Bioquímica Profa. Adriana C.

Mancin
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UNIVERSIDADE FEDERAL DO DELTA DO PARNAÍBA - UFDPar
DISCIPLINA: BIOQUÍMICA (PROFA. ADRIANA C. MANCIN)

SOLUÇÃO TAMPÃO OU SISTEMA TAMPÃO (“BUFFER”)

 Definição: solução capaz de manter o pH constante ou pouco variável após perturbação do

sistema causada pela adição de ácido ou pela adição de base a esse.

OBS: O conceito original de ação tamponante surgiu de estudos bioquímicos e da necessidade do controle do
pH em diversos aspectos da pesquisa biológica, como por exemplo em estudos com enzimas que têm sua
atividade catalítica muito sensível a variações de pH. Neste contexto, em 1900, Fernbach e Hubert, em seus
estudos com a enzima amilase, descobriram que uma solução de ácido fosfórico (H3PO4) e seus íons (íon
diidrogenofosfato H2PO4¯ e íon monoidrogenofosfato HPO4¯2) agiam como uma “proteção contra mudanças
abruptas na acidez e alcalinidade”. Esta resistência à mudança na concentração hidrogeniônica ([H+]) livre de
uma solução foi então descrita por estes pesquisadores como “ação tamponante” (do inglês buffering).

 Princípio de Funcionamento: a solução tampão segue o princípio de funcionamento da reação

de neutralização, na qual um ácido neutraliza uma base, ou vice-versa, formando um produto que não
irá alterar o valor do pH daquela solução. Geralmente, os produtos formados são sais e moléculas de
água. Mas, em alguns casos, a parte ácida do tampão irá neutralizar a parte básica do mesmo ao doar
íons H+ que reagirão com os íons OH¯ liberados pela base, formando água. Ou a parte básica do
tampão (íons OH¯) irão reagir com os íons H+ liberados pelo ácido e também formarão água. Além
disso, compostos nitrogenados (que agem como base) podem simplesmente receber os íons H+
liberados pelo ácido (tornando-se protonados), neutralizando-os e mantendo o pH constante ou pouco
variável.

 Componentes da solução tampão: 1) parte ácida: capaz de doar íons H+ e neutralizar os íons
OH¯ da base adicionada à solução tampão, podendo formar sal e água e mantendo o pH constante ou
pouco variável; 2) parte básica: capaz de doar íons OH¯ e neutralizar os íons H+ do ácido adicionado
à solução tampão, podendo formar sal e água e mantendo o pH constante ou pouco variável, ou apenas
capaz de receber os íons H+ do ácido adicionado à solução tampão, neutralizando-os e mantendo o
pH constante ou pouco variável; 3) parte anfótera [geralmente água, pois possui íons H+ (parte ácida)
e íons OH¯ (parte básica)]: capaz de doar tanto íons H+ (parte ácida) e neutralizar os íons OH¯ da
base adicionada à solução tampão como íons OH¯ (parte básica) e neutralizar os íons H+ do ácido
adicionado à solução tampão, mantendo o pH constante ou pouco variável.

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OBS: em 1904, Fels mostrou que o uso de misturas de ácidos fracos com seus sais (ou de bases fracas com
seus sais) permitia a obtenção de soluções cuja acidez (ou basicidade) não era alterada pela presença de
substâncias ácidas ou básicas na água ou nos sais utilizados na preparação das soluções usadas em
experimentos científicos.

 Tipos de solução tampão: 1) solução tampão ácido: atua em valores de pH abaixo de 7,0, ou
seja, na faixa ácida de pH, e na sua composição há maior concentração de ácido (fornecedor de íons
H+) do que de base (fornecedora de íons OH¯) ou de seu respectivo sal ou base conjugada; 2) solução
tampão neutra: atua em valores de pH iguais a 7,0 (variando geralmente entre 6,8 a 7,4), ou seja, na
faixa neutra de pH, e na sua composição há iguais concentrações de ácido (fornecedor de íons H+) e
de base (fornecedora de íons OH¯); 3) solução tampão básica: atua em valores de pH acima de 7,0,
ou seja, na faixa básica de pH, e na sua composição há maior concentração de base (fornecedora de
íons OH¯) do que de ácido (fornecedor de íons H+) ou de seu respectivo sal ou ácido conjugado.

 Aplicações: Henderson, em 1909, apontou o papel fundamental do íon bicarbonato (HCO3¯ ou

monoidrogenocarbonato, segundo a IUPAC) na manutenção da concentração hidrogeniônica (de íons
H+) do sangue, mantendo o pH sanguíneo praticamente constante (variando entre 7,2 e 7,4).
O ácido carbônico (H2CO3), formado pela junção da água e do gás carbônico (CO2), produzido na
respiração celular (reações de oxidação na mitocôndria para obtenção de energia), libera íons H+ e
íons bicarbonato HCO3¯ nos fluidos celulares e no sangue e devem ser neutralizados, a fim de manter
o pH constante ou pouco variável após a adição de ácido ou de base a esta solução. Um acréscimo de
ácido carbônico (ou outros ácidos, como o ácido láctico, produzido pela fermentação ou respiração
anaeróbica nos músculos e tecidos) na circulação sanguínea, provoca uma diminuição do pH
sanguíneo (para valores abaixo de 7,0), e deve ser neutralizado por uma elevação proporcional do íon
bicarbonato (HCO3¯), de modo a manter constante a razão [H2CO3] (ou parte ácida) / [HCO3–] (ou
parte básica), controlando as alterações bruscas de pH e mantendo a homeostase.

 Aplicações atuais: Hoje, o conceito de tampão é aplicado nas diversas áreas do conhecimento.
Bioquímicos utilizam tampões devido às propriedades de qualquer sistema biológico ser dependente
do pH; além disso, em química analítica e industrial, o controle adequado do pH pode ser essencial
na determinação das extensões de reações de precipitação e de eletrodeposição de metais, na
efetividade de separações químicas, nas sínteses químicas em geral e no controle de mecanismos de
oxidação e reações eletródicas. Uma definição mais abrangente foi apresentada, recentemente, por
Harris (1999): uma solução tamponada resiste a mudanças de pH quando ácidos ou bases são
adicionados ou quando uma diluição ocorre. Embora haja outros tipos de solução tampão, estas
soluções são constituídas geralmente por uma mistura de um ácido fraco e sua base conjugada
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(exemplo: ácido acético H3C-COOH e acetato de sódio H3C-COONa), ou da mistura de uma base
fraca e seu ácido conjugado (exemplo: amônia NH3 ou NH4OH e cloreto de amônio NH4Cl).

 Tampões de ocorrência natural e industrial: quase todos os processos biológicos são

dependentes do pH; uma pequena variação na acidez produz uma grande variação na velocidade da
maioria destes processos. O pH do sangue de mamíferos é um reflexo do estado do balanço ácido-
base do corpo (sistema tampão e homeostase). Em condições normais, o pH é mantido entre 7,35 e
7,45 devido a uma série de mecanismos complexos que compreendem produção, tamponamento e
eliminação de ácidos pelo corpo (Perrin; Dempsey, 1974). Um papel importante neste equilíbrio é
desempenhado por sistemas inorgânicos, tais como: 1) tampão fosfato, formado por H3PO4 (ácido
fosfórico) / H2PO4– (íon dihidrogeno fosfato) /HPO42– (íon monohidrogeno fosfato) / PO4-3 (íon
fosfato); 2) tampão bicarbonato/carbonato, formado por CO2 (gás carbônico ou dióxido de carbono)
/H2CO3 (ácido carbônico) / HCO3– (íon bicarbonato) / CO3-2 (íon carbonato); 3) grupos orgânicos
ácidos e básicos, principalmente de aminoácidos, peptídeos e proteínas. Uma diminuição (acidose)
ou aumento (alcalose) do pH do sangue pode causar sérios problemas e até mesmo ser fatal. A acidose
metabólica é a forma mais frequentemente observada entre os distúrbios do equilíbrio ácido-base ou
sistema tampão. Pode ser causada por diabetes grave, insuficiência renal, perda de bicarbonato por
diarréia e hipóxia ou isquemia, durante, por exemplo, exercício físico intenso. Uma compensação
natural da acidose metabólica pelo corpo é o aumento da taxa de respiração, fazendo com que mais
CO2 seja expirado. Tecidos vivos de plantas também são tamponados, embora menos intensamente.
O pH normal em tecidos vegetais varia entre 4,0 e 6,2. Nestes tecidos, os principais tampões são
fosfatos; carbonatos; e ácidos orgânicos, como o ácido málico (íon malato), ácido cítrico (íon citrato)
e ácido oxálico (íon oxalato) todos produzidos no Ciclo de Krebs ou ciclo do ácido cítrico no interior
das mitocôndrias, ácido tartárico (íon tartarato) e alguns aminoácidos.
Dentre os fluidos biológicos, a saliva também constitui uma solução tampão, com a função de
neutralizar os ácidos presentes na boca, evitando o desenvolvimento de bactérias que formam a placa
bacteriana. O pH normal da saliva varia entre 6,4 e 6,9 no intervalo entre as refeições e de 7,0 a 7,3
enquanto comemos. A capacidade tamponante em sistemas biogeoquímicos pode ser fator decisivo
em impactos ambientais. Um estudo interessante sobre o impacto da chuva ácida sobre lagos da região
das Montanhas Adirondack, área de Nova Iorque, revelou que lagos sobre áreas ricas em calcário são
menos suscetíveis a acidificação devido à considerável capacidade tamponante das águas destes lagos
(Skoog et al., 1996; Wright e Gjessing, 1976). O carbonato de cálcio presente no solo destas regiões
reage com os íons hidrônio (H3O+ ou H+) presentes na água, provenientes em grande parte da chuva
ácida:
CaCO3(s) + H3O+(aq) → Ca2+(aq) + HCO3− (aq) + H2O(l)
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levando à formação de um sistema tampão HCO3-/H2CO3/CO2.

O solo também age como um tampão e resiste às mudanças em pH, mas a sua capacidade
tamponante depende do seu tipo. Tal propriedade advém da capacidade de trocar cátions (CTC) com
o meio. Esta troca é o mecanismo pelo qual íons K+, Ca2+, Mg2+ e metais essenciais, em quantidades
muito pequenas ou traços, são disponibilizados às plantas. O processo de absorção de íons metálicos
do solo pelas raízes das plantas e sua consequente troca por íons H+, aliado à lixiviação de cálcio,
magnésio e outros íons do solo por água contendo ácido carbônico (H2CO3), tende a tornar ácido o
solo (Manahan, 1994):
Ca2+ + 2CO2 + 2H2O → 2H+ + Ca2+(raiz) + 2HCO3−

O balanço de H+ no solo (produção por meio das raízes contra o consumo pelo intemperismo)
é delicado e pode ser afetado pela deposição ácida. Se a taxa de intemperismo iguala-se ou excede a
taxa de liberação de H+ pelas plantas, como seria o caso de um solo calcário, o solo manterá um
tampão em cátions básicos (Ca2+, K+, NH4+, Al3+) e alcalinidade residual (HCO3−, H2PO4− etc.). Por
outro lado, em solos “ácidos”, a taxa de liberação de H+ pelas plantas pode exceder a taxa de consumo
de H+ pelo intemperismo e causar uma acidificação progressiva do solo (Stumm, 1992; Stumm e
Schnoor, 1995).
Na indústria de alimentos, alguns ácidos e bases (ácido cítrico, ácido adípico, bicarbonato de
sódio, ácido lático, tartarato ácido de potássio, ácido fosfórico) são usados como agentes de
processamento para o controle da acidez e alcalinidade de muitos produtos alimentícios. Dependendo
da quantidade desses aditivos e da acidez ou alcalinidade do alimento antes da adição destes
compostos, pode ocorrer a formação de sistemas tampões ou estes simplesmente funcionam como
agentes neutralizantes. Estes tipos de aditivos são usados em gelatinas, fermento, processamento de
queijo e em bebidas refrigerantes (Snyder, 1995).
Em alguns casos, a própria solução tampão (ácido lático/lactato de sódio) é adicionada ao
alimento, com a função de agente conservante, evitando a deterioração por bactérias e outros
microrganismos (Zeitoun; Debevere, 1992). Neste caso, as substâncias do tampão são utilizadas como
agentes antimicrobiais mantendo o alimento com o pH baixo e consequentemente evitando o
desenvolvimento de microrganismos, como fungos e bactérias.

SISTEMAS TAMPONANTES TIPO I: formados por 03 partes, uma parte ácida capaz de
neutralizar base, podendo formar sal e água; uma básica capaz de neutralizar ácido, podendo formar
sal e água, e uma parte anfótera, geralmente água (que possui parte ácida ou íons H+ e parte básica
ou íons OH¯ na mesma molécula) capaz de neutralizar tanto base como ácido.
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EXEMPLO: Tem-se um tampão formado pelo ácido nítrico (HNO3), pela base hidróxido de potássio
(KOH) e por 1 molécula de água, explique:
a) como esse tampão irá neutralizar os cátions (parte positiva) e ânions (parte negativa) do ácido
fluorídrico (HF) adicionado?
b) como esse tampão irá neutralizar os cátions (parte positiva) e ânions (parte negativa) da base
hidróxido de lítio (LiOH) adicionada?

a) RESOLUÇÃO:

TAMPÃO ÁCIDO PRODUTOS FORMADOS

ADICIONADO

H+ ácido Os íons positivos do ácido adicionado ao

ácido adicionado tampão (íons H+) só poderão reagir com os
HNO3 NO3¯ HF íons negativos do tampão de modo que
parte permitam a formação apenas de sal e água
positiva (ou seja, só irão reagir com os íons OH¯ da
H+ base e da água/anfótero do tampão).
PRODUTO FORMADO: água (H2O).
parte
negativa
base K+ Os íons negativos do ácido adicionado ao
F¯
KOH tampão (íons F¯) só poderão reagir com os
OH¯ íons positivos do tampão de modo que
permitam a formação apenas de sal e água
(ou seja, só irão reagir com os íons K+ da
base do tampão). PRODUTO FORMADO:
sal (KF).
anfótero H+
água
H2O OH¯

a) Os cátions H+ (parte positiva) do ácido fluorídrico (HF) adicionados serão neutralizados pelos
íons OH¯ da base do tampão e pelos íons OH¯ da água/anfótero do tampão, formando água (H2O).
Os ânions F¯ (parte negativa) do ácido fluorídrico (HF) adicionados serão neutralizados pelos íons
K+ da base do tampão, formando sal (KF).

b) RESOLUÇÃO:

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TAMPÃO BASE PRODUTOS FORMADOS

ADICIONADA

H+ base adicionada Os íons positivos da base adicionada ao

ácido tampão (íons Li+) só poderão reagir com os
LiOH
HNO3 NO3¯ íons negativos do tampão de modo que
parte permitam a formação apenas de sal e água
positiva (ou seja, só irão reagir com os íons NO3¯ do
Li+ ácido do tampão). PRODUTO FORMADO:
sal (LiNO3).
parte
negativa
base K+ OH¯ Os íons negativos da base adicionada ao
KOH tampão (íons OH¯) só poderão reagir com
OH¯ os íons positivos do tampão de modo que
permitam a formação apenas de sal e água
(ou seja, só irão reagir com os íons H+ do
ácido e da água/anfótero do tampão).
PRODUTO FORMADO: água (H2O).
anfótero H+
água
H2O OH¯

b) Os cátions Li+ (parte positiva) da base hidróxido de lítio (LiOH) adicionados serão neutralizados
pelos íons NO3¯ do ácido do tampão, formando sal (LiNO3). Os ânions OH¯ (parte negativa) da base
hidróxido de lítio (LiOH) adicionados serão neutralizados pelos íons H+ do ácido do tampão e pelos
íons H+ da água/anfótero do tampão, formando água (H2O).

SISTEMAS TAMPONANTES TIPO II: um único ácido (poliprótico) com mais de um H+ ionizável
ou uma única base com mais de uma hidroxila (OH¯) poderá desempenhar as três funções de um
tampão, ou seja: 1) agir como ÁCIDO doando H+ para neutralizar base ou neutralizar íons OH¯,
formando água (H2O); 2) agir como BASE recebendo H+ para neutralizar ácido ou doando íons OH¯
para neutralizar íons H+ do ácido, formando água (H2O); 3) agir com ANFÓTERO podendo atuar
tanto como ácido ou como base para neutralizar, respectivamente, a base ou o ácido adicionado. A
dissociação parcial (um de cada vez) dos H+ ionizáveis do ácido ou dos OH¯ da base irão, em cada
equação de dissociação, ora se comportar como ácido (lado esquerdo da equação) doando H+ a fim
de neutralizar base ou íons OH¯, ora se comportar como base (lado direito da equação) recebendo H+
a fim de neutralizar ácido ou íons H+. No sistema tampão tipo II é possível calcular a faixa de
tamponamento baseando-se nas constantes de dissociação dos ácidos (pKa – constante de dissociação

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do ácido) ou das bases (pKb – constante de dissociação da base), somando-se um a esse valor para
achar o limite superior e subtraindo um para achar o limite inferior.

Exemplo: Tem-se o tampão ácido fosfórico (H3PO4) e fosfato (PO4-3), e sabendo que o esse tampão
pode perder/liberar um íon H+ de cada vez, ampliando sua faixa de tamponamento, como indicado
nas equações abaixo, pergunta-se:
Eq. 1: H3PO4  H+ + H2PO4 pKa = 2,14
Eq. 2: H2PO4  H+ + HPO4 2 pKa = 6,86
Eq. 3: HPO4 2  H+ + PO4 3 pKa = 12,4
a) qual é(são) a(s) faixa(s) de tamponamento desse tampão? Este é um tampão eficiente para pH
ácido, básico ou neutro? Explique.
b) por que esse tampão consegue manter o pH constante (na faixa de tamponamento) após a adição
de ácido ou de base?
c) qual a função dos íons H+?
d) qual a função dos íons H2PO4 (na eq. 01), HPO4 2 (na eq. 02) e PO4 3 (na eq. 03)?

RESOLUÇÃO:
equação 01: H3PO4  H+ + H2PO4 pka1 = 2,14
(lado esquerdo) (lado direito)
ácido: doa H+ e capaz de neutralizar base: recebe H+ e limite superior
neutraliza base íons OH¯ neutraliza ácido 2,14 +1 = 3,14
ESTÁ adicionados para ESTÁ limite inferior
PROTONADO formar água DESPROTONADO 2,14 -1 = 1,14
(COM H+) (SEM H ) +

equação 02: H2PO4¯  H+ + HPO42 pka2 = 6,86

(lado esquerdo) (lado direito)
ácido: doa H+ e capaz de neutralizar base: recebe H+ e limite superior:
neutraliza base íons OH¯ neutraliza ácido 6,86 +1 = 7,86
ESTÁ adicionados para ESTÁ limite inferior
PROTONADO formar água DESPROTONADO 6,86 -1 = 5,86
(COM H+) (SEM H ) +

equação 03: HPO4¯2  H+ + PO43 pka = 12,4

(lado esquerdo) (lado direito)
ácido: doa H+ e capaz de neutralizar base: recebe H+ e limite superior:
neutraliza base íons OH¯ neutraliza ácido 12,4 +1 = 13,4
ESTÁ adicionados para ESTÁ limite inferior
PROTONADO formar água DESPROTONADO 12,4 -1 = 11,4

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(COM H+) (SEM H+)

a) para a equação 01 a faixa de tamponamento vai de 1,14 a 3,14, por isso esse tampão é eficiente
para pH ácido (valores de pH inferiores a 7); para a equação 02 a faixa de tamponamento vai de 7,68
a 5,68, por isso esse tampão é eficiente para pH ácido, neutro e básico (valor de pH = 5,68 inferior a
7 representa ácido e valor de pH = 7,68 superior a 7 representa básico, e entre esses valores está o pH
7 que é neutro); para a equação 03 a faixa de tamponamento vai de 13,4 a 11,4, por isso esse tampão
é eficiente para pH básico (valores de pH superiores a 7).

b) Esse tampão consegue manter o pH constante após a adição de ácido ou de base, porque H3PO4
age como ácido (por estar protonado), doando H+ a fim de neutralizar base; os íons PO4¯3 agem como
base (por estar desprotonado), recebendo H+ a fim de neutralizar ácido; e os íons H2PO4¯ e os íons
HPO4¯2 agem como anfóteros, ou seja, agem tanto como base (nas eq. 01 e eq. 02, respectivamente),
recebendo H+ a fim de neutralizar ácido ou como ácido (nas eq. 02 e eq. 03, respectivamente), doando
H+ a fim de neutralizar base.

c) A função dos íons H+ é neutralizar íons OH¯ adicionados para formar água, ou permitir a
protonação de grupos diminuindo a quantidade de íons H+ disponíveis que podem alterar o pH.

d) A função dos íons H2PO4 (na eq. 01), HPO4 2 (na eq. 02) e PO4 3 (na eq. 03) é agir como base
(uma vez que nessas equações estão desprotonados e podem, ao receberem H+, ficar protonados),
pois podem receber H+ e neutralizar ácido.