Machine Translated by Google

ARTIGO COMPLETO Parasitologia

Levantamento epidemiológico da infecção por Babesia gibsoni em cães no leste do Japão

Takako MIYAMA1), Yoshimi SAKATA2), Yojiro SHIMADA3), Shoji OGINO3), Malaika WATANABE1), Kazuhito ITAMOTO1),
Masaru OKUDA1), Rodolfo A. VERDIDA4), Xuenan XUAN4), Hideyuki NAGASAWA4) e Hisashi INOKUMA1)*

1)Faculdade de Agricultura, Yamaguchi University, Yamaguchi 753–8515, 2)Merial Japan, Ltd., Tóquio 100–0014, 3)Nippon Zenyaku Kogyo Co., Ltd., Koriyama, Fukushima 963–
0196 e 4)National Research Center for Protozoan Diseases, Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine, Obihiro, Hokkaido 0 80–8555, Japão

(Recebido em 1º de outubro de 2004/Aceito em 5 de janeiro de 2005)

ABSTRATO. Para determinar a distribuição da infecção por Babesia gibsoni em cães na parte oriental do Japão, um levantamento epidemiológico de
cães suspeitos de terem infecção por B. gibsoni foi tentada usando a reação em cadeia da polimerase (PCR) e o ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA). Trinta e cinco de
115 desses cães (30,4%) foram positivos por PCR e/ou ELISA. Os 35 cães positivos consistiam em 28
Cães Tosa, 4 American Pit Bull Terriers e 3 cães mestiços em Aomori, Fukushima, Ibaraki, Gunma, Chiba, Tóquio, Kanagawa e
Prefeituras de Nagano. Os cães positivos tiveram uma taxa significativamente menor de exposição a carrapatos e uma taxa maior de mordidas por outros cães. Vinte e dois dos 35
cães B. gibsoni positivos foram infectados com hemoplasma, e a taxa de infecção foi significativamente maior do que a dos cães B. gib soni negativos.

PALAVRAS-CHAVE: Babesia gibsoni, leste do Japão, ensaio imunoenzimático, hemoplasma, reação em cadeia da polimerase
J. Vet. Com. ciência 67(5): 467–471, 2005

A babesiose canina é uma doença transmitida por carrapatos
causada por parasitas protozoários, Babesia gibsoni (B. gibsoni) e Babesia
canis (B. canis). Eles infectam os glóbulos vermelhos de cães e
geralmente causam anemia hemolítica. Infecção por B. gibsoni
geralmente pode resultar em manifestações clínicas mais graves
do que a infecção com B. canis, e pode causar múltiplos
disfunções. Portanto, B. gibsoni é clinicamente mais
importante do que B. canis no Japão.
B. gibsoni está distribuído em várias regiões do
mundo, incluindo Ásia, África, Europa, América e Austrália [1, 13, 16].
No Japão, distribui-se principalmente na parte ocidental [3, 4, 7, 8] e
apenas alguns fatores epidemiológicos e
estudos clínicos foram relatados em canina B. gibsoni
infecção no leste do Japão. Todos os casos confirmados de B.
infecção gibsoni na parte oriental do Japão foram encontrados
entre os cães Tosa, raça de briga criada apenas em Aomori
Prefeitura [3, 10, 17]. A transmissão de B. gibsoni neste
área foi pensado para não ocorrer através de carrapatos [3], embora a
espécie de carrapato vetor, Haemaphysalis longicornis, seja distribuída
em todo o Japão [19]. Assim, a distribuição real de B.
gibsoni em cães no leste do Japão é desconhecida.
Em geral, as infecções por Babesia são diagnosticadas com base no
observação de um fino filme de sangue corado com Giemsa. No
entanto, esse método é afetado pela subjetividade do
observadores e é limitado em sua sensibilidade. Recentemente,
métodos moleculares, incluindo reação em cadeia da polimerase (PCR),
têm se mostrado eficazes em alguns estudos epidemiológicos de
Infecção por Babesia em cães [3, 8]. Enquanto isso, um ensaio
imunoenzimático (ELISA) com antígeno imunodominante P50 de B.
gibsoni foi desenvolvido como um
método sorodiagnóstico [2]. As vantagens da PCR e
ELISA sobre outras técnicas são sua sensibilidade e especificidade
* ENDEREÇO ATUAL: INOKUMA, H., Obihiro University of Agriculture
e Medicina Veterinária, Obihiro, Hokkaido 080–8555, Japão.
ficidade para o diagnóstico da babesiose canina causada por B. gibsoni.
Usando a combinação desses dois métodos, não apenas infecções
atuais, mas também infecções passadas podem ser detectadas.
No presente estudo, um levantamento epidemiológico de cães
suspeita de infecção por B. gibsoni foi tentada
usando PCR e ELISA para determinar a distribuição de B.
gibsoni em cães na parte oriental do Japão.
MATERIAIS E MÉTODOS
Amostragem: Para PCR e ELISA, anticoagulado com EDTA
amostras de sangue e soros foram coletados de 115 cães examinados
nos hospitais veterinários localizados em 13 prefeituras
(Aomori, Iwate, Miyagi, Fukushima, Ibaraki, Tochigi,
Gunma, Saitama, Chiba, Tóquio, Kanagawa, Yamanashi e
Nagano) de fevereiro a outubro de 2003. Os cães incluídos neste
estudo apresentaram sintomas sugestivos de infecção por B. gib soni ,
incluindo anorexia, anemia, icterícia,
hemoglobinúria, ou febre, ou mostrou protozoários semelhantes a B.
gibsoni em esfregaços de sangue fino. Situação clínica e epidemiológica
informações foram coletadas dos veterinários que tratam
esses cachorros ao mesmo tempo.
Extração de DNA e PCR: O DNA total foi extraído de
cada amostra canina com um QIAamp DNA Mini Kit
(QIAGEN GmbH, Hilden, Alemanha), ajustado para um total
volume de 200 l em
m tampão TE e armazenado a –20°C até o uso.
Para a triagem de B. gibsoni, a amplificação por PCR foi realizada em
25- l de cada ml mistura de reação contendo 5 m
Molde de DNA com o conjunto de primers Gib599F e Gib1270R,
que foi projetado com base na sequência do gene 18S rRNA
[8]. O procedimento de amplificação foi relatado anteriormente
[6], mas a temperatura de recozimento neste estudo foi sempre
55°C. PCR específico de gênero para Ehrlichia e Babesia [5,
27], e PCR de triagem para hemoplasmas [14] (incluindo
Machine Translated by Google

468 T. MIYAMA ET AL.

os organismos anteriormente conhecidos como Haemobartonella spp.) testes de ney. Stat View Ver 5.0 (Hulinks) foi usado para analisar
também foram realizados em todas as amostras usando os primers ambos os testes, e valores de P<0,05 foram considerados significativos.
listados na Tabela 1.
ELISA: ELISA com GST-P50t foi essencialmente realizado RESULTADOS

de acordo com o protocolo de Verdida et al. [20]. Resumidamente, 96-

bem microplacas foram revestidas com os antígenos, GST-P50t
e GST (controle negativo), na concentração de 250 ng por
bem. Se a diferença entre a absorbância do poço contendo o antígeno
(GST-P50t) e a do poço contendo o antígeno controle (GST) for igual ou
superior a 0,1,
a reação foi considerada positiva. O título de ELISA foi
expresso como o recíproco da diluição máxima que
mostrou uma reação positiva.
Análises estatísticas: Para comparar os resultados de diferentes
raça, sexo, histórico de exposição a carrapatos e picadas de outros cães,
e a taxa de co-infecção entre cães positivos para PCR e/ou ELISA e os
respectivos cães negativos, testes qui-quadrado
foram realizados. Os resultados do hemograma completo
também foram comparados entre dois grupos usando Mann-Whit
As distribuições geográficas de cães positivos detectam por
PCR e ELISA específicos de B. gibsoni são mostrados na Fig. 1.
Vinte e nove de 115 cães (25,2%) em 7 prefeituras foram positivos na
PCR específica para B. gibsoni. Esses cachorros eram de
Aomori (13 de 14 cães), Fukushima (1 de 3 cães), Ibaraki (3)
de 9 cães), Gunma (2 de 17 cães), Chiba (4 de 20 cães),
Prefeituras de Tóquio (4 de 15 cães) e Kanagawa (2 de 12 cães). Vinte
e sete de 115 cães (23,5%) em 8 províncias
foram soropositivos no ELISA com GST-P50t. Nagano
A Prefeitura foi recentemente adicionada à área de positivo no
ELISA com GST-P50t. A Prefeitura de Nagano foi recentemente
adicionado à área de positivo no ELISA (Fig. 1). Vinte e um dos 29 cães
que foram positivos por PCR também foram positivos
por ELISA. No entanto, 8 de 29 cães que foram positivos por

Figura 1. Distribuições de cães infectados com B. gibsoni na parte oriental do Japão. A)

Resultado da PCR específica para B. gibsoni. B) Resultado do ELISA com GST-P50t..

Tabela 1. Sequências de oligonucleotídeos de iniciadores usados para detectar patógenos neste

estudar

Nome do iniciador Sequência de oligonucleotídeos (5'-3')

Primário específico para B.gibsoni

Gib599F CTC-GGC-TAC-TTG-CCT-TGT-C
Gib1270R GCC-GAA-ACT-GAA-ATA-ACG-GC
Primário específico para o gênero Babesia
RIB19 CGG-GAT-CCA-ACC-TGG-TTG-ATG-CGT-C
RIB20 CCG-AAT-TCC-TTG-TTA-CGA-CTC
Iniciador específico de hemoplasma
F2 ACG-AAA-GTC-TGA-TGG-AGC-AAT-A
R2 ACG-CCC-AAT-AAA-TCC-G(A/G)A-TAA-T
Primário específico do gênero Ehrlichia
EHR16SD GGT-ACC-(C/T)AC-AGA-AGA-AGT-CC
EHR16SR TAG-CAC-TCA-TCG-TTT-ACA-GC
Machine Translated by Google

INFECÇÃO CANINA DE BABESIA GIBSONI NO ORIENTE DO JAPÃO 469

Tabela 2. Resultados do ensaio de PCR e ELISA nos 115 cães com suspeita de B. gibsoni
infecção

PCR

Números de Números de Total

cães positivos (%) cães negativos (%)

Números de 21 (18,3) 6 (5.2) 27 (23,5)

cães positivos
ELISA (%)
Números de 8 (6,9) 80 (69,6) 88 (76,5)
cães negativos
(%)
Total 29 (25,2) 86 (74,8) 115

Tabela 3. Comparação de raça, sexo, exposição a carrapatos, picadas de outros cães e infecção por
hemoplasma entre cães positivos em PCR e/ou ELISA para B. gibsoni e cães negativos em ambos os
testes

PCR- e/ou ELISA-positivo PCR- e ELISA-negativo

N=35 N=80

Raça Cães de combate: 32* Cães de combate: 15

Tosa: 28 Tosa : 7
American Pit Bull Terrier: 4 American Pit Bull Terrier: 8
Outros: 3* Outros: 65
vira-lata :3 Raça pura: 51
vira-lata: 14
Sexo Masculino: 29* Masculino: 41

Fêmea: 6 Feminino: 39
Exposição a carrapatos 3* 38
Mordidas por outros cães 26* 7
Infecção por 22* 14
hemoplasma

* Diferença significativa em comparação com cães negativos para PCR e ELISA (P<0,05).

PCR foram negativos por ELISA. Seis cães foram negativos por
PCR e positivo por ELISA. Trinta e cinco de 115 cães
(30,4%) foram positivos por PCR e/ou ELISA. Os 80 cães restantes
foram negativos (69,6%) tanto por PCR quanto por ELISA
(Mesa 2).
A PCR específica do gênero Babesia não detectou novos resultados
positivos. Todas as amostras foram negativas para Ehrlichia. No
entanto, 36 de 115 cães foram positivos na triagem de PCR para
hemoplasmas.
Raça, sexo, história de exposição a carrapatos e picadas de outros
cães e taxa de infecção por hemoplasma de PCR- e/ou
Cães ELISA-positivos foram comparados com cães
negativo em ambos os testes. Os resultados são mostrados na Tabela 3.
Os cães positivos para PCR e/ou ELISA consistiram em 28 Tosa
cães, 4 American Pit Bull Terriers e 3 vira-latas. Tudo de
estes cães Tosa e 1 dos 3 cães sem raça definida eram machos,
enquanto os outros 6 cães eram fêmeas. Apenas 3 dos 35 cães
positivos tinham histórico confirmado de exposição a carrapatos, e o
outros cães não tinham histórico de exposição a carrapatos ou
história de exposição era desconhecida. Vinte e seis dos 35 cães
positivos foram mordidos por outros cães e a taxa de mordidas foi
significativamente maior do que a dos cães negativos.
Vinte e dois de 35 cães positivos para PCR e/ou ELISA
(62,9%) foram positivos para infecção por hemoplasma por PCR,
enquanto a taxa de infecção por hemoplasma em cães B. gibsoni
negativos foi de 17,5%. A diferença foi significativa.
A média ± desvio padrão das contagens de plaquetas em
cães que foram positivos para PCR e/ou ELISA foi de 16,31 ±
15,39 (× 104 l),me isso foi significativamente menor do que em
Cães negativos para PCR e ELISA [29,97 ± 17,38 (× 104 l)]. m
No entanto, não houve diferenças significativas na porcentagem de
animais com febre e icterícia, ou em hemácias
contagens, PCV ou concentração de hemoglobina entre cães
que foram positivos para PCR e/ou ELISA e cães que foram
PCR e ELISA negativos.
DISCUSSÃO
No presente estudo, PCR e ELISA foram utilizados para realizar um
estudo epidemiológico da infecção por B. gibsoni em
cães no leste do Japão. Ambos os testes PCR e ELISA com GST P50t
usados neste estudo foram relatados como métodos sensíveis e
específicos para a detecção de B. gibsoni
infecção em cães [8, 20]. Usando esses testes, detectamos B.
gibsoni em 35 cães de 8 prefeituras no leste
parte do Japão.
Resultados positivos no teste de PCR implicam a existência de B.
gibsoni protozoários no sangue periférico, nomeadamente
Machine Translated by Google
470 T. MIYAMA ET AL.
infecção. Por outro lado, resultados positivos em ELISA implicam a
existência de anticorpo para B. gibsoni e, portanto, este método pode
detectar infecções passadas e atuais. Assim, cães com resultados
positivos em PCR e/ou ELISA são considerados como portadores de
infecção por B. gibsoni . Por outro lado, cães com resultados
negativos em PCR e ELISA têm uma probabilidade baixa de terem
sofrido infecção por B. gibsoni . Oito dos 29 cães foram positivos
para PCR, mas negativos para ELISA. Este resultado pode ter
ocorrido nas seguintes situações: na fase inicial da infecção por B.
gibsoni antes da produção de anticorpos, ou em cães com baixa
produção de anticorpos devido à terapia imunossupressora ou
doenças de base induzindo condições imunossupressoras. Seis cães
foram negativos para PCR e positivos para ELISA.
Isso indica que esses cães tiveram infecção por B. gibsoni no
passado, e a produção de anticorpos contra B. gibsoni foi duradoura,
embora os antígenos de B. gibsoni no sangue periférico estivessem
atualmente abaixo do limite de detecção por PCR.
Outra possibilidade é que os parasitas se distribuíssem principalmente
em outros órgãos como o baço, embora fossem baixos no sangue
periférico.
Trinta e dois dos 35 cães positivos por PCR e/ou ELISA eram de
raças tradicionais de briga: cães Tosa (28 cães) e American Pit Bull
Terriers (4 cães). Eles tiveram uma taxa significativamente menor de
exposição a carrapatos e maior taxa de mordidas por outros cães em
comparação com cães negativos em ambos os testes.
Este resultado sugere que a principal via de transmissão de B.
gibsoni em cães de briga pode ser por mordeduras ao invés de
picadas de carrapatos. B. gibsoni é geralmente transmitido por
carrapatos como Haemaphysalis longicornis ou Rhipicephalus
sanguineus [11, 12]; no entanto, também pode ser transmitida por
contaminação sanguínea direta, como por meio de brigas ou
transfusões de sangue.
Três cães sem raça definida que foram positivos para PCR e/ou
ELISA não apresentavam histórico de mordidas caninas. Um deles
tinha história prévia de exposição a carrapatos na província de
Hyogo e posteriormente apresentou manifestações clínicas incluindo
letargia, anorexia, anemia e febre, sugerindo infecção por B. gibsoni .
É possível que o cão tenha sido infectado com B. gibsoni por meio
de carrapatos no oeste do Japão. Os outros dois cães não tiveram
exposição aparente a carrapatos e suas rotas de infecção eram incertas.
O presente estudo revelou que a maioria dos cães positivos para
B. gibsoni apresentou trombocitopenia. Este achado é semelhante
aos de estudos anteriores [9, 15]. No entanto, não houve outras
diferenças significativas de manifestações clínicas entre os cães
positivos para PCR e/ou ELISA e os cães negativos para ambos os
testes.
Recentemente, os parasitas dos glóbulos vermelhos anteriormente
conhecidos como Hae mobartonella spp. foram reclassificados como
micoplasmas hemotoróficos (hemoplasmas) [18]. Em nosso estudo,
a taxa de co-infecção de hemoplasma no grupo positivo de PCR e/
ou ELISA foi significativamente maior do que a de cães B. gib soni-
negativos, mas não houve diferenças significativas de manifestações
clínicas em cães com versus sem co-infecção. Esse achado sugere
que a via de transmissão de B. gibsoni e hemoplasma foi a mesma.
No entanto, não foram relatados estudos sobre esse assunto. Avançar
estudos serão necessários para esclarecer a relação entre B. gibsoni
e infecção por hemoplasma em cães. Quatorze entre 80 cães que
foram negativos por B. gibsoni PCR e ELISA foram hemoplasma
positivos. Assim, as manifestações clínicas desses cães
possivelmente podem ser causadas por hemoplasmas; no entanto, o
restante dos 66 cães não detectou patógenos neste estudo. As
causas dos sintomas clínicos encontrados nesses cães não foram
determinadas neste estudo.
Até o momento, nenhum carrapato na parte oriental do Japão foi
encontrado positivo para B. gibsoni [7]. O presente estudo revelou
que cães infectados por B. gibsoni foram amplamente distribuídos
na parte oriental do Japão e a maioria deles eram cães de briga e
tinham uma baixa taxa de exposição a carrapatos. É possível que a
infecção por B. gibsoni seja prevalente apenas entre os cães de briga
na parte oriental do Japão. No entanto, Haemaphysalis longicornis,
uma espécie de carrapato predominante em cães, é conhecida por
transmitir B. gibsoni [11]. É amplamente distribuído em todo o Japão,
incluindo o leste do Japão, área deste estudo [17]. Assim, também é
possível que o B. gibsoni seja transmitido pelo sangue de cães
infectados para carrapatos e possa se estabelecer entre carrapatos
na parte oriental do Japão.
Levantamentos de carrapatos como vetores espontâneos de B.
gibsoni e outros cães que não cães de briga serão necessários para
avaliar a distribuição real de B. gibsoni no leste do Japão.
AGRADECIMENTOS. Os autores gostariam de agradecer a
assistência dos médicos veterinários participantes e suas equipes.
Este trabalho foi financiado em parte pela Merial Japan Ltd. e um
subsídio para pesquisa científica da Sociedade Japonesa para a
Promoção da Ciência
ence.
REFERÊNCIAS
1. Farwell, GE, LeGrand, EKand Cobb, CC 1982. Observações clínicas
sobre infecções por Babesia gibsoni e Babesia canis em cães.
Geléia. Veterinario. Med. Associado 180: 507–511.
2. Fukumoto, S., Sekine, Y., Xuan, X., Igarashi, I., Sugimoto, C.,
Nagasawa, H., Fujisaki, K., Mikami, T. e Suzuki, H. 2004.
Sorodiagnóstico da infecção canina por Babesia gibsoni por
ensaio imunoenzimático com P50 recombinante expresso em
Escherichia coli. J. Parasitol. 90: 387–391.
3. Ikadai, H., Tanaka, H., Shibahara, N., Matsuu, A., Uechi, M., Itoh,
N., Oshiro, S., Kudo, N., Igarashi, I. e Oyamada, T.
2004. Evidência molecular de infecções com parasitas Babesia
gibsoni no Japão e avaliação do potencial diagnóstico de um
método de amplificação isotérmica mediada por loop. J. Clin.
Microbiol. 42: 2465–2469.
4. Inokuma, H., Tamura, K. e Onishi, T. 1995 . J. Vet. Med. ciência 57:
567–568.
5. Inokuma, H., Ohno, K., Onishi, T., Raoult, D. e Brouqui, P.
2001. Detecção de infecção erliquial por PCR em cães das
províncias de Yamaguchi e Okinawa, Japão. J. Vet. Med. ciência
63: 815–817.
6. Inokuma, H., Fujii, K., Matsumoto, K., Okuda, M., Nakagome, K.,
Kosugi, R., Hirakawa, M. e Onishi, T. 2002. Demonstração de
inclusões de Anaplasma (Ehrlichia) platys em plaquetas
sanguíneas periféricas de um cão no Japão. Vet. Parasitol . 110 : 145–152 .
7. Inokuma, H., Yoshizaki, Y., Shimada, Y., Sakata, Y., Okuda,
Machine Translated by Google
INFECÇÃO CANINA DE BABESIA GIBSONI NO ORIENTE DO JAPÃO
M. e Onishi, T. 2003. Levantamento epidemiológico de espécies de
Babesia no Japão realizado com espécimes de carrapatos coletados de
cães e detecção de novo DNA de Babesia intimamente relacionado ao
DNA de Babesia odocoilei e Babesia divergens . j.
Clin. Microbiol. 41: 3494–3498.
8. Inokuma, H., Yoshizaki, Y., Matsumoto, K., Okuda, M., Onishi, T., Nakagome,
K., Kosugi, R. e Hirakawa, M. 2004.
Levantamento molecular da infecção por Babesia em cães em Okinawa,
Japão. Veterinario. Parasitol. 121: 341–346.
9. Inokuma, H., Okuda, M., Yoshizaki, Y., Hiraoka, H., Miyama, T., Itamoto, K.,
Une, S., Nakaichi, M. e Taura, Y. 2005.
Observação clínica de infecção por Babesia gibsoni com baixa parasitemia
confirmada por PCR. Veterinario. Gravando. 156: 116–118.
10. Itoh, N., Higuchi, S., Ogasawara, T., Ogasawara, A. e Kawa mura, S. 1987.
Um surto de babesiose canina na província de Aomori. J. Jpn. Veterinario.
Med. Associado 40: 167–171 (em japonês com resumo em inglês).
11. Higuchi, S., Simomura, S., Yoshida, H., Hoshi, F., Kawamura, S. e Yasuda,
Y. 1991. Desenvolvimento de Babesia gibsoni no epitélio intestinal do
carrapato, Haemaphysalis longicornis. j.
Saber. Com. ciência 53: 129–131.
[Artigo gratuito PMC] [PubMed] 12. S. Higuchi, M. Fujimori, F. Hoshi, S. Kawamura
e Y. Yasuda . J. Vet.
Med. ciência 57: 117–119.
13. Jefferies, R., Ryan, UM, Muhlnickel, CJ e Irwin, PJ
2003. Duas espécies de Babesia canina na Austrália: detecção e
caracterização por PCR. J. Parasitol. 89: 409–412.
14. Jensen, WA, Lappin, MR, Kamkar, S. e Reagan, WJ
471
2001. Uso de um ensaio de reação em cadeia da polimerase para detectar
e diferenciar duas cepas de Haemobartonella felis em gatos naturalmente
infectados. Sou. J. Vet. Res. 62: 604–608.
15. Kettner, F., Reyers, F. e Miller, D. 2003. Thrombocytopae nia in canine
babesiose and its clinic utility. JS Afr.
Veterinario. Associado 74: 63–68.
16. Lobetti, RG 1998. Babesiose Canina. Comp. Cont. Educ.
Praticar. 20: 418–430.
[ PMC free article ] [ PubMed ] 17. Matsuu, A., Kawabe, A., Koshida, Y., Ikadai,
H., Okano, S., e Higuchi, S. 2004. Incidência de infecção canina por
Babesia gibsoni e infecção subclínica entre cães Tosa na província de
Aomori, Japão . J. Vet. Med. ciência 66: 893–897.
18. Messick, JB 2004. Hemotropic mycoplasmas (hemoplasmas mas): uma
revisão e novos insights sobre o potencial patogênico. Veterinario.
Clin. Pathol. 33: 2–13.
19. Shimada, Y., Beppu, T., Inokuma, H., Okuda, M. e Onishi, T. 2003. Espécies
de carrapatos ixodídeos recuperadas de cães domésticos no Japão. Med.
Veterinario. Entomol. 17: 38–45.
20. Verdida, RA, Hara, OA, Xuan, X., Fukumoto, S., Igarashi, Zhang, S., Dong,
Junyan, Inokuma, H., Kabeya, H., Sato, Y., Morimoto, T., Maruyama, S.,
Claveria, D. e Nagasawa, H. 2004. Sorodiagnóstico de infecção por
Babesia gibsoni em cães por um imunossorvente enzimático melhorado
ensaio com P50 recombinante truncado . J. Vet. Med. ciência 66: 1517–
1521.
[ PMC free article ] [ PubMed ] 21. Zahler, M., H. Rinder, E. Zweygarth, T. Fukata,
Y. Maede, E. Schein e R. Gothe. Parasitol Gynecology 120: 365–369.