Os seus níveis variam consoante o sexo e a idade;
Os valores mais elevados são observados na infância
devido à isoenzima óssea que está presente nos ossos em crescimento, e durante a gravidez, devido à isoenzima placentária. Fosfatase Alcalina Esta enzima tem como principal função remover os grupos fosfatos presentes nas extremidades 5’ das moléculas de DNA, sendo por isso uma proteína muito usada em laboratório.
Quando estes grupos fosfatos são removidos da extremidade 5’
das moléculas de DNA estas ficam impedidas de se ligarem a outras moléculas de DNA. Fosfatase Alcalina Outra das utilizações da Fosfatase Alcalina é em termos da marcação radioactiva.
A remoção dos grupos fosfatos deixa um “espaço livre”,
esse “espaço” pode ser posteriormente preenchido com grupos radioactivos, o que permite a identificação da molécula mais tarde.
Para se conseguir identificar um anticorpo específico
junta-se-lhe a fosfatase alcalina, numa técnica de imunodetecção. Fosfatase Alcalina A fosfatase alcalina é ainda um bom indicador de problemas a nível hepático, uma vez que é produzida por vários tecidos e órgãos. P-nitrofenilfosfato
substrato da fosfatase alcalina;
Detecta a presença desta enzima;
Incolor; Reacção
O p-nitrofenilfosfatase de sódio é hidrolisado
especificamente pela fosfatase alcalina, libertando o p-nitrofenol e um grupo fosfato P-nitrofenol
Pode ser detectado por absorvância a 405 nm
(coloração amarela);
A sua coloração é proporcional à actividade da
fosfatase alcalina. Fosfatase Alcalina Determinação da cinética enzimática;
Cálculo da fosfatase alcalina em U.I.;
Determinação da Velocidade máxima (Vmáx);
Constante de Michaelis – Mentem (Km).
Protocolo
1. Preparação de um extracto enzimático da mucosa
intestinal de rato;
2. Determinação da actividade da Fosfatase Alcalina a
pH 8,5;
3. Efeito da Concentração de substrato na actividade