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Fosfatase Alcalina

 Enzima;

 Produzida, principalmente, por ossos, fígado, placenta e


mucosa intestinal;

 A sua concentração aumenta com o aumento da


actividade das células, seja na reparação de fracturas
ou no desenvolvimento de cancros, por exemplo.

 Existem vários tipos de fosfatases alcalinas;


Fosfatase Alcalina
 Permite, assim, detectar e monitorizar doenças ósseas,
hepáticas, etc;

 Os seus níveis variam consoante o sexo e a idade;

 Os valores mais elevados são observados na infância


devido à isoenzima óssea que está presente nos ossos em
crescimento, e durante a gravidez, devido à isoenzima
placentária.
Fosfatase Alcalina
Esta enzima tem como principal função remover os grupos fosfatos
presentes nas extremidades 5’ das moléculas de DNA, sendo por isso
uma proteína muito usada em laboratório.

Quando estes grupos fosfatos são removidos da extremidade 5’


das moléculas de DNA estas ficam impedidas de se ligarem a
outras moléculas de DNA.
Fosfatase Alcalina
Outra das utilizações da Fosfatase Alcalina é em termos
da marcação radioactiva.

A remoção dos grupos fosfatos deixa um “espaço livre”,


esse “espaço” pode ser posteriormente preenchido com
grupos radioactivos, o que permite a identificação da
molécula mais tarde.

Para se conseguir identificar um anticorpo específico


junta-se-lhe a fosfatase alcalina, numa técnica de
imunodetecção.
Fosfatase Alcalina
A fosfatase alcalina é ainda um bom indicador de
problemas a nível hepático, uma vez que é produzida
por vários tecidos e órgãos.
P-nitrofenilfosfato

substrato da fosfatase alcalina;

 Detecta a presença desta enzima;

Incolor;
Reacção

O p-nitrofenilfosfatase de sódio é hidrolisado


especificamente pela fosfatase alcalina, libertando o
p-nitrofenol e um grupo fosfato
P-nitrofenol

 Pode ser detectado por absorvância a 405 nm


(coloração amarela);

 A sua coloração é proporcional à actividade da


fosfatase alcalina.
Fosfatase Alcalina
 Determinação da cinética enzimática;

 Cálculo da fosfatase alcalina em U.I.;

 Determinação da Velocidade máxima (Vmáx);

 Constante de Michaelis – Mentem (Km).


Protocolo

1. Preparação de um extracto enzimático da mucosa


intestinal de rato;

2. Determinação da actividade da Fosfatase Alcalina a


pH 8,5;

3. Efeito da Concentração de substrato na actividade


enzimática.

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