Universidade do Estado do Rio de Janeiro

Centro Biomédico
Faculdade de Ciências Médicas

Bruna Alves da Silva Pimentel

Avaliação de aspectos clínico-epidemiológicos e de patogenicidade de

Streptococcus agalactiae isolados de gestantes e neonatos

Rio de Janeiro
2023
 Bruna Alves da Silva Pimentel

Avaliação de aspectos clínico-epidemiológicos e de patogenicidade de Streptococcus

agalactiae isolados de gestantes e neonatos

Tese apresentada, como requisito parcial para

obtenção do título de Doutor, ao Programa de Pós-
Graduação em Microbiologia, da Universidade do
Estado do Rio de Janeiro. Área de concentração:
Microbiologia Médica Humana.

Orientadora: Profª. Drª. Prescilla Emy Nagao Ferreira

Rio de Janeiro
2023
 CATALOGAÇÃO NA FONTE
UERJ/REDE SIRIUS/BIBLIOTECA CB-A

P644 Pimentel, Bruna Alves da Silva.

Avaliação de aspectos clínico-epidemiológicos e de patogenicidade de
Streptococcus agalactiae isolados de gestantes e neonatos / Bruna Alves da Silva
Pimentel. - 2023.
109 f.

Orientadora: Profª. Dra. Prescilla Emy Nagao Ferreira

Doutorado (Tese) - Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Instituto de

Biologia Roberto Alcântara Gomes. Pós-graduação em Biociências.

1. Streptococcus agalactiae – Patogenicidade – Teses. 2. Complicações infecciosas

na gravidez – Epidemiologia. 3. Sepse neonatal – Prevenção & controle. I. Ferreira,
Prescilla Emy Nagao. II. Universidade do Estado do Rio de Janeiro. Instituto de
Biologia Roberto Alcântara Gomes. III. Título.

CDU 579.862:618.2

Bibliotecário: Felipe Caldonazzo CRB7/7341

Autorizo apenas para fins acadêmicos e científicos, a reprodução total ou parcial desta tese, desde que
citada a fonte.
______________________________________ _____________________
Assinatura Data
 Bruna Alves da Silva Pimentel

Avaliação de aspectos clínico-epidemiológicos e de patogenicidade de Streptococcus

agalactiae isolados de gestantes e neonatos

Tese apresentada, como requisito parcial para

obtenção do título de Doutor, ao Programa de Pós-
Graduação em Microbiologia, da Universidade do
Estado do Rio de Janeiro. Área de concentração:
Microbiologia Médica Humana.

Aprovada em 13 de junho de 2023.

Banca Examinadora:
________________________________________________________
Profª. Dra. Prescilla Emy Nagao Ferreira (Orientadora)
Faculdade de Ciências Médicas – UERJ
________________________________________________________
Profª. Dra. Louisy Sanches dos Santos Sant’Anna
Faculdade de Ciências Médicas – UERJ
________________________________________________________
Profª. Dra.Gabriela Santos Jonathan
Instituto de Biologia Roberto Alcântara Gomes – UERJ
________________________________________________________
Profª. Dra. Verônica Viana Vieira
Fundação Oswaldo Cruz
________________________________________________________
Profª. Dra. Bernadete Teixeira Ferreira
Universidade Federal do Rio de Janeiro

Rio de Janeiro
2023
 DEDICATÓRIA

“Quanto aos nossos, que aprendam a dedicar-se à prática de boas obras, a fim de que
supram as necessidades diárias e não sejam improdutivos”. (Tito 3:14)
Nova Versão Internacional Bíblia Sagrada
 AGRADECIMENTOS

Porque ainda que a figueira não floresça, nem haja fruto na vide; ainda que decepcione o
produto da oliveira, e os campos não produzam mantimento; ainda que as ovelhas da
malhada sejam arrebatadas, e nos currais não haja gado; Todavia eu me alegrarei no
Senhor; exultarei no Deus da minha salvação. O Senhor Deus é a minha força, e fará os
meus pés como os das cervas, e me fará andar sobre as minhas alturas. (Habacuque 3:17-
19)
Agradeço aquele que sustentou até aqui, que fez com que tivesse forças para continuar.
LOUVADO SEJA DEUS! Agradeço em primeiro lugar à ele, por graça e misericórdia na
minha vida e que o nome dele seja bendito e louvado, desde agora e para todo sempre,
Amém! Este trabalho não seria realizado se não houvessem pessoas por trás, pessoas tão
maravilhosas e competentes que junto a mim executassem tal missão.
Agradeço a vida da minha orientadora Prof. Prescilla, que impulsionou me e vendo
capacidade até onde não havia, me auxiliou com todo empenho e forças, ouvindo me não só
como profa, mas também amiga que Deus colocou no meu caminho, louvo à Deus pela sua
vida! Te amo e obrigada!
Agradeço por todos presentes no grupo LBMFE os quais ajudaram sem medidas, não me
ausentando de nenhum componente, afinal, somos um grupo e sem cada um, nada disso seria
possível: Profa Gabriela Jonathan (amiga e colega de trabalho, te amo, gratidão); Kaian (não
mediu auxílio/esforços em nada, que você realize todos seus sonhos, gratidão); Rose (amiga e
prestativa em tudo, gratidão), Pamella, João, Julyana, Noemi, Isabelle, Eduarda, Dayane e
Lucas, todos, até os recém chegados (ICs), GRATIDÃO;
Agradeço aos amigos do HMCD que me ajudaram todo tempo, sentirei saudades, as
nossas manhãs eram ímpares! Vocês são nota 1000;
Agradeço ao GEAD UERJ (Grupo de estudantes adoradores de Deus), obrigada pela
amizade e apoio em fé e ousadia na palavra de DEUS;
Agradeço ao apoio dos familiares (Mãe e Pai) e amigos pessoais os quais foram
fundamentais para que chegasse até aqui, pela força que me ajudou a prosseguir;
Agradeço à IPAMPD (Ig. Pentecostal Apóstólica Ministério Promessa de Deus) minha
casa espiritual a qual juntamente com a minha líder Bp Marcia Franco, orou por este
momento e auxiliou me em tudo;
Agradeço ao meu noivo Thiago, meu amor, que ajuda, e não mede esforços para me
auxiliar, mesmo estando longe grande parte do tempo. Te amo!
Agradeço à todos que de alguma maneira me apoiaram em tal missão. Deus os abençoe e
recompense mil vezes mais.

Agradeço à CAPES pelo financiamento.

“Eis que vos envio como ovelhas ao meio de lobos; portanto, sede prudentes como as
serpentes e simples como as pombas”.
(Mateus 10:16) Jesus Cristo
Biblia Sagrada Versão Almeida Revista e Atualizada.
 RESUMO

PIMENTEL, Bruna Alves da Silva. Avaliação de aspectos clínico-epidemiológicos e de

patogenicidade de Streptococcus agalactiae isolados de gestantes e neonatos. 2023. 109 f.
Tese (Doutorado em Microbiologia) – Faculdade de Ciências Médicas, Universidade do
Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2023.

O Streptococcus agalactiae (estreptococos de grupo B, EGB) é um microrganismo

oportunista que compõe a microbiota anfibiôntica normal dos tratos gastrointestinal, bucal e
reto/vaginal humano. S. agalactiae pode ascender até o útero em gestantes colonizadas,
transpor a barreira placentária e ocasionar complicações podendo chegar até ao óbito
neonatal. O monitoramento da mãe e filho no hospital/maternidade de origem é de extrema
importância. Portanto, este estudo teve como objetivo principal a avaliação de aspectos
clínico-epidemiológicos e de patogenicidade de S. agalactiae isolados de gestantes e neonatos
atendidos na Maternidade Carmela Dutra (Rio de Janeiro, RJ). No período de janeiro de 2018
até fevereiro de 2020 foram coletadas 305 espécimes clínicos, sendo 225 (73,7%) espécimes
clínicos (vaginais, retais, urina e secreção) oriundos de gestantes entre 34a-37a semanas de
gestação e 80 (26,2%) espécimes clínicos (umbigo e orelha externa) de neonatos nascidos de
24 até 48h de nascimento, os quais foram submetidas à identificação por sorologia e pela
técnica de MALD TOF. As 29 (9,5%) amostras isoladas de gestantes e 19 (6,2%) amostras de
neonatos foram identificadas como pertencentes à espécie S. agalactiae, respectivamente. Os
resultados do PCR multiplex mostraram que o tipo capsular Ia foi predominante em gestantes
com 55% (n=16), seguido do tipo V com 20,6 % (n=6), II com 10,3% (n=3) e III com 14%
(n=4). Em amostras neonatais houve a prevalência do tipo capsular V (n=9; 47%), seguido
dos tipos Ia (n=4; 21%), III (n=2; 11%), II (n=2; 11%), VI (n=1; 5%) e VII (n=1; 5%).
Dentre as comorbidades verificadas com maior frequência nas gestantes estudadas a
hipertensão gestacional (24%), diabetes miellitus gestacional (17%) e infecções urinárias
(17%) foram as que apresentaram maior taxa de intercorrência no parto. Além disso, o tipo
capsular Ia foi identificado em amostras oriundas de gestantes com infecção urinária e
diabetes mellitus gestacional, características de gestação de alto risco. Os tipos capsulares Ia e
V tiveram uma maior prevalência em comorbidades quando comparados aos demais tipos
capsulares. Gestantes com idade entre 29-36, seguidas de 21-28 anos de idade foram
prevalentes com 28% e 17% das amostras bacterianas, respectivamente. Mães de cor parda
(24%) e branca (17%) foram predominantes em relação às de cor preta (14%). Podemos
observar também maior número de colonização por S. agalactiae em isolados oriundos de
umbigo de recém natos. Esses resultados demonstram a importância de análise de gestantes
colonizadas por S. agalactiae, incluindo neonatos de mães colonizadas que podem
desenvolver infecções invasivas através da colonização umbilical e no ouvido externo durante
o parto normal.

Palavras Chave: Streptococcus agalactiae. Gestantes. Prevenção. Sepse neonatal.

 ABSTRACT

PIMENTEL, Bruna Alves da Silva. Evaluation of clinical-epidemiological aspects and

pathogenicity of Streptococcus agalactiae isolated from pregnant women and newborns.
2023. 109 f. Tese (Doutorado em Microbiologia) – Faculdade de Ciências Médicas,
Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2023.

Streptococcus agalactiae (group B streptococci, GBS) is an opportunistic

microorganism that makes up the normal amphibian microbiota of the human gastrointestinal,
oral, and rectal/vaginal tracts. S. agalactiae can ascend to the uterus in colonized pregnant
women, cross the placental barrier and cause complications that can even lead to neonatal
death. Monitoring the mother and child at the hospital/maternity of origin is extremely
important. Therefore, this study had as its main objective the evaluation of clinical-
epidemiological aspects and pathogenicity of S. agalactiae isolated from pregnant women and
newborns treated at Maternidade Carmela Dutra (Rio de Janeiro, RJ). From January 2018 to
February 2020, 305 clinical specimens were collected, of which 225 (73,7%) were clinical
specimens (vaginal, rectal, urine and secretion) from pregnant women between the 34th-37th
week of pregnancy and 80 (26,2%) clinical specimens (umbilicus and external ear) of
neonates born from 24 to 48 hours after birth, which were submitted to identification by
serology and by the MALD TOF technique. The 29 (9,5%) samples isolated from pregnant
women and 19 (6,2%) samples from neonates were identified as belonging to the S.
agalactiae species, respectively. The multiplex PCR results showed that the capsular type Ia
was predominant in pregnant women with 55% (n=16), followed by type V with 20.6% (n=6),
type II with 10.3% (n=3) and III with 14% (n=4). In neonatal samples, there was a prevalence
of capsular type V (n=9; 47%), followed by types Ia (n=4; 21%), III (n=2; 11%), II (n=2; 11%
), VI (n=1; 5%) and VII (n=1; 5%). Among the comorbidities most frequently observed in the
pregnant women studied, gestational hypertension (24%), gestational diabetes mellitus (17%)
and urinary infections (17%) were the ones that presented the highest rate of complications
during childbirth. In addition, the capsular type Ia was identified in samples from pregnant
women with urinary tract infection and gestational diabetes mellitus, characteristics of high-
risk pregnancies. Capsular types Ia and V had a higher prevalence of comorbidities when
compared to the other capsular types. Pregnant women aged 29-36, followed by 21-28 years
old were prevalent with 28% and 17% of bacterial samples, respectively. Brown (24%) and
white (17%) mothers were predominant compared to black mothers (14%). We can also
observe a greater number of colonization by S. agalactiae in isolates from the umbilicus of
newborns. These results demonstrate the importance of analyzing pregnant women colonized
by S. agalactiae, including neonates of colonized mothers who may develop invasive
infections through umbilical and external ear colonization during normal delivery.

Keywords: Streptococcus agalactiae. Pregnant women. Prevention. Neonatal sepsis.

 LISTA DE FIGURAS

Figura 1- Colonização vaginal e transmissão do S. agalactiae através do fluido

amniótico,ultrapassando o epitélio, ascendendo até o útero e infectando
neonato.............................................................................................................. 17
Figura 2- Detecção de genes de virulência em amostras de S. agalactiae isoladas de
gestantes e neonatos.......................................................................................... 50
Figura 3- Correlação entre a amplificação dos genes lmb, fbsA, hvgA, pili-1, pili-2a,
pili-2b, hylB e iag e os tipos capsulares Ia (A), II (B), III (C) e V (D) de
amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes ............................................... 51
Figura 4- Correlação entre a amplificação dos genes lmb, fbsA, hvgA, pili-1, pili-2a,
pili-2b, hylB e iag e os tipos capsulares Ia (A), II (B), III (C) e V (D)
provenientes de amostras de S. agalactiae isoladas de neonatos ...................... 53
Figura 5- Complexos clonais e sequências tipo de amostras de gestantes. (A)
Complexo clonais 1, 17, 23 e 452. (B) Sequências tipo 1, 17, 23, 24, 144,
865 e 1249.......................................................................................................... 55
Figura 6- Complexos clonais e sequências tipo de amostras de neonatos. (A)
Complexos clonais 1, 17, 19, 23 e 452. (B) Sequências tipo 1, 19, 23, 24, 28,
144, 162, 163, 865 e 1249............................................................................... 56
Figura 7- Dendograma de similaridade das amostras de S. agalactiae isoladas de
gestantes e neonatos, contendo a sequência tipo complexo clonal, tipo
capsular,e fatores de virulência......................................................................... 57
Figura 8- Ensaios de aderência e invasão com amostras de gestantes e células epiteliais
(A549)................................................................................................................ 59
Figura 9- Ensaios de aderência e invasão com amostras neonatais e células epiteliais
(A549)................................................................................................................ 60
 LISTA DE GRÁFICOS

Gráfico 1 - Faixa etária de gestantes colonizadas pelo S. agalactiae. NI* Não

informada....................................................................................................... 40
Gráfico 2 - Cor de pele em gestantes colonizadas por S. agalactiae. NI* Não
informada....................................................................................................... 41
Gráfico 3 - Comorbidades em gestantes entre 34-37 semanas de
gestação......................................................................................................... 42
Gráfico 4 - Tipagem capsular de amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes com
34-37 semanas de gestação e de neonatos com 24h-48h de
nascimento..................................................................................................... 46
Gráfico 5 - Tipagem capsular de amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes entre
34-37 semanas de gestação........................................................................... 47
Gráfico 6 - Tipagem capsular de amostras de S. agalactiae isoladas de neonatos com
24h-48h de nascimento.................................................................................. 47
Gráfico 7 - Correlação entre o tipo capsular e comorbidades em gestantes com 34-37
semanas de gestação...................................................................................... 48
Gráfico 8 - Complicações durante o parto em gestantes colonizadas com amostras de
S. agalactiae pertencentes aos tipos capsulares Ia e V ................................. 49
 LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Primers para tipagem das amostras de S. agalactiae..................................... 36

Tabela 2 - Primers utilizados para determinação dos fatores de virulência das

amostras de S. agalactiae............................................................................... 37

Tabela 3 - Primers usados para MLST de S. agalactiae................................................. 38

Tabela 4 - Amostras de gestantes com 34-37 semanas de gestação e de recém-

nascidos com 24h-48h de vida, atendidos no setor de emergência do
Hospital e Maternidade Carmela Dutra (HMCD).......................................... 42
Tabela 5 - Identificação das amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes por
sorologia e MALDI-TOF MS com score ≥ 2,0 e perfil de susceptibilidade
aos antimicrobianos........................................................................................ 44
Tabela 6 - Identificação das amostras de S. agalactiae isoladas de neonatos por
sorologia e MALDI-TOF MS com score ≥ 2,0 e perfil de susceptibilidade
aos antimicrobianos........................................................................................ 45
Tabela 7 - Complexos clonais (CC) e sequências tipo (ST) das amostras de S.
agalactiae sequenciadas através do MLST.................................................... 54
 LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

BHI Infusão cérebro coração

CAMP Técnica para confirmação laboratorial do EGB (sigla corresponde
às iniciais Christie, Atkins e Miunch – Peterson)
CCs CCs Complexos Clonais
CDC Center of Diseases Control and Prevention
CLSI Clinical and Laboratory Standarts Institute
CP Capsula polissacarídica
CPS Polissacarídio capsular
CPS Gene referente a capsula polissacarídica
DMG Diabetes Miellitus Gestacional
DNA Ácido desoxirribonucléico
DO Densidade ótica
EDTA Ácido etileno amino acético
EGB Estreptococos do grupo B
ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
fbs A Fibrinogen binding protein A, proteína de ligação a fibrinogênio A
fbs B Fibrinogen binding protein B, proteína de ligação a fibrinogênio B
GAG Glicosamino glicanos
HAS Hipertensão arterial
HMCD Hospital e Maternidade Carmela Dutra
HvgA Adesina hipervirulenta de S. agalactiae
Hylb Hialuronidase
iag Gene associado a invasão
LMB Laminin binding protein; proteína ligada a laminina
MLST Multi Locus Sequence Typing
PCR Polymerase Chain Reaction
PI-1 pilus island 1
PI-2 pilus island 2
ST-17 Sequência Tipo 17
UFC/ML Unidades formadoras de colônia por mililitro
 SUMÁRIO

INTRODUÇÃO ................................................................................................... 14
1 OBJETIVOS ........................................................................................................ 30
1.1 Objetivo geral ....................................................................................................... 30
1.2 Objetivos específicos ............................................................................................ 30
2 MATERIAL E MÉTODOS ................................................................................ 31
2.1 Coleta de dados das gestantes colonizadas por S. agalactiae............................ 31
2.2 Coleta de swabs retais e vaginais de gestantes................................................... 31
2.3 Coleta de swabs de orelhas externa e umbigo de neonatos.............................. 32
2.4 Cultivo Identificação e armazenamento bacteriano......................................... 32
2.4.1 Coloração de Gram................................................................................................. 32
2.4.2 Catalase................................................................................................................... 33
2.4.3 Fator CAMP (Christie, Atkins, Munch-Petersen)………………………………... 33
2.4.4 Identificação sorológica das amostras de S. agalactiae.......................................... 33
2.4.5 Armazenamento e utilização das amostras de S. agalactiae................................... 34
2.5 Identificação por MALDI-TOF MS.................................................................... 34
2.6 Teste de susceptibilidade aos antimicrobianos................................................... 35
2.7 Tipagem capsular das amostras de S. agalactiae por PCR-multiplex.............. 35
2.8 Identificação dos fatores de virulência por PCR................................................ 36
2.9 Tipagem de sequências Multilocus (MLST)....................................................... 38
2.10 Ensaios de interação das amostras de S. agalactiae com células epiteliais
alveolares humanas (A549).................................................................................. 36
3 RESULTADOS...................................................................................................... 40
3.1 Coleta de dados...................................................................................................... 40
3.1.1 Faixa etária de gestantes.......................................................................................... 40
3.1.2 Cor de pele das gestantes por autodeclaração......................................................... 41
3.1.3 Comorbidades presentes em gestantes colonizadas pelo S. agalactiae.................. 41
3.2 Coleta de amostras................................................................................................ 42
3.3 Identificação das amostras isoladas de gestantes e neonatos............................ 43
Perfil de resistência aos antimicrobianos das amostras de S. agalactiae
3.4 43
isoladas de gestantes e neonatos...........................................................................
3.5 Tipagem Capsular................................................................................................. 46
3.6 Detecção de genes de fatores de virulência......................................................... 49
3.7 Tipagem de sequência multilocus (MLST)......................................................... 54
3.8 Ensaios de interação com células epitélio respiratório humano (A549)........... 57
4 DISCUSSÃO.......................................................................................................... 61
CONCLUSÕES..................................................................................................... 73
REFERÊNCIAS.................................................................................................... 75

ANEXO A - Ficha neonatal de coleta hospitalar................................................. 102

ANEXO B - Ficha gestacional de coleta hospitalar............................................. 104
ANEXO C - Publicação em Revista Online.......................................................... 107
 14

INTRODUÇÃO

Streptococcus agalactiae

O Streptococcus agalactiae, também denominado Estreptococos do Grupo B (EGB),

pertence à família Streptococcaceae e ao gênero Streptococcus, o qual compartilha diversas
características morfológicas com as espécies do gênero. O S. agalactiae é um coco Gram-
positivo que se organiza em pares ou em cadeias, β-hemolítico, anaeróbio facultativo e
catalase negativo (SIX et al., 2016; RAABE & SHANE et al., 2019).
Na década de 1970, o S. agalactiae foi reconhecido como agente etiológico da
mastite bovina (SCHUCHAT et al., 1999; FARLEY et al., 2001), sendo denominado
“Streptococcus da mastite”. O microrganismo foi identificado nas glândulas mamárias de
ruminantes, causando mastite e sobrevivendo por longos períodos de tempo (NOCARD &
MOLLEREAU et al., 1887; TEIXEIRA et al., 2008; MARTIN et al., 2010; SHANG et al.,
2020; HANNA & NOOR et al., 2023). A mastite causada pelo S. agalactiae pode ser
subclínica ou clínica apresentando processo inflamatório intenso, sendo responsável pela
redução de 25%-42% da produção de leite no Brasil (MARTIN et al., 2010; BRITO et al.,
2016). Posteriormente, o S. agalactiae foi reconhecido como microbiota anfibiôntica dos
tratos bucal, gastrointestinal e geniturinário humano, podendo ser também responsável por
quadros clínicos leves (infecção vaginal e urinária) e infecções graves como celulite e fascite
em neonatos e adultos imunocomprometidos. Vários fatores estão associados a um maior
risco de colonização pelo S. agalactiae incluindo etnia, comorbidades, múltiplos parceiros
sexuais entre outros (MORINIS et al., 2011; LEE et al., 2015; PIMENTEL et al., 2016).
A classificação do S. agalactiae em tipos capsulares (Ia, Ib, II-IX), baseia-se na
variação do polissacarídeo específico presente na cápsula polissacarídica, constituído por
polímeros de glicose, galactose, ramnose, N-acetilglicosamina e ácido siálico (SLOTVED et
al., 2007). Os tipos capsulares associados com doenças em humanos e animais são os tipos Ia,
Ib, II, III, IV e V (MARTINEZ et al., 2000; GHERARDI et al., 2007, VAN DER MEE-
MARQUET et al., 2009). O tipo III é responsável por 30-70% dos casos de sepse e meningite
neonatal, sendo o segundo mais detectado em gestantes assintomáticas, enquanto o tipo V tem
predominado em casos de infecções em adultos, idosos e adultos imunocomprometidos
(FIOLO et al., 2012; HO et al., 2013).
Na década de 1990, a triagem de S. agalactiae e a quimioprofilaxia intraparto
reduziram significativamente a mortalidade em países industrializados. Atualmente,
 15

independente das mudanças epidemiológicas, o S. agalactiae permanece como um patógeno

oportunista relevante de infecções graves em recém-nascidos, idosos e adultos com
comorbidades, principalmente obesidade e diabetes. A taxa de doenças invasivas é de
aproximadamente 25 casos a cada 100.000 adultos com mais de 65 anos (Centers for Disease
Control and Prevention, 2016; SACHELI et al., 2018; GRAUX et al. 2021). A mortalidade
estimada atribuída às infecções graves por S. agalactiae em idosos é superior a 50% e de 1/20
em adultos não-grávidos (EDWARS et al.,2005 VERANI et al., 2010; TAZI et al., 2011). O
S. agalactiae é o principal patógeno de infecção perinatal e endometrite (TEVDORASHVILI
et al., 2015), podendo acarretar em parto prematuro, aborto, natimorto e uma série de quadros
clínicos graves como pneumonia, sepse neonatal e meningite. A fim de reduzir as infecções
causadas pelo patógeno, mais atenção deve ser dada na prática clínica, incluindo análises para
triagem e detecção de S. agalactiae em gestantes, bem como tratamento preventivo para evitar
possível infecção materno-infantil (XIAO-YAN et al., 2021).
A técnica de Multi Locus Sequence Typing (MLST) possibilitou classificar a maioria
das amostras de S. agalactiae em complexos clonais (CCs), utilizando uma combinação de
sete genes housekeeping codificadores de enzimas relacionadas ao metabolismo bacteriano:
álcool dehidrogenase (adhP), fenilalanil tRNA sintetase (pheS), aminoácido transportador
(atr), glutamina sintetase (glnA), serina dehidratase (sdhA), glicose kinase (glcK) e
transketolase (tkt). O conjunto desses genes forma um perfil alélico denominado tipo
sequencial (ST, do inglês Sequence Type), que pode ser organizado em grupos relacionados
formando os complexos clonais (CC) quando pelo menos seis dos sete alelos são
compartilhados, além de definir o possível genótipo central do grupo. Essas informações são
inseridas em um banco de dados online com acesso aberto que recebe, organiza, compara e
disponibiliza informações sobre as sequências de ácido desoxirribonucleico (DNA)
depositadas (SØRENSEN et al., 2010; DA CUNHA et al., 2014). Desta forma, seis principais
CCs (CC1, CC10, CC17, CC19, CC23 e CC26) foram identificados, enfatizando a
diversidade do S. agalactiae em humanos (JONES et al., 2006; KARATAN & WATNICK et
al., 2009).
Amostras de S. agalactiae pertencentes a determinados CCs possuem maior potencial
para causar doença invasiva, enquanto outros abrigam principalmente amostras colonizadoras.
Pesquisas associaram as ST-1 e ST-19 à colonização assintomática (JONES et al., 2003).
Contudo, o clone ST-17 identificado em amostras de S. agalactiae pertencentes ao tipo
capsular III foi associado à meningite neonatal. Assim, amostras pertencentes à ST-17 têm
sido, atualmente, designadas como “hipervirulentas” (MUSSER et al., 1989; POYART et al.,
 16

2008; PHARES et al., 2008). O complexo clonal hipervirulento ST-17 possui tropismo por
meninges, ligando-se especificamente à vimentina e está presente em isolados neonatais
invasivos, mas não em amostras isoladas de portadores assintomáticos (DORAN et al., 2003).

Gestantes e neonatos

A transmissão e a infecção em recém-nascidos está associada à colonização materna

no momento do parto. A colonização vaginal é o principal fator de risco para doença neonatal,
onde 10-30% das mulheres são colonizadas de forma assintomática (WENNEKAMP,
HENNEKE et al., 2008; ROSEN et al., 2017). Cerca de 50% dos casos de neonatos
infectados, ocorrem através da transmissão vertical de mães colonizadas, onde 1% a 12% dos
bebês contaminados são propensos a desenvolverem doenças invasivas (BERARDI et al.,
2013). Os fatores de risco para transmissão vertical são: parto prematuro antes de 37a
semanas, febre materna (≥ 38°C) durante o trabalho de parto, ruptura prolongada das
membranas (≥ 18 horas) e infecção do trato urinário durante a gravidez (HAKIM et al., 2018).
As infecções neonatais podem ser classificadas de acordo com o tempo em que a
doença se manifesta. A doença de início precoce (DIP) representa cerca de 80% dos casos de
infecção neonatal (BERARDI et al., 2020), a qual ocorre até o 7º dia de vida do recém-
nascido, sendo as principais manifestações clínicas a pneumonia e a sepse (ONG et al., 2018;
NANDURI et al., 2019). No entanto, a doença de início tardio (DIT) pode ocorrer entre a
primeira semana e o terceiro mês de vida do neonato, sendo caracterizada pela sepse e
meningite com taxa de mortalidade de ~ 0,49 a cada 1.000 nascidos vivos (SEALE et al.,
2017; AGER et al., 2020). Após as diretrizes recomendadas pelo CDC em 1996 para triagem
universal de mulheres grávidas entre 35a-37a semanas de gestação e administração de
antibióticos profiláticos para mulheres colonizadas, a incidência de DIP diminuiu para 0,25
casos por 1.000 nascidos vivos (VAN DYKE et al., 2009; BERARDI et al., 2017). Desta
forma, o acompanhamento de gestantes colonizadas pelo S. agalactiae é de fundamental
importância para que o parto ocorra de forma natural e saudável.
 17

Figura 1 – Colonização vaginal e transmissão do S. agalactiae através do fluido amniótico, ultrapassando o

epitélio, ascendendo até o útero e infectando o neonato

Fonte: VORNHAGEN, 2017.

A taxa de colonização por S. agalactiae durante a gravidez é variável entre os

continentes. Nos Estados Unidos, a incidência de infecção pelo patógeno foi reduzida de 1,7
casos/1.000 nascidos vivos no início de 1990 para 0,34 casos/1.000 nascidos vivos após a
implantação da profilaxia com antibióticos durante o parto (EVANGELISTA et al., 2015). Na
França, no período de 2012 a 2022, trezentos e trinta e seis casos de infecções invasivas por S.
agalactiae em mulheres entre 18 a 50 anos, incluindo 242 (72%) infecções associadas à
gravidez, foram identificadas. Nessas gestantes, a maioria dos casos foi de infecções intra-
amnióticas (55,8%), parto pré-termo (61,3%) e associadas a complicações obstétricas e
neonatais (81,7%). Adicionalmente, S. agalactiae ST-17 foi o mais isolado durante o parto
(18,8% dos casos) em 700 gestantes atendidas em hospital em Nahariya, região Norte de
Israel. O estudo relatou um aumento significativo de 11,8% para 16,4% na incidência de
colonização pelo microrganismo em gestantes (GERMAN et al., 2006). Du e colaboradores
(2021) analisando mulheres grávidas vietnamitas no hospital em Hanói-Vietnã, demonstraram
que gestantes acima de 35 semanas de gestação apresentaram maior taxa de colonização pelo
S. agalactiae em comparação com gestantes com menos de 35 semanas.
 18

No Brasil, estudo realizado em uma maternidade pública de Brasília verificou sepse

neonatal causada por S. agalactiae em 1,7 casos/1.000 nascidos vivos, com taxa de
mortalidade de 44%. Após a implementação das diretrizes de prevenção às infecções por S.
agalactiae nesta maternidade, nenhum novo caso foi detectado e a incidência de sepse
neonatal foi reduzida de 1,7 para 1,3 casos/1.000 nascidos vivos no período de 2012-2015
(FREITAS et al., 2017). Na região Nordeste do Brasil apenas Maranhão, Ceará, e Salvador
realizaram triagem de S. agalactiae nos últimos 10 anos. No Maranhão, no período de 2005-
2006, a prevalência encontrada foi de 20,4%. Em 2011, dois estudos cearenses foram
publicados e as taxas de prevalência de colonização por S. agalactiae em gestantes foram de
9,8% e 8,9%, respectivamente (LINHARES et al., 2011; VENTURA et al., 2011). Em 2012,
análises em gestantes atendidas em maternidades de Vitória da Conquista/Bahia,
identificaram S. agalactiae em 17,4% das participantes (OLIVEIRA et al., 2013).
Na região Sudeste, dados do nosso grupo demonstraram que a maioria das amostras
isoladas na cidade do Rio de Janeiro pertenciam ao tipo III (38,46%), seguido dos tipos V
(25,64%), Ia (10,26%), II (7,69%), Ib (5,13%) e 12,82% de amostras não tipáveis (SOARES
et al., 2013). Em outro trabalho realizado no Rio de Janeiro com gestantes no período de 2008
a 2015, o S. agalactiae foi detectado em 26,2% dos casos, sendo a presença de corrimento
vaginal o único traço associado a um maior risco de colonização. Os tipos Ia (37,3%) e II
(19,9%) foram os mais frequentes entre os isolados de S. agalactiae avaliados, seguidos pelos
tipos Ib (11,1%), V (9,1%), III (6,8%), IV (3,5%) e amostras não tipadas (12,1%)
(BOTELHO et al., 2018). Rocchetti (2011) demonstrou taxa de colonização de 25,4 % em
405 mulheres entre a 35a e 37a semanas de gestação na cidade de Campinas. Outras pesquisas
também na cidade de Campinas, entre 2007-2011, mostraram a incidência de infecção por S.
agalactiae de 0,6/1.000 nascidos vivos (FIOLO et al., 2012).
Na região Sul do Brasil, estudo realizado no Rio Grande do Sul com 110 gestantes
hospitalizadas por complicações gestacionais, foi verificada a predominância de gestantes da
cor branca (77,3%) com idade entre 15-42 anos e renda per capita inferior a um salário
mínimo nacional (78,2%). Além disso, quatro casos de óbito fetal intrauterino ocorreram por
sífilis (2) e hipertensão arterial (2) (ZANINI DA ROCHA et al., 2020). Em 2010, no Hospital
da Universidade Federal do Paraná (Curitiba), foram isoladas amostras de S. agalactiae em
pacientes acometidos por bacteremia, artrite, meningite, osteomelite, infecção puerperal,
infecção na pele e infecção do trato urinário (isolados reto-vaginal e de trato urinário)
(PALMIERO et al., 2010). Apesar de todos esses dados publicados, o Brasil ainda não
 19

instituiu o esquema de profilaxia estabelecido pelo Centro de Controle de Doenças (Centers of

Disease Control and Prevention, CDC).
O S. agalactiae é um dos principais patógenos relacionados com a morte neonatal por
sepse precoce, mesmo com a utilização de antibióticos (PESSOA et al., 2014). Além da
colonização do trato genito-urinário materno representar um importante reservatório para
infecções oportunistas por S. agalactiae em crianças, onde a densidade da colonização
materna no parto é um importante preditor da transmissão vertical, funcionários hospitalares
também podem ser um importante reservatório do microrganismo, ocasionando a propagação
hospitalar (ABER et al., 1976; BOYER et al., 1983; KULKARNI et al., 2001). Durante o
período de hospitalização é provável que alguns lactentes adquiram o microrganismo após o
nascimento. Pesquisa realizada na Índia investigou a taxa de colonização por S. agalactiae em
1.050 recém-nascidos entre 24h e 48h de vida, visando identificar possíveis microrganismos
através da coleta de swabs de material da pele e/ou membranas mucosas do conduto auditivo
externo (10,2%), narinas anteriores (2%), umbigo (26,5%) e região anorretal (6,1%).
Interessantemente, a taxa variou de acordo com os sítios isolados, onde a taxa geral de
colonização por S. agalactiae foi de 3,23%, sendo 55,1% em isolados de umbigo (SHAH et
al., 2014).
Mulheres com infecção do trato urinário na gravidez têm maior probabilidade de
terem partos prematuros. A identificação de mulheres de alto risco de parto prematuro,
permite cuidados direcionados e uso adequado de recursos disponíveis. Por outro lado, o uso
indiscriminado de antibióticos e o subsequente desenvolvimento de resistência aos
antimicrobianos são preocupações crescentes (BALACHANDRAN et al., 2022). A falta de
triagem de S. agalactiae em gestantes nas maternidades brasileiras, bem como a não
implementação profilática recomendada pelo CDC (1996), podem contribuir para o aumento
de casos de infecções neonatais, uma vez que a maioria não é notificada. Desta forma, torna-
se importante a pesquisa dentro de hospitais/maternidades para que seja realizado o
monitoramento epidemiológico e, posteriormente, medidas preventivas possam ser
implementadas pelo governo brasileiro com intuito de reduzir os casos de infecções invasivas
e complicações que possam acarretar em óbitos.
 20

Resistência aos antimicrobianos

O antibiótico de primeira escolha recomendado pelo CDC é a penicilina, e para

mulheres que tenham histórico de alergias graves a este medicamento é recomendada a
substituição por clindamicina ou eritromicina. Estudos vêm demonstrando que em países onde
o protocolo de profilaxia contra S. agalactiae é aplicado de maneira correta, ocorreu uma
diminuição significativa nos casos de DIP (de 1,7 para 0,37 a cada 1000 nascidos vivos)
(VERANI et al., 2010; MORGAN et al., 2021). Entretanto, o mesmo padrão não ocorreu para
as DIT (TAZI et al., 2019). Apesar de os resultados serem positivos para as DIP, alguns
trabalhos relatam que este tipo de tratamento pode prejudicar o desenvolvimento da
microbiota intestinal neonatal, aumentando assim os riscos de infecção por outros
microrganismos (TAPIAINEN et al., 2019; THOMAS & COOK et al., 2020).
Nos últimos anos, a diminuição da susceptibilidade de S. agalactiae à penicilina tem
sido reportada. O primeiro trabalho foi publicado por Kimura (2008), o qual analisou 14
amostras de S. agalactiae isoladas de pacientes de 12 hospitais de diferentes regiões do Japão.
Todas as amostras apresentaram mutações no gene pbp2x, conhecido pela resistência aos β-
lactâmicos. Além disso, as amostras apresentaram susceptibilidade reduzida à penicilina, pois
os valores da concentração mínima inibitória (CMI) foram superiores aos estipulados pelo
CLSI. Desde então, outros trabalhos têm relatado amostras com susceptibilidade reduzida à
penicilina, principalmente no Japão, Estados Unidos, Itália e China (NAGANO et al., 2008;
NAGANO et al., 2009; KIMURA et al., 2011; NAGANO et al., 2012; GENOVESE et al.,
2020; LI et al., 2020). Posteriormente, Burcham e colaboradores (2019) relataram a
resistência à penicilina em 15% das amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes e
pertencentes aos tipos capsulares III (33%) e V (27%).
No Brasil, a diminuição da CMI para penicilina também foi encontrada em isolados
de S. agalactiae de origem oncológica, no período de 2010-2014, cujo valor alterou de
0,03/mL para 2μg/mL. Amostras de S. agalactiae também mostraram resistência para
tetraciclina (94,8%), clindamicina (8,4%), norfloxacino (38,5%) e eritromicina (2,7%)
(PIMENTEL et al., 2016).
Amostras bacterianas multirresistentes (MDR) apresentam resistência a três ou mais
classes de antimicrobianos (TULYAPRAWAT et al., 2021). A resistência antimicrobiana
emergente em ambientes clínicos e comunidades se tornou uma ameaça à saúde pública em
todo o mundo. Du e colaboradores (2021) analisando 272 isolados de S. agalactiae
verificaram resistência para tetraciclina (89,66%), seguida de eritromicina (76,23%) e
 21

clindamicina (58,21%). Esses dados indicaram uma prevalência crescente de amostras de S.

agalactiae MDR. Portanto, a escolha de antibióticos para a profilaxia e tratamento de
infecções por S. agalactiae, especialmente eritromicina e clindamicina, precisa ser
reconsiderada (GUO et al., 2018; HIRAI et al., 2020). Dados do Canadá, China e Portugal, no
período de 2007-2019, relataram doenças invasivas neonatais causadas por S. agalactiae,
onde o clone hipervirulento ST-17 foi responsável por 66% (827/1.262) dos casos. Além
disso, uma sublinhagem MDR de S. agalactiae ST-17 foi identificada apresentando
resistência à tetraciclinas, aminoglicosídeos, macrolídeos e lincosamidas (CAMPISI et al.,
2016; MARTIN et al., 2017; PLAINVERT et al., 2020).
O sequenciamento do genoma de 229 cepas isoladas de humanos em todo o mundo
mostrou que o aumento das doenças invasivas por S. agalactiae está associado com a
dominância de clones resistentes aos antimicrobianos, principalmente à tetraciclina (CUNHA
et al., 2014). Devido ao seu amplo espectro de ação, baixa toxicidade e baixo custo, a
tetraciclina foi amplamente utilizada e resultou em um elevado índice de resistência pelo S.
agalactiae, conforme previamente reportado (DE MELO et al., 2016). A resistência a
tetraciclina em S. agalactiae é codificada por genes de proteção ribossomal (tetM e tetO) ou
por bomba de efluxo codificadas pelos genes tetK ou tetL (CULEBRAS et al., 2002; RUBIO-
LÓPEZ et al., 2012; DU et al., 2021).
Os macrolídeos têm sido frequentemente usados em infecções de bactérias Gram-
positivas. Nos últimos anos, o número crescente de amostras resistentes aos macrolídeos
representa um problema mundial. A multiplicidade de mecanismos de resistência e a
diversidade na expressão de fenótipos, tornam difícil a interpretação de testes de
suscetibilidade in vitro e o uso terapêutico correto desta classe de antibióticos (KATAJA et
al., 1999; SANTINO et al., 2006; KIMURA et al., 2013; MITSUBOSHI et al., 2021). A
resistência aos macrolídeos entre amostras do gênero Streptococcus é bem conhecida, onde
três fenótipos de resistência para macrolídeos, lincosamidas e estreptogramina (MLSB)
mediados por diferentes genes foram descritos (KATAJA et al., 1998; MITSUBOSHI et al.,
2021; USHINO et al., 2021; GHAMARI et al., 2022). A modificação do sítio alvo por
metilação devido às metilases codificadas pelos genes erm (erythromycin ribosome
methylation) (A) ou (B) impedem a ligação do antibiótico ao seu alvo ribossômico conferindo
resistência a macrolídeos-lincosamidas-estreptogramina B. A resistência MLSB pode ser
expressa com dois fenótipos: constitutivo (cMLSB) ou induzível (iMLSB) (GIOVANETTI et
al., 1999; GIOVANETTI et al., 2002; USHINO et al., 2021; CHOI et al., 2021).
 22

A eritromicina é um macrolídeo caracterizado pela presença de um anel macrocíclico

de lactonas que atua ligando-se ao RNA ribossomal 23S da subunidade 50S, interferindo na
elongação da cadeia peptídica durante a tradução e bloqueio da biossíntese de proteínas
bacterianas (GUIMARÃES et al., 2010). Os genes de resistência ermA, ermB, mefA/E têm
sido descritos como determinantes para resistência à eritromicina (DUARTE et al., 2005;
GAO et al., 2012). O gene mef (macrolide efflux) codifica o mecanismo de efluxo em S.
agalactiae, impedindo a atuação de macrolídeos, podendo ser transferido para outras bactérias
através da conjugação, tal mecanismo age no meio intracelular, impedindo que o antibiótico
atue, protegendo os ribossomos. Este gene confere ao S. agalactiae resistência aos
macrolídeos, sem interferir na susceptibilidade às lincosamidas e estreptogramina B, sendo
responsável pelo fenótipo M (ROBERTS et al., 1999).
A clindamicina é uma lincosamida também utilizada no tratamento de infecções por
S. agalactiae. O gene lnuB é o gene que confere resistência às lincosamidas (DE MOUY et al.
2001; FACCONE et al. 2010). No Brasil tem sido relatado aumento na resistência à
clindamicina (NAKAMURA et al., 2011; MIRANDA et al., 2018). Resistência aos
antibióticos de segunda linha, como eritromicina e clindamicina, permanece elevado entre S.
agalactiae, com vários países verificando taxas de resistência aumentadas nos últimos anos.
Além disso, a resistência a outras classes de antibióticos, como as fluoroquinolonas e os
aminoglicosídeos, também tem apresentado resultados crescentes nos últimos anos (HAYES
et al., 2020).
No Rio de Janeiro, resultados têm indicado um aumento na resistência à eritromicina,
afetando 13,2% das amostras clínicas testadas, onde mais de 85% apresentaram o fenótipo
cMLSB. A resistência à tetraciclina foi de 81,7%. Outro estudo realizado no Rio de Janeiro
relatou 14% de resistência à eritromicina e 5% resistência à clindamicina. Para a tetraciclina,
foi encontrada resistência em 83% dos isolados (CORREA et al., 2011; NAKAMURA et al.,
2011). Botelho (2018), também no Rio de Janeiro, mostrou que amostras de S. agalatiae
foram resistentes a diferentes antibióticos. O percentual de resistência observado entre os
isolados foi de 86% para tetraciclina, 14% para eritromicina, 5% para cloranfenicol, 5% para
levofloxacina e 2% para clindamicina. S agalactiae MDR, apresentando resistência às
fluoroquinolonas também foi observada, principalmente devido ao mecanismo de efluxo ou
mutações nos genes de resistência às quinolonas que codificam para enzimas topoisomerase
tipo II, DNA girase (gyrA/gyrB) e topoisomerase IV (parC/parE) (SIMONI et al., 2018; LI et
al., 2020).
 23

Devido ao aumento da resistência aos antimicrobianos observado nas redes públicas

e privadas de saúde, torna-se de extrema relevância a investigação de amostras resistentes aos
antimicrobianos, especialmente a detecção de amostras MDR.

Fatores de Virulência

O S. agalactiae possui moléculas presentes em sua superfície ou secretadas que

contribuem para a sua patogenicidade. A presença desses fatores de virulência pode promover
vantagens na aderência, invasão e consequentemente na sobrevivência do patógeno no
hospedeiro (MAISEY et al., 2008; PATRAS et al., 2015; VORNHAGEN et al., 2017). Os
principais fatores de virulência são: cápsula polissacarídica (CP), ácido siálico, C5a peptidase,
proteínas de ligação à matriz extracelular (MEC), fator CAMP, hialuronidase, hemolisina,
proteína C, proteínas de superfície de S. agalactiae (Bsp), pili, superóxido dismutase,
peptídeos catiônicos antimicrobianos, adesinas imunogênicas, entre outros (LEE et al., 2004;
LINDAHL et al., 2005; MAISEY et al., 2008; RAJAGOPAL et al., 2009; BEIGVERDI et
al., 2014; VORNHAGEN et al., 2017; Paoletti et al., 2019; LANNES-COSTA et al., 2020).
A cápsula polissacarídica (CP) é utilizada na identificação do S. agalactiae em
diferentes tipos capsulares e um importante fator de virulência, cuja expressão pode variar de
acordo com a fase do crescimento bacteriano, presença de soro humano e cultivo em meio
líquido ou sólido (KOGAN et al., 1996 apud SPELLERBERG, 2000). A CP é formada por
polímeros de alto peso molecular com epítopos específicos criados por diferentes arranjos de
unidades repetidas de açúcares como, glicose, galactose, N-acetilglicosamina e ácido siálico
(KOGAN et al., 1996; ALHHAZMI et al., 2017). Ela é capaz de promover a aderência do
microrganismo às superfícies epiteliais/endoteliais e inibir a fagocitose por macrófagos e
neutrófilos (NIZET et al., 2001; CIELSLEWICZ et al., 2005).
O ácido siálico está presente na CP como açúcar terminal (Neu5Ac) ligado à
galactose através de ligação α2-3 (CIESLEWICZ et al., 2001; CHAFFIN et al., 2005;
IMPERI et al., 2010). Amostras de S. agalactiae pertencentes aos tipos capsulares Ia, III e IV,
quando tratadas com sialidase, não apresentaram viabilidade intracelular em macrófagos,
sugerindo o importante papel do ácido siálico na sobrevivência intracelular (MONTEIRO et
al., 2004). Além disso, o ácido siálico presente em diferentes tipos de S. agalactiae interage
com Siglecs humanos, lectinas semelhantes a imunoglobulinas de ligação de ácido siálico, de
 24

uma maneira específica (CARLIN et al. 2007). Recentemente, a interação do ácido siálico de
S. agalactiae com o Siglec-9 em humanos, induziu a supressão da ativação plaquetária e a
liberação de peptídeos antimicrobianos, contribuindo para a virulência do microrganismo
(UCHIYAMA et al., 2019; NIZET et al., 2020).
A C5a peptidase é uma proteína multifuncional expressa na superfície do S.
agalactiae. Essa peptidase é capaz de fragmentar a anafilotoxina C5a do sistema
complemento, interferindo na atividade de neutrófilos e promovendo a sobrevivência do S.
agalactiae frente à imunidade inata do hospedeiro (SANTILLAN et al., 2011; MCKENNAN
et al., 2021). A C5a peptidase possui papel de ligação à fibronectina, auxiliando na aderência
e invasão celular (BECKMANN et al., 2002; CHENG et al., 2002).
Integrinas e proteínas da matriz extracelular (MEC) como fibronectina, fibrinogênio
e laminina são utilizadas pelo S. agalactiae como facilitadoras da interação durante a
internalização na célula hospedeira. A proteína Lmb é codificada pelo gene lmb a qual
favorece a aderência bacteriana, sendo essencial para a colonização do patógeno ao epitélio
danificado e translocação para a corrente sanguínea (MOUSLIM et al., 2004; TENENBAUM
et al., 2007; KACZOREK et al., 2017). O fibrinogênio é uma proteína presente no plasma
sanguíneo e na MEC que desempenha importante função no processo de cicatrização.
Atualmente, três proteínas de ligação ao fibrinogênio em S. agalactiae têm sido descritas:
FbsA, FbsB e FbsC (HAY et al., 1991; FUSS et al., 2001; MOSESSON et al., 2001;
SHABAYEK & SPELLERBERG et al., 2018). A ligação do fibrinogênio com proteínas da
MEC, principalmente fibronectina e laminina, facilita a interação com as integrinas presentes
na superfície celular do hospedeiro (MOUSLIM et al., 2004). Os genes fbsA e fbsB codificam
as proteínas FbsA e FbsB responsáveis pela mediação da ligação entre S. agalactiae e o
fibrinogênio da célula hospedeira. A proteína FbsA é responsável pela aderência bacteriana,
enquanto a FbsB é necessária para invasão celular (SCHUBERT et al., 2001; JACOBSSON
et al., 2003; GUTEKUNST et al., 2004; PIETROCOLA et al., 2005; ALBUQUERQUE et al.,
2019). FbsB é encontrada em todas as amostras de S. agalactiae, enquanto a FbsA está
associada apenas a algumas amostras analisadas (TETTELIN et al., 2005; SANCHES et al.,
2021). A proteína FbsC parece ser essencial para a capacidade do S. agalactiae se ligar ao
fibrinogênio. Amostras ∆fbsC mostraram redução significativa no processo de interação e
invasão às células dos epitélios pulmonar e intestinal, podendo ser um importante fator de
virulência para promover a infecção por S. agalactiae (BUSCETTA et al., 2014).
O fator Christie Atkins Munch Peterson – CAMP (gene cfb) é uma proteína de 23-25
kDa secretada pelo S. agalactiae que possui a capacidade de se ligar à proteínas ancoradas ao
 25

glicosilfosfatidilinositol, promovendo a lise da célula hospedeira. O fator CAMP pode

interagir com a porção Fc das imunoglobulinas humanas da classe IgG e IgM, tornando os
anticorpos ineficazes durante a opsonização bacteriana (JURGENS et al., 1987; LANGONI et
al., 2007; RAJAGOPAL et al., 2009). Além disso, ensaios com lipossomos mostraram que a
produção de poros por ação do fator CAMP é um processo cooperativo e de natureza
oligomérica, contribuindo para a perda da integridade celular do hospedeiro e dispersão
bacteriana. O fator CAMP também é utilizado para identificação de S. agalactiae através da
reação de CAMP, baseada na atividade co-hemolítica do fator CAMP com a β-hemolisina de
Staphylococcus aureus, dando origem à hemólise denominada “ponta de seta” (DORAN &
NIZET et al., 2004; RAJAGOPAL et al., 2009; JIN et al., 2018; BALLARD et al., 2021).
O ácido hialurônico é uma glicosaminoglicana composta por unidades dissacarídicas
repetidas (ácido N-acetil-D-glucosamina-D-glucurônico), importante para a migração celular,
sinalização celular, regulação da inflamação e prevenção de infecção ascendente (HYNES &
WALTON et al., 2000). O gene da hialuronidase expresso pelo S. agalactiae é o hylB, sendo
uma endoglicosidase que cliva cadeias de glicosaminoglicanas durante a degradação do ácido
hialurônico, permitindo a disseminação da bactéria (STERN et al., 2006; MAHENDROO et
al., 2012; AKGUL et al., 2014; KOLAR et al., 2015; NGUYEN et al., 2022).
A β-hemolisina de S. agalactiae é considerada um importante fator de virulência para
o desenvolvimento de doenças invasivas, e vários estudos determinaram o papel da β-
hemolisina associada à superfície de S. agalactiae como uma toxina desestabilizadora da
membrana de células epiteliais e células endoteliais cerebrais, contribuindo para a patogênese
da doença (NIZET et al., 1996; DORAN et al., 2003; SAGAR et al., 2013; BARROS et al.,
2021; HANNA & NOOR et al., 2023). No entanto, existem relatos controversos sobre o
papel da β -hemolisina para a sobrevivência do S. agalactiae em fagócitos. A deleção no gene
cylE tornou o patógeno sensível aos mecanismos de depuração fagocítica (LEE et al., 2004;
JIANG et al., 2005; SEND et al., 2009; SAGAR et al., 2013).
Outras proteínas de superfície como Cα (gene bca), Rib (gene rib) e Cβ (gene bac)
medeiam a aderência às células hospedeiras (LARSSON et al., 2003; SOUZA et al., 2013),
especialmente à membrana placentária, facilitando a invasão das células endoteliais do
sistema nervoso central (RAGUNATHAN et al., 2013; BOBADILLA et al., 2021).
As proteínas de superfície de S. agalactiae (Bsp) são encontradas e distribuídas nos
diferentes tipos capsulares, onde pelo menos quatro proteínas Bsp têm sido observadas
(BspA, BspB, BspC e BspD). Pesquisas indicam que BspA pode ser um fator de virulência
relacionado ao processo de aderência (REGO et al., 2016). BspC contribui para a aderência às
 26

células epiteliais vaginais (REGO et al., 2016; PIDWILL et al., 2018). Interações entre o S.
agalactiae e a vimentina de células endoteliais do cérebro humano, demonstraram a
participação da proteína BspC durante a invasão das meninges pelo microrganismo
(CONCETTA et al., 2019). Além disso, a adesina associada à superfície bacteriana (HvgA),
específica de amostras ST-17, apresentou maior potencial adesivo às células epiteliais
intestinais, endoteliais e do plexo coróide quando comparadas com amostras que não
expressavam HvgA (TAZI et al., 2010).
S. agalactiae necessita entrar em contato com o hospedeiro e atravessar a barreira
epitelial/endotelial para causar doenças. O gene iag, identificado em 2005 por codificar um
glicolipídeo conhecido como diglicosildiacilglicerol, é um dos principais genes relacionados
com a invasão celular. Ensaios com cobaias demonstraram que a deleção do gene iag
apresentou menor penetração da barreira hematoencefálica, ressaltando a importância deste
gene na virulência bacteriana. A substituição do alelo que codifica iag em amostras mutantes
demonstrou que S. agalactiae necessita de iag para transpor a barreira hematoencefálica e, por
consequência, levar ao desenvolvimento da meningite. Contudo, a deleção de iag não afetou
os demais passos da patogênese do S. agalactiae para o desenvolvimento da meningite,
incluindo: sobrevivência na corrente sanguínea, aderência em células endoteliais cerebrais
humanas (hBMEC) e sobrevivência intracelular (DORAN et al., 2005; PIETROCOLA et al.,
2005).
Pili são organelas adesivas proteicas e longas, com papel crucial na aderência e
colonização dos tecidos do hospedeiro. Os pili foram observados na década de 1950 através
da microscopia eletrônica em bactérias Gram-negativas (ANDERSON et al., 1949; HOWINK
& VAN et al., 1950). Em bactérias Gram-positivas, pili foram detectados cerca de 18 anos
depois em Corynebacterium renale como filamentos que se projetavam da superfície
bacteriana (YANAGAWA et al., 1968; YANAGAWA & Otsuki, 1970). SORIANI &
TELFORD et al., 2010). Posteriormente, os pili foram observados em S. agalactiae,
Streptococcus pyogenese e Streptococcus pneumoniae, estando diretamente envolvidos na
colonização de células epiteliais, translocação e invasão celular e formação de biofilme
bacteriano (TELFORD et al., 2006; HENDRICKX et al., 2012; SHABAYEK &
SPELLERBERG, 2018).
Os genes que codificam pili em S. agalactiae estão agrupados em duas ilhas
genômicas (loci distintos): pilus 1 (PI-1) e 2 (PI-2), sendo pilus 2 com duas variantes (2a e 2b)
(ROSINI et al., 2006; BRITTAN & NOBBS., 2015; TEATERO et al., 2017). Cada pilus é
responsável por codificar três proteínas estruturais, duas proteínas auxiliares, uma proteína
 27

cerne e duas enzimas sortases de classe C que catalisam a polimerização do pilus (DRAMSI
et al., 2006; KHARE et al., 2011). Segundo Jiang (2012), o PI-1 desempenha um importante
papel no mecanismo de evasão do sistema imune. PI-2a tem sido descrito como principal
pilus encontrado na espécie, mediando a aderência do S. agalactiae nas células epiteliais
humanas (KONTO-GHIORGHI et al., 2009; RINAUDO et al., 2010). A variante PI-2b está
relacionada com a formação de biofilme, aderência e invasão do patógeno em células
endoteliais, promovendo a migração transendotelial (MAISEY et al., 2007; PEZZICOLI et
al., 2008).
A colonização e a persistência em diferentes nichos do hospedeiro dependem da
capacidade de aderência do S. agalactiae às células do hospedeiro. Contudo, os mecanismos
de patogenicidade utilizados pelo S. agalactiae para causar doenças invasivas no hospedeiro
não estão totalmente elucidados.

Interação S. agalactiae com células hospedeiras

A interação de patógenos com células eucarióticas é um processo dinâmico e

selecionado pela evolução, sendo o primeiro passo para o estabelecimento de infecções
microbianas (MOLINARI & CHHATWAL et al., 1999; SANTOS et al., 2009). A interação
celular depende de vários processos multifatoriais que se iniciam com a aderência do
microrganismo às células hospedeiras, colonização e invasão tecidual, multiplicação ou não
do patógeno, persistência bacteriana intracelular, colonização e a possível disseminação para
outros tecidos e órgãos (PIZZARO-CERDA & COSSART et al., 2006; PINAUD et al., 2018).
Desde 1994, ensaios in vitro com S. agalactiae vem sendo realizados com diferentes
linhagens celulares com a finalidade de aprofundar o conhecimento sobre o mecanismo
utilizado na interação celular a fim de elucidar os mecanismos específicos da patogênese
desse microrganismo (TAMURA et al., 1994; SANTOS et al., 2003, COSTA et al., 2005;
Fettucciari et al., 2011; COSTA et al., 2011; ZHENG et al., 2020).
A colonização vaginal por S. agalactiae é um fator de risco para ruptura de
membranas e consequente parto prematuro. Estudos in vitro mostraram que amostras de S.
agalactiae isoladas de lactentes com sepse neonatal aderem às células do córion da membrana
corioamniótica humana. No entanto, ainda não se sabe se as amostras de S. agalactiae que
penetram nas membranas corioamnióticas, afetam as propriedades biomecânicas das
 28

membranas, aumentando o risco de ruptura pré-termo. S. agalactiae obtidos de bebês sépticos

apresentaram propriedades adesivas quase três vezes maiores às células coriônicas in vitro em
comparação com amostras coletadas de portadores com gestações sem risco, indicando assim
o aumento da virulência de amostras de S. agalactiae obtidas de bebês sépticos (HELMING et
al., 1990 ; MOHAMED et al., 2021).
Costa e colaboradores (2016) demonstraram que S. agalactiae induziu a
citotoxicidade em células epiteliais (A549) com geração de espécies reativas de oxigênio
(ROS) e perda do potencial de membrana mitocondrial (ym). Estudos realizados em nosso
laboratório evidenciaram que S. agalactiae dos tipos III e V são capazes de aderir e
sobreviver no interior de células endoteliais por 24h a 40°C. Além disso, essas amostras
permaneceram viáveis dentro de vacúolos ácidos endoteliais que adquiriram marcadores
endossomais Rab-7 e LAMP-1 (FREITAS LIONE et al., 2010). Outro estudo do nosso
laboratório demonstrou que amostras dos tipos III e V foram capazes de inibir a atividade da
enzima NADPH-oxidase em vacúolos fagocíticos de macrófagos humanos, impedindo o burst
oxidativo (TEIXEIRA et al., 2001).
A pneumonia de início precoce causada por S. agalatiae é caracterizada pela
presença de numerosas bactérias, resultando um processo inflamatório e lesão pulmonar
acentuada das células epiteliais e endoteliais (ABLOW et al., 1976; KATZENSTEIN et al.,
1976). Respostas pró-inflamatórias inatas à infecção por S. agalactiae que podem contribuir
para a patologia respiratória incluem a síntese e liberação de citocinas (ROSATI et al., 1998;
KWAK et al., 2000), prostaglandinas (MALONEY et al., 2000) e óxido nítrico (GOODRUM
et al., 1994; LEIB et al., 1998). Como o S. agalactie é capaz de colonizar e invadir células
pulmonares, torna-se importante investigar a interação do patógeno com epitélio respiratório
para melhor compreender o mecanismos de interação celular e contribuir para a
implementação de novas técnicas profiláticas.
 29

RELEVÂNCIA E JUSTIFICATIVA

O S. agalactiae pode causar desde quadros clínicos leves como infecção

vaginal e urinária, até casos graves como pneumonia, sepse e meningite em neonatos e
gestantes. As autoridades em saúde pública do Brasil não aderiram às recomendações
sugeridas pelo CDC para prevenção das infecções de início precoce por S. agalactiae. Desta
forma, não há dados nacionais suficientes, referindo-se às taxas de infecção pelo patógeno
durante a gravidez e nem a incidência da infecção neonatal de início precoce em nosso país. O
acompanhamento de gestantes entre a 34a e 37a semanas, visando a identificação de
portadoras assintomáticas e a prevenção de transmissão vertical tornam-se relevantes. Desta
forma, o presente trabalho realizou um estudo epidemiológico de gestantes através da coleta
de swabs reto/vaginal e de neonatos pela coleta de material do ouvido externo e região
umbilical, com intuito de auxiliar na implantação de melhorias e novas estratégias de
atendimento às gestantes. Além disso, ensaios de interação celular e de fatores de virulência
foram analisados nas amostras de S. agalactiae identificadas neste trabalho.
 30

1 OBJETIVOS

1.1 Objetivo geral

De acordo com os dados anteriormente descritos, o S. agalactiae tem emergido como

importante patógeno responsável por sepse e pneumonia em neonatos. Contudo, análises da
colonização materna pelo patógeno em nosso país ainda carecem de dados. Deste modo, o
presente projeto teve como objetivo principal avaliar os aspectos clinico-epidemiológicos e de
patogenicidade de S. agalactiae em gestantes e neonatos colonizados e/ou infectados pelo
microrganismo, atendidos no Hospital e Maternidade Carmela Dutra (Lins de Vasconcelos -
RJ).

1.2 Objetivos específicos

a) Realizar a identificação através de testes bioquímicos e sorologia das amostras de

cocos Gram-positivos isoladas de gestantes e neonatos;
b) Comparar a identificação bacteriana acima com a técnica de MALD TOF MS;
c) Realizar a tipagem capsular das amostras de S. agalactiae;
d) Avaliar os perfis de resistência aos antimicrobianos das amostras de S. agalactiae;
e) Realizar a identificação de alguns fatores de virulência (lmb, fbsA, fbsB, pili-2a e
hylB) e,
f) Avaliar a aderência e a viabilidade intracelular de isolados de S. agalactiae com
células epiteliais respiratórias humanas (A549)
 31

2 MATERIAS E MÉTODOS

2.1 Coleta de dados das gestantes colonizadas por S. agalactiae

Neste trabalho foram coletados dados dos prontuários e formulários de amnésia dos
pacientes do Hospital Maternidade Carmela Dutra – RJ (HMCD), bem como os formulários
do LBMFE preenchidos pelas gestantes atendidas no HMCD. As gestantes estavam entre a
34a-37a semanas de gestação, de acordo com a data do último período de menstruação ou pela
ultrassonografia fetal realizada no primeiro trimestre de gestação. Todas as participantes
assinaram o termo de consentimento informando sobre a pesquisa a ser realizada. Gestantes
menores de 18 anos tiveram o termo de consentimento assinado por um responsável. Os
dados coletados foram: identificação da gestante, etnia, idade, número de gestações, dados
gestacionais atuais, idade gestacional, ocorrência de infecção do trato urinário durante a atual
gestação, doença sexualmente transmitida antes ou durante a gestação atual e aborto prévio
(Anexo 1). Este projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética da Secretaria do Estado do Rio de
Janeiro e pelo Comitê de Ética do Hospital Universitário Pedro Ernesto (CEP-HUPE),
recebendo o número CAAE 51317415.8.0000.5259.

2.2 Coleta de swabs retais e vaginais de gestantes

Amostras retais e vaginais foram coletadas de gestantes entre a 34a-37a semanas de

gestação pela equipe médica do HMCD. Posteriormente, as amostras foram conduzidas em
meio de transporte Amies com carvão vegetal (Kasvi, São José dos Pinhais, PR, Brasil) ao
Laboratório de Biologia e Fisiologia de Estreptococos da Universidade do Estado do Rio de
Janeiro (LBMFE/UERJ) para identificação bacteriana.
 32

2.3 Coleta de swabs de orelha externa e umbigo de neonatos

Amostras de orelha externa e umbigo de recém-nascidos (24h-48h após o

nascimento) foram coletadas através de swabs estéreis, sob supervisão da equipe médica do
HMCD, sendo posteriormente, conduzidas em meio de transporte Amies com carvão
vegetal(Kasvi) ao LBMFE/UERJ para identificação bacteriana.

2.4 Cultivo, identificação e armazenamento bacteriano

Para obtenção de cultura pura, as amostras foram semeadas em placas de ágar sangue,
contendo 5% de hemácias de carneiro (ágar-sangue carneiro; Sigma-Aldrich, St Louis,
Missouri, EUA) e em meio seletivo CHROMagar™ StrepB (StrepB; Plastlabor, Rio de
Janeiro, RJ, Brasil) para S. agalactiae. As colônias que apresentaram características de
Streptococcus spp. como colônias lisas, pequenas, brilhantes e côncavas, circundadas por um
halo de β-hemólise em ágar-sangue carneiro (Anvisa, 2008) e colônias rosa-magenta em meio
StrepB foram submetidas à coloração de Gram, teste da catalase, fator CAMP, sorologia e
MALDI-TOF para confirmação da espécie de estreptococos. As placas que apresentaram
contaminação por outro microrganismo foram descartadas.

2.4.1 Coloração de Gram

Para a coloração de Gram foi realizado um esfregaço com a alça bacteriológica de uma
colônia bacteriana crescida em placa de ágar sangue-carneiro. O material fixado foi corado
com solução de violeta genciana durante 1 min, seguido do tratamento com lugol por 1 min,
descoloração com álcool/acetona (v/v) e coloração com safranina durante 30 seg. Terminada a
bateria de corantes, a lâmina foi lavada em água corrente e deixada secar na posição vertical
para posterior observação ao microscópio em objetiva de imersão (100x). As amostras
bacterianas que apresentaram coloração violeta escuro foram consideradas Gram-positivas e
as de coloração rósea como Gram-negativas.
 33

2.4.2 Catalase

A catalase é uma enzima que decompõe o peróxido de hidrogênio em água e oxigênio.

Para realização do teste de catalase, as amostras foram cultivadas em caldo Brain Heart
Infusion (BHI; Difco Laboratories, Detroit, MI, USA) e suspensas em solução salina estéril.
Em uma lâmina, 100 µL de peróxido de hidrogênio P.A. (H2O2) foram misturados com 50 µL
da suspensão da amostra em salina. A interpretação do resultado foi positiva quando
observada imediata formação de bolhas pela conversão do H2O2 em água (H2O) e oxigênio
(O2) e negativo quando houve a ausência de bolhas ou efervescência.

2.4.3 Fator CAMP (Christie, Atkins, Munch-Petersen)

A reação de CAMP foi feita em placas de ágar sangue-carneiro, semeada em estria

única, na posição vertical, por uma amostra de Staphylococcus aureus (ATCC 25923). Por
placa, seis amostras com características prévias de S. agalactiae foram semeadas de forma
perpendicular à amostra de S. aureus. Após 24 h de incubação a 37°C foi observada a reação
de hemólise na superfície da placa de ágar sangue-carneiro, em forma de seta ou meia lua
produzida pela hemólise sinérgica da ação da esfingomielinase estafilocócica (β-lisina) e o
fator CAMP (proteína termoestável) do S. agalactiae.

2.4.4 Identificação sorológica das amostras de S. agalactiae

As amostras bacterianas foram identificadas por sorologia utilizando o kit
Streptoccocal grouping (DR0584A Oxoid, São Paulo, SP, Brasil), conforme recomendação
do fabricante. Este é um teste de aglutinação em látex para identificação dos estreptococos
pertencentes aos grupos A, B, C, D, F e G. A enzima de extração para estreptococos (DR593)
do kit Oxoid foi reconstituída em 10 mL de água destilada estéril, onde alíquotas de 400 µL
foram adicionadas de 2-4 colônias isoladas de cada amostra e incubadas em banho maria por
10 min a 37°C, sob agitação.
Posteriormente, uma gota de cada reagente contendo partículas de látex recobertas
com anticorpos contra os grupos A, B, C, D, F e G de Lancefield foram dispensadas em
 34

círculos do cartão de reação (DR500) e, posterior adição de uma gota do extrato

bacteriano/círculo. A mistura foi homogeneizada e após 30 seg observou-se a presença ou
ausência de aglutinação. O resultado foi positivo quando a aglutinação ocorreu em um dos
reagentes do grupo de Lancefield (A, B, C, D, F ou G).

2.4.5 Armazenamento e utilização das amostras de S. agalactiae

As culturas bacterianas foram armazenadas a - 80ºC em alíquotas de meio líquido BHI

(Difco) contendo 20% de glicerol. Quando descongeladas, as amostras foram crescidas em
meio ágar-sangue carneiro para análise das colônias e pureza antes da realização dos
experimentos. Para a realização dos ensaios experimentais, as bactérias foram crescidas em
BHI e padronizadas para uma densidade óptica (DO) de 0,4 em comprimento de onda de
λ=540 nm (~1,0 x 108 unidades formadoras de colônias por mililitro [UFC/mL]).

2.5 Identificação por MALDI-TOF MS

As amostras bacterianas crescidas em placas de BHI, foram transferidas para a placa

MALDI, sobrepostas com 1 µl de ácido fórmico 70%. Após a secagem, o poço foi coberto
com solução matriz e seco à temperatura ambiente. A placa foi introduzida no
espectrofotômetro de massa LT MALDI-TOF para medição automatizada e interpretação dos
dados. O espectro foi processado a partir do software MALDI Biotyper, usando as
configurações do programa para correspondência de padrões e o banco de dados de
referência. Amostras com score ≥ 2,0 foram consideradas como pertencentes à espécie
identificada pelo MALDI-TOF.
 35

2.6 Teste de susceptibilidade aos antimicrobianos

Suspensões bacterianas (escala 0,5 de Mcfarland) foram semeadas em meio ágar

Mueller-Hinton (MHA, Difco) contendo 5% de sangue de carneiro. Posteriormente, foram
adicionados discos com antimicrobianos (penicilina G - 10µg, ceftriaxona - 30µg,
levofloxacina - 5µg, cloranfenicol - 30µg, linezolida - 30µg, vancomicina - 30µg, tetraciclina
- 30µg, azitromicina - 15µg, eritromicina - 15µg e clindamicina - 2µg) e incubados por 24h a
37°C. A leitura dos diâmetros dos halos foi realizada seguindo as normas preconizadas pelo
CLSI (Clinical Laboratories Standards Institute, 2021).

2.7 Tipagem capsular das amostras de S. agalactiae por PCR-multiplex

Culturas bacterianas crescidas por 16 h em BHI foram centrifugadas a 10.000 rpm por
15 min a 4°C. O sedimento foi suspenso em 1 mL de TE (Tris HCl 0,1M e EDTA 1mM) e
solução de lise (lisozima [20mg/mL] + mutanolisina [10U/μL] + Brij 0,5% + RNAse
[10mg/mL] + TE) e incubado a 37°C por 16 h. Posteriormente, foi adicionada uma solução
de degradação proteica (protease [10mg/mL] + SDS 10%) a 37°C por 1 h e adição de acetato
de sódio 3M e etanol P.A. por 30 min a -20°C. Após centrifugação, o DNA foi tratado com 1
mL de etanol 70% gelado, transferido para tubos eppendorfs, centrifugado e seco em estufa a
37°C. O DNA foi suspenso em água bidestilada estéril (50 μL) e estocado a -20°C até a sua
dosagem (Nanovue-GE).
A seguir, um volume de 50 μL de reação final (200 μM cada dNTP, 5 μL de GoTaq
polimerase, tampão GoTaq 5x e 50 ng DNA) foi submetido ao termociclador para
amplificação das regiões específicas de cada gene (Tabela 1). O produto amplificado foi
separado por eletroforese em gel de agarose de 1% a 2% diluída em TBE 1x (Tris [89mM],
EDTA [2mM] e Ácido Bórico [89mM]), corados com SYBR Green e visualizados como
bandas brancas sobre um fundo negro por transiluminação UV. Como padrão de tamanho
molecular foi utilizado 1-kb Plus DNA ([1μg/μL]; Invitrogen, São Paulo, SP, Brasil). Como
controle negativo foi incluído em cada ensaio, a mesma mistura de reação, mas com água
bidestilada em vez de DNA. A corrida dos géis foi realizada em aparelho de eletroforese
Biorad-Power Pac Basic. O sistema foi montado em cuba horizontal ([modelo 11.14]; Gibco-
 36

BRL, New York, NY, USA) e colocado sob a voltagem de 100 V por 90 min a temperatura
ambiente.

Tabela 1 - Primers para tipagem das amostras de S. agalactiae

Nome do Sequência (5′ - 3′) Tamanho GenBank

primer amplicon (pb)
Ia-F GGTCAGACTGGATTAATGGTATGC AB028896
Ia-R GTAGAAATAGCCTATATACGTTGAATGC 521
Ib-F TAAACGAGAATGGAATATCACAAACC AB050723
Ib-R GAATTAACTTCAATCCCTAAACAATATCG 770
II-F GCTTCAGTAAGTATTGTAAGACGATAG AY375362
II-R TTCTCTAGGAAATCAAATAATTCTATAGGG 397
III-F TCCGTACTACAACAGACTCATCC AF163833
III-R AGTAACCGTCCATACATTCTATAAGC 1,826
IV-F GGTGGTAATCCTAAGAGTGAACTGT AF355776
IV-R CCTCCCCAATTTCGTCCATAATGGT 578
V-F GAGGCCAATCAGTTGCACGTAA AF349539
V-R AACCTTCTCCTTCACACTAATCCT 701
VI-F GGACTTGAGATGGCAGAAGGTGAA AF337958
VI-R CTGTCGGACTATCCTGATGAATCTC 487
VII-F CCTGGAGAGAACAATGTCCAGAT AY376403
VII-R GCTGGTCGTGATTTCTACACA 371
VIII-F AGGTCAACCACTATATAGCGA AY375363
VIII-R TCTTCAAATTCCGCTGACTT 282
Fonte: A autora, 2023

2.8 Identificação dos fatores de virulência por PCR

O DNA bacteriano foi extraído pela fervura durante 10 min em banho-maria. A

suspensão, após fervida, foi centrifugada a 13.000 rpm e 2 μL do sobrenadante foi utilizado
nas reações de amplificação (Hirata Jr. et al., 2008). O fragmento de DNA que corresponde a
uma região interna de cada gene foi amplificado por primers específicos para os genes lmb,
fbsA, fbsB, pili-1, pili-2a, pili-2b, hylB, iag e HvgA a partir do DNA genômico da linhagem
tipo-selvagem de S. agalactiae (Tabela 2). A amplificação foi realizada com o auxílio do
termociclador (Veriti 96 well thermal cycler; Applied Biological, New York, NY, USA). A
presença dos produtos de amplificação das reações foi monitorada por eletroforese em gel de
agarose a 1,2% em tampão Tris-Borato-EDTA, pH 8,0. O sistema foi submetido à corrente de
100V durante 70 min em cuba de eletroforese horizontal (modelo 11.14; Gibco). Os géis
foram corados com 5 µL de Syber safe (Life Technologies, São Paulo, SP, Brasil) e
visualizados em transiluminador modelo TFX 20 M Vilber Lourmat. A positividade do teste
 37

foi constatada pelo aparecimento da banda com peso molecular esperado

(KAYANSAMRUAJ et al., 2014)

Tabela 2 - Primers utilizados para determinação dos fatores de virulência das amostras de s.
agalactiae

Primer Sequência (5´- 3´) Tamanho do Autor

Amplicon (pb)
lmb-F GAAATACCCGAGATACCAAG
472 Correa et al., 2009
lmb-R CCGTCTGTAAATGATGTGGC
fbsA-F GAACCTTCTTGTCACACTTG
575 Godoy et al., 2013
fbsA-R TTGATCCTAGCACTCCCA
fbsB-F GCGCAAACTTTGTCCAA
436 Godoy et al., 2013
fbsB-R CCGCTACGATTGTCCAAATG
Pi-1-F AACAATAGTGGCGGGGTCAACTG
102 Kayansamruaj et al., 2014
Pi-1-R TTTCGCTGGGCGTTCTTGTGAC
Pi-2a-F CACGTGTCGCATCTTTTTGGTTGC
128 Kayansamruaj et al., 2014
Pi-2a-R AACACTTGCTCCAGCAGGATTTGC
Pi-2b-F AGGAGATGGAGCACTGATACGAC
128 Kayansamruaj et al., 2014
Pi-2b-R ACGACGACGGCAACAAGCAC
hylB-F CACCAATCCCCACTCTACTA
503 Correa et al., 2009
hylB-R TGTGTCAACCATCTATCAG
iag-F CGGGATTGATCTAAGTCGCT
458 Godoy et al., 2013
iag-R CCATCAACATCAGTCGCTAA
hvgA-F ATACAAATTCTGCTGACTACCG
210 Lamy et al., 2006
hvgA-R TTAAATCCTTCCTGACCATTCC
Fonte: A autora, 2018.

2.9 Tipagem de sequências Multilocus (MLST)

O MLST foi realizado através do sequenciamento dos sete genes housekeeping, adhP,
pheS, atr, glnA, sdhA, glcK e tkt, conforme previamente descrito (JOLLEY et la., 2018)
(Tabela 3). Os clones foram confirmados por PCR e o sequenciamento Sanger realizado no
PSEQDNA (Rio de Janeiro, RJ, Brasil). As sequências obtidas a partir do sequenciamento
foram analisadas pelos programas Sequencher 5.0 e Bioedit 7.0. Novos alelos ou perfis de
 38

sequências tipo (ST) foram submetidos e atribuídos na base de dados MLST S. agalactiae
(https:// pubmlst.org/sagalactiae/). O software Bionumeric 8.0 foi usado para análise de
homologia.

Tabela 3 - PRIMERS USADOS PARA MLST DE S. agalactiae

Tamanho do
Locus Forward (5' to 3') Reverse (5' to 3')
amplicon (pb)
pheS GATTAAGGAGTAGTGGCACG TTGAGATCGCCCATTGAAAT 723
adhP GTTGGTCATGGTGAAGCACT ACTGTACCTCCAGCACGAAC 672
atr CGATTCTCTCAGCTTTGTTA AAGAAATCTCTTGTGCGGAT 627
glnA CCGGCTACAGATGAACAATT CTGATAATTGCCATTCCACG 589
sdhA AGAGCAAGCTAATAGCCAAC ATATCAGCAGCAACAAGTGC 646
glcK CTCGGAGGAACGACCATTAA CTTGTAACAGTATCACCGTT 607
tkt CCAGGCTTTGATTTAGTTGA AATAGCTTGTTGGCTTGAAA 859
Fonte: JOLLEY, 2018

2.10 Ensaios de interação das amostras de S. agalactiae com células epiteliais alveolares
humanas (A549)

As células A549, uma linha celular epitelial alveolar de tipo II humana, foram
cultivadas e mantidas em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM; Sigma)
suplementado com 10% de soro fetal bovino (Gibco) e antibióticos. As monocamadas foram
semeadas em placas de cultura de tecidos de 24 poços (Corning; Sigma) e incubadas a 37ºC e
5% de CO2 até atingirem a confluência (Costa et al., 2011).
Monocamadas confluentes de A549 em placas de 24 orifícios (2x105 células por poço)
foram infectadas com amostra bacteriana na proporção de 1:100 (célula:bactérias) durante 1 h
e 2 h a 37ºC e 5% de CO2. Após a interação, as placas foram submetidas a lavagens
consecutivas com PBS para remoção dos microrganismos não aderidos às células
eucarióticas. Para análise do número total de bactérias, tanto as bactérias aderidas quanto as
internalizadas nas células A549 foram lisadas com tampão de lise contendo Tris 25mM pH
7,5, EDTA 5mM, NaCl 150mM e Igepal CA-630 1% (Sigma). O lisado foi diluído em salina
0,9% e plaqueado em meio de ágar-sangue carneiro para a contagem das UFC/mL.
Paralelamente, em outra série de poços, após lavagens com salina 0,9% foi feita
administração de gentamicina (100 µg/mL; Gibco) e penicilina (5 µg/mL; Gibco) por 2 h a
 39

37ºC em 5% de CO2 para eliminar as bactérias aderidas. Após esta etapa, houve a realização
da lise da célula eucariótica (com o mesmo tampão de lise descrito acima), diluição do lisado
em solução salina, plaqueamento em meio ágar-sangue carneiro e quantificação das bactérias
intracelulares viáveis. A contagem de S. agalactiae aderido foi realizada através da subtração
do número total de bactérias interagidas pelo número de bactérias intracelulares viáveis
(Santos et al., 2003).
 40

3 RESULTADOS

3.1 Coleta de Dados

Todos os dados coletados de prontuários e formulários de amnésia do HMCD, bem

como os formulários do LBMFE preenchidos pelas gestantes (Anexo B), no período de 2018-
2020, estão demonstrados a seguir:

3.1.1 Faixa etária de gestantes

O Gráfico 1 demonstra a faixa etária das gestantes que apresentaram colonização por
S. agalactiae. Gestantes com idade entre 29-36 anos, seguidas de 21-28 anos de idade foram
prevalentes com 28% e 17%, respectivamente. Contudo, a informação sobre a faixa etária não
foi encontrada em 31% das pacientes.

Gráfico 1 - Faixa etária de gestantes colonizadas pelo S. agalactiae. NI* Não informada

14%
31% 17%

13-20
21-28
29-36
3% 37-44
45-52
NI

7% 28%

Fonte: A autora, 2023

 41

3.1.2 Cor da pele das gestantes por autodeclaração

O Gráfico 2 apresenta a predominância relacionada à cor de pele de gestantes

colonizadas pelo S. agalactiae. Mães de cor parda (24%) foram predominantes em relação às
de cor branca (17%) e cor preta (14%). Da mesma forma, a informação sobre a cor da pele
não foi encontrada em 45% das pacientes.

Gráfico 2 - Cor de pele em gestantes colonizadas por S. agalactiae. NI* Não informada

14%
45%
24%
Preta
Parda
Branca
NI

17%

Fonte: A autora, 2023

3.1.3 Comorbidades presentes em gestantes colonizadas pelo S. agalactiae

Comorbidade é toda doença, condição ou estado físico e mental que, em razão da

gravidade, pode potencializar os riscos à saúde caso o portador venha a se infectar com algum
agente patogênico. As comorbidades identificadas nas gestantes deste trabalho foram:
hipertensão, diabetes gestacional, infecção do trato urinário, sífilis, hipotireoidismo e
adolescência (considerada gestação de alto risco). A hipertensão gestacional (35%) foi a
comorbidade verificada com maior frequência, seguida de diabetes mellitus gestacional (25%)
e infecção urinária (25%), as quais apresentaram maior taxa de intercorrências no parto
(Gráfico 3).
 42

Gráfico 3 - Comorbidades em gestantes entre 34-37 semanas de gestação

5% 25%
25%

Diabetes mellitus gestacional

5% Sífilis
Hipertensão gestacional
Hipotireoidismo
Infecção urinária
Alto Risco (Adolescente)
5%

35%

Fonte: A autora, 2023

3.2 Coleta de amostras

Um total de 225 amostras (vaginais, retais, urina e secreção) de gestantes entre 34a-
37a semanas de gestação e 80 amostras (umbigo e orelha externa) de neonatos, ambos
atendidos no setor de emergência do HMCD, foram submetidas à investigação de S.
agalactiae (Tabela 4).

Tabela 4 - Amostras de gestantes com 34-37 semanas de gestação e de recém-nascidos com

24h-48h de vida, atendidos no setor de emergência do Hospital e Maternidade Carmela Dutra
(HMCD)

Gestantes/Neonatos No de amostras S agalactiae Origem (%)

Retal 8 (28%)

Gestantes Vaginal 11 (38%)

215 + 10* 29 (12,9%)
(34-37 semanas) Urina 9* (31%)
Secreção 1* (3%)

Neonatos Umbigo 15 (79%)

80 19 (2,4%)
(24h-48h) Orelha externa 4 (21%)
Total 305 48
*Amostras pré-identificadas pelo Laboratório de Bacteriologia do HMCD e cedidas ao LBMFE
Fonte: A autora, 2023
 43

3.3 Identificação das amostras isoladas de gestantes e neonatos

Todas as colônias suspeitas de S. agalactiae em meios de cultivo ágar-sangue

carneiro e StrepB foram identificadas como Gram-positivas, catalase negativa e CAMP
positivo (dados não mostrados). A sorologia demonstrou que 29 (12,9%) amostras de
gestantes e 19 (2,4%) de neonatos foram positivas para S. agalactiae. Esses resultados foram
corroborados pela técnica de MALDI-TOF (Tabelas 5 e 6).

3.4 Perfil de resistência aos antimicrobianos das amostras de S. agalactiae isoladas de

gestantes e neonatos

O teste de disco-difusão demonstrou que todas as amostras provenientes de gestantes

foram sensíveis à vancomicina, clindamicina, levofloxacino, penicilina, cloranfenicol,
ceftriaxona, linezolida, norfloxacina, ciprofloxacino, ofloxacino e pefloxacino.
Adicionalmente, as amostras de neonatos apresentaram sensibilidade à vancomicina,
clindamicina, penicilina, azitromicina, eritromicina, ceftriaxona, linezolida, norfloxacina,
ciprofloxacino, ofloxacino e pefloxacino.
Com relação ao perfil de resistência, 20 (6,89%) amostras isoladas de gestantes
foram resistentes à tetraciclina, 11 (3,79%) à cotrimoxazol, 2 (0,68%) à azitromicina e 1
(0,34%) à eritromicina. As amostras neonatais apresentaram resistência à tetraciclina (18;
9,47%), cotrimoxazol (7; 3,68%), levofloxacino (2; 1,05%) e cloranfenicol (2; 1,05%).
Somente as amostra de S. agalactiae isoladas de orelha externa (N1905) e umbigo (N1906)
neonatal apresentaram resistência à levofloxacina, tetraciclina, cloranfenicol e ofloxacina,
sendo classificadas como MDR (Tabelas 5 e 6).
 44

Tabela 5 - Identificação das amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes por sorologia e MALDI-TOF MS com score ≥ 2,0 e perfil de
susceptibilidade aos antimicrobianos
SOROLOGIA/ ANTIBIOGRAMA (GESTANTES)
MALD
Amostra
TOF MS VAN CLI LEV PEN TET AZI CLO ERI CEF LNZ NOR CIP OFX PEF COT
(SCORE >2,0)
1 G1801 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
2 G1802 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
3 G1803 S.agalactiae S S S S S S S S S S S S S S S
4 G1805 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
5 G1806 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S R
6 G1807 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S R
7 G1809 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
8 G1810 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
9 G1811 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S R
10 G1812 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
11 G1813 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
12 G1814 S.agalactiae S S S S S S S S S S S S S S S
13 G1815 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S R
14 G1816 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
15 G1901 S.agalactiae S S S S S S S S S S S S S S R
16 G1902 S.agalactiae S S S S I S S S S S S S S S S
17 G1904 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S R
18 G1905 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S R
19 G1906 S.agalactiae S S S S S S S S S S S S S S R
20 G1907 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
21 G1908 S.agalactiae S S S S R R S R S S S S S S S
22 G1909 S.agalactiae S S S S R R S S S S S S S S S
23 G1910 S.agalactiae S S S S S S S S S S S S S S R
24 G1912 S.agalactiae S S S S S S S S S S S S S S R
25 G1913 S.agalactiae S S S S S S S S S S S S S S R
26 G1916 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
27 G1918 S.agalactiae S S S S S S S S S S S S S S S
28 G1919 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
29 G2001 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S

Gestantes (G); Vancomicina (VAN); Clindamicina (CLI); Levofloxacino (LEV); Penicilina (PEN); Tetraciclina (TET); Azitromicina (AZI); Cloranfenicol (CLO); Eritromicina (ERI);
Ceftriaxona (CEF); Linezolida (LNZ); Norfloxacina (NOR); Ciprofloxacino (CIP); Ofloxacino (OFX) e Pefloxacino (PEF); Cotrimoxizol (COT).
Fonte: A autora, 2023
 45

Tabela 6 - Identificação das amostras de S. agalactiae isoladas de neonatos por sorologia e MALDI-TOF MS com score ≥ 2,0 e perfil de
susceptibilidade aos antimicrobianos

SOROLOGIA/ ANTIBIOGRAMA (NEONATOS)

MALD
Amostra
TOF MS
(SCORE >2,0) VAN CLI LEV PEN TET AZI CLO ERI CEF LNZ NOR CIP OFX PEF COT

1 N1801 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S R
2 N1901 S.agalactiae S S S S I S S S S S S S S S S
3 N1902 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
4 N1903 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
5 N1905 S.agalactiae S S R S R S R S S S S S R S S
6 N1906 S.agalactiae S S R S R S R S S S S S R S S
7 N1907 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
8 N1910 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
9 N1911 S.agalactiae S S S S S S S S S S S S S S S
10 N1912 S.agalactiae S S S S I S S S S S S S S S S
11 N1913 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
12 N1915 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S R
13 N1916 S.agalactiae S S S S I S S S S S S S S S R
14 N1917 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S R
15 N1918 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S I
16 N1919 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S R
17 N1920 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
18 N1921 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S S
19 N1922 S.agalactiae S S S S R S S S S S S S S S R

Neonatos (N); Vancomicina (VAN); Clindamicina (CLI); Levofloxacino (LEV); Penicilina (PEN); Tetraciclina (TET); Azitromicina (AZI); Cloranfenicol (CLO); Eritromicina
(ERI); Ceftriaxona (CEFTRI); Linezolida (LNZ); Norfloxacina (NOR); Ciprofloxacino (CIP); Ofloxacino (OFX) e Pefloxacino (PEF); Cotrimoxizol (COT).
Fonte: A autora, 2023
 46

3.5 Tipagem capsular

Os resultados obtidos a partir da tipagem capsular das 48 amostras (gestantes=29 e

neonatos=19) de S. agalactiae, utilizando a técnica de PCR multiplex estão representados no
Gráfico 4. Os tipos capsulares predominantes foram Ia e V com 42% e 31%, respectivamente.
Os dados das amostras bacterianas isoladas de gestantes mostraram o tipo capsular Ia
predominante com cerca de 55% (n=16), seguido dos tipos V (21%; n=6), III (14%; n=4) e II
(10%; n=3) (Gráfico 5). Em relação às amostras neonatais, houve a prevalência do tipo
capsular V (47%; n=9), seguido dos tipos Ia (21%; n=4), II (11%; n=2), III (11%; n=2), VI
(5%; n=1) e VII (5%; n=1) (Gráfico 6).

Gráfico 4 - Tipagem capsular de amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes com 34-37

semanas de gestação e de neonatos com 24h-48h de nascimento

2% 2%
31%
42%

Ia
II
III
V
VI
VII

13%
10%

Fonte: A autora, 2023

 47

Gráfico 5 - Tipagem capsular de amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes entre 34-37

semanas de gestação

21%

Ia
14% II
III
V

55%

10%

Fonte: A autora, 2023

Gráfico 6 - Tipagem capsular de amostras de S. agalactiae isoladas de neonatos com 24h-48h

de nascimento

5% 21%
5%

Ia
11%
II
III
V
VI
47% VII
11%

Fonte: A autora, 2023

 48

O Gráfico 7 demonstra a correlação entre os tipos capsulares e as comorbidades em

gestantes com intercorrências clínicas no parto. Mães colonizadas por S. agalactiae
pertencentes aos tipos capsulares Ia e V apresentaram maiores complicações durante o parto.
Gestantes portadoras de S. agalactiae tipo V manifestaram intercorrências como anemia,
bolsa rota, asma, sífilis, hipertensão, tromboembolia e diabetes; contudo, gestantes portadoras
de S. agalactiae tipo Ia exibiram sofrimento fetal e bronquite como intercorrências mais
comuns. Adicionalmente, a gestação precoce em adolescentes é considerada um fator de alto
risco na hora do parto por possuir elevado índice de parto prematuro e complicações como
má-formação pulmonar. Neste trabalho, 3 adolescentes (10,3%) grávidas foram identificadas
colonizadas por S. agalactiae (Gráficos 7 e 8).

Gráfico 7 - Correlação entre o tipo capsular e comorbidades em gestantes com 34-37 semanas
de gestação

100%

90%

80%

70%

60%

50%

40%

30%

20%

10%

0%
Diabetes mellitus Sífilis Hipertensão Hipotireoidismo Infecção urinária Alto risco Eclâmpsia
gestacional gestacional (Adolescente)

Ia II III V

Fonte: A autora, 2023

 49

Gráfico 8 - Complicações durante o parto em gestantes colonizadas com amostras de S.

agalactiae pertencentes aos tipos capsulares Ia e V

100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%

Ia V

Fonte: A autora, 2023

3.6 Detecção de genes de fatores de virulência

O resultado da amplificação de genes de fatores de virulência em amostras isoladas de

gestantes e neonatos está demonstrado na Figura 2. Observamos que os genes para lmb
(100%) e iag (100%) foram amplificados em todas as amostras, seguido dos genes fbsB
(95,8%), fbsA (91,6%), pili-1 (89,5%), pili-2b (72, 9%), hylB (70,8%), pili-2a (66,6%) e hvgA
(2,1%).
 50

Figura 2 - Detecção de genes de virulência em amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes

e neonatos

100% 100%
95,8%
91,6%
89,5%
Porcentagem de amplificação (%)

72,9%
70,8%
66,6%

2,1%

lmb fbsA fbsB hvgA pili-1 pili-2a pili-2b hylB iag

Genes

Fonte: A autora, 2023

A Figura 3 apresenta os percentuais de amplificação de cada gene em amostras de

gestantes, distribuídos por tipos capsulares.
 51

Figura 3 – Correlação entre a amplificação dos genes lmb, fbsA, hvgA, pili-1, pili-2a, pili-2b, hylB e
iag e os tipos capsulares Ia (A), II (B), III (C) e V (D) de amostras de S. agalactiae isoladas de
gestantes.

GESTANTES

GESTANTES
Tipo I Tipo II
A B

Porcentagem de amplificação (%)

A B
Porcentagem de amplificação (%)

24,2%
20,7% 20,7% 20,7% 20,7% 20,7%
10,3% 10,3% 10,3% 10,3% 10,3% 10,3% 10,3%
17,3% 17,3%

3,4% 3,4%
3,5%

Genes
Genes

C Tipo III D Tipo V

13,8% 13,8% 13,8% 13,8% 13,8% 13,8%
Porcentagem de amplificação (%)

Porcentagem de amplificação (%)

20,6% 20,6% 20,6% 20,6% 20,6%

10,3% 17,2% 17,2%

6,9%

3,4%
0% 3,4%

Genes Genes

Fonte: A autora, 2023

 52

A Figura 4 demonstra os percentuais de amplificação dos genes em amostras neonatais de

acordo com cada tipo capsular descrito. Os tipos capsulares que apresentaram maior
amplificação também foram os tipos Ia e V.
 53

Figura 4 – Correlação entre a amplificação dos genes lmb, fbsA, hvgA, pili-1, pili-2a, pili-2b, hylB e
iag e os tipos capsulares Ia (A), II (B), III (C) e V (D) provenientes de amostras de S. agalactiae
isoladas de neonatos

NEONATOS
A B
Porcentagem de amplificação (%)

Porcentagem de amplificação (%)

Tipo Ia Tipo II

10,5% 10,5% 10,5% 10,5% 10,5% 10,5%

21,1% 21,1% 21,1% 21,1% 21,1%

5,2%
10,5% 10,5%

0%
0% 0% 0%

Genes Genes
C D
Porcentagem de amplificação (%)
Porcentagem de amplificação (%)

Tipo III Tipo V

47,4% 47,4% 47,4% 47,4%
10,5% 10,5% 10,5% 10,5%
36,8%
31,6%
26,3% 26,3%
5,2%

0% 0% 0% 0% 0%

Genes Genes

E Tipo VI F Tipo VII

Porcentagem de amplificação (%)
Porcentagem de amplificação (%)

5,3% 5,3% 5,3% 5,3% 5,3% 5,3% 5,3% 5,3% 5,3% 5,3% 5,3% 5,3% 5,3%

0% 0% 0% 0% 0%

Genes Genes
 54

3.7 Tipagem de sequência multilocus (MLST)

A Tabela 7 demonstra o total de 26 amostras de gestantes (n=12) e de neonatos (n=14)

que foram submetidas às análises por MLST.

Tabela 7 - Complexos clonais (CC) e sequências tipo (ST) das amostras de S. agalactiae
sequenciadas através do MLST
Amostra CC ST
1 G1801 23 23
2 G1803 452 24
3 G1805 17 1249
4 G1807 23 144
5 G1809 452 24
6 G1810 23 23
7 G1812 1 1
8 G1901 23 144
9 G1902 23 23
10 G1905 17 865
11 G1909 17 1249
12 G1919 17 17
13 N1801 23 23
14 N1901 23 163
15 N1902 23 144
16 N1903 23 162
17 N1905 19 19
18 N1906 23 162
19 N1912 23 144
20 N1913 17 865
21 N1915 19 28
22 N1916 452 24
23 N1917 19 28
24 N1919 17 1249
25 N1920 1 1
26 N1921 452 24
G: gestantes; N: neonatos
Fonte: A autora, 2023

Os resultados do MLST demonstraram que as amostras de S. agalactiae isoladas de

gestantes pertenciam à quatro complexos clonais: CC1 (n=1; 8,3%), CC17 (n=4; 33,3%),
 55

CC23 (n=5; 41,6%), CC452 (n=2; 16,6%) (Figura 5A). Além disso, sete sequências tipo
distintas foram identificadas: ST-1 (1; 8,3%), ST-17 (1; 8,3%), ST-23 (3; 25%), ST-24 (2;
16,6%), ST-144 (2; 16,6%), ST-865 (1; 8,3%) e ST-1249 (2; 16,6%) (Figura 5B).

Figura 5 – Complexos clonais e sequências tipo de amostras de gestantes. (A) Complexo

clonais 1, 17, 23 e 452. (B) Sequências tipo 1, 17, 23, 24, 144, 865 e 1249

GESTANTES
41,6% A
33,3%
Porcentagem(%)

16,6%
8,3%

1 17 23 452
Complexo clonal

25%
B

16,6% 16,6% 16,6%

Porcentagem (%)

8,3% 8,3% 8,3%

1 17 23 24 144 865 1249

Sequência tipo

Fonte: A autora, 2023

As amostras de S. agalactiae isoladas de neonatos apresentaram cinco complexos

clonais: CC23 (6; 42,8%), CC19 (3; 21,4%), CC17 (2; 14,2%), CC452 (2; 14,2%) e CC1 (1;
7,1%) (Figura 6A). Dez sequências tipo foram identificadas: ST-1 (1; 7,1%), ST-19 (1;
7,1%), ST-23 (1; 7,1%), ST-24 (2; 14,2%), ST-28 (2; 14,2%), ST-144 (2; 14,2%), ST-162 (2;
14,2%), ST-163 (1; 7,1%), ST-865 (1; 7,1%) e ST-1249 (1; 7,1%) (Figura 6B).
 56

Figura 6 – Complexos clonais e sequências tipo de amostras de neonatos. (A) Complexos

clonais 1, 17, 19, 23 e 452. (B) Sequências tipo 1, 19, 23, 24, 28, 144, 162, 163, 865 e 1249

NEONATOS A
42,8%
Porcentagem (%)

21,4%
14,2% 14,2%

7,1%

1 17 19 23 452
Complexo Clonal

B
14,2% 14,2% 14,2% 14,2%
Porcentagem (%)

7,1% 7,1% 7,1% 7,1% 7,1% 7,1%

1 19 23 24 28 144 162 163 865 1249

Sequência tipo

Fonte: A autora, 2023

A Figura 7 demonstra o dendograma com os complexos clonais, sequências tipo, tipos

capsulares e fatores de virulência das amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes e de
neonatos. As amostras N1801 e N1912 apresentam um mesmo complexo clonal e sequências
tipo 23 e 144, respectivamente. Esses resultados mostram que 1 alelo não foi totalmente
identificado.
 57

Figura 7 – Dendograma de similaridade das amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes e

neonatos, contendo a sequência tipo complexo clonal, tipo capsular e fatores de virulência

Fonte: A autora, 2023

3.8 Ensaios de interação com células epitélio respiratório humano (A549)

Na Figura 8, os resultados dos ensaios de interação das amostras de gestantes com

células epiteliais respiratórias humanas (A549) demostraram que todas amostras aderiram à
célula hospedeira e a maioria também invadiu, exceto a amostra G1813. Todas as amostras
 58

testadas exibiram maior perfil de aderência em 2 h de incubação, sendo a amostra G1810 com
maior capacidade adesiva (1,5x106 UFC/mL), apesar de não ser estatisticamente significativo.
Com relação à invasão celular, as amostras G1803 (CC não determinado) e G1810 (CC23)
apresentaram maior perfil invasivo em 1 h de incubação, sendo significativo somente para a
amostra G1803 (p<0,03).
A Figura 9 apresenta os resultados dos ensaios de interação de amostras de S.
agalactiae isoladas de neonatos com células A549. Todas as amostras testadas exibiram maior
aderência em 1 h de incubação (p<0,04). Contudo, a amostra N1903 (CC162) apresentou
elevada capacidade de aderência (~1,7x106 UFC/mL; p<0,01) quando comparada com as
amostras N1801 (CC23) e N1906 (CC162). O perfil de invasão das amostras N1801 e N1903
nos tempos de 1 h e 2 h de interação não foi estatisticamente significante. Em contrapartida, a
amostra N1906 apresentou capacidade invasiva elevada após 1 h (~2x104 UFC/mL; p<0,03) e
2 h de interação (~1,6x104 UFC/mL; p<0,05).
 59

Figura 8 - Ensaios de aderência e invasão com amostras de gestantes e células epiteliais

(A549). *p<0,05

Fonte: A autora, 2023

 60

Figura 9 – Ensaios de aderência e invasão com amostras neonatais e células epiteliais (A549)

2,50E+06 A
ADERÊNCIA

2,00E+06
*
*
1,50E+06

1,00E+06

5,00E+05

0,00E+00
1 N1801 N1903 N1906 2

2,50E+04 B
INVASÃO
*
2,00E+04

*
1,50E+04

1,00E+04

5,00E+03

0,00E+00
1 N1801 N1903 N1906 2
 61

4 DISCUSSÃO

S. agalactiae tem sido reconhecido como um importante microrganismo relacionado

com a morbimortalidade materna e neonatal, causando parto prematuro, morte intrauterina,
baixa peso do recém-nato, endometrite e corioamnionite (SCHRAG et al., 2002; EDWARD
et al., 2011; KHAN et al., 2015). Fatores como idade materna, raça negra, etnia não
hispânica, hipertensão crônica, diabetes preexistente e uso de tabaco têm sido associados à
colonização pelo S. agalactiae (EDWARDS et al., 2019). A colonização por S. agalactiae em
gestantes de 85 países, demonstrou que a prevalência variou entre 7-14% na América Central
e Ásia e de 35% no Caribe. Europa, América do Norte e Austrália tiveram taxas de
prevalência semelhantes de 15-20%. Curiosamente, as estimativas na África variaram
amplamente, onde a África Ocidental apresentou 14% e a África do Sul 25% de colonização
pelo patógeno (RUSSELL et al., 2017). No Quênia (África Oriental), o S. agalactiae foi
identificado em 20,5% das gestantes com idade média de 30 anos. Nenhum fator de risco foi
associado à colonização por S. agalactiae (JISUVEI et al., 2020). Pesquisa na Oceania
(Austrália) demonstrou que a taxa geral de colonização por S. agalactiae foi de 24%, sendo
10,6% dos participantes positivos colonizados transitoriamente. Dentre os critérios avaliados,
a etnia (aborígines e africanas), idade materna ≥25 anos, relações sexuais frequentes (≥5
vezes/semana) e uso de brinquedos sexuais foram associados à colonização por S. agalactiae
(Furfaro et al., 2019). Em contrapartida, no Oriente Médio (Líbano), a colonização em
gestantes pelo patógeno foi de 18,4%, não havendo diferenças significativas entre faixas
etárias ou nível de escolaridade dessas mulheres (ALFOUZAN et al., 2021).
Na América latina, verificou-se que a triagem materna de S. agalactiae foi inferior a
15%, exceto no Uruguai que rastreou mais de 65% das gestantes. Desta forma, somente os
dados de colonização de gestantes no Uruguai foi informada (18,5%). Os países com baixa
triagem materna para S. agalactiae tiveram maiores chances de sepse neonatal e pneumonia.
Mulheres negras, idosas e sem ensino fundamental apresentaram maior colonização pelo
microrganismo (21,3%, 20,4% e 21,9%, respectivamente) (HOGENESCH et al., 2020).
Devido à natureza assintomática da colonização reto-vaginal, é difícil determinar se a
prevalência da colonização por S. agalactiae está mudando ao longo do tempo. Esses estudos
destacam que o microrganismo contribui significativamente para a carga global da doença e,
além disso, enfatiza que a colonização reto-vaginal do S. agalactiae é comum em todo o
mundo.
 62

No Brasil, a prevalência de S. agalactiae em gestantes variou de 4,2 a 28,4%, nos

últimos 10 anos (NASCIMENTO et al., 2019). No presente trabalho, a taxa de colonização
foi de 12,9% em gestantes, estando dentro dos valores médios encontrados nas Américas.
Altas temperaturas do país de nascimento foram associadas a maior taxa de colonização.
Assim, as diferenças na colonização do S. agalactiae dependem do país de origem. Essa
variabilidade retrata um padrão geográfico influenciado pela temperatura (SAHUQUILLO-
ARCE et al., 2020). De forma preocupante, nossos resultados demonstraram que 79% das
amostras de umbigo e 21% das amostras de orelha externa de neonatos apresentavam
colonização pelo S. agalactiae, índice muito maior do que o observado na Índia, cuja
colonização pelo microrganismo foi de 55% no umbigo e 10,2% na orelha externa (SHAH et
al., 2014). SAHA e colaboradores (2017) também descreveram a colonização por S.
agalactiae no umbigo (48%) e na orelha externa (83%) de neonatos. Outra publicação, relatou
ter analisado material de umbigo e orelha, mas não citou nenhum dado sobre o percentual
encontrado em cada sítio coletado, descreveu somente a taxa geral de colonização neonatal de
1,3% (GUO et al., 2018). Até a presente data, somente esses artigos analisaram a colonização
de umbigo e orelha externa de recém-nascidos. Desta forma, nosso trabalho demonstra, pela
primeira vez, dados nacionais preocupantes sobre a elevada colonização umbilical e da orelha
neonatal, logo após o nascimento, que pode contribuir para o desenvolvimento de doenças de
início precoce ou tardio. Assim, enfatizamos a importância do monitoramento contínuo das
gestantes e também dos recém-nascidos para que terapêuticas profiláticas possam ser
adotadas, evitando assim, o desenvolvimento futuro de infecções invasivas pelo S. agalactiae.
Dados publicados pelo CDC em 2020 no Active Bacterial Core Surveillance (ABCs),
rede de programa de infecções emergentes que inclui o S. agalactiae, descreveu que a taxa de
colonização em mulheres negras foi de 9,3/100.000 habitantes em 10 estados americanos, e
que dos 1.036 pacientes com infecções de início tardio, 28% eram negros e a incidência geral
de doenças invasivas na população negra foi 2 vezes maior do que na população branca
(PHARES et al., 2008; CDC, 2020; BERARDI et al., 2021). Nossos resultados mostraram
que mulheres pardas e negras apresentaram maior colonização por S. agalactiae (~38%)
quando comparadas com mulheres brancas. O índice encontrado em nosso trabalho, foi maior
que o descrito pelo CDC (2020) e pelo estudo transversal multicêntrico que avaliou mulheres
grávidas nos EUA e Irlanda (9%). Contudo, foi inferior ao encontrado no Hospital
universitário em Durham, Carolina do Norte, no período de 2003-2015, que foi de 45,7%
(Edwards et al., 2019) e dos dados publicados pelo Centro de Ciências da Saúde da
Universidade Estadual da Louisiana (74,7%) (CAPRARO et al., 2020). Interessantemente,
 63

nossos dados foram muito próximos dos dados publicados pelas clínicas pré-natais da
Londres North West University Healthcare NHS (39,5% em mulheres negras), cujo país
apresenta diferenças climáticas e culturais em relação ao Brasil, os quais são fatores já
estabelecidos por influenciar de forma significativa na colonização pelo S. agalactiae. Estes
resultados demonstram a prevalência aumentada do S. agalactiae em mulheres negras, o que
provavelmente reflete variações ligadas à etnia e diferenças da microbiota vaginal que pode
explicar o aumento da suscetibilidade de neonatos negros às infecções invasivas pelo
microrganismo.
A maioria dos casos de infecções por S. agalactiae em adultos ou idosos está
associada a condições médicas subjacentes, como diabetes mellitus, obesidade, cirrose
hepática, acidente vascular cerebral, câncer e doenças cardiovasculares (NAVARRO-TORNÉ
et al., 2021). No presente trabalho, as comorbidades identificadas nas gestantes que
apresentaram maior taxa de intercorrências no parto foram hipertensão gestacional (35%),
diabetes gestacional (25%), infecção do trato urinário (25%), sífilis (5%), hipotireoidismo
(5%) e adolescência (5%) considerada gestação de alto risco. Nas gestantes colonizadas,
houve um risco aumentado de diabetes e hipertensão gestacional. Nenhuma associação foi
observada com tabagismo, aborto anterior, história anterior de morte fetal, vaginite ou
infecção do trato urinário. Com relação a idade das gestantes, houve a prevalência de
gestantes com idade média entre 29-36 anos, bem como 3 gestantes adolescentes com idade
entre 15-19 anos. Apenas dois artigos foram encontrados na literatura com gestantes
adolescentes colonizadas pelo S. agalactiae; contudo, nenhum dado brasileiro foi publicado
até a presente data. Desta forma, este é o primeiro trabalho que aborda a colonização por S.
agalactiae em adolescentes grávidas no país. Ressaltamos o risco gestacional em adolescentes
colonizadas pelo S. agalactiae que possuem riscos maiores de complicações obstétricas e pré-
eclâmpsia, bem como risco de parto prematuro e má-formação pulmonar (OLIVEIRA-
CAMPOS et al., 2013).
As complicações obstétricas em gestantes da Jordânia incluíram hipertensão
gestacional (9,5%), diabetes gestacional (6,0%) e infecções do trato urinário (53,5%), das
quais 84,5% relataram tratamento (CLOUSE et al., 2019). Pesquisa realizada por QADI e
colaboradores (2021), as gestantes colonizadas por S. agalactiae também apresentaram risco
elevado de diabetes gestacional. Nenhuma associação foi observada com tabagismo, aborto
anterior, história de morte fetal ou vaginite. Pesquisa com placentas de gestantes com diabetes
mellitus gestacional, demonstrou que a hiperglicemia severa promoveu a produção de
citocinas inflamatórias e reduziu a síntese de defensinas. Os tratamentos com insulina e
 64

metformina foram eficazes como anti-inflamatórios em cenários infecciosos hiperglicêmicos,

limitando a invasão do S. agalactiae nas vilosidades placentárias (Jiménez –Escutia et al.,
2023). Além disso, isolados de infecções urinárias coletados de 715 gestantes que visitaram
oito centros comunitários de saúde na Indonésia, entre 2015-2017, apresentaram colonização
por S. agalactiae em 9,3% dos casos (ROSANA et al., 2020). Na atual era da
multirresistência, o diagnóstico e tratamento apropriados devem ser fornecidos às futuras
mamães para evitar complicações gestacionais, principalmente em países em
desenvolvimento, incluindo o Brasil, os quais possuem instalações limitadas e precariedade
em recursos financeiros.
A resistência aos antibióticos pelo S. agalactiae é uma preocupação constante, devido
ao seu papel como a principal causa de doença neonatal em todo o mundo (LAMAGNI et al.,
2013). As taxas de letalidade são altas e a penicilina é a primeira escolha de antibiótico para
profilaxia intraparto (VERANI et al., 2010; HUGHES et al., 2017). Em casos de alergia grave
à penicilina, os macrolídeos e as lincosamidas são recomendadas como antibióticos de
segunda linha em alguns países (ACOG, 2019); no entanto, o aumento de resistência a ambos
os antibióticos limitou sua utilização. De fato, o Royal College of Obstetricians and
Ginecologistas (RCOG) não recomenda mais o uso de clindamicina para diretrizes baseadas
no Reino Unido (HUGHES et al., 2017). Enquanto a penicilina permanece eficaz contra a
maioria das amostras de S. agalactiae, os crescentes relatos de isolados com suscetibilidade
reduzida e alguns trabalhos indicando resistência à penicilina (BURCHAM et al., 2019) são
preocupantes, especialmente quando a resistência aos antibióticos de segunda linha, como
eritromicina e clindamicina permanece elevada nesse microrganismo. À luz dessas tendências
emergentes de resistência, é oportuna e apropriada considerar outras classes de antibióticos
com potencial terapêutico para infecções por S. agalactiae.
A resistência aos macrolídeos entre os estreptococos β-hemolíticos foi relatada pela
primeira vez em 1959 em S. pyogenes e, desde então, dois principais mecanismos de
resistência foram descritos. Modificação do alvo por metilases ribossomais codificadas pelos
genes ermA e ermB que conferem resistência a macrolídeo-lincosamida-estreptogramina B
(MLS) que pode ser constitutivo ou induzível. A expressão das bombas de efluxo, codificadas
pelo gene mefA, está relacionada com o fenótipo M e confere resistência apenas aos
macrolídeos (BARROS et al., 2021). Além disso, resistência à fluoroquinolona entre os
estreptococos é devido a substituições de nucleotídeos nas regiões determinantes de
resistência às quinolonas (QRDR), genes que codificam girase e topoisomerase IV,
especialmente gyrA e parC. Entre S. agalactiae, as primeiras alterações de aminoácidos que
 65

levaram à resistência às fluoroquinolonas foram S81L e S79F, devido a substituições de

nucleotídeos em gyrA e parC, respectivamente (KAWAMURA et al., 2003). Entretanto,
trabalho na Argentina, descreveu o aumento na resistência às fluoroquinolonas, podendo ser
explicada pela disseminação de um único clone tipo capsular Ib que respondeu por 84% dos
isolados resistentes naquele país. Os resultados enfatizam a necessidade de cuidados
epidemiológicos e reforça a importância do monitoramento da suscetibilidade antibiótica às
fluoroquinolonas. As consequências inadvertidas do uso de fluoroquinolonas, particularmente
para o tratamento de infecções do trato urinário, pode contribuir para a seleção de amostras
resistentes, principalmente considerando que o S. agalactiae é um uropatógeno frequente
(ARIAS et al., 2019). Desta forma, decidimos incluir no teste de difusão em disco, as
fluorquinolonas (levofloxacino, norfloxacino, ciprofloxacino ofloxacino e pefloxacino)
recomendadas pelo autor. Somente duas amostras de neonatos (N1905 e N1906/CC23)
apresentaram resistência à levofloxacino e ofloxacino. Desta forma, necessitamos estar
vigilantes para que o perfil de resistência às fluorquinolonas não aumente em nosso país.
O Brasil é o maior país da América Latina, com uma população projetada de 213,2
milhões de habitantes. As desigualdades sociais são históricas e impactam fortemente o
acesso da população à assistência à saúde e à educação. O país está dividido em cinco grandes
regiões geográficas, sendo o Sul e o Sudeste as mais desenvolvidas. Essas duas regiões
apresentam melhores índices de desenvolvimento humano, como menores taxas de
mortalidade infantil e maior expectativa de vida, em comparação com as taxas nacionais (11,9
por 1.000 nascidos vivos e 76,6 anos, respectivamente) (IBGE, 2020). Enquanto algumas
ameaças à saúde têm notificação compulsória nacional (Ministério da Saúde, 2021), o que
contribui para sua vigilância epidemiológica contínua, outras, incluindo infecções pelo S.
agalactiae, não possuem um sistema nacional de notificação. Diferenças regionais podem ser
observadas na produção e análise dos dados, sendo a maioria dos estudos realizados nas
regiões mais desenvolvidas citadas acima. Em relação aos esquemas terapêuticos, vale
ressaltar que a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa) disponibilizou
recentemente dados nacionais sobre o consumo de antibióticos (Anvisa, 2021), o que pode ser
uma ferramenta importante para avaliar as taxas de resistência antimicrobiana entre os
patógenos bacterianos circulantes no país.
Na América do Sul, S. agalactiae apresentou alta resistência à tetraciclina, amoxicilina
e ácido clavulânico, eritromicina e trimetoprima-sulfametoxazol (AKPAK et al., 2022).
Dados do Rio de Janeiro, indicaram aumento na resistência à eritromicina, afetando 9 % dos
isolados clínicos testados, onde mais de 85% apresentaram o fenótipo cMLSB. A resistência à
 66

tetraciclina foi de 85% (FIGUEIREDO SANCHES et al., 2021). Outro estudo realizado no
Rio de Janeiro relatou 14% de resistência à eritromicina e 5% resistência à clindamicina. Para
a tetraciclina, foi encontrada resistência em 83% dos isolados (NAKAMURA et al., 2011).
Botelho e colaboradores (2018), no Rio de Janeiro, mostraram que 592 amostras de S.
agalactiae foram resistentes a diferentes antibióticos. As porcentagens de resistência
observadas entre os isolados foram 5% para cloranfenicol, 2% para clindamicina, 14% para
eritromicina, 5% para levofloxacina e 86% para tetraciclina (BOTELHO et al., 2018). Além
disso, no Paraná, de 544 gestantes, 136 (25%) apresentaram níveis de resistência para
eritromicina (8,1%), clindamicina (2,2%) e tetraciclina (82,3%) (DE MELO et al., 2016).
Nosso trabalho confirma esses relatos onde foram identificadas amostras resistentes à
tetraciclina, cotrimoxazol, levofloxacina, ofloxacina, azitromicina, eritromicina e
cloranfenicol. Somente as amostras de S. agalactiae isoladas de orelha externa (N1905) e
umbigo (N1906) neonatal apresentaram resistência à levofloxacina, tetraciclina, cloranfenicol
e ofloxacina, sendo classificadas como MDR. Apesar de ter sido descrito na Tailândia a
predominância dos tipos Ib/ST1 VI/ST1 apresentando resistência aos macrolídeos
(TULYAPRAWAT et al., 2021), nossos resultados demonstraram a resistência aos
macrolídeos das amostras G1909 e G1908, pertencentes ao CC-17 (dado do MLST da G1908
não incluído). Felizmente, até o momento, com base nos estudos realizados no Brasil, todos
os isolados apresentaram sensibilidade à penicilina. A profilaxia antibiótica intraparto e o
tratamento com antibióticos são usados com sucesso para prevenir e tratar infecções por S.
agalactiae. No entanto, a necessidade de uma vacina universal contra o patógeno é uma
importante ferramenta para proteção dos bebês, gestantes e idosos com comorbidades
subjacentes.
A tipagem capsular do S. agalactiae é uma ferramenta importante para determinar a
patogenicidade das amostras bacterianas e para fins epidemiológicos. A distribuição do tipo
capsular depende de fatores como região geográfica, etnia ou outras características da
população estudada. Na Jordânia, os tipos III (48%), Ia (24%), II (20%) e V (8%) foram
prevalentes em gestantes (CLOUSE et al., 2019). Na Austrália, a tipagem capsular de
amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes identificou os tipos Ia e III como
predominantes (FURFARO et al., 2019). Dados brasileiros também mostraram a prevalência
do tipo Ia em gestantes (NASCIMENTO et al., 2019; FIGUEIREDO SANCHES et al., 2021).
Esses dados corroboram com o nosso trabalho, no qual o tipo capsular Ia foi prevalente em
gestantes, seguido dos tipos V, II e III; em neonatos, houve a prevalência dos tipos capsulares
V e Ia. Diferentemente, estudo realizado por SCHINDLER e colaboradores (2020) com 1.074
 67

gestantes assintomáticas durante o ano de 2017, o tipo capsular dominante foi o VI com
40,8%, seguido pelos tipos III, V e IV com 17,5%, 12,5% e 11,7 %, respectivamente. O tipo
predominante nos casos de morte fetal intrauterina foi o VI com 76,9%. Contudo, o tipo III
(84,2%), principalmente associado à ST-17 (73,7%) foi o mais identificado nos casos de
doença de início precoce. Infelizmente, no presente trabalho não houve casos pares. A
pesquisa não foi capaz de acompanhar as gestantes e seus bebês, pois as mesmas não
apareceram mais ao HMCD e, nem mesmo atendiam às inúmeras ligações telefônicas
realizadas para o número de contato fornecido. Embora os resultados deste estudo sejam
semelhantes aos de outros estudos publicados previamente e, comparáveis a outros países, a
maioria das mulheres foi colonizada por tipos capsulares comumente associados a desfechos
maternos adversos e isso representa um risco tanto para a mãe quanto para o bebê.
A prevenção da infecção por S. agalactiae na gravidez é complexa e provavelmente
influenciada por vários fatores, incluindo patogenicidade, fatores do hospedeiro, microbioma
vaginal, triagem de falso-negativo e/ou alterações na resistência a antibióticos (JIN et al.,
2022). O S. agalactiae codifica uma série de fatores de virulência que permitem que ele
persista no inóspito ambiente vaginal. Muitos desses fatores estão envolvidos na adesão e
invasão de células epiteliais do hospedeiro que permitem a colonização persistente. Aderência
e a invasão parece ser mediada por interações do S. agalactiae com a matriz extracelular do
hospedeiro; essas interações também podem promover a resistência do patógeno a danos
mecânicos, depuração, prevenção de vigilância imune e transmigração paracelular. Os genes
lmb, iag, fbsB, fbsA, pili-1, pili-2a, pili-2b, hylb e hvgA estão envolvidos com o aumento da
virulência do S. agalactiae (VORNHAGEN et al., 2017).
Nossos resultados demonstraram que os genes para lmb e iag foram amplificados em
todas as amostras, seguido dos genes fbsB, fbsA, pili-1, pili-2b, hylB, pili-2a e hvgA, sendo os
tipos capsulares Ia e V, os que apresentaram maior amplificação desses fatores de virulência.
BOBADILLA e colaboradores (2021) detectaram os genes fbsA e fbsB em todas as amostras
de S. agalactiae testadas, e os genes cylB, lmb e bca em 95%, 94% e 87%, respectivamente.
No México, os genes de virulência identificados foram lmb, fbsA, fbsB, pili-1, pili-2a, pili-2b
e hvgA (PALACIOS-SAUCEDO et al., 2022). Na África, perfis distintos de genes de
virulência foram identificados, sendo os mais comuns hly, scpB e bca em 37,2% das amostras.
O gene hylB foi detectado em 97,8%, scpB em 90,1% e bca em 86,0% das amostras
analisadas (MUDZANA et al., 2021). Podemos observar que as diferentes amostras
bacterianas apresentam um perfil heterogênio de fatores de virulência. Sabemos que a
proteína de ligação à laminina (Lmb) medeia a ligação do S. agalactiae à laminina, sendo
 68

crucial para a colonização e invasão bacteriana (BURCHAM et al., 2020). O gene iag está
envolvido na penetração da barreira hemato-encefálica do S. agalactiae e desenvolvimento da
meningite bacteriana neonatal (DORAN et al., 2005). As proteínas FbsA, FbsB e FbsC são
membros da família de proteínas de ligação ao fibrinogênio codificadas pelo S. agalactiae,
possuindo capacidade adesiva às células epiteliais humanas para promover a penetração
vaginal (BUSCETTA et al., 2014). Além da cápsula, o pilus também foi identificado como
um fator essencial na patogenicidade, sendo importantes para colonização e formação de
biofilmes (ARMISTEAD et al., 2019). HylB denominada hialuronidase ou hialuronato liase,
uma enzima exolítica liberada pelo S. agalactiae pode clivar o polímero glicosaminoglicano
de alto peso molecular de ácido hialurônico, que serve como componente da matriz
extracelular epitelial, quebrando a barreira materno-fetal e permitindo a passagem do S.
agalactiae da vagina para o feto, causando infecção e danos fatais (VORNHAGEN et al.,
2016). A adesina GBS hipervirulenta (HvgA), proteína ancorada na superfície específica do
ST-17, pode aumentar a invasão bacteriana através das barreiras intestinal e hematoencefálica.
A bactéria, mediada por HvgA, pode se espalhar para a corrente sanguínea e sistema nervoso
central, levando ao desenvolvimento de meningite (AWWAD et al., 2022).
Torna-se claro que o S. agalactiae desenvolveu um conjunto de fatores de virulência,
incluindo adesinas e pigmentos hemolíticos, para promover sua capacidade de colonizar e
invadir hospedeiros humanos. Embora tenha havido uma grande quantidade de pesquisas nos
últimos anos para melhorar nossa compreensão do mecanismo de patogenicidade deste
microrganismo, uma exploração mais aprofundada ainda é necessária na estrutura de alguns
dos fatores de virulência, bem como na capacidade de sobrevivência do S. agalactiae como
um simbionte da microbiota humana e como um patógeno oportunista, dependendo da saúde
do hospedeiro. Preencher essa lacuna de conhecimento pode ser crucial para o
desenvolvimento de futuras opções de tratamento. Apenas uma compreensão completa dos
mecanismos patogênicos deste importante patógeno, muitas vezes menosprezado pela classe
médica e governamental, poderá levar à prevenção mais eficaz de doenças invasivas com
elevada taxa de morbidade e mortalidade materna e neonatal.
Atualmente, a presença de numerosos genomas bacterianos disponíveis em bancos
de dados e de novas ferramentas baseadas em sequenciamento de nucleotídeos, tem
transformado a epidemiologia tradicional em epidemiologia molecular. Em 2003, a tipagem
de seqüência multilocus de sete genes (MLST) foi introduzida para a classificar o S.
agalactiae em complexos clonais (CC) e sequencias tipo (ST). Os primeiros estudos
empregando o MLST revelaram que o tipo capsular não está restrito a uma determinada ST,
 69

ou seja, amostras bacterianas podem pertencer a uma mesma ST, mesmo sendo de tipos
capsulares diferentes (JONES et al., 2003). No presente trabalho, 26 amostras de gestantes e
de neonatos foram submetidas às análises por MLST, onde amostras de S. agalactiae isoladas
de gestantes foram classificadas em quatro complexos clonais CC1, CC17, CC23 e CC452, e
em sete sequências tipo distintas ST-1, ST-17, ST-23, ST-24, ST-144, ST-865 e ST-1249. As
amostras de S. agalactiae isoladas de neonatos apresentaram cinco complexos clonais CC23,
CC19, CC17, CC452 e CC1 e dez sequências tipo ST-1, ST-19, ST-23, ST-24, ST-28, ST-
144, ST-162, ST-163, ST-865 e ST-1249. Estudo realizado em um hospital de Pequim (2015-
2016), amostras de S. agalactiae obtidas de gestantes e recém-nascidos foram classificadas
em 5 CC e 18 ST. As ST19/III, ST10/Ib e ST23/Ia foram prevalentes, sendo o CC19 o tipo
mais comum (LI et al., 2023). Nossos resultados demonstraram que o CC23/Ia foi
predominante tanto em amostras de S. agalactiae isoladas de gestantes como em amostras de
neonatos, sendo a ST23 (Ia/V) predominante em gestantes, e em neonatos as ST24 (Ia/V),
ST28 (Ia/V), ST144 (Ia/V) e ST162 (V) foram as mais prevalentes.
Com a disponibilidade dos dados do MLST, ficou claro que amostras de S.
agalactiae de certos CCs possuem um maior potencial para causar doença invasiva, enquanto
outras abrigam principalmente cepas colonizadoras. MLST para uma coleção global de S.
agalactiae identificou que os STs 1 e 19 estão associados à colonização assintomática e o ST-
23 com doenças invasivas pelo patógeno (JONES et al., 2003; MANNING et al., 2008).
Consistentemente, TEATERO e colaboradores (2017) encontraram as STs 1 e 19 como mais
frequentes em gestantes colonizadas. Em geral, a predominância de amostras pertencentes aos
CCs 1, 19 e 23 entre gestantes assintomáticas foi consistentemente relatado (LUAN et al.,
2005; SPRINGMAN et al., 2014), indicando que CCs são predominantes como comensais da
mucosa vaginal e gastrointestinal humana. Adicionalmente, um clone responsável por uma
grande proporção de infecções invasivas neonatais, pertencentes ao tipo III e CC17, ganhou
interesse especial devido à sua forte associação com meningite neonatal. Amostras
pertencentes ao CC17 são relatados como hipervirulentas, representando mais de 80% das
infecções neonatais de início tardio por S. agalactiae e frequentemente, mas não
exclusivamente, associados à meningite (TAZI et al., 2010; BELLAIS et al., 2012;
FLORINDO et al., 2014).
A incidência da doença neonatal por S. agalactiae continua a ser uma causa
significativa de preocupação em todo o mundo. Amostras bacterianas pertencentes ao CC17
são frequentemente responsáveis por infecções invasivas. Nosso trabalho identificou que
 70

somente a amostra de gestante (G1919) apresentou perfil considerado hipervirulento,

pertencendo ao CC17 e ST17.
Análise de pesquisadores de oito países europeus (Bélgica, Bulgária, República
Tcheca, Dinamarca, Alemanha, Itália Espanha e Reino Unido) que participam do consórcio
DEVANI, confirmou um alto nível de heterogeneidade de amostras de S. agalactiae, com 19
STs agrupados em 4 diferentes CCs, dos quais predominaram CC452, CC459 e CC1. Os
autores descreveram que o CC452 pode ter se originado de um ancestral relativamente recente
do atual ST-24 que trocou cerca de 40% de seu genoma com uma amostra do ST-17 por
recombinação. Este evento causou um aumento adicional na diversidade do sorotipo IV,
gerando a linhagem CC452. Este novo clone ganhou uma combinação única de fatores de
virulência, compartilhando parcialmente variantes alélicas com ST-17 ou ST-24 (CAMPISI et
al., 2016). Curiosamente, nosso trabalho corrobora a pesquisa acima, demonstrando 4
amostras de S. agalactiae agrupadas no CC452 (G1803/V/ST24, G1809/V/ST-24,
N1916/V/ST-24 e N1921/Ia/ST-24). Desta forma, nossos resultados fornecem uma imagem
da diversidade e da evolução do CC452, ressaltando a importância de uma vigilância
genômica de clones emergentes que devem ser considerados na concepção de estratégias de
contenção baseadas na vacinação.
Entender a interação entre o hospedeiro e a bactéria é vital para compreender como
efetivamente prevenir a doença de S. agalactiae, tendo efeitos adversos mínimos no
hospedeiro humano. A pesquisa neste campo revelou novos insights sobre os fatores de
virulência bacteriana necessários para o estabelecimento bem-sucedido da doença e uma
resposta apropriada do hospedeiro para prevenir infecção ascendente e parto prematuro.
Qualquer perturbação neste equilíbrio pode levar a resultados sérios e duradouros para o
hospedeiro, ou pressões desvantajosas para a bactéria. Além disso, mais dados
epidemiológicos são necessários para descrever a carga global do S. agalactiae na
colonização assintomática e na doença, sendo a colonização por S. agalactiae durante a
gravidez, intermitente e variável, a metodologia de triagem atual, provoca perda de uma parte
significativa da colonização durante a gravidez. Esse problema resulta em um risco
mensurável para que o S. agalactiae cause infecção ascendente durante a gravidez, podendo
levar a natimorto e parto prematuro. A triagem de S. agalactiae pode ajudar a esclarecer essas
questões, fornecendo dados para que intervenções eficazes e viáveis possam ser
desenvolvidas para prevenir a doença pelo S. agalactiae, principalmente em países que não
adotaram oficialmente nenhuma norma profilática em gestantes/neonatos contra esse
microrganismo. Em última análise, a vacinação provará ser a intervenção mais eficaz. A
 71

combinação de design racional de vacina, implementação de estratégias inteligentes e

monitoramento periódico podem levar à erradicação do S. agalactiae no ser humano.
Durante as etapas iniciais da infecção pelo S. agalactiae, o epitélio alveolar fornece a
primeira linha de defesa, pois constitui uma barreira física que produz compostos
antibacterianos, sendo capaz de fagocitar e destruir bactérias, bem como recrutar e ativar
células imunes (EDDENS et al., 2012). No entanto, em hospedeiros suscetíveis, o S.
agalactiae é capaz de invadir células epiteliais e endoteliais e entrar na corrente sanguínea
(NIZET et al., 1997; CUTTING et al., 2014). Contudo, os mecanismos de interação celular
do S. agalactiae com epitélio pulmonar não estão completamente elucidados.
No presente trabalho, foram realizados ensaios de interação de S. agalactiae com células
epiteliais respiratórias humanas A549. Os resultados demonstraram que todas as amostras de
S. agalactiae oriundas de gestantes, aderiram à célula hospedeira e a maioria também invadiu.
As amostras bacterianas que apresentaram maior capacidade adesiva ao epitélio respiratório
humano foram as amostras G1810 (tipo Ia/CC23/ST23) e N1903 (tipo V/CC23/ST162). Em
contrapartida, as amostras G1803 (tipo V/CC452/ST24), G1810 e N1906 (tipo
V/CC23/ST162) foram as mais invasivas. As amostras G1803 e G1810 possuem os mesmos
fatores de virulência, com exceção do gene hylB que não foi detectado na amostra. Esse gene
é responsável pela hidrólise do ácido hialurônico, favorecendo a invasão celular, mas
curiosamente esse fator de virulência não influenciou na invasão celular desta amostra
bacteriana que possuiu capacidade invasiva semelhante à amostra que possui o gene hylB.
Com relação à invasão das amostras isoladas de neonatos, a N1906 apresentou maior invasão
e os genes para pili-2a e pili-2b, responsáveis por favorecer a aderência bacteriana e a
formação de biofilme. Nossos dados destacam a relevância adaptativa e de virulência dos
clones CC452 e CC23 de S. agalactiae em relação ao hospedeiro humano.
Entender a interação entre o hospedeiro e a bactéria é vital para efetivamente prevenir a
doença de S. agalactiae, tendo efeitos adversos mínimos no hospedeiro humano. A pesquisa
neste campo revelou novos insights sobre os fatores de virulência bacteriana necessários para
o estabelecimento bem-sucedido da doença e uma resposta apropriada do hospedeiro para
prevenir infecção ascendente e parto prematuro. Qualquer perturbação neste equilíbrio pode
levar a resultados sérios e duradouros para o hospedeiro, ou pressões desvantajosas para a
bactéria. Desta forma, nossos resultados mostraram que dados epidemiológicos com triagens
de S. agalactiae mais precoces e frequentes durante a gravidez, incluindo gestantes
adolescentes, são necessárias para descrever a carga global do S. agalactiae, principalmente
no Brasil que não adotou nenhuma recomendação oficial para profilaxia em gestantes e
 72

neonatos. Além disso, a identificação de amostras do CC452 apresentando elevada capacidade

adesiva e invasiva em epitélio humano, ressalta novamente a necessidade de monitoramento
contínuo para que intervenções eficazes e viáveis para prevenir a doença pelo S. agalactiae
possam ser desenvolvidas. Em última análise, a vacinação provará ser a intervenção mais
eficaz. A combinação de design racional de vacina, implementação de estratégias inteligentes
e monitoramento periódico podem levar à erradicação do S. agalactiae no ser humano.
 73

CONCLUSÕES

✓ De 305 amostras coletadas de gestantes e neonatos no Hospital e Maternidade Carmela

Dutra (HMCD), 48 amostras foram identificadas como S. agalactiae por sorologia e
MALDI TOF;
✓ A faixa etária prevalente em gestantes com colonização por S. agalactiae foi de 29-36
anos, tendo 3 gestações em adolescentes;
✓ Mães de cor parda (24%) e cor preta apresentaram elevado percentual de colonização
por S. agalactiae;
✓ As comorbidades verificadas com maior frequência em gestantes colonizadas por S.
agalactiae foram hipertensão gestacional, diabetes mellitus gestacional e infecção
urinária, as quais apresentaram maior taxa de intercorrências no parto;
✓ Amostras isoladas de gestantes foram resistentes à tetraciclina, cotrimoxazol,
azitromicina e eritromicina. As amostras neonatais foram resistentes à tetraciclina,
cotrimoxazol, levofloxacino e cloranfenicol.
✓ Somente as amostras de S. agalactiae isoladas de orelha externa (N1905) e umbigo
(N1906) neonatal apresentaram resistência à levofloxacina, tetraciclina, cloranfenicol e
ofloxacina, sendo classificadas como MDR;
✓ A tipagem capsular demostrou que os tipos capsulares de S. agalactiae predominantes
foram Ia e V em gestantes e V e Ia em neonatos;
✓ As gestantes colonizadas com amostras de S. agalactiae tipo V manifestaram
intercorrências como anemia, bolsa rota, asma, sífilis, hipertensão, tromboembolia e
diabetes; entretanto, gestantes portadoras de S. agalactiae tipo Ia exibiram sofrimento
fetal e bronquite como intercorrências mais comuns;
✓ Os genes para os fatores de virulência lmb e iag foram amplificados em todas as
amostras, seguido dos genes fbsB, fbsA, pili-1, pili-2b, hylB, pili-2a e hvgA;
✓ Os resultados do MLST demonstraram que as amostras de S. agalactiae isoladas de
gestantes pertenciam à quatro complexos clonais e sete sequências tipo, sendo o CC23 e
a ST-23 prevalentes.
✓ Em amostras de neonatos, o CC23 e as ST-24, ST-28, ST-144 e ST-162 foram
predominantes;
✓ Os resultados dos ensaios de interação das amostras de gestantes com células epiteliais
respiratórias humanas (A549) demostraram que todas as amostras aderiram à célula
hospedeira e a maioria também invadiu, exceto a amostra G1813 (CC não determinado);
 74

✓ A amostra neonatal N1903 (CC162) apresentou maior capacidade de aderência às

células A549;
✓ Apesar das amostras neonatais N1903 e N1906 pertencerem ao complexo clonal 23 e
ST-162, elas apresentaram perfil de interação celular diferente. A amostra N1903 maior
aderência às células A549 e a amostra N1906 maior capacidade invasiva.
✓ As amostras de gestantes e neonatos apresentaram todas as características necessárias
para promover doenças invasivas (fatores de virulência, resistência aos antimicrobianos
e capacidade de invadir o epitélio respiratório), não devendo ser menosprezadas pelas
autoridades brasileiras.
✓ O monitoramento da colonização por S. agalactiae em gestantes e em neonatos
necessita ser continuamente realizado, principalmente no Brasil, onde normas oficiais
de profilaxia ainda não foram adotadas.
 75

REFERÊNCIAS

Ablow RC, Driscoll SG , Effmann E L, I Gross, C J Jolles, R Uauy, J B Warshaw . A

comparison of early-onset group B steptococcal neonatal infection and the respiratory-
distress syndrome of the newborn. N Engl J Med. 1976 Jan 8;294 (2):65-70. doi:
10.1056/NEJM197601082940201

ACOG. Prevention of Group B Streptococcal early-onset disease in newborns. Obstet

Gynecol. 2019. 134:e19–e40

Ager, EPC , Steele ED, Lindsey E Nielsen , Nestander MA, Mende K, Steven E Spencer 3.
Hypervirulent Streptococcus agalactiae septicemia in twin ex-premature infants transmitted
by breast milk: report of source detection and isolate characterization using commonly
available molecular diagnostic methods.Case Reports Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2020
Nov 26;19(1):55. doi: 10.1186/s12941-020-00396-6

Akgül, Ö, Çetinkaya E, Ersöz Ş, Tez M. Role of surgery in colorectal cancer liver metastases.
Review World J Gastroenterol. 2014 May 28;20(20):6113-22. doi: 10.3748/wjg.v20.i20.6113

Akpaka PE, Henry K, Thompson R, Unakal C. Colonization of Streptococcus agalactiae

among pregnant patients in Trinidad and Tobago .. IJID Reg. 2022 Jun; 3: 96–100. Published
online 2022 Mar 18. doi: 10.1016/j.ijregi.2022.03.010

Albuquerque, R C, Moreno ACR, Santos SRD, Ragazzi SLB, Martinez MBB . Multiplex-
PCR for diagnosis of bacterial meningitis. J Microbiol. 2019 Apr;50(2):435-443. doi:
10.1007/s42770-019-00055-9

Alhhazmi, A, Pandey A, Tyrrell GJ. Identification of Group B Streptococcus Capsule Type

by Use of a Dual Phenotypic/Genotypic Assay. J Clin Microbiol . 2017 Sep;55(9):2637-2650.
doi: 10.1128/JCM.00300-17

Al-Sweih N, Maiyegun S, Diejomaoh M, Rotimi V, Khodakhast F, Hassan N, George S, Baig

S. Streptococcus agalactiae (Group B Streptococci) carriage in late pregnancy in Kuwait. Med
Princ Pract. 2004 Jan-Feb;13(1):10-4. doi: 10.1159/000074044

Alvareza MD, Subramaniam A, Tang Y, Edwards RK. Obesity as an independent risk factor
for group B streptococcal colonization. J Matern Fetal Neonatal Med. 2017 Dec; 30(23):
2876-2879. doi: 10.1080/14767058.2016.1265937. Epub 2016 Dec 20

Anderson, T. The Nature of Bacterial Surface. Oxford University Press 1949; 76.

Arias B, Kovacec V, Vigliarolo L, Suárez M, Tersigni C, Müller L, Lopardo H, Bonofiglio L,

Mollerach M. Fluoroquinolone-Resistant Streptococcus agalactiae Invasive Isolates
 76

Recovered in Argentina. Microb Drug Resist. 2019 Jun;25(5):739-743. doi:

10.1089/mdr.2018.0246

Armistead B, Oler E, Waldorf AK, Rajagopal L. The Double Life of Group B Streptococcus:
Asymptomatic Colonizer and Potent Pathogen. J Mol Biol. 2019 Jul 26;431(16):2914-2931.
doi: 10.1016/j.jmb.2019.01.035

Awwad E, Srour M, Hasan S, Khatib S. Molecular determination, serotyping, antibiotic

profile and virulence factors of group B Streptococcus isolated from invasive patients at
Arabcare Hospital Laboratory, Palestine. Am. J. Infect. Control 2022, 50, 934–940

Balachandran L, Jacob L, Awadhi RA, Yahya LO, Catroon KM, Soundararajan LP, Wani S,
Alabadla S, Cureus Yassmin AH. Urinary Tract Infection in Pregnancy and Its Effects on
Maternal and Perinatal Outcome: A Retrospective Study. 2022 Jan 22;14(1):e21500. doi:
10.7759/cureus.21500

Ballard MB, Mercado-Evans V, Marunde MG, Nwanosike H, Zulk J, Patras KA. Group B
Streptococcus CAMP Factor Does Not Contribute to Interactions with the Vaginal Epithelium
and Is Dispensable for Vaginal Colonization in Mice. Microbiol Spectr. 2021 Dec
22;9(3):e0105821. doi: 10.1128/Spectrum.01058-21

Barros RR. Antimicrobial Resistance among Beta-Hemolytic Streptococcus in Brazil: An

Overview. Review Antibiotics (Basel) . 2021 Aug 12;10(8):973. doi:
10.3390/antibiotics10080973

Batista RP, Ferreira Cristiane Rúbia. Streptococcus agalactiae septicemia in a patient with
diabetes and hepatic cirrhosis. Autops Case Rep. 2015 Dec 30;5(4):35-43. doi:
10.4322/acr.2015.028. eCollection 2015 Oct-Dec

Beckmann H, Senitz D. Developmental malformations in cerebral structures in "endogenous

psychoses". Review J Neural Transm (Vienna) .2002 Mar;109(3):421-31. doi:
10.1007/s007020200034

Beigverdi R, Jabalameli F, Mirsalehian A, Hantoushzadeh S, Boroumandi S, Taherikalani M,

Emaneini M. Virulence factors, antimicrobial susceptibility and molecular characterization of
Streptococcus agalactiae isolated from pregnant women. Acta Microbiol Immunol Hung.
2014 Dec;61(4):425-34. doi: 10.1556/AMicr.61.2014.4.4

Berardi A, Rossi C, Bacchi Reggiani ML, et al. An area-basedho study on intrapartum

antibiotic prophylaxis for preventing group B streptococcus early-onset disease: advances and
limitations. J Matern Fetal Neonatal Med. (30),1739-44 (2017)
 77

Berardi A, Rossi C, Creti R, China M, Gherardi G, Venturelli C, Rumpianesi F, Ferrari F.

Group B streptococcal colonization in 160 mother-baby pairs: a prospective cohort study. J
Pediatr. 2013 Oct;163(4):1099-104

Berardi A, Spada C, Vaccina E, Boncompagni A, Bedetti L, Lucaccioni L. Intrapartum beta-

lactam antibiotics for preventing group B streptococcal early-onset disease: can we abandon
the concept of 'inadequate' intrapartum antibiotic prophylaxis? Expert Rev Anti Infect
Ther. 2020 Jan;18(1):37-46

Bobadilla FJ, Marina GN, Iliana JC, Osvaldo DD, Margarita EL. Prevalence, serotypes and
virulence genes of Streptococcus agalactiae isolated from pregnant women with 35-37 weeks
of gestation. BMC Infect Dis. 2021 Jan 14;21(1):73. doi: 10.1186/s12879-020-05603-5

Botelho ACN, Oliveira JG, Damasco AP, Santos KTB, Ferreira AFM, Rocha GT, Marinho
PS, Bornia RBG, Pinto TCA, Américo MA, Fracalanzza SEL, Teixeira LM.PLoS One. 2018
May 11;13(5):e0196925. doi: 10.1371/journal.pone.0196925

Botelho ACN, Oliveira JG, Damasco AP, Santos KTB, Ferreira AFM, Rocha GT, Marinho
PS, Bornia RBG, Pinto TCA, Américo MA, Fracalanzza SEL, Teixeira LM Streptococcus
agalactiae carriage among pregnant women living in Rio de Janeiro, Brazil, over a period of
eight years. PLoS One. (2018)13(5):e0196925. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0196925

Boyer, KM Gadzala, CA, Kelly PD, Gotoff SP. Selective intrapartum chemoprophylaxis of
neonatal group B streptococcal early-onset disease. III. Interruption of mother-to-infant
transmission. Clinical Trial J Infect Dis. 1983 Nov;148(5):810-6. doi:
10.1093/infdis/148.5.810

Brito ER, Pedroso-Roussado C, Melo-Cristino J, Ramirez M; Portuguese Group for the Study
of Streptococcal Infections. Streptococcus agalactiae causing neonatal infections in Portugal
(2005–2015): Diversification and emergence of a CC17/PI-2b multidrug resistant
sublineage. Front Microbiol. 2017;8:499. 10.3389/fmicb.2017.00499

Brittan & Nobbs. Jane L, Angela H. Group B Streptococcus pili mediate adherence to salivary
glycoproteins. Microbes Infect. 2015 May;17(5):360-8. doi: 10.1016/j.micinf.2014.12.013

Brokaw A, Furuta A, Dacanay M, Rajagopal L, Adams Waldorf KM Bacterial and Host

Determinants of Group B Streptococcal Vaginal Colonization and Ascending Infection in
Pregnancy. Front. Cell. Infect. Microbiol. (2021) 11:720789. doi: 10.3389/fcimb.2021.720789

Burcham LR, Breton LY; Radin, J.N.; Spencer, B.L.; Deng, L.; Hiron, A.; Ransom, M.R.;
Mendonca, J.D.C.; Belew, A.T.; El-Sayed, N.M.; et al. Identification of Zinc-Dependent
Mechanisms Used by Group B Streptococcus To Overcome CalprotectinMediated Stress.
mBio 2020, 11, e02302-20
 78

Burcham LR, Spencer BL, Keeler LR, Runft DL, Patras KA, Neely MN, Doran KS.
Determinants of Group B streptococcal virulence potential amongst vaginal clinical isolates
from pregnant women. PLoS One. 2019;14(12):e0226699

Buscetta M, Papasergi S, Firon A, Pietrocola G, Biondo C, Mancuso G, Midiri A, Romeo L,

Teti G, Spezieal P, Trieu-Cuot P, Beninat C. FbsC, a novel fibrinogen-binding protein,
promotes Streptococcus agalactiae-host cell interactions. J Biol Chem. 2014 Jul
25;289(30):21003-21015. doi: 10.1074/jbc.M114.553073

Campisi E, Rosini R, Ji W, Guidotti S, Rojas-López M, Geng G. Genomic analysis reveals

multi-drug resistance clusters in group B Streptococcus CC17 hypervirulent isolates causing
neonatal invasive disease in southern mainland China. Front Microbiol. 2016;7:1265.
10.3389/fmicb.2016.01265

Capraro GA, Lala S, Khaled K, Gosciniak E, Saadat B, Alvarez SM, Kumar S, Calhoun T,
Landry E, Caldito G, Bocchini JA Jr, Vanchiere JA. Association of sexually-transmitted
infection and African-American race with Streptococcus agalactiae colonization in
pregnancy. Antimicrob Resist Infect Control. 2020 Nov 4;9(1):174. doi: 10.1186/s13756-020-
00827-1

Carlin AF, Lewis AL, Varki A, Nizet V. Group B streptococcal capsular sialic acids interact
with siglecs (immunoglobulin-like lectins) on human leukocytes. J Bacteriol 2007 .
Feb;189(4):1231-7. doi: 10.1128/JB.01155-06

Centers for Disease Control and Prevention. 2020. Active Bacterial Core Surveillance Report,
Emerging Infections Program Network, Group B
Streptococcus,2020.ww.cdc.gov/abcs/downloads/GBS_Surveillance_Report_2020

Chen Z, Wu C, Cao X, Wen G, Guo D, Yao Z, Ye X. J Perinatol. 2018 Oct;38(10):1309-

1317. doi: 10.1038/s41372-018-0182-z. Risk factors for neonatal group B streptococcus
vertical transmission: a prospective cohort study of 1815 mother-baby pairs. Epub 2018 Aug
1

Cheng, YW, Bryant AS, Caughey AB. Equality in obstetrical care: racial/ethnic variation in
group B streptococcus screening. Matern Child Health J . 2011 Nov;15(8):1160-5. doi:
10.1007/s10995-010-0682-8

Choi SJ, Kang J, Uh Y . Recent Epidemiological Changes in Group B Streptococcus Among

Pregnant Korean Women.. Ann Lab Med. 2021 Jul 1;41(4):380-385. doi:
10.3343/alm.2021.41.4.380. PMID: 33536356 Free PMC article.

Cieslewicz MJ, Chaffin D, Glusman G, Kasper D, Madan A, Rodrigues S, Fahey J, Wessels

MR, Rubens C. Structural and genetic diversity of group B streptococcus capsular
 79

polysaccharides. Infect Immun. 2005 May;73(5):3096-103. doi: 10.1128/IAI.73.5.3096-

3103.2005

Cieslewicz MJ, Kasper DL, Wang Y, Wessels M R. Functional analysis in type Ia group B
Streptococcus of a cluster of genes involved in extracellular polysaccharide production by
diverse species of streptococci. J Biol Chem. 2001 Jan 5;276(1):139-46. doi:
10.1074/jbc.M005702200

Clouse K, Shehabi A, Suleimat AM, Faouri S, Khuri-Bulos N, Jammal Al , Chappell J,

Fortner KB, Chamby AB, Randis TM, Ratner AJ, Aronoff DM, Halasa N. High prevalence of
Group B Streptococcus colonization among pregnant women in Amman, Jordan. BMC
Pregnancy Childbirth. 2019 May 20;19(1):177. doi: 10.1186/s12884-019-2317-4

Concetta B, Famà A, Teti G. How BspC from Streptococcus agalactiae Interacts with Host
Vimentin during Meningitis Affiliations expand PMID: 31324435 DOI:
10.1016/j.tim.2019.07.001

Corrêa, ABA, Silva LG, Pinto TCA, Oliveira ICM, Fernandes FG, Costa NS, Mattos MC,
Fracalanzza SEL, Benchetrit LC. The genetic diversity and phenotypic characterisation of
Streptococcus agalactiae isolates from Rio de Janeiro, Brazil. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2011
Dec;106(8):1002-6. doi: 10.1590/s0074-02762011000800017

Costa, AFE, Moraes JA, Silva, SOJ, Santos, MHB, Santos, GS, Barja-Fidalgo C, Mattos-
Guaraldi AL, Nagao P. E. Reactive oxygen species involved in apoptosis induction of human
respiratory epithelial (A549) cells by Streptococcus agalactiae . Microbiology, 162, 94–99.
2016

Culebras E, Rodriguez-Avial I, Betriu C, Redondo M, Picazo JJ. Antimicrob Agents

Macrolide and tetracycline resistance and molecular relationships of clinical strains of
Streptococcus agalactiae. Chemother . 2002 May;46(5):1574-6. doi: 10.1128/AAC.46.5.1574-
1576.2002

Cutting AS, Del Rosario Y, Mu R, Rodriguez A, Till A, Subramani S, Gottlieb RA, Doran
KS. The role of autophagy during group B Streptococcus infection of blood-brain barrier
endothelium. J. Biol. Chem. 2014;289:35711–35723. doi: 10.1074/jbc.M114.588657

Da Costa AFE, Pereira CS, Santos GS, Carvalho Técia MU, Hirata RJr, Mattos-Guaraldi AL,
Rosa ACP, Nagao PE. Group B Streptococcus serotypes III and V induce apoptosis and
necrosis of human epithelial A549 cells. Int J Mol Med . 2011 May;27(5):739-44. doi:
10.3892/ijmm.2011.635

Da Cunha V, Davies MR, Douarre PE. Streptococcus agalactiae clones infecting humans were
selected and fixed through the extensive use of tetracycline, Nat. Commun. 5 4544, 2014
 80

De Figueiredo Sanches G, Lannes-Costa PS, Cristoforêto MC, Doran KS, Mattos-Guaraldi

AL, Nagao PE. Streptococcus agalactiae strains isolated from cancer patients in Rio de
Janeiro, Brazil. Braz J Microbiol. 2021 Mar;52(1):303-310. doi: 10.1007/s42770-020-00419-
6

De Melo SCCS, Santos NCDS, Oliveira MD. Streptococcus agalactiae isolated from pregnant
women. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. Antimicrobial susceptibility of 58(1):83, 2016

De Mouy D, Cavallo JD, Leclercq R, Fabre R. Antibiotic susceptibility and mechanisms of

erythromycin resistance in clinical isolates of Streptococcus agalactiae: French multicenter
study .Multicenter Study Antimicrob Agents Chemother. Association de Formation Continue
en Pathologie Infectieuse des Biologistes. 2001 Aug;45(8):2400-2. doi:
10.1128/AAC.45.8.2400-2402.2001.AFICORPI-BIO Network

Dobrut A, Ochonska D, ´ Brzozowska E, Górska S, Kaszuba-Zwoinska J, Gołda- CM,

Gamian A, Brzychczy-Wloch M . Molecular Characteristic, AntibioticResistance, and
Detection of Highly Immunoreactive Proteins of Group B Streptococcus Strains Isolated
From Urinary Tract Infections in Polish Adults. Front. Microbiol. (2022)13:809724. doi:
10.3389/fmicb.2022.809724

Doran & Nizet KS, Victor . Molecular pathogenesis of neonatal group B streptococcal
infection: no longer in its infancy. Review Mol Microbiol. 2004 Oct;54(1):23-31. doi:
10.1111/j.1365-2958.2004.04266

Doran KS, Chang JCW, Benoit VM, Eckmann L, Nizet V. Group B Streptococcal b-
Hemolysin/Cytolysin Promotes Invasion of Human Lung Epithelial Cells and the Release of
Interleukin-8. J Infect Dis 2002; 185:196–203.

Doran KS, Engelson EJ, Khosravi A, Maisey HC, Fedtke I, Equils O, Michelsen KS, Arditi
M, Peschel A, Nizet V. Blood-brain barrier invasion by group B Streptococcus depends upon
proper cell-surface anchoring of lipoteichoic acid. J Clin Invest 2005:115; 2499- 2507

Doran KS, Liu GY, Nizet V. Group B streptococcal β-hemolysin/cytolysin activates

neutrophil signaling pathways in brain endothelium and contributes to development of
meningitis. J Clin Invest 2003; 112:736–744. [PubMed: 12952922]

Dramsi S, Caliot , Bonne I, Guadagnini S, Prévost MC, Kojadinovic M, Lalioui L, Poyart C,

Trieu-Cuot P. Assembly and role of pili in group B streptococci . Mol Microbiol. 2006
Jun;60(6):1401-13. doi: 10.1111/j.1365-2958.2006.05190

Du J, Xiang Y, Sankaranarayanapillai M, Zhang M, Wang J, Si Y, Pham HA, Xu H, Chen Y,

Tao C. Extracting postmarketing adverse events from safety reports in the vaccine adverse
 81

event reporting system (VAERS) using deep learning . J Am Med Inform Assoc. 2021 Jul
14;28(7):1393-1400. doi: 10.1093/jamia/ocab014

Duarte, HM, Jakovljevic I, Kaiser , Planta UL. Lateral diffusion of CO2 in leaves of the
crassulacean acid metabolism plant Kalanchoe daigremontiana Hamet et Perrier. 2005
Apr;220(6):809-16. doi: 10.1007/s00425-004-1398-z. Epub 2004 Nov 11

Eddens T, Kolls JK. Host defenses against bacterial lower respiratory tract infection. Curr.
Opin. Immunol. 2012;24:424–430. doi: 10.1016/j.coi.2012.07.005

Edward MS, Nizet V. Group B streptococcal infections. In: Jack S, Remington JS, Klein JO,
Wilson CB, Nizet V, Maldonado YA, editors (7th ed.). Infectious diseases of the fetus and
newborn infant, Philadelphia: WB Saunders. 2011: 417-67

Edwards JM, Watson N, Focht C, Wynn C, Todd CA, Walter EB, Heine RP, Swamy GK.
Group B Streptococcus (GBS) Colonization and Disease among Pregnant Women: A
Historical Cohort Study. Infect Dis Obstet Gynecol. 2019 Feb 3;2019:5430493. doi:
10.1155/2019/5430493

Edwards, MS, Baker, CJ. Group B Streptococcus neonatalinfection in an intensive care unit in
Brazil: high fatality andmissed opportunities for antibiotic prophylaxis. Review Clin Infect
Dis. 2005 Sep 15;41(6):839-47. doi: 10.1086/432804. Epub 2005 Aug 16. Group B
streptococcal infections in elderly adults

El-Gendy AA, Hassan SET, Gertz B, Bernard B, Ahmed MM, Elzohry HA, Tawab GAE, El-
Sayed ME, Kamel SY, Zakaria H, Mahros AM, Ahmed MH, Tahoon MA, Sakr MA,
Gadallah AAA, Ahmed FE , Elgazzar MF. Serotyping and Antibiotic Susceptibility of
Invasive Streptococcus agalactiae in Egyptian Patients with or without Diabetes Mellitus.
Observational Study .Am J Trop Med Hyg. 2021 Oct 4;105 (6):1684-1689. doi:
10.4269/ajtmh.21-0300

Evangelista ML, Freitas FT. Braz J InfectDis. 19:98–9, 2015

Faccone D, L Guerriero EM, L Errecalde HC, Yoyas N, Togneri A, Romanowski V, Galas M,

Whonet R, Corso A. Fluoroquinolone-resistant Streptococcus agalactiae isolates from
Argentina . Multicenter Study Rev Argent Microbiol. 2010 Jul-Sep;42(3): 203-7

Farley MM. Group B streptococcal disease in nonpregnant adults.Clin Infect Dis. 2001 Aug
15;33(4):556-61. doi: 10.1086/322696. Epub 2001 Jul 20. Affiliations expand. PMID:
11462195 DOI: 10.1086/322696

Fettucciari K, Quotadamo F, Noce R, Palumbo C, Modesti A, Rosati E, Mannucci R, Bartoli

A, Marconi P. Group B Streptococcus (GBS) disrupts by calpain activation the actin and
 82

microtubule cytoskeleton of macrophages. Cell Microbiol. 2011 Jun;13(6):859-84. doi:

10.1111/j.1462-5822.2011.01584.x. Epub 2011 Mar 18

Fiolo K, Zanardi CE, Salvadego M, Bertuzzo CS, Amaral E, Calil R, Levy CE. Infection rate
and Streptococcus agalactiae serotypes in samples of infected neonates in the city of
Campinas (São Paulo), Brazil. Rev Bras Ginecol Obstet. 2012 Dec;34(12):544-9. doi:
10.1590/s0100-72032012001200003

Flaherty RA, Aronoff DM, Gaddy JA, Petroff MG, Manning SD. Distinct Group B
Streptococcus Sequence and Capsule Types Differentially Impact Macrophage Stress and
Inflammatory Signaling Responses. Infect Immun. 2021 Apr 16;89(5):e00647-20. doi:
10.1128/IAI.00647-20.

Freitas L, Oliveira V, Dos Santos MHB, Carvalho TMU, Hirata R Jr, Mattos-Guaraldi AL,
Mortara RA, Nagao PE. Fever temperature enhances mechanisms of survival of
Streptococcus agalactiae within human endothelial cells. Int J Mol Med . 2010 Oct;26(4):511-
6. doi: 10.3892/ijmm_00000493

Freitas, FTM, Romerob GAS. Early-onset neonatal sepsis and the implementation of group B
streptococcus prophylaxis in a Brazilian maternity hospital: a descriptive study. Braz j Infect
Dis .2 1 (1):92–97. 2017

Furfaro LLD, Chang B J, Kahler CM, Payne MS. Genomic characterisation of perinatal
Western Australian Streptococcus agalactiae isolates. The School of Medicine, Division of
Obstetrics and Gynaecology. The University of Western Australia, Perth, Western Australia,
Australia, The School of Biomedical Sciences, The Marshall Centre for Infectious. Diseases
Research and Training, The University of Western Australia, Perth, Western Australia,
Australia

Fuss C, Palmaz JC EA. Fibrinogen: structure, function, and surface interactions. Sprague
Review J Vasc Interv Radiol. 2001 Jun;12(6):677-82. doi: 10.1016/s1051-0443(07)61437-7

Genovese C, D'Angeli F, Salvatore VD, Tempera G, Nicolosi D. Streptococcus agalactiae in

pregnant women: serotype and antimicrobial susceptibility patterns over five years in Eastern
Sicily (Italy) Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2020 Dec;39(12):2387-2396. doi:
10.1007/s10096-020-03992-8. Epub 2020 Jul 22

German L, Bornstein SIJ, Ben-Harush S, Mordechai B, Weintraub Z. Is there an increase in

the incidence of gbs carrier rates among pregnant women in northern Israel? Harefuah. 2006
Dec;145(12):866-9, 944

Ghamari M, Jabalameli F, Emaneini M, Beigverdi R . Multiple-locus variable-number tandem

repeat analysis for genotyping of erythromycin-resistant group B streptococci in Iran.. New
 83

Microbes New Infect. 2022 Jan 17;45:100957. doi: 10.1016/j.nmni.2022.100957. eCollection

2022 Jan

Gherardi G, Imperi M, Baldassarri L, Pataracchia M, Alfarone G, Recchia S, Orefici G,

Dicuonzo G, Creti R. Molecular epidemiology and distribution of serotypes, surface proteins,
and antibiotic resistance among group B streptococci in Italy. J Clin Microbiol. 2007
Sep;45(9):2909-16. doi: 10.1128/JCM.00999-07. Epub 2007 Jul 18

Giovanetti AB, Burioni R, Varaldo PE. A novel efflux system in inducibly erythromycin-
resistant strains of Streptococcus pyogenes. Antimicrob Agents Chemother. 2002
Dec;46(12):3750-5. doi: 10.1128/AAC.46.12.3750-3755.2002. Eleonora

Giovanetti E, Montanari MP, Mingoia M, Varaldo PE. Phenotypes and genotypes of

erythromycin-resistant Streptococcus pyogenes strains in Italy and heterogeneity of inducibly
resistant strains. Antimicrob Agents Chemother. 1999 Aug;43(8):1935-40. doi:
10.1128/AAC.43.8.1935

Gonzalez-Gil A, Schnaar RL. Siglec Ligands. Cells. 2021 May 20;10(5):1260. doi:
10.3390/cells10051260. PMID: 34065256 Free PMC article. Review.

Goodrum KJ, McCormick LL, Schneider B. Group B streptococcus-induced nitric oxide

production in murine macrophages is CR3 (CD11b/CD18) dependent. Infect. Immun.
1994.62:3102–3107

Goodrum, JF, Earnhardt T, GoineN s, Bouldin TW. Fate of myelin lipids during degeneration
and regeneration of peripheral nerve: an autoradiographic study. J Neurosci. 1994
Jan;14(1):357-67. doi: 10.1523/JNEUROSCI.14-01-00357.1994.

Gori A, Harrison OB, Mlia E, Nishihara Y, Chan JM, Msefula J, Mallewa M, Dube Q,
Swarthout TD, Nobbs AH, Maiden MCJ, French N, Heyderman RS. Pan-GWAS of
Streptococcus agalactiae Highlights Lineage-Specific Genes Associated with Virulence and
Niche Adaptation. 2020. Jun 9;11(3):e00728-20. doi: 10.1128/mBio.00728-20

Graux E, Hites M, Martiny D, Maillart E, Delforge M, Melin P, Dauby N. Invasive group B

Streptococcus among non-pregnant adults in Brussels-Capital Region, 2005-2019.
Multicenter Study Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2021 Mar;40(3):515-523. doi:
10.1007/s10096-020-04041-0. Epub 2020 Sep 17

Guimarães DO, Momesso LS, Pupo MT. Antibioticos: importância terapêutica e perspectivas
para a descoberta e desenvolvimento de novos agentes. Quim. Nova 2010;33 (3):667-679
Guo CM, Chen RR, Kalhoro DH, Wang ZF, Liu GJ, Lu CP, Liu YJ. Identification of genes
preferentially expressed by highly virulentpiscine streptococcus agalac tiae upon interaction
with macrophages. Plos One. 2014 (2) 3; 9(2):E87980. Doi:10.1371/Journal.Pone.0087980
 84

Guo D, Cao X, Li S, Ou Q, Lin D, Yao Z, Chen S, Wu C, Wen G , Ye X. Neonatal

colonization of group B Streptococcus in China: Prevalence, antimicrobial resistance,
serotypes, and molecular characterization. American Journal of Infection Control (2017)

Hakim M, Jabour A, Anton M, Hakim M, Kheirallah S. Screening Arab Israeli Pregnant

Women for Group B Streptococcus by the AmpliVue GBS Assay: Are the Rates Higher the
National Average? Isr Med Assoc J. 2018 May;20(5):291-294

Hanna M, Noor A. Streptococcus Group B In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL):
StatPearls Publishing; 2023 Jan. 2023

Hanna M, Noor A. Streptococcus Group B. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL):
2023 Jan 16. StatPearls Publishing; 2023 Jan–. PMID: 31985936 Free Books & Documents.

Hay J, Shahzeidi S, Laurent G. Mechanisms of bleomycin-induced lung damage . Review

Arch Toxicol. 1991;65(2):81-94. doi: 10.1007/BF02034932

Hayes ET, Roca-Barcelo A, Douglas P, Fecht D, Sterrantino AF, Williams B, Blangiardo M,

Gulliver J, Hansell AL. Risk of respiratory hospital admission associated with modelled
concentrations of Aspergillus fumigatus from composting facilities in England Environ Res .
2020 Apr;183:108949. doi: 10.1016/j.envres.2019.108949. Epub 2020 Jan 3

Hendrickx DM, Hoefsloot HCJ, Hendriks MMWB, Vis DJ, Canelas AB, Teusink B. Inferring
differences in the distribution of reaction rates across conditions. Age K Smilde. Mol Biosyst.
2012 Sep;8(9):2415-23. doi: 10.1039/c2mb25015b. Epub 2012 Jul 11

Henneke P, Wennekamp J. Induction and termination of inflammatory signaling in group B

streptococcal sepsis. Review Immunol Rev. 2008 Oct;225:114-27. doi: 10.1111/j.1600-
065X.2008.0067

Herbert Mark A, Beveridge, Catriona JEa; Saunders, Nigel Jb Current Bacterial virulence
factors in neonatal sepsis: group B streptococcus Opinion in Infectious Diseases: Paediatric
and neonatal infections June 2004 - Volume 17 - Issue 3 - pp 225

Hirai N, Kasahara K, Nakano R, Ogawa Y, Suzuki Y, Ogawa M, Hishiya N, Nakano A,

Ichimura S, Yano H, Yoshikawa M. Clinical characteristics and molecular epidemiology of
invasive Streptococcus agalactiae infections between 2007 and 2016 in Nara, Japan. PLoS
One. 2020 Oct 19;15(10):e0240590. doi: 10.1371/journal.pone.0240590. eCollection 2020

Hsu JF, Lu JJ, Lin C, Chu SM, Lin LC, Lai MY, Huang HR, Chiang MC, Tsai MH. Clustered
Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat Analysis of Clonal Complex 17 Serotype III
Group B Streptococcus Strains Causing Neonatal Invasive Diseases. Int J Mol Sci. 2021 Nov;
22(21): 11626. Published online 2021 Oct 27. doi: 10.3390/ijms222111626
 85

Hynes WL, Walton SL. Hyaluronidases of Gram-positive bacteria. Review FEMS Microbiol
Lett. 2000 Feb 15;183(2):201-7. doi: 10.1111/j.1574-6968.2000.tb08958.x

Imperi M. Pataracchia M. Alfarone G. Baldassarri L. Orefici G. Creti R. A multiplex PCR

assay for the direct identification of the capsular type (Ia to IX) of Streptococcus agalactiae. J
Microbiol Methods. 2010; 80: 212-214https://doi.org/10.1016/j.mimet.2009.11.010

Jacobsson, K. A novel family of fibrinogen-binding proteins in Streptococcus agalactiae. Vet

Microbiol. 2003 Oct 8;96(1):103-13. doi: 10.1016/s0378-1135(03)00206-2

Jeane ZR, Feltraco J, Radin V, Gonçalves CV, Silva PEA, Von Groll A. Streptococcus
agalactiae colonization and screening approach in high-risk pregnant women in southern
Brazil. J Infect Dev Ctries. 2020 Apr 30;14(4):332-340. doi: 10.3855/jidc.12025.

Jiang S, Wessels MR. BsaB, a novel adherence factor of group B Streptococcus. Infect
Immun. 2014.82:1007–1016. https://doi.org/10.1128/IAI .01014-13

Jiménez-Escutia R, Vargas-Alcantar D, Flores-Espinosa P, Helguera-Repetto A C,

Villavicencio-Carrisoza O, Mancilla-Herrera I, Irles C, Torres-Ramos YD, Valdespino-
Vazquez MY, Velázquez-Sánchez P, Zamora-Escudero R, Islas-López M, Carranco-Salinas
C, Díaz L, Zaga-Clavellina V, Olmos-Ortiz A. High Glucose Promotes Inflammation and
Weakens Placental Defenses against E. coli and S. agalactiae Infection: Protective Role of
Insulin and Metformin. Int J Mol Sci. 2023 Mar 9;24(6):5243. doi: 10.3390/ijms24065243

Jin G, Xu S, Pelisek JZ. Atherosclerosis Is an Epigenetic Disease. Review Trends Endocrinol

Metab. 2018 Nov;29(11):739-742. doi: 10.1016/j.tem.2018.04.007. Epub 2018. May 10

Jin Z, Li J, Zhou H, Wang Z, Yi L, Liu N, Du J, Chang CY, Ji W. Serotype Distribution,

Virulence Determinants and Antimicrobial Susceptibility of Streptococcus agalactiae isolated
from Young Infants. 2022 Nov 15;11(11):1355. doi: 10.3390/pathogens11111355
Johri AK, Margarit I, Broenstrup M, Brettoni C, Hua L, Gygi SP, Telford J L, Grandi G,
Paoletti LC. Transcriptional and proteomic profiles of group B Streptococcus type V reveal
potential adherence proteins associated with high-level invasion. Infect. Immun. (2007) 75,
1473–1483

Johri AK, Paoletti LC, Glaser P, Dua M, Sharma PK, Grandi G, Rappuoli R. Group B
Streptococcus: global incidence and vaccine development. Nature 4:932–942(2006)

Jones A, Seepersaud LR, Needham, RHV, Kim CS. Abundance of the delta subunit of RNA
polymerase is linked to the virulence of Streptococcus agalactiae. J Bacteriol. 2006
Mar;188(6):2096-105. doi: 10.1128/JB.188.6.2096-2105.2006

Jones N, Bohnsack JF, Takahashi S. Multilocus sequence typing system for group B
streptococcus. J Clin Microbiol. 2003;41(6):2530–6
 86

Jürgens G, Hoff HF, Chisolm GM, Esterbauer H . Modification of human serum low density
lipoprotein by oxidation--characterization and pathophysiological implications. Review Chem
Phys Lipids. 1987 Nov-Dec;45(2-4):315-36. doi: 10.1016/0009-3084(87)90070-3

Kaczorek E, Małaczewska J, Wójcik R, Siwicki AK. Biofilm production and other virulence
factors in Streptococcus spp. isolated from clinical cases of bovine mastitis in Poland. BMC
Vet Res. 2017 Dec 28;13(1):398. doi: 10.1186/s12917-017-1322-y.

Karatan E, Watnick P. Signals, regulatory networks, and materials that build and break
bacterial biofilms. Microbiol Mol Biol Rev. 2009 Jun;73(2):310-47. doi:
10.1128/MMBR.00041-08

Katzenstein A, Davis C, Braude A.. Pulmonary changes in neonatal sepsis to group B -

hemolytic streptococcus: relation of hyaline membrane disease. J. Infect. Dis. 1976. 133:430–
435.

Katzenstein AL, Bloor CM, Leibow AA. Diffuse alveolar damage--the role of oxygen, shock,
and related factors. A review. Review Am J Pathol. 1976 Oct;85(1):209-28

Kawamura Y, Fujiwara H, Mishima N, Tanaka Y, Tanimoto A, Ikawa S, Itoh Y, Ezaki T.

First Streptococcus agalactiae isolates highly resistant to quinolones, with point mutations in
gyrA and parC. Antimicrob Agents Chemother. 2003 Nov;47(11):3605-9. doi:
10.1128/AAC.47.11.3605-3609.2003

Khan MA, Faiz A, Ashshi AM. Maternal colonization of group B streptococcus: prevalence,
associated factors and antimicrobial resistance. Ann Saudi Med. 2015; 35 (6), 423-7.

Khare R, Chen CY, Weaver EA, Barry MA. Advances and future challenges in adenoviral
vector pharmacology and targeting. Review Curr Gene Ther. 2011 Aug;11(4):241-58. doi:
10.2174/156652311796150363

Kimura K, Nagano N, Nagano Y, Suzuki S, Wachino J, Shibayama K, Arakawa Y. J

Antimicrob Chemother. High frequency of fluoroquinolone- and macrolide-resistant
streptococci among clinically isolated group B streptococci with reduced penicillin
susceptibility. 2013 Mar;68(3):539-42. doi: 10.1093/jac/dks423. Epub 2012 Oct 30

Kimura K, Suzuki S, Wachino J, Kurokawa H, Yamane K, Shibata N, Nagano N, Kato H,

Shibayama K, Arakawa Y. First molecular characterization of group B streptococci with
reduced penicillin susceptibility.Antimicrob Agents Chemother . 2008 Aug;52(8):2890-7. doi:
10.1128/AAC.00185-08. Epub 2008 May 19
 87

Kimura K, Yanagisawa H, Wachino J, Shibayama K, Arakawa Y. Ra[id and reliable

loopmediated isothermal amplification method for detecting streptococcus agalactiae. Jpn J
Infect Dis 2013; 66(6): 549-8

Kogan G, Uhrín D, Brisson JR, Paoletti LC, Blodgett AE, Kasper DL, Jennings HJ. Structural
and immunochemical characterization of the type VIII group B Streptococcus capsular
polysaccharide. J Biol Chem. 1996 Apr 12;271(15):8786-90. doi: 10.1074/jbc.271.15.8786

Kolar SL, Kyme P, Tseng CW, Soliman A, Kaplan A, Liang , Nizet V, Jiang D, Murali R,
Arditi M, Underhill DM, Liu GY. Cell Host Microbe. 2015 Dec 9;18(6):694-704. doi:
10.1016/j.chom.2015.11.001. Group B Streptococcus Evades Host Immunity by Degrading
Hyaluronan

Konto-Ghiorghi Y , Mairey E, Mallet A, Duménil G, Caliot E, Trieu-Cuot P, Dramsi S. Dual

role for pilus in adherence to epithelial cells and biofilm formation in Streptococcus agalactiae
.PLoS Pathog . 2009 May;5(5):e1000422. doi: 10.1371/journal.ppat.1000422. Epub 2009
May 8

Kwak DJ, Augustine NH, Borges WG, Joyner JL, Green WF, Hill HR. Intracellular and
extracellular cytokine production by human mixed mononuclear cells in response to group B
streptococci Infect Immun. 2000 Jan;68(1):320-7. doi: 10.1128/IAI.68.1.320-327.2000

Lamagni TL, Keshishian C, Efstratiou A, Guy R, Henderson KL, Broughton K, Sheridan E.

2013. Emerging trends in the epidemiology of invasive group B streptococcal disease in
England and Wales, 1991–2010. Clin Infect Dis. 57(5): 682–688

Lancefield RC. A serological differentiation of specific types of bovine hemolytic

streptococci (group B). J. Exp. Med.1934;59: 441-458, 1934
Langoni H, Ribeiro MG, Santos MV, Domingues PF, Pinto JPAN, FILHO NA. Mastite
bovina. Conceitos e fundamentos. In: IN: 4º ENCONTRO DE PESQUISADORES EM
MASTITES, Anais. Botucatu: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia –
Universidade Estadual de São Paulo, 2007

Lannes-Costa PS, Baraúna RA , Ramos JN, Veras JFC, Conceição MVR, Vieira VV, Mattos-
Guaraldi AL, Ramos RTJ, Doran KS, Silva A, Nagao PE. Comparative genomic analysis and
identification of pathogenicity islands of hypervirulent ST-17 Streptococcus agalactiae
Brazilian strain. Infect Genet Evol. 2020 Jun;80:104195. doi: 10.1016/j.meegid.2020.104195.
Epub 2020 Jan 15

Larsson M, Fonteneau JF, Bhardwaj N. Cross-presentation of cell-associated antigens by

dendritic cells. Review Curr Top Microbiol Immunol. 2003;276:261-75. doi: 10.1007/978-3-
662-06508-2_12
 88

Lee JJY, Wu J-J, Lee H-C, Liu K-H, W-C Ko. Group B streptococcal soft tissue infections in
non-pregnant adults N-Y. Clin Microbiol Infect. 2005 Jul;11(7):577-9. doi: 10.1111/j.1469-
0691.2005.01186.x

Leib SL, Kim YS, Black SM, Tureen JH, Tauber MG. Inducible nitric oxide synthase and the
effect of aminoguanadine in experimental neonatal meningitis. J. Infect. Dis. 1998.177:692–
700

Leib SL, Kim YS, Black SM, Tureen JH, Täuber MG. Inducible nitric oxide synthase and the
effect of aminoguanidine in experimental neonatal meningitis . J Infect Dis . 1998
Mar;177(3):692-700. doi: 10.1086/514226

Li C, Sapugahawatte DN, Yang Y, Wong KT, Lo Norman WS. Multidrug-Resistant

Streptococcus agalactiae Strains Found in Human and Fish with High Penicillin and
Cefotaxime Non-Susceptibilities., Margaret Ip 1 Microorganisms. 2020 Jul 16;8(7):1055. doi:
10.3390/microorganisms8071055

Lin C, Chu S, Wang HC, Peng-Hong Yang, Hsuan-Rong Huang, Ming-Chou Chiang, Ren-
Huei Fu, Ming-Horng Tsai, Jen-Fu Hsu. Complicated Streptococcus agalactiae Sepsis
with/without Meningitis in Young Infants and Newborns: The Clinical and Molecular
Characteristics and Outcomes. Microorganisms. 2021. Oct; 9(10): 2094. Published online
2021 Oct 3. doi: 10.3390/microorganisms9102094

Lindah G, Stålhammar-Carlemalm M, Areschoug T. Surface proteins of Streptococcus

agalactiae and related proteins in other bacterial pathogens . Review Clin Microbiol Ver .
2005 Jan;18(1):102-27. doi: 10.1128/CMR.18.1.102-127.2005

Linhares JJ, Neto PGC, Vasconcelos JLM, Saraiva TV, Ribeiro AMF, Siqueira TM, Rocha
FR. Prevalence of the colonization by Streptococcus agalactiae in pregnant women from a
maternity in Ceará, Brazil, correlating with perinatal outcomes. Rev Bras Ginecol Obstet.
2011 Dec;33(12):395-400

Liu G, Nizet YV . Extracellular virulence factors of group B Streptococci.Review Front

Biosci . 2004 May 1;9:1794-802. doi: 10.2741/1296

Liu Y, Liu J. Group B Streptococcus: Virulence Factors and Pathogenic Mechanism. Review
Microorganisms . 2022 Dec 15;10(12):2483. doi: 10.3390/microorganisms10122483

López Y, Parra El, Cepas V, Sanfeliú I, Juncosa T, Andreu A, Xercavins M, Pérez J, Sanz S,
Vergara A, Bosch J, Soto SM. Serotype, virulence profile, antimicrobial resistance and
macrolide-resistance determinants in Streptococcus agalactiae isolates in pregnant women and
neonates in Catalonia, Spain . Enferm Infecc Microbiol Clin (Engl Ed) 2018 Oct;36(8):472-
477. doi: 10.1016/j.eimc.2017.08.0
 89

Mahendroo M. Cervical remodeling in term and preterm birth: insights from an animal
model.Review Reproduction. 2012 Apr;143(4):429-38. doi: 10.1530/REP-11-0466. Epub
2012 Feb 18

Maisey C, Hensler M, Nizet V, Doran KS . Group B streptococcal pilus proteins contribute to

adherence to and invasion of brain microvascular endothelial cells Heather. J Bacteriol. 2007
Feb;189(4):1464-7. doi: 10.1128/JB.01153-06. Epub 2006 Oct 13.

Maloney CG, Thompson SD, Hill HR, Bohnsack JF, McIntyre TM, Zimmerman GA.
Induction of cyclooxygenase-2 by human monocytes exposed to group B streptococci. J
Leukoc Biol . 2000 May;67(5):615-21. doi: 10.1002/jlb.67.5.615

Maloney CG, Thompson SD, Hill HR, Bohnsack JF, McIntyre TM, Zimmerman GA.
Induction of cyclooxygenase-2 by human monocytes exposed to group B streptococci. J.
Leukoc. Biol. 2000.67:615–621

Martin R, Patil EN. Native aortic valve infective endocarditis caused by Streptococcus
agalactiae in a renal transplant recipient. Case Reports Am J Med Sci. 2010 Dec;340(6):518-
20. doi: 10.1097/MAJ.0b013e3181f31203.

Martinez G, Harel J, Higgins R, Lacouture S, Daignault D, Gottschalk M. Characterization of

Streptococcus agalactiae isolates of bovine and human origin by randomly amplified
polymorphic DNA analysis. J Clin Microbiol. 2000 Jan;38(1):71-8. doi:
10.1128/JCM.38.1.71-78.2000.

Martins ER, Pedroso-Roussado C, Melo-Cristino J, Ramirez M. Streptococcus agalactiae

Causing Neonatal Infections in Portugal (2005-2015): Diversification and Emergence of a
CC17/PI-2b Multidrug Resistant Sublineage.Front Microbiol. 2017 Mar 28;8:499. doi:
10.3389/fmicb.2017.00499. eCollection 2017. Portuguese Group for the Study of
Streptococcal Infections

McKennan C, Naughton K, Stanhope C, Kattan M, O'Connor GT, Sandel MT, Visness CM,
Wood RA, Bacharier LB, Beigelman A, Lovinsky-Desir S, Togias A, Gern JE, Nicolae D,
Ober C. Longitudinal data reveal strong genetic and weak non-genetic components of
ethnicity-dependent blood DNA methylation levels. Epigenetics. 2021 Jun;16(6):662-676.
doi: 10.1080/15592294.2020.1817290. Epub 2020 Sep 30.

Miranda PSD, Lannes-Costa PS, Pimentel BAS, Silva LG, Ferreira-Carvalho BT, Menezes
GC, Mattos-Guaraldi AL, Hirata R Jr, Mota RA, Nagao PE . Biofilm formation on different
pH conditions by Streptococcus agalactiae isolated from bovine mastitic milk. Comparative
Study Lett Appl Microbiol. 2018 Sep;67(3):235-243. doi: 10.1111/lam.13015. Epub 2018 Jul
10.
 90

Mitsuboshi S, Date J, Tsuruma N, Yamaga H, Watanabe K, Kijima H, Nakashita M,

Hosokawa H, Tsugita M. Does Quinolone- or Macrolide-Resistant Streptococcus agalactiae
Bacteremia Affect Patient Outcome? A Multicenter Cohort Study. Comparative Study Jpn J
Infect Dis. 2021 May 24;74(3):240-244. doi: 10.7883/yoken.JJID.2020.589. Epub 2020 Oct
30

Mohamed NA, Hinge M, Ole HL, Sørensen UBS, Uldbjerg N, Nejsum LN. Streptococcus
agalactiae do not penetrate human chorioamniotic membranes in vitro but alter their
biomechanical properties. Acta Obstet Gynecol Scand. 2021 Oct;100(10):1814-1821. doi:
10.1111/aogs.14232. Epub 2021 Aug 2

Molinari & Chhatwal GGS. Streptococcal invasion. Review Curr Opin Microbiol. 1999
Feb;2(1):56-61. doi: 10.1016/s1369-5274(99)80010-1

Monteiro GCTS, Hirata RJr, Andrade AFB, Mattos-Guaraldi AL, Nagao PE. Surface
carbohydrates as recognition determinants in non-opsonic interactions and intracellular
viability of group B Streptococcus strains in murine macrophages. Int J Mol Med. 2004
Jan;13(1):175-80

Morgan JA, Hankins ME, Callais NA, Albritton CW, Vanchiere JA, Betcher RE, Lewis DF.
Group B Streptococcus Rectovaginal Colonization and Resistance Patterns in HIV-Positive
Compared to HIV-Negative Pregnant Patients. Am J Perinatol. 2021 Nov 16. doi: 10.1055/s-
0041-1739356. Online ahead of print

Morinis J, Shah J, Murthy P, Fulford M. Horizontal transmission of group B streptococcus in

a neonatal intensive care unit. Paediatr Child Health. 2011 Jun;16(6):e48-50

Moschioni M, Pansegrau W, Barocchi MA. Adhesion determinants of the Streptococcus

species. Microb Biotechnol 3:370 –388. 2010.https://doi .org/10.1111/j.1751-
7915.2009.00138.x

Mosesson MW, Siebenlist KR, Meh DA . The structure and biological features of fibrinogen
and fibrin. Ann N Y Acad Sci . 2001;936:11-30. doi: 10.1111/j.1749-6632.2001.tb03491.x

Mudzana R, Mavenyengwa RT, Gudza-Mugabe M. Analysis of virulence factors and

antibiotic resistance genes in group B streptococcus from clinical samples. BMC Infect Dis.
2021 Jan 28;21(1):125. doi: 10.1186/s12879-021-05820-6

Musser JM, Mattingly SJ, Quentin R, Goudeau A, Selander RK. Identification of a

highvirulence clone of type III Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus) causing
invasive neonatal disease. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United
States of America. 1989;86(12):4731-4735
 91

Nagano N, Nagano Y, Kimura K, Tamai K, Yanagisawa H, Arakawa Y. Genetic

heterogeneity in pbp genes among clinically isolated Group B Streptococci with reduced
penicillin susceptibility. Antimicrob Agents Chemother 2008;52(12):4258–4267. [PubMed:
18809936]

Nagano Y, Nagano N, Takahashi S, Murono K, Fujita K, Taguchi F, Okuwaki Y. Restriction

endonuclease digest patterns of chromosomal dna from group b beta-haemolytic streptococci.
J med microbiol. 1991 (11);35(5):297-303

Nakamura K. Central circuitries for body temperature regulation and fever . Review Am J
Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2011 Nov;301(5):R1207-28. doi:
10.1152/ajpregu.00109.2011. Epub 2011 Sep 7

Nakamura PAM, Schuab RBB, Neves FPG, Pereira CFA, de Paula GR, Barros RR
Antimicrobial resistance profiles and genetic characterisation of macrolide resistant isolates of
Streptococcus agalactiae. Mem Inst Oswaldo Cruz (2011)106(2):119–122.

Nanduri SA, Petit S, Smelser C, Apostol M, Alden NB, Harrison LH, Lynfield R, Vagnone
PS, Burzlaff K, Spina NL, Dufort EM, Schaffner W, Thomas AR, Farley MM, Jain JH, Pondo
T, McGee L, Beall BW, Schrag SJ. Epidemiology of Invasive Early-Onset and Late-Onset
Group B Streptococcal Disease in the United States, 2006 to 2015: Multistate Laboratory and
Population-Based Surveillance. JAMA Pediatr. 2019 Mar 01;173(3):224-233

Navarro-Torné A, Curcio D, Moïsi JC, Jodar L. Burden of invasive group B Streptococcus

disease in non-pregnant adults: A systematic review and meta-analysis. PLoS One. 2021 Sep
30;16(9):e0258030. doi: 10.1371/journal.pone.0258030
Nguyen K, Dersnah GD, Ahlawat R. Innate antimicrobial peptide protects the skin from
invasive bacterial infection. Famotidine. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL):
StatPearls Publishing; 2023 Jan. 2022 Jul 11

Nizet V, Chang Y. Siglecs at the Host-Pathogen Interface. Review Adv Exp Med Biol.
2020;1204:197-214. doi: 10.1007/978-981-15-1580-4_8

Nizet V, Gibson RL, Chi EY, Framson PE, Hulse M, Rubens CE. Group B streptococcal
betahemolysin expression is associated with injury of lung epithelial cells. Infection and
Immunity. 1996;64(9):3818-3826

Nizet V, Kim KS, Stins M, Jonas M, Chi EY, Nguyen D, Rubens EC. Invasion of brain
microvascular endothelial cells by group B streptococci. Infect. Immun. 1997;65:5074–5081.
doi: 10.1128/iai.65.12.5074-5081.1997

Nizet V, Ohtake T, Lauth X, Trowbridge J, Rudisill J, Dorschner RA, Pestonjamasp V,

Piraino J, Huttner K, Gallo RL. Nature. 2001. Nov 22;414(6862):454-7. doi:
10.1038/35106587
 92

Ohri Ma, Parashar S, Pai VS, Ghosh S, Chakraborti A. A cytosol derived factor of Group B
streptococcus prevent its invasion into human epithelial cells. World J Microbiol Biotechnol.
2018 Mar 8;34(3):45. doi: 10.1007/s11274-018-2428-5

Oliveira MV, Teles MF, Viana TA. Prevalência e fatores de risco associados à colonização
por Streptococcus agalactiae em gestantes atendidas no hospital municipal esaú matos em
vitória da conquista – BA. C&D-Revista Eletrônica da Fainor. 2013. 6 (1): 172–184

Oliveira-Campos M, Giatti L, Malta D, Barreto SM. Contextual factors associated with sexual
behavior among Brazilian adolescents. Ann Epidemiol. 2013 Oct;23(10):629-35. doi:
10.1016/j.annepidem.2013.03.009

Ong SW, Barkham T, Kyaw WM, Ho HJ, Chan M. Characterisation of bone and joint
infections due to Group B Streptococcus serotype III sequence type 283. Eur J Clin Microbiol
Infect Dis. 2018 Jul;37(7):1313-1317

Palacios-Saucedo GDC, Rivera-Morales LG, Vázquez-Guillén JM, Caballero-Trejo A,

Mellado-García MC, Flores-Flores AS, González-Navarro JA, Celia Herrera-Rivera G,
Osuna-Rosales LE, Hernández-González JA, Vázquez-Juárez R, Barrón-Enríquez C,
Valladares-Trujillo R, Treviño-Baez JD, Alonso-Téllez CA, Ramírez-Calvillo LD, Cerda-
Flores RM, Ortiz-López R, Rivera-Alvarado MÁ, Solórzano-Santos F, Castro-Garza J,
Rodríguez-Padilla C. Genomic analysis of virulence factors and antimicrobial resistance of
group B Streptococcus isolated from pregnant women in northeastern Mexico . PLoS One.
2022 Mar 16;17(3):e0264273. doi: 10.1371/journal.pone.0264273
Pantazi I, Papafragkos I, Kolliniati O, Lapi I, Tsatsanis C, Vergadi E. Akt Inhibition Promotes
Autophagy and Clearance of Group B Streptococcus from the Alveolar Epithelium.
Pathogens. 2022 Sep 30;11(10):1134. doi: 10.3390/pathogens11101134

Paoletti LC, Kasper DL. Surface Structures of Group B Streptococcus Important in Human
Immunity. Review Microbiol Spectr. 2019 Mar;7(2). doi: 10.1128/microbiolspec.GPP3-0001-
2017

Paoletti LC, Kasper DL. Surface Structures of Group B Streptococcus Important in Human
Immunity. Microbiol Spectr. 2019 Mar;7(2)

Park C, Nichols M, Schrag SJ. Two cases of invasive vancomycin-resistant group B

streptococcus infection. N Engl J Med. 2014 Feb 27;370(9):885-6. doi:
10.1056/NEJMc1308504

Patras KA, Wescombe PA, Rösler B, Hale JD, Tagg JR, Doran KS. Streptococcus salivarius
K12 Limits Group B Streptococcus Vaginal Colonization. Infect Immun . 2015
Sep;83(9):3438-44. doi: 10.1128/IAI.00409-15. Epub 2015 Jun 15
 93

Paveenkittiporn W, Ungcharoen R, Kerdsin A. Streptococcus agalactiae infections and

clinical relevance in adults, Thailand. Diagn Microbiol Infect Dis. 2020 May;97(1):115005.
doi: 10.1016/j.diagmicrobio.2020.115005. Epub 2020 Jan 30

Pezzicoli A, Santi I, Lauer P, Rosini R, Rinaudo D, Grandi G, Telford JL, Soriani M. Pilus
backbone contributes to group B Streptococcus paracellular translocation through epithelial
cells. J Infect Dis. 2008 Sep 15;198(6):890-8. doi: 10.1086/591182

Phares CR, Lynfield R, Farley MM, Mohle-Boetani J, Harrison LH, Petit S, Craig AS,
Schaffner W, Zansky SM, Gershman K, Stefonek KR, Albanese BA, Zell ER, Schuchat A,
Schrag SJ. Epidemiology of invasive group B streptococcal disease in the United States,
1999-2005.; Active Bacterial Core surveillance/Emerging Infections Program Network .
JAMA. 2008 May 7;299(17):2056-65. doi: 10.1001/jama.299.17.2056

Pidwill GR, Rego S, Jenkinson HF, Lamont RJ, Nobbs AH. 2018. Coassociation between
Group B Streptococcus and Candida albicans promotes interactions with vaginal epithelium.
Infect Immun 86:e00669-17. https:// doi.org/10.1128/IAI.00669-17. 20

Pietrocola G, Schubert A, Visai L, Torti M, J Fitzgerald R, Foster TJ, Reinscheid DJ, Speziale
P. FbsA, a fibrinogen-binding protein from Streptococcus agalactiae, mediates platelet
aggregation. Blood. 2005 Feb 1;105(3):1052-9. doi: 10.1182/blood-2004-06-2149. Epub 2004
Sep 21

Pimentel BSA, Martins CA, Mendonça JC, Miranda PS, Sanches GF, Mattos-Guaraldi AL,
Nagao PE. Streptococcus agalactiae infection in cancer patients: a five-year study. Eur j clin
microbiol infect dis. 2016 (6);35(6):927-33. doi: 10.1007/s10096-016-2617-9

Pinaud L, Sansonetti PJ, Phalipon A. Host Cell Targeting by Enteropathogenic Bacteria T3SS
Effectors. Review Trends Microbiol. 2018 Apr;26(4):266-283. doi:
10.1016/j.tim.2018.01.010. Epub 2018 Feb 21

Pizarro-Cerdá J, Cossart P. Bacterial adhesion and entry into host cells. Review Cell. 2006
Feb 24;124(4):715-27. doi: 10.1016/j.cell.2006.02.012.

Plainvert C, Hays C, Touak G, Joubrel-Guyot C, Dmytruk N, Frigo A, Poyart C, Tazi A

Multidrug-Resistant Hypervirulent Group B Streptococcus in Neonatal Invasive Infections,
France, 2007-2019.. Emerg Infect Dis. 2020 Nov;26(11):2721-2724. doi:
10.3201/eid2611.201669

Poyart C, Réglier-Poupet H, Tazi A, Billoët A, Dmytruk N, Bidet P, Bingen E, Raymond J,

Trieu-Cuot P. Invasive group B streptococcal infections in infants, France. Emerg Infect Dis.
2008 Oct;14(10):1647-9. doi: 10.3201/eid1410.080185
 94

Poyart C, Réglier-Poupet H, Tazi A. Invasive Group B Streptococcal Infections in Infants,

France. Emerging Infectious Diseases. 2008;14(10):1647-1649. doi:10.3201/eid1410.080185

Pykało-Gawińska D, Zaręba-Szczudlik J, Gawiński C, Stępień A, Dobrowolska-Redo A,

Malinowska-Polubiec A, Romejko-Wolniewicz E. Gestational weight gain and glycemic
control in GDM patients with positive genital culture. Taiwan J Obstet Gynecol. 2021
Mar;60(2):262-265. doi: 10.1016/j.tjog.2021.01.005

Qadi, M, AbuTaha A, Al-Shehab R, Sulaiman S, Hamayel A, Hussein A, AbuTaha S,

Dawoud A, Hussein F. Prevalence and Risk Factors of Group B Streptococcus Colonization
in Pregnant Women: A Pilot Study in Palestine. Can J Infect Dis Med Microbiol. 2021 Dec
13;2021:8686550. doi: 10.1155/2021/8686550. eCollection 2021

Raabe V, Shane A. Group B Streptococcus (Streptococcus agalactiae). Review. Microbiol

Spectr . 2019 Mar;7(2):10.1128/microbiolspec.GPP3-0007-2018. doi:
10.1128/microbiolspec.GPP3-0007-2018

Raabe VN, Shane AL. Group B Streptococcus (Streptococcus agalactiae). Microbiol Spectr.
2019 Mar;7(2):10.1128/microbiolspec.GPP3-0007-2018. doi: 10.1128/microbiolspec.GPP3-
0007-2018

Ragunathan P, Sridaran D, Weigel A, Shabayek S, Spellerberg B, Ponnuraj K. Metal binding

is critical for the folding and function of laminin binding protein, Lmb of Streptococcus
agalactiae. PLoS One. 2013 Jun 24;8(6):e67517. doi: 10.1371/journal.pone.0067517. Print
2013
Rajagopal, L. Review Future Microbiol 2009 Mar;4(2):201-21. doi:
10.2217/17460913.4.2.201. Understanding the regulation of Group B Streptococcal virulence
factors

Rego S, Heal TJ, Pidwill GR, Till M, Robson A, Lamont RJ, Sessions RB, Jenkinson HF,.
Structural and functional analysis of cell wall-anchored polypeptide adhesin BspA in
Streptococcus agalactiae. J Biol Chem 291:15985–16000. Race PR, Nobbs AH. 2016.
https://doi.org/10.1074/jbc.M116.726562

Rinaudo CD, Rosini R, Galeotti CL, Berti F, Necchi F, Reguzzi V, Ghezzo C, Telford JL,
Grandi G, Maione D. Specific involvement of pilus type 2a in biofilm formation in group B
Streptococcus. PLoS One. 2010 Feb 15;5(2):e9216. doi: 10.1371/journal.pone.0009216

Rocchetti TT , Marconi C, Rall VLM, Borges VTM, Corrente JE, Silva MG. Group B
streptococci colonization in pregnant women: risk factors and evaluation of the vaginal flora.
Arch Gynecol Obstet. 2011 Apr;283(4):717-21. doi: 10.1007/s00404-010-1439-8. Epub 2010
Mar 28
 95

Rosana Y, Ocviyanti D, Halim M, Harlinda FY, Amran R, Akbar W, Billy M, Akhmad SRP.
Urinary Tract Infections among Indonesian Pregnant Women and Its Susceptibility Pattern.
Infect Dis Obstet Gynecol. 2020 Apr 21;2020:9681632. doi: 10.1155/2020/9681632.
eCollection 2020

Rosati E, Fettucciari K, Scaringi L, Cornacchione P, Sabatini R, L. Mezzasoma, R. Rossi,

Marconi P. Cytokine release to group B streptococcus infection in mice. Scand. J.
Immunol.47: 1998.NIZET 14–323

Rosati EPC, Scaringi L, Fettucciari K, Sabatini R, Orefici G, Von Hunolstein C, Modesti A,

Modica A, Minelli F, Marconi P. Group B streptococci persist inside macrophages .
Immunology. 1998 Jan;93(1):86-95. doi: 10.1046/j.1365-2567.1998.00402.x

Rosen GH, Randis TM, Desai PV, Sapra KJ, Ma B, Gajer P, Humphrys MS, Ravel J, Gelber
S, Ratner AJ. Group B Streptococcus and the Vaginal Microbiota. J Infect Dis. 2017 Sep
15;216(6):744-751. doi: 10.1093/infdis/jix395

Rosini R, Rinaudo CD, Soriani M, Lauer P, Mora M, Maione D, Taddei A, Santi I, Ghezzo C,
Brettoni C, Buccato S, Margarit I, Grandi G, Telford JL. Identification of novel genomic
islands coding for antigenic pilus-like structures in Streptococcus agalactiae. Mol Microbiol.
2006 Jul;61(1):126-41. doi: 10.1111/j.1365-2958.2006.05225.x

Rubens CE, Smith S, Hulse M, Chi EY, Van Belle G. Respiratory epithelial cell invasion by
group B streptococci. Infect. Immun. 1992;60:5157–5163. doi: 10.1128/iai.60.12.5157-
5163.1992

Rubio-López V, Valdezate S, Alvarez D, Villalón P, Medina MJ, Salcedo C, Sáez-Nieto JA.

Molecular epidemiology, antimicrobial susceptibilities and resistance mechanisms of
Streptococcus pyogenes isolates resistant to erythromycin and tetracycline in Spain (1994-
2006). BMC Microbiol. 2012. Sep 21;12:215. doi: 10.1186/1471-2180-12-215

Sagar A, Klemm C, Hartjes L, Mauerer S, Van Zandbergen G, Spellerberg B. The β-

hemolysin and intracellular survival of Streptococcus agalactiae in human macrophages.
PLoS One. 2013 Apr 4;8(4):e60160. doi: 10.1371/journal.pone.0060160. Print 2013

Saha S, Ahmed Z, Modak JK, Naziat H, Uddin MA, Islam M, Baqui AH, Darmstadt GL,
Schrag SJ. Group B Streptococcus among Pregnant Women and Newborns in Mirzapur,
Bangladesh: Colonization, Vertical Transmission, and Serotype Distribution. Observational
Study J Clin Microbiol. 2017 Aug;55(8):2406-2412. doi: 10.1128/JCM.00380-17

Said M, Dangor Y, Mbelle N, Madhi SA, Kwatra G, Ismail F. Antimicrobial susceptibility

and serotype distribution of Streptococcus agalactiae rectovaginal colonising isolates from
pregnant women at a tertiary hospital in Pretoria, South Africa: An observational descriptive
 96

study.Observational Study. S Afr Med J. 2020 Aug 31;110(9):869-871. doi:

10.7196/SAMJ.2020.v110i9.14524.

Santillan DA, Rai KK, Santillan MK, Krishnamachari Y, Salem AK, Hunter SK. Efficacy of
polymeric encapsulated C5a peptidase-based group B streptococcus vaccines in a murine
model. Am J Obstet Gynecol. 2011 Sep;205(3):249.e1-8. doi: 10.1016/j.ajog.2011.06.024.
Epub 2011 Jun 15

Santino I, Scazzocchio F, Berlutti F, Cipriani P, Oliva B, Paola F, Del Piano M . Genotype

and phenotype relationship in MLSb resistance in Streptococcus pyogenes and Streptococcus
agalactiae isolated in central Italy. Int J Immunopathol Pharmacol. 2006 Oct-Dec;19(4):889-
95. doi: 10.1177/039463200601900418

Santos GS, Miyazaki NHT, Mattos-Guaraldi AL, Nagao PE Int . The effects of interferon-
gamma and transforming growth factor-beta on adherence and survival of group B
Streptococcus type III strains in ECV304 cells. J Mol Med . 2003 Mar;11(3):401-6

Santos NFB, Ferreira RCC, Taddei CR. Streptococcus agalactiae in pregnant women in
Brazil: prevalence, serotypes, and antibiotic resistance Cilicia S do Nascimento Review . Braz
J Microbiol. 2019 Oct;50(4):943-952. doi: 10.1007/s42770-019-00129-8. Epub 2019 Aug 20

Santos SD, Carvalho AL, Caldeira MV, Duarte CB. Regulation of AMPA receptors and
synaptic plasticity. Review Neuroscience. 2009 Jan 12;158(1):105-25. doi:
10.1016/j.neuroscience.2008.02.037. Epub 2008 Feb 29

Schindler Y, Madar-Shapiro L, Validation JA, Maor Y, Rahav G, Nissan I, Group B

Streptococcus serotypes associated with different clinical syndromes: Asymptomatic carriage
in pregnant women, intrauterine fetal death, and early onset disease in the newborn. PLoS
One. 2020; 15(12). Published online 2020 Dec 31. doi: 10.1371/journal.pone.0244450.
PMCID: PMC7774942

Schindler Y, Rahav G, Nissan I, Treygerman O, Prajgrod G, Attia BZ, Raz R, Valenci GZ,
Tekes-Manova D and Maor Y. Group B streptococcus virulence factors associated with
different clinical syndromes: Asymptomatic carriage in pregnant women and early-onset
disease in the newborn. Front. Microbiol (2023). 14:1093288. doi:
10.3389/fmicb.2023.1093288

Schrag S, Gorwitz R, Fultz-Butts K, Schuchant A. Prevention of perinatal streptococcal

disease. Revised guidelines for CDC, MMWR Recomm Rep. 2002; 51 (RR11), 1-22.

Schubert A, Reinscheid J, Gottschalk B, Eikmanns BJ, Chhatwal GS. Identification and

molecular analysis of PcsB, a protein required for cell wall separation of group B
streptococcus. Comparative Study J Bacteriol. 2001 Feb;183(4):1175-83. doi:
10.1128/JB.183.4.1175-1183.2001
 97

Schuchat A. Group B streptococcus Review Lancet. 1999 Jan 2;353(9146):51-6. Affiliations

expand. PMID: 10023965 DOI: 10.1016/S0140-6736(98)07128-1.

Schumann R, Semin RJL. Neurol. 1999;19 Suppl 1:17-24

Seale AC, Madrid L, Kohli-Lynch M, Edmond KM, Lawn JE, Heath PT, Madhi SA, Baker
CJ , Bartlett L, Cutland C, Gravett MG, Margaret Ip, Le Doare K, Rubens CE, Saha SK,
Meulen AST, Vekemans J, Schrag S. Infant Group B Streptococcal Disease Incidence and
Serotypes Worldwide: Systematic Review and Meta-analyses. Infant GBS Disease
Investigator Group

Shabayek S, Spellerberg B. Group B Streptococcal Colonization, Molecular Characteristics,

and Epidemiology. Review. Front Microbiol. 2018 Mar 14;9:437. doi:
10.3389/fmicb.2018.00437. eCollection 2018

Shah VS, Ohlsson A. Intrapartum antibiotics for known maternal Group B streptococcal
colonization. Review Cochrane Database Syst Rev. 2014 Jun 10;(6) : CD007467. doi:
10.1002/14651858.CD007467.pub4
Shang F, Wang H, Xue T. Anti-Biofilm Effect of Tea Saponin on a Streptococcus agalactiae
Strain Isolated from Bovine Mastitis. Animals (Basel). 2020 Sep 22;10(9):1713. doi:
10.3390/ani10091713

Sharma P, Hem Lata, Deepak Kumar Arya, Arun Kumar Kashyap, Hemant Kumar,
Meenakshi Dua, Arif Ali, Atul Kumar Johri . J Biol Chem. 2013 Feb 8;288(6):4023-34. doi:
10.1074/jbc.M112.425728. Epub 2012 Dec 3. Role of pilus proteins in adherence and
invasion of Streptococcus agalactiae to the lung and cervical epithelial cells

Shet A, Ferrieri P. Neonatal & maternal group B streptococcal infections: A comprehensive

review. Indian J. Med. Res. 2004;120:141–150

Simoni S , Vincenzi C, Brenciani A, Morroni G, Bagnarelli P, Giovanetti E, Varaldo PE,

Mingoia M. Molecular Characterization of Italian Isolates of Fluoroquinolone-Resistant
Streptococcus agalactiae and Relationships with Chloramphenicol Resistance.

Six A, Firon A, Plainvert C, Caplain C, Bouaboud A, Touak G, Dmytruk N, Longo M,

Letourneur F, Fouet A, Trieu-Cuot P, Poyart C. Molecular Characterization of Nonhemolytic
and Nonpigmented Group B Streptococci Responsible for Human Invasive Infections. J Clin
Microbiol. 2016 Jan;54(1):75-82

Six A, Firon A, Plainvert C, Caplain C, Bouaboud A, Touak G, Dmytruk N, Longo M,

Letourneur F, Fouet A, Trieu-Cuot P, Poyart C. Molecular Characterization of Nonhemolytic
and Nonpigmented Group B Streptococci Responsible for Human Invasive Infections. J Clin
Microbiol. 2016 Jan;54(1):75-82. doi: 10.1128/JCM.02177-15
 98

Slotved HC, Kong F, Lambertsen L, Sauer S, Gilbert GL. Serotype IX, a Proposed New
Streptococcus agalactiae Serotype. J Clin Microbiol. 2007 Sep;45(9):2929-36. doi:
10.1128/JCM.00117-07. Epub 2007 Jul 18

Soares GCT, Alviano DS, Santos GS, Alviano CS, Mattos-Guaraldi AL, Nagao PE .
Prevalence of Group B Streptococcus serotypes III and V in pregnant women of Rio de
Janeiro, Brazil. J Microbiol. 2014 Jan 15;44(3):869-72. doi: 10.1590/s1517-
83822013000300032. eCollection 2013

Soriani & Telford M, John L. Relevance of pili in pathogenic streptococci pathogenesis and
vaccine development. Review Future Microbiol. 2010 May;5(5):735-47. doi:
10.2217/fmb.10.37

Souza SL , Santos Michelle HB, Da Costa AFE, Ferreira BJ, Lannes PS, Santos GS, Mattos-
Guaraldi AL, Nagao PE. A phosphoramidon-sensitive metalloprotease induces apoptosis of
human endothelial cells by Group B Streptococcus. Antonie Van Leeuwenhoek. 2013
Dec;104(6):1125-33. doi: 10.1007/s10482-013-0034-y. Epub 2013 Sep 20
Spellerberg B, Martin S, Franken C, Berner R, Lütticken R. Identification of a novel insertion
sequence element in Streptococcus agalactiae. Gene. 2000 Jan 4;241(1):51-6. doi:
10.1016/s0378-1119(99)00469-2

Takahashi S, Aoyagi Y, Adderson EE, Okuwaki Y, Bohnsack JF. Capsular sialic acid limits
C5a production on type III group B streptococci. Infect Immun. 1999 Apr;67(4):1866-70

Tamura GS, Kuypers JM, Smith S, Raff H, Rubens CE. Adherence of group B streptococci to
cultured epithelial cells: roles of environmental factors and bacterial surface components.
Infect Immun. 1994 Jun;62(6):2450-8. doi: 10.1128/iai.62.6.2450-2458.1994

Tapiainen T, Koivusaari P, Brinkac L, Lorenzi HA, Salo J, Renko M, Pruikkonen H, Pokka T,

Li W, Nelson K , Pirttilä AM, Tejesvi MV. Impact of intrapartum and postnatal antibiotics on
the gut microbiome and emergence of antimicrobial resistance in infants Sci Rep. 2019 Jul
23;9(1):10635. doi: 10.1038/s41598-019-46964-5

Tazi A, Plainvert C, Anselem O, Ballon M, Marcou V, Seco A, El Alaoui F, Joubrel C, El

Helali N, Falloukh E, Frigo A, Raymond J, Trieu-Cuot P, Branger C, Monnier AL, Azria E,
Ance PY, Jarreau PH, Mandelbrot L, Goffinet F, Poyart C. Risk Factors for Infant
Colonization by Hypervirulent CC17 Group B Streptococcus: Toward the Understanding of
Late-onset Disease .Observational Study Clin Infect Dis. 2019 Oct 30;69(10):1740-1748. doi:
10.1093/cid/ciz033

Tazi A, Bellais S, Tardieux I, Dramsi S, Trieu-Cuot P, Poyart C. Group B Streptococcus

surface proteins as major determinants for meningeal tropism. Review Curr Opin Microbiol.
2012 Feb;15(1):44-9. doi: 10.1016/j.mib.2011.12.002. Epub 2011 Dec 27
 99

Teatero S, Neemuchwala A, Yang K, Gomes J, Athey TBT, Martin I, Demczuk W, McGeer

A, Fittipaldi N. Genetic evidence for a novel variant of the pilus island 1 backbone protein in
group B Streptococcus. J Med Microbiol . 2017 Oct;66(10):1409-1415. doi:
10.1099/jmm.0.000588. Epub 2017 Sep 19

Teixeira LM , Botelho ACN, Oliveira JG, Damasco AP, Santos KTB, Ferreira AFM, Rocha
GT, Marinho PS, Rita Bornia BG, Pinto TCA, Américo MA, Fracalanzza SEL. Streptococcus
agalactiae carriage among pregnant women living in Rio de Janeiro, Brazil, over a period of
eight years. Clinical Trial PLoS One. 2018 May 11;13(5):e0196925. doi:
10.1371/journal.pone.0196925. eCollection 2018

Telford JL, Barocchi MA, Margarit I, Rappuoli R, Grandi G. Pili in gram-positive pathogens.
Review Nat Rev Microbiol . 2006 Jul;4(7):509-19. doi: 10.1038/nrmicro1443.

Tenenbaum T, Spellerberg B, Adam R, Vogel M, Kim KS, Schroten H. Streptococcus

agalactiae invasion of human brain microvascular endothelial cells is promoted by the
laminin-binding protein Lmb. Microbes Infect. 2007 . May;9(6):714-20. doi:
10.1016/j.micinf.2007.02.015. Epub 2007 Feb 24

Tettelin H, Masignani V, Cieslewicz M J, Donati C, Medini D, Ward NL, Angiuoli SV,

Crabtree J, Jones AL, Durkin AS, Deboy RT, Davidsen TM, Mora M, Scarselli M, Margarit y
Ros I, Peterson JD, Hauser CR, Sundaram JP, Nelson WC, Madupu R, Brinkac LM, Dodson
RJ, Rosovitz MJ, Sullivan SA, Daugherty SC, Haft DH, Selengut J, Gwinn ML, Zhou L,
Zafar N, Khouri H, Radune D, Dimitrov G, Watkins K, O'Connor KJB, Smith S, Utterback
TR, White O, Rubens CE, Grandi G, Madoff LC, Kasper DL, Telford J L, Wessels MR,
Rappuoli R, Fraser CM . Genome analysis of multiple pathogenic isolates of Streptococcus
agalactiae: implications for the microbial "pan-genome" . Proc Natl Acad Sci U S A. 2005
Sep 27;102(39):13950-5. doi: 10.1073/pnas.0506758102. Epub 2005 Sep 19

Tevdorashvili G, Tevdorashvili D, Andghuladze M, Tevdorashvili M. Prevention and

treatment strategy in pregnant women with group B streptococcal infection. Georgian Med
News. 2015 Apr;(241):15-23

Thomas L, Cook L. Two-Component Signal Transduction Systems in the Human Pathogen

Streptococcus agalactiae. Review Infect Immun. 2020 Jun 22;88(7):e00931-19. doi:
10.1128/IAI.00931-19. Print 2020 Jun 22

Tulyaprawat O, Pharkjaksu S, Shrestha RK, Ngamskulrungroj P. Emergence of Multi-Drug

Resistance and Its Association With Uncommon Serotypes of Streptococcus agalactiae
Isolated From Non-neonatal Patients in Thailand. Front Microbiol. 2021 Sep 8;12:719353.
doi: 10.3389/fmicb.2021.719353
 100

Tulyaprawat SP, Shrestha RK, Ngamskulrungroj P. Emergence of Multi-Drug Resistance and

Its Association With Uncommon Serotypes of Streptococcus agalactiae Isolated From Non-
neonatal Patients in Thailand Orawan.Front Microbiol. 2021 Sep 8;12:719353. doi:
10.3389/fmicb.2021.719353. eCollection 2021

Tyrrell GJ, Senzilet LD, Spika JS. Invasive disease due to group B streptococcal infection in
adults: results from a Canadian, population-based, active laboratory surveillance study-1996.
Sentinel Health Unit Surveillance System Site Coordinators. J Infect Dis.2000; 82 (1), 168-
73.

Uchiyama S, Sun J, Fukahori K, Ando N, Wu M, Schwarz F, Siddiqui SS, Varki A, Marth JD,
Nizet V. Dual actions of group B Streptococcus capsular sialic acid provide resistance to
platelet-mediated antimicrobial killing. Proc Natl Acad Sci U S A (2019) 116(15):7465–7470

Ushino T, Jin W, Wachino JI, Arakawa Y, Kimura K. Daptomycin Susceptibility of Group B

Streptococcus. Jpn J Infect Dis. 2021 May 24;74(3):233-235. doi:
10.7883/yoken.JJID.2020.371. Epub 2020 Sep 30

Valentin-Weigand P, Chhatwal GS. Correlation of epithelial cell invasiveness of group B

streptococci with clinical source of isolation. Microb. Pathog. 1995;19:83–91. doi:
10.1006/mpat.1995.0048

Van der Mee-Marquet N, Jouannet C, Domelier AS, Arnault L, Lartigue MF, Quentin R.
Genetic diversity of Streptococcus agalactiae strains and density of vaginal carriage. J Med
Microbiol. 2009 Feb;58(Pt 2):169-173. doi: 10.1099/jmm.0.005827-0

Van Dyke MK, Phares CR, Lynfield R. Evaluation of universal antenatal screening for group
B streptococcus. N Engl J Med. (2009) (360)[25],2626-36

Ventura AM, Rodrigues JLN, Feitosa, FEDL, Junior, CAD, Almeida, PC. Colonização por
Streptococcus do Grupo B em Gestantes com Trabalho de Parto Prematuro e/ou Ruptura
Prematura das Membranas. Arq Med 25(2):61–66, 2011

Verani JR, McGee L, Schrag SJ . Practice Guideline MMWR Recomm Rep. 2010 Nov
19;59(RR-10):1-36. Prevention of perinatal group B streptococcal disease--revised guidelines
from CDC. 2010. Division of Bacterial Diseases, National Center for Immunization and
Respiratory Diseases. Centers for Disease Control and Prevention (CDC)

Vigliarolo L, Arias B, Suárez M, Haute EV, Kovacec V, Lopardo H, Bonofiglio L, Mollerach

M. Argentinian multicenter study on urinary tract infections due to Streptococcus agalactiae
in adult patients. Observational Study J Infect Dev Ctries. 2019 Jan 31;13(1):77-82. doi:
10.3855/jidc.10503
 101

Vornhagen J, Quach P, Boldenow E, Merillat S, Whidbey C, Ngo LY, Waldorf AK,

Rajagopal L. Bacterial. Hyaluronidase Promotes Ascending GBS Infection and Preterm Birth.
mBio 2016, 7, e00781-16.

Vornhagen J, Waldorf KMA, Rajagopal L. Perinatal Group B Streptococcal Infections:

Virulence Factors, Immunity, and Prevention Strategies. Review Trends Microbiol. 2017
Nov;25(11):919-931. doi: 10.1016/j.tim.2017.05.013. Epub 2017 Jun 17

Xiao-Yan Y , Liu H , Liu J , Song Y SunY. Pathogenic mechanism, detection methods and
clinical significance of group B Streptococcus. FUTURE MICROBIOLOGY VOL. 16, NO. 9
| REVIEW normal. Published Online: 8 Jun 2021 https://doi.org/10.2217/fmb-2020-0189

Yadeta TA, Worku A, Egata G, Seyoum B, Marami D, Berhane Y. Vertical transmission of

group B Streptococcus and associated factors among pregnant women: a cross-sectional
study, Eastern Ethiopia. Infect Drug Resist. 2018 Mar 13;11:397-404. doi:
10.2147/IDR.S150029

Yanagawa R, Otsuki K. Some properties of the pili of Corynebacterium renale. J Bacteriol.

1970 Mar;101(3):1063-9. doi: 10.1128/jb.101.3.1063-1069.1970

Yanagisawa N, Ueno E, Oguchi K. Morphological abnormalities of erythrocyte membrane in

the hereditary neurological disease with chorea, areflexia and acanthocytosis. J Neurol Sci.
1982 Oct;56(1):89-97. doi: 10.1016/0022-510x(82)90063-6

Zheng J, Chen Z, Xu Z, Chen J, Xu G, Sun X, Yu Z, Qu D. In vitro evaluation of the

antibacterial activities of radezolid and linezolid for Streptococcus agalactiae. Microb Pathog.
2020 Feb;139:103866. doi: 10.1016/j.micpath.2019.103866. Epub 2019 Nov 9
 102

ANEXO A - Ficha neonatal de coleta hospitalar

Dados Gerais de Coleta de Swabs neonatais (N° do Paciente:___________)

1. Data da Coleta:___/_____/______ 2. Horário da coleta: ___:___

3. Nome da mãe:

4. Tipo de Gestação:1.Única 2. Gemelar(dois) 3.Gemelar(três) 4.Gemelar (quarto)

5. Tipo de Parto: 1.Cesária 2. Normal

6. Intercorrência no parto: 1 Sim 2 Não (Qual? )

Dados da Internação

8. Data da Internação: ___/____/_______

9. Setor para onde foi encaminhada no momento da admissão/internação:

1. Enfermaria/quarto 2. Pré-parto 3. PPP 4. Sala de parto
5. Centro cirúrgico obstétrico 6. UTI 9. Sem informação

Antecedentes Clínico- Obstétricos

10. Número de gestações anteriores:

Dados do Neonato

11. N° de prontuário do Recém Nato:

12. Nome do Recém Nato:

13. Sexo 1. Masculino 2.Feminino

14. Indicação de internação em UTI neonatal: 0. Não 1. Sim |___|

15. Internação em UTI neonatal: 0. Não 1. Sim |___|

16. Uso de antibiótico

1. Não usou
|___|
2. Inicio até 48h de vida (Sepse precoce)
3. Início após 48h de vida (Sepse tardia)

Quais?_____________________________________________________________

17. Uso de aleitamento materno exclusivo: 0. Não 1. Sim |___|

 103

18. Outros alimentos que recebeu durante a internação (Permite mais de 1 opção)
1. Água
2. Soro glicosado/ Glicose via oral (chuca com açúcar)
3. Leite humano ordenhado
4. Leite artificial
5. Nutrição Parenteral (NPT)

Quais? ________________________________________________________

Observações:___________________________________________________________
_____________________________________________________________________
 104

ANEXO B - Ficha gestacional de coleta hospitalar

Dados Gerais de Coleta de Swabs Gestantes(N° do Paciente:___________)

1. Data da Coleta:___/_____/______ 2. Horário da coleta: ___:___
3. Nome da mãe:
4. N° do Prontuário da mãe:
5. Tipo de Gestação:1.Única 2. Gemelar(dois) 3.Gemelar(três) 4.Gemelar (quarto)
6. Tipo de Parto: 1.Cesária 2. Normal
7. Intercorrência no parto: 1 Sim 2 Não (Qual? )
Dados da Internação
8. Data da Internação: ___/____/_______
9. Setor para onde foi encaminhada no momento da admissão/internação:
1. Enfermaria/quarto 2. Pré-parto 3. PPP 4. Sala de parto
5. Centro cirúrgico obstétrico 6. UTI 9. Sem informação
Antecedentes Clínico- Obstétricos
10. Número de gestações anteriores:
11. Doença cardíaca 0. Não 1. Sim |___|
12. Hipertensão arterial com tratamento continuado 0. Não 1. Sim |___|
13. Anemia grave ou outra hemoglobinopatia 0. Não 1. Sim |___|
14. Asma 0. Não 1. Sim |___|
15. Lupus ou esclerodermia 0. Não 1. Sim |___|
16. Hipertireodismo 0. Não 1. Sim |___|
17. Diabetes não gestacional 0. Não 1. Sim |___|
18. Doença renal crônica 0. Não 1. Sim |___|
19. Convulsões/epilepsia 0. Não 1. Sim |___|
20. AVC 0. Não 1. Sim |___|
21. Doença Hepática Crônica 0. Não 1. Sim |___|
22. Doenças Psiquiátricas 0. Não 1. Sim |___|
23. Quais? ______________________________________________________________
 105

Intercorrência clínica ou obstétrica na gestação atual (antes da internação):

24. Sífilis 0. Não 1. Sim |___|
25. Descolamento prematuro de placenta (DPP) 0. Não 1. Sim |___|
26. Infecção Urinária 0. Não 1. Sim |___|
27. Diabetes gestacional 0. Não 1. Sim |___|
28. Sofrimento Fetal 0. Não 1. Sim |___|
29. Eclâmpsia/Convulsões 0. Não 1. Sim |___|
30. Infecção por HIV 0. Não 1. Sim |___|
31. Exame de cultura para Streptococo na vagina e/ou ânus positivo 0. Não 1. Sim |___|
Dados do Recém nato
32. N° de prontuário do Recém Nato:
33. Nome do Recém Nato:
34. Sexo 1. Masculino 2.Feminino 3. Indefinido
35. Intercorrências ao Nascimento 0. Não 1. Sim |___|
Quais? ____________________________________________________________________
36. Indicação de internação em UTI neonatal: 0. Não 1. Sim |___|
37. Internação em UTI neonatal: 0. Não 1. Sim |___|
38. Uso de antibiótico
1. Não usou
|___|
2. Inicio até 48h de vida (Sepse precoce)
3. Início após 48h de vida (Sepse tardia)
Quais?_____________________________________________________________
39. Uso de aleitamento materno exclusivo: 0. Não 1. Sim |___|
40. Outros alimentos que recebeu durante a internação (Permite mais de 1 opção)
1. Água
2. Soro glicosado/ Glicose via oral (chuca com açúcar)
3. Leite humano ordenhado
4. Leite artificial
5. Nutrição Parenteral (NPT)
41. Tipo de saída do hospital onde ocorreu o nascimento:
0. Continua internado aos 28 dias de vida |___|
1. Alta 2. Óbito 3. Transferência para outro hospital
 106

42. Causas de óbito registradas no prontuário: (Permite mais de 1 opção)

1. Prematuridade extrema (< 1000g)
2. Infecção
3. Sífilis congênita
|___|
4. Malformação congênita
5. Problemas respiratórios (DMH, pneumotórax, aspiração de mecônio,
pneumonia, hipertensão pulmonar
6. Outros
Quais? ________________________________________________________
Observações:___________________________________________________________
_____________________________________________________________________
 107

ANEXO C - Publicação em revista online

108
109