Nesta etapa, deve-se determinar a concetracao correcta da
concentração de H2SO4 com uso de solução de titrasol de NaOH 0.1 mol L-1

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  Indicador verde – de – bromocresol – indicador de metil

Procedimentos

- Extracção

Pesar 10 g de amostra de solo seco (<2mm) em erlemeyer de 125 mL

Adicionar 100 mL de solução de KCl 1M

Agitar por 1 hora.

Deixar em repouso por 1 h. Caso seja possível a analise de amonio e nitrato num período de
24 horsa subsequente a extracçao é conveniente que se proceda à filtragem da solução de solo
e KCl com papel de filtro (Whatman No 42) como posterior armazenamento do extracto em
regrigerador a 4oC ate que a destilação possa ser efectuada.

- Quantificação

Determinacao de amonio

a. Pipetar 30 mL do sobrenadante límpido. Adicionar em tubos de digestão

b. Adicionar 0.2 g de MgO
c. Proceder à destilição da alíquota de 30 mL em destilador de arraste de vapores
(Metodo Kjedahl;
d. Colectar o condensado em erlemeyer de 125 mL, contendo 5 mL de solução
indicadora de acido bórico (2%). O volume do condensado no erlemeyer de acido
bórico deve atingir 50 mL (mais ou menos 3 minutos de destilação)

Determinacao de nitrato

Nesta fase, utiliza-se a mesma alíquota de 30 mL destilada anteriormente. A essa quantidade

de extracto adiciona-se 0.2 g de liga de Devarda;

Proceder novamente a destilação dessa solução em destilador de arraste de vapores em novo

erlemenyer com acido bórico ate que o volume do condensado nesse recipiente atinja 50 mL

Calculo

O teor de N (NO3- / NH4+) no solo é obtido segundo a expressão:

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N-NH4+ / NO3- (mg kg-1) = A x B x C x D

A = 3.333, obtido da divisão de 100 (quantidade em mL de KCl (1 M) usada na extracção)

por 30 (alíquota em mL usada na determinacao de amonio e nitrato)

B = volume (mL) de H2SO4 (0.005 N) gastos na titulacao

C = 0.070, decorrente do facto de que cada 1 mL de H2SO4 (0.005N) gasto na titulacao

equivale à presença de 0.070 mg de N-NH4+ ou N-NO3-.

D = 100, pois é a relação entre os 1.000 g do solo usadas na unidade e os 10 g de solo usadas
na extracção.

NB. Deve-se prepara sempre um BRANCO, seguindo o procedimento usado na amostra,

principalmente naquelas preparadas com o uso de de reagentes de baixa qualidade. As
extraccoes das formas de amonio / nitrato também podem ser quantificadas por colorimetria.

5. Determinação de S-Disponível (SO42+)

Principio

O método baseia-se em marcha analítica por Vitti (1989), que inclui extracção de sulfato por
iões fosfatos (500 mg P L-1) dissolvidos em acido acético 2.0 mol L-1 e posterior
quantificação do S disponivel pela medicao em espectrofotometro UV/VIS, da turbidez
formada pela precipitação de sulfato pelo cloreto de bario.

Equipamentos e reagentes

Equipamentos

Agitador horizontal circular

Colorimentro ou espectrofotometro

Estufa de secagem

Reagentes

Solucao extractora – Pesar 2.034 g Ca(H2PO4)2H2O. Transferir para balão volumétrico de 1

L. Completar o volume com solução de acido acético 2 mol L-1.

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Acido acético 2 mol L-1 – Medir 120 mL de CH3COOH (d=1.05). Transferir para balão
volumétrico de 1 L. Completar o volume com agua destilada.

Solucao de acido clorídrico (6 mol L-) com enxofre (20 mg L-1) – em balão volumétrico de 1
L, adicionar 200 mL de agua destilada, em seguida 500 mL de HCl (d=1.19) e 0.1087 g
K2SO4 (seco em estufa). Completar o volume com agua destilada.

Carvao activado.

Nota – no caso de não usar-se carvao isento de S, é aconselhável que se proceda a lavagem
desse reagente 3 vezes com solução extractora com posterior secagem do carvao no estufa.

BaCl22H2O

Nota – utilizar reagente de pureza elevada, sendo convenienre usao de cristais retidos entre as
peneiras de 20 e 60 mesh.

Solucao – estoque de S (100 mg L-1) – Pesar 0.5434 de K2SO4 (seco no estufa). Transferir
para balão volumétrico de 1 L. Completar o volume com agua destilada

Solucoes padroes de sulfato - Em balões volumétricos de 50 mL, acrescentrar: 0, 1, 2.5, 5.0,

10.0, 12.5, 15.0 e 20.0 mL solução de estoque (100 mg S L-1). Completar o volume com
agua destilada . Estas soluções apresentam concentrações de 0, 2, 5, 10, 20, 25, 30, 40, g S-
SO42- mL-1 de solução.

Procedimentos

Extracção

a. Em erlemeyer de 125 mL, adicionar 2.5 g de solo e 25 mL de solução extractora

(Ca(H2PO4)2.H2O – 500 mg P L-1).
b. Agitar por 30 minutos
c. Adicionar a mistura de 0.25 g de carvao ativado
d. Agitar novamento por 3 minutos
e. Filtrar a mistura, adicionando novamente ao filtro 0.25 g de carvao activado, visando
obter sobrenadante cristalino, isento de impurezas e de particulas em suspensão.

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 Quantificação

a. Em tubos de ensaio ou em copos plásticos de 100 mL adicionar 10 mL de

sobrenadante e 1 mL de solução de HCl 6 mol L-1 contendo 20 mg de S L-1;
b. Juntar a essa solução 500 mg BaCl22H2O. Aguardar um minuto.
c. Proceder à agitação dos tubos por 30 segundos de modo a obter completa dissolução
dos critais de NaCl
d. Medir a turbidez em colirimetro ou espectrómetro a 420 nm num prazo de 8 minutos
após a adicao de critais de BaCl2;
e. Preparacao de curva padrao:
i) Adicionar em erlemeyer de 125 mL alíquotas de 25 mL das soluções padrao de
sulfato. Adicionar em cada erlemeyer , 0.25 g de carvao activado. Agitar por 3
minutos
ii) Filtrar adicionando 0.25 g de carvao activado no filtro de modo a obter extracto
límpido
iii) Transferir uma alíquota de 10 mL desse extracto para erlemnyer de 125 mL ou
tubo de ensaio
iv) Adicionar 1.0 mL de HCl 6.0 mol L-1 contendo 20 mg de S L-1 e 500 mg de
critais de BaCl2. Aguardar por 1 minuto
v) Agitar os tubos durante 30 segundos
vi) Fazer leitura em colorímetro ou espectrofotometro a 420 nm no máximo por 8
minutos após a adicao de critais de BaCl2, zerando a absorvancia com agua
deionizada
vii) Relacionar as concentrações de S-SO4 (mg mL-1) com as absorvancias obtidas,
buscando a obtecao da curva padrao

Calculos

O teor de sulfato no solo é obtido pela seguinte expressão:

S – SO42- (g g-1 solo) = A x B

A = concentração de S-SO42- (g mL-1) no extracto, determinada pela curva padrao

B = 2.5. Factor obtido pela diluição durante a etapa de extracao de 2.5 g de solo em 25 mL de
solução extractora.

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INTRODUÇÃO

O Nitrogénio do solo é transformado em amónio (NH4+), pela oxidação do mesmo com ácido
sulfúrico concentrado, utilizando sulfato de potássio ou sódio na presença de selénio e sulfato
de cobre como catalisador.

Depois da digestão, o amónio è destilado em presença de um alcali. O amoníaco (NH 3)

libertado è recolhido numa solução de ácido bórico e titulado com ácido clorídrico.

Material necessário

Aparelho de digestão

Aparelho de destilação

Tubos kjeldahl

Erlenmeyers de 250 ml

Pipetas automáticas

Bureta de 50 ml

Reagentes:

Acido sulfúrico (H2SO4)concentrado de baixo teor de nitrogénio.

Catalisador

Pese 1.5 g de selénio e 1.0g de sulfato de cobre (CuSO 4.5H2O) e moa no almofariz. Junte
100g de sulfato de sódio ou sulfato de potássio e misture bem.

Hidróxido de sódio (NaOH) 25%

Dissolva 250 g de NaOH em aproximadamente 600 ml de água destilada. Deixe arrefecer.

Perfazer o volume com água destilada até 1000 ml.

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Acido bórico 1%:

Pese 10.0 g de ácido bórico para um balão volumétrico de 1 l. Dissolva e perfaça o volume
com água destilada até a marca.

Indicador misto

Pese 0.15 g de verde de bromocresol, 0.10 g de vermelho de metil e dissolva em 100 ml de

álcool etílico ou metílico. Guardar a solução num frasco castanho.

Ácido clorídrico 0.01 N

Pipete 9.8 ml de HCl concentrado (32%.densidade 1.160 g/l) para um balão de 1 l com
aprox.500 ml de água destilada. Deixe arrefecer e perfaça o volume até a marca. A
concentração da solução é de 0.1 mol/l (0.1 N). De seguida pipete 50 ml dessa solução para
um balão de 500 ml e perfaça com água destilada até a marca. A concentração da solução e
0.01N. Alternativamente. esta solução pode ser preparada com uso duma ampola
(Merck.titrisol no.9974).

Equipamento e materiais:

- Aparelhagem de digestão “Kjeldahl”com balões de 100 ml, equipada com extractor de

vapores. Marca: Gerhardt digestion unit.

- Destilador a vapor (p.e.da marca Buchi-modelo 321).

- Bureta.

- Erlenmeyer de 250ml.

- pipetas.

Procedimento:

1. Digestão

Observação: A digestão é feita com ácidos fortes. Cuidado. Proteja os olhos e a roupa e faça
o trabalho no nicho de vapores.

Pese 1.00 g de solo num balão de kjeldahl. Inclua na sua serie um ensaio em branco e uma
amostra padrão (com conteúdo de nitrogénio conhecido).

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Bata ligeiramente o balão na palma de mão para arrastar toda a amostra para o interior deste.
Adicione 1 g do catalisador com espátula e lave o gargalo com 4 ml de ácido sulfúrico
concentrado.

Adicione pérolas de vidro para facilitar a fervura de solução.

Ligue os balões ao aparelho de digestão e aqueça lentamente, agitando frequentemente até

diminuir a espuma. Depois aumente a temperatura e mantenha o aquecimento até que o
resíduo fique branco ou verde. Ferva lentamente durante 30 minutos, agitando de vez em
quando. E deixe arrefecer.

2. Destilação com destilador Buchi 321

Abra o sistema de refrigeração e ligue o aparelho. Controle a corrente de água. Controle os

reservatórios de água e NaOH se estão livres e deixam passar os líquidos livremente.
Controle se o destilador está ‘Ready’ (pronto para começar a determinação).

Antes de começar a destilação deixe aquecer a água no destilador e faça uma destilação só
com água destilada com o objectivo de limpar o destilador.

O tempo de destilação é de 4 minutos.

Coloque à saída de destilação um Erlenmeyer de 250 ml contendo 10.0 ml de ácido bórico a

1% e três gotas de indicador. A extremidade do condensador deve estar mergulhada na
solução contendo o ácido bórico, tudo para evitar perdas de gás NH3.

A seguir transfira o conteúdo dos balões de digestão quantitativamente para os tubos de

digestão e ligue o aparelho.

Adicione água até um volume de 100 ml (butão de água) e junte 35 ml de NaOH (25%)
(butão de NaOH); inicie a destilação e ligue (botão “Start destilation) “.

O Nitrogénio passa na forma de gás NH3 para o balão de 250 ml onde reage com ácido
bórico. A cor da solução de ácido bórico passa de rosa a verde durante a destilação.

Depois da destilação titule a solução destilada (cor verde) com solução de ácido clorídrico
0.01 N, até a cor mudar para vermelho.

Cálculos:

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N(%)=(A-B)*N(HCl)*14*F/P*10

Onde :

A: ml gastos na titulação da amostra

B:ml gastos na titulação do ensaio em branco

N: normalidade da solução HCl

Peso M (N): peso molecular do nitrogénio (14 g/mol)

P:peso da amostra

F:factor da humidade = [H(%)+100]/100

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Fósforo Assimilável

Método de Olsen

Princípio

O solo é extraído com uma solução 0,5 molar de NaHCO3 a pH 8,5. Em solos calcários,
alcalinos ou neutros, contendo fosfatos de cálcio, este extratante diminui a precipitação
secundária. Em solos ácidos contendo alumínio e fosfatos de ferro, a concentração de P na
solução aumenta à medida que o pH aumenta. Novamente, as reacções secundárias de
precipitação são mantidas em baixo nível.

Reagentes:

Solução extractante (0.5 M NaHCO3 a.pH=8.5)

Dissolver 42.0 g de bicarbonato de sódio (NaHCO3) em água destilada, ajustar o pH a 8.5 e

perfazer o volume para 1 litro. Em caso de pH baixo, o ajuste è feito adicionando algumas
gotas de NaOH a 50% e em caso de pH elevado, o ajuste è feito adicionando algumas gotas
de ácido acético concentrado.

Molibdato de amónio

Dissolver 20 g de molibdato de amônio.(NH4)6MO7O24.4H2O..em cerca de 400 ml de água

destilada morna. Ajustar o volume a 500 ml num balão volumétrico. Filtrar se necessário.
Manter numa garrafa de pyrex. Armazenar no escuro.

Tartarato duplo de potássio e antimónio (KSbOC4H4O6)

Dissolver 0.274 g de K(SbO)C4H4O6 em água destilada num balão volumétrico de 100 ml.
Perfazer o volume com água destilada até a marca.

Ácido sulfúrico 2.5 M

Adicionar cuidadosamente 70 ml de H2SO4 concentrado (densidade 1.84kg/l.) em cerca de

400 ml de água destilada, deixar arrefecer e perfazer o volume com água destilada até a
marca de 500 ml.

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Ácido ascórbico 0.1 M (agente reductor)

Dissolver 0.89 g de ácido ascórbico em água destilada e perfazer o volume até a marca num
balão volumétrico de 50 ml. Este reagente deve ser preparado sempre que necessário já que
não se pode guardar por mais de um dia.

Mistura reagente:

Misturar 50 ml de ácido sulfúrico 2.5 M, 15 ml de molibdato de amónio, 30 ml de ácido

ascórbico e 5 ml de tartarato duplo de potássio e antimónio.

Filtrar após 20 minutos para eliminar o precipitado colloidal azul que se tiver formado. A
mistura apenas pode ser guardada por um dia.Preparar apenas antes de usar.

Solução padrão de stock de fósforo 200 mg/l

Dissolver 0.8782 g de KH2PO4 previamente secos a 105oC, durante pelo menos duas horas,
num balão volumétrico de 1000 ml em cerca de 80 ml de água destilada. Perfazer o volume
até à marca com água destilada e agitar. Esta solução contém 200 mg/l de P. Armazenar a
solução num local escuro.

Solução padrão diluída de fósforo. 2mg/l

Pipetar 10 ml da solução stock 200mg/l de fósforo para um balão volumétrico de 1000 ml e

perfazer o volume com água destilada até a marca (diluição é 100 vezes).

Solução de 4 - Dinitrofenol

Dissolver 0.05 g de indicador 4 - dinitrofenol num balão volumétrico de 1000ml e perfazer o

volume com água destilada. Armazenar a solução no escuro.

Série padrão

Pipetar 0 – 5.0 – 10.0 – 15.0 – 20.0 – 25.0 ml da solução padrão diluída em balões de 50 ml.
Adicionar 10 ml da solução extractante e y ml de H 2SO4 2.5 M. Agitar para a retirada de
CO2. Adicionar 8 ml da mistura reagente. Completar o volume até à marca e homogeneizar a
solução. A série padrão tem as seguintes concentrações: 0 – 0.2 – 0.4 – 0.6 – 0.8 – 1.0 mg/l
de P.

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Metodologia

Extracção

Pesar 5 g de uma amostra do solo seco ao ar para um balão de Erlenmeyer de 250 ml. Cada
amostra pode ser feita em duplicado. Preparar também um ensaio em branco (sem solo)
Adicionar 100 ml de solução de NaHCO3. e colocar as rolhas nos balões. Agitar durante 30
minutos com o agitador mecânico a 135 vibrações por minuto. Filtrar através de papel de
filtro .Watman no 40 ou equivalente. Guardar o filtrado para análise do fósforo.

Solução de ensaio

Pipetar 10 ml da solução extractante 0.5 M NaHCO3.para um Erlenmeyer de 50 ml e

determinar a quantidade de ácido necessário para levar a solução a pH 5.com H 2SO4 2.5 M.
Para isso, juntar algumas gotas da solução do indicador 4 - Nitrofenol. Titular com 2.5 M
H2SO4 até a solução ficar branca. Considere esta quantidade como tendo y ml de H 2SO4 2.5
M. (aproximadamente 1 ml).

Pipetar 10 ml dos extractos do solo e do branco para balões de 50 mls. Adicionar y ml de

H2SO4 2.5M gota a gota, agitando com cuidado. Deixar em repouso durante o tempo
necessário para deixar escapar as bolhas de CO2 produzidas durante a acidificação. Adicionar
8.0 ml da misturara reagente, homogeneizar e completar o volume com agua destilada.
Deixar em repouso durante 15 minutos para o desenvolvimento da cor.

Medição das concentrações das amostras

Ligar o espectrofotómetro uv/vis e calibrar com a série padrão. As amostras que tiverem uma
concentração mais alta do que o ultimo padrão precisam de ser diluídas com a solução
extractante de NaHCO3.

Cálculos

A concentração P no solo é:
P mg/kg do solo =(a-b)*500/w
a = concentração do P na solução em mg/l
b- concentração do P na solução do ensaio em branco em mg/l
w= peso do solo em g

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Determinação do Fósforo no solo segundo Bray

Princípio do método

Este método tem sido largamente usado como índice de Fósforo disponível em solos. A
combinação de HCl e NH4F é designada para remover formas de fósforo facilmente solúveis,
em grande destaque os fosfatos de cálcio e ferro e uma porção de alumínio.

Reagentes:

Fluoreto de amónio (NH4F)1 M: Dissolver 37 g de NH4F em 1 litro de água destilada.

Armazenar num frasco de polietileno.

Acido Clorídrico 0.5 M: Diluir 20.8 ml de HCl concentrado (d =1.19 g/cm3) com água
destilada até 500 ml.

Solução extractante: misturar 15 ml de NH4F 1 M +25ml de HCl 0.5 M e diluir com água
destilada. Deixar arrefecer e perfazer o volume até 500 ml.

Molibdato de Amónio: Dissolver 20 g (NH4)6MO7O24.4H2O em 500 ml de água destilada.

Armazenar em lugar escuro.

Ácido ascórbico: Dissolver 0.89g de ácido ascórbico em 50 ml de água destilada. Preparar

esta solução para o dia do uso porque não deve ser armazenada por um período superior a um
dia.

Tartarato duplo de Potássio e antimónio: Dissolver 0.274 g de KSbOC4H4O6 em 100 ml de

água destilada.

Mistura reagente: Misturar 50 ml de ácido sulfúrico 2.5 M, 15 ml de molibdato de amónio, 30

ml de ácido ascórbico e 5 ml de tartarato duplo de Potássio e antimónio. Preparar esta solução
no dia do uso porque ela não pode ser armazenada por um período superior a um dia.

Acido Bórico 2.4%: Dissolver 2.4 g de H3BO3 em 100 ml de água destilada.

Solução padrão 120 mg/l de P: Dissolver 0.5265 g de KH 2PO4 em água destilada num balão
volumétrico de 1 litro e perfazer o volume com água destilada.

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Solução padrão diluída de 12 mg/l de P: Diluir 100 ml da solução padrão de de 120mg/l para
um balão volumétrico de 1 litro e perfazer o volume com água destilada.

Série Padrão: Pipetar da solução padrão diluída 0.0-10.0-20.0-30.0-40.0-50.0 ml para balões

volumétricos de 100 ml. Perfazer o volume até á marca com a solução extractante.

Pipetar 1.0 ml da série padrão para tubos de ensaio e adicionar 4.0 ml da solução de ácido
bórico 2.4%. Misturar bem e em seguida adicionar.1.0 ml da mistura reagente. Agitar e
esperar, no mínimo, 20 minutos. Esta série padrão tem as seguintes concentrações:0.0-0.2-
0.40.6-0.8-1.0 mg p/l.

Procedimento

Pesar 1.00 g de solo para tubos de ensaio e adicionar 7 ml da solução extractante. Agitar por
um minuto e filtrar imediatamente a solução com papel de filtro e colectar o filtrado num
tubo de ensaio. Se o filtrado não for claro, passe novamente a solução por papel de filtro.
Preparar um ensaio em branco.

Pipetar 1.0 ml de extractos e do ensaio em branco para tubos de ensaio e adicionar 4.0 ml da
solução de ácido bórico. Agitar bem e adicionar em seguida 1.0 ml de mistura reagente.
Agitar e esperar, no mínimo, 20 minutos. Medir a absorvância da série padrão, das amostras e
do ensaio em branco a 720 ou 882 nm.

Cálculos

P(mg/100g de solo) (a-b)*4.2/W)

Onde: a = concentração de P medida na amostra (mg/l)
B = concentração de P medida no ensaio em branco (mg/l)
W= peso do solo (em gramas)

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Determinação da Capacidade de Troca Catiónica

Princípio do método

O solo é percolado com uma solução de acetato de amónio 1 M (pH 7). A quantidade total de
amónio retida pelo solo após a lavagem de excesso de acetato de amónio é considerada uma
estimativa da capacidade de troca de catiónica (CTC). O amónio adsorvido é libertado por
percolação com uma solução acidificada de cloreto de cálcio e subsequentemente
determinado por destilação do amoníaco.

Reagentes:

Acetato de amónio: 1M. pH7: Pesar 77 g de CH 3COONH4 e dissolver em 1 litro de água

destilada.

Etanol 70%: Diluir 730 ml de C2H5OH 96% com água destilada num balão volumétrico de 1
litro até à marca.

Cloreto de calico.0.5 M: Dissolver 73.5g de CaCl2.2H2O em um balão volumétrico de 1 litro

e completar o volume com água dsetilada.

HCl 2 M: Diluir 166 ml de HCl (ρ = 1.19 g/cm3) com água destilada até 1 litro.

Cloreto de Calcio acidificado.0.25M: Misturar 500ml de 0.5 M de CaCl 2.2H2O e 10 ml de

HCl 2 M e completar o volume para 1 litro com água destilada.

Indicador: dissolver 0.150 g de verde de bromocresol e 0.10 g de vermelho de metil em 200

ml de etanol 96%. de bromo cresol e vermelho de metilo: Dissolva 0.150 g de bromocresol
verde+0.10 g de vermelho de metilo em 200 ml de álcool etílico 96%.

Areia pura.Merck no 7712

Acido cloridrico 0.01N. Diluir uma ampola de 1N HCl.Controle a normalidade.

Procedimento:

Saturação do complexo

Pesar 5 g de amostra seca ao ar em duplicado. Junte um volume de 20 ml de areia pura e

misture.

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Fazer um ensaio em branco só com 20 ml de areia pura e tratá-la da mesma forma que as
amostras. Fechar a saída dos tubos de percolação com algodão e cubrir com 1 cm da areia
pura. Saturar as amostras com 100 ml de NH4AC 1 M da seguinte forma: Juntar a solução de
NH4AC até o solo no tubo ficar submerso. Fechar a torneira e deixar saturar durante 20
minutos. Verificar se o solo está em contacto com a solução

Recolha do primeiro percolado

Abrir a torneira do tubo e começar a percolação com a solução de NH4Ac até que a solução
acabe (100 ml). Observação: a velocidade de percolação não pode ser alta; deve ser de
aproximadamente 1 gota por Segundo. Uma velocidade de percolação alta provoca uma má
troca catiónica.

Recolher o primeiro extracto num balão volumétrico de 100 ml e perfazer o volume com
NH4Ac 1 M até a marca. Guardar as soluções para a determinação de Mg, Ca, K e Na.

Lavagem do excesso de NH4+.

Tirar o excesso de NH4+ por percolação com 100 ml de álcool etílico a 70%. O objectivo
desta é eliminar o NH4+ que não foi adsorvido no complexo de troca.

Extracção do amónio adsorvido na amostra

Por um balão volumétrico de 100 ml com 5 gotas de solução indicador e 0.5 ml de solução de
HCl 2M à saida do tubo. Continuar a percolar agora com 100 ml da solução de cloreto de
cálcio até a marca. Guardar a solução para a determinação de NH4+ que reflecte directamente
a CTC do solo.

Determinação da CTC

Destilação

Esta operação visa reduzir o NH4+ para NH3 e recolhê-lo em ácido bórico. Usar um
destilador tipo Buchi para os melhores resultados.

Ligar o destilador e abrir o sistema de refrigeração do destilador (verifique o seu

funcionamento).

Controlar os reservatórios de água destilada e NaOH 25%: Controlar se os tubos de

fornecimento de água e NaOH estão livres e deixam passar os líquidos livremente.

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Antes de começar a destilação deixar aquecer a água no destilador e fazer uma destilação só
com água destilada com objectivo de limpar o destilador. O tempo de destilação é de 4
minutos.

Colocar á saída de destilação um Erlenmeyer de 250ml contendo 10.0 ml de ácido bórico 1%

com indicador de modo que a extremidade do condensador mergulhe no ácido. Tudo para
evitar perdas de NH3. A seguir pipetar um volume de 10 a 25 ml do extracto para tubos de
destilação e colocar no aparelho. Juntar água destliada até um volume de 100 ml e 35 ml de
NaOH 25%; inicie a destilação, ligando o Butão “ start destilation”.

O Nitrogénio passa na forma de gás NH3 para o balão de 250 ml onde reage com ácido
bórico. A cor da solução de ácido bórico passa de rosa a verde durante a destilação.

Depois da destilação titule a solução destilada (cor verde) com solução de ácido clorídrico
0.01 N, até a cor mudar para vermelho.

Cálculos:

CTC (cmolc/Kg de solo) = C*(a-b)*100*V/(v*w)

Onde:

C = concentração de ácido clorídrico;

a = volume de ácido clorídrico gasto na titulação da amostra;
b = volume de ácido clorídrico gasto na titulação de ensaio em branco;
V = volume total do extracto de amónia;
v = volume pipetado do extracto de amónia.

Determinação do Cálcio e do Magnésio por complexometria

Reagentes:
Solução padrão de Cálcio de 0.01 N
Pesar 0.5 gramas de carbonato de cálcio p.a. e transferir para um balão volumétrico de 1000
ml. Adicionar um bocadinho de agua destilada e depois mais ou menos 10 ml de acido
clorídrico 1N pouco a pouco até dissolver todo o carbonato de cálcio. Completar o volume
com água destilada.
Solução de EDTA 0.02N (C10H14N2O8Na2.2H2O)

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Pesar de etileno diamino-tetracetato de sódio (EDTA) 7,4450 g para um balão volumétrico de
2000 ml, dissolver e completar o volume com água destilada e homogeneizar. Controlar a
normalidade com a solução de cálcio.

Solução tampão de pH 10
Pesar 5 g de NH4Cl (cloreto de amónio) e 2 g de Mg EDTA, transferir para um balão
volumétrico de 1000 ml, dissolver com mais ou menos 500 ml de agua destilada, juntar 350
ml de NH4OH (hidróxido de amónio) concentrado (25%), completar o volume com agua
destilada e homogeneizar.

Negro de Eriocromo T
Dissolver 0.125 g de negro de eriocromo T e 1.1 g de colreto de hidroxilamina (H 4CLNO) em
25 ml de álcool etílico (C2H5OH). Para dissolver aquecer a solução (mas com cuidado) num
aquecedor eléctrico. Filtrar com papel de filtro e guardar num frasco escuro, fora da luz.

Calcon indicador em NaCl

Pesar 0.2 g de calcon e 100 g de NaCl (cloreto de sódio), misturar bem e moer em almofariz.
Guardar num frasco de vidro escuro, fora da luz.

Solução de hidróxido de sódio (NaOH) 5N

Dissolver 200g de hidróxido de sódio em água destilada num copo de 1500 ml e perfazer o
volume a 1000 ml.

Solução de ácido clorídrico (HCl) 1N

Deitar para um balão volumétrico de 500 ml que contém metade de água destilada 41.5 ml de
HCL concentrado (37%; ρ = 1.19 g/cm3). Preencher com água destilada até 500 ml,
homogeneizar e deitar num frasco de 500 ml.

Modo operatório
Titulação de cálcio e magnésio
Pipetar 20 ml de extracto de acetato de amónio para um erlenmeyer de 250 ml, adicionar 80
ml de agua destilada, 10 ml de hidróxido de sódio (NaOH) e uma ponta de espátula de
calcon. Titular directamente com a solução de EDTA até à viragem de cor rosa para azul.

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Titulação de cálcio e magnésio
Pipetar 20 ml de extracto de acetato de amónio para um erlenmeyer de 250 ml, adicionar 80
ml de água destilada e aquecer até 60oc e juntar imediatamente 10 ml da solução tampão de
pH 10, 3 gotas de indicador negro de eriocromo T. Titular directamente com a solução de
EDTA 0.02 N até a viragem de cor rosa para azul.

Cálculos
Cálcio de troca (cmolc/Kg de solo) = (A- B)*t*V*100*f/(v*p)
Cálcio + magnésio de troca (cmolc/Kg de solo) = (A- B)*V*100*f/(v*p)
Onde:
A = ml de EDTA gastos na titulação da amostra
B = ml de EDTA gastos na titulação do ensaio em branco
t = normalidade de EDTA
V = volume inicial do extracto
v = volume pipetado do extracto de solo
p = peso do solo em gramas
f = factor de humidade

Determinação de sódio e potássio no fotómetro de chama

Reagentes
Solução padrão de sódio e potássio (20 meq/l)
Secar uma quantidade conveniente de cloreto de sódio e de cloreto de potássio na estufa de
secagem a 105oc durante duas horas e esfriar no exsicador.
Pesar 1.491 g de cloreto de potássio (KCl) e 1.169 g de cloreto de sódio (NaCl) para um
balão volumétrico de 1000 ml, dissolver e perfazer o volume com acetato de amónio pH 7
(1N) e homogeneizar.

Solução padrão de sódio e potássio (4meq/l)

Pipetar 50 ml da solução padrão de 20 meq/l de sódio e de potássio para um balão
volumétrico de 250 ml. Perfazer o volume com acetato de amónio 1N (pH 7) e
homogeneizar.

Modo de fazer a curva padrão de potássio e sódio

Pipetar da solução padrão de 4 meq/l para balões volumétricos de 200 ml:
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0.0 – 1.0 – 3.0 – 5.0 – 10.0 – 20.0 – 30.0 – 40.0 – 50.0 ml e perfazer os volumes com acetato
de amónio pH 7 (1N).
A serie de padrões têm:
0.0 – 0.02 – 0.06 – 0.10 – 0.20 – 0.40 – 0.60 – 0.80 – 1.00 meq/l.

Modo operatório
Acertar o fotómetro de chama com as soluces padres e medir os extractos. Fazer a curva de
calibração.
No caso de as leituras dos extractos das amostras forem superiores á leitura da solução padrão
mais concentrada, diluir o extracto com acetato de amónio 1N (pH).

Calculos:
Na+ ou K+ (cmolc/Kg) = c*10*f/p
Onde:
c = concentração de Na+ ou K+ em meq/l
p =peso do solo em gramas
f = factor de humidade

Observações
Determinação da normalidade de EDTA
Pipetar 20 ml da solução padrão de cálcio 0.01 N para um erlenmeyer de 250 ml, adicionar
80 ml de agua destilada, 10 ml de NaOH (5N), uma ponta de espátula de calcon e titular
directamente com a solução de EDTA 0.02 N ate viragem de cor rosa para azul.

Cálculos da normalidade de EDTA

Normalidade de EDTA = V*t/A
Onde:
A = ml de EDTA gastos na titulação da solução padrão de cálcio
T = normalidade da solução padrão de cálcio (0.02 N)
V = volume da solução padrão de cálcio pipetado (20 ml).

Na falta de álcool etílico usar a mesma quantidade de álcool metílico (CH3OH).

Em vez de calcon e também possível usar muxeride.

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Pesar 500 mg de muxeride e 100 g de NaCl, misturar bem, moer em almofariz e guardar num
frasco de vidro escuro, fora da luz.
O método não é apropriado para solos salgados, solos calcários e solos gipsicos.

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Determinação de acidez trocável (H+ e Al3+) no solo
Metodo: KCl 1 N

Principio
A determinação e feita se o pHH2O é menor que 5.5. O solo é tratado com cloreto de potássio,
resultando que o H+ e Al3+ trocáveis entram em solução. O H+ e Al3+ são determinados por
titulação.

Reagentes
Cloreto de potássio (KCl) pH 7, 1 N
Pesar 74,6 g de KCl para um balão volumétrico de 1000 ml, dissolver e completar o volume
com agua destilada, homogeneizar.

Fluoreto de sódio (NaF) 0.5 N

Pesar 42 g de NaF para um balão volumétrico de 2000 ml, dissolver e completar o volume
com agua destilada e homogeneizar.

Hidróxido de sódio (NaOH) 0.05 N

Pesar 4 g de NaOH para um balão volumétrico de 2000 ml, dissolver e completar o volume
com agua destilada e homogeneizar. Ou usar ampolas. Controlar a normalidade de NaOH
com a solução padrão de biftalato de potássio.

Acido clorídrico (HCl) 0.05 N

Deitar num balão volum’etrico de 1000 ml que já tenha mais ou menos 500 ml de agua
destilada, 4.2 ml de HCl concentrado. Completar o volume com agua destilada e
homogeneizar. Ou usar ampolas. Controlar a normalidade de HCl com iodato de potássio.

Fenolftaleina 1%
Pesar 1.0 g de fenolfatleina e dissolver em 100 ml de álcool etílico (C2H5OH).

Modo operatório
Fazer um ensaio em branco e dois padrões para cada série de determinações.
Pesar 10 g de solo e pôr directamente num papel de filtro, colocado no funil. Colocar por
baixo balões volumétricos de 100 ml. Deitar com pipeta automática 10 ml de cloreto de
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potássio 1N e esperar 10 ml para filtrar completamente. Deitar mais 10 ml e esperar 10
minutos e assim repetir 10 vezes (o volume total de cloreto de potássio deitado para cada
amostra é de 100 ml). Essa operação não deverá durar mais de duas horas.
Se a velocidade de filtração for muito lenta, repetir as análises mas colocando na amostra 20
a 30 g de areia pura fina lavada. Depois da solução completamente filtrada, perfazer o
volume com KCl 1 N a 100 ml e homogeneizar.

Determinação do hidrogénio e alumínio de troca

Pipetar 50 ml do filtrado para um erlenmeyer de 250 ml, adicionar 5 gotas de fenolftaleina e
titular com NaOH 0.05 N até a viragem da cor do extracto para coloração rósea que fica 30
segundos.

Determinação de alumínio de troca

Logo após a titulação anterior, se necessário faz-se desaparecer a coloração rósea com a
adição de uma ou duas gotas de HCl 0.05 N e adicionar com pipeta automática 20 ml de NaF
0.5 N. Se existir alumínio trocável, a cor rósea voltará novamente a aparecer. Em caso de
aparecimento da cor, titular com HCl 0.05 N até que fique incolor.

Cálculos:
H+ + Al3+ trocáveis (meq/100g) = (A-B)*t*V*100*f/(v*p)
Onde:
A = ml de NaOH gastos na titulação da amostra;
B = ml de NaOH gastos na titulaç@ao de ensaio em branco
t = normalidade de NaOH
V = volume inicial do extracto
v = volume pipetado do extracto de solo
p = peso do solo em gramas
f = factor de humidade

Al3+ trocável (meq/100g) = (A-B)*t*V*100*f/(v*p)

Onde:
A = ml de HCl gastos na titulação da amostra
B = ml de HCl gastos na titulaç¬ao do ensaio em branco
t = normalidade de HCl
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V = volume inicial do extracto
v = volume pipetado do extracto
p = peso do solo em gramas
f = factor de humidade

H+ trocável (meq/100g) = H+ + Al3+ trocável – Al3+ meq/100g

Observaçoes:
Na falta de álcool etílico pode-se usar o álcool metílico (CH3OH)
No caso de não existir alumínio trocável, o valor de H+ e Al3+ corresponde a H+.
Para fins de fertilidade utilizar este método.

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Determinação de fósforo assimilável
Método de Mehlich 3
Princípio do Método
O método Mehlich-3 tem a sua acção baseada na presença do ião fluoreto, EDTA e no pH
ácido. O ião fluoreto actua na formação de um forte complexo com os iões Al3+, libertando
assim o fósforo ligado ao metal. O fósforo presente no solo, como fosfato de cálcio, também
é extraído pela precipitação de fluoreto de cálcio. A adição de EDTA tem como finalidade
complexar os micronutrientes, melhorando sua capacidade de extracção.

Reagentes
Solução stock de NH4F 3,75 mol/l + EDTA 0.25 mol/l
Colocar 138.9 g de fluoreto de amónio (NH 4F p.a.) em 600 ml de agua destilada ou ionizada,
contidos em balão volumétrico de 1 litro. Misturar. Adicionar 73,05 g de EDTA p.a. Misturar
continuamente atè dissolver todo o sal. Completar o volume e homogeneizar. Guardar em
frasco plástico escuro. Essa quantidade de solução-estock è suficiente para analisar 5 000
amostras.
Solução extractante (CH3COOH 0.2 mol/l + NH4NO3 0.25 mol/l +NH4F 0.015 mol/l + HNO3
0.013 mol/l + EDTA 0.00 mol/l)
Colocar, em um balão de plástico com capacidade para 2.5 litros, cerca de 2 litros de água
destilada ou desionizada. Adicionar 50g de nitrato de amónio, 20 ml da solução-estock, de
NH4F 3,75 mol/l + EDTA 0,25 mol/l. Misturar. Juntar 28,57 ml de ácido acético glacial
(CH3COOH p.a.) e 2,05 ml de ácido nítrico (HNO 3 p.a.). Completar o volume com água
destilada ou desionizada. Misturar bem. O pH da solução deve ficar em 2,5±0,1. Essa
quantidade de solução é suficiente para analisar 100 amostras.

Solução ácida de molibdato e tartarato de amónio

Dissolver 50 g de molibdato de amónio [(NH4)6Mo7O244H2O] p.a. e 1,212 g de tartarato duplo
de potássio e antimónio [K(SbO2)C4H4O6.1/2H2O p.a.] em cerca de 200 ml de agua destilada
ou desionizada , contida em balão volumétrico de 1 litro. Essa reacção liberta calor, mas nao
deve exceeder 60oc. Adicionar 700 ml de H2SO4 concentrado p.a. Misturar bem. Deixar
esfriar. Completar o volume com agua destilada ou desionizada. Guardar em frasco de
polietileno refrigerado e escuro. A cor desse reagente, quando concentrado, é azul. Ao ser
diluído na solução de trabalho, fica incolor.

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Solução ácida de molibdato e tartarato de amónio (diluída ou solução de trabalho)
Em balão volumétrico de 1 litro, com cerca de 500 ml de água destilada ou desionizada,
juntar 20 ml de solução concentrada de molibdato e tartarato de amónio e 10 ml de solução
de ácido ascórbico. Misturar bem. Completar o volume com água destilada ou desionizada.
Homogeneizar. Deixar à temperatura ambiente por, aproximadamente, meia hora antes de
usar. Essa solução deve ser preparada, no máximo, três dias antes do uso.

Solução de ácido ascórbico

Pesar 22 g de ácido ascórbico. Colocar em balão volumétrico de 250 ml. Adicionar água
destilada ou desionizada. Agitar. Completar o volume com água destilada ou desionizada.
Guardar num frasco de vidro, em compartimento refrigerado e escuro.

Solução padrão de fósforo (100 μg de P/mL)

Pesar 0.439 g de KH2PO4 p.a., previamente seco em estufa a 10 oc. Dissolver em água
destilada ou desionizada contida em balão volumétrico de 1 litro. Completar o volume com
solução extractora. Homogeneizar. Guardar em frasco escuro.

Solução padrão de fósforo (2 μg, 4 μg, 6 μg, 8 μg e 10 μg de P/mL)

Pipetar 5 mL, 10 mL, 15 mL, 20 mL e 25 mL da solução de 100 μg de P/mL. Colocar em
balões de 250 mL. Completar o volume com solução extractora. Essas soluções têm,
respectivamente, 2 μg, 4 μg, 6 μg, 8 μg e 10 μg de P/mL.

Extracção
Pesar 2.5 g de solo em frasco de plástico de 125 mL. Adicionar 25 mL de solução extractora
mol/L. Agitar durante 5 minutos em agitador horizontal circular (200 rpm). Não é necessário
tapar os frascos de plástico. Filtrar em papel de filtro de porosidade média (quantitativo ou
qualitativo, mas lavado com AlCl3.

Determinação de fósforo
Transferir 2 ml do extracto para tubos de 50 mL. Adionar 26 mL da solução de trabalho.
Misturar bem. Após 15 minutos, efectuar a leitura da transmitância (T) ou absorvância (A),
usando o filtro de 880 nm. Anotar.

Cálculos
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Estabelecimento da curva padão
Transferir 2 mL de cada solução padrão diluída (2 μg, 4 μg, 6 μg, 8 μg e 10 μg de P/mL),
para tubos de 50 mL. Adicionar 26 mL da solução de trabalho. Misturar bem. Após 15
minutos, efectuar a leitura da transmitância ou absorvância. Anotar as leituras
correspondentes a cada padrao.

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