Article A comparison of antioxidant and antimicrobial activity between hop leaves

and hop cones

Abram 2015

2.2.5. Análise de detector de matriz de diodos HPLC

Para a análise por HPLC, 5 mL dos extratos etanólicos foram concentrados em

rotavapor (Büchi, Alemanha) em frascos para evitar a aderência permanente das
amostras secas ao vidro. Após a remoção completa do etanol, as amostras secas foram
ressuspensas em 1 mL de metanol usando um banho ultrassônico (Sonorex TK52,
Bandelin, Alemanha), uma vez que o metanol era anteriormente demonstrou ser um
solvente melhor que o etanol.

Uma coluna Chromolith® Performance de fase reversa (RP) (100 mm × 4,6 mm; 3 m)
(Merck, Alemanha) foi usado com um Detector de matriz de diodos HPLC (DAD)
(sistema Agilent série 1200; Agilent Technologies, EUA) para a análise HPLC-DAD. O
gradiente da eluição consistiu em fase móvel A (ácido acético:água, 25:975, v/v) e fase
móvel B (acetonitrila). A separação foi realizada a 30 ◦C com uma taxa de fluxo de 1
mL/min, com os seguintes gradientes de: 0 a 60 min, 100% a 0% A em B; 60 a 70 min,
100%B. O volume de injeção foi de 5 µL. O comprimento de onda de detecção foi
ajustado em 320 nm, pois os cromatogramas deram os sinais mais abundantes neste
comprimento de onda. Na determinação quantitativa, foi usado xantohumol (90% puro)
como padrão externo. Para atribuir alguns dos picos nos cromatogramas de HPLC para
compostos específicos, padrões foram executados para determinar seus tempos de
retenção. Os padrões eram: ácido cumárico (11,6 min), rutina (15,9 min), catequina
(30,3 min) e ácido cafeico (35,1 min).

Os picos que foram separados neste sistema HPLC-DAD foram atribuídos de acordo
com os seus tempos de retenção nas condições descritos e suas concentrações (CX)
foram calculadas de acordo com a seguinte equação: