Bios Segura Nca

FUNASA
VIGILNCIA EPIDEMIOLGICA
Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia
Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia
Braslia, outubro de 2001
2001
Edio original em ingls: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories editado pelo CDC - Centro de Controle e Preveno de Doenas / Estados Unidos e pelo Instituto Nacional de Sade / Estados Unidos - 4 edio Maio de 1999 - HHS Publicao N (CDC) 93-8395 permitida a reproduo parcial ou total desta obra, desde que citada a fonte. Reviso Tcnica da Traduo: Ncleo de Biossegurana/NuBio Vice-Presidncia de Tecnologia Fundao Oswaldo Cruz Endereo: Av. Brasil, 4036 - 7 andar - sala 716 Telefone: (21) 590-9122 R-257/258, Fax: (21) 590-9122 Cep: 21 040-961, Rio de Janeiro Distribuio e informao: Coordenao Geral de Laboratrios de Sade Pblica Centro Nacional de Epidemiologia Fundao Nacional de Sade Setor de Autarquias Sul Quadra 4, bloco N, 6 andar, sala 619 Telefones: (061) 314.65.50/6556 70058-902 - Braslia DF Impresso no Brasil / Printed in Brazil
FICHA CATALOGRFICA Biossegurana em laboratrios biomdicos e de microbiologia / editado por Jonathan Y. Richmond, Robert W. Mckinney; organizado por Ana Rosa dos Santos, Maria Adelaide Millington, Mrio Cesar Althoff. - Braslia : Ministrio da Sade : Fundao Nacional de Sade, 2000. 290 p. il; 21,5x14 cm Traduo de: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 1. Laboratrios de sade pblica. I. Richmond, Jonathan Y. II. Mckinney, Robert W. III. Santos, Ana Rosa. IV. Millington, Maria Adelaide. V. Althoff, Mrio. VI. Ministrio da Sade. VII. Fundao Nacional de Sade.
APRESENTAO
O imprevisvel e diversificado comportamento das doenas infecciosas emergentes e reemergentes tem acarretado a discusso das condies de biossegurana nas instituies de ensino, pesquisa, desenvolvimento tecnolgico e de prestao de servios. A despeito do avano tecnolgico, o profissional de sade est freqentemente exposto a riscos biolgicos e de produtos qumicos, cujo enfrentamento est consubstanciado na adequao das instalaes do ambiente de trabalho e na capacitao tcnica desses profissionais. O manejo e a avaliao de riscos so fundamentais para a definio de critrios e de aes, e visam minimizar os riscos que podem comprometer a sade do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos - Biossegurana. A Biossegurana constitui uma rea de conhecimento relativamente nova, regulada em vrios pases no mundo por um conjunto de leis, procedimentos ou diretrizes especficas. No Brasil, a legislao de Biossegurana foi criada em 1995 e, apesar da grande incidncia de doenas ocupacionais em profissionais de sade, engloba apenas a tecnologia de engenharia gentica, estabelecendo os requisitos para o manejo de organismos geneticament modificados. A segurana dos laboratrios e dos mtodos de trabalho transcende aos aspectos ticos implcitos nas pesquisas com manipulao gentica. Medidas de biossegurana especficas devem ser adotadas por laboratrios e aliados a um amplo plano de educao baseado nas normas nacionais e internacionais quanto ao transporte, conservao e manipulao de microorganismos patognicos. Ao apresentar este livro, traduo autorizada do original em ingls Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - 4 Edition CDC-INH, 1999, esperamos atender s necessidades de conhecimentos bsicos de biossegurana laboratorial, dos profissionais participantes do Programa Nacional de Capacitao em Biossegurana Laboratorial, que est sendo desenvolvido pelo Centro Nacional de Epidemiologia da Fundao Nacional de Sade - CENEPI/FUNASA, e constituir um roteiro atualizado de condutas gerais de segurana para os profissionais que atuam na Rede Nacional de Laboratrios de Sade Pblica. Braslia/DF, Agosto de 2000
JARBAS BARBOSA DA SILVA JUNIOR Diretor do CENEPI / FUNASA
Organizado por: Coordenao Nacional de Laboratrios de Sade Pblica Centro Nacional de Epidemiologia Fundao Nacional de Sade Equipe Tcnica:Ana Rosa dos Santos Maria Adelaide Millington (Coordenadora) Mrio Cesar Althoff
Reviso Tcnica da Traduo: Ncleo de Biossegurana/NuBio Vice-Presidncia de Tecnologia Fundao Oswaldo Cruz Equipe Tcnica: Bernardo Elias Corra Soares Francelina Helena Alvarenga Lima e Silva Leila Macedo Oda (Coordenadora) Sheila Sotelino da Rocha Telma Abdalla de Oliveira Cardoso Traduo de: Denise Bittar
DEDICATRIA Esta quarta edio de Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e Microbiolgicos dedicada vida e realizaes de John H. Richardson, D.V.M, M.P.H. Dr. Richardson foi o pioneiro e incessante defensor da segurana para educao biolgica. Ele foi o co-editor das duas primeiras edies da BLBM, cujas normas so agora aceitas como o padro ouro internacional para a conduo segura de uma pesquisa microbiolgica. Ele adaptou os programas de quarentena de animais importados para os Estados Unidos e o de manejo de organismos biolgicos perigosos em laboratrios de pesquisas. Ele foi scio-presidente e ex-presidente da Associao Americana de Segurana Biolgica (American Biological Safety Association) e auxiliou no desenvolvimento do programa de qualificao dos profissionais da rea de segurana biolgica. Aps uma longa e ilustre carreira no Servio de Sade Pblica (Public Health Service), ele atuou como Diretor de Segurana do Meio Ambiente e na Secretaria de Sade da Universidade de Emory antes de tornar-se um renomado Consultor de Biossegurana. Talvez, o aspecto mais importante, por ter sido um cavalheiro e defensor da sade pblica, os muitos amigos e associados que tiveram o privilgio de conhec-lo e trabalhar ao seu lado sentiro muito a sua falta.
Editores: Jonathan Y. Richmond, Ph.D. Diretor do Escritrio de Sade e Segurana Servio de Sade Pblica Centros de Preveno e Controle da Doena 1600 Clifton Road N.E. Atlanta, Georgia 30333
Robert W. McKinney, Ph. D. Diretor da Diviso de Segurana Servio de Sade Pblica Institutos Nacionais de Sade Building 31, Room 1C02 Bethesda, Maryland 20892
EDITORES CONVIDADOS: Centros para Preveno e Controle da Doena Robert B. Craveb, M.D.
Chefe do Departamento de Epidemiologia Diviso de Doena Provocada por Arbovrus Centro Nacional de Doenas Infecciosas Chefe da Diviso de Biologia e Diagnsticos Diviso de Doenas Parasitrias Centro Nacional de Doenas Infecciosas
Mark L. Eberhard, Ph.D.
Thomas Folks, Ph. D.
Chefe da Diviso de HIV e Retrovirologia Diviso de AIDS, DST e Laboratrio de Pesquisa. Centro Nacional de Doenas Infecciosas. Consultor Senior do Laboratrio da Diviso de Bacteriologia e Doenas Micticas. Centro Nacional de Doenas Infecciosas. Chefe do Laboratrio de Segurana Secretaria da Sade e Segurana
Bradford Kay, Dr.P.H.
Richard C. Knudsen, Ph.D.
Brian W. J. Mahy, Sc.D, Ph.D. Diretor da Diviso de Doenas Virais e Rickettsiais. Centro Nacional de Doenas Infecciosas.
C.J. Peters, M.D.
Chefe da Diviso de Patgenos Especiais Centro Nacional de Doenas Infecciosas
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Margaret A.Tipple, M.D.
Chefe do Programa de Atividades Externas Secretaria da Sade e Segurana
Instituto Nacional de Sade John Bennett, M.D.

Chefe da Seo de Micologia do Instituto
Nacional de Alergias e Doenas Infecciosas David Hackstadt, Ph.D Microbiologista do Rocky Mountain Laboratory.
Chefe da Diviso de Segurana e Sade Ocupacional
Deborah E. Wilson, Dr.P.H.
Departamento de Segurana. Editores individuais convidados Jonathan Crane, A.I.A Arquiteto Atlanta, GA
Diretor do Centro de Pesquisa Regional de Primatas de Tulane Centro Mdico da Universidade de Tulane
Peter J. Gerone, Sc.D
Convington, Louisiana. Thomas Hamm, D.V.M, Ph.D Consultor Cary, NC Debra L. Hunt, Dr. P.H. Diretor da Segurana Biolgica e Controle de Infeces. Centro Mdico da Universidade de Duke Durham, North Carolina.
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Peter Jahrling, Ph.D.
Cientista Senior de Pesquisa Diviso de Avaliao da Doena USAMRIID Frederick, Maryland. Chefe do Departamento de Cincias Moleculares. Glaxo Welcome, Inc. Research Triangle Park, NC.
Thomas Kost, Ph.D.
Editor tcnico Marie J. Murray Editor-Escritor Atlanta, GA
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CONTEDO
SEO I Introduo .............................................................................. SEO II Princpios de Biossegurana ..................................................
01 08
SEO III Nveis de Biossegurana Laboratorial ..................................... 19 Tabela 1. Resumo dos Nveis de Biossegurana Recomendados para Agentes Infecciosos .................................................... 59 SEO IV Critrios para os Nveis de Biossegurana para Animais Vertebrados ................................................................ 60 Tabela 1. Resumo dos Nveis de Biossegurana Recomendados para as Atividades nas quais Animais Vertebrados Invertebrados`Naturalmente ou Experimentalmente so Utilizados ................................................................. 86 SEO V Avaliao dos Riscos ............................................................. SEO VI Nveis de Biossegurana Recomendados para Agentes Infecciosos e Animais Infectados ........................................... SEO VII Relao dos Agentes ............................................................. Seo VII-A: Agentes Bacterianos ......................................... Seo VII-B: Agentes Fngicos ............................................. Seo VII-C: Agentes Parasitrios ......................................... Seo VII-D: Prions ................................................................ Seo VII-E: Agentes Ricketisiais .......................................... Seo VII-F: Agentes Virais (no incluindo o arbovrus) .......... Seo VII-G: Arbovrus e Vrus Zoonticos Relacionados ....... v
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96
100 100 133 142 150 165 171 205
Arbovrus Designados para o Nvel de Biossegurana 2 ....... 205 Tabela 1. Arbovrus e Arenavrus Designados para o Nvel de Biossegurana 2. ................................................... 208 Tabela 2. Cepas de Vacina de Vrus do NB-3/4 que Podem Ser Manipulados em um Nvel de Biossegurana 2. Arbovrus e Arenavrus Designados para o Nvel de Biossegurana 3. ........................................................ 211 Tabela 3. Arbovrus e Alguns Outros Vrus Designados para o Nvel e Biossegurana 3 (baseado em experincia insuficiente). ............................................. 216 Tabela 4. Arbovrus e Alguns Outros Vrus Designados para oNvel de Biossegurana 3. ................................ 217 Arbovrus, Arenavrus e Filovrus Designados ao Nvel de Biossegurana 4. ................................................... 219 Tabela 5. Arbovrus, Arenavrus e Filovrus Designados para o Nvel de Biossegurana 4. ................................ 221 APNDICE A Conteno Primria: Cabines de Segurana Biolgica ........... Tabela 1. Comparao das Cabines de Segurana Biolgica. .................................................................... Figura 1. Cabine de Segurana Biolgica Classe I ............ Figura 2a. Cabine de Segurana Biolgica Classe II, Tipo A ......................................................................... Figura 2b. Cabine de Segurana Biolgica Classe II, Tipo B1 ....................................................................... Figura 2c. Cabine de Segurana Biolgica Classe II, Tipo B2 ....................................................................... Figura 2d. Cabine de Segurana Biolgica Classe II, Tipo B3 ....................................................................... Figura 3. Cabine de Segurana Biolgica Classe III........... APNDICE B Imunoprofilaxia ....................................................................... 236 vi 287
224 229 230 231 232 233 234 235
APNDICE C Transporte e Transferncia de Agentes Biolgicos .......... 238 Figura 1. Embalagem e Rotulagem de Substncias Infecciosas ................................................................ 244 Figura 2. Embalagem e Rotulagem de Amostras Clnicas .... 244 APNDICE D Patgenos Animais ............................................................ 245 APNDICE E Fontes de Informaes ...................................................... 248 APNDICE F Segurana do Laboratrio e Resposta de Emergncia para Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia ............... 250 APNDICE G Gerenciamento Integrado de Roedores e Insetos ............ 256 APNDICE H Trabalhos com Clulas e Tecidos Humanos e de Outros Primatas ... 261 APNDICE I Normas para o Trabalho com Toxinas de Origem Biolgica .... 264 NDICE REMISSIVO ndice Remissivo ................................................................ 270
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PREFCIO
Essa publicao descreve as combinaes das prticas microbiolgicas padres e as especiais, dos equipamentos de segurana e instalaes que constituem os Nveis de Biossegurana de 1-4 recomendados para um trabalho que envolva uma variedade de agentes infecciosos em vrios estabelecimentos laboratoriais. Essas recomendaes possuem um carter consultivo. A inteno o de fornecer um guia voluntrio ou cdigo de prtica, assim como os objetivos para operaes de um nvel mais alto. Esses conselhos so tambm oferecidos como um guia e uma referncia na construo das instalaes de um novo laboratrio e na reforma de instalaes j existentes. Porm, a aplicao destas recomendaes em uma operao de um laboratrio particular dever se basear na avaliao do risco de agentes e de atividades especiais, ao invs de ser utilizado como um cdigo universal e genrico aplicvel a todas as situaes. Desde a publicao da terceira edio do livro Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e Microbiolgicos, ocorreram inmeros eventos que acabaram por influenciar algumas das mudanas feitas nesta quarta edio. Em resposta preocupao global concernente s doenas infecciosas emergentes e as reemergentes, a seo de Avaliao de Riscos foi ampliada para proporcionar ao laboratorista informaes adicionais para facilitar a implantao de tais determinaes. Devido a grande demanda de projetos e construes de laboratrios biomdicos e microbiolgicos, particularmente nos Nveis de Biossegurana 3 e, incorporamos esclarecimentos e acrscimos s Sees Instalaes, em particular s Sees III e IV. O objetivo a expanso de nossa abordagem baseada na atuao com o objetivo de obtermos uma conteno apropriada.
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Com a identificao da encefalopatia espongiforme bovina (EEB) na Inglaterra houve um aumento significativo do interesse sobre doenas provocadas por prions. Por esta razo, acrescentamos um apndice para direcionar as vrias preocupaes associadas ao trabalho com estes agentes. Como tem ocorrido vrias infeces associadas a laboratrios envolvendo agentes previamente conhecidos e desconhecidos, modificamos ou acrescentamos vrios Resumos das Caractersticas de Agentes nesta edio. Os resumos de agentes agora contm informaes sobre os requisitos necessrios para obteno de licenas para o transporte de microrganismos infecciosos. O motivo para essa modificao foi a preocupao em relao ao crescente transporte nacional e internacional de microorganismos infecciosos. E finalmente, nestes ltimos anos, houve um aumento nas preocupaes em relao ao bioterrorismo, o que tem provocado um considervel interesse nas questes que envolvem a biossegurana. Portanto, acrescentamos um apndice para ajudar a concentrarmos nossas atenes nas necessidades de aumento de segurana em nossos laboratrios de microbiologia.
Gostaramos tambm de agradecer as contribuies de muitos da comunidade cientfica que proporcionaram idias para aperfeioarmos essa edio. Em particular, temos um grande dbito com o Comit Tcnico de Reviso (Technical Review Committee) da Associao Americana de Segurana Biolgica (American Biological Safety Association) por seus amveis comentrios e sugestes.
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SEO I
Introduo
Laboratrios de microbiologia so, com freqncia, ambientes singulares de trabalho que podem expor as pessoas prximas a eles ou que neles trabalham a riscos de doenas infecciosas identificveis. As infeces contradas em um laboratrio tm sido descritas por meio da histria da microbiologia. Os relatrios de microbiologia publicados na virada do sculo descreveram casos de tifo, clera, mormo, brucelose, e ttano associados a laboratrios1. Em 1941, Meyer e Eddie2 publicaram uma pesquisa de 74 casos de brucelose associados a laboratrio, ocorrido nos Estados Unidos, e concluram que a manipulao de culturas ou espcies ou ainda a inalao da poeira contendo a bactria Brucella eminentemente perigosa para os trabalhadores de um laboratrio.Inmeros casos foram atribudos falta de cuidados ou a uma tcnica de manuseio ruim de materiais infecciosos. Em 1949, Sulkin e Pike3, publicaram a primeira de uma srie de pesquisas sobre infeces associadas a laboratrios. Eles constataram 222 infeces virais, sendo 21 delas fatais. Em pelo menos um tero dos casos, a provvel fonte de infeco estava associada ao manuseio de animais e tecidos infectados. Acidentes conhecidos foram registrados em 27 (12%) dos casos relatados. Em 1951, Sulkin e Pike4, publicaram a segunda de uma srie de pesquisas baseada em um questionrio enviado a 5.000 laboratrios. Somente um tero dos 1.342 casos citados foram relatados na literatura. A Brucelose era a infeco mais freqentemente encontrada nos relatrios em relao s infeces contradas em um laboratrio e juntamente com a tuberculose, a tularemia, o tifo, e a infeco estreptoccica contribuam para 72% de todas as infeces bacterianas e 31% das infeces causadas por outros agentes. O ndice total de mortalidade era de 3%. Somente 16% de todas as infeces relatadas estavam associadas a um acidente documentado. A maioria destes estavam relacionados ao uso de pipetas, seringas e agulhas.
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Introduo
Essa pesquisa foi atualizada em 19655, quando houve um acrscimo de 641 novos casos ou de casos que no havia sido relatados anteriormente. Em 19766, houve uma nova atualizao perfazendo um total acumulativo de 3.921 casos. A brucelose, o tifo, a tularemia, a tuberculose, a hepatite e a encefalite eqina venezuelana eram as infeces mais comumente relatadas. Menos de 20% de todos os casos estavam associados a um acidente conhecido. A exposio aos aerossis infecciosos era considerada como sendo uma fonte plausvel, mas no confirmada de infeco para mais de 80% dos casos onde as pessoas infectadas haviam trabalhadas com o agente. Em 19677, Hanson e colaboradores relataram 428 casos patentes de infeces de arbovrus associados a laboratrio. Em alguns casos, a capacidade de um dado arbovrus de produzir uma doena humana foi primeiramente confirmada como o resultado de uma infeco no intencional da equipe laboratorial. No caso, os aerossis infecciosos eram considerados a fonte mais comum de infeco. Em 1974, Skinholj8 publicou os resultados de uma pesquisa que mostrava que o corpo de funcionrios dos laboratrios clnicos dinamarqueses apresentava uma relatada incidncia de hepatite (2,3 casos ao ano por 1.000 funcionrios) sete vezes maior que a populao em geral. De maneira semelhante, uma pesquisa de 1976 realizada por Harrington e Shannon9 indicou que os trabalhadores de laboratrios mdicos na Inglaterra apresentavam um risco cinco vezes maior de adquirir uma tuberculose do que a populao em geral.A Hepatite B e a shigelose tambm eram conhecidas por serem um contnuo risco ocupacional. Junto com a tuberculose, essas eram as trs causas mais comuns de infeces associadas a laboratrio relatadas na Gr-Bretanha. Embora esses relatrios sugerissem que os funcionrios de laboratrios corriam um elevado risco de se contaminarem pelos agentes que eles prprios manipulavam, os ndices atuais de infeco no se encontram disponveis. Porm, os estudos de Harington e Shannon e os de Skinhoj10 indicam que as equipes
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Introduo
laboratoriais apresentavam maiores ndices de tuberculose, shigelose e de hepatite B do que a maioria da populao em geral. Ao contrrio das ocorrncias documentadas de infeces contradas por funcionrios de laboratrios, esses laboratrios que trabalham com agentes infecciosos no representam uma ameaa sociedade. Por exemplo, embora 109 casos de infeces associadas a laboratrios tenham sido registrados nos Centros de Preveno e Controle de Doena de 1947 a 197311, nenhum caso secundrio foi relatado nos membros da famlia ou em contatos comunitrios. O Centro Nacional de Doena Animal relatou uma experincia12 semelhante, sem nenhum caso secundrio ocorrido nos contatos laboratoriais e no laboratoriais em relao aos 18 casos de infeces associadas a laboratrio no perodo de 1960 a 1975. Atravs de um caso secundrio da Doena de Marburg contrado pela esposa de um caso primrio, concluiu-se que a infeco havia sido sexualmente transmitida dois meses aps o marido ter recebido alta do hospital13. Trs casos secundrios de varola foram relatados em dois surtos associados a laboratrio na Inglaterra em 197314 e 197815. Relatos anteriores de seis casos de febre Q entre os funcionrios de uma lavanderia comercial que lavava os uniformes e roupas de um laboratrio que manipulava o agente16, um caso de uma pessoa que visitava o laboratrio17 e dois casos de febre Q em contatos domiciliares de um rickettsiologista18 tambm foram constatados. Existe o relato de um caso de transmisso do vrus B de macaco de um tratador de animais infectados para a sua esposa, aparentemente provocado pelo contato do vrus com a pele lesionada do indivduo19. Esses casos so representativos da natureza espordica e da pouca freqncia das infeces na comunidade de trabalhadores de laboratrio que lidam com agentes infecciosos. Na reviso de 1979 20, Pike chegou a concluso que o conhecimento, as tcnicas e o equipamento para a preveno das infeces laboratoriais j esto disponveis.Nos Estados Unidos, porm, nenhum cdigo de prtica, padres, diretrizes ou outras publicaes proporcionaram descries detalhadas das tcnicas, equipamento e outras consideraes ou recomendaes para um
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Introduo
maior esfera de ao das atividades laboratoriais conduzidas com uma variedade de agentes infecciosos exticos e nativos. O folheto Classificao dos Agentes Etiolgicos Baseando-se no Grau de Risco21 serviu como uma referncia geral para vrias atividades laboratoriais que utilizam agentes infecciosos. Neste folheto, o conceito sobre a classificao dos agentes infecciosos e das atividades laboratoriais em quatro nveis ou classes, serviu como um formato bsico para as edies anteriores do Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e Microbiolgicos (BLBM). Esta quarta edio do BLBM continua a descrever especificamente as combinaes de prticas microbiolgicas, instalaes laboratoriais, equipamento de segurana e recomendaes sobre suas utilizaes nas quatro categorias ou nos quatro nveis de biossegurana de operao laboratorial com agentes infecciosos que afetam homens. As descries dos Nveis de Biossegurana de 1-4 paralelas quelas contidas nas Diretrizes do NIH para Pesquisa Envolvendo o DNA Recombinante22, 23, esto de acordo com os critrios gerais originalmente usados para a designao dos agentes infecciosos para as Classes de 1-4 na Classificao dos Agentes Etiolgicos Baseando-se no Grau de Risco24. Quatro nveis de biossegurana tambm so determinados para as atividades de doenas infecciosas utilizando pequenos animais de laboratrios. As recomendaes para os nveis de biossegurana para agentes especficos so feitas com base no risco potencial do agente, da funo ou da atividade do laboratrio. Desde o incio dos anos 80, os laboratrios aplicam esses fundamentos em atividades associadas com manipulaes envolvendo o vrus da imunodeficincia humana (HIV). Mesmo antes do HIV ter sido identificado como o agente causador da Sndrome da Imunodeficincia Adquirida (AIDS), os princpios que regulam a manipulao de um patgeno presente no sangue j eram considerados adequados para um trabalho laboratorial seguro. Normas tambm foram publicadas para os trabalhadores da rea de sade sob o ttulo de Precaues Universais25. De fato, as Precaues Universais e esta publicao tornaram-se a base do manuseio seguro de sangue e de fludos corporais, como descrito
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Introduo
na recente publicao OSHA, intitulada Padro de Patgenos Sanguneos26. No final dos anos 80 havia uma grande preocupao com o lixo mdico-hospitalar, o que levou a publicao do Ato de Rastreamento de Lixo Hospitalar de 1988 27 . Os princpios estabelecidos nos volumes anteriores do BLBM para o manuseio de dejetos potencialmente infecciosos como um risco ocupacional foi reforado pela Pesquisa do Conselho Nacional intitulada Biossegurana em Laboratrios: Prticas Prudentes para o Manuseio e Remoo de Materiais Infecciosos28. No momento em que esta publicao estava sendo editada, h uma preocupao crescente em relao ao reaparecimento do M. tuberculosis e a segurana dos trabalhadores de laboratrios e equipamentos da rea de sade. Os princpios descritos no BLBM que tentam assegurar as prticas, procedimentos e instalaes de segurana na sade so aplicveis ao controle deste patgeno areo incluindo sua cepas resistentes a inmeras drogas (multidrogas resistentes)29, 30. As tecnologias com DNA recombinante esto sendo aplicadas rotineiramente em laboratrios para modificar a composio gentica de vrios microorganismos. Uma avaliao completa de riscos deve ser conduzida quando nos referimos a estas atividades e a seus resultados e desconhecidos. A experincia tem demonstrado a importncia das precaues tomadas com as prticas, procedimentos, e instalaes dos Nveis de Biossegurana de 1-4 descritas para as manipulaes de agentes etiolgicos em montagem de laboratrios e dependncias animais. Embora no exista nenhum tipo de relatrio nacional que descreva as infeces associadas a laboratrios, casos curiosos sugerem que uma rgida adeso a essas normas contribui para um meio de trabalho mais seguro e saudvel para a equipe do laboratrio, seus colaboradores e a comunidade ao redor. Para reduzir ainda mais o potencial de risco de infeces associadas a laboratrios, as normas apresentadas aqui devem ser consideradas como uma orientao mnima para conteno das mesmas. Estas devem ser adaptadas para cada laboratrio em particular e podem ser utilizadas juntamente com outras informaes cientficas disponveis.
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Introduo
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Introduo
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SEO II
Princpios de Biossegurana
O termo conteno usado para descrever os mtodos de segurana utilizados na manipulao de materiais infecciosos em um meio laboratorial onde esto sendo manejados ou mantidos. O objetivo da conteno o de reduzir ou eliminar a exposio da equipe de um laboratrio, de outras pessoas e do meio ambiente em geral aos agentes potencialmente perigosos. A conteno primria, a proteo da equipe do laboratrio e do meio de trabalho contra a exposio aos agentes infecciosos, proporcionada por uma boa tcnica de microbiologia e pelo uso de um equipamento de segurana adequado. O uso de vacinas pode fornecer um elevado nvel de proteo pessoal. J a conteno secundria, a proteo do meio ambiente externo ao laboratrio contra a exposio aos materiais infecciosos, proporcionada pela combinao de um projeto das instalaes e das prticas operacionais. Desta forma, os trs elementos de conteno incluem a prtica e a tcnica laboratorial, o equipamento de segurana e o projeto da instalao. A avaliao do risco do trabalho a ser realizado com um agente especfico determinar a combinao adequada destes trs elementos. Prtica e Tcnica Laboratorial. O elemento de conteno mais importante a adeso rgida s prticas e tcnicas microbiolgicas padres. As pessoas que trabalham com agentes infecciosos ou com materiais potencialmente contaminados devem se conscientizar sobre os riscos potenciais, e devem ser treinadas e estarem aptas a exercerem as tcnicas e prticas necessrias para o manuseio seguro destes materiais. Cabe ao diretor ou a pessoa responsvel pelo laboratrio, a responsabilidade tambm pelo fornecimento ou pela elaborao de um treinamento adequado para o corpo de funcionrios. Cada laboratrio dever desenvolver ou adotar um manual de biossegurana ou de operaes que identifique os riscos que
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sero ou que podero ser encontrados e que especifique tambm as prticas e procedimentos especficos para minimizar ou eliminar as exposies a estes perigos. Os funcionrios devem receber informaes sobre os riscos especiais e devem ler e seguir todas as prticas e procedimentos solicitados. Um cientista treinado e com grande conhecimento das tcnicas laboratoriais apropriadas, dos procedimentos de segurana e dos perigos associados ao manuseio de agentes infecciosos deve ser o responsvel pela conduo do trabalho envolvendo quaisquer agentes ou materiais infecciosos. Quando as prticas laboratoriais padres no forem suficientes para controlar os perigos associados a um agente ou a um procedimento laboratorial em particular, medidas adicionais podero ser necessrias. O diretor do laboratrio ser o responsvel pela seleo das prticas adicionais de segurana que devem estar relacionadas aos riscos associados aos agentes ou aos procedimentos. A equipe, as prticas de segurana e as tcnicas laboratoriais devero ser complementadas com um projeto apropriado das instalaes e das caractersticas da arquitetura, do equipamento de segurana e das prticas de gerenciamento. Equipamento de Segurana (Barreiras Primrias). O equipamento de segurana inclui as cabines de segurana biolgica (CSB), recipientes adequados e outros controles da engenharia de segurana projetados para remover ou minimizar exposies aos materiais biolgicos perigosos. A cabine de segurana biolgica (CSB) o dispositivo principal utilizado para proporcionar a conteno de borrifos ou aerossis infecciosos provocados por inmeros procedimentos microbiolgicos. Trs tipos de cabines de segurana biolgica (Classe I, II e III) usados em laboratrios de microbiologia esto descritos e ilustrados no Apndice A. As cabines de segurana biolgica Classe I e II, que possuem a frente aberta, so barreiras primrias que oferecem nveis significativos de proteo para a equipe do laboratrio e para o meio ambiente quando utilizado com boas tcnicas microbiolgicas. A cabine de
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segurana biolgica Classe II tambm fornece uma proteo contra a contaminao externa de materiais (por exemplo, cultura de clulas, estoque microbiolgico) que sero manipulados dentro das cabines. A cabine de segurana biolgica Classe III hermtica e impermevel aos gases proporciona o mais alto nvel de proteo aos funcionrios e ao meio ambiente. Um outro exemplo de barreira primria o copo de segurana da centrfuga, um recipiente conectado centrfuga projetado para evitar que aerossis sejam liberados durante uma centrifugao. Para minimizarmos este perigo, controles de conteno como as cabines de segurana biolgicas (CSB) ou os copos da centrfuga devero ser utilizadas ao manipularmos agentes infecciosos que possam ser transmitidos atravs da exposio aos aerossis. O equipamento de segurana tambm pode incluir itens para a proteo pessoal como luvas, aventais, gorros, proteo para sapatos, botas, respiradores, escudo ou protetor facial, mscaras faciais ou culos de proteo. O equipamento de proteo pessoal freqentemente usado em combinao com as cabines de segurana biolgica e outros dispositivos que faam a conteno os agentes, animais ou materiais que esto sendo manipulados. Em alguns casos nos quais torna-se impossvel trabalhar em capelas de segurana biolgica, o equipamento de segurana pessoal deve formar a barreira primria entre os trabalhadores e os materiais infecciosos. Os exemplos incluem certos estudos animais, necropsia animais, atividades de produo em grande escala do agente e atividades relacionadas manuteno, servios ou suporte da instalao do laboratrio. Projeto e Construo das Instalaes (Barreiras Secundrias). O planejamento e a construo das instalaes contribuem para a proteo da equipe do laboratrio, proporcionando uma barreira de proteo para as pessoas que se encontram fora do laboratrio e para as pessoas ou animais da comunidade contra agentes infecciosos que podem ser liberados acidentalmente pelo laboratrio. A gerncia do laboratrio deve ser a responsvel por instalaes que estejam de acordo com o
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funcionamento do mesmo e com o nvel de biossegurana recomendado para os agentes que forem ali manipulados. As barreiras secundrias recomendadas dependero do risco de transmisso dos agentes especficos. Por exemplo, o risco das exposies para grande parte dos trabalhos laboratoriais em dependncias de um Nvel De Biossegurana 1 e 2 ser o contato direto com os agentes ou as exposies inadvertidas atravs de um meio de trabalho contaminado. As barreiras secundrias nestes laboratrios podem incluir o isolamento da rea de trabalho ao acesso pblico, disponibilidade de uma dependncia para descontaminao (por exemplo, uma autoclave) e dependncias para lavagem das mos. Quando o risco de contaminao atravs da exposio aos aerossis infecciosos estiver presente, nveis mais elevados de conteno primria e barreiras de proteo secundrias podero ser necessrios para evitar que agentes infecciosos escapem para o meio ambiente. Estas caractersticas do projeto incluem sistemas de ventilao especializados em assegurar o fluxo de ar unidirecionado, sistemas de tratamento de ar para a descontaminao ou remoo do ar liberado, zonas de acesso controlado, cmaras pressurizadas como entradas de laboratrio, separados ou mdulos para isolamento do laboratrio. Os engenheiros responsveis pelo projeto devem levar em considerao as recomendaes especficas para ventilao como as encontradas no Manual de Aplicaes para Calefao, Ventilao e Refrigerao (Applications Handbook for Heating, Ventilation and Air-Conditioning - HVAC) publicado pela Sociedade Americana de Engenheiros de Calefao, Refrigerao e Condicionamento de Ar (American Society of Heating, Refrigerating and Air-Conditioning Engineers ASHRAE)1. Nveis de Biossegurana. Os quatro nveis de biossegurana (NB) esto descritos na Seo III, e consistem de combinaes de prticas e tcnicas de laboratrio, equipamento de segurana e instalaes do laboratrio. Cada combinao especificamente adequada para as operaes realizadas, vias de
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transmisses documentadas ou suspeitas de agentes infecciosos e funcionamento ou atividade do laboratrio. Os nveis de biossegurana recomendados para os organismos da Seo VII (Resumo dos Agentes) representam as condies nas quais o agente pode ser manuseado com segurana. O diretor do laboratrio especificamente e primariamente o responsvel pela avaliao dos riscos e pela aplicao adequada dos nveis de biossegurana recomendados. Geralmente, o trabalho com agentes desconhecidos deve ser conduzido em um nvel de biossegurana recomendado pela Seo VII. Quando temos uma informao especfica disponvel que possa sugerir a virulncia, a patogenicidade, os padres de resistncia a antibiticos, a vacina e a disponibilidade de tratamento, ou outros fatores significativamente alterados, prticas mais (ou menos) rgidas podero ser adotadas. Nvel de Biossegurana 1 - As prticas, o equipamento de segurana e o projeto das instalaes so apropriados para o treinamento educacional secundrio ou para o treinamento de tcnicos, e de professores de tcnicas laboratoriais. Este conjunto tambm utilizado em outros laboratrios onde o trabalho, com cepas definidas e caracterizadas de microorganismos viveis e conhecidos por no causarem doenas em homens adultos e sadios, realizado. O Bacillus subtilis, o Naegleria gruberi, o vrus da hepatite canina infecciosa e organismos livres sob as Diretrizes do NIH de DNA Recombinantes so exemplos de microorganismos que preenchem todos estes requisitos descritos acima. Muitos agentes que geralmente no esto associados a processos patolgicos em homens so, entretanto, patgenos oportunos e que podem causar uma infeco em jovens, idosos e indivduos imunosupressivos ou imunodeprimidos. As cepas de vacina que tenham passado por mltiplas passagens in vivo no devero ser consideradas no virulentas simplesmente por serem cepas de vacinas. O Nvel de Biossegurana 1 representa um nvel bsico de conteno que se baseia nas prticas padres de
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microbiologia sem uma indicao de barreiras primrias ou secundrias, com exceo de uma pia para a higienizao das mos. Nvel de Biossegurana 2 - As prticas, os equipamentos, a planta e a construo das instalaes so aplicveis aos laboratrios clnicos, de diagnstico, laboratrios escolas e outros laboratrios onde o trabalho realizado com um maior espectro de agentes nativos de risco moderado presentes na comunidade e que estejam associados a uma patologia humana de gravidade varivel. Com boas tcnicas de microbiologia, esses agentes podem ser usados de maneira segura em atividades conduzidas sobre uma bancada aberta, uma vez que o potencial para a produo de borrifos e aerossis baixo. O vrus da hepatite B, o HIV, a salmonela e o Toxoplasma spp. so exemplos de microorganismos designados para este nvel de conteno. O Nvel de Biossegurana 2 adequado para qualquer trabalho que envolva sangue humano, lquidos corporais, tecidos ou linhas de clulas humanas primrias onde a presena de um agente infeccioso pode ser desconhecido. Os laboratoristas que trabalham com materiais humanos devem consultar o livro Padro de Patgenos Transmitidos pelo Sangue da OSHA (OSHA Bloodborne Pathogen Standard2) para as precaues especficas necessrias. Os perigos primrios em relao aos funcionrios que trabalham com esses agentes esto relacionados com acidentes percutneos de as exposies da membrana mucosa ou com a ingesto de materiais infecciosos. Deve-se tomar um extremo cuidado com agulhas contaminadas ou com instrumentos cortantes. Embora os organismos rotineiramente manipulados em um Nvel de Biossegurana 2 no sejam transmitidos atravs de aerossis, os procedimentos envolvendo um alto potencial para a produo de salpicos ou aerossis que possam aumentar o risco de exposio destes funcionrios devem ser conduzidos com um equipamento de conteno primria ou com dispositivos como a CSB ou os copos de segurana da centrfuga. Outras barreiras primrias, como os escudos para borrifos, proteo
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facial, aventais e luvas devem ser utilizados de maneira adequada. As barreiras secundrias como pias para higienizao das mos e instalaes para descontaminao de lixo devem existir com o objetivo de reduzir a contaminao potencial do meio ambiente. Nvel de Biossegurana 3 - As prticas, o equipamento de segurana, o planejamento e construo das dependncias so aplicveis para laboratrios clnicos, de diagnsticos, laboratrio escola, de pesquisa ou de produes. Nestes locais, realiza-se o trabalho com agentes nativos ou exticos que possuam um potencial de transmisso via respiratria e que podem causar infeces srias e potencialmente fatais. O Mycobacterium tuberculosis, o vrus da encefalite de St. Louis e a Coxiella burnetii so exemplos de microorganismos determinados para este nvel. Os riscos primrios causados aos trabalhadores que lidam com estes agentes incluem a autoinoculao, a ingesto e a exposio aos aerossis infecciosos. No Nvel de Biossegurana 3, enfatizamos mais as barreiras primrias e secundrias para protegermos os funcionrios de reas contguas, a comunidade e o meio ambiente contra a exposio aos aerossis potencialmente infecciosos. Por exemplo, todas as manipulaes laboratoriais devero ser realizadas em uma CSB (Cabine de Segurana Biolgica) ou em um outro equipamento de conteno como uma cmara hermtica de gerao de aerossis. As barreiras secundrias para esse nvel incluem o acesso controlado ao laboratrio e sistemas de ventilao que minimizam a liberao de aerossis infecciosos do laboratrio. Nvel de Biossegurana 4 As prticas, o equipamento de segurana, o planejamento e construo das dependncias so aplicveis para trabalhos que envolvam agentes exticos perigosos que representam um alto risco por provocarem doenas fatais em indivduos. Estes agentes podem ser
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transmitidos via aerossis e at o momento no h nenhuma vacina ou terapia disponvel. Os agentes que possuem uma relao antignica prxima ou idntica aos dos agentes do Nvel de Biossegurana 4 tambm devero ser manuseados neste nvel. Quando possumos dados suficientes, o trabalho com esses agentes deve continuar neste nvel ou em um nvel inferior. Os vrus como os de Marburg ou da febre hemorrgica Crimia - Congo so manipulados no Nvel de Biossegurana 4. Os riscos primrios aos trabalhadores que manuseiam agentes do Nvel de Biossegurana 4 incluem a exposio respiratria aos aerossis infecciosos, exposio da membrana mucosa e/ou da pele lesionada as gotculas infecciosas e a autoinoculao. Todas as manipulaes de materiais de diagnstico potencialmente infecciosos, substncias isoladas e animais naturalmente ou experimentalmente infectados apresentam um alto risco de exposio e infeco aos funcionrios de laboratrio, comunidade e ao meio ambiente. O completo isolamento dos trabalhadores de laboratrios em relao aos materiais infecciosos aerossolizados realizado primariamente em cabines de segurana biolgica Classe III ou com um macaco individual suprido com presso de ar positivo. A instalao do Nvel de Biossegurana 4 geralmente construda em um prdio separado ou em uma zona completamente isolada com uma complexa e especializada ventilao e sistemas de gerenciamento de lixo que evitem uma liberao de agentes viveis no meio ambiente. O diretor do laboratrio primariamente e especificamente responsvel pela operao segura do laboratrio. O conhecimento e julgamento dele/dela so crticos para a avaliao dos riscos e para a aplicao adequada destas recomendaes. O nvel de biossegurana recomendado representa as condies sob as quais o agente pode ser manipulado com segurana. As caractersticas especiais dos agentes utilizados, o treinamento e experincia dos empregados e a natureza da funo do laboratrio podero posteriormente influenciar o diretor quanto aplicao destas recomendaes.
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Dependncias para Animais. Os quatro nveis de biossegurana tambm so descritos para as atividades que envolvem o trabalho de doenas infecciosas com animais experimentais. Estas quatro combinaes de prticas, equipamento de segurana e de instalaes so denominadas de Nveis de Biossegurana Animal 1, 2, 3, e 4 e proporcionam nveis crescentes de proteo aos funcionrios e ao meio ambiente. Laboratrios Clnicos. Os laboratrios clnicos, especialmente aqueles situados em clnicas e hospitais recebem amostras clnicas requisitando uma grande variedade de diagnsticos e servios de apoio clnico. Geralmente, a natureza infecciosa do material clnico desconhecida e as amostras so freqentemente submetidas a uma ampla solicitao de exame microbiolgico em relao aos mltiplos agentes (por exemplo, o escarro pode ser submetido a uma cultura de rotina, cido resistente e cultura fngica. responsabilidade do diretor do laboratrio estabelecer procedimentos padres no laboratrio que, de fato, direcionem a questo do perigo da infeco imposto pelas amostras clnicas. Com exceo de circunstncias extraordinrias (por exemplo, suspeita de uma febre hemorrgica), o processamento inicial de uma amostra clnica e a identificao sorolgica de substncias isoladas poder ser realizado de forma segura em um Nvel de Biossegurana 2 - o nvel recomendado para o trabalho com patgeno do sangue como o vrus da hepatite B e o HIV. Os elementos de conteno descritos no Nvel de Biossegurana 2 devero estar de acordo com o padro da OSHA, Exposio Ocupacional aos Patgenos Transmitidos atravs do Sangue3, 4 publicado pela Administrao de Sade e Segurana Ocupacional. Isto requer o uso de precaues especficas para todas as amostras clnicas de sangue ou outros materiais potencialmente infecciosos (Precaues ou Padres Universais) 5 . Alm disto, outras recomendaes especficas para laboratrios clnicos podem ser obtidas atravs do Comit Nacional de Padres para Laboratrios Clnicos (National Committee for Clinical Laboratory Standard)6.
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As recomendaes para o nvel de Biossegurana 2 e os requerimentos do OSHA enfocam a preveno exposio por contato com a pele e mucosas materiaias clnicos. Barreiras primrias, como as cabines de segurana biolgica ( Classe I e II), devem ser usadas quando procedimentos que causam gotejamento, pulverizao e salpicos de gotas. As cabines de segurana biolgica tambm devem ser usadas quando do incio da manipulao de espcimes clnicos, cuja natureza do teste requerer, ou em presena de um agente que reconhecidamente transmite infeces por aerossis (por ex.; M. tuberculosis) ou quando o uso de uma cabine de segurana biolgica (Classe II) indicado para proteger a integridade do espcime. A segregao das funes de um laboratrio clnico e o acesso limitado ou restrito a estas reas de responsabilidade do diretor da instituio. responsabilidade tambm do diretor estabelecer um padro e procedimentos por escrito que direcionem os riscos potenciais e os cuidados ou precaues necessrias a serem implantadas. Importao e Expedio Interestadual de Certos Materiais Biomdicos. A importao de vetores e agentes etiolgicos de patologias humanas est sujeita aos regulamentos da Public Health Service Foreign Quarentine. Os regulamentos do Servio de Sade Pblica e do Departamento de Transportes especificam os requisitos necessrios para a embalagem, rotulagem e embarque de agentes etiolgicos e amostras para diagnsticos expedidos para o comrcio interestadual (veja Apndice). O Departamento de Agricultura dos E.U. A regulamenta a importao e expedio interestadual de patgenos animais e probe a importao, posse ou uso de certos agentes patolgicos de animais exticos que possam ser uma ameaa para aves e criaes em geral por provocarem srias doenas (veja o Apndice D).
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Referncias: 1. American Society of Heating, Refrigerating, and air-Conditioning Engineers, Inc. 1999. Laboratories. In: ASHRAE Handbook, Heating, Ventilation, and Air-Conditioning Applications, Chapter 13. U.S. Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration. 1991. Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens, Final Rule. Fed. Register 56: 64175-64182. U.S. Department of Labor, Occupational Safety and Health Administrations. 1991. (2) Richmond, J.Y. 1994. HIV Biosafety: Guidelines and Regulations. In (G. Schochetman, J.R. George, Eds). AIDS Testing, Edition 2 (pp. 346-360). Springer-Verlag New York, Inc. Centers for Disease Control. 1988. Update: Universal Precautions for Prevention of Transmission of Human Immunodeficiency Virus, Hepatitis B Virus and Other Bloodborne Pathogens in Healthcare Settings. MMWR, 37: 377-382, 387, 388. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). 1997. Protection of laboratory workers from instrument biohazards and infectious disease transmitted by blood, body fluids and tissue. Approved guideline. Dec. 1997, NCCLS Doc. M29-A (ISBN-1-56238339-6).
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SEO III Nveis de Biossegurana Laboratorial Os principais requisitos exigidos para os quatro nveis de biossegurana em atividades que envolvam microorganismos infecciosos e animais de laboratrio esto resumidos na Tabela 1 desta Seo e da Seo IV. Os nveis so designados em ordem crescente, pelo grau de proteo proporcionado ao pessoal do laboratrio, meio ambiente e comunidade. Nvel de Biossegurana (NB-1) O Nvel de Biossegurana 1 adequado ao trabalho que envolva agentes bem caracterizados e conhecidos por no provocarem doena em seres humanos e que possuam mnimo risco ao pessoal do laboratrio e ao meio ambiente. O laboratrio no est separado das demais dependncias do edifcio. O trabalho conduzido, em geral, em bancada, com adoo das boas prticas laboratoriais (BPL). Equipamentos especficos de proteo ou caractersticas especiais de construo no so geralmente usados ou exigidos. O pessoal do laboratrio dever ter treinamento especfico nos procedimentos realizados no laboratrio e devero ser supervisionados por um cientista com treinamento em microbiologia geral ou cincia correlata. Os seguintes padres e prticas especiais, equipamento de segurana e as instalaes devero ser aplicados aos agentes designados ao Nvel de Biossegurana 1: A.
Prticas Padres em Microbiologia

1. O acesso ao laboratrio dever ser limitado ou restrito de acordo com a definio do diretor do laboratrio quando estiverem sendo realizados experimentos ou trabalhos com culturas e amostras. As pessoas devero lavar as mos aps o manuseio de materiais viveis, aps a remoo das luvas e antes de sarem do laboratrio.
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Nveis de Biossegurana Laboratorial NB1
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No permitido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato, aplicar cosmticos ou armazenar alimentos para consumo nas reas de trabalho. As pessoas que usam lentes de contato em laboratrios devero usar tambm culos de proteo ou protetores faciais. Os alimentos devero ser guardados fora das reas de trabalho em armrios ou geladeiras especficos para este fim. proibida a pipetagem com a boca; devem ser utilizados dispositivos mecnicos.
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5. 6.
Devem ser institudas normas para o manuseio de agulhas. Todos os procedimentos devem ser realizados cuidadosamente a fim de minimizar a criao de borrifos ou aerossis. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas, pelo menos, uma vez ao dia e sempre depois de qualquer derramamento de material vivel. Todas as culturas, colnias e outros resduos devero ser descontaminados antes de serem descartados atravs de um mtodo de descontaminao aprovado como, por exemplo, esterilizao por calor mido (autoclave). Os materiais que forem ser descontaminados fora do laboratrio devero ser colocados em recipientes inquebrveis, prova de vazamentos e hermeticamente fechados para serem transportados ao local desejado. Os materiais que forem enviados para descontaminaco fora da instituio devero tambm ser embalados de acordo com os regulamentos locais, estaduais e federais, antes de serem removidos das dependncias do laboratrio. O smbolo de Risco Biolgico dever ser colocado na entrada do laboratrio em qualquer momento em que o
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agente infeccioso estiver presente no local. Este sinal de alerta dever indicar o(s) agente(s) manipulado(s) e o nome e nmero do telefone do pesquisador. 10. Deve ser providenciado um programa rotineiro de controle de insetos e roedores. (ver Apndice G). B.
Prticas Especiais Nenhuma Equipamento de Segurana (Barreiras Primrias)

1. Os equipamentos especiais de conteno, tais como as cabines de segurana biolgica, no so geralmente exigidas para manipulaes de agentes de classe de risco 1. recomendado o uso de jalecos, aventais ou uniformes prprios, para evitarem a contaminao ou sujeira de suas roupas normais. Recomenda-se o uso de luvas para os casos de rachaduras ou ferimentos na pele das mos. Algumas alternativas como o uso de luvas de ltex com talco devero ser avaliadas. culos protetores devero ser usados na execuo de procedimentos que produzam borrifos de microorganismos ou de materiais perigosos.
C.
2.
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4.
D.
Instalaes Laboratoriais (Barreiras Secundrias)

1. Os laboratrios devero possuir portas para controle do acesso. Cada laboratrio dever conter uma pia para lavagem das mos. O laboratrio deve ser projetado de modo a permitir fcil limpeza. Carpetes e tapetes no so apropriados para laboratrios.
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recomendvel que a superfcie das bancadas seja impermevel gua e resistente ao calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis e qumicos usados para a descontaminao da superfcie de trabalho e do equipamento. Os mveis do laboratrio devero ser capazes de suportar cargas e usos previstos. Os espaos entre as bancadas, cabines e equipamento devero ser suficientes de modo a permitir fcil acesso para limpeza. Se o laboratrio possuir janelas que se abram para o exterior, estas devero conter telas de proteo contra insetos.
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Nveis de Biossegurana 2 (NB-2) O nvel de Biossegurana 2 semelhante ao Nvel de Biossegurana 1 e adequado ao trabalho que envolva agentes de risco moderado para as pessoais e para o meio ambiente. Difere do NB-1 nos seguintes aspectos: (1) O pessoal de laboratrio dever ter um treinamento especfico no manejo de agentes patognicos e devem ser supervisionados por cientistas competentes; (2) O acesso ao laboratrio deve ser limitado durante os procedimentos operacionais; (3) precaues extremas sero tomadas em relao a objetos cortantes infectados; e (4) Determinados procedimentos nos quais exista possibilidade de formao de aerossis e borrifos infecciosos devem ser conduzidos em cabines de segurana biolgica ou outros equipamentos de conteno fsica. Os seguintes padres e prticas especiais, equipamentos de segurana e instalaes so aplicveis aos agentes designados para o Nvel de Biossegurana 2:
A.
Prticas Padres de Microbiologia

1. O acesso ao laboratrio dever ser limitado ou restrito de acordo com a definio do diretor do laboratrio quando estiver sendo realizado experimento.
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2.
As pessoas devem lavar as mos aps a manipulao de materiais viveis, aps a remoo das luvas e antes de sarem do laboratrio. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos nas reas de trabalho. Os alimentos devero ser guardados fora das reas de trabalho em armrios ou geladeiras especficas para este fim. proibida a pipetagem com a boca; devem ser utilizados dispositivos mecnicos. Devem ser institudas normas para o manuseio de agulhas. Todos os procedimentos devem ser realizados cuidadosamente a fim de minimizar a criao de borrifos ou aerossis. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas com desinfetantes que sejam eficazes contra os agentes manipulados, ao final do trabalho ou no final do dia e aps qualquer vazamento ou borrifada de material vivel. Todas as culturas, colnias e outros resduos devero ser descontaminados antes de serem descartados atravs de um mtodo de descontaminao aprovado como, por exemplo, esterilizao por calor mido (autoclave). Os materiais que forem ser descontaminados fora do prprio laboratrio devero ser colocados em recipientes inquebrveis, prova de vazamentos e hermeticamente fechados para serem transportados ao local desejado. Deve ser providenciado um programa rotineiro de controle contra insetos e roedores (veja Apndice G).
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B. Prticas Especiais
1. O acesso ao laboratrio dever ser limitado ou restrito de acordo com a definio do diretor, quando o trabalho com
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agentes infecciosos estiver sendo realizado. Em geral, pessoas susceptveis s infeces, ou pessoas que quando infectadas possam apresentar srias complicaes, no sero permitidas no laboratrio ou nas salas dos animais. Por exemplo, pessoas que estejam imunocomprometidas ou imunodeprimidas podero estar correndo um srio risco de se contaminarem. Cabe ao diretor a deciso final quanto avaliao de cada circunstncia e a determinao de quem deve entrar ou trabalhar no laboratrio ou na sala de animais. 2. O diretor do laboratrio dever estabelecer normas e procedimentos com ampla informao a todos que trabalharem no laboratrio sobre o potencial de risco associado ao trabalho, bem como sobre os requisitos especficos (por exemplo, imunizao) para entrada em laboratrio. O smbolo de Risco Biolgico dever ser colocado na entrada do laboratrio onde agentes etiolgicos estiverem sendo utilizados. Este sinal de alerta dever conter informaes como o(s) nome(s) o(s) agente(s) manipulado(s), o nvel de biossegurana, as imunizaes necessrias, o nome e nmero do telefone do pesquisador, o tipo de equipamento de proteo individual que dever ser usado no laboratrio e os procedimentos necessrios para sair do laboratrio. O pessoal do laboratrio deve estar apropriadamente imunizado ou examinado quanto aos agentes manipulados ou potencialmente presentes no laboratrio (por exemplo, vacina contra a hepatite B ou teste cutneo para a tuberculose). Quando apropriado, dependendo do(s) agente(s) manipulado(s), para referncia futura, devem ser mantidas amostras sorolgicas da equipe do laboratrio e de outras pessoas possivelmente expostos aos riscos. Amostras
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sorolgicas adicionais devem ser colhidas periodicamente, dependendo dos agentes manipulados ou da funo das instalaes laboratoriais. 6. Os procedimentos de biossegurana devem ser incorporados aos procedimentos operacionais padres ou a um manual de biossegurana especfico do laboratrio, adotado ou preparado pelo diretor do laboratrio. Todo pessoal deve ser orientado sobre os riscos e devem ler e seguir as instrues sobre as prticas e procedimentos requeridos. O diretor do laboratrio dever assegurar que o laboratrio e a equipe de apoio receba um treinamento apropriado sobre os riscos potenciais associados ao trabalho desenvolvido, as precaues necessrias para preveno de exposio e os procedimentos para avaliao das exposies. A equipe de funcionrios dever receber cursos de atualizao anuais ou treinamento adicional quando necessrio e tambm no caso de mudanas de normas ou de procedimentos. Deve-se sempre tomar uma enorme precauo em relao a qualquer objeto cortante, incluindo seringas e agulhas, lminas, pipetas, tubos capilares e bisturis.
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a. Agulhas e seringas hipodrmicas ou outros instrumentos cortantes devem ficar restritos ao laboratrio e usados somente quando no houver outra alternativa para inoculao parenteral, flebotomia ou aspirao de fludos de animais de laboratrio e de garrafas com diafragma. Recipientes plsticos devem ser substitudos por recipientes de vidro sempre que possvel. b. Devem ser usadas somente seringas com agulha fixa ou agulha e seringa em uma unidade nica descartvel usada para injeo ou aspirao de materiais infecciosos.
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As agulhas descartveis usadas no devero ser dobradas, quebradas, reutilizadas, removidas das seringas ou manipuladas antes de serem desprezadas. Ao contrrio, elas devero ser cuidadosamente colocadas em recipiente resistente a perfuraes localizado convenientemente, utilizado para recolhimento de objetos cortantes desprezados. Objetos cortantes no descartveis devem ser colocados em um recipiente cuja parede seja bem resistente para o transporte at a rea para descontaminao, de preferncia atravs de uma autoclave. c. As seringas que possuem um envoltrio para a agulha, ou sistemas sem agulha e outros dispositivos de segurana devero ser utilizados quando necessrios. d. Vidros quebrados no devem ser manipulados diretamente com a mo, devem ser removidos atravs de meios mecnicos como uma vassoura e uma p de lixo, pinas ou frceps. Os recipientes que contm agulhas, equipamentos cortantes e vidros quebrados contaminados devero passar por um processo de descontaminao antes de serem desprezados, de acordo com os regulamentos locais, estaduais ou federais. 9. Culturas, tecidos e amostras de fludos corpreos ou dejetos potencialmente infecciosos devem ser colocados em um recipiente com uma tampa que evite o vazamento durante a coleta, o manuseio, o processamento, o armazenamento, o transporte ou o embarque.
10. O equipamento laboratorial e as superfcies de trabalho devero ser descontaminadas rotineiramente com um desinfetante eficaz aps a concluso do trabalho com materiais infecciosos e especialmente aps borrifos e derramamentos ou depois que outras contaminaes por materiais infecciosos tenham ocorrido. O equipamento
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contaminado dever ser descontaminado de acordo com as normas locais, estaduais ou federais antes de ser enviado para conserto, manuteno ou acondicionamento para transporte de acordo com as normas locais, estaduais ou federais aplicveis, antes de ser removido do local. 11. Respingos e acidentes resultantes de uma exposio de materiais infecciosos aos organismos devero ser imediatamente notificados ao diretor do laboratrio. A avaliao mdica, a vigilncia e o tratamento devero ser providenciados e registros do acidente e das providncias adotadas devero ser mantidos por escrito. 12. proibida a admisso de animais que no estiverem relacionados ao trabalho em execuo no laboratrio.
C. Equipamento de Segurana (Barreira Primria)

1. Devem ser usadas cabines de segurana biolgica mantidas de maneira adequada, de preferncia de Classe II, ou outro equipamento de proteo individual adequado ou dispositivos de conteno fsica sempre que: a. Sejam realizados procedimentos com elevado potencial de criao de aerossis ou borrifos infecciosos como centrifugao, triturao, homogeneizao, agitao vigorosa, misturas, ruptura por sonificao, abertura de recipientes contendo materiais infecciosos onde a presso interna possa ser diferente da presso ambiental, inoculao intranasal em animais e em cultura de tecidos infectados de animais ou de ovos embrionados. b. Altas concentraes ou grandes volumes de agentes infecciosos forem utilizados. Tais materiais s podero ser centrifugados fora das cabines de segurana se forem utilizadas centrfugas de segurana e frascos
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lacrados. Estes s devero ser abertos no interior de uma cabine de segurana biolgica. 2. Proteo para o rosto (mscaras de proteo, protetor facial, culos de proteo ou outra proteo para respingos) deve ser usada para prevenir respingos ou sprays proveniente de materiais infecciosos ou de outros materiais perigosos, quando for necessria a manipulao de microrganismos fora das cabines de segurana biolgica. No interior do laboratrio, os freqentadores devero utilizar roupas apropriadas como jalecos, gorros ou uniformes de proteo. Antes de sair do laboratrio para as reas externas (cantina, biblioteca, escritrio administrativo), a roupa protetora dever ser retirada e deixada no laboratrio, ou encaminhada para a lavanderia da instituio. A equipe do laboratrio nunca deve lev-la para a casa. Devem ser usadas luvas, quando houver um contato direto com materiais e superfcies potencialmente infecciosas ou equipamentos contaminados. O mais adequado usar dois pares de luvas. Essas luvas devem ser desprezadas quando estiverem contaminadas, o trabalho com materiais infecciosos for concludo ou quando a integridade da luva estiver comprometida. Luvas descartveis no podero ser lavadas, reutilizadas ou usadas para tocar superfcies limpas (teclado, telefones, etc.), e no devem ser usadas fora do laboratrio. Alternativas como luvas de ltex com talco devero estar disponveis. As mos devero ser lavadas aps a remoo das luvas.
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D. Instalaes Laboratoriais (Barreiras Secundrias)

1. exigido um sistema de portas com trancas em dependncias que abrigarem agentes restritos (como definido em 42 CFR 72.6). Considere a construo de novos laboratrios longe de rea pblicas.
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Cada laboratrio dever conter uma pia para a lavagem das mos. Recomendamos a construo de pias que funcionem automaticamente ou que sejam acionadas com o p ou com o joelho. O laboratrio dever ser projetado de modo a permitir fcil limpeza e descontaminao. Carpetes e tapetes no so apropriados para laboratrio. As bancadas devero ser impermeveis gua e resistentes ao calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis e solventes qumicos utilizados na descontaminao das superfcies de trabalho e do equipamento. Os mveis do laboratrio devem suportar cargas e usos previstos com espaamento suficiente entre as bancadas, cabines e equipamentos para permitir acesso fcil para limpeza. As cadeiras e outros mveis utilizados no trabalho laboratorial devem ser cobertos com um material que no seja tecido e que possa ser facilmente descontaminado. Cabines de segurana biolgica devem ser instaladas, de forma que a variao da entrada e sada de ar da sala, no provoque alterao nos padres de conteno de seu funcionamento. As cabines de segurana biolgica devem estar localizadas longe de portas, janelas que possam ser abertas, reas laboratoriais muito cheias e que possuam outros equipamentos potencialmente dilaceradores, de forma que sejam mantidos os parmetros de fluxo de ar nestas cabines de segurana biolgica. Um lava olhos deve estar disponvel. A iluminao dever ser adequada para todas as atividades, evitando reflexos e luzes fortes e ofuscantes que possam impedir a viso.
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10. No existem exigncias em relao ventilao. Porm, o planejamento de novas instalaes deve considerar
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sistemas mecnicos de ventilao que proporcione um fluxo interno de ar sem que haja uma recirculao para os espaos fora do laboratrio. Caso o laboratrio possua janelas que se abram para o exterior, essas devero possuir telas para insetos. Nvel de Biossegurana 3 (NB-3) O Nvel de Biossegurana 3 aplicvel para laboratrios clnicos, de diagnstico, ensino e pesquisa ou de produo onde o trabalho com agentes exticos possa causar doenas srias ou potencialmente fatais como resultado de exposio por inalao. A equipe laboratorial deve possuir treinamento especfico no manejo de agentes patognicos e potencialmente letais devendo ser supervisionados por competentes cientistas que possuam vasta experincia com estes agentes. Todos os procedimentos que envolverem a manipulao de materiais infecciosos devem ser conduzidos dentro de cabines de segurana biolgica ou outro dispositivo de conteno fsica. Os manipuladores devem usar roupas e equipamento de proteo individual. Sabe-se, porm, que algumas instalaes existentes podem no possuir todas as caractersticas recomendadas para um Nvel de Biossegurana 3 (por exemplo, uma rea de acesso com duas portas, selamento das entradas de ar). Nestas circunstncias, um nvel aceitvel de segurana para conduo dos procedimentos de rotina (por exemplo, procedimentos para diagnsticos envolvendo a reproduo de um agente para identificao, tipagem, teste de susceptibilidade, etc.) poder ser conseguido atravs de instalaes do Nvel de Biossegurana 2 garantindo-se que: (1) o ar liberado do laboratrio seja jogado para fora da sala, (2) a ventilao do laboratrio seja equilibrada para proporcionar um fluxo de ar direcionado para dentro da sala, (3) o acesso ao laboratrio seja restrito quando o trabalho estiver sendo realizado e (4) as Prticas Padres de Microbiologia, as Prticas Especiais e o Equipamento de Segurana para o Nvel de Biossegurana 3 sejam
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rigorosamente seguidas. A deciso de implementar essas modificaes das recomendaes do Nvel de Biossegurana 3 deve ser tomada somente pelo diretor do laboratrio. O seguinte padro e prticas de segurana especiais, equipamentos e instalaes se aplicam aos agentes enumerados no Nvel de Biossegurana 3: A. Prticas Padres de Microbiologia 1. O acesso ao laboratrio deve ser limitado ou restrito de acordo com a definio do diretor do laboratrio quando experimentos estiverem sendo realizados. As pessoas devem lavar as mos aps a manipulao de materiais infecciosos, aps a remoo das luvas e antes de sarem do laboratrio. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos dentro da rea de trabalho. As pessoas que usarem lentes de contato em laboratrios devero tambm usar culos de proteo ou protetores faciais. Os alimentos devem ser armazenados fora do ambiente de trabalho em armrios ou geladeiras utilizadas somente para este fim. proibido a pipetagem com a boca, devem ser utilizados dispositivos mecnicos. Devem ser institudas normas para o manuseio de agulhas. Todos os procedimentos devem ser realizados cuidadosamente a fim de minimizar a criao de aerossis. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas pelo menos uma vez ao dia e depois de qualquer derramamento de material vivel. Todas as culturas, colnias e outros resduos relacionados devem ser descontaminados antes de serem descartados,
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atravs de um mtodo de descontaminao aprovado, como por exemplo, a autoclavao. Os materiais que forem ser descontaminados fora da rea prxima ao laboratrio devero ser colocados dentro de um recipiente rgidos, prova de vazamento e hermeticamente fechado para ser transportado do laboratrio. O lixo infeccioso de laboratrios de Nveis de Biossegurana 3 dever ser descontaminado antes de ser removido para locais fora do laboratrio. 9. Deve ser providenciado um programa rotineiro de controle de insetos e roedores (veja o Apndice G).
B. 1.
Prticas Especiais
As portas do laboratrio devem permanecer fechadas quando experimentos estiverem sendo realizados. O diretor do laboratrio dever controlar e limitar o acesso ao laboratrio. Somente as pessoas necessrias para que o programa seja executado ou o pessoal de apoio devem ser admitidos no local. As pessoas que apresentarem risco aumentado de contaminao ou que possam ter srias conseqncias caso sejam contaminadas, no sero permitidas dentro do laboratrio ou na sala de animais. Por exemplo, pessoas imunocomprometidas ou imunodeprimidas podem estar mais susceptveis a uma contaminao. O diretor dever ser o responsvel final pela avaliao de cada caso e na determinao de quem dever ou no entrar ou trabalhar dentro do laboratrio. No permitida a entrada de menores no laboratrio. O diretor do laboratrio dever estabelecer normas e procedimentos pelos quais s sero admitidas no laboratrio ou nas salas dos animais pessoas que j tiverem recebido informaes sobre o potencial de risco, que atendam todos os requisitos para a entrada no mesmo (por exemplo, imunizao) e que obedeam a todas as regras para entrada e sada no laboratrio.
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Quando materiais infecciosos ou animais infectados estiverem presentes no laboratrio ou no mdulo de conteno, deve ser colocado em todas as portas de acesso do laboratrio e das salas de animais um sinal de alerta contendo o smbolo universal de risco biolgico e a identificao do agente, do nome do Pesquisador principal ou de outro responsvel e endereo completo. O sinal de alerta tambm dever indicar qualquer requisito especial necessrio para a entrada no laboratrio, tais como a necessidade de imunizao, respiradores ou outras medidas de proteo individual. O pessoal do laboratrio deve ser apropriadamente imunizado ou examinado quanto aos agentes manipulados ou potencialmente presentes no laboratrio (por exemplo, vacina para hepatite B ou teste cutneo para tuberculose) e exames peridicos so recomendados. Amostras sorolgicas de toda a equipe e das pessoas expostas ao risco devero ser coletadas e armazenadas adequadamente para futura referncia. Amostras sorolgicas adicionais podero ser periodicamente coletadas, dependendo dos agentes manipulados ou do funcionamento do laboratrio. Um manual de biossegurana especfico para o laboratrio dever ser preparado e adotado pelo diretor do laboratrio e os procedimentos de biossegurana devem ser incorporadas aos procedimentos operacionais padro. Todo pessoal deve ser orientado sobre os riscos especiais devem ler e seguir as instrues sobre as prticas e procedimentos requeridos. A equipe do laboratrio e a equipe de apoio devero receber treinamento adequado sobre os riscos potenciais associados ao trabalho desenvolvido, os cuidados necessrios para evitar uma exposio perigosa ao agente infeccioso e sobre os procedimentos de avaliao da
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exposio. A equipe do laboratrio dever freqentar cursos de atualizao anuais ou treinamento adicional quando necessrio e tambm em caso de mudanas de normas e procedimentos. 9. Caber ao diretor do laboratrio assegurar que antes que o trabalho com os organismos designados para o Nvel de Biossegurana 3 se inicie, toda a equipe do laboratrio demonstre estar apto para as prticas e tcnicas padres de microbiologia e demonstrar habilidade tambm nas prticas e operaes especficas do laboratrio. Podendo estar includo uma experincia anterior em manipulao de patgenos humanos ou culturas de clulas, ou um treinamento especfico proporcionado pelo diretor do laboratrio ou por outros peritos na rea de manejo de prticas e tcnicas microbiolgicas seguras.
10. Deve-se tomar uma extrema precauo, quando objetos cortantes, incluindo seringas e agulhas, lminas, pipetas, tubos capilares e bisturis forem manipulados. a. Agulhas e seringas hipodrmicas ou outros instrumentos cortantes devem ficar restritos ao laboratrio e usados somente quando no houver outra alternativa para inoculao parenteral, flebotomia ou aspirao de fludos de animais de laboratrio e de garrafas com diafragma. Recipientes plsticos devem ser substitudos por recipientes de vidro sempre que possvel. b. Devem ser usadas somente seringas com agulha fixa ou agulha e seringa em uma unidade descartvel (por exemplo, quando a agulha parte integrante da seringa) usada para injeo ou aspirao de materiais infecciosos. As agulhas descartveis usadas no devero ser dobradas, quebradas, reutilizadas, removidas das seringas ou manipuladas antes de serem desprezadas. Ao contrrio, elas devero ser cuidadosamente colocadas em um recipiente resistente a perfuraes
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localizado convenientemente, utilizado para recolhimento de objetos cortantes desprezados. Objetos cortantes no descartveis devero ser colocados em um recipiente cuja parede dever ser bem resistente para o transporte at uma rea para descontaminao, de preferncia atravs de uma autoclave. c. Seringas que possuem um envoltrio para a agulha, ou sistemas sem agulhas e outros dispositivos de segurana devero ser utilizados quando necessrios. d. Vidros quebrados no devem ser manipulados diretamente com a mo, devem ser removidos atravs de meios mecnicos como uma vassoura e uma p de lixo, pinas ou frceps. Os recipientes que contm agulhas, equipamentos cortantes e vidros quebrados contaminados devero passar por um processo de descontaminao antes de serem desprezados, de acordo com os regulamentos locais, estaduais ou federais. 11. Todas as manipulaes abertas que envolvam materiais infecciosos devero ser conduzidas no interior de cabines de segurana biolgica ou de outros dispositivos de conteno fsica dentro de um mdulo de conteno. Nenhum trabalho onde tenhamos que abrir a pele para alcanarmos os vasos dever ser conduzido em bancadas abertas. A limpeza dever ser facilitada atravs do uso de toalhas absorventes com uma face de plstico voltada para baixo, recobrindo as superfcies de trabalho no perfuradas das cabines de segurana biolgica. 12. O equipamento laboratorial e as superfcies de trabalho devero ser descontaminadas rotineiramente com um desinfetante eficaz aps a concluso do trabalho com materiais infecciosos, especialmente no caso de derramamento, vazamentos ou outras contaminaes por materiais infecciosos.
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a. Vazamentos de materiais infecciosos devero ser descontaminados, contidos e limpos pela equipe de profissionais especializados ou por outras pessoas adequadamente treinadas e equipadas para trabalharem com material infeccioso concentrado. Os procedimentos para vazamento devero ser desenvolvidos e notificados. b. O equipamento contaminado dever ser descontaminado antes de ser removido do laboratrio para conserto, manuteno ou para ser embalado para transporte de acordo com os regulamentos locais, estaduais e federais aplicveis. 13. As culturas, tecidos, amostras de fludos corpreos ou resduos devero ser colocados em um recipiente que evite um vazamento durante a coleta, manuseio, processamento, armazenamento, transporte ou embarque. 14. Todos os dejetos contendo materiais contaminados (por exemplo, luvas, jalecos de laboratrios, etc.) em laboratrio devero ser descontaminados antes de serem desprezados ou reutilizados. 15. Vazamentos e acidentes que resultem em exposies abertas dos materiais infecciosos aos organismos devero ser imediatamente relatados ao diretor do laboratrio. Avaliao mdica adequada, vigilncia e tratamento devero ser proporcionados e registros por escrito devero ser mantidos. 16. Animais e plantas que no estiverem relacionados ao trabalho em desenvolvimento no devero ser admitidos dentro do laboratrio. C. Equipamento de Segurana (Barreiras Primrias) 1. Roupas de proteo como jalecos com uma frente inteira, macaco ou uniforme de limpeza devero ser usados pela
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equipe quando estiver dentro do laboratrio. A roupa de proteo no dever ser usada fora do laboratrio. Antes de ser lavada esta roupa dever ser descontaminada e dever ser trocada depois de contaminada. 2. Todos devero usar luvas quando estiverem manuseando materiais infecciosos, animais infectados e equipamentos contaminados. Recomenda-se a mudana freqente das luvas acompanhada de lavagem das mos. As luvas descartveis no devero ser reutilizadas. Todas as manipulaes de materiais infecciosos, necropsias de animais infectados, coleta de tecidos ou lquidos de animais infectados ou de ovos embrionados, etc., devero ser conduzidas em uma cabine de segurana biolgica de Classe II ou de Classe III (veja Apndice A). Quando um procedimento ou processo no puder ser conduzido dentro de uma cabine de segurana biolgica devem ser utilizadas combinaes apropriadas de equipamentos de proteo individual (por exemplo, respiradores, protetores faciais) com dispositivos de conteno fsica (por exemplo, centrfugas de segurana e frascos selados). A proteo facial e o respirador devero ser usados quando a equipe estiver dentro de salas contendo animais infectados.
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D.
Instalaes do Laboratrio (Barreiras Secundrias)

1. O laboratrio dever estar separado das reas de trnsito irrestrito do prdio com acesso restrito. exigido um sistema de dupla porta com sistema de intertravamento automtico como requisito bsico para entrada no laboratrio a partir de corredores de acesso ou outras reas contguas. As
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portas devero conter fechaduras (Veja Apndice F). Uma sala para a troca de roupas dever ser includa no laboratrio. 2. Cada sala do laboratrio dever possuir uma pia para lavagem das mos. A pia dever ser acionada automaticamente sem o uso das mos e estar localizada perto da porta de sada. As superfcies das paredes internas, pisos e tetos das reas, onde os agentes de NB-3 so manipulados, devero ser construdas e mantidas de forma que facilitem a limpeza e a descontaminao. Toda a superfcie deve ser selada e sem reentrncias. As paredes, tetos e pisos devero ser lisas, impermeveis e resistentes a substncias qumicas e desinfetantes normalmente usados em laboratrios. Os pisos devero ser monolticos e anti - derrapante. O uso de revestimento de piso dever ser levada em considerao. Orifcios ou aberturas nas superfcies de pisos, paredes e teto devero ser selados. Dutos e espaos entre portas e esquadrias devem permitir o selamento para facilitar a descontaminao. As bancadas devero ser impermeveis e resistentes ao calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis e solventes qumicos utilizados para descontaminao de superfcies e equipamentos. Os mveis do laboratrio devero suportar cargas e usos previstos com espaamento suficiente entre as bancadas, cabines e equipamentos para permitir acesso fcil para a limpeza. As cadeiras e outros mveis utilizados em um laboratrio devero ser cobertos por uma material que no seja tecido e possa ser facilmente descontaminado. Todas as janelas do laboratrio devero ser fechadas e lacradas. Um mtodo para descontaminao de todos os dejetos do laboratrio dever estar disponvel para a equipe e utilizado
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de preferncia dentro do laboratrio (por exemplo, autoclave, desinfeco qumica, incinerao, ou outros mtodos aprovados de descontaminao). Deve-se considerar os meios de descontaminao de equipamentos. Caso o lixo seja transportado para fora do laboratrio, ele dever ser adequadamente lacrado e no dever ser transportado em corredores pblicos. 8. Devero existir cabines de segurana biolgica em todos os laboratrios. Estas cabines devero estar localizadas distantes de portas, de venezianas, do almoxarifado e de reas do laboratrio que possuam um grande movimento. O laboratrio dever ter um sistema de ar independente, com ventilao unidirecional onde o fluxo de ar penetra no laboratrio atravs da rea de entrada. O sistema de ar dever tirar o ar contaminado para fora do laboratrio e jogar o ar de reas limpas para dentro do mesmo. O ar de exausto no dever recircular em outras reas do prdio. A filtrao e outros tratamentos do ar liberado no so necessrios, mas podero ser utilizados dependendo das condies do local, dos agentes especficos manipulados e das condies de uso. O ar liberado dever ser jogado fora de reas ocupadas e de entradas de ar, ou dever ser filtrado atravs de filtro HEPA (High Efficiency Particulated Air). A equipe do laboratrio dever verificar constantemente se o fluxo de ar (para dentro do laboratrio) est funcionado de forma adequada. Recomenda-se que um monitor visual seja instalado para indicar e confirmar a entrada direcionada do ar para dentro do laboratrio. Devemos considerar a instalao de um sistema de controle HVAC para evitar uma pressurizao positiva contnua do laboratrio. Alarmes audveis tambm so recomendados para notificar a equipe de uma possvel falha no sistema HVAC.
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10. O ar exaurido de uma cabine de segurana biolgica Classe II, filtrado pelo HEPA poder recircular no interior do laboratrio se a cabine for testada e certificada anualmente.
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O ar exaurido das cabines de segurana biolgica deve ser retirado diretamente para fora do ambiente de trabalho atravs do sistema de exausto do edifcio. As cabines devero estar conectadas de maneira que evitem qualquer interferncia no equilbrio do ar das cabines ou do sistema de exausto do edifcio (por exemplo, uma abertura de ar entre o exaustor das cabines e o duto do exaustor). Quando as cabines de segurana biolgica Classe III forem utilizados, estas devero estar conectadas diretamente ao sistema de exaustores. Se as cabines de Classe III estiverem conectadas ao sistema de insuflao do ar, isto dever ser feito de tal maneira que previna uma pressurizao positiva das cabines (veja Apndice A). 11. Centrfugas de fluxo contnuo ou outros equipamentos que possam produzir aerossis devero ser refreadas atravs de dispositivos que liberem o ar atravs de filtros HEPA antes de serem descarregados no do laboratrio. Esses sistemas HEPA devero ser testados anualmente. Uma outra alternativa seria jogar o ar de sada das cabines para fora, em locais distantes de reas ocupadas ou das entradas de ar. 12. As linhas de vcuo devero ser protegidas por sifes contendo desinfetantes lquidos e filtros HEPA, ou o equivalente. Os filtros devero ser substitudos quando necessrio. Uma alternativa usar uma bomba a vcuo porttil (tambm adequadamente protegida com sifes e filtros). 13. Um lava olhos deve estar disponvel no laboratrio. 14. A iluminao dever ser adequada para todas as atividades, evitando reflexos e brilhos que possam ofuscar a viso. 15. O projeto da instalao e os procedimentos operacionais do Nvel de Biossegurana 3 devem ser documentados. Os parmetros operacionais e das instalaes devero ser
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verificados quanto ao funcionamento ideal antes que o estabelecimento inicie suas atividades. As instalaes devero ser verificadas pelo menos uma vez ao ano. 16. Protees adicionais ao meio ambiente (por exemplo, chuveiros para a equipe, filtros HEPA para filtrao do ar exaurido, conteno de outras linhas de servios e a descontaminao dos efluentes) dever ser considerada em conformidade com as recomendaes para manipulao dos agentes, com as normas de avaliao de risco, condies do local ou outras normas locais, estaduais ou federais aplicveis. Nvel de Biossegurana 4 (NB-4) O Nvel de Biossegurana 4 indicado para o trabalho que envolve agentes exticos e perigosos que exponham o indivduo a um alto risco de contaminao de infeces que podem ser fatais, alm de apresentarem um potencial relevado de transmisso por aerossis. Os agentes com uma relao antignica prxima ou idntica aos dos agentes includos no Nvel de Biossegurana 4 devero ser manipulados neste nvel at que se consigam dados suficientes para confirmao do trabalho neste nvel ou para o trabalho em um nvel inferior. A equipe do laboratrio dever ter um treinamento especfico e completo direcionado para a manipulao de agentes infecciosos extremamente perigosos e dever ser capaz de entender as funes da conteno primria e secundria, das prticas padres especficas, do equipamento de conteno e das caractersticas do planejamento do laboratrio. Os trabalhadores devero ser supervisionados por cientistas competentes, treinados e com vasta experincia no manuseio destes agentes. O acesso ao laboratrio dever ser rigorosamente controlado pelo diretor. A instalao dever ser em um edifcio separado ou em uma rea controlada dentro do edifcio, que seja totalmente isolada de todas as outras. Um manual de operaes especfico para as instalaes dever ser preparado ou adotado. Dentro do ambiente de trabalho, todas as atividades devero permanecer restritas s cabines de segurana biolgica Classe III
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ou de Classe II usadas com roupas de proteo com presso positiva, ventiladas por sistema de suporte de vida. O laboratrio do Nvel de Biossegurana 4 dever possuir caractersticas especficas quanto ao projeto e a engenharia para preveno da disseminao de microorganismos dentro do meio ambiente. As seguintes prticas de segurana padres e especiais e as instalaes se aplicam aos agentes pertencentes ao Nvel de Biossegurana 4: A. 1.
Prticas Padres de Microbiologia

O acesso ao laboratrio dever ser limitado pelo diretor, quando experimentos estiverem sendo realizados. A norma para uma manipulao segura de objetos perfurocortantes devero ser institudas. Todos os procedimentos devero ser cuidadosamente realizados para minimizar a produo de aerossis. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas pelo menos uma vez ao dia e depois de qualquer vazamento de material vivel. Todo o lixo dever ser descontaminado antes de ser desprezado atravs de um mtodo de descontaminao aprovado tal qual a autoclavao. Deve-se providenciar um programa rotineiro de controle de insetos e roedores (ver Apndice G).
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B. ` Prticas Especiais 1. Somente as pessoas envolvidas na programao e no suporte ao programa a ser desenvolvido e cujas presenas forem solicitadas no local ou nas salas do laboratrio devero ter permisso para entrada no local. As pessoas
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que estiverem imunocomprometidas ou imunodeprimidas estaro correndo um alto risco de adquirirem infeces. Portanto, estas pessoas que forem susceptveis ou as pessoas em que uma eventual contaminao possa provocar srios danos, como no caso de crianas ou gestantes, no recebero permisso para entrarem no laboratrio ou nas salas de animais. O supervisor do labora trio dever ter a responsabilidade final no controle do acesso. Por questo de segurana, o acesso ao laboratrio dever ser bloqueado por portas hermeticamente fechadas. A entrada dever ser controlada pelo diretor do laboratrio, por outra pessoa responsvel pelo controle dos riscos biolgicos ou por outra pessoa responsvel pela segurana fsica da instalao. Antes de entrar no laboratrio, as pessoas devero ser avisadas sobre o risco potencial e devero ser instrudas sobre as medidas apropriadas de segurana. As pessoas autorizadas devero cumprir com rigor as instrues dadas e todos os outros procedimentos aplicveis para a entrada e sada do laboratrio. Dever haver um registro, por escrito, de entrada e sada de pessoal, com data, horrio e assinaturas. 2. Quando materiais infecciosos ou animais infectados estiverem presentes no laboratrio, deve ser colocado em todas as portas de acesso do laboratrio e das salas de animais um sinal de alerta contendo o smbolo universal de risco biolgico. O sinal de alerta dever identificar o agente, relacionar o nome do diretor do laboratrio ou outra pessoa responsvel e tambm indicar qualquer requisito especial necessrio para a entrada na rea (por exemplo, necessidade de imunizao, respiradores ou outras medidas de proteo individual).
3.
O diretor do laboratrio dever ser o responsvel por assegurar que, antes de iniciar o trabalho com organismos pertencentes ao Nvel de Biossegurana 4, toda a equipe
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demonstre uma alta competncia em relao s prticas e tcnicas microbiolgicas e em prticas e operaes especiais especficas do laboratrio. Isto poder incluir uma experincia anterior no manuseio de patgenos humanos ou culturas de clulas, ou um treinamento especfico fornecido pelo diretor do laboratrio ou por outro perito com experincia nestas tcnicas e prticas microbiolgicas singulares. 4. A equipe do laboratrio dever receber imunizaes para os agentes manipulados ou potencialmente presentes no laboratrio. Amostras sorolgicas de toda a equipe do laboratrio e de outras pessoas expostas a um elevado risco devero ser coletadas e armazenadas. Amostras sorolgicas adicionais devero ser periodicamente coletadas, dependendo dos agentes manipulados ou do funcionamento do laboratrio. Ao estabelecer um programa de vigilncia sorolgica devese considerar a disponibilidade dos mtodos para a avaliao do anticorpo do(s) agente(s) em questo. O programa para o teste das amostras sorolgicas dever ter um intervalo a cada coleta e o responsvel pelo projeto dever comunicar os resultados aos participantes. Um manual sobre biossegurana dever ser preparado ou adotado. A equipe dever ser avisada quanto aos perigos e riscos especiais e devero ler e seguir as instrues sobre as prticas e procedimentos. A equipe do laboratrio e a equipe de apoio devero receber treinamento adequado sobre os perigos e riscos associados ao trabalho, as precaues necessrias para a preveno de exposies e os procedimentos de avaliao da exposio. A equipe tambm dever participar de cursos de atualizao anual ou treinamento adicional quando necessrio em caso de mudanas nos procedimentos. A entrada e sada de pessoal do laboratrio devem ocorrer somente aps uso do chuveiro e troca de roupas. Os
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funcionrios devero usar o chuveiro de descontaminao a cada sada do laboratrio. A entrada e sada de pessoal por antecmara pressurizada somente devero ocorrer em situaes de emergncia. 9. Para adentrar ao laboratrio, a roupa comum, dever ser trocada (nos vestirios externos) por roupa protetora completa e descartvel. Todas as roupas usadas no laboratrio, incluindo roupas de baixo, calas e camisas ou macaces, sapatos e luvas devero ser fornecidas e utilizadas por todas as pessoas que entrarem no laboratrio. Ao deixar o local e antes de se dirigirem para as reas de banho, as pessoas devero retirar a roupa usada no laboratrio no vestirio interno. As roupas sujas devero passar pela autoclave antes de serem lavadas.
10. Estoques e materiais necessrios para o laboratrio devero ser descontaminadas em autoclave de dupla porta, cmara de fumigao ou sistema de antecmara pressurizada antes de serem utilizados. Aps garantir a segurana das portas externas, a equipe dentro do laboratrio dever retirar os materiais abrindo as portas interiores da autoclave, da cmara de compresso ou da cmara de fumigao. Estas portas devero ser trancadas depois da retirada dos materiais. 11. Deve-se sempre tomar extrema precauo com qualquer objeto perfurocortante contaminado, como seringas e agulhas, lminas, pipetas, tubos capilares e bisturi. a. Agulhas e seringas hipodrmicas ou outros instrumentos cortantes so restritos ao laboratrio e usados somente quando no houver outra alternativa para inoculao parenteral, flebotomia ou aspirao de fludos de animais de laboratrio e de garrafas com diafragma. Recipientes plsticos devem ser substitudos por recipientes de vidro sempre que possvel b. Devem ser usadas somente seringas com agulhas fixas ou agulha e seringa em uma unidade nica e descartvel
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(por exemplo, quando a agulha parte integrante da seringa) usada para injeo ou aspirao de materiais infecciosos. As agulhas descartveis usadas no devero ser dobradas, quebradas, reutilizadas, removidas das seringas ou manipuladas antes de serem desprezadas. Ao contrrio, elas devero ser cuidadosamente acondicionadas em um recipiente resistente a perfuraes localizado convenientemente, utilizado para recolhimento de objetos cortantes desprezados. Objetos cortantes no descartveis devero ser acondicionados em um recipiente cuja parede dever ser bem resistente para o transporte at uma rea para descontaminao, de preferncia atravs de uma autoclave. c. As seringas que possuem um envoltrio para a agulha, ou sistemas sem agulha e outros dispositivos de segurana devero ser utilizados quando necessrios. d. Vidros quebrados no devem ser manipulados diretamente com a mo, devem ser removidos atravs de meios mecnicos como uma vassoura e uma p de lixo, pinas ou frceps. Os recipientes que contm agulhas, equipamentos cortantes e vidros quebrados contaminados devero passar por um processo de descontaminao antes de serem desprezados, de acordo com os regulamentos locais, estaduais ou federais. 12. O material biolgico vivel ou intacto, a ser removido de cabines Classe III ou do laboratrio de Nvel de Biossegurana, dever ser acondicionado em recipiente de conteno primria lacrado e inquebrvel. Este, por sua vez, dever ser acondicionado em um segundo recipiente tambm selado e inquebrvel que dever passar por um tanque de imerso contendo desinfetante, uma cmara de fumigao ou por uma cmara de compresso planejada com este propsito.
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13.
Nenhum material, com exceo do material biolgico que dever permanecer intacto ou vivel poder ser removido de um laboratrio de Nvel de Biossegurana 4, sem antes ter sido autoclavado ou descontaminado. Equipamentos ou materiais que no resistam a temperaturas elevadas ou ao vapor devero ser descontaminados utilizando-se gases ou vapor em uma cmara de compresso ou em uma cmara especfica para este fim. O equipamento do laboratrio dever ser descontaminado rotineiramente aps o trabalho com materiais infecciosos e especialmente depois de vazamentos, gotejamentos ou outras contaminaes por material infeccioso. O equipamento dever ser descontaminado antes de ser enviado para conserto ou manuteno. Vazamentos de materiais infecciosos devero ser refreados e limpos por profissionais especializados ou outros propriamente treinados e equipados para o trabalho com material infeccioso concentrado. Um procedimento para vazamento dever ser desenvolvido e adotado pelo laboratrio. Um sistema de notificao de acidentes e exposies laboratoriais, absentesmo de empregados e doenas associadas ao laboratrio dever ser organizado, bem como um sistema de vigilncia mdica. Relatos por escrito devero ser preparados e mantidos. Deve-se ainda, prever uma unidade de quarentena, isolamento e cuidados mdicos para o pessoal contaminado por doenas conhecidas ou potencialmente associado a laboratrio. Todos os materiais no relacionados ao experimento que estiver sendo realizado no momento (por exemplo, plantas, animais e roupas) no devero ser permitidos no laboratrio.
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14.
15.
16.
17.
C.
Equipamento de Segurana (Barreiras Primrias)
Todos os procedimentos dentro do laboratrio devero ser conduzidos em cabines de segurana biolgica Classe III ou cabines de Classe II usadas em associao com roupas de proteo pessoal com presso positiva e ventiladas por sistema de suporte de vida. D. Instalao do Laboratrio (Barreiras Secundrias) Existem dois modelos de laboratrio de Nvel de Biossegurana 4: (A) o Laboratrio Cabine onde todas as manipulaes do agente so realizadas em uma cabine de segurana biolgica Classe III, e o (B) que o Laboratrio Escafandro onde a equipe usa uma roupa de proteo. Os laboratrios de Nvel de Biossegurana 4 podem se basear em um dos modelos ou em uma combinao dos dois modelos na construo de um s laboratrio. Se a combinao for utilizada, cada tipo dever atender todos os requisitos identificados para o mesmo.
(A)
1.
Laboratrio Cabine (veja Apndice A)

O laboratrio de Biossegurana 4 dever estar separado do prdio ou em uma rea claramente demarcada e isolada dentro de um prdio. As salas do laboratrio devero ser planejadas para assegurar a passagem atravs de no mnimo duas portas antes de entrarmos nas salas contendo as cabines de segurana biolgica Classe III (sala das cabines). Devem estar previstas cmaras de entradas e sadas de pessoal, para troca de roupas, separadas por chuveiro. Deve ser previsto, ainda, um sistema de autoclave de duas portas, um tanque de imerso contendo desinfetante, uma cmara de fumigao ou uma ante-sala ventilada para descontaminao na barreira de conteno para o fluxo de materiais, estoques ou equipamentos que no passam no interior dos pelos vestirios para chegarem at a sala.
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2.
Inspees dirias de todos os parmetros de conteno (por exemplo, fluxo de ar direcionado) e sistemas de suporte de vida devero estar concludos antes que o trabalho se inicie dentro do laboratrio para asseguramos que este esteja funcionando de acordo com os parmetros de operao. As paredes, os pisos e tetos da sala contendo as cabines e do vestirio interno devero ser construdas de maneira que formem uma concha interna selada que facilitar a fumigao e que evitar a entrada e sada de animais e insetos. Os pisos devero ser totalmente selados e revestidos. As superfcies internas desta concha devero ser resistentes a lquidos e produtos qumicas para facilitar a limpeza e a descontaminao da rea. Aberturas ao redor das portas das salas de cabine e dentro dos vestirios internos devero ser minimizadas e facilmente seladas para facilitar a descontaminao. O sistema de drenagem do piso da sala da cabine dever estar conectado diretamente ao sistema de descontaminao do dejeto lquido. O sistema de esgoto e outra linha de servio devero conter filtros HEPA e protees contra animais nocivos, parasitas, etc. As bancadas devero possuir superfcies seladas e sem reentrncias que devero ser impermeveis gua e resistentes ao calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis e solventes qumicos utilizados na descontaminao das superfcies de trabalho e dos equipamentos. Os mveis do laboratrio devero ter uma construo simples e devero suportar cargas e usos previstos. O espaamento entre as bancadas, as cabines e armrios e o equipamento dever ser suficiente para facilitar a limpeza e a descontaminao. As cadeiras e outros mveis usados em um laboratrio devero ser cobertos por um material que no seja tecido e que possa ser facilmente descontaminado.
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3.
4.
5.
6.
Pias com acionamento automtico ou que sejam acionadas sem uso das mos, devero ser construdas prximas porta da sala da cabine e perto dos vestirios internos e externos. Se existir um sistema central de vcuo, este no dever servir as reas fora da sala das cabines. Filtros HEPA em srie devero ser colocados da forma mais prtica possvel em cada ponto onde ser utilizado ou prximo da vlvula de servio. Os filtros devero ser instalados de forma a permitir a descontaminao e a substituio local dos mesmos. Outras linhas utilitrias, como a de gs e lquidos, que convergem para a sala das cabines devero ser protegidas por dispositivos que evitem o retorno do fluxo. Se houver bebedouros de gua, eles devero ser acionados automaticamente ou atravs dos ps e devero estar localizados nos corredores do local, fora do laboratrio. O servio de abastecimento da gua dos bebedouros dever ser isolado do sistema de distribuio e abastecimento de gua das reas laboratoriais e dever ser equipado com um dispositivo que previna o retorno do fluxo. As portas de acesso ao laboratrio devero possuir trancas e fechamento automtico.
7.
8.
9.
10. Todas as janelas devero ser inquebrveis e seladas. 11. Todos os laboratrios devero possuir autoclaves de duas portas para a descontaminao de materiais que passem pelas cabines de segurana biolgica Classe III em pelas salas com cabines. As portas das autoclaves que se abrem para fora da barreira de conteno devero ser seladas s paredes da barreira de conteno. Estas portas devero ser controladas automaticamente de forma que a porta externa da autoclave somente possa ser aberta depois que o ciclo de esterilizao da autoclave tenha sido concludo. 12. Todos os laboratrios devero possuir tanques de imerso contendo desinfetantes, cmaras de fumigao ou mtodos
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equivalentes de descontaminao de forma que os materiais e equipamentos que no possam ser descontaminados em uma autoclave possam ser removidos de maneira segura das cabines de segurana biolgica Classe III e das salas com as cabines. 13. Efluentes lquidos vindos da parte suja dos vestirios internos (incluindo os vasos sanitrios), das pias das salas das cabines, do sistema de esgoto (se utilizado), das cmaras da autoclave e de outras fontes dentro da sala das cabines devero ser descontaminados atravs de um mtodo de descontaminao comprovado, de preferncia atravs de um tratamento por calor antes de serem jogados no esgoto sanitrio. Os efluentes vindo de chuveiros e vasos sanitrios limpos devero ser jogados no esgoto sem antes passar por um tratamento. O processo usado para a descontaminao de dejetos lquidos dever ser validado fisicamente e biologicamente. 14. Todos os laboratrios devero possuir um sistema de ventilao sem uma re-circulao. Os componentes de abastecimento e de liberao do sistema devero estar equilibrados para assegurar um fluxo de ar direcionado da rea de menos risco para rea(s) de maior risco potencial. O sistema de ar no laboratrio dever prever uma presso diferencial e fluxo unidirecionado de modo a assegurar diferencial de presso que no permita a sada do agente de risco. O fluxo de ar direcionado/presso diferencial dever ser monitorado e dever conter um alarme que acuse qualquer irregularidade no sistema. Um dispositivo visual que monitorize a presso de maneira apropriada, que indique e confirme o diferencial da presso da sala das cabines dever ser providenciado e dever ser colocado na entrada do vestirio. O fluxo de ar de entrada e sada tambm dever ser monitorado, e um sistema de controle HEPA dever existir para evitar uma contnua pressurizao positiva do laboratrio. A cabine de Classe III dever ser diretamente conectada ao sistema de exaustores. Se a cabine de Classe III estiver conectada ao sistema de
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abastecimento, isto dever ser feito de forma que previna uma pressurizao positiva da cabine. 15. O ar que entra e sai da sala das cabines, do vestirio interno e da ante-sala dever passar pelo(s) filtro(s) HEPA. O ar dever ser liberado longe dos espaos ocupados e das entradas de ar. O(s) filtro(s) dever(o) estar localizado(s) de maneira mais prxima possvel da fonte a fim de minimizar a quantidade de canos potencialmente contaminados. Todos os filtros HEPA devero ser testados e certificados anualmente. O alojamento dos filtros HEPA dever ser projetado de maneira que permita uma descontaminao in situ do filtro antes deste ser removido, ou antes, da remoo do filtro em um recipiente selado e de conteno de gs para subseqente descontaminao e/ou destruio atravs da incinerao. O projeto do abrigo do filtro HEPA dever facilitar a validao da instalao do filtro. O uso de filtros HEPA pr-certificado pode ser vantajoso. A vida mdia de filtros HEPA de exausto pode ser prolongada atravs de uma pr-filtrao adequada do ar insuflado. 16. O projeto e procedimentos operacionais de um local de Nvel de Biossegurana 4 devero ser documentados. O local dever ser testado em funo do projeto e dos parmetros operacionais para ser verificado se realmente atendem a todos os critrios antes que comecem a funcionar. Os locais devero ser checados novamente pelo menos uma vez ao ano e os procedimentos neles existentes devero ser modificados de acordo com a experincia operacional. 17. Sistemas de comunicaes apropriados devero ser instalados entre o laboratrio e o exterior (por exemplo, fax, computador, interfone).
(B)
1.
Laboratrio Escafandro
A instalao de Nvel de Biossegurana 4 consiste de um edifcio separado ou de uma rea claramente demarcada e
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isolada dentro do edifcio. As salas devero ser construdas de forma que assegurem a passagem atravs dos vestirios e da rea de descontaminao antes da entrada na(s) sala(s) onde o trabalho com os agentes do NB-4 (rea do escafandro). Vestirios interno e externo, separados por um chuveiro devero ser construdos para a entrada e sada da equipe que trabalha no laboratrio escafandro. Uma rea para o uso do escafandro, projetada especialmente para o local, tambm ser construda para proporcionar uma proteo pessoal equivalente quela proporcionada pelas cabines de segurana biolgica Classe III. As pessoas que entrarem nesta rea devero vestir uma roupa de pea nica de presso positiva e que seja ventilada por um sistema de suporte de vida protegido pelo sistema de filtros HEPA. O sistema de suporte de vida inclui compressores de respirao de ar, alarmes e tanques de ar de reforo de emergncia. A entrada nesta rea dever ser feita atravs de uma cmara de compresso adaptada com portas hermticas. Um chuveiro qumico para descontaminao da superfcie da roupa antes que o trabalhador saia da rea dever ser instalado. Um gerador de luz, automaticamente acionado em casos de emergncia, ser instalado para evitar que os sistemas de suporte de vida, os alarmes, a iluminao, os controles de entrada e sada e as cabines de segurana parem de funcionar. A presso do ar dentro da roupa dever ser positiva em relao rea ao redor do laboratrio. J a presso do ar dentro da rea da roupa dever ser menor que aquela das reas adjacentes. A iluminao e os sistemas de comunicao de emergncia devero ser instalados. Todas as aberturas e fendas dentro da concha interna da sala da roupa de proteo, do chuveiro qumico e das fechaduras devero ser seladas. 2. Uma inspeo diria de todos os parmetros de conteno (por exemplo, o fluxo de ar direcionado, chuveiros qumicos) e dos sistemas de suporte de vida devero estar concludos antes que o trabalho no laboratrio se inicie para garantir que o laboratrio esteja operando de acordo com os parmetros operacionais.
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3.
Uma autoclave com duas portas dever ser instalada na barreira de conteno para descontaminao dos dejetos a serem removidos da rea do laboratrio escafandro. A porta da autoclave, que se abre para a rea externa da sala escafandro, dever ser automaticamente controlada de forma que a porta exterior s possa ser aberta depois que o ciclo de esterilizao esteja concludo. Um tanque de imerso, uma cmara de fumigao, ou cmara de compresso dever ser colocado no local para permitir a passagem de materiais, suprimentos ou equipamentos que sero trazidos para o interior do laboratrio escafandro, atravs dos vestirios. Estes dispositivos podem tambm ser utilizados para a remoo de materiais, suprimentos ou equipamentos que no possam ser descontaminados em uma autoclave. As paredes, pisos e tetos do laboratrio escafandro devero ser construdos de maneira que formem uma concha interna selada, que facilite a fumigao e que evite a entrada de animais e insetos (veja Apndice G). As superfcies internas desta concha devero ser resistentes a lquidos e solues qumicas, facilitando a limpeza e a descontaminao da rea. Todas as aberturas e fendas nestas estruturas e superfcies devero ser seladas. Qualquer sistema de drenagem do piso dever conter sifes cheios de desinfetante qumico de eficcia comprovada contra o agente alvo e devero estar conectados diretamente ao sistema de descontaminao de dejetos lquidos. O esgoto e outras linhas de servio devero conter filtros HEPA. Acessrios internos como dutos de ventilao, sistemas de suprimento de luz e gua devero ser instalados de maneira que minimizem a rea da superfcie horizontal. As bancadas devero possuir superfcies seladas e sem emendas que devero ser impermeveis e resistentes ao calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis e solventes qumicos utilizados na descontaminao das superfcies de trabalho e nos equipamentos.
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4.
5.
6.
7.
Os mveis do laboratrio devero ter uma construo simples e devero suportar cargas e usos previstos. Recomenda-se o uso de materiais no porosos. Os espaos entre os bancadas, as cabines e armrios e o equipamento devero ser suficientes para facilitar a limpeza e a descontaminao. As cadeiras e outros mveis do laboratrio devero ser cobertos por um material que no seja tecido e que possa ser facilmente descontaminado. Pias com funcionamento automtico ou que sejam acionadas sem o uso das mos, devero ser construdas prximas rea em conjunto com a roupa de proteo. A construo de pias para a lavagem das mos nos vestirios internos e externos dever ser considerado bsico para a avaliao de risco. Se existir um sistema central de vcuo, este no servir as reas fora do laboratrio conjunto com a roupa de proteo. Os filtros HEPA enfileirados devero ser colocados da forma mais prtica possvel em cada ponto onde ser utilizado ou prximo da vlvula de servio. Os filtros devero ser instalados para que permitam a descontaminao e a substituio local dos mesmos. Outros servios de gs e lquidos para estas reas conjuntas devero ser protegidas atravs de dispositivos que evitem o retorno do fluxo.
8.
9.
10. As portas de acesso ao laboratrio devero possuir trancas e fechamento automtico. As portas internas e externas ao chuveiro qumico e as internas e externas s entradas de ar devero ser trancadas para evitar que ambas as portas sejam abertas simultaneamente. 11. Todas as janelas devero ser resistentes e devero ser seladas. 12. Efluentes lquidos provenientes das pias, dos canos de esgoto do piso (se utilizado), das cmaras da autoclave e
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de outras fontes dentro da barreira de conteno devero ser descontaminados atravs de um mtodo de descontaminao comprovado, de preferncia atravs de um tratamento com calor antes de serem jogados no esgoto sanitrio. Os efluentes vindo de chuveiros e vasos sanitrios limpos devero ser jogados no esgoto sem antes passar por um tratamento. O processo usado para a descontaminao de dejetos lquidos dever ser validado fisicamente e biologicamente. 13. Todos os laboratrios devero possuir um sistema de ventilao sem re-circulao. Os componentes de insuflao e exausto de ar do sistema devero estar equilibrados para assegurar um fluxo de ar direcionado da rea de menos risco para rea(s) de maior perigo. Recomendamos o uso de ventiladores para o abastecimento e para a liberao de ar. O fluxo de ar direcionado/presso diferencial entre as reas adjacentes dever ser monitorado e dever conter um alarme para indicar qualquer irregularidade no sistema. Um dispositivo visual que monitore a presso de maneira apropriada, que indique e confirme o diferencial da presso da sala das cabines dever ser providenciado e dever ser colocado na entrada do vestirio. O fluxo de ar nos componentes de abastecimento e escape tambm dever ser monitorado, e um sistema de controle HVAC dever ser instalado para evitar uma pressurizao positiva do laboratrio. 14. O ar que abastece a rea conjunta, o chuveiro qumico e a cmara de compresso devero passar atravs do filtro HEPA. O ar que sai desta rea conjunta, do chuveiro qumico e das cmaras de compresso e de descontaminao dever passar por dois filtros HEPA em srie antes de ser jogado para fora do laboratrio. O ar dever ser lanado distante dos espaos ocupados e das entradas de ar. O(s) filtro(s) HEPA devero estar localizados de maneira mais prxima possvel da fonte a fim de minimizar a extenso dos canos potencialmente contaminados. Todos os filtros
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HEPA devero ser testados e certificados anualmente. O abrigo para os filtros HEPA dever ser projetado de maneira que permita uma descontaminao in situ do filtro antes deste ser removido. Uma outra alternativa seria a remoo do filtro em um recipiente primrio e hermtico ao gs para subseqente descontaminao e/ou destruio atravs da incinerao. O projeto do abrigo do filtro HEPA dever facilitar a validao da instalao do filtro. O uso de filtros HEPA pr-certificados pode ser vantajoso. A vida mdia de filtros HEPA exaustores pode ser prolongada atravs de uma prfiltrao adequada do ar fornecido. 15. O posicionamento dos pontos de entrada e sada de ar dever ser de forma que os espaos de ar estticos dentro do laboratrio escafandro sejam minimizados. 16. O ar de sada tratado e o liberado das cabines de segurana biolgica Classe II, localizadas no local onde os trabalhadores vestem a roupa de presso positiva, poder ser jogado para dentro do ambiente de trabalho ou para o exterior atravs do sistema de exaustores do local. Se o ar tratado for liberado para fora atravs dos exaustores, este dever estar diretamente conectado a este sistema, de maneira que evite qualquer interferncia no equilbrio do ar das cabines ou do sistema de exaustores. 17. O projeto e procedimentos operacionais de um local de Nvel de Biossegurana 4 devero ser documentados. O local dever ser testado em funo do projeto e dos parmetros operacionais para que se verifique se realmente atendem a todas as necessidades antes que comecem a funcionar. Os locais devero ser checados novamente uma vez ao ano e os procedimentos neles existentes devero ser modificados de acordo com a experincia operacional.
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18.
Sistemas de comunicaes apropriados devero ser instalados entre o laboratrio e o exterior (por exemplo, fax, computador, interfone).
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Tabela 1. Resumo dos Nveis de Biossegurana Recomendados para Agentes Infecciosos.

NB AGENTES Que no so conhecidos por causarem doenas em adultos sadios. Associados com doenas humanas, risco = leso percutnea, ingesto, exposio da membrana mucosa. PRTICAS Prticas Padres de microbiologia EQUIPAMENTO DE SEGURANA (Barreiras Primrias) No so necessrios INSTALAES (Barreiras Secundrias) Bancadas abertas com pias prximas.
Prtica de NB-1 mais: Acesso limitado Avisos de Risco Biolgico Precaues com objetos perfurocortantes. Manual de Biossegurana que defina qualquer descontaminao de dejetos ou normas de vigilncia mdica. Prticas de NB-2 mais: Acesso controlado Descontaminao de todo o lixo Descontaminao da roupa usada no lab. antes de ser lavada. Amostra sorolgica NB-3 mais: Mudana de roupa antes de entrar. Banho de ducha na sada. Todo o material descontaminado na sada das instalaes.
Barreiras Primrias= Cabines de Clas- NB-1 mais: Autoclave disponvel. se I ou II ou outros dispositivos de conteno fsica usados para todas as manipulaes de agentes que provoquem aerossis ou vazamento de materiais infecciosos; Procedimentos Especiais como o uso de aventais, luvas, proteo para o rosto como necessrio. Barreiras Primrias = Cabines de Classe I ou II ou outros dispositivos de conteno usados para todas as manipulaes abertas de agentes; Uso de aventais, luvas, proteo respiratria quando necessria. Barreiras Primrias = Todos os procedimentos conduzidos em cabines de Classe III ou Classe I ou II juntamente com macaco de presso positiva com suprimento de ar. NB-2 mais: Separao fsica dos corredores de acesso. Portas de acesso dupla com fechamento automtico. Ar de exausto no recirculante. Fluxo de ar negativo dentro do laboratrio. NB-3 mais: Edifcio separado ou rea isolada. Sistemas de abastecimento e escape, a vcuo, e de descontaminao. Outros requisitos sublinhados no texto.
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3 4
Agentes exticos com potencial para transmisso via aerosol; a doena pode ter conseqncias srias ou at fatais.
Agentes exticos ou perigosos que impem um alto risco de doenas que ameaam a vida, infeces laboratoriais transmitidas via aerosol; ou relacionadas a agentes com risco desconhecido de transmisso.
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Critrios para os Nveis de Biossegurana para Animais Vertebrados

Caso sejam usados animais experimentais, a administrao da instituio dever fornecer instalaes adequadas, equipe para cuidar dos animais e estabelecer prticas que assegurem nveis apropriados para a qualidade, segurana e cuidados para com o meio ambiente. As instalaes para animais de laboratrio consistem de um tipo especial de laboratrio. Como princpio geral, os nveis de biossegurana (as instalaes laboratoriais, as prticas e os requisitos operacionais) indicado para o trabalho envolvendo agentes infecciosos in vivo e in vitro so similares. Porm, bom lembrarmos que as salas onde se encontram os animais podem apresentar alguns problemas singulares. No laboratrio de microbiologia, as condies de risco so provocadas pela equipe do laboratrio ou pelo equipamento usado por eles. Nas salas dos animais, as atividades dos prprios animais podem apresentar novos riscos. Os animais podem produzir aerossis, morder e arranhar e podem estar infectados por uma doena zoontica. Essas recomendaes presumem que as dependncias de um laboratrio de experimentao animal, as prticas operacionais e a qualidade do tratamento ao animal atendam a padres e regulamentos aplicveis (por exemplo, Guide for the Care and Use of Laboratory Animals1 e Laboratory Animal Welfare Regulations2) e que espcies adequadas tenham sido selecionadas para os experimentos animais. Alm deste aspecto, a organizao dever ter um plano de segurana e de sade ocupacional. A publicao recente do Institute of Medicine, Occupational Health and Safety Care of Research Animals3, auxilia muito. O ideal seria que as dependncias para animais de laboratrios usados nos estudos de doenas infecciosas ou no infecciosas possussem um isolamento fsico de outros locais, onde so realizadas atividades tais como a reproduo animal e a
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Critrios para os Nveis de Biossegurana para Animais Vertebrados
quarentena; de laboratrios clnicos e especialmente de dependncias onde pacientes so atendidos. No momento da elaborao do projeto das instalaes, deve-se considerar o fluxo de pessoas no local, de forma que minimize o risco de infeces. As recomendaes, detalhadas abaixo, descrevem quatro combinaes de prticas, equipamentos de segurana e dependncias para experimentos com animais infectados por agentes que provocam, ou que possam provocar infeces humanas. Essas quatro combinaes, designadas de Nveis de Biossegurana para Animais (NBA) 1-4, proporcionam nveis crescentes de proteo ao pessoal e ao meio ambiente, e so recomendadas como padres mnimos a serem seguidos em atividades que envolvam animais de laboratrios infectados. Os quatro nveis descrevem as dependncias para animais e prticas aplicveis para o trabalho com animais infectados por microorganismos pertencentes aos Nveis de Biossegurana 1-4, respectivamente. Os pesquisadores inexperientes quanto conduo destes tipos de procedimentos devero procurar ajuda com pessoas que possuam experincia com esse trabalho especial para que possam realiz-lo com segurana. Padres para as instalaes e prticas de manuseio de vetores e hospedeiros invertebrados no esto includos nos padres de trabalhos para animais de laboratrio comumente utilizados. O livro Laboratory Safety for Arboviruses and Certain Other Viruses of Vertebrates 4, preparado pelo Subcomit de Segurana de Laboratrios de Arbovrus (SALS) do Comit Americano de Vrus de Artrpodes, serve como uma referncia til no planejamento e operao das dependncias onde sero realizados trabalhos com artrpodes. Nvel de Biossegurana Animal 1 (NBA-1) O Nvel de Biossegurana Animal 1 (NBA-1) recomendado para o trabalho que envolva agentes bem caracterizados, que no
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Nvel de Biossegurana Animal NBA-1
sejam conhecidos por provocarem doenas em humanos adultos sadios e que apresentem um risco potencial mnimo para a equipe laboratorial e para o meio ambiente.
A.
Prticas Padres
1. O chefe do laboratrio de experimentao animal dever estabelecer normas, procedimentos e protocolos para situaes de emergncia. Cada projeto dever ser submetido a uma pr-aprovao pelo Comit Institucional de Tratamento e Uso de Animais (IACUC) e pelo Comit Institucional de Biossegurana (IBC). Quaisquer prticas especiais devero ser aprovadas neste momento. Somente as pessoas que trabalham ou que fazem parte da equipe de apoio devero receber autorizao para entrarem no local. Antes de entrarem, essas pessoas devero ser avisadas quanto aos riscos biolgicos potenciais e devero receber instrues sobre os procedimentos de segurana apropriados. Um programa de vigilncia mdica adequado dever ser institudo. Um manual de segurana dever ser preparado ou adotado. A equipe dever ser avisada sobre os riscos especiais, devero ler e seguir as instrues sobre as prticas e os procedimentos. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos. Os alimentos para uso humano devero ser guardados somente em reas designadas para esse fim, e no sero permitidos nas salas de trabalho ou nas salas dos animais. Todos os procedimentos devero ser realizados com cuidado para minimizarmos a criao de aerossis e borrifos.
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2.
3.
4.
5.
6.
7.
As superfcies de trabalho devero ser descontaminadas aps o uso ou depois de qualquer derramamento de materiais viveis. Todos os rejeitos da sala de animais (incluindo tecidos, carcaas e o material das camas de animais contaminados) devero ser transportados da sala dos animais em recipientes, rgidos, cobertos e a prova de vazamento para serem adequadamente desprezados de acordo com os requisitos locais ou institucionais aplicveis. Recomendase a incinerao. Normas quanto ao manuseio seguro de objetos cortantes devero ser institudas.
8.
9.
10. A equipe dever lavar as mos aps ter manuseado culturas e animais, depois da remoo das luvas e antes de sarem da sala dos animais. 11. Um aviso de risco biolgico dever ser colocado na entrada da sala de animais quando agentes infecciosos estiverem presentes no local. O aviso de risco dever identificar o(s) agente(s) infeccioso(s) em uso, o nome e o nmero do telefone da pessoa responsvel e indicar os requisitos especiais para a entrada na sala dos animais (por exemplo, necessidade de imunizao e do uso de respiradores). 12. Deve ser providenciado um programa rotineiro de controle de insetos e roedores (veja Apndice G). B.
Prticas Especiais:
Nenhuma.
C. Equipamentos de Segurana (Barreiras Primrias): 1. Recomenda-se o uso de jalecos, aventais e/ou uniformes prprios nas dependncias. Estes devero permanecer no local e no devero ser usados fora das dependncias do laboratrio de experimentao animal.
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2.
As pessoas que tiverem contato com primatas no-humanos devero avaliar o risco de exposio das mucosas e usar uma proteo para os olhos e a face5.
D.
1.
Instalaes (Barreiras Secundrias):

As dependncias do laboratrio de experimentao animal devero estar separadas das reas do edifcio abertas ao pblico. As portas externas do laboratrio devero ser fechadas e trancadas automaticamente. As portas das salas dos animais devero abrir para dentro, fechar automaticamente e serem mantidas fechadas quando os animais estiverem presentes. As portas internas da sala da ante-sala devero abrir para fora ou deslizarem vertical ou horizontalmente. As dependncias devero ser planejadas, construdas e mantidas de tal forma a facilitar a limpeza e a manuteno. As superfcies das paredes, pisos e tetos devero ser impermeveis a gua. Acessrios internos, como fixao de luzes, dutos de ar, e canos de gs e gua devero ser instalados de tal forma a minimizar reas de superfcie horizontal. Janelas no so recomendadas. Qualquer janela dever ser resistente a quebra. Em todos os locais possveis as janelas que porventura existirem, devero ser seladas. Se as dependncias para animais possurem janelas que so abertas, estas devero conter telas para insetos. Se houver sistema de drenagem no piso, os ralos devero sempre conter gua e/ou um desinfetante adequado. A ventilao a ser instalada dever estar de acordo com a ltima edio do Guide for Care and Use of Laboratory Animals6. No dever haver nenhuma recirculao do ar
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2.
3.
4.
5.
6.
7.
exaurido. Recomenda-se que as salas para os animais sejam mantidas com uma presso negativa em relao aos corredores adjuntos. 8. A dependncia dever conter uma pia para lavagem das mos. As caixas e gaiolas devero ser lavadas manualmente ou em uma mquina para a lavagem mecnica de caixas e gaiolas. Esta mquina dever ter enxge final com gua a uma temperatura de pelo menos 72C (1800F).
9.
10. A iluminao dever ser adequada para todas as atividades, evitando reflexos e brilhos que possam impedir a viso. Nvel de Biossegurana Animal 2 (NBA-2) O Nvel de Biossegurana Animal 2 envolve prticas para o trabalho com agentes associados a doenas humanas. Esse nvel indicado tanto para riscos advindos da ingesto, quanto para exposies da membrana mucosa e cutnea. O NBA-2 baseia-se nos requisitos de prticas padres, procedimentos, equipamentos de conteno e instalaes do NBA-1. A.
Prticas Padres
1. Alm das normas, procedimentos e protocolos padres para situaes de emergncia estabelecidas pelo diretor do local, normas e procedimentos especiais devero ser desenvolvidos quando necessrio e devero ser aprovados pelo Comit Institucional de Tratamento e Uso de Animais (IACUC) e pelo Comit Institucional de Biossegurana (IBC). O acesso s salas dos animais dever ser limitado, permitindo o acesso ao menor nmero de pessoas possvel. As pessoas que receberem autorizao para entrar nas salas para trabalharem ou realizarem algum tipo de servio quando o trabalho estiver sendo realizado, devero ser avisadas em relao aos riscos em potencial.
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2.
3.
Um programa de vigilncia mdica adequado dever ser adotado. Toda a equipe dever ser imunizada e testada contra os agentes manuseados ou potencialmente presentes (por exemplo, vacina de Hepatite B, teste cutneo para TB). Quando apropriado, um sistema de vigilncia sorolgica dever ser implementado7. Um manual de biossegurana dever ser preparado ou adotado. A equipe do laboratrio dever ser avisada sobre os riscos especiais, devero ler e seguir as instrues sobre as prticas e procedimentos. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos. Os alimentos de uso humano devero ser guardados somente em reas designadas para esse fim e no sero permitidos dentro das salas para os animais ou salas de procedimentos. Todos os procedimentos devero ser realizados com cuidado para minimizarmos a criao de aerossis e borrifos. O equipamento e as superfcies de trabalho na sala devero ser rotineiramente descontaminados com um desinfetante de ao comprovada, aps o trabalho com o agente, e especialmente depois de borrifos, derramamentos ou de outras contaminaes com materiais infecciosos. Todas as amostras infecciosas devero ser coletadas, etiquetadas, transportadas e processadas de maneira que contenha e previna a transmisso do(s) agente(s). Todos os rejeitos da sala para animais (incluindo tecidos, carcaas e o material das camas contaminadas dos animais, sobra de alimentos e objetos perfurocortantes) devero ser transportados da sala de animais em recipientes rgidos, cobertos e a prova de vazamentos, de acordo com os requisitos locais aplicveis. A superfcie exterior dos recipientes dever ser desinfetada antes do material ser
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transportado. Antes da incinerao o contedo dever ser autoclavado. 9. Normas para um manuseio seguro de objetos perfurocortantes devero ser adotadas: a. As seringas e agulhas ou outros instrumentos perfurocortantes devero ficar restritos ao laboratrio e devero ser usados somente quando no houver uma outra alternativa, como nos casos de injeo parenteral, flebotomia, aspirao de lquidos de animais e de garrafas de diafragma. b. Usar seringas que possuam envoltrio para a agulha, ou sistemas que no utilizam agulhas e outros dispositivos de segurana quando apropriados. c. Recipientes de plstico devero ser substitudos por recipientes de vidro sempre que possvel. 10. A equipe dever lavar as mos aps o manuseio de culturas e animais, aps a remoo das luvas, e antes de sair das dependncias dos animais. 11. Um aviso de risco biolgico dever ser colocado na entrada da sala dos animais sempre que houver agentes infecciosos presentes. Este aviso dever conter a identificao do(s) agente(s) infeccioso(s), dever relacionar o nome e o telefone da pessoa responsvel e dever indicar os requisitos especiais (por exemplo, necessidade de imunizao e do uso de respiradores) para a entrada na sala dos animais. 12. Um programa de controle de insetos e roedores dever ser adotado (veja Apndice G). B.
Prticas Especiais
1. As pessoas que tratam dos animais e as que do suporte ao programa, devero receber treinamento adequado sobre
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os riscos potenciais associados ao trabalho, sobre as precaues necessrias para evitar exposies e os procedimentos de avaliao da exposio. A equipe dever receber cursos anuais de atualizao, ou treinamento adicional quando forem necessrias mudanas de normas ou procedimentos. Os registros de todo o treinamento fornecido devero ser mantidos. Em geral, as pessoas expostas a um elevado risco de contaminao ou para quem as infeces possam ser perigosas, no sero permitidas dentro da sala para animais, a menos que procedimentos especiais possam eliminar os riscos extras. 2. 3. 4. Somente animais usados para o(s) experimento(s) sero permitidos na sala. Todo o equipamento dever ser adequadamente descontaminado antes de ser removido da sala. Respingos e acidentes que resultem em exposies a materiais infecciosos devero ser imediatamente relatados ao chefe do laboratrio. Uma avaliao mdica, vigilncia e tratamento devero ser providenciados e registros por escrito devero ser mantidos.
C.
Equipamento de Segurana (Barreira Primria)

1. Os aventais, uniformes, ou jalecos de laboratrio devero ser usados enquanto a pessoa estiver dentro da sala dos animais. O jaleco do laboratrio dever ser removido e mantido dentro da sala. Antes de sair da sala, os aventais, uniformes e jalecos devero ser removidos. As luvas devero ser usadas ao manipular animais infectados e quando for inevitvel o contato da pele com os animais infectados. O equipamento de proteo individual dever ser baseado nas determinaes da avaliao do risco (veja Seo V). Protetores respiratrios e para olhos/rosto devero ser usados por todos que entrarem nas salas de animais que abrigam primatas no-humanos8.
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Cabines de segurana biolgica, assim como outros dispositivos de conteno fsica e/ou equipamento de conteno fsica (por exemplo, respiradores, protetores faciais) devero ser usados ao conduzir procedimentos que apresentem um alto potencial de criao de aerossis. Estes procedimentos incluem necropsia de animais infectados, coleta de tecidos, lquidos de animais ou ovos infectados e inoculao intranasal de animais. Quando necessrio, os animais devero ser alojados em equipamentos de conteno primria apropriados s espcies animais. Sistemas com filtros de caixas ou gaiolas devero sempre ser manipuladas em cabines de bioconteno animal, recomendadas para roedores, adequadamente projetadas e operadas.
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Instalaes (Barreiras Secundrias)

1. A dependncia para animais dever ser separada das reas que so abertas ao trnsito irrestrito de pessoas dentro do edifcio. O acesso s dependncias dever ser limitado atravs de portas hermeticamente fechadas. As portas externas devero ser fechadas e trancadas automaticamente. As portas das salas dos animais devero se abrir para dentro, ser fechadas automaticamente e mantidas fechadas quando os animais estiverem presentes. As portas internas da sala da ante-sala devero ser abertas para fora ou deslizarem vertical ou horizontalmente. As dependncias devero ser planejadas, construdas e mantidas de tal forma a facilitar a limpeza e a manuteno. As superfcies das paredes, pisos e tetos devero ser impermeveis a gua. Acessrios internos, como fixao de luzes, dutos de ar, e canos de gs e gua devero ser instalados de tal forma a minimizar reas de superfcie horizontal.
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As janelas no so indicadas. Qualquer janela dever ser resistente a quebra. Em todos os locais possveis, as janelas que porventura existirem, devero ser seladas. Se houver sistema de drenagem no piso, os sifes devero sempre conter desinfetante adequado. O ar exaurido dever ser jogado para o lado de fora do prdio, sem recircular por outras salas. A ventilao a ser instalada dever estar de acordo com a ltima edio do Guide for Care and Use of Laboratory Animals. A direo do fluxo de ar na sala dos animais dever ser para dentro; e as salas para os animais devero ser mantidas sob presso negativa em relao aos corredores adjuntos. As caixas e gaiolas devero ser lavadas manualmente ou em uma mquina para a lavagem mecnica de caixas e gaiolas. Esta mquina dever ter enxge final com gua a uma temperatura de pelo menos 72C (1800F). Dever existir uma autoclave dentro do laboratrio de experimentao animal para descontaminao do lixo infeccioso.
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10. A sala de manuteno de animais infectados dever conter uma pia para lavagem das mos, assim como em qualquer outro lugar do laboratrio. 11. A iluminao dever ser adequada para todas as atividades, evitando reflexos e brilhos que possam impedir a viso. Nvel de Biossegurana Animal 3 (NBA 3) O Nvel de Biossegurana Animal 3 envolve as prticas adequadas para o trabalho com animais infectados por agentes nativos ou exticos que apresentem potencial elevado de transmisso por aerossis e risco de provocar doenas fatais ou srias. O NBA-3 baseia-se nos requisitos de prticas padres,
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procedimentos, equipamentos de conteno e instalaes do NBA-2. A. Prticas Padres 1. Alm das normas, procedimentos e protocolos padres para situaes de emergncia estabelecidas pela chefia do laboratrio, normas e procedimentos especiais devero ser desenvolvidos quando necessrio e devero ser aprovadas pelo Comit Institucional de Tratamento e Uso de Animais (IACUC) e pelo Comit Institucional de Biossegurana (IBC). O chefe do laboratrio limitar o acesso s salas dos animais, ao menor nmero de pessoas possvel. As pessoas que receberem autorizao de entrada, para trabalharem ou realizarem algum tipo de servio, devero ser avisadas em relao ao risco em potencial. Um programa de vigilncia mdica adequado dever ser adotado. Toda a equipe dever ser imunizada e testada contra os agentes manuseados ou potencialmente presentes (por exemplo, vacina de Hepatite B, teste cutneo para TB). Quando apropriado, um sistema de vigilncia sorolgica dever ser adotado9. Em geral, as pessoas que podem estar passando por um risco crescente de adquirirem a infeco ou para quem as infeces possam ter srias conseqncias, no sero permitidas dentro da sala para animais, a menos que procedimentos especiais possam eliminar os riscos extras. Um manual de biossegurana dever ser preparado ou adotado. A equipe do laboratrio dever ser avisada sobre os riscos especiais, devero ler e seguir as instrues sobre as prticas e procedimentos. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos. Os alimentos de uso humano devero ser guardados somente em reas designadas para esse
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fim e no sero permitidos dentro das salas para animais ou das salas de procedimentos. 6. Todos os procedimentos devero ser realizados cuidadosamente para minimizar a produo de aerossis e borrifos. Os equipamentos e as superfcies de trabalho na sala devero ser rotineiramente descontaminados com desinfetante que possua ao comprovada, aps o trabalho com agentes infecciosos, e especialmente aps borrifos, derramamentos ou outras contaminaes com materiais infecciosos tenham ocorrido. Todos os rejeitos da sala de animais (incluindo tecidos, carcaas e o material das camas dos animais contaminados, alimentao que no tenha sido utilizada e objetos perfurocortantes) devero ser transportados da sala dos animais em recipientes rgidos, a prova de vazamentos e cobertos, para serem desprezados de forma adequada e de acordo com os requisitos locais ou institucionais aplicveis. Recomendamos a incinerao. A superfcie externa dos recipientes dever ser desinfetada antes da remoo do material (veja Prticas Especiais N 3 abaixo). Normas quanto ao manuseio seguro de objetos perfurocortantes devero ser institudas. a. As seringas e agulhas ou outros instrumentos perfurocortantes devero ser restritos ao laboratrio e somente usados quando no houver outra alternativa, como nos casos de injeo parenteral, flebotomia, aspirao de lquidos de animais e de garrafas de diafragma. Os recipientes de plstico devero ser substitudos por recipientes de vidro sempre que possvel. b. As seringas que possuem um envoltrio para a agulha, ou sistemas sem agulhas e outros dispositivos de segurana devero ser utilizados quando necessrios.
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c. Vasilhas plsticas devero ser substitudas por vasilhames de vidro sempre que possvel. 10. A equipe dever lavar as mos aps ter manuseado culturas e animais, depois da remoo das luvas e antes de sair da sala dos animais. 11. Um aviso de risco biolgico dever ser colocado na entrada da sala do laboratrio de experimentao animal, quando agentes infecciosos estiverem presentes no local. O aviso de risco dever identificar o(s) agente(s) infeccioso(s) em uso, relacionar o nome e o nmero do telefone da pessoa responsvel e indicar os requisitos especiais para a entrada na sala dos animais (por exemplo, necessidade de imunizao e do uso de respiradores). 12. Todas as amostras infecciosas devero ser coletadas, etiquetadas, transportadas e processadas de maneira que faam a devida conteno e previnam a transmisso de agentes. 13. As pessoas que cuidam dos animais de laboratrio e as que do suporte ao programa, devero receber treinamento adequado sobre os riscos potenciais associados ao trabalho, sobre as precaues necessrias para evitar exposies e os procedimentos de avaliao da exposio. A equipe dever receber cursos anuais de atualizao, ou treinamento adicional quando forem necessrias mudanas de normas ou procedimentos. Os registros de todo o treinamento fornecido devero ser mantidos. 14. Um programa de controle de insetos e roedores dever ser adotado. B. Prticas Especiais 1. As caixas e gaiolas dos animais devero passar pela autoclave ou tero que ser descontaminadas antes que o
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material da cama seja removido e antes de serem lavadas. O equipamento dever ser descontaminado de acordo com as normas locais, estaduais ou federais antes de ser embalado para transporte ou remoo do local, para reparo ou manuteno. 2. Deve-se desenvolver um procedimento para o caso de respingos. Somente o pessoal adequadamente treinado e equipado para trabalhar com materiais infecciosos dever limpar os respingos. Respingos e acidentes que resultem em uma exposio direta com materiais infecciosos devero ser imediatamente relatados ao chefe do laboratrio. Uma avaliao mdica, vigilncia e tratamento devero ser providenciados e registros por escrito devero ser mantidos. Todos os rejeitos provenientes das salas de animais devero passar pela autoclave antes de serem incinerados ou serem tratados atravs de outro mtodo de esterilizao. Os materiais que no tiverem relao alguma com o experimento (por exemplo, plantas ou animais que no forem ser utilizados no ensaio) no sero permitidos na sala.
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C. Equipamento de Segurana (Barreiras Primrias)

1. Uniformes ou roupas especficos devero ser usadas pelas pessoas que entrarem na sala de animais. Estas vestimentas tero toda frente protegida, ou seja, as vestimentas que so abotoadas na frente no so adequados. O uniforme dever ser retirado e deixado na sala de animais NBA-3. Antes de sair das salas, as roupas ou uniformes devero ser removidos e adequadamente acondicionados e descontaminados antes de serem lavados ou descartados (no caso de uniformes descartveis). O equipamento de proteo individual dever ser usado de acordo com as determinaes da avaliao de riscos. a. O equipamento de proteo individual dever ser usado em todas as atividades envolvendo manipulaes de material infeccioso ou de animais infectados.
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b. A equipe dever usar luvas ao manusear animais infectados. Essas luvas devero ser removidas assepticamente e autoclavadas juntamente com outros lixos da sala de animais antes de serem descartadas. c. Protetores respiratrios e para olhos/rosto devero ser usados por todos que entrarem nas salas de animais. d. Botas, sapatilhas ou pr-ps ou outro tipo de proteo para os ps, e banhos desinfetantes para os ps ou lava-ps devero ser avaliados e usados onde forem indicados. 3. Podemos reduzir o risco de formao de aerossis infecciosos advindos da manipulao de animais infectados ou dos materiais utilizados nas camas infectadas, se os animais forem colocados em sistemas de confinamento parcial, como caixas cobertas com filtros e paredes rgidas, colocadas em locais com ventilao direcionada para o interior das mesmas (por exemplo, cabines de fluxo laminar), ou outros sistemas similares de conteno primria. As cabines de segurana biolgica e outros dispositivos de conteno fsica devero ser usados ao conduzir procedimentos que possuam um alto risco de criao de aerossis. Esses incluem a necropsia de animais infectados, coleta de tecidos, lquidos de animais ou ovos infectados e inoculao intranasal de animais. Em um laboratrio NBA3, todo o trabalho dever ser realizado em uma barreira primria, caso contrrio as pessoas devero usar protetores respiratrios dentro da sala.
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D. Instalaes (Barreiras Secundrias)

1. A dependncia para os animais dever ser separada das reas que so abertas ao trnsito irrestrito de pessoas dentro do edifcio.
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O acesso s dependncias dever ser limitado atravs de portas que se fecham e se trancam automaticamente, com sistema de intertravamento, ou leitura tica ou carto magntico. A entrada de pessoal para a sala dos animais dever ser realizada atravs de uma antecmara pressurizada, que dever incluir chuveiro(s) e um vestirio para troca de roupa. Um acesso adicional com porta dupla (air-lock) dever ser construdo ou uma autoclave com porta dupla dever existir no local para o fluxo de suprimentos e rejeitos dentro e fora do laboratrio, respectivamente. As portas para as salas de animais devero se abrir para dentro e devero se fechar automaticamente. As portas internas da ante-sala dentro de uma sala para animais devero ser abertas para fora ou deslizarem vertical ou horizontalmente. As instalaes de um laboratrio de experimentao animal NBA-3 devero ser planejadas, construdas e mantidas de forma que facilitem a limpeza e a manuteno. As superfcies das paredes, pisos e tetos devero ser impermeveis a gua. Selar as juntas, fendas ou aberturas em paredes, pisos e tetos. Penetraes das linhas de servio, tais como gua, luz, gs, e outras devem ser vedadas e os espaos entre as portas e esquadrias devero permitir um selamento para facilitar a descontaminao do ambiente. Cada sala para animais dever conter uma pia para lavagem das mos acionada automaticamente ou sem o uso das mos perto das portas de sada. O sifo da pia dever conter um desinfetante adequado aps o uso da mesma. Acessrios internos, como fixao de luzes, dutos de ar, e canos de gs e gua devero ser instalados de tal forma a minimizar reas de superfcie horizontal. Qualquer janela dever ser resistente a quebra. Em todos os locais possveis, as janelas que porventura existirem, devero ser vedadas. Se as instalaes para animais possurem janelas que so abertas, estas devero conter telas contra insetos.
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Se houver sistema de drenagem no piso, estes devero sempre conter um desinfetante adequado. A ventilao instalada dever estar de acordo com a ltima edio do Guide for Care and Use of Laboratory Animals. Os sistemas de entrada de ar e exausto devem ser interligados. Esse sistema cria um fluxo de ar direcionado, retirando o ar contaminado de dentro do laboratrio, jogando-o para fora e ao mesmo tempo retira o ar das reas limpas e o joga para dentro do laboratrio. O ar exaurido no pode recircular em nenhuma outra rea do prdio. Filtrao ou outros tipos de tratamento do ar exaurido podem no ser necessrios, mas devero ser considerados, baseados nos requisitos do local, nos microorganismos especficos manipulados e nas condies de uso. O ar exaurido dever ser lanado para longe de reas ocupadas e de entradas de ar, ou poder ser filtrado atravs de filtros HEPA. A equipe dever verificar se a direo do ar insuflado (para dentro das reas dos animais) est apropriada. Recomenda-se o uso de monitores visuais que indiquem e confirmem o fluxo de ar direcionado para dentro do recinto. Devemos considerar a instalao de um sistema de controle de HVAC para evitar a pressurizao positiva nas reas onde esto os animais. Alarmes audveis devem ser considerados para evidenciar qualquer falha no sistema de controle HVAC. O ar filtrado pelo HEPA de uma cabine de segurana biolgica Classe II poder recircular dentro da sala para animais se a cabine for testada e aprovada anualmente. Quando o ar exaurido das cabines de segurana biolgica classe II, for lanado para fora do ambiente de trabalho, atravs do sistema de exausto do edifcio, as cabines devero estar conectadas de maneira que evitem qualquer interferncia no equilbrio do ar das cabines ou do sistema de exausto do edifcio (por exemplo, uma conexo metlica entre o exaustor das cabines e que se prende ao duto dos exaustores do edifcio). Quando as cabines de segurana
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biolgica Classe III forem utilizadas, elas devero estar conectadas diretamente ao sistema de exausto. Se as cabines de Classe III estiverem conectadas ao sistema de insuflao, isto dever ser feito de tal maneira que previna a pressurizao positiva das cabines (veja Apndice A). 10. As caixas e gaiolas devero ser lavadas manualmente ou em uma mquina para a lavagem mecnica de caixas e gaiolas. Esta mquina dever ter enxge final com gua a uma temperatura de pelo menos 72C (1800F). 11. Dever existir uma autoclave dentro da sala de experimentao animal NBA-3, onde o risco est contido, para descontaminao de lixo infeccioso antes de ser removido para outras reas do local. 12. Se houver um sistema de vcuo (por exemplo, central ou local), cada conexo de servio dever possuir um sifo contendo desinfetante lquido e um filtro HEPA em linha, colocado o mais prximo possvel de cada ponto de uso ou da vlvula de servio. Os filtros devero ser instalados de tal forma que permitam a descontaminao e a substituio dos mesmos no local. 13. A iluminao dever ser adequada para todas as atividades, evitando reflexos e brilhos que possam impedir a viso. 14. O projeto de edificao e os procedimentos operacionais do laboratrio de experimentao animal NBA-3, deve ser documentado. O local dever ser testado em funo do projeto e dos parmetros operacionais para verificarmos se realmente eles atendem a todas as necessidades antes que comecem a operar. Os locais devero ser checados novamente pelo menos uma vez ao ano e os procedimentos neles existentes devero ser modificados de acordo com a experincia operacional. 15. Protees adicionais ao meio ambiente (por exemplo, chuveiros para a equipe, filtros HEPA para filtrao do ar
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exaurido, conteno de outras linhas de servios, e a proviso da descontaminao dos efluentes) devero ser considerados, se recomendados devido s caractersticas dos agentes manipulados, determinado pela avaliao do risco das condies locais, ou por outros regulamentos locais, estaduais ou federais. Nvel de Biossegurana Animal 4 (NBA-4) O Nvel de Biossegurana Animal 4 envolve as prticas adequadas para o trabalho com agentes perigosos ou exticos que exponha o indivduo a um alto risco de infeces que podem ser fatais, alm de apresentarem um potencial elevado de transmisso por aerossis ou de agentes relacionados com um risco de transmisso desconhecido. O NBA-4 baseia-se nos requisitos de prticas, procedimentos, equipamento de conteno e instalaes padres do NBA-3. Os procedimentos devero ser desenvolvidos no prprio local para direcionar as operaes especficas das cabines de segurana biolgica Classe III ou no laboratrio escafandro.
A. Prticas Padres
1. Alm das normas, procedimentos e protocolos padres para situaes de emergncia estabelecidas pela chefia do laboratrio, normas e procedimentos especiais devero ser desenvolvidos, quando necessrio, e devero ser aprovadas pelo Comit Institucional de Tratamento e Uso de Animais (IACUC) e pelo Comit Institucional de Biossegurana (IBC). O chefe do laboratrio dever limitar o acesso s salas dos animais, permitindo o acesso ao menor nmero de pessoas possvel. As pessoas que receberem autorizao de entrada, para trabalharem ou realizarem algum tipo de servio, devero ser avisadas em relao ao risco em potencial. Um programa de vigilncia mdica adequado dever ser adotado para todas as pessoas que entrarem em um
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laboratrio NBA-4. Esse programa dever incluir imunizaes, coleta para acompanhamento sorolgico, disponibilidade de aconselhamento ps-exposio e potencial profilaxia10. Em geral, as pessoas que podem estar passando por um crescente risco de adquirirem a infeco ou para quem as infeces possam ser perigosas, no sero permitidas dentro da sala para animais a menos que procedimentos especiais possam eliminar os riscos extras. A avaliao dever ser realizada pelo mdico do trabalho. 4. Um manual de biossegurana especfico para o local dever ser preparado ou adotado. A equipe do laboratrio dever ser avisada sobre os riscos especiais, devero ler e seguir as instrues sobre as prticas e procedimentos. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos. O alimento de uso humano dever ser guardado somente em reas designadas para esse fim e no ser permitido dentro das salas para os animais ou salas de procedimentos. Todos os procedimentos devero ser realizados cuidadosamente para minimizar a produo de aerossis e borrifos. Os equipamentos e as superfcies de trabalho na sala devero ser rotineiramente descontaminados com desinfetante que possua ao comprovada, aps o trabalho com agentes infecciosos, e especialmente aps borrifos, derramamentos ou outras contaminaes com materiais infecciosos tenham ocorrido. Um procedimento para borrifos dever ser desenvolvido e institudo. Somente o pessoal adequadamente treinado e equipado para esse tipo de trabalho dever limpar os borrifos de materiais infecciosos. Borrifos e acidentes que resultem em uma exposio direta com materiais infecciosos devero ser imediatamente relatados ao chefe do
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laboratrio. Uma avaliao mdica, vigilncia e tratamento devero ser providenciados e registros por escrito devero ser mantidos. 9. Todos os rejeitos provenientes das salas de animais (incluindo tecidos animais, carcaas e material da cama contaminado), outros materiais que sero descartados e as roupas ou uniformes usados que iro ser encaminhados para a lavanderia, devero ser esterilizadas em uma autoclave de porta dupla (veja B-4 abaixo). Recomendamos a incinerao de materiais descartveis.
10. Normas quanto ao manuseio seguro de objetos perfurocortantes devero ser institudas. a. As seringas e agulhas ou outros instrumentos perfurocortantes devero ser restritos a sala dos animais e devero ser usados somente quando no houver uma outra alternativa, como nos casos de injeo parenteral, coleta de sangue ou aspirao de lquidos de animais de laboratrio e de garrafas de diafragma. b. As seringas que possuem um envoltrio para a agulha, ou sistemas sem agulhas e outros dispositivos de segurana devero ser utilizados quando necessrios. c. Vasilhas plsticas devero ser substitudas por vasilhames de vidro sempre que possvel. 11. Um aviso de risco biolgico dever ser colocado na entrada da sala do laboratrio de experimentao animal, quando agentes infecciosos estiverem presentes no local. O aviso de risco dever identificar o(s) agente(s) infeccioso(s) em uso, relacionar o nome e o nmero do telefone da pessoa responsvel e indicar os requisitos especiais para a entrada na sala dos animais (por exemplo, necessidade de imunizao e do uso de respiradores). 12. As pessoas que cuidam dos animais de laboratrio e as que do suporte ao programa devero receber treinamento
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adequado sobre os riscos potenciais associados ao trabalho, sobre as precaues necessrias para evitar exposies e os procedimentos de avaliao da exposio. A equipe dever receber cursos anuais de atualizao, ou treinamento adicional quando forem necessrias mudanas de normas ou procedimentos. Os registros de todo o treinamento fornecido devero ser mantidos. 13. As caixas e gaiolas dos animais devero passar pela autoclave ou tero que ser descontaminadas antes que o material da cama seja removido e antes de serem lavadas. Os equipamentos e as superfcies de trabalho devero ser rotineiramente descontaminados com desinfetante que possua ao comprovada, aps o trabalho com materiais infecciosos, e especialmente depois de borrifos, derramamentos ou outras contaminaes com materiais infecciosos tenham ocorrido. Os equipamentos devero ser descontaminados de acordo com qualquer regulamento local, estadual ou federal antes de ser removido do local para reparo ou manuteno. 14. As pessoas responsveis pelo trabalho com animais infectados devero trabalhar em pares. Baseado na avaliao dos riscos (veja Seo V), procedimentos, tais como o uso de caixas ou gaiolas de conteno, realizao de trabalho somente com animais anestesiados ou outros, que visem reduzir as possveis exposies do trabalhador devero ser adotados. 15. Os materiais no relacionados ao ensaio (por exemplo, plantas e animais que no forem ser utilizados) no sero permitidos no local.
B. Prticas Especiais
1. Medidas adicionais devero ser efetivadas para controle do acesso (por exemplo, um sistema de guarda durante 24 horas para entrada e sada de pessoas). A equipe dever
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entrar ou sair do local somente atravs do vestirio e das salas de banhos. Cada vez que sarem do local, a equipe dever tomar banho. A entrada ou a sada de pessoal por antecmara pressurizada somente dever ocorrer em situaes de emergncia. 2. Em uma operao na cabine de segurana biolgica Classe III, a roupa do pessoal dever ser retirada no vestirio externa e deixada l mesmo. O traje laboratorial completo, incluindo peas ntimas, calas e camisas ou macaces, sapatos e luvas devero ser fornecidos e usados pelo pessoal. Ao sair, devero retirar os trajes laboratoriais no vestirio interno antes de entrar na sala de banho. A roupa suja (usada) dever ser esterilizada na autoclave. Nos procedimentos operacionais em laboratrios NBA-4, dever ser necessria a mudana completa de roupa. Um banho ser necessrio aps a remoo da roupa descontaminada. As roupas sujas do laboratrio devero ser autoclavadas antes de serem lavadas. Os materiais e suprimentos que forem introduzidos no laboratrio devero passar por uma autoclave de porta dupla ou por uma cmara de fumigao. Depois que a porta externa estiver trancada, as pessoas dentro do laboratrio devero abrir a porta interna e retirar os materiais. As portas da autoclave e da cmara de fumigao devero ser interligadas de maneira que a porta externa s seja aberta depois que o ciclo de esterilizao tenha sido concludo ou depois que a cmara de fumigao tenha sido descontaminada. Um sistema para notificao de acidentes, incidentes, exposies e absentesmo deve ser estabelecido, e um outro sistema para a vigilncia mdica de doenas potencialmente associadas ao trabalho em laboratrio. Um aspecto essencial para esta vigilncia/notificao a disponibilidade de um local para quarentena, isolamento e
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atendimento mdico de pessoas com suspeitas de contaminao. 6. As amostras sorolgicas coletadas devero ser analisadas periodicamente. Os resultados devero ser comunicados aos participantes.
C. Equipamento de Segurana (Barreiras Primrias)

1. Os animais infectados com microorganismos da classe de risco 4 devero ser alojados dentro de cabines de segurana biolgica classe III em um laboratrio NBA-4. Em um laboratrio NBA-4 escafandro, toda a equipe dever vestir macaces com presso positiva e ventilados com um sistema de suporte de vida. Os animais infectados devero ser alojados em um sistema de conteno parcial (como em caixas abertas colocadas em locais ventilados, caixas de paredes slidas, possuindo um sistema de ventilao e a exausto feita atravs de filtros e abertas em fluxos laminares ou outros sistemas de conteno primria equivalentes). O uso de materiais descartveis que no requerem limpeza, incluindo caixas e gaiolas de animais, devero ser levadas em considerao. Esses materiais descartveis devero passar pela autoclave na sada do laboratrio e depois incinerados.
2.
D.
Instalaes (Barreiras Secundrias)
Os laboratrios NBA-4 podero ser includos como uma parte integrante dos Laboratrios NBA-4 de Cabine ou aos Laboratrios NBA-4 de Escafandro como descrito na Seo III deste documento. Os requisitos para instalaes descritos na seo Laboratrio NB-4 devero ser utilizados juntamente com o uso das caixas descritas na seo de equipamentos acima.
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Referncias: 1. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, National Academy Press, Washington, DC, 1996. 2. U.S. Department of Agriculture. Laboratory Animal Welfare Regulations 9 CRF, Subchapter A, Parts 1, 2 and 3. 3. Occupational Health and Safety in the Care of Research Animals. National Academy Press, Washington, D.C., 1996. 4. Subcommittee on Arbovirus Laboratory Safety for Arbovirus and Certain Other Viruses for Vertebrates. 1980. Am J Trop Med Hyg 29(6): 1359-1381. 5. Centers for Disease Control and Prevention. 1998. Fatal Cercopithecine herpesvirus 1 (B Virus) Infection Following a Mucocutaneous Exposure and Interim Recommendations for Worker Protection. MMWR 47 (49); 1073-6, 1083. 6. Guide for the Care ands Use of Laboratory Animals (1) 7. Occupational Health and Safety in the Care of Research Animals (3). 8. Centers for Disease Control and Prevention. 1998. (5) 9. Occupational Health and Safety in the Care of Research Animals (3) 10. Occupational Health and Safety in the Care of Research Animals. (3)
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Tabela 1. Resumo dos Nveis de Biossegurana Recomendados para as Atividades nas quais Animais Vertebrados Infectados Naturalmente ou Experimentalmente so Utilizados.
BSL Agentes Desconhecidos por causarem doenas em adultos humanos sadios Prticas Cuidado com o animal e prticas de gerenciamento padres, incluindo programas de vigilncia mdica adequados. Equipamentos de Segurana (Barreiras Primrias) Cuidados normais, solicitados, por cada espcie. Instalaes (Barreiras Secundrias) Instalaes animal padres. - Nenhuma recirculao do ar exaurido. - Recomendao de fluxo de ar direcionado. - Recomendao de pia para lavagem de mo. Instalaes de NBA-1 mais: - Autoclave disposio. - Pia para lavagem de mos dentro da sala de animais. - Uso de lavagem mecnica das caixas e gaiolas.
Associados com doenas humanas. Risco: exposio cutnea, ingesto, exposio da membrana mucosa.
Prticas de NBA-1 mais: - Acesso limitado. - Avisos de risco - Precauo com objetos perfurocortantes. - Manual de biossegurana. - Descontaminao de todo o lixo infeccioso e de caixas e gaiolas de animais antes da lavagem. Prticas de NB-2 mais: Acesso controlado Descontaminao de todo o lixo Descontaminao da roupa usada no lab. antes de ser lavada. Amostra sorolgica
Equipamento de NBA-1 mais barreiras primrias: equipamento de conteno adequado para espcies animais; PPES: jalecos, luvas, proteo facial e respiradores quando necessrios.
Agentes nativos ou exticos com elevado potencial de transmisso por aerossis; doenas que podem causar srios danos sade.
Prticas de NBA-2 mais: - Acesso controlado. - Descontaminao das roupas antes de serem lavadas. - Descontaminao das caixas e gaiolas antes do material da cama ser removida. - Lavagem dos ps com desinfetante.
Equipamento de NBA-2 mais: - Equipamento de conteno para manuteno dos animais. - Cabines SB de Classe I ou II para manipulaes (inoculao, necropsia) que possam criar aerossis infecciosos. PPEs: proteo respiratria adequada. Instalaes de NBA-2 mais: - Separao fsica dos corredores de acesso. - Fechamento automtico, porta dupla de acesso. - Linhas de penetraes seladas. - Janelas vedadas. - Autoclave presente no local. Instalaoes de NBA-3 mais: - Edifcio separado ou rea isolada. - Sistemas de insuflao e exausto, vcuo e sistemas de descontaminao. - Outros requisitos enfatizados no texto.
Agentes exticos ou perigosos que imponham alto risco de doena fatal, transmisso por aerossis, ou relacionada a agentes com risco de transmisso desconhecido.
Prticas de NBA-3 mais: - Entrada atravs do vestirio para troca de roupa onde a roupa pessoal removida e a do laboratrio vestida; banho na sada. - Todos os lixos devero ser descontaminados antes da remoo do local.
Equipamento de NBA-3 mais: - Equipamento de mxima conteno (CSB Classe III ou de conteno parcial junto com macaco pressurizado positivamente com ar) usado para todas as atividades e procedimentos.
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SEO V
Avaliao dos Riscos

A palavra risco indica a probabilidade que um dano, um ferimento ou uma doena ocorra. No contexto dos laboratrios biomdicos e de microbiologia, a avaliao do risco se concentra primariamente na preveno de infeces relacionadas aos laboratrios. Ao enderear atividades laboratoriais que envolvam materiais infecciosos ou potencialmente infecciosos, a avaliao do risco um exerccio essencial e produtivo. Ele auxilia a designar os nveis de biossegurana (instalaes, equipamentos e prticas) que reduziro para um risco mnimo, a exposio de trabalhadores e do meio ambiente a um agente perigoso. A inteno desta seo a de fornecer um guia e o de estabelecer parmetros para a seleo do apropriado nvel de biossegurana. A avaliao do risco pode ser qualitativa ou quantitativa. Na presena de riscos conhecidos (por exemplo, nveis residuais de gs de formaldedo depois da descontaminao do laboratrio), a avaliao quantitativa poder ser realizada. Mas em muitos casos, os dados quantitativos estaro incompletos ou ausentes (por exemplo, a investigao de um agente desconhecido ou de uma amostra sem rtulo). Os tipos, subtipos e variantes dos agentes infecciosos envolvendo vetores diferentes ou raros, a dificuldade de avaliar as medidas de um potencial de amplificao do agente e as singulares consideraes dos recombinantes genticos so alguns dos vrios desafios na conduo segura de um laboratrio. Diante tal complexidade, nem sempre os mtodos de amostragem quantitativa significativos esto nossa disposio. Desta forma, o processo de avaliao do risco para o trabalho com materiais biolgicos perigosos pode no depender de um algoritmo prescrito. O diretor do laboratrio ou o principal pesquisador dever ser o responsvel pela avaliao dos riscos que implique no estabelecimento de nveis de biossegurana para o trabalho. Isto dever ser realizado em colaborao com o Institutional Biosafety Committee (e/ou outros profissionais ou instituies se necessrio) para assegurar a obedincia s normas e regras estabelecidas.
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Avaliao dos Riscos
Ao realizar a avaliao do risco qualitativo, todos os fatores de risco devero ser identificados e explorados. Informaes relacionadas devero estar disponveis, na forma de um manual. Consultas s Normas do NIH de DNA Recombinante, Normas de Biossegurana em Laboratrios Canadenses e Normas de Segurana da Organizao Mundial de Sade devero ser consideradas. Em alguns casos, devemos confiar nas fontes de informaes, como os dados de campo de um expert no assunto. Essa informao dever ser interpretada pela sua tendncia em aumentar ou diminuir o risco de uma infeco adquirida em laboratrio1. O desafio da avaliao do risco se encontra naqueles casos onde uma informao completa sobre esses fatores no est nossa disposio. Uma abordagem conservadora geralmente aconselhada quando as informaes forem insuficientes nos forando a um julgamento subjetivo. As Precaues Universais devero sempre ser recomendadas. Os fatores de interesse em uma avaliao dos riscos incluem: A patogenicidade do agente infeccioso ou suspeito, incluindo a incidncia e gravidade da doena (ex. morbidade mdia contra uma mortalidade alta, doena aguda versus doena crnica). Quanto mais grave a potencialidade da doena adquirida, maior ser o risco. Por exemplo, o Sthaphilococcus aureus raramente provoca uma doena grave ou fatal em um indivduo contaminado em um laboratrio e est relegado ao NB-2. J vrus como o Ebola, Marburg e da febre de Lassa, que provocam doenas com alta taxa de mortalidade e para as quais no existem vacinas ou tratamentos so trabalhadas em um NB-4. Porm, a gravidade da doena precisa ser amenizada por outros fatores. O trabalho com um vrus humano de imunodeficincia (HIV) e com o vrus da Hepatite B tambm feito em um NB-2, embora eles possam causar uma doena potencialmente fatal. Mas esses vrus no so transmitidos atravs de aerossis, e
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a incidncia de uma infeco adquirida em laboratrio extremamente baixa para o HIV. No caso da Hepatite B, j existe uma vacina eficaz contra esta patologia. A via de transmisso (por exemplo, parenteral, via area ou por ingesto) de agentes isolados recentemente pode no estar definitivamente estabelecida. Os agentes que podem ser transmitidos via aerosol tm provocado grande parte das infeces laboratoriais. Ao planejar o trabalho com um agente relativamente no caracterizado e com um modo de transmisso desconhecido, o mais seguro considerar o potencial de transmisso por via aerosol. Quanto maior o potencial do aerosol, maior o risco. A estabilidade do agente um aspecto que envolve no somente a infectividade de aerossis (por exemplo, de bactrias formadoras de esporos), mas tambm a capacidade de sobreviver por um tempo extra do agente no meio ambiente. Fatores como a dissecao, a exposio luz solar ou ultravioleta, ou a exposio a desinfetantes qumicos dever ser considerada. A dose infecciosa do agente um outro fator a ser considerado. A dose infecciosa pode variar de uma a milhares de unidades. A natureza complexa da interao dos microorganismos e do hospedeiro apresenta um desafio significativo at mesmo para o mais saudvel e imunizado trabalhador de laboratrio, e pode impor um srio risco queles com menos resistncia. O grau de imunizao do trabalhador do laboratrio est diretamente relacionado sua susceptibilidade doena provocada por um agente infeccioso. A concentrao (nmero de organismos infecciosos por unidade de volume) ser importante na determinao do risco. Essa determinao dever considerar o meio que contm o organismo (por exemplo, tecido slido, sangue viscoso ou escarro ou meio lquido) e a atividade
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laboratorial planejada (por exemplo, amplificao, sonificao ou centrifugao do agente). O volume do material concentrado a ser manipulado tambm importante. Na maioria dos casos, os fatores de risco aumentam com o aumento do volume de trabalho de microorganismos de alta titulao, uma vez que um manuseio adicional dos materiais freqentemente solicitado. A origem do material potencialmente infeccioso tambm fundamental para a avaliao dos riscos. A palavra origem pode se referir localizao geogrfica (por exemplo, domstico ou originrios de outros pases); hospedeiro (por exemplo, animal ou ser humano infectado ou no); ou natureza da fonte (por exemplo, potencialmente zoontica ou associada a um outro surto de doena). Sob outro ngulo, esse fator pode tambm levar em considerao o potencial dos agentes que ameaam as aves e os animais de criao. A disponibilidade de dados gerados por estudos animais, na falta de dados humanos, poder fornecer informaes teis para uma avaliao do risco. As informaes sobre a patogenicidade, a infectividade e a via de transmisso em animais podem proporcionar informaes valiosas. Porm, sempre devemos tomar cuidado em traduzir dados de uma espcie animal para os de outras espcies. A disponibilidade de uma profilaxia eficaz estabelecida ou de uma interveno teraputica outro fator importante a ser considerado. A forma mais comum de profilaxia a imunizao com uma vacina eficiente. A avaliao do risco inclui a determinao da disponibilidade de imunizaes eficazes. Em alguns casos, a imunizao pode afetar o nvel de biossegurana (por exemplo, o vrus Junin do grupo NB-4 pode ser trabalhado no NB-3 por um trabalhador imunizado). A imunizao tambm pode ser
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Avaliao dos Riscos
passiva (por exemplo, o uso de uma imunoglobulina sorolgica nas exposies ao HBV). Apesar de importante, a imunizao somente servir como uma camada adicional de proteo mediante os controles de engenharia, as prticas e procedimentos padres e o uso de equipamento de proteo individual. Ocasionalmente, a imunizao ou a interveno teraputica (terapia com antibiticos ou antiviral) pode ser particularmente importante nas condies de campo. A oferta de imunizaes parte do gerenciamento do risco. A vigilncia mdica assegura que as normas de segurana decididas realmente produzam os resultados positivos esperados. A vigilncia mdica tambm parte da administrao do risco. Podemos incluir o banco de soro, monitoramento da condio de sade do trabalhador e a participao em um gerenciamento ps-exposio. A avaliao do risco tambm pode incluir uma avaliao da experincia e nvel de capacitao das pessoas expostas a riscos como os laboratoristas e as pessoas que cuidam dos animais, da limpeza e manuteno (veja Seo III). Uma educao adicional tambm pode ser necessria para garantir a segurana das pessoas que trabalham em cada um dos nveis de biossegurana.
Os agentes infecciosos cujo risco avaliado freqentemente sero classificados em uma destas categorias: Materiais contendo agentes infecciosos conhecidos. As caractersticas da maioria dos agentes infecciosas so conhecidas. As informaes teis para a avaliao do risco podem ser obtidas atravs de pesquisas laboratoriais, vigilncia da doena e estudos epidemiolgicos. Os agentes infecciosos conhecidos por causarem infeces associadas a laboratrio esto includas no Resumo das Caractersticas dos Agentes neste volume (veja Seo VII). Outras fontes incluem o manual do American Public Health Association, Control of Communicable Diseases 2. Os artigos
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Avaliao dos Riscos
literrios sobre infeces adquiridas em laboratrio tambm podero ser teis3, 4, 5, 6, 7, 8. Materiais contendo agentes infecciosos desconhecidos. O desafio aqui estabelecer o nvel de biossegurana mais adequado tendo, em mos, somente informaes limitadas. Com freqncia essas sero amostras clnicas. Algumas perguntas que podero auxili-lo em uma avaliao do risco so as seguintes: 1. Por que um agente infeccioso considerado suspeito? 2. Quais so os dados epidemiolgicos disponveis? Qual via de infeco indicada? Qual o ndice de morbidade ou de mortalidade associado ao agente? 3. Quais so os dados mdicos disponveis? As respostas a essas perguntas podem identificar o agente ou o agente substituto cujas caractersticas encontradas no Resumo das Caractersticas dos Agentes e podero ser utilizadas para determinarmos um nvel de biossegurana. Na ausncia de dados concretos, recomenda-se uma abordagem conservadora. Materiais contendo molculas de DNA recombinantes. Essa categoria de agentes inclui os microorganismos que foram geneticamente modificados atravs de tecnologias do DNA recombinante. Essas tecnologias continuam a serem desenvolvidas rapidamente. Os projetos experimentais designados para extrair novos vrus, bactrias, levedo e outros microorganismos recombinantes se tornaram comuns nos dias de hoje. muito provvel que futuras aplicaes da tecnologia do DNA recombinante produziro novos vrus hbridos. A publicao do National Institutes of Health chamado Guidelines for Research Involving Recombinant DNA Molecules9 um excelente ponto de referncia para a seleo de um nvel de biossegurana adequado para o trabalho que envolva microorganismos recombinantes. Ao selecionar um nvel de biossegurana apropriado para este trabalho, talvez o maior desafio seja avaliar o aumentado do
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Avaliao dos Riscos
risco biolgico associado a uma modificao gentica em particular. Em grande parte dos casos, a seleo de um nvel de biossegurana adequado comea ao estabelecermos a classificao do vrus no modificados. Entre os vrus recombinantes, agora rotineiramente desenvolvidos esto o adenovrus, alfavrus, retrovrus, vrus vacnia, herpesvrus e outros designados para expressar os produtos de genes heterlogos. Porm, a natureza da modificao gentica e a quantidade de vrus devero ser cuidadosamente considerados ao selecionar um nvel de biossegurana adequado para o trabalho com um vrus recombinante. Entre os pontos a serem considerados no trabalho com os microorganismos recombinantes esto: O gene inserido codifica uma toxina conhecida ou uma toxina relativamente descaracterizada? A modificao possui um potencial para alterar o alcance do hospedeiro ou o tropismo celular do vrus? A modificao possui um potencial para aumentar a capacidade de replicao do vrus? O gene inserido codifica um oncogene conhecido? O gene inserido possui o potencial para alterar o ciclo celular? O DNA viral se integra ao genoma do hospedeiro? Qual a probabilidade de que cepas de vrus competentes replicados sejam geradas? A lista de perguntas no significa que seja uma questo inclusiva. Pelo contrrio, elas servem como um exemplo de informao necessrio para julgarmos se um nvel de biossegurana maior necessrio para o trabalho com microorganismos geneticamente modificados. J que em muitos casos as respostas para essas perguntas no sero definitivas, importante que a empresa possua um Comit Institucional de Biossegurana constituda e informada, como enfatizado pelos estatutos do NIH, para verificar a avaliao do risco. Materiais que possam conter ou no agentes infecciosos desconhecidos. Na ausncia de informaes que possam sugerir a infectividade do agente, deve-se considerar as precaues universais. 93
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Estudos Animais. Estudos laboratoriais que envolvam animais podero apresentar muitos tipos diferentes de riscos fsicos, biolgicos e ao meio ambiente. Os riscos especficos presentes em qualquer dependncia para animais em particular so nicos, variando de acordo com as espcies envolvidas e com a natureza da pesquisa desenvolvida. A avaliao do risco quanto ao perigo biolgico dever se concentrar particularmente no potencial das instalaes animais para uma aumentada exposio de patgenos humanos e aos agentes zoonticos. Os prprios animais podem introduzir novos perigos biolgicos nas instalaes. As infeces latentes so mais comuns em animais capturados no campo ou em animais vindo de populaes no selecionadas. Por exemplo, o vrus-b do macaco apresenta um risco latente aos indivduos que lidam com smios. As vias de transmisso animais devem tambm ser consideradas na avaliao do risco. Os animais que transmitem vrus atravs de disseminao respiratria ou disseminao na urina ou fezes so muito mais perigosos do que aqueles que no o fazem. As pessoas que lidam com animais experimentais em locais de pesquisas e que trabalham com agentes infecciosos apresentam um risco muito maior de exposio devido s mordidas, arranhes e aerossis provocados por eles. A Seo IV descreve as prticas e instalaes aplicveis ao trabalho de animais infectados por agentes listados nos Nveis de Biossegurana de 1-41. Outras aplicaes. O processo de avaliao dos riscos descritos tambm se aplica s operaes laboratoriais que no envolvam o uso de agentes primrios de doenas humanas. verdade que os estudos microbiolgicos de patgenos especficos de hospedeiros animais, do solo, gua, alimentos, raes e outros materiais naturais ou industrializados impem riscos consideravelmente menores para os laboratoristas. Ainda assim, os microbiologistas e outros cientistas que trabalhem com esses materiais podem achar de grande valor estas prticas, equipamentos de conteno e recomendaes para as instalaes descritas neste livro, para o desenvolvimento de padres operacionais que atenda todas as necessidades de suas prprias avaliaes.
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Referncias: 1. Knudsen, R.C. 1998. Risk Assessment for Biological Agents in the Laboratory. In J. Richmond, Ph. D, R.B.P. (ed.) Rational Basis for Biocontainment: Proceedings of the Fifth National Symposium on Biosafety. American Biological Safety Association, Mundelein, IL. Benenson, Abram S., Editor. Control of Communicable Diseases Manual. 16th Edition, 1995. American Public Health Association, Washington, D.C. 200005. Collins, C.H. Laboratory-acquired infections, history, incidence, causes and prevention. Butterwoths, and Co.Ltd. 1983. Richmond, Jonathan Y., McKinney, Robert W. Editors. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Public Health Service, 3rd Edition, May, 1993. Sewell, David L. Laboratory Associated Infections and Biosafety. Clinical Microbiology Reviews, 8:389-405, 1995. Sulkin, S.E., Pike, R.M. 1949. Viral Infections contracted in the laboratory. New England J. Medicine. 241:205-213. Sulkin, S.E., Pike, R.M. 1951. Survey of Laboratory Acquired infections. Am J Public Health 41:769-781. Sullivan, J.F. Songer, J.R., Estrem, I.E. 1978. Laboratory acquired infections at the National Animal Disease Center, 1960-1975. Health Laboratory Sci. 15: 58-64. National Institutes of Health. Guidelines for Research Involving Recombinant DNA Molecules. (Washington: GPO, 1998) Federal Register. 59FR34496.
2.
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5. 6. 7. 8.
9.
Outras Fontes: NIH Guidelines for Recombinant DNA Molecules: http://www.NIH.gov/od/orda/toc.html NIH Office of Recombinant DNA Activities: http://www.NIH.gov/od/orda
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Nveis de Biossegurana Recomendados para Agentes Infecciosos e Animais Infectados

A seleo de um nvel de biossegurana adequado para o trabalho envolvendo um agente ou um estudo animal em particular depende de um nmero de fatores (veja a Seo V, Avaliao dos Riscos). Alguns destes fatores mais importantes so: a virulncia, a patogenicidade, a estabilidade biolgica, a rota de disseminao e a transmissibilidade do agente; a natureza ou funo do laboratrio; os procedimentos e manipulaes envolvendo o agente; a endemicidade do agente e a disponibilidade de vacinas ou de medidas teraputicas eficazes. A relao sumria dos agentes apresentada nesta seo proporciona um guia para a seleo dos nveis de biossegurana adequados. As informaes especficas sobre riscos laboratoriais relacionados com um agente em particular e as recomendaes sobre uma conduta segura de procedimentos que possam reduzir significativamente o risco de doenas associadas ao trabalho laboratorial, tambm se encontram relacionadas nesta seo. As relaes sumrias dos agentes incluem um ou mais dos seguintes critrios: o agente um fator de risco comprovado para os trabalhadores que manipulam materiais infecciosos (por exemplo, vrus da hepatite B, M. tuberculosis); o potencial para as infeces associadas ao trabalho laboratorial elevado mesmo na falta de um documento prvio das infeces adquiridas em laboratrio (por exemplo, arbovrus exticos); ou as conseqncias da infeco sero graves. As recomendaes para o uso de vacinas e toxides esto includas nas relaes sumrias dos agentes, assim como os produtos licenciados disponveis, alm dos produtos em investigao pelo Investigational New Drug (IND) (veja o Apndice B, Imunoprofilaxia). Quando aplicvel, as recomendaes para o uso destes produtos sero baseadas nas recomendaes do Public Health Service Advisory Committeee on Immunization Practice, e so especficas s pessoas que esto expostas a este tipo de risco,
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que trabalham em laboratrio ou as que tm de entrar em reas laboratoriais. Essas recomendaes especficas de maneira alguma devero impedir o uso rotineiro destes produtos como o toxide tetnico-diftrico, a vacina contra plio, a vacina contra influenza e outras, porque o risco potencial de exposio da comunidade, independe de quaisquer riscos laboratoriais. Precaues adequadas devero ser tomadas na administrao de vacinas atenuadas de vrus vivo em indivduos com sistema auto-imune alterado ou com outra condio mdica (por exemplo, gravidez), na qual uma infeco viral pode resultar em conseqncias adversas. As avaliaes dos riscos e os nveis de biossegurana recomendados nas relaes sumrias dos agentes referem-se a uma populao de indivduos imune competentes. As pessoas com a imunocompetncia alterada podero ser expostos gradativamente aos riscos. A imunodeficincia pode ser hereditria, congnita ou induzida por um nmero de doenas neoplsicas ou infecciosas, por terapia ou por radiao. O risco de se tornar infectado ou a conseqncia de uma infeco pode tambm ser influenciado por fatores tais como: idade, sexo, raa, gravidez, cirurgias (por exemplo, esplenectomia, gastrostomia), predisposio a doenas (por exemplo, diabetes, lpus eritematoso) ou uma funo fisiolgica alterada. Estas e outras variveis devero ser consideradas na aplicao das avaliaes dos riscos s atividades especficas dos indivduos selecionados. O nvel de biossegurana escolhido para um agente baseado nas atividades associadas ao crescimento e manipulao das quantidades e concentraes dos agentes infecciosos requeridos para realizar a identificao ou a tipagem. Se as atividades com os materiais infecciosos provocarem um menor risco aos trabalhadores do que aquelas atividades associadas com a manipulao de culturas, recomenda-se um nvel de biossegurana menor. Por outro lado, se as atividades envolverem grandes volumes e/ou altas concentraes (quantidades de produo) ou se as manipulaes geralmente provocarem a formao de aerossis ou que sejam intrinsicamente perigosos, podem ser indicados precaues individuais especficas e de elevar os nveis de conteno primria a secundria.
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O termo quantidades de produo se refere a grandes volumes ou altas concentraes de agentes infecciosos considerados volumosos em relao quelas usadas para a identificao e a tipagem. A propagao e a concentrao dos agentes infecciosos, como ocorre na fermentao em grande escala, na produo de antgeno e de vacinas e em inmeras atividades comerciais e de pesquisa, lidam claramente com massas significativas de agentes infecciosos que so considerados quantidades de produo. Porm, em termos de um risco potencialmente aumentado em funo da massa de agentes infecciosos, impossvel definir como quantidades de produo os volumes ou concentraes finitas de qualquer agente. Portanto, cabe ao diretor do laboratrio realizar uma avaliao das atividades conduzidas e das prticas selecionadas, dos equipamentos de conteno e das instalaes apropriadas ao risco, independente do volume ou da concentrao do agente envolvido. Haver casos em que o diretor do laboratrio ter que selecionar um nvel de biossegurana maior que o recomendado. Por exemplo, um nvel de biossegurana maior poder ser indicado pela natureza nica da atividade proposta (por exemplo, a necessidade de uma conteno especial para aerossis gerados experimentalmente para estudos de inalao) ou pela proximidade das reas de risco do laboratrio (por exemplo, um laboratrio de diagnsticos localizado prximo s reas de atendimento de pessoas). Da mesma forma, um nvel de biossegurana recomendado pode ser adaptado para compensar a ausncia de certas protees recomendadas. Por exemplo, nas situaes em que recomendado Nvel de Biossegurana 3, pode-se conseguir um nvel satisfatrio de proteo nas operaes rotineiras ou repetitivas (por exemplo, procedimentos para diagnstico envolvendo a reproduo de um agente para identificao, tipagem e teste de susceptibilidade) nos laboratrios onde as caractersticas construtivas satisfaam as recomendaes para o Nvel de Biossegurana 2, providos das boas prticas microbiolgicas, de prticas especiais e de equipamentos de segurana para que o Nvel de Biossegurana 3 seja rigorosamente seguido. Um exemplo envolve o trabalho com o vrus da imunodeficincia humana (HIV). O trabalho de rotina para o
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diagnstico do vrus com amostras clnicas pode ser feito com segurana em um nvel de Biossegurana 2, usando as prticas e os procedimentos do Nvel de Biossegurana 2. O trabalho de pesquisa (incluindo co-cultivo, estudos de replicao do vrus, ou manipulaes envolvendo o vrus concentrado) pode ser feito em instalaes NB-2, usando as prticas e os procedimentos de NB-3. As atividades de produo de vrus, incluindo as concentraes virais, requerem instalaes NB-3 e o uso de prticas e procedimentos de NB-3 (veja o resumo dos agentes). A deciso de adaptar as recomendaes do Nvel de Biossegurana 3, como foi feito no exemplo acima, dever ser tomada somente pelo diretor do laboratrio. Essa adaptao, porm, no indicada para as operaes ou atividades de produo de agentes onde os procedimentos freqentemente so mudados. O diretor do laboratrio tambm dever ter uma ateno especial ao estabelecer procedimentos de segurana para os materiais que possam conter um agente suspeito. Por exemplo, soro de origem humana pode conter vrus da hepatite B e desta forma, todo o sangue ou fluidos derivados do sangue devero ser manuseados sob condies que evitem ao mximo a exposio cutnea, da membrana mucosa ou parenteral do pessoal. O escarro enviado ao laboratrio para o ensaio do bacilo da tuberculose dever ser manipulado sob condies que evitem a formao de aerossis durante a manipulao dos materiais clnicos ou das culturas. Os agentes infecciosos que atendam os critrios anteriormente estabelecidos esto relacionados pela categoria do agente na Seo VII. Para usar esses sumrios, primeiro localize o agente na lista atravs da categoria adequada ao mesmo. Segundo utilize as prticas, os equipamentos de segurana e o tipo de instalao recomendada nas relaes dos agentes como descrito na Seo VII para o trabalho com materiais clnicos, culturas, agentes infecciosos, ou animais infectados. O diretor do laboratrio tambm ser o responsvel pela avaliao dos riscos e pela utilizao adequada das prticas, dos equipamentos de conteno e das instalaes para os agentes no includos na lista dos agentes.
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SEO VII
Relao dos Agentes
Seo VII-A: Agentes Bacterianos

Agente: Bacillus anthracis
Numerosos casos de carbnculo adquiridos no laboratrio que acontecem primariamente em locais onde so conduzidas pesquisas do antraz, tm sido relatados1, 2. Nenhum caso de antraz que no esteja associado a laboratrio foi relatado nos Estados Unidos desde o final dos anos 50 quando a vacina contra o carbnculo foi introduzida. Nenhum trabalho com o B. anthracis requer consideraes de segurana especiais devido ao seu uso potencial no terrorismo biolgico. Os animais naturalmente e experimentalmente infectados oferecem um risco potencial equipe do laboratrio e aos tratadores de animais.
Riscos no Laboratrio: O agente pode estar presente no sangue, em exudatos de leso de pele, no lquido cerebroespinhal, no lquido pleural, no escarro e raramente na urina e fezes. O contato direto e indireto da pele intacta e rachada com culturas e superfcies laboratoriais contaminadas, inoculaes parenterais por acidente e raramente atravs de aerossis infecciosos so considerados como riscos primrios para os trabalhadores de um laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas, o equipamento de conteno e as dependncias do Nvel de Biossegurana 2 devero ser os procedimentos indicados para as atividades que utilizem materiais clnicos e quantidades de culturas infecciosas para diagnstico. As prticas, os equipamentos de conteno e as dependncias do Nvel de Biossegurana Animal 2 so as recomendadas para estudos que utilizem roedores de laboratrio infectados experimentalmente. J as prticas, o equipamento de conteno e as dependncias do Nvel de Biossegurana 3 so indicados para o trabalho que envolva quantidades ou
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Relao dos Agentes Agentes Bacterianos
concentraes de produo de culturas, e para as atividades com um alto potencial para a produo de aerossis.
Observao: Uma vacina licenciada est disponvel atravs dos Centers for Disease Control and Prevention; porm, a imunizao de toda a equipe no recomendada a no ser que o freqente trabalho com amostras clnicas ou culturas para diagnstico esteja previsto (por exemplo, laboratrio de diagnstico de doena animal). Nestas dependncias, a imunizao recomendada para todas as pessoas que trabalhem com o agente, todas as pessoas que trabalhem na mesma sala do laboratrio onde as culturas so manuseadas e para as pessoas que trabalhem com animais infectados. Transferncia do Agente: A licena para a importao deste agente pode ser obtida junto com o CDC. J para exportao ligue para o Department of Commerce. necessrio um registro do laboratrio com o CDC antes de enviar ou receber esse agente. Uma licena para importao ou transporte domstica pode ser obtida atravs da USDA/APHIS/VS. Agente: Bordetella pertussis O Bordetella pertussis, um patgeno presente no sistema respiratrio humano e de distribuio mundial, o agente causador da coqueluche. A doena tipicamente uma doena que ocorre na infncia; entretanto, o agente tem sido cada dia mais associado com a doena em adultos3, 4, 5. Vrios surtos em trabalhadores da rea da sade foram relatados na literatura6, 7. Adolescentes e adultos com doena atpica ou sem diagnstico podem servir como reservatrios da infeco e podem transmitir o patgeno para recmnascidos e crianas8. Oito casos de infeco em adultos pelo B. pertussis foram documentados em um instituto de grandes pesquisas. Os indivduos infectados no trabalhavam diretamente com o microorganismo, mas possuam um acesso aos espaos em comum de um laboratrio onde o agente era manipulado. Um caso de transmisso secundria para uma pessoa da famlia foi tambm documentado9. Um incidente semelhante ocorreu em uma grande
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universidade do Meio-Oeste dos Estados Unidos que resultou em dois casos documentados de infeco adquirida em laboratrio e um caso documentado de transmisso secundria10 . Outras infeces com o B. pertussis adquiridas em laboratrio foram relatadas, assim como a transmisso de adulto para adulto no local de trabalho11, 12. As infeces adquiridas em laboratrios resultantes de manipulao de amostras clnicas ou substncias isoladas no foram relatadas. A incidncia desta infeco disseminada no ar influenciada pela intimidade e freqncia da exposio de indivduos susceptveis.
Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente em secrees respiratrias, mas no encontrado no sangue ou tecido. Uma vez que o modo de transmisso via respiratria, quanto maior a gerao de aerossis durante a manipulao de culturas ou de suspenses concentradas do agente, maior ser o risco. Precaues Recomendadas: As prticas, o equipamento de conteno e as dependncias do Nvel de Biossegurana 2 so recomendados para todas as atividades que envolvam a manipulao de materiais ou culturas conhecidamente ou potencialmente infecciosas. J o Nvel de Biossegurana Animal 2 dever ser usado para o alojamento de animais. Os dispositivos e equipamentos de conteno primria (por exemplo, cabines de segurana biolgica, conchas de segurana para centrfugas ou centrfugas de segurana especialmente projetadas) devero ser utilizados para as atividades que provavelmente iro causar a formao de aerossis potencialmente infecciosos. As prticas, os procedimentos e as dependncias do Nvel de Biossegurana 3 so indicados para produes em grande escala. Observao: As vacinas contra a coqueluche esto disponveis, mas no so atualmente recomendadas para uso em adultos. Sugerimos ao leitor consultar as recomendaes atuais do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) publicada no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) para a vacinao de adultos contra a coqueluche. Transferncia do Agente: A licena de importao deste agente dever ser obtida junto ao CDC.
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Agente: Brucella (B. abortus, B. canis, B. melitensis, B. suis).

A Brucelose continua sendo a infeco bacteriana associada a laboratrio mais comumente relatada13, 14,15. O B. abortus, o B. canis, o B. melitensis e o B. suis tm provocado vrias doenas em trabalhadores de laboratrios 16, 17,18. A hipersensibilidade aos antgenos da Brucella tambm prejudicial equipe do laboratrio. Casos ocasionais tm sido atribudos exposio a animais infectados experimentalmente ou naturalmente e aos seus tecidos.
Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente no sangue, no lquido cerebroespinhal, no smen e ocasionalmente na urina. A maioria dos casos associados a laboratrio ocorreu em dependncias para pesquisas e envolveu a exposio ao agente Brucella largamente produzido. Vrios casos em laboratrios clnicos tambm foram constatados em culturas bacteriolgicas desprezadas19. O contato direto da pele com culturas ou com amostras clnicas infecciosas de animais (por exemplo, sangue, secrees uterinas) est comumente envolvido nestes casos. Os aerossis formados durante os procedimentos laboratoriais tm provocado grandes surtos20, 21. Pipetagem com a boca, inoculaes parenterais acidentais e sprays lanados nos olhos, nariz e boca tambm tm provocado infeces. Precaues Recomendadas: Recomenda-se as prticas do Nvel de Biossegurana 2 para atividades que envolvam amostras clnicas de origem humana ou animal contendo ou potencialmente contendo Brucella spp. patognico. J as prticas, o equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 3 e do Nvel de Biossegurana Animal 3 so recomendados, respectivamente, para todas as manipulaes de culturas do Brucella spp. patognico relacionadas neste resumo e para estudos de animais experimentais. Observao: Embora as vacinas humanas contra a brucelose tenham sido desenvolvidas e testadas em outros pases com limitado sucesso, at o momento da publicao deste volume, nenhuma vacina humana encontrava-se disposio nos Estados Unidos22.
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Transferncia do Agente: A licena para a importao deste agente deve ser conseguida junto ao CDC e a licena de exportao dever ser obtida no Department of Commerce. No caso de envio ou recebimento deste agente necessrio obter um registro do laboratrio com o CDC. A licena para importao ou transporte domstico deste agente poder ser obtida no USDA/APHIS/VS.
Agente: Burkholderia pseudomallei)
pseudomallei
(Pseudomonas
Dois casos de melioidose associados a laboratrio foram relatados: um associado exposio massiva da pele aos aerossis; e o segundo provocado pela formao de aerossis durante uma destruio de uma cultura, que se supunha ser de Ps. Cepacia, em frasco aberto atravs das ondas sonoras de alta freqncia24.
Riscos em Laboratrio: Este agente pode estar presente no escarro, sangue, exsudatos de um ferimento e em vrios tecidos, dependendo do local da infeco. O contato direto com culturas e materiais infecciosos de homens, animais ou do meio ambiente, a ingesto, auto-inoculao e exposio aos aerossis e perdigotos infecciosos so considerados como riscos primrios de um laboratrio. O agente tem sido encontrado em sangue, escarro e materiais de abscesso e pode estar presente em amostras de solo e de gua de reas endmicas. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so recomendadas para todas as atividades que envolvam lquidos corporais, tecidos e culturas reconhecidamente ou potencialmente infecciosas. Deve-se usar luvas ao manusear animais infectados durante a necropsia e quando existir a possibilidade de contato direto da pele com os materiais infecciosos destes animais. A conteno primria e precaues pessoais adicionais, como quelas descritas para o Nvel de Biossegurana 3, podem ser indicadas para atividades com um alto potencial para produo de aerossis ou perdigotos, e para as atividades envolvendo quantidades ou concentraes de produo de materiais infecciosos. As vacinas no se encontram atualmente a disposio para o uso em homens.
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Transferncia do Agente: Entre em contato com o Department of Commerce para uma licena de exportao do agente. Agente: Campylobacter (C. jejuni/C. coli, C. fetus subsp. fetus). O C. jejuni / C. coli gastroenteritis raramente a causa de doenas associadas a laboratrio, embora alguns casos adquiridos em laboratrios tenham sido documentados25, 26,27. Numerosos animais domsticos e selvagens, incluindo aves, animais de estimao, animais de fazenda, animais de laboratrio e pssaros selvagens so reconhecidos como reservatrios e so uma fonte potencial de infeco para as pessoas que cuidam destes animais e que trabalham no laboratrio. Animais experimentalmente infectados tambm so uma fonte potencial de infeco28. Riscos em Laboratrio: As campylobacters patognicas podem ser encontradas em amostras fecais em grande nmero. A C. fetus subsp. fetus pode tambm estar presente no sangue, exudatos de abscessos, tecidos e escarro. A ingesto ou inoculao parenteral da C. jejuni constitui os riscos primrios de um laboratrio. A ingesto oral de 500 microorganismos provocou uma infeco em um indivduo29. A importncia da exposio aos aerossis no conhecida. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so recomendadas para atividades que envolvam culturas ou materiais clnicos potencialmente infecciosos. As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so recomendadas para atividades com animais experimentalmente ou naturalmente infectados. As vacinas, atualmente, no se encontram a disposio para o uso em humanos. Transferncia do Agente: Para obteno de uma licena para importao, entre em contato com o CDC. Agente: Chlamidia psittaci, C. pneumoniae, C. trachomatis.
As infeces como a psitacose, tracoma e o linfogranuloma venreo j foram, no passado, as infeces bacterianas mais
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comuns associadas a laboratrio30. Em casos relatados antes de 195531, a maioria das infeces diagnosticadas era de psitacose e esta era a doena que apresentava o mais alto ndice de mortalidade de agentes infecciosos adquiridos em laboratrio. O contato e a exposio aos aerossis infecciosos ao manusear, cuidar ou realizar necropsias em animais naturalmente ou experimentalmente infectados so as maiores fontes de transmisso da psitacose associada a laboratrio. Ratos e ovos infectados so fontes menos importantes do C. psittaci. Os animais de laboratrio no so fontes relatadas de infeco humana com o C. trachomatis.
Riscos em Laboratrio: A bactria C. psittaci pode estar presente nos tecidos, fezes, secrees nasais e sangue de pssaros infectados, e no sangue, escarro e tecidos de homens infectados. A C. trachomatis pode estar presente nos lquidos genitais, bulbares e conjuntivais de homens infectados. A exposio aos aerossis e perdigotos infecciosos produzidos durante o manuseio de pssaros e tecidos infectados o risco primrio para os trabalhadores de um laboratrio que trabalham com a bactria psitacose. J os riscos primrios em um laboratrio em relao ao C. trachomatis se encontram na inoculao parenteral acidental e na exposio direta ou indireta das membranas mucosas dos olhos, nariz e boca aos lquidos genitais, bulbares e conjuntivais, aos materiais de culturas de clulas e aos lquidos de ovos infectados. Os aerossis infecciosos tambm podem ser uma fonte potencial de infeco. Precaues Recomendadas: As prticas, o equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so os recomendados para atividades envolvendo a necropsia de pssaros infectados e no diagnstico de tecidos ou de culturas conhecidas por conterem ou por estarem potencialmente infectadas com a C. psittaci ou a C. trachomatis. Para reduzirmos o risco de formao de aerossis de fezes e secrees nasais infectadas contidas nas asas e nas superfcies externas do pssaro, o melhor procedimento molhar as asas dos pssaros infectados com um detergentedesinfetante antes de realizar a necropsia. As prticas, o equipamento de conteno, as instalaes e a proteo respiratria do Nvel de Biossegurana Animal 2 so os procedimentos indicados
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para as pessoas que realizam trabalhos com pssaros engaiolados naturalmente ou experimentalmente infectados. Recomenda-se o uso de luvas para a necropsia dos pssaros e ratos, para a abertura de ovos inoculados e quando houver a possibilidade de contato direto da pele com tecidos infectados, lquido bulbar e outros materiais clnicos. As instalaes e prticas do Nvel de Biossegurana 3 so indicadas para as atividades com alto potencial de produo de perdigotos ou aerossis e para as atividades envolvendo grandes quantidades ou concentraes de materiais infecciosos.
Observao: Atualmente, as vacinas para esses agentes no se encontram disponveis para o uso humano. Transferncia dos Agentes: Para obter uma licena para exportao dos agentes, entre em contato com o Department of Commerce.
Agente: Clostridium botulinum Embora s exista um relatrio32 sobre o botulismo associado ao manuseio do agente ou da toxina no laboratrio ou no trabalho com animais naturalmente ou experimentalmente infectados, as conseqncias de tais intoxicaes ainda so consideradas bem graves. O trabalho com culturas de C. botulinum requer consideraes especiais de segurana devido ao uso potencial destas culturas no terrorismo biolgico.
Riscos em Laboratrio: O C. botulinum ou a sua toxina pode estar presente em uma variedade de produtos alimentcios, em materiais clnicos (soro, fezes) e amostras do meio ambiente (solo, gua de superfcie). A exposio toxina do C. botulinum considerada o risco laboratorial primrio. Esta toxina pode ser absorvida aps a ingesto ou contato posterior com a pele, ou com as membranas mucosas, incluindo o trato respiratrio. A inoculao parenteral acidental tambm representa uma significativa exposio toxina. O crescimento das culturas em caldos quando sob tima produo de toxina pode conter uma DL50 de 2x 106 ratos por mL34.
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Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so as indicadas para todas as atividades com materiais conhecidos por conter ou potencialmente conter a toxina. Um toxide pentavalente do botulismo (ABCDE) encontra-se disponvel atravs dos Centers for Disease Control and Prevention, como uma nova droga de pesquisa (IND). Este toxide indicado para as pessoas que trabalham com culturas de C. botulinum ou com suas toxinas. Solues de hipoclorito de sdio (0.1%) ou de hidrxido de sdio (0.1 N) inativam a toxina prontamente, e so recomendadas para a descontaminao das superfcies de trabalho e perdigotos de culturas ou de toxinas. Cuidados pessoais e conteno primria adicional, como as recomendadas para o Nvel de Biossegurana 3, so indicadas para as atividades com um alto potencial para a produo de aerossis ou perdigotos e para as atividades envolvendo quantidades grandes de toxinas. As prticas, equipamento de conteno e instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para estudos de diagnsticos e titulao da toxina. Transferncia do Agente: Para obter uma licena de importao para este agente, entre em contato com o CDC.
Agente: Clostridium tetani Embora o risco de infeco da equipe do laboratrio seja insignificante, cinco incidentes relacionados exposio do pessoal durante a manipulao da toxina foram relatados35.
Riscos em Laboratrio: A inoculao parenteral acidental e a ingesto da toxina so consideradas como risco primrio para a equipe laboratorial. Como no se tem certeza se a toxina pode ser absorvida atravs das membranas mucosas, os riscos associados aos aerossis e perdigotos ainda permanecem desconhecidos. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades envolvendo a manipulao de culturas
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ou toxinas. Embora o risco de ttano associado a laboratrio seja baixo, a administrao de um toxide ttano-difteria adulto em intervalos de 10 anos, reduz o risco de exposio toxina e de contaminao por ferimento do pessoal do laboratrio e dos tratadores de animais, e , portanto, altamente recomendada36. O leitor dever consultar as atuais recomendaes do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) para a vacinao de adultos contra o C. tetani.
Transporte do Agente: Para obter uma licena de importao para esse agente, entre em contato com o CDC e com o Department of Commerce para uma licena de exportao. O registro do laboratrio com o CDC ser necessrio antes do envio ou recebimento deste agente.
Agente: Corynebacterium diphtheriae As infeces com o C. diphteriae associadas a laboratrio tm sido relatadas, mas as associadas a animais de laboratrio ainda no foram relatadas37.
Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente em exudatos ou secrees de nariz, garganta (amdala), faringe, laringe, ferimentos, sangue e sobre a pele. A inalao, a inoculao parenteral acidental e a ingesto so os riscos primrios em um laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so as indicadas para todas as atividades utilizando materiais clnicos ou culturas potencialmente ou conhecidamente infectadas. J as prticas do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para estudos que utilizem animais de laboratrios infectados. Embora o risco da difteria associado a laboratrio seja baixo, a administrao de um toxide ttano-difteria adulto em intervalos de 10 anos pode posteriormente reduzir o risco de exposies toxina e a trabalhos com materiais infecciosos pela equipe do laboratrio e aos tratadores
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de animais38. O leitor dever consultar as atuais recomendaes do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) para a vacinao contra o C. diphteriae.
Transferncia do Agente: Para obteno de uma licena para este agente, entre em contato com o CDC.
Agente: Escherichia coli (organismos produtores (VTEC/SLT) de citotoxina) As cepas produtoras de citotoxina (VTEC/SLT) da Escherichia coli (tambm chamada de cepas enterohemorrgicas) so riscos comprovados para as pessoas que trabalham em laboratrios nos Estados Unidos e em outros locais39, 40,41. A sndrome urmica hemoltica ocorre em uma pequena proporo de pacientes (geralmente crianas) e a responsvel pela maioria das mortes associadas s infeces com esses organismos. Os animais domsticos de fazendas (em particular os bovinos) so reservatrios significativos do organismo. Porm, os pequenos animais experimentalmente infectados tambm so fontes de infeces no laboratrio. Riscos em Laboratrio: A E. coli enterohemorrgica geralmente isolada nas fezes. Uma grande variedade de alimentos contaminados com esses agentes pode servir como veculo de transmisso e incluem a carne moda crua e produtos de laticnio no pasteurizados. Ela raramente encontrada no sangue de homens e animais infectados. A ingesto o risco laboratorial primrio. A importncia da exposio aos aerossis ainda no conhecida.
Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do nvel de Biossegurana 2 so as indicadas para todas as atividades utilizando materiais clnicos ou culturas conhecidamente ou potencialmente infecciosos. J as prticas do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para as atividades com animais naturalmente ou experimentalmente
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infectados. Atualmente, as vacinas para uso em homens no se encontram a disposio. O leitor deve consultar as recomendaes atualizadas do ACIP relacionadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) sobre a existncia de indicaes para a vacinao contra cepas enterohemorrgicas de E. coli.
Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente dever ser obtida no CDC.
Agente: Francisella tularensis A tularemia tem sido uma infeco bacteriana associada a laboratrio comumente relatada42. Quase todos os casos ocorreram nas dependncias onde a pesquisa da tularemia estava sendo realizada. Casos ocasionais tm sido relacionados ao trabalho com animais naturalmente ou experimentalmente infectados ou seus ectoparasitas. Embora no tenha sido relatado, existem casos que ocorreram em laboratrios. O trabalho com culturas de F. tularensis requer uma segurana especial devido ao seu potencial uso no terrorismo biolgico.
Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente em exudatos de leses, secrees respiratrias, lquido cerebroespinhal, sangue, urina, tecidos de animais infectados e lquidos de artrpodes infectados. O contato direto da pele ou de membranas mucosas com materiais infecciosos, inoculao parenteral acidental, ingesto e exposio aos aerossis e perdigotos infecciosos resultaram em infeco. A infeco tem sido mais comumente associada s culturas do que aos materiais clnicos e animais infectados. A dose 25% a 50% infecciosa para homens de aproximadamente 10 microorganismos pela via respiratria43. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as dependncias do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para as atividades com materiais clnicos de origem humana ou animal contendo ou potencialmente contendo Francisella tularensis. J as prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 3 e do Nvel de
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Biossegurana Animal 3 so indicadas, respectivamente, para todas as manipulaes de culturas e para estudos de animais experimentais.
Observao: A vacinao contra a F. tularensis encontrase a disposio para a populao e deve ser levada em considerao para as pessoas que trabalham com materiais infecciosos ou roedores infectados. A vacina tambm recomendada para as pessoas que trabalham com o agente ou animais infectados e para aquelas que trabalham dentro ou que entram no laboratrio ou na sala para animais onde as culturas ou animais infectados esto sendo mantidos44. O leitor dever consultar as recomendaes atualizadas do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) sobre as recomendaes para vacinas contra a F. tularensis. Transferncia do Agente: Para obteno de licena para importao do agente, entre em contato com o CDC. Se a licena for para exportao deste agente, entre em contato com o Department of Commerce. O registro do laboratrio com o CDC necessrio antes do envio ou recebimento deste agente. Agente: Heliobacter pylori
Desde a sua descoberta em 1982, a Heliobacter Pylori tem recebido uma grande ateno como um agente causador da gastrite45. O habitat principal do H. pylori a membrana mucosa gstrica humana. A infeco com este agente pode ser longa quanto durao, com poucos ou nenhum sintoma, ou pode-se apresentar como uma doena gstrica aguda. Tanto as infeces humanas associadas a laboratrios experimentais ou as acidentais foram relatadas46, 47. O agente pode estar presente nas secrees gstricas ou orais e nas fezes. A transmisso, embora no seja completamente clara, acredita-se ser atravs da via oral-fecal ou oral-oral.
Riscos em Laboratrio: Este agente pode ser encontrado nas secrees gstricas e orais ou nas fezes. A ingesto o principal
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risco dentro de um laboratrio. A importncia da exposio aos aerossis desconhecida.
Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para as atividades com materiais clnicos e culturas conhecidamente ou potencialmente infectados por este agente. J as prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para atividades com animais naturalmente ou experimentalmente infectados. Atualmente, as vacinas no se encontram a disposio para o uso em homens. Transferncia do Agente: A licena para importao do agente poder ser obtida atravs do CDC. Agente: Leptospira interrogans todos os sorotipos
A leptospirose um risco laboratorial muito bem documentado. Pike relatou 67 infeces associadas a laboratrio e 10 mortes48, e ainda trs casos foram relatados em outros locais49. Um coelho infectado experimentalmente foi identificado como uma fonte de contaminao do L. interrogans sorotipo icterohemorrhagiae50. O contato direto e indireto com lquidos e tecidos de mamferos naturalmente ou experimentalmente infectados durante o manuseio, o cuidado, ou a necropsia uma fonte potencial de infeco. Em animais com infeces renais crnicas, o agente encontrado na urina em numerosas quantidades por longos perodos.
Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado na urina, sangue e tecidos de animais e homens infectados. A ingesto, a inoculao parenteral acidental e o contato direto ou indireto da pele ou da membrana mucosa com culturas, tecidos ou lquidos corporais infectados especialmente a urina so considerados riscos laboratoriais primrios. Ainda no se conhece a importncia da exposio aos aerossis. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so
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indicadas para todas as atividades que envolvam o uso ou a manipulao de tecidos, lquidos corporais e culturas conhecidamente ou potencialmente infecciosas e para o alojamento de animais infectados. Recomenda-se o uso de luvas para o manuseio e a necropsia de animais infectados e quando houver uma possibilidade de contato direto da pele com os materiais infectados. Atualmente, as vacinas contra este agente no se encontram a disposio para uso em homens.
Transferncia de Agentes: Uma licena para importao destes agentes poder ser obtida junto ao CDC. Uma licena para importao ou transporte domstico deste agente poder ser obtida no USDA/APHIS/VS. Agente: Listeria monocytogenes
A Listeria monocytogenes oferece um risco potencial para a equipe de laboratrio. Os bacilos aerbicos, gram-positivos e no formadores de esporos so hemolticos e catalase positivos51. As bactrias tm sido isoladas no solo, poeira, alimento humano, animais e humanos assintomticos52, 53. A maioria dos casos de listerose aconteceram devido ingesto de alimentos contaminados, mais notavelmente de queijos suaves, carne crua e vegetais crus no lavados54. Embora adultos e crianas saudveis possam contrair a infeco por Listeria , elas geralmente no adquirem uma doena sria. J as mulheres grvidas, os recmnascidos e as pessoas com um sistema imune deficiente fazem parte do grupo de risco e adquirem a forma grave da doena.
Riscos em Laboratrio: A Listeria monocytogenes pode ser encontrada nas fezes, lquido cerebroespinhal e no sangue, assim como em alimentos e materiais provenientes do meio ambiente55, 56. Os animais naturalmente ou experimentalmente infectados so uma fonte de exposio aos trabalhadores de laboratrio e as pessoas que zelam dos animais, e para outros animais. A ingesto o modo de exposio mais provvel, mas a Listeria tambm pode causar infeces nos olhos e na pele aps uma exposio direta. As infeces causadas por este agente em mulheres grvidas ocorrem
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com mais freqncia no terceiro semestre e podem precipitar o parto. A transmisso transplacentria deste agente oferece um grave risco ao feto e pode at resultar em um abscesso disseminado, contribuindo para o ndice de mortalidade de aproximadamente 100%57.
Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades com amostras clnicas e culturas reconhecidas ou suspeitas de conterem o agente. Recomenda-se o uso de luvas e proteo para os olhos ao manusear culturas infectadas. As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para atividades com animais naturalmente ou experimentalmente infectados. Atualmente, as vacinas no se encontram a disposio para uso humano58. Mulheres grvidas que trabalham com este agente em um laboratrio de diagnstico ou de pesquisa devero ser informadas sobre os riscos potenciais associados ao agente, incluindo os riscos potenciais para o feto. Transferncia do Agente: Uma licena para importao ou transporte domstico deste agente poder ser obtida atravs do USDA/APHIS/VS. Agente: Legionella pneumophila, outros agentes semelhantes a Legionella.
Devido a uma presumida exposio aos aerossis ou perdigotos durante estudos animais com o agente da Febre de Pontiac (L. pneumophilia), um nico documento apresentando um caso de legionelose associado a laboratrio foi relatado 59. A transmisso de homem para homem ainda no foi documentada. As infeces experimentais so prontamente produzidas em cobaias e ovos de galinha embrionrios60. Coelhos de laboratrios tambm desenvolvem anticorpos, mas no a doena clnica, enquanto que os camundongos so resistentes a exposio parenteral. Estudos no publicados dos Centers for Disease Control
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and Prevention mostram que a transmisso de animais para animais no acontece em uma variedade de espcies mamferas e avcolas experimentalmente infectadas.
Riscos em Laboratrio: Este agente pode ser encontrado no lquido pleural, tecido, escarro e fontes do meio ambiente (por exemplo, gua de torre). Uma vez que o modo natural de transmisso aparentemente via area, o maior risco potencial a produo de aerossis durante a manipulao de culturas ou de outros materiais que contenham uma grande concentrao de microorganismos infecciosos (por exemplo, tecidos e o saco vitelino infectado). Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades envolvendo o uso ou a manipulao de materiais clnicos ou de culturas sabiamente ou potencialmente infecciosas. J as prticas do Nvel de Biossegurana 3 com dispositivos de conteno primrios e equipamentos (por exemplo, cabines de segurana biolgica, conchas de segurana em centrfugas) so usadas para atividades que possivelmente produzem aerossis potencialmente infecciosos e para as atividades que envolvam quantidades de produo de microorganismos. Observao: Atualmente, as vacinas para uso em homens no se encontram a disposio. Transferncia do Agente: A obteno de uma licena para importao deste agente dever ser feita atravs do CDC. Agente: Mycobacterium leprae
A transmisso parenteral acidental da lepra de homens para homens tem sido relatada aps a contaminao de um cirurgio atravs de uma picada acidental de uma agulha61, e atravs do uso de uma agulha para tatuagem provavelmente contaminada62. No existem casos relatados que tenham sido provocados pelo trabalho
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em um laboratrio envolvendo bipsias ou outros materiais clnicos de origem humana e animal. Embora a lepra que ocorre naturalmente ou as doenas semelhantes lepra tenham sido relatadas em tatus63 e em primatas no humanos64, 65, o ser humano o nico reservatrio importante desta doena.
Riscos em Laboratrio : O agente infeccioso pode ser encontrado em tecidos e exudatos de leses de homens infectados e em animais naturalmente ou experimentalmente infectados. O contato direto da pele e das membranas mucosas com materiais e inoculaes parenterais acidentais infecciosas considerado risco primrio de um laboratrio, associado com o manuseio de materiais clnicos infecciosos. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades com materiais clnicos sabidamente ou potencialmente infecciosos de homens e animais infectados. Um cuidado especial deve ser tomado para evitar uma inoculao parenteral acidental com instrumentos cortantes contaminados. As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para estudos animais que utilizem roedores, tatus e primatas no humanos. Atualmente, as vacinas para uso em humanos no se encontram a disposio. Transferncia do Agente: Para obteno de uma licena para importao deste agente dever ser feita atravs do CDC. Agente: Mycobacterium spp. diferente do M. tuberculosis, M. bovis ou M. leprae.
Pike relatou 40 casos de tuberculose no-pulmonar que se acreditava estar relacionada a acidentes ou incidentes ocorridos no laboratrio ou na sala de autpsia66. Provavelmente, essas infeces eram provocadas por um outro tipo de micobactria que no a M. tuberculosis ou a M. bovis. Um nmero de micobactrias que so ubquas na natureza associado com outras doenas que
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no a tuberculose ou a lepra em homens, animais domsticos e selvagens. Em relao s caractersticas, esses organismos so infecciosos, mas no so contagiosos. J clinicamente, as doenas associadas com as infeces por essas atpicas bactrias podem ser divididas, em geral, em trs categorias: 1. Doenas semelhantes tuberculose, que podem estar associadas com a infeco pelo complexo M. kansasii, M. avium e raramente pelos M. xenopi, M. malmoense, M. asiaticum, M. simiae e M. szulgai. 2. Limfadenitis, que podem estar associadas com a infeco pelo complexo M. scrofulaceum, M. avium e raramente pelo M. fortuitum e M. kansasii. 3. lceras de pele e infeces de ferimentos do tecido mole, que podem estar associadas com infeco pelo M. ulcerans, M. marinum, M. fortuitum e M. chelonei.
Riscos em Laboratrio: Os agentes podem ser encontrados no escarro, exudatos de leses, tecidos e em amostras do meio ambiente (por exemplo, solo e gua). O contato direto da pele ou da membrana mucosa com materiais infecciosos, ingesto e inoculao parenteral acidental o risco primrio laboratorial associado aos materiais clnicos e s culturas. Um risco de infeco potencial aos trabalhadores de laboratrio tambm oferecido pelos aerossis infecciosos criados durante a manipulao do caldo de culturas ou homogeneizao de tecidos contendo esses organismos associados com a doena pulmonar. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades com materiais clnicos e culturas de Mycobacterium spp. com exceo dos tipos M. tuberculosis ou M. bovis. As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para estudos animais com a micobactria que no a M. tuberculosis, M. bovis ou M. leprae. Atualmente, as vacinas para uso humano ainda no se encontram disponveis.
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Transferncia do Agente: A obteno de uma licena para importao do agente dever ser feita atravs do CDC. Agente: Mycobacterium tuberculosis, M. bovis.
As infeces com a Mycobacterium tuberculosis e a M. bovis (incluindo a BCG) so um risco comprovado aos trabalhadores de laboratrio assim como para outras pessoas que podem estar expostas aos aerossis infecciosos no laboratrio67, 68, 69, 70,71. A incidncia da tuberculose em pessoas que trabalham com a M. tuberculosis em laboratrio tem sido relatada como sendo trs vezes maior do que em pessoas que no trabalham com o agente. Primatas no-humanos infectados naturalmente ou experimentalmente so uma fonte comprovada de infeco humana (por exemplo, o ndice de converso anual de tuberculina em pessoas que trabalham com primatas no-humanos infectados de aproximadamente 70/10. 000 se comparada ao ndice de menos de 3/10. 000 da populao em geral)73. Cobaias ou camundongos experimentalmente infectados no oferecem o mesmo risco, uma vez que ncleos em perdigotos no so produzidos pela tosse nestas espcies; porm, o dejeto de animais infectados pode se tornar contaminado e servir como uma fonte de aerossis infecciosos.
Riscos em Laboratrio: Os bacilos da tuberculose podem ser encontrados no escarro, lquidos de lavagem gstrica, lquido cerebroespinhal, urina e nas leses em vrios tecidos74. A exposio aos aerossis produzidos em laboratrio o risco mais importante encontrado. Os bacilos da tuberculose podem sobreviver em esfregaos fixados com o calor75 e podem ser nebulizados na preparao de seces congeladas e durante a manipulao de culturas lquidas. Devido baixa dose infecciosa do M.tuberculosis para homens (i.e., DI50 < 10 bacilos) e, em alguns laboratrios, um alto ndice de isolamento de organismos resistentes ao cido originado de amostras clnicas (>10%)76, o escarro e outras amostras clnicas de casos de tuberculose suspeitos ou j comprovados deve ser considerados potencialmente infecciosos e manipulados com os adequados cuidados. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do nvel de Biossegurana 2 so
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indicadas para as manipulaes de materiais clnicos que no produzam aerossis como a preparao de esfregaos cido-resistentes. Todas as atividades que formem aerossis devero ser conduzidas em cabines de segurana biolgicas Classe I ou II. Recomenda-se o uso de uma bandeja para aquecer a lmina ao invs de sec-la em um Bico de Bunsen. A liquidificao ou a concentrao do escarro para a colorao cido-resistente pode tambm ser conduzida de forma segura em uma bancada aberta, tratando, primeiramente, a amostra (em uma cabine de segurana Classe I ou II) com um igual volume de soluo de hipoclorito de sdio a 5% (branqueamento domstico no diludo) e depois esperando 15 minutos antes da centrifugao77, 78. As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 3 so indicadas para atividades laboratoriais na propagao e manipulao de culturas de M. tuberculosis ou M. bovis, e para estudos animais que utilizem primatas no-humanos naturalmente ou experimentalmente infectados com a M. tuberculosis ou a M. bovis. Estudos animais utilizando cobaias ou camundongos podem ser conduzidos em um Nvel de Biossegurana Animal 279.
Observao: O teste cutneo com uma protena purificada derivada (PPD) de pessoas que trabalham em laboratrios e que apresentem um teste cutneo negativo podem ser usados como um procedimento de vigilncia. Uma vacina de vrus vivo atenuado (BCG) encontra-se a disposio, mas no usada nos Estados Unidos para equipes de laboratrio. O leitor deve consultar as recomendaes atuais do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) para as recomendaes atuais para vacinao. Transferncia do Agente: A obteno de uma licena para importao deste agente conseguida no CDC. J a licena para importao e transporte domstico do M. bovis deve ser obtida atravs do USDA/APHIS/VS. Agente: Neisseria gonorrhoeae
As infeces gonoccicas associadas a laboratrio tm sido relatadas nos Estados Unidos80.
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Riscos em Laboratrio: Esse agente pode ser encontrado em exudatos cervicais, uretrais e conjuntivais, lquido sinovial, urina, fezes e lquido cerebroespinhal. A inoculao parenteral acidental e o contato direto ou indireto da membrana mucosa com materiais infecciosos so os riscos primrios laboratoriais conhecidos. A importncia dos aerossis no foi ainda determinada. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades que envolvam o uso ou a manipulao de materiais clnicos ou de culturas. Recomenda-se o uso de luvas ao manipular animais laboratoriais infectados e quando houver a possibilidade do contato direto da pele com os materiais infecciosos. Cuidados de conteno primria ou pessoal, como as descritas para o Nvel de Biossegurana 3, podem ser indicados para a produo de perdigotos ou aerossis e para as atividades envolvendo quantidades de produo ou concentraes de materiais infecciosos. As vacinas, atualmente, no esto disponveis para uso em humanos. Transferncia do Agente: A obteno e uma licena para importao deste agente devero ser feitas atravs do CDC. Agente: Neisseria meningitis
A meningite meningoccica um risco demonstrado, mas raro de ocorrer com trabalhadores de laboratrio81, 82,83.
Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado em exudatos faringneos, lquido cerebroespinhal, sangue e saliva. A inoculao parenteral, a exposio da membrana mucosa a perdigotos e a ingesto so os riscos primrios para a equipe do laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades que utilizem lquidos corpreos, tecidos e culturas conhecidamente ou potencialmente infecciosas.
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Precaues pessoais e de conteno primria adicional, como as descritas para o Nvel de Biossegurana 3, podem ser indicadas para atividades com um alto risco potencial para formao de perdigotos ou aerossis, e para as atividades que envolvam quantidades de produo ou concentraes de materiais infecciosos.
Observao: As vacinas para a N. meningitidis esto disponveis e devem ser consideradas para as pessoas que trabalham regularmente com materiais infecciosos. O leitor deve consultar as atuais recomendaes do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) para as recomendaes sobre vacinao contra a N. meningitidis. Transferncia de Agentes: A obteno de uma licena para importao deste agente deve ser feita atravs do CDC. Agente: Salmonella todos os sorotipos com exceo do typhi
A salmonelose um risco documentado para as pessoas que trabalham em uns laboratrio84, 85,86. Os hospedeiros reservatrios primrios incluem um amplo espectro de animais domsticos e selvagens incluindo os pssaros, mamferos e rpteis, sendo que todos podem servir como uma fonte de infeco para a equipe laboratorial.
Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado nas fezes, sangue, urina e em alimentos, raes e materiais provenientes do meio ambiente. A ingesto ou a inoculao parenteral um perigo primrio para um laboratrio. A importncia da exposio aos aerossis ainda desconhecida. Animais naturalmente ou experimentalmente infectados so uma fonte potencial de infeco para funcionrios do laboratrio e para os que tratam dos animais, alm de serem perigosos para outros animais tambm. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para as atividades com materiais clnicos e culturas
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conhecidas por possurem ou potencialmente conterem os agentes. As prticas, equipamento de conteno e instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so recomendadas para atividades com animais naturalmente ou experimentalmente infectados. As vacinas ainda no se encontram a disposio da populao.
Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente deve ser obtida atravs do CDC. Agente: Salmonella typhi
A febre tifide um risco comprovado para pessoas que trabalham em laboratrio87, 88,89.
Riscos em Laboratrio: Esse agente pode ser encontrado nas fezes, sangue, vescula biliar (bile) e urina. O ser humano o nico reservatrio conhecido da infeco. A ingesto e a inoculao parenteral do agente representam o risco primrio em laboratrio. No se conhece ainda a importncia da exposio aos aerossis. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades que utilizem materiais clnicos e culturas sabidamente ou potencialmente infecciosas. As prticas do Nvel de Biossegurana 3 so indicadas para atividades que possivelmente provoquem a formao de aerossis ou de atividades que envolvam quantidades de produo de microorganismos.
As vacinas para a S. typhi esto disponveis no mercado e devem ser consideradas para as pessoas que trabalhem regularmente com materiais potencialmente infecciosos. O leitor deve consultar as recomendaes atuais do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) publicadas pelo CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) para as recomendaes sobre a vacinao contra a S. typhi.
Transferncia do Agente: A licena para importao pode ser conseguida atravs do CDC.
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Agente: Shiguella spp.

A shigelose um risco comprovado aos trabalhadores de um laboratrio, com dzias de casos relatados s nos Estados Unidos e Gr-Bretanha90, 91, 92,93. Embora surtos tenham ocorrido em primatas no-humanos em cativeiro, somente o ser humano considerado um reservatrio significativo da infeco. Porm, cobaias, outros roedores e primatas no-humanos experimentalmente infectados tambm so fontes comprovadas de infeco.
Riscos em Laboratrio: Esse agente pode ser encontrado nas fezes e raramente no sangue de animais e humanos infectados. A ingesto e a inoculao parenteral do agente so os riscos primrios de um laboratrio. A dose oral 25%-50% infecciosa do agente da S. flexneri para humanos de aproximadamente 200 microorganismos94. Ainda no se sabe a importncia da exposio aos aerossis deste agente. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades que utilizem materiais clnicos ou culturas sabidamente ou potencialmente infecciosas. J as prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para atividades com animais infectados experimentalmente ou naturalmente. As vacinas no se encontram a disposio no mercado para uso em homens. Transferncia do Agente: A licena para a exportao deste agente dever ser obtida no Department of Commerce. Agente: Treponema pallidum
A sfilis um risco comprovado para as pessoas de um laboratrio que manipulam ou coletam materiais clnicos de leses cutneas. Pike relacionou 20 casos desta infeco associada a laboratrio95. O ser humano o nico reservatrio conhecido deste agente. Um exemplo o caso onde o agente foi transmitido a um indivduo da equipe de um laboratrio que trabalhava com uma suspenso concentrada do T. pallidum obtido de um coelho com
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orquite experimental96. A transferncia hematognica da sfilis tem ocorrido atravs da transfuso de uma unidade de sangue fresco obtida de um paciente com sfilis secundria. O T. pallidum se encontra presente na circulao durante a sfilis primria e secundria. O nmero mnimo de organismos do T. pallidum (DL50) necessrios para infectar um indivduo atravs de uma injeo subcutnea de 2397. A concentrao do T. pallidum no sangue de pacientes durante o incio da sfilis, porm, ainda no foi determinada. Nenhum caso de infeco associado a laboratrios animais foi relatado at o momento; porm cepas do T. pallidum (Nichols e possivelmente outras) adaptadas a coelhos conservaram suas virulncias em homens.
Riscos em Laboratrio: Esse agente pode ser encontrado em materiais coletados de leses cutneas, de membranas mucosas primrias e secundrias e no sangue. A inoculao parenteral acidental, o contato das membranas mucosas e de pele lesada com os materiais infecciosos e possivelmente com aerossis infecciosos so os riscos primrios para as pessoas que trabalham em laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades que envolvam o uso ou a manipulao de sangue ou material de leses de homens ou de coelhos infectados. Recomenda-se o uso de luvas quando houver a possibilidade do contato direto da pele com os materiais da leso. O monitoramento sorolgico peridico deve ser considerado para pessoas que trabalham com materiais infecciosos. As vacinas, atualmente, no se encontram disponveis para o uso em humanos. Transferncia do Agente: A licena para importao do agente de ver ser obtida atravs do CDC. Agente: Vibrionic enteritis parahaemolyticus). (Vibrio cholerae, V.
A enterite vibrinica causada pelo Vibrio cholerae ou pelo Vibrio parahaemolyticus uma doena associada a laboratrio
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documentada, mas rara98. Os animais naturalmente ou experimentalmente infectados so uma fonte potencial de infeco.
Riscos em Laboratrio: Os vibries patognicos podem ser encontrados nas fezes. A ingesto do V. cholerae e a ingesto ou inoculao parenteral de outros vibries constituem os riscos primrios laboratoriais. A dose infecciosa oral humana de aproximadamente 106 organismos99. A importncia da exposio aos aerossis ainda desconhecida. O risco de infeco aps uma exposio oral pode ser aumentado em indivduos aclordricos. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades com culturas ou materiais clnicos potencialmente infecciosos. J as prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicados para atividades com animais naturalmente ou experimentalmente infectados. Embora existam vacinas contra a clera, no se recomenda o uso rotineiro pela equipe laboratorial. O leitor deve consultar as atuais recomendaes do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) sobre as recomendaes para a vacinao humana contra V. parahaemolyticus. Transferncia do Agente: A licena para exportao deste agente dever ser obtida atravs do Department of Commerce. Agente: Yersinia pestis
A peste um risco laboratorial comprovado, mas raro. Nos Estados Unidos h relatos desta infeco100, 101. O trabalho com o Y. pestis requer consideraes especiais de segurana devido ao seu alto uso potencial no terrorismo biolgico.
Riscos em Laboratrio: Este agente pode ser encontrado no lquido bulbar, sangue, escarro, lquido cerebroespinhal, fezes e urina humana, dependendo da forma clnica e estgio da doena.
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Os riscos primrios para a equipe do laboratrio se constituem do contato direto com culturas e materiais infecciosos de homens ou animais, aerossis ou perdigotos infecciosos produzidas durante a manipulao de culturas e de tecidos infectados. Na necropsia de roedores, o risco primrio para a equipe laboratorial inclui a inoculao parenteral acidental, a ingesto e a picada de pulgas infectadas coletadas em roedores.
Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades que envolvam o manuseio de materiais clnicos e culturas potencialmente infecciosas. Deve-se tomar um cuidado especial para evitar a produo de aerossis de materiais infecciosos e durante a necropsia de roedores naturalmente ou experimentalmente infectados. Recomenda-se o uso de luvas ao manusear roedores de laboratrio coletados no campo ou infectados e quando houver a possibilidade do contato direto da pele com os materiais infecciosos. A necropsia de roedores idealmente conduzida em uma cabine de segurana biolgica. Precaues individuais e de conteno primria adicional, como as descritas para o Nvel de Biossegurana 3, so recomendadas para atividades com um alto potencial para formao de perdigotos ou aerossis, para o trabalho com cepas resistentes a antibiticos e para as atividades envolvendo quantidades ou concentraes de produo de materiais infecciosos. Observao: A vacina para o Y. pestis est disposio para uso em humanos e deve ser usada pela equipe do laboratrio que trabalha com materiais infecciosos ou roedores infectados. O leitor deve consultar as recomendaes atuais do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) para maiores informaes sobre a vacinao contra o Y. pestis. Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente dever ser obtida atravs do CDC. J a licena para exportao deve ser conseguida atravs do Department of Commerce. necessrio o registro do laboratrio junto ao CDC antes do envio ou recebimento deste agente.
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Seo VII-B: Agentes Fngicos

Agente: Blastomyces dermatitidis
Infeces locais associadas a laboratrio tm sido relatadas aps a inoculao parenteral acidental com tecidos ou culturas infectadas contendo formas da B. dermatitidis semelhantes levedura 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8. Infeces pulmonares ocorreram depois de uma suposta inalao de condios; duas pessoas desenvolveram pneumonia e uma apresentou uma leso osteoltica de onde se retirou amostra da. B. dermatitis para cultura 9,10. Provavelmente, as infeces pulmonares esto associadas somente s formas semelhantes levedura formadoras de esporos (condio).
Riscos em Laboratrio: Formas semelhantes a leveduras podem ser encontradas nos tecidos de animais infectados e em amostras clnicas. A inoculao parenteral (subcutnea) destes materiais pode provocar granulomas locais. As culturas das formas fngicas da B. dermatitidis contendo condios infecciosos, solo processado ou outras amostras ambientais podem oferecer um risco quanto exposio aos aerossis. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 e Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para as atividades com materiais clnicos, tecidos animais, culturas, amostras ambientais e animais infectados. Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente dever ser obtida atravs do CDC. O registro do laboratrio junto ao CDC dever ser obtido antes do envio ou recebimento deste agente. Agente: Coccidioides immitis
A coccidioidomicose adquirida em laboratrio um risco documentado11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22. Smith relatou que de 31 infeces adquiridas em laboratrios da sua instituio, 28 (90%) resultaram em uma doena clnica, onde mais da metade destas infeces adquiridas na natureza eram assintomticas23.
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Relao dos Agentes Agentes Fngicos
Riscos em Laboratrio: Devido ao tamanho (2-5 milimicrons), os artrocondios tendem a ser prontamente espalhados no ar e retidos nos profundos espaos pulmonares. Quanto maior o tamanho da esfrula (30-60 milimcrons) mais reduzida ser a eficcia desta forma de fungo como um patgeno areo.
As esfrulas dos fungos podem estar presentes em amostras clnicas e tecidos animais. J os artrocondios infecciosos so encontrados em culturas e solo mofados ou em outras amostras de locais naturais. A inalao do artrocondio contido nas amostras ambientais ou nas culturas da forma fngica um perigo srio dentro de um laboratrio. Um risco terico dentro de um laboratrio imposto por amostras clnicas ou tecidos de animais ou homens infectados que foram armazenados ou embalados de forma a produzir a germinao de artrocondios. H um nico relatrio sobre um veterinrio com uma coccidiodomicose que se iniciou 13 dias depois da autpsia de um cavalo com esta infeco, embora o veterinrio morasse em uma rea endmica 24. A inoculao percutnea acidental da esfrula pode resultar na formao de um granuloma local25. A doena disseminada ocorre com uma freqncia muito maior em negros e em filipinos do que em brancos.
Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para o manuseio e processamento de amostras clnicas, identificao isolada e processamento dos tecidos animais. J as prticas e as instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para estudos de experimentao animal quando a via de transmisso do agente a via parenteral.
As prticas e as instalaes do Nvel de Biossegurana 3 so indicadas para a reproduo e manipulao de culturas que formam esporos j identificados como C. immitis, e para o processamento de solo ou outros materiais do meio ambiente que contenham ou possivelmente contenham artrocondios infecciosos.
Transferncia do Agente: a licena para importao deste agente dever ser obtida atravs do CDC. O registro do laboratrio dever ser obtido junto ao CDC antes do envio ou recebimento deste agente.
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Agente: Cryptococcus neoformans

A inoculao acidental de uma pesada quantidade de Cryptococcus neoformans nas mos de um trabalhador de laboratrio ocorreu durante a injeo ou a necropsia de animais de laboratrios26, 27. Mas no houve a formao de um granuloma local e nem uma leso, sugerindo uma baixa patogenicidade por esta via. As infeces respiratrias como conseqncia de exposio laboratorial ainda no foram registradas.
Riscos em Laboratrio: A inoculao parenteral acidental de culturas ou de outros materiais infecciosos representa um risco potencial para a equipe laboratorial, particularmente queles que possam estar imunodeprimidos. Mordidas de camundongos experimentalmente infectados e as manipulaes de materiais do meio ambiente infeccioso (por exemplo, excrementos de pombos) tambm representam um risco primrio ao pessoal do laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 e do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas, respectivamente, para atividades com materiais clnicos, ambientais ou de culturas sabidamente ou potencialmente infecciosas e ainda com animais infectados experimentalmente.
O processamento do solo ou de outros materiais do meio ambiente que contenha ou que potencialmente contenha clulas infecciosas semelhantes levedura dever ser conduzida em cabines de segurana biolgicas Classe I ou II. Esta precauo tambm indicada para a cultura do estado perfeito ou sexual do agente.
Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente dever ser obtida atravs do CDC. Agente: Histoplasma capsulatum
A histoplasmose associada a laboratrio um risco comprovado em instalaes onde so conduzidos trabalhos de
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investigao ou de diagnsticos28, 29,30. As infeces pulmonares so resultantes de culturas que formam fungos31. J uma perfurao na pele durante uma autpsia de um indivduo infectado32 e uma inoculao parenteral acidental de uma cultura vivel 33 provoca uma infeco local. A coleta e processamento de amostras de solo retiradas de reas endmicas tm provocado infeces pulmonares em trabalhadores de laboratrio. Os esporos encapsulados so resistentes a secagem e podem permanecer viveis durante longos perodos de tempo. O pequeno tamanho do condio infeccioso (menos que 5 mcrons) possibilita sua disperso no ar e a reteno intrapulmonar. Furcolow relatou que em camundongos 10 esporos foram quase que to infecciosos quanto uma dose letal de 10.000 a 100.000 esporos34.
Riscos em Laboratrio: O estgio infeccioso deste fungo dimrfico (condio) est presente nas culturas de formas esporuladas e no solo de reas endmicas. A forma de levedura em tecidos ou lquidos de animais infectados pode produzir uma infeco local aps uma inoculao parenteral. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 e Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para o manuseio e processamento de materiais clnicos, identificao de substncias isoladas, tecidos animais e culturas fngicas, identificao de culturas na rotina de laboratrios de diagnsticos e para estudos animais experimentais quando a via do agente for parenteral.
As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 3 so indicadas para a reproduo e manipulao de culturas j identificadas como de H. capsulatum, e para o processamento de solo ou de outros materiais ambientais conhecidos por conter ou possivelmente conter condio infeccioso.
Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente deve ser feita atravs do CDC. Agente: Sporothrix schenckii O S. schenckii tem causado um nmero expressivo de infeces locais na pele e nos olhos de pessoas que trabalham em
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laboratrios35. A maioria dos casos est associada a acidentes que ocorrem com borrifos do material de uma cultura dentro do olho36, 37, arranho38 ou mordida de um animal infectado40, 41 ou ao injetar39 material infectado na pele. As infeces dermatolgicas so causadas tambm pelo manuseio de culturas42, 43 ou necropsias de animais45 sem que ocorra um conhecido erro tcnico na hora do procedimento. No houve nenhum caso de infeco pulmonar resultante da exposio laboratorial, embora se supe que a doena pulmonar tenha ocorrido naturalmente como resultado de uma inalao.
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 e do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para todas as atividades em laboratrios e em atividades com experimentao animal com S. schenckii. Recomenda-se o uso de luvas ao manusear animais experimentalmente infectados e durante operaes com culturas lquidas (caldos) que possam resultar em uma contaminao da mo. Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Membros patognicos dos Gneros Epidermophyton, Microsporum e Trychophyton.
Embora as infeces de pele, cabelo e unhas provocadas por estes fungos dermatofdites estejam entre as infeces humanas mais freqentes, o processamento do material clnico ainda no foi associado s infeces laboratoriais. As infeces relatadas foram adquiridas atravs de contatos com animais de laboratrios naturalmente ou experimentalmente infectados (camundongo, cobaias, etc.) e ocasionalmente com o manuseio de culturas46, 47, 48,49 .
Perigos em Laboratrio: Os agentes podem ser encontrados na pele, cabelo e unhas de hospedeiros humanos e animais. O contato com animais de laboratrios infectados que apresentem
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infeces aparentes ou no aparentes considerado como risco primrio para a equipe do laboratrio. As culturas e materiais clnicos no so uma fonte importante de infeco humana.
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 e do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para todas as atividades em laboratrios e em atividades com experimentao animal com os dermatofitdes. Os animais infectados experimentalmente devem ser manipulados com luvas descartveis. Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Fungos diversos
Vrios fungos tm provocado srias infeces em hospedeiros imunocompetentes aps uma provvel inalao ou inoculao parenteral acidental de fontes do meio ambiente. Esses agentes so os Penicillium marneffei, Exophiala (Wangiella) dermatitidis, Fonsecaea pedrosoi, Ochroconis gallopavum, Clauduphialopora bantians e Ramichlorisium mackenzieim. Embora nenhuma infeco causada por grande parte destes agentes associados a laboratrios tenha sido registrada, a gravidade desta patologia adquirida naturalmente suficiente para adotarmos cuidados especiais no laboratrio. O Penicillium marneffei causou uma infeco local por inoculao acidental em um laboratorista50. J o Stachybotrus atra provavelmente no o agente causador da infeco em seres humanos quando o fungo ou fomitos contidos no mofo so inalados, embora a ingesto de gros mofados que possuam o fungo tenha envenenado animais.
Riscos em Laboratrio: A inalao de condios em culturas de fungos com esporos ou a injeo acidental na pele durante um procedimento de infeco de animais de experimentao so riscos tericos aos trabalhadores de um laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para a reproduo e manipulao de culturas conhecidas por conterem esses agentes.
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Transferncia do Agente: A licena para importao dever ser obtida junto ao CDC.
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Seo VII-C: Agentes Parasitrios

Agente: Protozorios Parasitas de Tecido e Sangue Humanos
Infeces com o Plasmodium spp. (incluindo o P. cynomolgi), o Trypanosoma spp e a Leishmania spp. adquiridas em laboratrio foram relatadas1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,12. Embora nenhuma infeco laboratorial com a Babesia spp. tenha sido relatada, um indivduo pode adquirir uma infeco atravs de uma picada acidental com agulha ou atravs de uma picada de um carrapato infectado. Embora infeces associadas a animais de laboratrio no sejam comuns, a malria transmitida pelo mosquito realmente ocorre. Outras fontes diretas potenciais de infeco para a equipe de um laboratrio incluem o contato com um material extrado de uma leso de roedores que apresentam uma leishmaniose cutnea e o contato com fezes ou sangue de animais experimentalmente ou naturalmente infectados com T. cruzi13.
Riscos em Laboratrio: Os estgios contagiosos destes agentes podem estar presentes no sangue, fezes, fludo cerebroespinhal, medula ssea ou em outros tecidos de bipsia, exudatos de leso e artrpodes infectados. Dependendo do parasita, os riscos primrios laboratoriais incluem a ingesto, penetrao na pele atravs de ferimentos ou microabrases, inoculao parenteral acidental e transmisso atravs de vetores artrpodes. A exposio aos aerossis ou perdigotos de organismos nas membranas mucosas dos olhos, nariz ou boca considerada como um risco potencial quando o trabalho com culturas de Leishmania spp., T. cruzi ou com homogeneizao de culturas ou de sangue contendo hemoflagelados realizado. Os indivduos imunocomprometidos devem evitar qualquer trabalho com esses agentes vivos. Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades com estgios infecciosos dos parasitas acima relacionados. Os artrpodes
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Relao dos Agentes Agentes Parasitrios
infectados devem ser mantidos em dependncias que impeam a exposio do pessoal do laboratrio ou a sada do artrpode para fora do local. A conteno primria (por exemplo, cabine de segurana biolgica) ou proteo pessoal (por exemplo, proteo facial) pode ser indicada quando o trabalho com culturas de Leishmania spp., de T. cruzi, ou a homogeneizao de tecidos ou de sangue contendo hemoflagelados forem realizados 14, 15 . Recomenda-se o uso de luvas para atividades onde exista a possibilidade do contato direto da pele com os estgios infecciosos dos parasitas acima listados. O tratamento apropriado para a maioria das infeces provocadas por protozorios existe e as informaes sobre dosagem, fonte da droga, etc. se encontram a disposio16.
Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente dever ser obtida atravs do CDC. Agente: Protozorios Parasitas do Intestino Humano.
Infeces com o Toxoplasma spp.; Entamoeba spp.; Isospora spp.; Giardia spp.; Sarcocystis spp. e o Cryptosporidium spp. associadas a laboratrio foram relatadas17, 18, 19, 20,21. Nenhuma infeco laboratorial com microspordios foi registrada, mas a ingesto de esporos encontrados nas fezes, urina, escarro, fludo cerebroespinhal ou culturas pode provocar uma infeco. Infeces associadas ao laboratrio de experimentao animal tm sido relatadas e constituem uma fonte direta de infeco para as pessoas que trabalham nestes laboratrios e que esto em contato com as fezes de animais naturalmente ou experimentalmente infectados. No caso de roedores inoculados experimentalmente com o Toxoplasma via intraperitoneal, o contato com o lquido peritoneal pode provocar uma exposio aos organismos infecciosos. J as infeces com o Cryptosporidium adquiridas em laboratrio ocorrem com regularidade em quase todos os laboratrios que trabalham com esse agente, especialmente aqueles nos quais os bezerros so usados como fonte de ocitos. Outros animais infectados experimentalmente tambm oferecem
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riscos potenciais. A evidncia circunstancial sugere que a transmisso area de ocitos deste pequeno organismo pode acontecer. Uma obedincia rigorosa a todas essas recomendaes reduz a ocorrncia de infeces nos laboratrios e em tratadores de animais.
Riscos em Laboratrio: Os estgios ativos infecciosos podem ser encontrados nas fezes ou em outros fludos e tecidos corporais. Dependendo do parasita, a ingesto o risco primrio laboratorial. Embora no se conhea o nvel do risco, as exposies das membranas mucosas dos olhos, nariz ou boca aos aerossis ou perdigotos de trofozotas podem ser riscos potenciais quando trabalhos com culturas de amebas que vivem livremente, como a Naegleria fowleri, Acanthamoeba ou a Balamuthia esto sendo realizados. Os indivduos imunocomprometidos devem evitar o trabalho com organismos vivos. Devido s graves conseqncias da toxoplasmose em fetos em desenvolvimento e em mulheres sorologicamente negativas que podem engravidar, cabe ao supervisor do laboratrio informar essas mulheres sobre os riscos potenciais ao feto. Caso os empregados bem informados sobre os riscos se recusarem a ficar expostos a esses agentes, o laboratrio dever designar outras atividades em uma rea de trabalho onde o Toxoplasma no esteja sendo manipulado. O trabalho com ocitos contagiosos oferece um risco maior de se adquirir uma infeco. As picadas de agulhas com material contendo taquizotas ou bradizotas atravs da membrana mucosa ou de abrases na pele tambm so riscos significativos. A infeco por taquizotas ou bradizotas atravs da membrana mucosa ou de abrases da pele tambm so possveis. Os laboratrios que conduzem estudos somente com materiais de parasitas mortos ou inativados e com fraes de parasitas no oferecem riscos significativos de infeco. Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades com estgios contagiosos dos parasitas acima listados. A conteno primria (por exemplo, cabine de segurana biolgica) ou a proteo pessoal (por exemplo, protetor facial) pode ser indicada em trabalhos envolvendo culturas de Naegleria fowleri ou Cryptosporidium. O
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tratamento apropriado para a maioria das infeces provocadas por protozorios j existe e mais informaes sobre a dose, fonte das drogas, etc. esto disponveis22.
Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente dever ser obtida atravs do CDC. Agente: Trematdeos Parasitas de Humanos (Schistosoma spp. e Fasciola spp.)
Infeces com o Schistosoma spp. e a Fasciola spp. adquiridas em laboratrio tm sido relatadas. Nenhuma infeco estava diretamente associada aos animais de laboratrio, com exceo dos moluscos infectados, que so os hospedeiros intermedirios23, 24, 25,26 .
Riscos em Laboratrio: Os estgios contagiosos do Schistosoma spp. (cercria) e da Fasciola spp. (metacercria) podem ser encontrados, respectivamente, na gua ou encistados em plantas de aqurios de laboratrios usados para manter os caracis hospedeiros. A penetrao das cercrias do esquistossomo na pele e a ingesto da metacercria de qualquer trematdeo so considerados riscos primrios. A disseco ou o esmagamento de caracis infectados pelo esquistossomo pode tambm resultar na exposio da pele ou da membrana mucosa aos tecidos contendo as cercrias. Alm disto, a metacercria pode ser transferida inadvertidamente das mos para a boca atravs dos dedos ou das luvas, depois do contato com a vegetao aqutica contaminada ou com as superfcies contaminadas do aqurio. A maioria das exposies laboratoriais ao Schistosoma spp. supostamente resultaria em baixas cargas de vermes com um potencial mnimo da doena. Drogas seguras e eficazes para o tratamento da esquistossomose j se encontram no mercado. Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades com os estgios contagiosos dos parasitas acima citados. Recomenda-se o uso de luvas onde houver um contato direto com gua contaminada
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por cercrias, ou onde houver vegetao contendo metacercria de caracis infectados experimentalmente ou naturalmente. Jalecos de mangas compridas ou outro traje de proteo devero ser usados quando um trabalho ao redor do aqurio ou em outras fontes de gua que possam conter cercrias do esquistossomo estiver sendo realizado. Os caracis e as cercrias encontradas na gua proveniente do aqurio do laboratrio devem ser eliminados atravs de substncias qumicas (por exemplo, hipoclorito, iodo) ou atravs do calor antes de serem jogados no esgoto. O tratamento apropriado para grande parte das infeces causadas por trematdeos existe, e as informaes sobre a fonte das drogas, dosagens, esto disponveis27.
Transferncia do Agente: A licena para importao do agente deve ser obtida junto ao CDC. Agente: Cestides Parasitas de Humanos Echinococcus granulosus, Taenia solium (cysticercus cellulosae ) e Hymenolepis nana.
Embora nenhuma infeco com o E. granulosus ou a T. solium relacionada a laboratrio tenha sido relatada, as conseqncias destas infeces aps a ingesto de ovos infectados por E. granulosus ou T. solium so potencialmente srias. A H. nana um parasita cosmopolita que no requer um hospedeiro intermedirio e a contaminao se d diretamente atravs da ingesto de fezes humanas ou de roedores infectados.
Riscos em Laboratrio: Os ovos infectados podem ser encontrados nas fezes de ces ou de outros candeos (hospedeiro definitivo do E. granulosus) ou nas fezes humanas (o hospedeiro definitivo da T. solium). A ingesto de ovos infectada destas fontes considerada como risco primrio em laboratrios. Os cistos e fludo de cistos do E. granulosus no so infecciosos para o homem. J os cistos que contm a larva da T. solium (Cysticercus cellulosae) prontamente produzem a infeco humana com a solitria adulta. A ingesto de um nico ovo infectado pelos dois parasitas e proveniente das fezes do hospedeiro definitivo pode potencialmente
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resultar em uma sria patologia. A ingesto dos ovos da H. nana nas fezes do hospedeiro definitivo pode causar uma infeco intestinal.
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para o trabalho com os estgios contagiosos destes parasitas. Deve-se dar uma ateno especial a higiene pessoal (por exemplo, a lavagem das mos) e evitar a ingesto de ovos infectados. Recomenda-se o uso de luvas quando houver um contato direto com as fezes ou com superfcies contaminadas por fezes frescas de ces infectados por E. granulosus, com humanos infectados pela T. solium adulta ou com humanos ou roedores infectados pela H. nana. O tratamento adequado para muitas infeces causadas por cestides existe e informaes sobre a fonte das drogas, dosagem, etc. j se encontram disponveis28. Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente deve ser obtida atravs do CDC. Agente: Nematides Parasitas de Humanos
Infeces por Ascaris spp.; Strongyloides spp; ancilstomos e Enterobius spp. j foram relatadas. As reaes alrgicas a vrios componentes antignicos de nematides (por exemplo, antgenos de Ascaris nebulizados) podem representar um risco ao indivduo sensvel. As infeces associadas a laboratrio (incluindo artrpodes) no foram registradas, mas as larvas contagiosas encontradas nas fezes de primatas no-humanos infectados com o Strongyloides spp. so consideradas como um risco potencial de infeco para trabalhadores de laboratrio e tratadores de animais.
Riscos em Laboratrio: Os ovos e larvas de fezes frescas do hospedeiro definitivo no so geralmente infecciosos, uma vez que o desenvolvimento dos estgios infecciosos pode levar de um dia at vrias semanas. A Trichinella preocupa porque o tecido fresco ou digerido pode conter larvas que seriam infecciosas se ingeridas. A ingesto de ovos infectados ou a penetrao na pele de larvas
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infectadas so os riscos primrios para as pessoas que trabalham em um laboratrio e as que tratam dos animais. Os artrpodes infectados com os parasitas filariais oferecem um risco potencial para a equipe laboratorial. comum o desenvolvimento de uma hipersensibilidade em trabalhadores de laboratrios que freqentemente so expostos aos antgenos aerolizados de Ascaris spp.
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades que envolvam os estgios contagiosos relacionados. A exposio aos antgenos sensibilizados aerolizados do Ascaris spp. deve ser evitada. Uma conteno primria (por exemplo, cabine de segurana biolgica) pode ser necessria para o trabalho com estes materiais por indivduos hipersensveis. O tratamento adequado para maior parte das infeces causadas por nematides existe, e maiores informaes sobre a dosagem, fonte das drogas e etc. j se encontram disponveis32. Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente deve ser obtida junto ao CDC.
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Seo VII-D: Prions
Os Centros para Controle e Preveno da Doena e os Institutos Nacionais de Sade gostariam de expressar seus agradecimentos a Jiri Safar, M.D; Darlene Groth, A.B; Stephen J. DeArmond, M.D., Phd. e Stanley B. Prusiner, M.D., da University of California San Francisco, San Francisco, CA, pelas contribuies neste campo emergente e na preparao desta seo.
Os prions so partculas Infecciosas de Proteinceos que no possuem cidos nuclicos1. Os prions so em grande parte, se no totalmente, compostos por um isoforme anormal de uma protena celular normal. Em mamferos, os prions so compostos de um isoforme anormal, patognico da protena prinio (PrP), chamada de PrPSc. O expoente Sc inicialmente derivou-se do termo scrapie (tronco), j que a scrapie um distrbio degenerativo contagioso do sistema nervoso de ovinos e caprinos provocado pelos prions. Uma vez que todas as doenas causadas por prions conhecidas (Tabela 6) em mamferos envolvem o metabolismo aberrante do PrP semelhante ao observado na scrapie, o uso de um expoente Sc indicado para todos os isoformes PrP patognicos, anormais2. Neste contexto, o expoente Sc utilizado para designar a isoforma do PrP semelhante do scrapie. Um gene cromossmico decodifica os genes PrP e no PrP que so encontrados em preparaes purificadas dos prions. O PrPSc derivado do PrPC (o isoforme celular do PRP) por um processo ps-translacional onde o PrPSc adquire um alto contedo da enzima b da ovelha3. Nem os cidos nuclicos especficos de prions e nem as partculas semelhantes ao vrus foram detectados nas preparaes infecciosas purificadas. Em fungos, evidncias de trs prions diferentes foram acumuladas4. Os prions em mamferos causam a scrapie e outras doenas neurodegenerativas relacionadas ao homem e animais (Tabela 6).
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Relao de Agentes Prions
As doenas provocadas pelos prions tambm so referidas como encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs)5. Tabela 1. As doenas causadas por Prions
Patologias (Abreviao) Scrapie Hospedeiro Natural ovelhas e cabras Prions Isoforma Patognica do PrP OvPrPSc
scrapie prions
Encefalopatia Transmissvel de Viso (TME) Doena Crnica Distrfica(CWD) Encefalopatia Espongiforme Bovina (BSE) Encefalopatia Espongiforme Felina (FSE) Encefalopatia Extica Ungulado (EUE) Kuru Doena de CretzfeldtJakob (CDJ) Sndrome de Gerstmann Stussler-Scheinker (GSS) Insnia familiar Gatal (FFI)
viso
prions TME
MkPrPSc
alce e veado de orelhas longas gado
prions CWD
MdePrSc
prions BSE
BoPrPSc
gatos
prions FSE
FePrPSc
antlope africano e niala humanos humanos
prions EUE
UngPrPSc
prions kuru prions CJD
HuPrPSC HuPrPSc
humanos
prions GSS
HuPrPSc
humanos
prions FFI
HuPrPSc
Prions especficos de espcies. Diferente de alguns vrus, as propriedades dos prions mudam dramaticamente quando so passados de uma espcie para outra. Os resultados de estudos transgnicos (Tg) em camundongos indicam que, quando os prions de homens so passados para os camundongos, a patogenicidade potencial dos no transgnicos para os humanos diminui drasticamente6. Os prions que so reproduzidos em camundongos no transgnicos so agora prions de camundongo e prions no
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humanos. Estes prions de camundongos contm o PrPSc, o PrPSc no humano. Esta mudana especfica da espcie na molcula do PrPSc acompanhada pela alterao na patogenicidade do prions. Em contraste aos prions humanos, os prions de camundongo so altamente patognicos para o prprio camundongo. Nossa compreenso destas mudanas especficas na patogenicidade do prions de cada espcie proveniente, em grande parte, de estudos de camundongos que apresentam uma variedade de transgenes PrP. Uma vez que o PrPSc produzido no camundongo derivado do PrPC no possvel determinar a origem do prions inicialmente inoculado no camundongo7. Vale a pena observar que a susceptibilidade de espcies em particular a um prions de outras espcies pode ser profundamente afetada pelas diferentes cepas de prions. As propriedades manifestadas pelas cepas de prions como o perodo de incubao e os perfis neuropatolgicos parecem estar contidas na estrutura do PrPSc. Tais consideraes dos princpios bsicos da biologia prinica ajudam a formar a base para a classificao da biossegurana de diferentes prions.
Classificao do Nvel de Biossegurana: Os prions humanos e os reproduzidos em macacos e chimpanzs so manipulados no Nvel de Biossegurana 2 ou 3, dependendo dos estudos que esto sendo conduzidos. Os prions BSE so igualmente manipulados no Nvel de Biossegurana 2 ou 3, devido possibilidade dos prions terem sido transmitidos aos seres humanos na Gr-Bretanha e na Frana9.
Todos os outros prions animais so considerados patgenos do Nvel de Biossegurana 2. Portanto, baseado na nossa compreenso atual sobre a biologia do prions descrita acima, assim que os prions humanos so passados para camundongos ocorre a produo do PrPSc de camundongo. Neste caso, estes prions devem ser considerados como prions do Nvel de Biossegurana 2, embora os prions humanos sejam manipulados no Nvel de Biossegurana
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3 em grande parte das condies experimentais. Uma exceo a esta regra no caso de camundongos que apresentam transgenes de camundongo/humanos quimricos ou humanos. Esses camundongos transgnicos produzem prions humanos quando infectados por prions humanos e devem ser tratados no Nvel de Biossegurana 2 ou 3, de acordo com os procedimentos descritos acima. Os mecanismos do prions disseminado em ovelhas e caprinos que so os responsveis pelo desenvolvimento do scrapie ainda so desconhecidos10, 11. Acredita-se que os prions CWD, TME, BSE, FSE e EUE ocorrem depois do consumo de alimentos infectados por prions12, 13, 14,15.
Doenas Humanas provocadas por Prions: Os mesmos cuidados usados em pacientes com AIDS ou com hepatite so certamente adequados para as patologias provocadas por prions e pacientes que esto morrendo devido a esta patologia. Em contraste a essas doenas virticas, as doenas provocadas por prions no so transmissveis e nem contagiosas 16. No h evidncias sobre a transmisso atravs de contato ou de aerossis de prions de um indivduo para outro. Porm, esses agentes se tornam contagiosos sob algumas circunstncias, como por exemplo, no ritual de canibalismo na Nova Guin que provoca a doena chamada de kuru, na administrao do hormnio do crescimento contaminado por prions que resultar na CJD iatrognica e no transplante de enxertos de tecido da dura-mter contaminado por prions que provocam a doena em outras pessoas. J as doenas CJD, GSS e FFI familiares, so doenas provocadas por prions dominantes herdados. Cinco mutaes diferentes do gene PrP mostraram ser geneticamente ligadas ao desenvolvimento da doena congnita. Muitos prions de doenas congnitas foram transmitidos aos chimpanzs, macacos e camundongos portadores de transgenes PrP humano20, 21,22. Procedimentos Cirrgicos: Os procedimentos cirrgicos em pacientes diagnosticados como portadores da doena prinica devem ser minimizados. Acredita-se que a CJD tenha sido transmitida de um paciente portador da CJD para dois outros que, momentos depois, sofreram procedimentos neurocirrgicos na
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mesma sala de cirurgia23. Embora no existam documentos que comprovem a transmisso de prions aos homens atravs da exposio da pele intacta ou das membranas e gstricas aos perdigotos de sangue ou de lquido cerebroespinhal, o risco da ocorrncia de tais infeces uma possibilidade. A esterilizao dos instrumentos e a descontaminao da sala de cirurgia deve ser realizada, de acordo com as recomendaes descritas acima. Por ser importante o estabelecimento de um diagnstico definitivo de uma doena provocada por prions e a distino entre casos familiares e espordicos e as adquiridas pela contaminao ocorrida atravs de procedimentos mdicos ou da ingesto de alimentos contaminados por prions, deve-se obter o tecido cerebral no-fixado. Em todos os casos de suspeita de uma doena prinica, um mnimo de um centmetro cbico de crtex cerebral no-fixado deve fazer parte da bipsia. Essa amostra deve ser biseccionada a partir da superfcie cortical at a substncia branca do crebro adjacente, com uma metade da amostra fixada em formalina e a outra metade congelada.
Autpsias: As autpsias de rotina e o processamento de quantidades de tecidos fixados em formalina contendo prions humanos requerem os cuidados de um Nvel de Biossegurana 221. Na autpsia, todo o crebro deve ser coletado e cortado em seces coronais de aproximadamente 4 cm de espessura. Pequenos blocos de tecidos podem facilmente ser removidos de cada seco coronal e colocados em um fixador para posterior anlise histopatolgica. Cada seco coronal dever ser imediatamente lacrada por calor em uma sacola de plstico para carga pesada. Presupe-se que o exterior desta sacola esteja contaminado por prions e por outros patgenos. Com luvas novas ou com a ajuda de um assistente que esteja usando luvas sem contaminao, esta sacola contendo a amostra dever ser colocada em outra sacola plstica que no possua uma superfcie exterior contaminada. As amostras, ento, devero ser congeladas em gelo seco ou colocadas diretamente em um freezer com temperatura de 70 C para armazenamento. Deve-se obter e congelar, no mnimo, uma seco coronal do hemisfrio do cerebelo contendo o tlamo e uma do hemisfrio cerebelar e do tronco cerebral.
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A ausncia de qualquer tratamento eficaz para doenas prinicas demanda muita cautela. As maiores concentraes de prions se encontram na rea do sistema nervoso central. Baseado em estudos animais h a possibilidade de que altas concentraes de prions sejam encontradas no bao, timo, ndulos linfticos e pulmes. O principal cuidado a ser tomado quando estiver realizando um trabalho com material contaminado ou infectado por prions o de evitar a perfurao da pele25. A pessoa que estiver realizando o procedimento dever utilizar luvas resistentes a perfuraes. Caso ocorra uma contaminao acidental da pele, a rea dever ser esfregada com hidrxido de sdio a 1 N durante cinco minutos e depois enxaguada com enormes quantidades de gua. As Tabelas de 2-5 proporcionam procedimentos para a reduo de perfuraes na pele, formao de aerossis e contaminao da sala de cirurgia, das superfcies do necrotrio e dos instrumentos. As amostras nofixadas de crebro, medula espinhal e de outros tecidos contendo prions humanos devero ser processadas com extremo cuidado em um Nvel de Biossegurana 3.
Encefalopatia Espongiforme Bovino. O risco de contaminao humana pelos prions BSE ainda no est muito claro. Talvez, a abordagem mais prudente seja estudar os prions BSE em dependncias de um Nvel de Biossegurana 2 ou 3 dependendo das amostras a serem estudadas, como observado para prions humanos (crebro, medula espinhal). Doenas prinicas em roedores experimentais. Os camundongos e hamsters so os animais experimentais de escolha para todos os estudos da doena prinica. Com o desenvolvimento do camundongo transgnico, que altamente susceptvel aos prions humanos, o uso de chimpanzs e macacos raramente necessrio. As maiores titulaes de prions (~ 109,5 DI50/g) so encontradas no crebro e na medula espinhal de roedores de laboratrio infectados com cepas adaptadas de prions26, 27, e as menores titulaes (~ 106 DI50 /g) esto presentes no bao e no sistema linforeticular28, 29. Propriedades Fsicas dos Prions. A menor partcula de um prions infeccioso provavelmente de um dmero de PrPSc. Esta
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estimativa consistente com o tamanho de um alvo de radiao ionizante de 55 9 kDa30. Portanto, os prions podem no ser contidos pela maioria dos filtros existentes que de forma eficaz eliminam as bactrias e vrus. Alm disto, os prions se agregam s partculas de tamanho no uniforme e assim, os detergentes no conseguem solubiliz-los, exceto sob condies de desnaturao onde a infectividade perdida31, 32. Os prions resistem inativao atravs da nuclease33, irradiao de UV a 254 nm34, 35 e tratamento com psoralens36, ctions divalentes, queladores do on metal, cidos (entre pH 3 e 7), hidroxilamina, formalina, ebulio ou proteases37, 38 .
Inativao dos prions. Os prions se caracterizam pela extrema resistncia aos procedimentos convencionais de inativao incluindo a irradiao, a ebulio, calor seco e agentes qumicos (formalina, betapropiolactona, lcoois). Embora a infectividade do prions em amostras purificadas seja diminuda pela prolongada digesto com proteases39, 40, os resultados de ebulies em dodecilsulfato de sdio e uria so variveis. A esterilizao de extratos cerebrais de roedores com altas titulaes requer o uso da autoclave a 132 C durante quatro horas e meia. Os solventes orgnicos desnaturadores como o fenol, os reagentes caotrpicos como o tiocianato de guanidina e os lcalis como o NaOH podem tambm ser utilizados para a esterilizao41, 42, 43, 44,45. Os prions so inativados atravs do NaOH a 1 N, cloridrato ou isocianato de guanidnio a 4.0 M, hipoclorito de sdio (concentrao livre de cloro 2) e autoclave a vapor a 132 C durante quatro horas e meia46, 47, 48,49. Recomendase que o dejeto seco seja autoclavado a 132 C durante quatro horas e meia ou ento incinerado. Grandes volumes de dejetos lquidos infecciosos contendo altas titulaes de prions podem ser totalmente esterilizados atravs do tratamento com NaOH a 1 N (concentrao final) ou atravs de uma autoclave a 132 C durante quatro horas e meia. Os vasilhames plsticos, que podem ser descartados como dejeto seco, so altamente recomendveis. Uma vez que o procedimento de vaporizao com paraformaldedo no diminui a titulao do prions, as cabines de segurana devem ser descontaminadas com NaOH a 1 N, seguido de HCI a 1 N e depois enxaguadas com gua. Os filtros HEPA devem ser autoclavados e incinerados.
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Embora no haja evidncias que possam sugerir que a transmisso via aerosol ocorra na doena natural, mais prudente evitar a formao de aerossis ou perdigotos durante a manipulao de tecidos ou lquidos e durante a necropsia de animais experimentais. Recomenda-se tambm, o uso de luvas para atividades que propiciem o contato direto da pele com tecidos e lquidos infecciosos. Os tecidos fixados em formaldedos e embebidos em parafina, especialmente tecidos cerebrais, permanecem infecciosos. Alguns pesquisadores recomendam que tecidos de casos suspeitos de doenas prinicas fixados em formaldedos sejam imersos durante 30 minutos em cido frmico a 96% ou em fenol antes de ser processado histopatologicamente50, mas esse tratamento pode distorcer a neuropatalogia microscpica.
Manuseio e processamento de tecidos de pacientes com suspeita de doena por prions. As caractersticas especiais do trabalho com prions requerem uma ateno particular com as instalaes, equipamentos, normas e procedimentos envolvidos. As consideraes relacionadas sublinhadas nas seguintes tabelas devem ser incorporadas administrao dos riscos laboratoriais para este trabalho.
Tabela 2. Precaues padres* para autpsias de pacientes com suspeita de doena por prions. *No confundir com Procedimentos Universais Padres 1. O atendimento dever ser limitado a um patologista experiente e uma equipe pequena. Os membros da equipe devero evitar o contato direto com o corpo, mas devero assistir ao procedimento atravs do manuseio dos instrumentos e recipientes da amostra. 2. Um traje padro para autpsia obrigatrio. a. Ao invs de um avental de tecido, deve-se usar uma roupa descartvel e a prova de gua. b. Luvas resistentes a cortes e perfuraes devero ser colocadas debaixo de dois pares de luvas cirrgicas ou
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luvas chain mail, que devero ser usadas entre dois pares de luvas cirrgicas. c. Os aerossis so formados principalmente durante a abertura do crnio com uma serra Stryker. Uma proteo respiratria adequada dever ser utilizada (PAPR). 3. Para reduzir a contaminao da sala de autpsia: a. A mesa de autpsia dever ser coberta com um lenol descartvel com fundo plstico prova dgua. b. Os instrumentos contaminados devero ser colocados em um papel absorvente. c. O crebro dever ser removido, enquanto a cabea dever ser colocada em um saco plstico para a reduo da nebulizao e de borrifos. d. O crebro poder ser colocado em um recipiente com um revestimento de saco plstico para pesagem. e. O crebro dever ser colocado em uma tbua de corte e as amostras adequadas sero dissecadas para o congelamento instantneo (veja Tabela 4). f. O crebro ou os rgos a ser fixado dever ser imediatamente colocado em um recipiente com um tampo neutro de formalina a 10%. g. Na maioria dos casos de suspeita de doena prinica, a autpsia pode ser limitada somente ao exame do crebro. Em casos que exijam uma autpsia completa, devemos considerar o exame e amostragem dos rgos torcicos e abdominais in situ. Tabela 3. Procedimentos de descontaminao da sala de autpsia. 1. Os instrumentos (grampos) e as lminas da serra devero ser colocados em uma placa grande de ao inoxidvel que dever
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ser imersa durante uma hora em hidrxido de sdio a 2 N ou durante duas horas em hidrxido de sdio a 1 N, e depois devero ser bem enxaguados em gua antes de serem autoclavados a uma temperatura de 134 C (autoclave de vapor com deslocamento de gravidade) por 1 hora; autoclave de vapor para cargas porosas por um ciclo de 18 minutos a 30 libras por polegada quadrada ou seis ciclos de 3 minutos a 30 libras por polegada quadrada). 2. A serra Stryker dever ser descontaminada atravs de repetidas umidificaes com uma soluo de hidrxido de sdio a 2 N por um perodo de um hora. Uma lavagem adequada dever ser realizada para remoo do NaOH residual. O papel absorvente que cobre a mesa e envolve os instrumentos, as roupas descartveis, etc. devero ser duplamente embaladas em sacos adequados para lixos infecciosos para posterior incinerao. Quaisquer reas suspeitas de contaminao da mesa ou da sala de autpsia devero ser descontaminadas atravs de repetidos banhos de uma soluo de hidrxido de sdio a 2 N durante uma hora.
3.
4.
Tabela 4. Procedimentos de corte do crebro. 1. Aps a adequada fixao em formaldedo (pelo menos de 1014 dias), o crebro dever ser examinado e cortado sobre uma mesa coberta com um papel absorvente que possua a parte de trs coberta por um material impermevel. As amostras para a histologia devero ser etiquetadas com o termo: As precaues da CJD. Para laboratrios que no possuam equipamento para colorao e imerso ou um micrtomo exclusivo para doenas infecciosas incluindo a CJD, blocos de tecido fixado atravs da formalina podero ser colocadas em cido frmico absoluto a 96% durante 30 minutos, seguido de uma soluo de tampo neutro de formalina a 10% por pelo menos 48 horas51. O bloco de tecido ser,
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2.
ento, imerso em parafina como normalmente realizado. As tcnicas neurohistolgicas ou imunohistoqumicas padres no so afetadas pelo tratamento com o cido frmico; porm, de acordo com a nossa experincia, os cortes de tecidos se tornam quebradios e danificados durante o seccionamento. 3. Todos os instrumentos e superfcies que tiveram um contato com o tecido devero ser descontaminados como descrito na Tabela 3. Os resduos de tecidos, fragmentos de cortes e soluo de formaldedo contaminado devero ser descartados como lixo hospitalar descartvel para eventual incinerao.
4.
Tabela 5. Preparao do tecido 1. 2. Os tcnicos de histologia devero usar luvas, aventais, jalecos e proteo facial. A fixao adequada de pequenas amostras de tecidos (por exemplo, bipsias) de um paciente com suspeita de doena prinica dever passar por uma ps-fixao em cido frmico absoluto a 96% durante 30 minutos, seguido de 48m horas em formalina fresca a 10%. O dejeto lquido dever ser coletado em um garrafo para lixo de 4 litros contendo 600 ml de hidrxido de sdio a 6 N. As luvas, moldes imersos e todos os materiais de manipulao devero ser descartados como lixo de perigo biolgico. As fitas de tecido devero ser processadas manualmente para prevenir a contaminao dos processadores de tecido. Os tecidos que devero ser imersos em um molde descartvel. Caso seja utilizado, as pinas devero ser descontaminados. Ao preparar as seces, recomenda-se o uso de luvas. Os cortes no usados devero ser coletados e desprezados em um container para lixo de perigo biolgico. A faca dever ser
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3.
4.
5.
6.
7.
lavada com uma soluo de NaOH a 1-2N e dever ser descartada imediatamente em um recipiente para objetos cortantes biolgicos. As lminas devero ser etiquetadas com os dizeres Precaues contra CDJ. O bloco seccionado dever ser fixado com parafina. 8. Colorao de rotina: a. As lminas devero ser processadas manualmente. b. Os reagentes devero ser preparados em clices de 100 ml descartveis. c. Aps a colocao da lamnula, as lminas devero ser descontaminadas ao mergulh-las em uma soluo de NaOh a 2 N durante 1 hora. d. As lminas devero ser etiquetadas como CDJ Infecciosos. 9. Outras sugestes: a. Os clices descartveis ou as estantes para lminas podero ser usados para os reagentes. b. As lminas para a imunocitoqumica podero ser processadas em placas de Petri descartveis. c. O equipamento dever ser descontaminado como descrito acima.
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Seo VII-E: Agentes Rickettsiais

Agente: Coxiella burnetii
Dos agentes rickettisiais, a Coxiella burnetii provavelmente o agente que apresenta o maior risco de uma infeco laboratorial. O organismo altamente contagioso e incrivelmente resistente secagem e as condies ambientais1. A dose infecciosa dos organismos da Fase I virulenta em laboratrios animais tem sido calculada como sendo to pequena quanto um nico microorganismo. A dose humana infecciosa estimada ID25-50 (inalao) para a febre Q de 10 organismos2. O resumo de Pike indica que a febre Q a segunda infeco associada a laboratrio mais comumente relatada, com surtos envolvendo 15 ou mais pessoas registradas em vrias instituies3, 4. Vrios mamferos domsticos e selvagens so os hospedeiros naturais da febre Q e podem servir como fontes potenciais de infeco para as pessoas que trabalham em um laboratrio e para os tratadores de animais de laboratrios. A exposio a ovelhas naturalmente infectadas e freqentemente assintomticas e seus filhotes so parte de um risco documentado ao pessoal5, 6. Embora rara, a C. burnetii conhecida por causar infeces crnicas como a endocardite ou a hepatite granulomatosa.
Riscos em Laboratrio: A necessidade do uso de ovos embrionrios ou de tcnicas de cultura celular para a reproduo da C. burnetii leva a extensivos procedimentos de purificao. A exposio aos aerossis contagiosos e inoculao parenteral so as fontes mais provveis de contgio para as pessoas que trabalham em laboratrios e as que tratam de animais7. Os agentes podem ser encontrados em artrpodes infectados, no sangue, urina, fezes, leite e tecidos de hospedeiros animais ou humanos infectados. As placentas de ovelhas infectadas podem conter at 109 organismos por grama de tecido8, enquanto que o leite pode conter 105 organismos por grama. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicados para procedimentos
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Relao de Agentes Agentes Rickettsiais
laboratoriais no reprodutivos, incluindo os exames sorolgicos e a colorao de impresso dos esfregaos. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 3 so indicadas para atividades envolvendo a inoculao, incubao e a coleta de ovos embrionados ou de culturas de clulas, a necropsia de animais infectados e a manipulao de tecidos infectados. Uma vez que cobaias e outros roedores podem conter o agente nas fezes ou urina9, os roedores experimentalmente infectados devero ser mantidos sob um Nvel de Biossegurana Animal 3. O isolamento clonal especfico de cepas no virulentas (Fase II) pode ser considerado para condies de conteno inferiores10. Spinelli 11 e Bernard 12 descreveram as precaues recomendadas para as instalaes, quando ovelhas so utilizadas como animais experimentais. Uma nova Fase I de investigao, a vacina contra a febre Q (IND), j se encontra disponvel para os indivduos includos no Special Immnunizations Program (USAMRIID), em Fort Detrick, Maryland. O uso da vacina deve se limitar aos indivduos que esto expostos a altos riscos e que no tenham demonstrado sensibilidade ao antgeno da febre Q. Os indivduos que possuem uma doena cardiovalvular no devero trabalhar com a C. burnetii.
Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente deve ser obtida atravs do CDC. No caso de uma licena para exportao, esta dever ser conseguida atravs do Department of Commerce. O registro do laboratrio junto ao CDC necessrio para o envio ou recebimento do agente. J a licena para importao ou transporte domstico deste agente poder ser obtida atravs do USDA/APHI/VS. Agente: Rickettsia prowazekii, Rickettsia typhi (R. mooseri), Orientia (Rickettsia) tsutsugamushi e os agentes do Grupo da Febre Maculosa de doena humana; Rickettsia ricketsii, Rickettsia conorii, Rickettsia akari, Rickettsia australis, Rickettsia siberica e Rickettsia japonicum.
Pike relatou 57 casos de tifo (tipo no especificado) associado a laboratrio, 56 casos de tifo epidmico com trs mortes e alguns
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casos de tifo murino13. Mais recentemente, trs casos de tifo murino foram relatados em um laboratrio de pesquisa14. Dois destes trs casos estavam associados ao manuseio de materiais infecciosos em bancadas abertas e o terceiro caso foi provocado por uma inoculao parenteral acidental. Esses trs casos representaram uma incidncia de 20% das pessoas que trabalham com materiais infecciosos. A febre maculosa das Montanhas Rochosas um risco documentado para as equipes laboratoriais. Pike relatou 63 casos adquiridos em laboratrio, dos quais 11 foram fatais15. Oster, por sua vez, registrou 9 casos que ocorreram por um perodo de 6 anos em um laboratrio, que acreditava serem resultantes de uma exposio aos aerossis infecciosos16.
Riscos em Laboratrio: A inoculao parenteral acidental e a exposio aos aerossis contagiosos so as fontes mais provveis de infeces associadas a laboratrio17. A transmisso bem sucedida atravs de aerossis contaminados por R. rickettsii foi documentada experimentalmente em primatas no-humanos18. Cinco casos de varola por riqutsia registrados por Pike estavam associados a exposio s picadas de caros infectados19.
Mamferos naturalmente ou experimentalmente infectados, seus ectoparasitas e seus tecidos infectados so considerados riscos potenciais de infeco humana. Os organismos so relativamente instveis sob condies ambientais normais.
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para procedimentos laboratoriais no reprodutivos, incluindo procedimentos sorolgicos e de anticorpo fluorescente e ainda a colorao de impresso dos esfregaos. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 3 so indicadas para todas as outras manipulaes de materiais sabiamente ou potencialmente infecciosos, incluindo a necropsia de animais experimentalmente infectados e triturao de seus tecidos, a inoculao, incubao e coleta de ovos embrionados e culturas de clulas. As prticas e instalaes do Nvel de
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Biossegurana Animal 2 so indicadas para o alojamento de mamferos, com exceo dos artrpodes, experimentalmente infectados. J as prticas e instalaes do Nvel 3 so indicadas para estudos animais com artrpodes naturalmente ou experimentalmente infectados por agentes rickettsiais da doena humana. Devido ao valor comprovado da terapia com antibiticos nos estgios iniciais da infeco, essencial que os laboratrios que trabalham com a riqutsia possuam um sistema eficaz de relato de doenas febris na equipe laboratorial, uma avaliao mdica de casos potenciais e, quando indicado, a instituio de uma terapia antibitica adequada. As vacinas, atualmente, no esto a disposio para uso em homens (veja a seo seguinte sobre Vigilncia).
Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente deve ser obtida atravs do CDC. No caso de uma licena para exportao, esta dever ser conseguida atravs do Department of Commerce. O registro do laboratrio junto ao CDC necessrio para o envio ou recebimento do agente. Vigilncia da Equipe Laboratorial em relao s Infeces Rickettsiais Adquiridas em Laboratrios.
Sob circunstncias naturais, a gravidade da doena causada por agentes rickettsiais varia consideravelmente. Em laboratrio, inoculaes muito grandes so possveis, o que poderia produzir respostas raras, mas muito srias. A vigilncia da equipe em relao s infeces por rickttsias adquiridas a laboratrio pode reduzir de forma dramtica o risco de srias conseqncias da doena. A experincia mostra que as infeces quando adequadamente tratadas com quimioterapia anti-rickettisial especfica no primeiro dia da doena, geralmente no provocam srios problemas no indivduo. A demora em adotar esta quimioterapia, porm, pode resultar em uma doena debilitante ou muito aguda variando com perodos crescentes de convalescena
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no caso do tifo e em morte no caso de tifo rural em infeces por R. rickettsii. A chave para a reduo da gravidade da doena provocada por infeces associadas a laboratrio um sistema confivel de vigilncia que inclui: 1. Disponibilidade total de um mdico experiente; 2. Doutrinao de toda a equipe sobre os riscos potenciais do trabalho com agentes rickettisiais e as vantagens de uma terapia precoce, 3. Um sistema de relatrios para todas as exposies conhecidas e para todos os acidentes ocorridos, 4. Relatrios de todas as doenas febris, especialmente as associadas a dor de cabea, mal-estar e prostrao quando no existir nenhuma outra causa e 5. Uma atmosfera de no punio que possa motivar o relato de qualquer doena febril. Os agentes rickttesiais podem ser manipulados em um laboratrio com um perigo real mnimo quando um sistema adequado de vigilncia for complementado por uma equipe que tenha conhecimento sobre os riscos de infeces por riqutsias e usos de medidas seguras recomendadas pelo Resumo das Caractersticas dos Agentes.
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Seo VII-F: Agentes Virais (no incluindo o arbovrus)

Agentes: Hantavrus
O trabalho com o vrus de Hantaan (febre hemorrgica com sndrome renal) e outros hantavrus (Puumala, Seul e Sin Nombre sendo ou no registrados no International Catalogue of Arboviruses and Certain Other Viruses 1985, como o vrus El Moro Canyon) em ratos, ratazana e outros roedores de laboratrio, dever ser conduzido com especial cuidado devido ao risco extremo de contgio por aerossis, especialmente da urina de roedores infectados. A Sndrome Pulmonar por Hantavrus (HPS) uma nova doena grave e freqentemente fatal, causada pelo vrus Sin Nombre e/ou um vrus relacionado 1. A maioria dos casos de patologias humanas resultou de exposies a roedores selvagens naturalmente infectados. Os vetores artrpodes no so conhecidos como transmissores do hantavrus. Nenhuma transmisso de um indivduo para outro foi provocada por um vrus associado a essa doena.
Riscos em Laboratrio: A transmisso laboratorial do hantavrus de roedores para os homens atravs do aerossol bem documentada2, 3, 4,5. As exposies s excrees de roedores, material fresco para necropsia e roupas que envolvem os animais de laboratrio so supostamente associadas ao risco. Outras vias potenciais de infeco incluem a ingesto, o contato de materiais contagiosos com membranas mucosas ou pele rachada e, em particular, mordidas de animais.
Quatro trabalhadores de laboratrio foram infectados enquanto trabalhavam com o vrus Hantaan adaptado a uma cultura de clulas. Embora os procedimentos associados s infeces ainda no estejam bem explicados, esses quatro indivduos trabalharam repetidas vezes com culturas de hantavrus e realizaram a centrifugao do vrus concentrado6. O RNA viral foi detectado em amostras de necropsias e no sangue e plasma de um paciente
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Relao de Agentes Agentes Virais
coletados no incio da doena7. As implicaes destas descobertas para a infectividade do sangue ou dos tecidos so desconhecidas.
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para o manuseio laboratorial de soros de pessoas potencialmente infectadas com os agentes da HPS. O uso de uma cabine de segurana biolgica certificada recomendado para todas as manipulaes com lquidos humanos corporais quando existe um potencial para a formao de borrifos ou aerossis.
Amostras de tecidos potencialmente infectados devero ser manipuladas em instalaes do NB-2 seguindo as prticas e procedimentos do NB-3. A reproduo do vrus em culturas de clulas dever ser realizada em uma instalao do NB-3, seguida das prticas e procedimentos do NB-3. O crescimento em grande escala do vrus, incluindo a preparao e manuseio dos concentrados virais, dever ser feito em instalaes de conteno do NB-4. Espcies de roedores experimentalmente infectados conhecidos por no apresentarem o vrus nas fezes podero ser alojados em instalaes do NBA-2, usando prticas e procedimentos do NBA-2. As cabines de segurana e outros dispositivos de conteno fsica primria devero ser utilizados onde procedimentos com um alto potencial para formao de aerossis estiverem sendo conduzidos. O soro ou amostras de tecidos de roedores potencialmente infectados dever ser manipulado em NB 2, usando prticas e procedimentos de um NB-3. Todo o trabalho envolvendo a inoculao do vrus contendo amostras do P. maniculatus ou outras espcies permissivas dever ser conduzido em NBA-4.
Transferncia do Agente: A licena para importao destes agentes deve ser conseguida atravs do CDC. A licena para exportao dever ser conseguida junto ao Department of Commerce e necessrio o registro do laboratrio junto ao CDC antes do envio ou recebimento destes agentes.
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Agente: Hendra e Vrus Semelhantes a Hendra (inclusive o vrus anteriormente conhecido como Morbilivirus Eqino)
Surtos de um paramixovrus anteriormente desconhecido, que foi primeiramente chamado de morbilivrus eqino e posteriormente denominado de vrus Hendra, ocorreram em cavalos na Austrlia em 1994 e 19958, 9, 10,11,12. Trs pessoas que possuam um contato prximo com cavalos enfermos desenvolveram a encefalite ou a doena respiratria e duas falecerem. Nenhum surto associado doena humana foi reconhecido, mas dois indivduos que trabalhavam em chiqueiro de porcos lembraram de uma doena que tiveram semelhante gripe, na mesma poca em que ocorreram os surtos. Alm disto, todos os dois indivduos possuam titulaes neutralizadoras de anticorpos ao vrus de Menangle. De 1998 a 1999, um surto da doena provocado por um vrus semelhante, mas distinto do Hendra aconteceu na Cingapura e Malsia13. Nestes dois pases, a doena humana - caracterizada por febre, dor de cabea grave, mialgia e sinais de encefalite acometeu indivduos que tiveram um contato prximo com porcos (isto , fazendeiros e trabalhadores de abatedouros). Poucos pacientes desenvolveram uma doena respiratria. Metade das pessoas infectadas por esse vrus faleceram. O(s) hospedeiro(s) natural(is) da Hendra e de vrus semelhantes a Hendra no foram identificados. Porm, na Austrlia os morcegos eram animais suspeitos de carregarem o vrus Hendra. Estudos epidemiolgicos e laboratoriais esto em andamento. Nenhuma infeco adquirida em laboratrio conhecida por ter sido resultante da exposio ao Hendra ou ao vrus semelhante a Hendra. Porm, deve-se observar que nos surtos da Austrlia e da Malria/Cingapura, o vrus foi reconhecido como um significativo patgeno veterinrio. Estudos laboratoriais foram limitados aos laboratrios de doenas infecciosas humanas e/ou veterinrias de alta conteno. Os cientistas e veterinrios da sade pblica, por sua vez, tm acompanhado de perto todos estes estudos.
Riscos em Laboratrio: O modo exato de transmisso ainda no foi estabelecido. Todos os casos at hoje estavam associados
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ao contato prximo com cavalos, e com o sangue ou lquidos corporais de cavalos (Austrlia) ou de porcos (Malsia/Cingapura). O vrus Hendra e o semelhante a ele foram encontrados nos tecidos de animais contaminados durante os surtos descritos acima. Em um recente surto na Malsia e em Cingapura, o antgeno viral foi descoberto no sistema nervoso central, tecidos renais e pulmonares de casos humanos fatais14.
Precaues Recomendadas: Devido aos riscos desconhecidos para os trabalhadores do laboratrio e ao impacto potencial sobre criaes de animais nativos, o vrus dever ser pesquisado ou diagnosticado no laboratrio. Os fiscais da sade e os gerentes dos laboratrios devero avaliar a necessidade de se realizar um trabalho com esse vrus e a capacidade das dependncias antes de iniciarem qualquer trabalho com o Hendra, com o vrus semelhante ao Hendra ou com vrus suspeitos relacionados. Especialistas em doenas da sade pblica e veterinria devero desenvolver planejamentos como estudos laboratoriais e transporte de amostras e de substncias isoladas para o laboratrio. At que mais informaes sejam conseguidas, o manuseio de amostras clnicas humanas ou tentativas de isolamento deste vrus dever ser realizado em dependncias de um NB-3 e por pessoas experientes. O NB-4 (laboratrio escafandro ou cabines de segurana Classe III) dever ser utilizado em qualquer trabalho envolvendo animais contaminados ou envolvendo grandes quantidades de vrus15. Transferncia do agente: A licena para importao deste agente deve ser obtida atravs do CDC. No caso de uma licena para exportao, esta dever ser conseguida atravs do Department of Commerce. O registro do laboratrio junto ao CDC necessrio para o envio ou recebimento do agente. Agente: Vrus da Hepatite A, Vrus da Hepatite E
As infeces com os vrus da hepatite A e E adquiridas em laboratrio no parecem ser importantes riscos ocupacionais para as equipes laboratoriais. Porm, a doena um risco documentado para as pessoas que manuseiam animais e para outros que trabalham com chimpanzs e outros primatas no-humanos
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experimentalmente ou naturalmente contaminado16. O vrus da hepatite E parece ser um risco menor para as pessoas que trabalham com ele do que o grande risco envolvendo os que manuseiam o vrus da hepatite A, exceto durante a gravidez quando a infeco pode resultar em uma doena fatal ou grave. Os trabalhadores que manipulam outros primatas recentemente capturados e susceptveis (macacos coruja, sagis) podem tambm estar correndo um srio risco.
Riscos em Laboratrio: Os agentes podem ser encontrados nas fezes, saliva e sangue de humanos e primatas no-humanos contaminados. A ingesto de fezes, gua de vaso sanitrio e de outros materiais contaminados o risco primrio para a equipe laboratorial. A importncia da exposio aos aerossis no foi demonstrada. Cepas atenuadas ou no virulentas dos vrus da hepatite A resultantes de passagens em srie em cultura celular foram descritas17, 18. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de segurana e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicados para atividades com fezes humanas ou de primatas no - humanos conhecidamente ou potencialmente contaminada. J as prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para atividades que usem primatas no-humanos naturalmente ou experimentalmente contaminados. Os tratadores de animais devero usar luvas e tomar outras precaues adequadas para evitar possveis exposies fecal-oral. Uma vacina inativada licenciada contra a hepatite A est disponvel na Europa. Nos Estados Unidos encontramos somente uma vacina de pesquisa que a recomendada para os trabalhadores de laboratrio. As vacinas contra a hepatite E no esto disponveis para o uso em humanos. Transferncia do Agente: A licena para importao este agente dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Vrus da Hepatite B, Vrus da Hepatite C (anteriormente conhecido como Vrus no-A e vrus no-B) e Vrus da Hepatite D
A hepatite B tem sido uma das infeces associadas a laboratrio19 mais freqentemente encontrada e os trabalhadores
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de laboratrio so reconhecidos como o grupo de maior risco de contaminao por este vrus20. Os indivduos contaminados pelo vrus da hepatite B correm o risco de contrarem o vrus da hepatite D (delta), que incompleto e requer a presena do vrus da hepatite B para se reproduzir. A infeco por hepatite C pode acontecer em um laboratrio. A prevalncia do anticorpo da hepatite C levemente maior em trabalhadores da rea da sade pblica do que na populao em geral. Evidncias epidemiolgicas indicam que a hepatite C disseminada predominantemente pela via parenteral21, 22,23.
Riscos em Laboratrio: O vrus da hepatite B pode ser encontrado no sangue e produtos sanguneos de origem humana, na urina, smen, lquido cerebroespinhal e saliva. A inoculao parenteral, exposio das membranas mucosas e da pele lesada aos perdigotos so os riscos primrios laboratoriais. O vrus pode ser estvel no sangue ou nos componentes do sangue seco. Cepas atenuadas ou no virulentas no foram identificadas.
O vrus da Hepatite C tem sido detectado primariamente em sangue e soro, menos freqentemente na saliva e raramente em urina ou semen. E aparece ser relativamente instvel, quando estocado em temperatura ambiente, e em congelamentos e descongelamentos repetidos.
Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades utilizando lquidos corporais e tecidos conhecidamente ou potencialmente contaminados. Precaues pessoais e conteno primria adicional, como as descritas para o Nvel de Biossegurana 3, podem ser indicadas para atividades com potencial para a formao de perdigotos ou aerossis e para as atividades envolvendo quantidades ou concentraes de produo de materiais infecciosos. As prticas, equipamento de conteno e instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicadas para atividades que utilizem chimpanzs ou outros primatas no-humanos contaminados naturalmente ou experimentalmente. Deve-se usar luvas quando trabalhos com
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animais contaminados estiverem sendo realizados ou quando houver a possibilidade de contato da pele com materiais contaminados. As vacinas recombinantes licenciadas contra a hepatite B esto disponveis e so altamente recomendadas e oferecidas aos trabalhadores e laboratrios24. J as vacinas contra a hepatite C e D ainda no esto disponveis para uso humano. Alm destas precaues recomendadas, as pessoas que trabalham com o HBV, HVC ou outros patgenos do sangue devero consultar o ASHA Bloodborne Pathogen Standard 25. Questes relacionadas interpretao destes padres devero ser direcionadas aos escritrios federais, regionais e estaduais da OSHA.
Transferncia do Agente: A licena para importao destes agentes dever ser obtida atravs do CDC. Agentes: Herpesvirus simiae (Cercopithecine herpesvirus [CHV1], B-virus)
O CHV-1 um alfaherpesvrus que ocorre naturalmente contaminando smios livres ou em cativeiro incluindo a Macaca mulatta, M. fascicularis e outros membros do gnero. Em smios este est associado a leses orais vesiculares agudas, assim como infeces latentes e freqentemente recrudescentes26. A infeco humana tem sido documentada em pelo menos 50 casos, geralmente com um resultado fatal ou com srias seqelas de encefalites27, 28, 29, 30, 31, 32,33. Vinte e nove casos fatais de infeces humanas (com um ndice de fatalidade de 58%) com o CHV-1 foram relatados 34, 35, 36,37. Embora o CHV-1 apresente um risco potencial aos trabalhadores de laboratrios que manipulam esse agente, as infeces humanas com o CHV-1 adquiridas em laboratrio, com raras excees, se limitaram aos trabalhadores que tiveram um contato direto com os smios. As culturas celulares primrias de smios, incluindo as clulas dos rins do macaco reso comercialmente preparadas, ocasionalmente podem ser
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assintomaticamente contaminadas com o CHV-1 e estavam comprometidas em um caso humano38. O treinamento especfico peridico sobre a avaliao do risco, a compreenso dos modos de transmisso e exposio ao CHV-1 e o uso adequado de equipamentos de proteo pessoal so itens altamente recomendados para as pessoas que trabalham com ou que possuam um contato direto com smios, seus tecidos e com um meio ambiente potencialmente contaminado por eles (incluindo gaiolas, brinquedos e materiais de dejetos). necessrio um treinamento adequado para primeiros socorros e para o abastecimento, alm de um apoio mdico emergencial.
Riscos em Laboratrio: O alojamento assintomtico acontece na maioria das transmisses entre os macacos e os trabalhadores humanos, embora o maior risco de se adquirir o vrus CHV-1 de smios seja atravs da mordida de um macaco contaminado e que possua leses ativas. A contaminao da pele rachada ou das membranas mucosas por secrees orais, oculares ou urogenitais de smios contaminados durante suas infeces recrudescentes ou primrias tambm perigosa e tem provocado pelo menos um caso de mortalidade ocupacional39. A estabilidade de partculas virais em gaiolas e outras superfcies no conhecida, mas o risco potencial dever ser reconhecido para cortes ou abrases provocados por estas superfcies potencialmente contaminadas. Acredita-se que outros alfaherpesvrus no iro persistir no meio ambiente por longo tempo. O trabalho experimental com animais indica que a importncia da exposio aos aerossis do CHV-1 possivelmente mnima. Cepas atenuadas ou no virulentas ainda no foram identificadas.
O agente tambm pode ser encontrado em vsceras torcicas e abdominais e nos tecidos nervosos de smios naturalmente contaminados. Esses tecidos e as culturas preparadas a partir deles, so riscos potenciais40.
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades
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envolvendo o uso ou manipulao de tecidos lquidos corporais e materiais para cultura de tecidos de smios. As prticas e precaues individuais adicionais, como as detalhadas para o Nvel de Biossegurana 3, so indicadas para atividades envolvendo o uso ou a manipulao de qualquer material conhecido por conter ou por suspeitamente conter o CHV-1, incluindo a reproduo in vitro do vrus para diagnstico. Seria pudente limitar as manipulaes de culturas positivas contendo altas titulaes de vrus para instalaes do Nvel de Biossegurana 4 (CSB de Classe III ou laboratrio escafandro - veja Seo III), dependendo da deciso do diretor do laboratrio. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 4 so recomendadas para as atividades envolvendo a reproduo e a manipulao de quantidades e concentraes de produo de CHV-1. Todas as colnias de smios, mesmo as que acreditamos no possurem o anticorpo do CHV-1, devem ser vistas como naturalmente contaminadas. Os animais com leses orais sugestivas de uma infeco pelo vrus B ativo devero ser identificados e manipulados com extremo cuidado. Os estudos com animais experimentalmente contaminados por CHV-1 devero ser conduzidos em um ANB-3. Existem normas para o trabalho seguro com smios e estas devero ser consultadas41, 42. O uso de luvas, mscaras e jalecos ou macaces de laboratrios recomendado para todas as pessoas enquanto estiverem trabalhando com primatas no-humano especialmente smios e outras espcies do Velho Mundo e para todas as pessoas que entrarem nas salas de animais onde os primatas no-humanos so alojados. Para minimizar o potencial da exposio da membrana mucosa43, alguma forma de barreira dever ser utilizada para prevenir a contaminao dos olhos, boca e narinas por borrifos e perdigotos. O uso de diferentes tipos de equipamento de proteo individual (culos de proteo, culos com escudos slidos ou escudos faciais usados juntamente com mscaras e respiradores) deve ser obrigatrio para a avaliao do risco em laboratrio. As especificaes do equipamento devero ser
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balanceadas com o trabalho realizado, de maneira que as barreiras selecionadas no aumentem o perigo apresentado pelo local de trabalho obscurecendo a viso e contribuindo para o aumento de mordidas, picadas por agulhas ou arranhes de animais. As drogas antivirais representam grandes promessas em relao terapia de coelhos contaminados com H. simiae e a limitada experincia clnica44, 45 sugere que esta pode ser estendida ao homem46, 47. Devido gravidade da infeco com este vrus, pessoas com experincia mdica devero estar constantemente presentes e disponveis para que pudessem gerenciar os incidentes envolvendo as exposies ao agente ou as infeces suspeitas. A transmisso de homens para homens foi documentada em um nico caso, mostrando que se devem tomar cuidado com lquidos vesiculares, secrees orais e secrees conjuntivais de pessoas contaminadas48. As vacinas no esto disponveis para o uso em humanos.
Transferncia do Agente: A licena para a importao deste agente dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Herpesvrus Humano
Os herpesvrus so patgenos humanos ubquos e so comumente encontrados em uma variedade de materiais clnicos submetidos ao isolamento do vrus. Embora poucos vrus sejam agentes comprovadamente causadores de infeces associadas a laboratrios, eles so patgenos primrios e oportunistas, especialmente em hospedeiros imunocomprometidos. Os vrus herpes simples 1 e 2, e o vrus da varicela apresentam algum risco pelo contato direto e/ou aerossis. J os citomegalovrus e o vrus Epstein-Barr apresentam riscos de infeco relativamente baixos para as equipes de laboratrios. O risco de uma infeco laboratorial tendo os herpesvrus 6 e 7 como agentes etiolgicos ainda desconhecido. Embora esse grupo diversificado de agentes virais nativos no atenda aos critrios para que possam ser includos no resumo das caractersticas dos agentes (isto , risco comprovado ou alto risco potencial para infeces associadas a laboratrio e
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para graves seqelas provocadas por uma infeco), a freqncia de sua presena em materiais clnicos e o uso comum deste grupo em pesquisas garante sua incluso nesta publicao.
Riscos em Laboratrio: Os materiais clnicos e as substncias isoladas dos herpesvrus apresentam um risco de infeco aps a ingesto, inoculao parenteral acidental, exposio das membranas mucosas dos olhos, nariz ou boca aos perdigotos ou inalao de materiais concentrados nebulizados. As amostras clnicas contendo o Herpesvirus simiae (vrus B) mais virulento podem ser inadvertidamente submetidas a diagnstico de uma suspeita infeco por herpes simples. O vrus tambm foi encontrado em culturas de clulas renais primrias do macaco reso. O citomegalovrus pode ser um risco especial durante a gravidez devido infeco potencial do feto. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de conteno e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades que utilizem materiais clnicos sabidamente ou potencialmente infecciosos ou culturas de agentes virais nativos que estejam associadas ou sejam identificadas como patgeno primrio de doena humana. Embora existam poucas evidncias de que os aerossis infecciosos sejam uma fonte significativa de infeces associadas a laboratrio, mais prudente evitar a formao de aerossis durante a manipulao de materiais clnicos ou de produtos isolados, ou durante a necropsia de animais. Os dispositivos de conteno primria (cabines de segurana biolgica) constituem a barreira bsica de proteo dos trabalhadores para evitar a exposio de aerossis infecciosos. Transferncia do Agente: A licena para importao destes agentes dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Influenza
As infeces adquiridas em laboratrios e que possuem o vrus da influenza como agente causador no so normalmente documentadas na literatura. Entretanto deve-se considerar dados
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informais e relatrios publicados que indicam que quando novas cepas que apresentam um desvio ou uma flutuao antignica foram introduzidas em um laboratrio para o diagnstico ou pesquisa acabaram por causar infeces deste tipo49. As infeces adquiridas em laboratrios animais, por sua vez, no foram relatadas, mas h uma grande possibilidade de transmisso atravs de doninhas infectadas para o ser humano e vice e versa.
Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado em tecidos ou secrees respiratrias de humanos ou de grande parte de animais contaminados e na cloaca de muitas espcies de aves contaminadas. O vrus pode ser disseminado em mltiplos rgos de algumas espcies animais infectadas.
O risco laboratorial primrio a inalao do vrus atravs de formao de aerossis de materiais de animais contaminados ou pela aspirao, suspenso ou mistura de amostras contaminadas pelo vrus. A manipulao gentica tem um potencial de alterar o alcance, a patogenicidade e a composio dos vrus da influenza. Existe um potencial desconhecido na introduo de vrus humanos transmissveis com uma nova composio antignica.
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para o recebimento e inoculao rotineira de amostras laboratoriais para diagnsticos. O material para autpsia dever ser manipulado em uma cabine de segurana biolgica usando os procedimentos do Nvel de Biossegurana 2. Atividades Utilizando Cepas de Vrus No Contemporneas: Os requisitos para a Biossegurana no caso de uma infeco adquirida em laboratrio e transmisso subseqente, devem estar de acordo com as informaes disponveis sobre a patogenicidade e virulncia das cepas que esto sendo usadas e o potencial de danos para o ser humano ou para a sociedade. As atividades de produo e pesquisa utilizando cepas contemporneas podem ser realizadas com segurana usando as prticas de conteno do Nvel
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de Biossegurana 2. A susceptibilidade infeco com cepas humanas no contemporneas mais velhas, recombinantes, ou com substncias isoladas de animais garante o uso de procedimentos de conteno do Nvel 2. Mas no h evidncias para infeces adquiridas em laboratrio com referncia as cepas A/PR/8/34 e A/ WS/33, ou com suas variantes neurotrpicas mais comumente usadas.
Transferncia de Agente: A licena para importao deste agente dever ser feita junto ao CDC. J a licena para importao ou transporte domstico dever ser obtida junto ao USDA/APHIS/VS. Agente: Vrus da Coriomeningite Linfoctica
As infeces com o vrus LCM adquiridas em laboratrios so bem documentadas onde ocorram infeces em roedores de laboratrio especialmente camundongos, hamsters e cobaias50, 51,52 . Os camundongos desprotegidos podem oferecer riscos especiais por alojarem infeces crnicas silenciosas. As culturas celulares, que inadvertidamente se tornaram contaminadas, representam uma fonte potencial de infeco em de disseminao do agente. As infeces naturais so encontradas em primatas nohumanos, incluindo chimpanzs e macacos sagis (o vrus Callitrichid um vrus coriomeningite linfoctica) e pode ser fatal para os sagis. Os sunos e ces so vetores menos importantes.
Riscos em Laboratrio: Esse agente pode ser encontrado no sangue, lquido cerebroespinhal, urina, secrees da nasofaringe, fezes e tecidos de hospedeiros animais contaminados e possivelmente do homem. A inoculao parenteral, inalao, contaminao das membranas mucosas ou de peles rachadas por tecidos ou lquidos contaminados de animais infectados so os riscos mais comuns. A transmisso por aerossis tambm bem documentada53. O vrus pode oferecer um risco especial durante a gravidez devido infeco potencial do feto. Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para as atividades que
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utilizam lquidos corporais sabidamente ou potencialmente infecciosos e passagem de cultura celular de cepas de clulas cerebrais de camundongo adaptadas para laboratrio. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so adequadas para estudos em camundongos adultos com cepas de passagem cerebrais de rato. Porm, a conteno e precaues individuais adicionais, como as descritas para o Nvel de Biossegurana 3, so indicadas para atividades que possuam um alto potencial para a formao de aerossis ou atividades que envolvam quantidades ou concentraes de produo de materiais infecciosos. Estas precaues tambm so recomendadas para a manipulao de tumores contaminados infectveis, isolamento de campo e materiais clnicos de casos humanos. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 3 so recomendadas para o trabalho com hamsters contaminados. As vacinas no esto disponveis para uso em humanos54.
Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente deve ser obtida junto ao CDC. Agente: Poliovrus
As infeces com o poliovrus adquiridas em laboratrios so raras e se limitam s pessoas que trabalham diretamente com este vrus em laboratrio e que no so vacinadas55. Existem no mnimo 12 casos documentados de infeces por poliovrus associados a laboratrio, incluindo duas mortes entre 1941 e 197656. Porm, uma vez que ~1% das infeces com o poliovrus resultou em patologia, sem uma confirmao laboratorial impossvel estimar precisamente os nmeros das infeces adquiridas em laboratrio. Com vacinas eficazes, instalaes laboratoriais eficazes, tecnologia e procedimentos so bem possvel que estas infeces j sejam raras em laboratrios. Mas, se os trabalhadores de um laboratrio se contaminarem, esses se tornaro uma fonte de vrus para a populao no vacinada57. As infeces em animais, associadas a laboratrio, entretanto, no tem sido relatadas58, mas os primatas no-humanos experimentalmente ou naturalmente contaminados poderiam ser uma fonte de infeco se expostos s pessoas no
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imunizadas. Os ratos transgnicos apresentam o receptor humano para o poliovrus e podem tambm ser fontes potenciais de infeco humana.
Riscos em Laboratrio: Esse agente est presente nas fezes e em secrees de garganta de pessoas infectadas. A ingesto ou a inoculao parenteral de tecidos ou lquidos infecciosos por trabalhadores no imunizados considerada como risco primrio de infeco em laboratrios. As exposies laboratoriais oferecem um risco insignificante para as pessoas adequadamente imunizadas. Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades que utilizam lquidos sabidamente ou potencialmente infecciosos e materiais clnicos contendo ou suspeitos de conter cepas do tipo selvagens. Todos os trabalhadores de laboratrios que trabalhem diretamente com o agente devero possuir um atestado de vacinao ou provas sorolgicas da imunidade a todos os trs tipos de poliovrus59. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana Animal 2 so indicados para estudos de vrus virulentos em animais. menos que existam fortes razes cientficas para o trabalho com poliovrus virulentos (que foram erradicados dos Estados Unidos), os laboratrios devero usar cepas de vacina oral Sabin de poliovrus atenuado. Essas no oferecem risco algum equipe imunizada dos laboratrios.
A Organizao Mundial de Sade (WHO) tem publicado guias documentadas60 relacionados ao trabalho com este poliovrus selvagem. A partir de 1999, os laboratrios que manipulam o poliovrus devero estabelecer um NB-2 (especfico para plio) para todos os trabalhadores que manipulam ou que forem manipular o poliovrus selvagem. As NB-2 para plio seguem os requisitos do NB-2 tradicional quanto s instalaes, prticas e procedimentos com os seguintes acrscimos: 1) todos os estoques de poliovrus e materiais potencialmente infecciosos sero descartados quando no houver mais a necessidade de ret-los para a realizao de pesquisa ou diagnsticos; 2) todas as pessoas que entrarem no laboratrio devero estar completamente imunizadas contra o vrus da plio; 3) o acesso ao laboratrio dever ser restrito; 4) todos os poliovrus
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selvagens retidos no laboratrio devero ser relacionados e armazenados em uma rea separada e segura com acesso limitado; 5) somente os vrus que forem prontamente identificveis por mtodos moleculares sero usados se as cepas de vrus selvagens ou estoques de trabalho forem necessrios; e 6) o descarte de poliovrus selvagens, materiais infecciosos e materiais potencialmente infecciosos dever ser feito utilizando a esterilizao e/ou a incinerao. Todos os laboratrios que desejarem guardar materiais contaminados por poliovrus selvagem ou potencialmente infeccioso devero comear a implementao dos procedimentos de conteno do Nvel de Biossegurana 3 para plio e fornecer a documentao necessria para implementao at o segundo ano. No caso de laboratrios que desejarem ser qualificados como uma instalao de NB-3/plio e quiserem reter materiais contaminados por poliovrus devero, ento, ser relacionados na Agency/ Institutional e no National Inventories. J os que no desejarem a converso para uma conteno de NB especfica para a plio devero destruir todos os materiais contendo o poliovrus selvagem ou potencialmente infecciosos atravs da incinerao ou uso da autoclave. Uma outra alternativa seria o contato com um depsito designado pela Organizao de Sade Pblica especfico para conteno de agentes de um NB-3/plio, e que sero responsveis pelo transporte e armazenamento dos materiais selecionados. Quando a imunizao pela OPV (vacina oral de poliovrus vivos) terminar, todo o trabalho com o poliovrus selvagem ficar restrito a laboratrios de conteno mxima (NB-4). Essas devero ser em laboratrios cabines ou laboratrios de roupa de proteo (Seo III).
Transferncia do Agente: A licena para a importao deste agente dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Poxvrus
Casos espordicos de infeces por poxvrus (catapora, vacnia, yabapox, tanabox) foram relatados 61 . Evidncias
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epidemiolgicas sugerem que a transmisso do vrus do macaco para homens ou de roedores para homens possa ter ocorrido na natureza, mas no nas dependncias de um laboratrio. Animais de laboratrios naturalmente ou experimentalmente contaminados so fontes potenciais de infeco para pessoas que trabalham em um laboratrio e que no so vacinadas. Vrus da vacnia recombinantes reproduzidos geneticamente oferecem um risco potencial ainda maior para a equipe laboratorial devido ao contato direto ou contato com materiais clnicos de voluntrios ou animais contaminados.
Riscos em Laboratrio: Esses agentes podem ser encontrados em lquidos de leses ou em escaras, secrees respiratrias ou tecidos de hospedeiros contaminados. A ingesto, inoculao parenteral e a exposio de membranas mucosas ou da pele rachada aos perdigotos ou aerossis de lquidos ou tecidos infecciosos so os riscos primrios para trabalhadores de laboratrios e tratadores de animais. Alguns poxvrus so estveis em temperatura ambiente quando secos e podem ser transmitidos atravs dos fomitos. Precaues Recomendadas: A posse e uso do vrus da varola ficam restritos ao Collaborating Center for Smallpox and Other Poxvirus Infections da Organizao Mundial de Sade localizado nos Centros de Controle e Preveno de Doenas em Atlanta, Gergia. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so recomendadas para todas as atividades envolvendo o uso ou a manipulao de poxvrus, com exceo do vrus da varola, que apresentam um grande risco de infeco aos homens. Todas as pessoas que trabalham dentro de um laboratrio ou que forem entrar nas reas de laboratrios ou reas dos animais onde atividades com os vrus vaccnia, vrus da varola bovina e de macacos estiverem sendo conduzidas devero possuir um atestado de vacinao. Esta imunizao dever ter sido realizada dentro de um perodo de dez anos. As atividades com os vrus relacionados acima em quantidades maiores que as apresentadas nas culturas para diagnstico, podero tambm ser conduzidas em um Nvel de Biossegurana 2, mas por pessoas imunizadas j que todas as
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manipulaes de materiais viveis devero ser realizadas em cabines de segurana biolgica Classe I ou II. Indivduos imunodeprimidos correm um risco de adquirirem uma patologia ainda mais grave quando infectado por um poxvrus64.
Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente dever ser obtida junto ao CDC. No caso de uma licena para exportao, esta dever ser obtida atravs do Department of Commerce. O registro dos laboratrios junto ao CDC dever ser obtido antes do envio ou recebimento destes agentes. Agente: Vrus da Raiva
As infeces provocadas por este agente e adquiridas em laboratrio so extremamente raras. Somente duas foram documentadas. Todas as duas resultaram de uma suposta exposio a nevoas infecciosa de altas titulaes, sendo uma formada em um local de produo da vacina65 e a outra em um local de pesquisa66. Os animais naturalmente ou experimentalmente contaminados, seus tecidos e excrees constituem uma fonte potencial de exposio para o pessoal do laboratrio e tratadores de animais.
Riscos em Laboratrio: Este agente pode estar presente em todos os tecidos de animais contaminados. As maiores titulaes so encontradas em tecidos, glndulas salivares e saliva do Sistema Nervoso Central. A inoculao acidental, cortes ou farpas de equipamento laboratorial contaminado, mordidas de animais infectados e exposio de membranas mucosas ou pele rachada a lquidos ou tecidos contaminados, so as fontes mais provveis de riscos para a equipe laboratorial e tratadores de animais. J os aerossis contaminados ainda no foram demonstrados como sendo um perigo comprovado ao pessoal que trabalha com materiais clnicos e que conduzem exames de diagnsticos. Cepas fixas ou atenuadas deste vrus so supostamente menos perigosas, mas os nicos dois casos comprovados de raiva adquiridos em laboratrios resultaram de exposio de um Padro Viral Desafiador (CVS) fixo e de uma cepa atenuada derivada de uma cepa SAD (Street Alabama Dufferin), respectivamente67, 68.
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Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades que utilizam materiais sabidamente ou potencialmente infecciosos. A imunizao recomendada para todos os indivduos antes que se inicie o trabalho com o vrus da raiva ou com animais infectados, ou atividades que envolvam o diagnstico, produo ou pesquisa do vrus. A imunizao tambm recomendada para todos os indivduos que forem entrar na mesma sala onde o vrus da raiva ou de animais contaminados estiver sendo usado. Embora no seja sempre possvel abrir o crnio ou retirar o crebro de um animal infectado dentro de uma cabine de segurana biolgica, essencial o uso de luvas pesadas de proteo para prevenir cortes ou farpas de instrumentos cortantes ou de fragmentos de ossos e tambm o uso de um escudo facial para proteo das membranas mucosas dos olhos, nariz e boca quanto exposio destas aos perdigotos infecciosos ou fragmentos de tecidos. Se a serra de Stryker for usada para abrir o crnio, evite o contato do crebro com a lmina da serra. A conteno primria e as precaues individuais adicionais, como as descritas para o Nvel de Biossegurana 3, podero ser indicadas para atividades com um alto potencial de formao de aerossis ou perdigotos e para as atividades que envolvam quantidades ou concentraes de materiais infecciosos em grande escala. Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Retrovrus, incluindo o Vrus da Imunodeficincia Humana e o Vrus da Imunodeficincia Smia(HIV e SIV)
Os dados sobre a transmisso da HIV ocupacional em trabalhadores de um laboratrio so coletados atravs de dois sistemas de vigilncia nacional apoiados pelos CDC: vigilncia quanto a: 1) AIDS e 2) pessoas infectadas pelo HIV que no adquiriram a infeco atravs de exposies ocupacionais. Para propsitos de vigilncia, os trabalhadores de laboratrios so definidos como as pessoas, incluindo estudantes e estagirios, que trabalham ou j trabalharam em um laboratrio para diagnstico
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do HIV ou laboratrio clnico a partir de 1987. Os casos reportados nestes dois sistemas so classificados como uma transmisso ocupacional possvel ou documentada. As que so classificadas como transmisso ocupacional documentada possuem evidncias de uma soroconverso do HIV (um teste HIV negativo no momento da exposio que se alterou e se tornou positivo) seguido de uma discreta exposio ocupacional percutnea ou mucocutnea ao sangue, lquidos ou outras amostras clnicas ou laboratoriais. At junho de 1998, o CDC havia registrado 16 trabalhadores de laboratrios (todos clnicos) nos Estados Unidos com transmisso ocupacional documentada69. Em 1992, dois trabalhadores de diferentes laboratrios desenvolveram o Vrus da Imunodeficincia de Smios (SIV) aps terem se exposto. Um caso estava associado a uma picada de agulha que aconteceu enquanto o trabalhador estava manipulando uma agulha contaminada com sangue aps uma hemorragia em um macaco infectado por SIV70. J o outro envolveu um trabalhador que manipulava amostras de sangue de um macaco infectado pelo SIV sem usar luvas. Embora ele no se lembrasse deste incidente especfico, este indivduo apresentou dermatites nos antebraos e mo enquanto trabalhava com amostras de sangue infectado71. O primeiro trabalhador apresentou uma soroconverso e, portanto no apresentou evidncia alguma de infeco pelo SIV. O segundo era soropositivo durante pelo menos nove anos sem evidncia alguma da doena ou de deficincia imunolgica. Publicaes recentes72, 73 identificaram a prevalncia (4/231, 1.8%) da infeco por vrus espumosos de smios (SFV) entre humanos ocupacionalmente expostos a primatas no-humanos. O diagnstico de infeces por SFV inclui a soropositividade, deteco de DNA proviral e isolamento do vrus espumoso. O SFV se originou do macaco-verde africano (uma pessoa) e de babunos (trs pessoas). Essas infeces ainda no provocaram doenas ou transmisso sexual, e podem representar infeces endpoints benignas.
Riscos em Laboratrio: O HIV tem sido isolado do sangue, smen, saliva, lgrimas, urina, lquido cerebroespinhal e tecido de
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pessoas infectadas e de primatas no-humanos experimentalmen74 te infectados . O CDC recomenda que o cuidado com o sangue e lquidos corporais seja usado consistentemente quando amostras 75, 76 de sangue contaminadas estejam sendo manipuladas . Esta abordagem, chamada de precaues universais, inclui a necessidade de identificar as amostras clnicas obtidas de pacientes soropositivos ou de se realizar um teste HIV da amostra. Embora o risco de um HIV adquirido ocupacionalmente ser primariamente atravs da exposio ao sangue contaminado, devese usar luvas quando outros lquidos corporais como fezes, saliva, urina, lgrimas, suor, vmito e leite do seio humano estiverem sendo manipulados. Este procedimento tambm reduzir o potencial de exposio a outros microorganismos que possam causar outros tipos de infeces. No laboratrio, deve-se supor que o vrus esteja presente em todas as amostras sanguneas e clnicas contaminadas por sangue, em qualquer tecido ou rgo (que no seja a pele intacta) humano (vivo ou morto) no fixado, em culturas de HIV, em todos os materiais derivados de culturas de HIV e em/sobre equipamentos e dispositivos que tenham um contato direto com qualquer um destes materiais. J o SIV tem sido isolado no sangue, lquido cerebroespinhal e em uma varieda d e de tecidos de primatas no-humanos infectados. Existem dados limitados sobre a concentrao do vrus no smen, saliva, lquido cerebroespinhal, urina, leite materno humano e no lquido amnitico. No laboratrio, deve-se supor que o vrus esteja presente em todas as culturas com SIV, em animais experimentalmente infectados ou inoculados com SIV, em todos os materiais derivados de culturas de HIV ou de SIV e em/sobre todos os equipamentos de dispositivos que tenham um contato direto com 77 qualquer um destes materiais . No laboratrio, a pele (especialmente quando arranhes, cortes, abrases, dermatites ou outras leses estiverem presentes) e as membranas mucosas dos olhos, nariz e boca devero ser consideradas como vias de entradas potenciais destes retrovrus.
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No se sabe se a infeco pode ocorrer via trato respiratrio. A necessidade do uso de objetos cortantes no laboratrio dever ser avaliada. Agulhas, instrumentos afiados, vidros quebrados e outros objetos afiados devero ser cuidadosamente manipulados e adequadamente descartados. Deve-se tomar cuidado para prevenir a formao de borrifos ou vazamento do lquido de cultura de clulas contaminadas e de outros materiais contendo o vrus ou 78 potencialmente contaminados .
Precaues Recomendadas:
Alm das seguintes precaues recomendadas, as pessoas que trabalham com o HIV, SIV ou outros patgenos presentes no sangue devero consultar o OSSHA Bloodborne 79 Pathogen Standard . As questes relacionadas interpretao deste Padro devero ser dirigidas aos escritrios Federais, regionais ou estaduais da OSHA. 1. O padro do NB-2 e prticas especiais, equipamento de conteno e instalaes so indicadas para as atividades que envolvam todas as amostras clnicas contaminadas com sangue, lquido corporal e tecidos de todos os homens ou de animais laboratoriais inoculados ou infectados com SIV ou HIV. As atividades como a produo de quantidades em grande escala para laboratrios de pesquisas de HIV ou SIV, manipulao de preparaes concentradas de vrus e conduo de procedimentos que possam formar perdigotos ou aerossis, devero ser realizadas em um local de NB-2, mas usando prticas e equipamentos de conteno adicionais recomendadas para o Nvel de Biossegurana 3. As atividades que envolvem volumes em escala industrial ou preparao de HIV ou SIV concentrado devero ser conduzidos em um local de NB-3, usando prticas e equipamento de conteno 3. Primatas no-humanos ou outros animais infectados com HIV ou SIV devero ser alojados em instalaes de NB-2 usando prticas especiais e equipamento de conteno de NBA-2.
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2.
3.
4.
Comentrios Adicionais:
1. No existem evidncias que as roupas usadas em laboratrio representam um risco para a transmisso do retrovrus; porm, as roupas contaminadas pelo HIV ou o SIV devero ser descontaminadas antes de serem encaminhadas para a lavanderia ou descartadas. A equipe do laboratrio dever retirar a roupa usada neste local antes de se dirigirem s reas no pertencentes ao laboratrio. As superfcies de trabalho devero ser descontaminadas com um germicida qumico apropriado depois do procedimento ser concludo, quando as superfcies estiverem excessivamente contaminadas e no final de cada dia de trabalho. Muitos 80, 81, 82, 83,84 desinfetantes qumicos vendidos comercialmente podero ser utilizados para a descontaminao das superfcies do laboratrio e de alguns instrumentos, para limpeza local de roupas contaminadas usadas em laboratrio e para vazamento de materiais infecciosos. A descontaminao imediata de vazamentos ocorridos dever ser uma prtica padro. O soro humano de qualquer fonte usado como um controle ou reagente em um teste dever ser manipulado em um NB-2. Recomenda-se que todas as instituies estabeleam normas por escrito em relao ao gerenciamento das exposies em laboratrio do HIV e SIV juntamente com as leis federais, estaduais e locais aplicveis. Tais normas devero considerar como confidenciais questes como o consentimento para realizao de teste, administrao de terapia de drogas profilticas adequadas85, aconselhamento e outros itens relacionados. Se um trabalhador do laboratrio expuser a membrana mucosa ou parenteral ao sangue, lquido corporal ou material de cultura viral, o material utilizado dever ser identificado e, se possvel, testado para verificao da presena do vrus. Se o material fonte for HIV positivo para o antgeno, vrus ou anticorpo, ou no possuir quantidade suficiente para realizao do teste, o trabalhador dever ser aconselhado
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2.
3.
4.
sobre o risco de infeco e dever ser avaliado clinicamente e sorologicamente para evidncia de uma infeco por HIV. A profilaxia ps-exposio dever ser oferecida de acordo com as ltimas normas. O trabalhador deve ser advertido a relatar e procurar atendimento mdico caso haja a ocorrncia de um 86 quadro agudo de febre, com 12 semanas aps a exposio . Uma vez que a doena possui caractersticas singulares, se o indivduo apresentar sintomas como febre, erupes ou linfoadenopatias, estes podero ser indicativos de uma infeco recente ao HIV. Se no incio (no momento da exposio) o teste for negativo, o trabalhador dever refazer o teste 6 semanas depois da exposio e a partir da periodicamente (isto , na 12 semana e no 6, 9 e 12 ms aps a exposio). Durante este acompanhamento, os trabalhadores expostos devero ser aconselhados a 87, 88, 89, 90,91 prevenirem a transmisso do HIV . 5. Outros agentes patognicos oportunistas e primrios podero estar presentes nos lquidos corporais e tecidos de pessoas infectadas com o HIV. Os trabalhadores de laboratrios devero seguir as prticas de biossegurana aceitas para assegurar uma proteo mxima contra a exposio inadvertida aos agentes que podem tambm estar presentes em amostras 92, clnicas ou em amostras obtidas de primatas no-humanos 93,94 .
A pesquisa envolvendo outros retrovrus humanos (isto , vrus linfotrpico-T tipo I e II) e de smios est sendo desenvolvida em muitos laboratrios. Uma vigilncia recente para essas infeces revelou a exposio e infeco ocupacional pelo vrus espumoso do smio entre zeladores de animais de locais de pesquisa 95, 96 laboratoriais . As precaues destacadas acima devero ser suficientes enquanto o trabalho com esses agentes estiver sendo conduzido. Os laboratrios que trabalham com vetores do retrovrus, especialmente os que possurem genomas moleculares infecciosos de longa durao (HIV-1), devero ser manipulados em NB-2 sob a
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prtica de NB-2/3. Isto inclui os clones infecciosos derivados de vrus no-humanos, mas que possuem uma esfera de hospedeiro xemotrpio (especialmente para clulas humanas).
Transferncia do Agente: A licena para importao deste agente dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Encefalopatias Espongiformes Transmissveis (por agentes da Creutzfeldt-Jakob, kuru e outros agentes)
As infeces por encefalopatias espongiformes transmissveis e adquiridas em laboratrio (doenas prinica) ainda no foram documentadas. Porm, existe uma evidncia de que a doena de Creutzfeldt-Jakob (CJD) tenha sido iatrogenicamente transmitida aos pacientes atravs de transplantes de crnea, transplante da dura-mter e extrao do hormnio do crescimento das glndulas pituitrias humanas e atravs da exposio aos eletrodos 97 eletroencefalogrficos contaminados . A infeco sempre fatal. No se conhece um reservatrio no-humano para a CDJ ou para a kuru. Os primatas no-humanos e outros animais de laboratrios foram contaminados atravs da inoculao, mas no existem evidncias de uma transmisso secundria. A scrapie de ovelhas e cabras, a encefalopatia espongiforme bovina e a encefalopatia de vises so encefalopatias espongiformes transmissveis de animais que so semelhantes s doenas humanas transmissveis. Entretanto, no existem evidncias de que as doenas animais possam ser transmitidas ao homem. (Veja tambm a Seo VII-D, Prions).
Riscos em Laboratrio: Altas titulaes de um agente transmissvel foram encontradas no crebro e medula espinhal de pessoas com kuru. Em pessoas com a doena de Creutzfeldt-Jakob e as variantes da Sndrome de Gerstmann-Strussler-Schenker, encontrou-se um agente transmissvel semelhante no crebro, bao, fgado, ndulos linfticos, pulmes, medula espinhal, rins, crnea e lentes e no lquido espinhal e sangue. A inoculao parenteral acidental, especialmente de tecidos nervosos, incluindo amostras de tecidos no fixados, extremamente perigosa. Embora
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os tecidos no - nervosos sejam bem menos infecciosos, todos os tecidos de homens e de animais infectados com esses agentes devero ser considerados potencialmente perigosos. O risco de uma infeco atravs de aerossis, perdigotos e de exposies da pele intacta, das membranas mucosas e gstricas no conhecido; mas no h evidncia de contaminaes por transmisso atravs de aerossis ou contato. Esses agentes so caracterizados pela extrema resistncia aos procedimentos de inativao convencionais incluindo a radiao, a ebulio, o calor seco e as substncias qumicas (formalina, betapropiolactona, lcool). Porm, eles foram inativados atravs do uso de NaOH a 1 N, ao hipocloreto de sdio (concentrao sem cloro 2%) e da autoclave a vapor durante quatro horas e meia em uma temperatura de 132 C.
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para todos as atividades utilizando tecidos e lquidos sabiamente ou potencialmente infecciosos de homens naturalmente infectados e de animais experimentalmente infectados. Deve-se tomar um extremo cuidado para evitar a auto-inoculao acidental ou outras inoculaes 98 parenterais traumticas de tecidos e lquidos infecciosos . Embora no haja evidncias que sugiram a transmisso via aerossis na doena natural, mais prudente evitar a formao de aerossis ou perdigotos durante a manipulao de tecidos e lquidos e durante a necropsia de animais experimentais. Recomenda-se muito o uso de luvas para as atividades que proporcionem o contato da pele com tecidos e lquidos infectados. Os tecidos fixados em formaldedo e imersos em parafina, especialmente os tecidos do crebro, permanecem infecciosos. Recomenda-se, ento, que os tecidos de casos suspeitos de encefalopatia fixados em formalina, sejam imersos em cido frmico a 96% durante trinta minutos antes do 99 processamento histopatolgico . As vacinas no esto disponveis 100 para uso em humanos . Transferncia do Agente: A licena para importao destes agentes dever ser obtida atravs do CDC. A licena para importao ou transporte domstico do vrus da encefalopatia espongiforme bovina poder ser obtido atravs do USDA/APHIS/ VS.
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Agente: Vrus da Estomatite Vesicular (VSV)

Um nmero de infeces por cepas nativas do VSV adquiri101 das em laboratrio foi relatado . As atividades laboratoriais com essas cepas apresentam dois diferentes nveis de risco ao pessoal do laboratrio e esto relacionadas, pelo menos em parte, histria das passagens das cepas utilizadas. As atividades que usam criaes, seus tecidos infectados e substncias virulentas isoladas destas fontes so um perigo demonstrado aos funcionrios do 102, 103 . Os ndices de laboratrio e aos tratadores de animais soroconverso e doena clnica em pessoas que trabalham com 104 estes materiais so altos . Riscos semelhantes podem estar 105 associados s cepas exticas como a Piry . Em contraste, informaes no oficiais indicam que as atividades com cepas menos virulentas adaptadas a laboratrio (por exemplo, Indiana, San Juan e Glascow) so raramente associadas com a soroconverso ou com a doena. Essas cepas so comumente utilizadas por bilogos moleculares, freqentemente em grandes volumes e altas concentraes, sob condies de conteno mnima ou nenhuma conteno primria. Algumas cepas do VSV so consideradas organismos restritos pelos regulamentos da USDA (9CFR 122.2). Ratos infectados experimentalmente no serviram como uma fonte documentada de infeco humana.
Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado no lquido vesicular, tecidos de animais infectados e no sangue e secrees de garganta de homens infectados. A exposio aos aerossis ou perdigotos contaminados, ao contato direto da pele e da membrana mucosa com os tecidos e lquidos infectados e a auto-inoculao acidental, so os perigos primrios associados com a substncia virulenta isolada. A inoculao parenteral acidental e a exposio aos aerossis infectados representam os riscos potenciais ao pessoal que trabalha com cepas menos virulentas adaptadas aos laboratrios. Precaues Recomendadas:As prticas e instalaes do nvel de biossegurana 3 so indicadas para atividades que envolvam o
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uso ou a manipulao de tecidos infectados e substncias virulentas isoladas de animais de criao infectados naturalmente ou experimentalmente. As luvas e a proteo respiratria so recomendadas para a necropsia e manuseio de animais infectados. As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicadas para atividades que utilizam cepas adaptadas em laboratrios de baixa virulncia. As vacinas no esto disponveis para uso em humanos.
Transferncia do Agente: A licena para exportao deste agente dever ser obtida no Department of Commerce. J a licena para importao ou transporte domstico para este agente dever ser obtido no USDA/APHIS/VS.
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204
Seo VII-G: Arbovrus e Vrus Zoonticos Relacionados
Arbovrus Designados para o Nvel de Biossegurana 2

O American Committee on Arthropod-Borne Viruses (ACAV) registou 537 casos de arbovrus at dezembro de 1997. Em 1979, o subcomit da ACAV sobre a Segurana quanto ao Arbovrus em Laboratrio (SALS Subcommittee on Arbovrus Labroratory Safety) classificaram e registraram 424 vrus no Catalogue of 1 Arboviruses and Certain Other Viruses of Vertebrates (Catlogo de Arbovrus e Alguns Outros Vrus de Vertebrados) em um dos quatro grupos de prticas, equipamento de segurana e instalaes recomendadas. Essas recomendaes esto 2descritas nesta publicao como Nveis de Biossegurana 1-4 . A SALS tem atualizado periodicamente a publicao de 1980, fornecendo uma lista suplementar para os arbovrus registrados desde 1979. As classificaes da SALS se baseiam nas avaliaes do risco derivadas de informaes fornecidas por uma pesquisa mundial de 585 laboratrios que trabalham com o arbovrus. A SALS recomenda que o trabalho com grande parte destes agentes seja conduzido em um nvel semelhante ao Nvel de Biossegurana 2 (Tabela 2). A SALS tambm reconhece cinco cepas de vacinas comumente usadas, nas quais a atenuao foi firmemente estabelecida. Esses vrus podem ser manipulados com segurana em um Nvel de Biossegurana 2, uma vez que as pessoas que trabalham com essas cepas de vacinas so imunizadas (Tabela 2). A SALS classificou todos os vrus registrados, com os quais a experincia laboratorial insuficiente como um Nvel de Biossegurana 3 (Tabela 3) e reavalia a classificao assim que recebe novas informaes. Os vrus classificados como um NB-2, esto relacionados por ordem alfabtica na Tabela 1 e incluem os seguintes agentes que so relatados como causadores de infeces adquiridas em labo3, 4,5 ratrio . Vrus Estomatite Vesicular** Febre do carrapato do Colorado Dengue* Pichinde
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Casos 46 16 11 17
Relao de Agentes Arbovrus e Vrus Zoonticos Relacionados
Encefalomielite eqina ocidental** Rio Bravo Kunjin Catu Caraparu Rio Ross Bunyamwera Encefalomielite eqina do leste** - * Zika Apeu Marituba Tacaribe Murutucu Onyong nyong Modoc Oriboca Ossa Keystone Bebaru Bluetongue *-**
7 (2 mortes) 7 6 5 5 5 4 4 4 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1
* Licena de exportao obtida atravs do Department of Commerce. ** A licena para importao ou transporte domstico para este agente pode ser obtido atravs do USDA/APHIS/VS. Os resultados de uma pesquisa realizada pela SALS indicam, claramente, que a fonte suspeita das infeces adquiridas em laboratrio relacionadas acima no foi a exposio aos aerossis infecciosos. A recomendao de que o trabalho com os 342 vrus relacionados acima na Tabela 1 seja conduzido em um Nvel de Biossegurana 2, baseou-se na existncia de uma experincia laboratorial durante toda a histria para a avaliao dos riscos do trabalho com este grupo de vrus de riscos. Isto indica que (a) nenhuma infeco aberta e associada ao laboratrio foi relatada; (b) as infeces foram provocadas por exposies diferentes das exposies aos aerossis; ou (c) se a doena provocada pela exposio aos aerossis foi documentada, ela rara.
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Riscos em Laboratrio: Os agentes relacionados neste grupo podem ser encontrados no sangue, lquido cerebroespinhal, tecidos do sistema nervoso central e outros tecidos e em artrpodes infectados, dependendo do agente e do estgio da infeco. Os riscos primrios em laboratrios so impostos pela inoculao parenteral acidental, contato do vrus com pele rachada ou membranas mucosas e mordidas de roedores e artrpodes de laboratrio. Porm, os aerossis infecciosos podem tambm ser uma fonte potencial de infeco. Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de segurana e instalaes do Nvel de Biossegurana 2 so indicados para as atividades com materiais clnicos potencialmente infecciosos, ovos embrionados e roedores. A infeco de galinhas recm-nascidas pelos vrus da encefalomielite eqina ocidental e do leste especialmente perigosa e dever ser manipulada por pessoas imunizadas em condies de um Nvel de Biossegurana 3. As vacinas investigacionais (IND) contra a encefalomielite eqina do leste e a ocidental esto a disposio atravs do Centro de Preveno e Controle da Doena (telefone 404-639-3356) e atravs do Instituto de Pesquisa Mdica de Doenas Infecciosas do Exrcito (USDAMRIID) em Fort Detrick, Maryland (telefone 301-619-2833). O uso destas vacinas recomendado para as pessoas que trabalham diretamente e regularmente com esses dois agentes no laboratrio.
Antes de 1988, foram relatados 12 casos de dengue adquiridos em laboratrios. Porm, de 1988 at 1991, somente quatro casos foram documentados. Em todos os quatro casos, no se usou uma roupa de segurana apropriada (jaleco de manga comprida amarrado atrs, luvas, mscaras e culos de proteo) e em trs casos a conteno para aerossi potenciais em uma cabine de biossegurana de fluxo laminar foi ignorada. Esses sprays ou lquidos infectados possivelmente contaminaram a pele desprotegida ou rachada. Um fator adicional nestes casos foi o trabalho com quantidades de vrus altamente concentradas. A manipulao segura do vrus da dengue em laboratrio (particularmente em preparaes concentradas) requer uma obedincia severa s recomendaes do Nvel de Biossegurana 2.
s
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Grandes quantidades e/ou altas concentraes de qualquer vrus possui um potencial para superar os mecanismos imunes naturais e a imunidade induzida pela vacina. Quando um vrus do Nvel de Biossegurana 2 produzido em grandes quantidades ou em altas concentraes, os diretores dos laboratrios devero garantir que a roupa de proteo adequada seja usada, como descrita no pargrafo acima, e que as manipulaes sejam realizadas em cabines de biossegurana de fluxo laminar (Veja tambm a Seo V, Avaliao do Risco).
Transferncia do Agente: A licena para importao destes agentes dever ser conseguida atravs do CDC. O registro do laboratrio junto ao CDC necessrio antes do envio ou recebimento destes agentes.
Tabela 1. Arbovrus e Arenavrus designados para o Nvel d Abras Abu Hammad Acado Acara Aguacate Alfuy Almpiwar Amapari Ananindeua Anhang Anhembi Anfilo A Anfilo B Apeu Apoi Aride Arkonam Aroa Aruac Arumowot Aura Avalon Babahoyo Bagaza Bahig Bakau Baku Bandia Bangoran Bangui Banzi Barur Batai Batama Bauline Bebaru Belmont Benevides Benfica Bertioga Bimiti Birao Bluetongue* Boracia Botambi Boteke
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Bouiboui Bujaru Bunyamwera Bunyp Creek Burg El Arab Bushbush Bussuquara Buttonwillow Bwamba Cacao Cache Valley Caimito California enc. Calovo Candiru Cape Wrath Capim Caraparu Catu Chaco Chagres Chandipuras Changuinola
Chardleville Chenuda Chilibre Chobar gorge Clo Mor Corriparta Cotia Cowbone Ridge Csiro Village Cuiab DAguilar Dengue-1 Dengue-2 Dengue-3 Dengue-4 Dera Ghazi Khan do Leste ** Doena Hem. Ep Edge Hill Encef. Eqina Encef. Eqina Ocid.** Erve Eubenangee Eyach Feb. do carrapato do Colorado Febre do MosquitoPlvora (Naples) Febre do MosquitoPlvora (Sicilian) Febre Hem de Smios Flanders Floresta Barmah Forte Morgan Frijoles Gamboa Gan Gan
Gomoka Gossas Grand Arbaud Great Island Guajara Guama Guaratuba Guaroa Gumbo Limbo Hart Park Highlands J Huacho Hughes Icoaraci Ieri Ilesha Ilha Carey Ilheus Ingwavuma Inkoo Ippy Irituia Isfahan Itaporanga Itaqui Jamestown Canyon Japanaut Johnson Atoll Joinjakaka Juan Diaz Jugra Jurona Jutiapa Kadam Kaeng Khoi Kaikalur Kaisodi Kamese Kammavanpettai
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Kannamangalam Kao Shuan Karimabad Karshi Kasba Kemerovo Kern Canyn Ketapang Keterah Keuraliba Keystone Kismayo Klamath Kokobera Kolongo Koongol Kowanyama Kunjin Kununurra Kwatta La Crosse La Joya Landjia Langat Lanjan Las Maloyas Latino Le Bombo Le Dantec Lednice Lipovnik Lokern Lone Star Lukuni Mpoko Madrid Maguari Main Drain Malakal
Manawa Manitoba Manzanilla Mapputta Maprik Marco Marituba Marrakai Matara Matruh Matucare Melao Mermet Minatitlan Minnal Mirim Mitchell River Modoc Mono Lake Mont. Myotis leuk Morcego Dakar Morcego Entebe Morcego Lagos Morcego Mount Elgon Morcego PhnomPenh Moriche Mosqueiro Mossuril Murutucu Mykines Navarro Ncgaigan Nepuyo Nique Nkolbisson Nola
Ntaya Nugget Nyamanini Nyando Onyong-nyong Okhotskiy Okola Olifantsvlei Oriboca Ossa Pacora Pacui Palyam Paran Pata Pathum Thani Patois Pichinde Pixuna Pongola Ponteves Precarious Point Pretoria Prospect Hill Puchong Punta Salinas Punta Toro Qalyub Quaranfil Rede Mahogany Restan Rio Bravo Rio Grande Ross River Royal Farm Sabo Saboya Saint Floris
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Sakhalin Salehabad San Angelo Sandjimba Sango Sathuperi Sawgrass Sebokele Seletar Serra do Navio Shark River Sharmonda Shuni Silverwater Simbu Sindbis Sixgun City Snowshoew hare Sokuluk Soldado Sororoca Stratford Sunday Canyon Tacaiuma Tacaribe Taggert Tahyna Tamiami Tanga Tanjong Rabok Tataguine Tehran Tembre Tembusu Tensaw Tete Tettnang Thimiri
Thottapalayan Tibrogargan Timbo Timboteua Toscana Toure Tribec Triniti Trivittatus Tsuruse Turlock Tyndholmur Tyuleniy Uganda S Uma
Umatilla Umbre Upolu Urucuri Usutu Uukuniemi Vellore Venkatapuram Vinces Virgin River VS-Indiana VS-New Jersey Wad Medani Wallal Wanowrie
Warrego Whataroa Witwatersand Wongal Wongorr Wyeomyia Yaquina Head Yata Yogue Zaliv Terpeniya Zegla Zika Zirqa
* A licena para a exportao deste agente deve ser obtida atravs do Department of Commerce. ** A vacina j se encontra disponvel e recomendada para todas as pessoas que trabalham com o agente. a licena para importao ou para o transporte domstico para este agente poder ser obtido junto ao USDA/APHIS/VS.
Transferncia do Agente: A licena para importao destes agentes dever ser obtida atravs do CDC. O registro do laboratrio junto ao CDC necessrio para o envio ou recebimento destes agentes.
Tabela 2. Cepas vacinais de vrus do NB-3/4 que podem ser manipulados em um Nvel de Biossegurana 2. Vrus Chikungunya* Junin* Febre do Vale Rift* Encefalomielite Eqina Venezuelana* Febre amarela* Cepa da Vacina 131/25 C ndida N 1 20 MP-12 TC-83 17-D
* A licena para exportao deve ser obtida atravs do Department of Commerce.

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Arbovrus e Arenavrus Designados para o Nvel de Biossegurana 3. A SALS recomenda que o trabalho com os 184 arbovrus includos nas listas por ordem alfabtica das Tabelas 3 e 4 seja conduzido pelas prticas, equipamento de segurana e instalaes semelhantes as do Nvel de Biossegurana 3. Essas recomendaes baseiam-se nos seguintes critrios: para a Tabela 3, a SALS considerou a experincia inadequada laboratorial para a avaliao de risco, sem levar em considerao as informaes disponveis sobre a gravidade da doena. Para os agentes relacionados na Tabela 4, a SALS registrou as infeces adquiridas em laboratrios abertos e que eram transmitidas atravs de aerossis e na ausncia de vacinas. A SALS considerou que a doena natural em homens potencialmente grave, ameaa vida ou causa seqelas. Os arbovrus tambm foram classificados no NB-3 se causassem doenas em animais domsticos em pases fora dos Estados Unidos. As infeces associadas ao laboratrio ou ao laboratrio animal com os seguintes agentes de NB-3 foram relatados6, 7,8: Vrus Encefalomielite Eqina Venezuelana* Febre do Vale Rift * Chikungunya * Febre Amarela* Encefalite Japonesa* Encefalite Ovina Nilo Oeste Coriomeningite Linfoctica* Orungo Piry Wesselsbron Mucambo Bhanja Hantaan* Mayaro
212
Casos (SALS) 150 (1 morte) 47 (1 morte) 39 38 (8 mortes) 22 22 18 15 13 13 13 10 6 6 5
Spondweni Encefalite do Vale Murray Semliki Forest Powassan Dugbe Issyk-kul Koutango
4 3 3 (1 morte) 2 2 1 1
A licena para a exportao destes agentes deve ser obtida no Department of Commerce. A licena para a importao ou transporte domstico do agente dever ser conseguida junto ao USDA/APHIS/VS. Grandes quantidades e altas concentraes do Vrus da Floresta de Semliki so comumente usadas ou manipuladas por bilogos moleculares sob condies de uma conteno moderada ou baixa. Embora os anticorpos tenham sido demonstrados em indivduos que trabalhavam com esse vrus, a primeira infeco aberta (e fatal) adquirida em laboratrio foi relatada em 1979. Uma vez que o resultado desta infeco pode ter sido influenciada por uma via de exposio incomum ou por uma alta dose, um hospedeiro comprometido ou uma cepa de vrus mutante, este caso e seu resultado no so exemplos tpicos. Mais recentemente, o SFV foi associado ao surto de doena febris entre soldados europeus cuja 9 base militar era em Bangui . A via de exposio no foi determinada na infeco laboratorial fatal; uma vez que os mosquitos foram os provveis vetores destas infeces naturais. A SALS continua a classificar este vrus (SFV) como um vrus do NB-3, com advertncia de que a maioria das atividades com esse vrus pode ser conduzida com segurana em um Nvel de Biossegurana 2. Alguns vrus (por exemplo, a meningoencefalite turca de Israel, Akabane) esto relacionados em um NB-3, no por serem uma ameaa sade humana, mas por serem doenas exticas de aves ou criaes domsticas.
Riscos em Laboratrio: Os agentes relacionados neste grupo podem ser encontrados no sangue, lquido cerebroespinhal, urina
213
e exudatos dependendo do agente especfico e estgio da doena. Os riscos laboratoriais primrios so a exposio aos aerossis de solues infecciosas e roupas de cama de animais, inoculao parenteral acidental e o contato com a pele rachada. Alguns destes agentes (por exemplo, o VEE) podem ser relativamente estveis no sangue seco ou em exudatos. Para os vrus de um NB-3/4, as cepas atenuadas existem e podem ser manipuladas em um NB2, como relacionado na Tabela 2.
Precaues Recomendadas: As prticas, equipamento de segurana e instalaes do Nvel de Biossegurana 3 so indicadas para as atividades que usam materiais clnicos potencialmente infecciosos e culturas de tecido, animais e artrpodes infectados.
Um vrus vivo atenuado licenciado se encontra a disposio para a imunizao contra a febre amarela. Recomenda-se o uso desta vacina para as pessoas que trabalham com este agente ou com animais infectados e a pessoas autorizadas a entrarem na sala onde os agentes ou os animais infectados estejam presentes. Realmente, para esta vacina, a infectividade dos aerossis e alto ndice de fatalidade do vrus da febre amarela fazem com que ele seja classificado como um vrus do NB-4. Para a encefalomielite eqina venezuelana, a vacina investigacional TC-83 proporciona uma excelente proteo contra muitas cepas epizoticas. Esta proteo pode se estender a outras cepas de VEE do complexo, incluindo os vrus Everglades, Mucambo, Tonate e Cabassou. A vacina TC-38 dever ser usada como parte de um programa de segurana e pode ser particularmente importante para a proteo das pessoas que trabalham com animais infectados e vrus concentrados. A administrao da vacina e o uso deste complemento inativado (C-84) devero ser determinados por peritos com experincia no uso destas vacinas dentro das restries compatveis com as drogas de pesquisas. De forma semelhante, a vacina IND inativada est a disposio para o vrus da febre do Vale Rift. Uma vacina de vrus Junin atenuado (Cndida n 1) tambm est disponvel. Essas vacinas de IND podem ser obtidas atravs do U.S Army Medical Research and Material Command, aps consulta ao USAMRIID (telefone 301-619-2833).
214
A SALS tem diminudo a classificao do risco biolgico do vrus Junin para o nvel de Biossegurana 3, j que todas as pessoas do grupo de risco so imunizadas e o laboratrio se encontra equipado com filtros HEPA de exausto. A SALS tambm diminuiu a classificao do vrus da encefalite transmitida pelo carrapato da Europa Central (CETBE) para o Nvel de Biossegurana 3, j que todas as pessoas do grupo de risco so imunizadas. Uma vacina IND inativada para o CTEBE se encontra disponvel atravs da USAMRIID e recomendada para todos os funcionrios de laboratrios e tratadores de animais que trabalham com o agente ou os animais infectados e tambm para todas as pessoas que entrarem nos laboratrios ou nas salas de animais quando o agente estiver sendo usado.
Conteno acentuada do Nvel de Biossegurana 3: Podem ocorrer situaes onde so necessrias intensificaes das prticas e equipamentos do nvel de Biossegurana 3. Um exemplo desta situao seria um laboratrio de NB-3 realizar testes de diagnsticos em amostras de pacientes com febre hemorrgica quando se suspeita de uma febre amarela ou dengue. Quando a origem das amostras a frica, o Oriente Mdio ou a Amrica do Sul, o potencial est presente em amostras que contenham agentes etiolgicos como o arenavrus, filovrus ou outros vrus que so geralmente manipulados em laboratrios de NB-4. As intensificaes aos laboratrios de NB-3 podem incluir uma ou mais destas trs categorias a seguir: a) aumentada proteo respiratria individual contra os aerossis; b) filtrao pelo HEPA do ar liberado do laboratrio; c) descontaminao de efluentes lquidos de laboratrios. Um treinamento apropriado para as pessoas que tratam os animais dever ser considerado. Bioconteno de Agentes Infecciosos Desconhecidos: As decises em relao classificao do perigo biolgico para materiais que contenham um vrus infeccioso devero se basear em todas as informaes disponveis em relao ao agente. Os vrus isolados de pacientes humanos infectados devero ser manipulados em um nvel de biossegurana 3 com precaues intensificadas, como detalhado no resumo as caractersticas do
215
agente Hantavrus, ou de preferncia em um NB-4, a menos que se tenha certeza que o agente no infeccioso atravs de aerossis. Todas as amostras desconhecidas devero ser manipuladas em um NB-3, a menos que haja evidncias de uma transmisso atravs de aerossis (que iria requer uma conteno do NB-4). A SALS continuar a avaliar a infectividade e os dados sobre virulncia para todos os vrus registrados no Catalogue of Arboviruses and Certain Other Viruses of Vertebrates e para vrus recentemente desenvolvidos antes do registro.
Transferncia do Agente: A licena para a importao destes agentes dever ser conseguida junto ao CDC.
Tabela 3. Arbovrus e alguns outros vrus designados para o Nvel de Biossegurana 3 (baseado em experincia insuficiente) Adelaide River gua Preta Alenquer Almeirim Altamira Andasibe Antequera Araguari Aransas Bay Arbia Arboledas Babanki Batken Belm Berrimah Bimbo Bobaya Bobia Bozo Buenaventura Cabassou, Cacipacore Calchaqui Canania Canind Chim Coastal Plains Connecticut Corfou Dabakala Douglas Enseada Estero Real Fomede Forecariah Fort Sherman Gabek Forest Gadgets Gully Garba Gordil Gray Lodge Gurupi
216
Iaco Ibaraki Ife Iguape Inhangapi Inini Issyk-Kul Itaituba Itimirim Itupiranga Jacareacanga Jamanxi Jar Kedougou Khasan Kindia Kyzylagach Lake Clarendon Llano Seco Macaua Mapuera
Mboke Meaban Moji Dos Compos Monte Dourado Munguba Naranjal Nariva Nasoule Ndelle New Minto Ngari Ngoupe Nodamura Northway Odrenisrou Omo Oriximina Ouango Oubangui Oubi Ourem Palestina
Palma Para Paramushir Paroo River Perinet Petevo Picola Playas Pueblo Viejo Purus Radi Razdan Resistencia Rochambeau Salanga San Juan Santa Rosa Santarm Saraca Saumarez Reef Sena Madureira
Sendlec Sepik Shokwe Slovakia Somone Sripur Tai Tamdy Telok Forest Termeil Thiafora Tilligerry Tinaroo Tlacotalpan Tonate, Utinga Xiburema Yacaaba Yaounde Yoka Yug Bogdanovac
A SALS recomenda que o trabalho com este agente dever ser feito somente em instalaes de NB-3 que proporcionem a filtrao HEPA de todo o ar liberado antes de ser jogado para o laboratrio. A vacina TC-83 est disponvel e recomendada para todas as pessoas que trabalham com o agente. Tabela 4. Arbovrus e alguns outros vrus designados para o Nvel de Biossegurana 3 Aino Akabane Banna a,f Bhanja Central Eur. TBE b,d (Kumlinge. Hypr, Hanzalova, Absettarov)
217
Chikungunya c,d Cocal Dhori Dobrava-Belgrade
Doena Ovina de Nairobi a Dugbe Enc. De Vale Murray Encef. Japonesa h Encefalite Eqina Venezuelana c,d,h Estomatite Vesicular (Alagoas) h Everglades c,d Febre Amarela c,d Febre do Rift Valley
a,c,d,h
Flexal Germiston Getah Haantan h
Junin c,d,h Kairi Kimberley Koutango Kumlinge (Europa Central, TBE) Louping III a,c,h Mayaro Menin. Tur. De Israel. Mopeia e Middelburg Mobala Mucambo c,d Ndumu Negishi Oropouche c
Orungo Peaton Piry Puumala Rocio Sagiyama Sal Vieja San Perlita Seuol Sin Nombre Spondweni Thogoto Turuna Wesselsbron a,c West Nile Zinga g
a A importao, posse ou uso deste agente fica restrito ao regulamento ou norma administrativa do USDA. Veja o Apndice D. b O vrus da Encefalite do carrapato da Europa Central (CETBE) no um nome registrado no The International Catalogue of Arboviruses 1985. At a questo do registro do nome ter sido resolvida taxonomicamente, a CETBE se refere ao seguinte grupo de flavivrus associado ao carrapato muito prximo, mas no idntico da Tchecoslovquia, Finlndia e Rssia como: Absettarov, Hanzalova, Hypr e Kumlinge. Esses quatro vrus so antigenicamente homogneos e so diferenciados do vrus da Encefalite Primavera-Vero da Rssia (RSSE)10, 11,12. Embora haja uma vacina que confira imunidade ao grupo do CETBE de vrus geneticamente homogneos (> 98%), a eficcia desta vacina contra as infeces causadas pelo vrus da CETBE ainda no foi estabelecida. Desta forma, a SALS reclassificou o grupo de vrus CETBE como do Nvel de Biossegurana 3, quando as pessoas esto imunizadas com a vacina contra a CETBE. O RSSE continua classificado como um vrus pertencente ao Nvel de Biossegurana 4.
218
c. A SALS tambm recomenda que o trabalho com estes agentes seja conduzido somente em instalaes do nvel de Biossegurana 3, que proporcione uma filtrao HEPA de todo o ar liberado antes de ser jogado para dentro do laboratrio. d. A vacina est disponvel e recomendada para todas as pessoas que trabalham com este agente. e. Este vrus, atualmente est sendo registrado no Catalogue of Arboviruses. f. Os cientistas da Repblica da China verbalmente relataram o vrus Banna como sendo associado a casos graves de encefalites. As tradues dos originais do chins para o Ingls no se encontravam a disposio para esta reviso. g. O vrus Zinga agora reconhecido como idntico ao Vrus da Febre do Rift Vale. h. A licena para exportao deste vrus deve ser obtida junto ao Department of Commerce. i. Uma licena de importao ou transporte domstico deste agente pode ser obtido atravs do USDA/APHIS/VS. Arbovrus, Arenavrus e Filovrus Designados ao Nvel de Biossegurana 4. A SALS recomenda que o trabalho com os 11 arbovrus, 13 arenavrus ou filovrus includos na Tabela 5 seja conduzido pela prtica, equipamento de segurana e instalaes semelhantes as do Nvel de Biossegurana 4. Essas recomendaes so baseadas em casos documentados de infeces freqentemente fatais ocorridas naturalmente em homens e nas infeces transmitidas por aerossis em laboratrios. A SALS tambm recomenda que alguns agentes com uma relao prxima com os agentes do Nvel de Biossegurana 4 (por exemplo, o vrus da Encefalite PrimaveraVero da Rssia) tambm sejam provisoriamente manipulados neste nvel at que experincias laboratoriais suficientes indiquem a posio do mesmo neste nvel ou a reclassificao deste apara um
219
nvel menor. Como observado abaixo, com a imunizao, a SALS recomenda uma diminuio do nvel de classificao do Vrus Junin e do complexo de vrus da Encefalite do Carrapato da Europa Central (Absettarov, Hanzalova, Hypr e Kumlinge) ao Nv e l de Biossegurana 3. As infeces associadas a laboratrio ou ao laboratrio animal provocadas pelos seguintes agentes foram rela14, 15, 16, 17, 18, 19,20: tadas Vrus Casos (SALS) Junin* Marburg* Enc. Primavera-Vero Enc. Hemorrgica Crimia-Congo Febre hemorrgica Omsk Lassa* Machupo* Ebola* Sabia* 21 (1 morte) 25 (5 mortes) 8 8 (1 morte) 5 2 (1 morte) 1 (1 morte) 1 3 (1 morte)
ser ob
* A licena para exportao deste agente dever Department of Commerce.
tida junto ao
Os roedores so reservatrios naturais do vrus da Lassa (Mastomys spp.), do Junin, do vrus Machupo (Calomys spp.), Guaranito (Zygodontomys spp.) e talvez de outros membros deste grupo. Os primatas no-humanos estavam associados aos surtos iniciais da Doena da Floresta de Kyasanur (Presbytis spp.) e o vrus da doena de Marburg (Cercopithecus spp.). Mais recentemente, os filovrus relacionados com o Ebola foram associados com o Macaca spp. e chimpanzs (Pan troglodytes). Os artrpodes so os vetores naturais do complexo de agentes da encefalite do carrapato. O trabalho com ou a exposio aos roedores, aos primatas no-humanos ou aos vetores naturalmente ou experimentalmente infectados com esses agentes representa uma fonte potencial de infeco humana.
Riscos em Laboratrio: Os agentes infecciosos podem ser encontrados no sangue, urina e secrees de garganta, smen e
220
tecidos de hospedeiros humanos ou animais, artrpodes, roedores e primatas no-humanos. A exposio respiratria aos aerossis infecciosos, a exposio da membrana mucosa aos perdigotos infecciosos e a inoculao parenteral acidental so os perigos primrios para o laboratrio e para as pessoas que cuidam de ani21, 22 mais .
Precaues Recomendadas: As prticas e instalaes do Nvel de Biossegurana 4 so indicadas para todas as atividades que utilizem materiais sabiamente ou potencialmente infecciosos de origem humana, animal ou artrpode. As amostras clnicas de pessoas com suspeita de terem sido contaminadas pelos agentes relacionados acima devero ser submetidas a um exame laboratorial 23, 24 . do Nvel de Biossegurana 4 de mxima conteno Transferncia do Agente: A licena para a importao destes agentes dever ser obtida no CDC. J a licena para exportao dever ser conseguida no Department of Commerce. O registro do laboratrio necessrio junto ao CDC antes do envio ou recebimento destes agentes.
Tabela 5. Arbovrus, Arenavrus e Filovrus designados para o Nvel de Biossegurana 4 Encefalite do carrapato da Europa Central Febre hemorrgica Crimia-Congo Ebola Guaranito Junin Doena da Floresta de Kyasanur Lassa Machupo Febre hemorrgica de Omsk Encefalite Primavera-Vero da Rssia Sabia
221
Referncias: 1. International Catalog of Arboviruses including Certain Other viruses of Vertebrates. 1985. The Subcommittee on Information Exchange of the American Committee on Arthropod-borne Viruses. Third edition. N. Karabatsos, Editor. American Society for Tropical Medicine and hygiene. San Antonio, TX Subcommittee on Arbovirus Laboratory Safety for Arboviruses and Certain Other Viruses of vertebrates. 1980. Am J Trop Med Hyg 29 (6):1359-1381. Hanson, R.P., et al. 1967. Arbovrus infections of laboratory workers. Science 158: 1283-1286. Pike, R.M. 1976. Laboratory-associated infections: Summary and analysis of 3.921 cases. Htlh Lab Sci 13: 105-114. Subcommittee on Arbovirus Laboratory Safety for Arboviruses and Certain Other Viruses of Vertebrates. 1980. (2) Hanson, R.P., et al. 1967. (3) Pike, R.M. 1976 (4) Subcommittee on Arbovirus Laboratory Safety for Arbovirus and Certain Other Viruses of Vertebrates. 1980. (4). Mathiot, C.C. et al. 1990. An Outbreak of Human Semliki Forest Virus Infections in Central African Republic. Am J Trop Med Hyg 42: 386-393. Heinz, FX, Kunz, C: Molecular epidemiology of tick-borne encephalitis virus: peptide mapping of large non-strucutural proteins of European isolates and comparison with other flaviviruses. J. Gen. Virol., 62: 271, 1982. Calisher, CH: Antigenic classification and taxonomy of flaviviruses (Family Flaviviridae) emphasizing a universal system for the taxonomy of viruses causing tick-borne encephalitis. Acta virol. 32: 469, 1998. Wallner, G. Mandi, CW, Ecker, M, Holzman, H, Stiasny, K, Kunz, C, and Heinz, FX: Characterization and Complete genome sequences of high- and low-virulence variants of tick-borne encephalitis vrus. J. Gen. Virol: 77 1035, 1996. Killey, M.P. et al. 1982. Filoviridae: a taxonomic home for Marburg and Ebola viruses? Intervirology 18: 24-32. Edmond, R.T.D., et al. 1977. A case of Ebola virus infection. Br Md J 2: 541-544. Hanson, R.P., et al. 1967. (3). Hennessen, W. 1971. Epidemiology of Marburg Vrus disease. In:
222
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223
APNDICE A Conteno Primria: Cabines de Segurana Biolgica As cabines de segurana biolgica (CSB) esto entre os mais comuns e eficazes dispositivos de conteno primria utilizados em laboratrios que trabalham com agentes infecciosos1. Os trs tipos gerais de cabines (Classe I, II e III) possuem caractersticas e aplicaes que sero descritas neste apndice. As CSB de Classe I e II adequadamente mantidas, quando usadas em conjunto com boas tcnicas de microbiologia, proporcionam um sistema de conteno eficaz para uma manipulao segura de microorganismos de risco moderado ou alto (agentes do Nvel de Biossegurana 2 e 3). Tanto as Cabines de Classe I como as de Classe II possuem uma velocidade de fluxo de ar (75-100 ps lineares por minuto) que proporcionam nveis de conteno comparveis para a proteo dos funcionrios de laboratrio e do meio ambiente das reas adjacentes contra aerossis infecciosos gerados dentro das cabines. As cabines de segurana biolgica de Classe II tambm protegem o prprio material e a pesquisa atravs de uma filtrao altamente eficiente (filtrao HEPA) do fluxo de ar sobre toda a superfcie de trabalho (fluxo laminar vertical). J as Cabines de Classe III oferecem uma proteo mxima para os trabalhadores do laboratrio, para a comunidade e para o meio ambiente porque todos os materiais perigosos esto contidos em uma cabine ventilada e totalmente fechada. CLASSE I (Observao: as cabines de Classe I, atualmente, esto sendo fabricadas em nmero limitado; muitas podem ser substitudas por cabines de Classe II).
As Cabines de Segurana Biolgica de Classe I (Fig. 1) uma cabine ventilada de presso negativa operada por uma abertura frontal e uma mnima velocidade de face para abertura de trabalho de 75 ps lineares por minuto (lfpm). Todo o ar da cabine liberado atravs de um filtro HEPA para dentro ou para fora do laboratrio. A cabine de Classe I projetada para a pesquisa geral de agentes
224
Apndice A
microbiolgicos de risco moderado e baixo e til para a conteno de processadores, liquidificadores e de outros equipamentos. Essas cabines no so apropriadas para a manipulao de materiais de pesquisa que sejam vulnerveis a contaminao pelo ar, uma vez que o fluxo interno do ar no filtrado do laboratrio pode carregar microorganismos contaminantes para dentro da cabine. A cabine de Classe I pode tambm ser usada, com um painel frontal fechado e sem as luvas de borracha, que aumentar a velocidade do fluxo interno para aproximadamente 150 lfpm. Se essas cabines equipadas estiverem ligadas atravs de dutos externos de exausto, elas podero ser usadas para materiais txicos ou com baixos nveis radioativos usados como auxiliares da pesquisa microbiolgica. Alm disto, as ervas de braos longos de borracha podem ser anexadas ao painel frontal com um dispositivo de liberao da presso do ar para proteo adicional. Nesta configurao, necessrio instalar uma entrada de ar adaptada e ajustada com um filtro HEPA na cabine. CLASSE II
A Cabine de Segurana Biolgica de Classe II (Fig. 2) projetada com um fluxo de ar interior com uma velocidade (75-100 lfpm), para proteger os funcionrios um fluxo de ar laminar vertical filtrado pelo sistema HEPA para proteo do produto e com ar de sada, exausto, filtrado pelo sistema HEPA para proteo do meio ambiente. Os padres do projeto, construo e atuao das cabines de Classe II, assim como as listas de produtos que atendam a estes padres foram desenvolvidas pela National Sanitation Foundation International2 em Ann Arbor, no Michigan. A utilizao deste padro e desta lista dever ser o primeiro passo na seleo e aquisio de uma cabine de Classe II.
As cabines de Classe II so classificadas em dois tipos (A e B) baseadas na construo, velocidades e padres do fluxo de ar e nos sistemas de exausto. Basicamente, as cabines do Tipo A so adequadas para pesquisas microbiolgicas na ausncia de substncias qumicas volteis ou txicas e de radionucldeos, uma
225
Apndice A
vez que o ar recirculado dentro da cabine. As cabines do Tipo A podem ter exausto dentro do laboratrio ou para fora atravs de uma conexo metlica que se prende ao sistema de exaustores do edifcio. As cabines do Tipo B so sub-divididas em Tipos B1, B2 e B3. Uma comparao entre as caractersticas do projeto e as aplicaes est representadas nas Figuras 2b, 2c e 2d respectivamente. As cabines do Tipo B possuem dutos rgidos conectados ao sistema de exausto do prdio e contm um sistema de ar de presso negativa. Essas caractersticas, mais uma velocidade plena de 100 lfpm, permitem o trabalho a ser feito com substncias qumicas txicas ou radionucldeos. essencial que as cabines de proteo biolgica I e II sejam testadas e certificadas in situ no momento da instalao dentro do laboratrio, todas as vezes que a CSB for removida ou uma vez ao ano. A verificao local pode atestar a performance da cabine individual ou modelo, mas no poder excluir os testes crticos antes do uso em laboratrio. Como em qualquer equipamento do laboratrio, as pessoas devero ser treinadas para o uso adequado das cabines de segurana biolgica. De particular interesse so as atividades que possam romper o fluxo direcionado para o interior. Fatores como a insero e retirada repetida dos braos dos trabalhadores para dentro e para fora das cabines, abertura e fechamento de portas do laboratrio ou do cubculo de isolamento, a colocao ou a operao imprpria dos materiais ou dos equipamentos dentro da cmara de trabalho ou uma caminhada vigorosa prxima a CSB enquanto esta estiver sendo utilizada causam a liberao destas partculas aerolizadas de dentro da cabine. As cabines de Classe I e II devero estar localizadas longe do fluxo de pessoas e da portas. O fluxo de ar gerado por ventiladores, ventilao proveniente de venezianas, metlicas em portas ou paredes outros dispositivos para movimentao do ar podem interromper o padro de fluxo de ar na frente da cabine. A obedincia severa a estas regras para uso de CSB e a colocao adequada das mesmas em um laboratrio
226
Apndice A
so to importantes na manuteno da capacidade de conteno mxima do equipamento quanto o prprio funcionamento do equipamento. CLASSE III
A Cabine de Segurana Biolgica de Classe III (Fig. 3) uma cabine totalmente fechada e ventilada, a prova de escape de ar e oferece o mais alto grau de proteo ao pessoal e ao meio ambiente contra aerossis infecciosos, assim como a proteo de materiais de pesquisa de contaminantes microbiolgicos. As cabines de Classe III so mais adequadas para o trabalho com agentes perigosos que requerem uma conteno de um Nvel de Biossegurana 3 ou 4.
Todas as operaes na rea e trabalho da cabine devero ser realizadas atravs de braos com luvas de borracha ou por meio de macaco. A cabine de Classe III operada com presso negativa. O suprimento de ar filtrado atravs do sistema HEPA e o ar liberado da cabine filtrado atravs de dois filtros HEPA em srie, ou a filtrao HEPA seguida de uma incinerao, antes de ser descartado para fora do local. Todos os equipamentos necessrios para uma atividade em um laboratrio, como as incubadoras, geladeiras e centrfugas devero ser uma parte integral do sistema de cabine. A cabine de Classe III dever ser conectada a uma autoclave de duas portas e/ ou um tanque de imerso qumica usado para esterilizar ou desinfetar todos os materiais que sarem da cabine, e permitir que os estoques entrem na cabine. Vrias cabines de Classe II so, portanto, tipicamente instaladas como um sistema interconectado. MACACO INDIVIDUAL DE PRESSO POSITIVA A proteo individual equivalente fornecida por cabines de Classe III, tambm pode ser obtida atravs do uso de uma vestimenta de pea nica e ventilada. O trabalhador dever us-la quando estiver trabalhando com agentes do Nvel de Biossegurana 3 ou 4
227
Apndice A
em uma rea de risco correspondente e usando CSB de Classe I ou II. A roupa individual mantida sob uma presso positiva com um sistema de suporte de vida para prevenir o vazamento dentro desta vestimenta. Neste sistema de conteno, o trabalhador dever estar isolado dos materiais de trabalho. A rea escafandro dever ser essencialmente equivalente a uma cabine grande de Classe III. A entrada nesta rea dever ser feita atravs da cmara de compresso adaptada com portas hermticas. Um chuveiro qumico dever ser instalado como um tanque de imerso para descontaminao das superfcies da roupa e dos trabalhadores que entram e saem da rea. O ar liberado da rea escafandro dever ser filtrado atravs de dois filtros HEPA instalados em sries. Toda a rea dever estar sob presso negativa. Assim como nas CSB III, as luvas das roupas individuais so o componente mais vulnervel do sistema, pois esto sujeitas a perfuraes por objetos cortantes e mordidas de animais.
Outros dispositivos: As bancadas de fluxo laminar de ar horizontal de clean benches so usados em instalaes clnicas, farmacuticas e laboratoriais estritamente para garantir a proteo do produto. Este equipamento nunca dever ser usado para a manipulao de materiais txicos, infecciosos, radioativos ou sensibilizadores, uma vez que o trabalhador respira o ar liberado da bancada limpa. As bancadas de fluxo laminar vertical podem ser teis para algumas manipulaes de materiais limpos (por exemplo, placa de agar), mas no devero ser usados quando o trabalho com materiais infecciosos estiver sendo conduzido.
Referncias: 1. U.S Department of Health and Human Services. Primary Containment of Biohazards: Selection, Installation and Use of Biological Safety Cabinets. (Washington: GPO, 1995) National Sanitation Foundation Standard 49. 1983. Class II (laminar Flow) Biohazard Cabinetry. Ann Arbor, Michigan.
228
2.
Tabela 1. Comparao das Cabines de Segurana Biolgica.

Tipo Velocidade frontal 75 Padro de fluxo do ar Radionucldeos/ Substncias Qumicas No Nveis de Biossegurana 2, 3 Proteo do Produto No
Classe I* com a frente aberta Classe II Tipo A Tipo B1
Frontal; atrs e acima atravs do filtro HEPA.

70% de ar recircu-lado atravs do HEPA; exausto atravs do HEPA. 30% de ar recirculado atravs do HEPA; exausto de ar via HEPA e dutos. Nenhuma recir-culao do ar; total exausto via HEPA e dutos Idntica s Cabines IIA, mas o sistema de ventilao plena sob presso negativa para sala e exausto atravs de dutos. Entradas e sada do ar atravs do filtro HEPA 2
75
No
2, 3
Sim
100
Sim (Nveis baixo/ volatilidade) Sim
2, 3
Sim
Tipo B2
100
2, 3
Sim
Tipo B3
100
Sim
2, 3
Sim
Classe III
NA
Sim
3, 4
Sim
* os compartimentos para as luvas podero ser acrescentados e aumentaro a velocidade frontal para 150 lfpm; as luvas podem ser adicionadas com a liberao da presso da entrada de ar que permitir o trabalho com radionucldeos/qumicos.
229
Figura 1 Cabine de Segurana Biolgica Classe I. A. abertura frontal, B. vidraa corredia. C. filtro HEPA para exausto, D. espao de exausto.
Ar ambiente Ar potencialmente contaminado Ar filtrado por filtro HEPA
VISTA LATERAL
Figura 2a Cabine de segurana Biolgica Classe 2, Tipo A. A. abertura frontal, B. vidraa corredia, C. filtro HEPA para exausto, D. espao posterior, E. filtro HEPA para o suprimento de ar, F. ventilador.
Ar ambiente
Ar potencialmente contaminado Ar filtrado por filtro HEPA
VISTA LATERAL
231
Figura 2b Cabine de segurana biolgica Classe II, Tipo B1 (desenho clssico). A. abertura frontal, B. vidraa corredia, C. filtro HEPA para exausto, D. filtro HEPA para o suprimento de ar, E. espao de exausto com presso negativa,, F. ventilador, G. filtro HEPA adicional para o suprimento de ar. Observao: O exaustor da cabine necessita ser conectado ao sistema de exaustores do edifcio.
Conexo necessria de sistema de exaustores do edifcio
232
Ar ambiente Ar potencialmente contaminado Ar filtrado por filtro HEPA
VISTA LATERAL
VISTA FRONTAL
232
Figura 2c Cabine de Segurana Biolgica Classe II, Tipo B2. A. abertura frontal, B. vidraa corredia, C. filtro HEPA para exausto, D. filtro HEPA para suprimento de ar, E. espao de exausto com presso negativa, F. tela do filtro. Observao: O filtro de carbono do sistema de exaustores do edifcio no est mostrado nesta figura. O ar de exausto na cabine dever ser conectado ao sistema de exaustores do edifcio.
Ar ambiente
VISTA LATERAL
233
VISTA FRONTAL
Figura 2d Cabine de Segurana biolgica Classe II. Tipo B3 (modelo de mesa). A. abertura frontal, B. vidraa corredia, C. filtro HEPA de exausto, D. filtro HEPA para suprimento de ar, E. espao de presso positiva, F. espao de presso negativa. Observao: Os exaustores da cabine devero ser conectados aos sistemas dos exaustores do edifcio.
Ar ambiente
VISTA LATERAL
VISTA FRONTAL
234
Figura 3 Cabine de Segurana Biolgica de Classe III. A.compartimento para fixao de luvas longas de borracha cabine, B. vidraa corredia, C. filtro HEPA para exausto, D. filtro HEPA para o suprimento de ar, E. autoclave dupla sada na extremidade ou caixa de passagem da cabine. Observao: Um tanque de imerso qumica pode ser instalado e dever ser colocado abaixo da superfcie de trabalho da CSB com o acesso por cima. O sistema de exaustores da cabine necessita ser conectada a um sistema de exaustores independente.
Ar ambiente
VISTA LATERAL
235
VISTA FRONTAL
APNDICE B Imunoprofilaxia Um nvel adicional de proteo para pessoas do grupo de risco pode ser conseguido atravs de imunizaes profilticas adequadas. essencial uma norma organizacional por escrito que defina as pessoas do grupo de risco, especifiquem os riscos e os benefcios das vacinas especficas e que faa distino entre as vacinas solicitadas e as recomendadas. Ao desenvolver essas normas organizacionais, essas recomendaes e requisitos devero ser especificamente concentrados em doenas infecciosas que sero ou provavelmente sero encontradas em um local em particular. As vacinas licenciadas nas quais os benefcios (nveis de anticorpo considerados como protetores) excedem os riscos (por exemplo, as reaes locais ou sistmicas) devero ser requisitadas para todas as pessoas claramente identificadas. Exemplos destas preparaes incluem as vacinas contra a hepatite B, febre amarela, anti-rbica e contra a plio. As recomendaes para aplicao de vacinas menos eficazes, como as associadas aos altos ndices de reaes locais ou sistmicas, as que produzem reaes muito graves com o uso repetido e as vacinas no licenciadas dadas sob os protocolos de uma nova droga de pesquisa (IND), devero ser cuidadosamente consideradas. Os produtos com essas caractersticas (por exemplo, as vacinas contra a clera, o antraz e a tularemia) podem ser recomendados, mas no podero ser requisitados para o trabalho. Um registro completo das vacinas recebidas baseando-se nos requisitos ou recomendaes ocupacionais dever ser mantido em cada ficha mdica do trabalhador. As recomendaes para o uso e vacina adaptadas da lista mencionada no Public Health Service Advisory Committee on Immunization Practices, esto includas no resumo das caractersticas dos agentes na Seo VII e esto elaboradas nas referncias 1, 2 abaixo . O leitor dever consultar as recomendaes atuais da ACIP publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR). Deve-se dar uma ateno particular para os indivduos que esto ou que podem se tornar imunodeprimidos, uma vez que
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Apndice B
as recomendaes para administrao de vacinas podem ser diferentes das recomendaes indicadas para um adulto imunologicamente competente. Referncias: 1. Centers for Disease Control and Prevention. General Recommendations on Immunization Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP), January 28, 1994. / Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) 43(RR01); 1-38. 2. Centers for Disease Control and Prevention. 1997. Immunization of Health-Care Workers: Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) and the Hospital Infection Control Practices Advisory Committee (HICPAC) Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR) 46 (RR-18); 1-42.
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APNDICE C Transporte e Transferncia de Agentes Biolgicos Os agentes biolgicos incluem os agentes infecciosos de homens, plantas e animais, assim como as toxinas que podem ser produzidas por micrbios e por material gentico potencialmente perigoso por si s ou quando introduzido em um vetor adequado. Agentes etiolgicos e substncias infecciosas so termos intimamente relacionados e so encontrados nas normas de transporte e de transferncia. Os agentes biolgicos podem existir em culturas purificadas e concentradas, mas tambm podem ser encontrados em uma variedade de materiais como fludos corpreos, tecidos, amostras de solo e etc. Agentes biolgicos e materiais suspeitos de cont-los, ou que sabidamente os contm, so reconhecidos pelos governos federais e estaduais como materiais perigosos e o transporte e a transferncia destes materiais devero estar sujeitos ao controle normativo. O termo transporte se refere ao acondicionamento e envio destes materiais pelo ar, terra ou mar, geralmente feito por uma empresa comercial. J o termo transferncia se refere ao processo de mudana de local destes materiais. Transporte Os regulamentos sobre o transporte de agentes biolgicos so definidos de forma a assegurar proteo ao pblico e aos trabalhadores da rede de transporte exposio a qualquer agente que possa estar presente na embalagem. A proteo obtida atravs de: (a) requisitos para um rigoroso acondicionamento que suporte manipulaes bruscas e a conteno de todo o material lquido dentro da embalagem sem que ocorra vazamento para o lado de fora, (b) rotulagem adequada das embalagens com o smbolo de risco biolgico e outros rtulos que alertem os trabalhadores da rede de transporte sobre o contedo perigoso da embalagem, (c) documentao sobre o contedo perigoso da embalagem contendo informaes necessrias para o caso de uma situao de emergncia e, (d) treinamento de trabalhadores da rede de transporte para que possam se familiarizar com os
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Apndice C
contedos perigosos de forma a serem capazes de responder s situaes de emergncia.
Regulamentos
Servio Pblico de Sade 42 CRF Parte 72. Transporte Interestadual de Agentes Etiolgicos. Este regulamento est sendo revisado para harmonizar-se com outros regulamentos internacionais e dos E.U.A. Uma cpia do regulamento atual poder ser conseguida atravs da internet no: http://www.cdc.gov/od/ohs Departamento de Transporte. 49 CFR Partes 171-178. Regulamentos para transporte de Materiais Perigosos. Este se aplica aos agentes biolgicos e as amostras clnicas. Maiores informaes podero ser obtidas atravs da internet no site: http://dot.gov.rules.html Servio Postal dos Estados Unidos. 39 CFR Parte 111. Envio Postal de Agentes Etiolgicos. Codificados no Manual de Postagem Domstica 124.38: Preparaes dos Agentes Etiolgicos. Uma cpia do Manual de Postagem Domstica poder ser obtida atravs do Setor de Publicao do Governo atravs do telefone 1-202-5121800 ou atravs do site na internet: http://www.access.gpo.gov Administrao da Segurana e da Sade Ocupacional (OSHA). 29 CFR Parte 1910.1030 Exposio Ocupacional aos Patgenos do Sangue. Estabelece os requisitos mnimos para acondicionamento e rotulagem para o transporte de sangue e de fludos corpreos dentro do laboratrio e fora dele. Maiores informaes podero ser adquiridas no escritrio local da OSHA ou no site: http://osha.gov Regulamentos sobre Produtos Perigosos (DGR). Associao Internacional de Transporte Areo (IATA). Esses regulamentos fornecem os requisitos para o acondicionamento e rotulagem de substncias e materiais infecciosos e de amostras clnicas que
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Apndice C
possuam uma baixa probabilidade de conterem substncias infecciosas. Estes so os regulamentos seguidos pelas empresas areas. Eles se baseiam nos regulamentos do Comit de Peritos em Transporte de Produtos Perigosos, Secretariado das Naes Unidas e as Instrues Tcnicas para o Transporte de Produtos Perigosos via area que so fornecidas pela Organizao Internacional da Associao Civil (ICAO). A cpia do DGR poder ser obtida atravs do telefone 1-800-716-6326 ou atravs do site: http://www.iata.org ou http://who.org Requisitos Gerais de Acondicionamento para Transporte de Agentes Biolgicos e de Amostras Clnicas A Figura 1 mostra o acondicionamento do tipo triplo (container primrio, embalagem secundria com conteno de gua, embalagem externa resistente a impacto) necessrio para agente biolgico oriundo de doena humana ou de materiais suspeitos de cont-los ou que sabidamente os contm. Esta embalagem requer a colocao de um rtulo externo, com os dizeres Substncia Infecciosa, mostrado na Figura 2. Esta embalagem dever atender aos testes de performance enfatizados nos regulamentos do DOT, USPS, PHS e da IATA. As amostras clnicas com uma baixa probabilidade de conter um agente infeccioso tambm necessitam de um acondicionamento triplo, mas os testes de performance s exigem que a embalagem no apresente vazamentos aps o teste de uma queda de quatro ps. O DOT, o PHS e a IATA exigem um rtulo externo identificando a embalagem como Amostra Clnica.
Transferncia
Os regulamentos para a transferncia de agentes biolgicos visam assegurar que a mudana de posse dos materiais biolgicos esteja dentro dos interesses do pblico e da nao. Estes regulamentos exigem a documentao dos trabalhadores, instalaes e justificativa da necessidade de transferncia do agente e subseqente aprovao deste processo por uma autoridade
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Apndice C
federal. Os seguintes regulamentos se aplicam nesta categoria:
Importao de Agentes Etiolgicos de Doenas Humanas

42 CFR Parte 71 Quarentena Estrangeira. Parte 71.54 Agentes, Hospedeiros e Vetores Etiolgicos. Este regulamento exige uma licena para a importao (obtida nos Centros de Preveno e Controle de Doenas) dos agentes etiolgicos de doenas humanas e de quaisquer materiais, incluindo animais e insetos vivos que possam cont-los. Um requerimento e maiores informaes sobre as licenas para importao podero ser obtidos atravs do telefone 1-888-CDC-FAXX e dando entrada no documento nmero 101000 ou no site: http://www.cdc.gov/od/ohs/biosty/imprtper.html
Importao de Agentes Etiolgicos de Criaes, Aves e de Outras Doenas em Animais.

9 CFR Partes 92, 94. 95 96, 122 e 130. Estes regulamentos exigem que uma licena de importao obtida no Departamento de Agricultura dos Estados Unidos (USDA), Servio de Inspeo de Sade de Plantas e Animais (APHIS), Servios Veterinrios para a importao ou transferncia domstica de agentes etiolgicos de criaes, aves, outros animais e qualquer outro material que possa conter estes agentes etiolgicos. Maiores informaes podero ser obtidas atravs do telefone (301) 734-3277 ou atravs do site: http://aphisweb.aphis.usda.gov/ncie
Importao de Pestes de Plantas

7 CFR Parte 330. Regulamentos Federais de Pestes de Plantas; Geral; Pestes de Plantas; Solo; Pedras e Produtos de Ardsia; Lixo. Este regulamento exige uma licena para a importao ou a transferncia domstica de pestes botnicas, agente biolgicos de plantas ou de qualquer material que possa cont-los. Maiores informaes podero ser obtidas atravs do telefone 301-734-3277 ou atravs do site: http://aphis.usda.gov./ppq/ppqpermits.html
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Apndice C
Transferncia de Agentes Biolgicos Selecionados de Doenas Humanas

42 CFR Parte 72.6 Exigncias Adicionais para Instalaes Que Realizam Transferncias ou Recebimento de Agentes Selecionados. Instalaes que transferem ou importam agentes selecionados devero ser registrados junto ao CDC e cada transferncia de um agente selecionado dever ser documentada. Maiores informaes podero ser conseguidas atravs do site: http://www.cdc.gov/od/ohs/lrsat
Exportao de Agentes Etiolgicos Humanos, Animais, Plantas e Materiais Relacionados. Departamento de Comrcio. 15 CFR Partes 730 a 7999. Estes regulamentos exigem que os exportadores de uma grande variedade de agentes etiolgicos humanos, plantas e doenas animais, incluindo o material gentico, e produtos que podero ser usados na cultura de grandes quantidades de agentes, possuam uma licena para exportao. Maiores informaes podero ser obtidas atravs do telefone do DOC Bureau of Export Administration: 202-482-4811 ou atravs do site: http://www.bxa.fedworld.gov ou http://www.bxa.doc.gov
As Figuras 1 e 2 ilustram o acondicionamento e rotulao de substncias e amostras clnicas infecciosas em volumes de menos de 50 ml, de acordo com as provises do sub-pargrafo 72.3 (a) do regulamento do Interstate Shipment of Etiologic Agents (42 CFR, Parte 72). A reviso depende ainda dos resultados dos requisitos adicionais de rotulao de embalagens, mas at o momento da publicao desta quarta edio do BMBL, essas modificaes no haviam sido concludas. Para maiores informaes sobre qualquer clusula deste regulamento, entre em contato com: Centers for Disease Control and Prevention Attn: External Activities Program Mail Stop F-05 1600 Clifton Road N.E.
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Apndice C
Atlanta, GA 30333 Telephone: (404) 639-4418 FAX: (404) 639-2294. Observe que o nome, endereo e nmero de telefone do remetente devero ser colocados no lado externo e interno dos containers. Advertimos ao leitor consultar outras clusulas adicionais do Department of Transportation (49 CFR, Partes 171-180) Hazardous Materials Regulations.
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Figura 1. Embalagem e rotulagem de substncias infecciosas
Fita a prova dgua Cultura Rtulo de Identificao da Amostra Rtulo de Risco Biolgico Embalagem de material de absorvente Rtulo de Substncia Infecciosa
Recipiente primrio Embalagem de material absorvente Cultura Tampa Rtulo de risco biolgico Segundo recipiente ou recipiente secundrio Nome, telefone e endereo do remetente. Outro recipiente
Figura 2. Embalagem e rotulagem de amostras clnicas
Lista discriminada dos contedos recipiente secundrio hermeticamente fechado (lacrado em um saco plstico) Recipiente hermtico primrio Amostra ID Rtulo de risco biolgico Embalagem de material absorvente Rtulo da amostra clnica
Recipiente hermtico primrio Recipiente secundrio hermeticamente fechado (lacrado em um saco plstico) embalagem de material absorvente
nome, telefone e endereo do destinatrio
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APNDICE D Patgenos Animais

Os patgenos que normalmente no so encontrados na criao domstica de aves e de gado podero necessitar de um projeto laboratorial especial, operao e caractersticas especficas de conteno, que geralmente no esto especificadas nesta publicao. A importao, posse ou uso dos seguintes agentes proibida ou restrita por lei ou pelos regulamentos ou normas administrativas do Departamento de Agricultura dos Estados Unidos ou por polticas administrativas:
Doena do Cavalo Africano
Mycoplasma mycoides (mycoides) Vrus da doena de ovinos africanos (vrus Ganjam) Vrus da Doena de Newscastle* (cepas velognicas)
Vrus da Febre Suna Africana*
Vrus da Akabane
Vrus da Influenza Aviria
Peste dos pequenos ruminantes* (praga dos pequenos ruminantes)
Besnoitia besnoiti
Vrus da Febre do Vale Rift* Vrus de Rinderspest* Varola de ovinos e caprinos* Vrus da Doena Vesicular de Sunos*
Vrus da Lngua Azul* Vrus da Doena de Borna
Encefalopatia Espongiforme Bovina
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Apndice D
Agente da Febre Petequial Infeciosa Bovina
Vrus da Doena de Teschen* Theileria annulata Theileria lawrencei Theileria bovis
Brucella abortus Brucellosis melitensis* Burckholderia mallei (Pseudomonas mallei Glanders) Vrus da varola do camelo Febre Suna clssica Cochliomya hominivorax (larva da Cochliomya hominivorax) Cowdria ruminantium (caudriose)
Theileria hirci Trypanosoma brucei Trypanosoma congolense Trypanosoma equiperdum (dourine) Trypanosoma evansi
Encefalopatia Espongiforme Bovina, variante da Doena de Creutzeldt-Jakob Vrus da Febre Efemeral Vrus da doena da mo-e-boca*
Trypanosoma vivax Encefalomielite Eqina Venezuelana Vrus do Exantema Vesicular Estomatite Vesicular Doena hemorrgica viral de coelhos Vrus da Doena de Wesselsbron
Histoplasma (Zymonema) farciminosum Vrus da Encefalite Bovina Vrus da doena da pele granulosa
Mycobacterium bovis
Mycoplasma agalactiae 246
Apndice D
A importao, a posse, o uso ou o embarque interestadual de patgenos animais, com exceo dos relacionados acima, pode tambm estar sujeita aos regulamentos do Departamento de Agricultura dos Estados Unidos. A licena para importao atr avs do USDA/APHIS necessria para a importao de qualquer agente infeccioso animal que estejam na lista de patgenos animais da USDA/APHIS. Esta licena poder ser requerida para a importao de qualquer outro agente de infeco de aves e gado. Uma licena de importao tambm necessria para a importao de qualquer produto derivado de aves ou de gado, tais como sangue, soro ou outros tecidos. Maiores informaes podero ser obtidas escrevendo para: U.S Department of Agriculture Animal and Plant Health Inspection Service Veterinary Services, National Center for Import and Export 4700 River Road, Unit # 40 Riverdale, Maryland 20737-1231 Telefone: (301) 734-3277 Fax: (301) 734-8226 Internet: http: /www.aphis.usda.gov/ncei
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APNDICE E
FONTES DE INFORMAES
As fontes de informaes, consultas e recomendaes sobre o controle de risco biolgico, procedimentos de descontaminao e outros aspectos do gerenciamento da segurana de um laboratrio incluem: Centers for Disease Control and Prevention Attention: External Activities Program Atlanta, Georgia 30333 Telefone: (404) 639-4418 National Institutes of Health Attention: Division of Safety Bethesda, Maryland Telefone: (301) 496-1357 National Animal Disease Center U.S Department of Agriculture Ames, Iowa 50010 Telefone: (515) 862-8258 United States Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration Exposio Ocupacional aos Patgenos do Sangue, Regra Final Fed Reg 1991; 56: 64041-64182 http://www.osha-slc.gov/OshStd_data/1910_1030.html. Regra Proposta para TB: http://www.osha slc.gov/FedReg_osha_data/FED19980205.html. Padres de Segurana e de Sade. Ocupacional 29 CFR Parte 1910: (http://www.oshda-slc.gov/OshStd_toc/ OSHDA_Std_toc_1910.html) Normas: Centros de Preveno e Controle da Doena Tuberculose: 1994: http://www.cdc.gov/nchstp/tb/pubs/250001.pdf 1997 (Lab): http://www.cdc.gov/od/ohs/tbdoc2.html
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Apndice E
Imunizao para Trabalhadores da rea de Sade: http://www.cdc.gov/epo/mmwr/preview/rr4618.html Normas para Controle de Infeces em Trabalhadores da rea de Sade, 1998: http://www.cdc.gov/ncidod/hip/draft_gu/waisgate.txt Profilaxia para o HIV: http://www.cdc.gov/epo/mmwr/mmwr_rr.html Departamento do Exrcito, DOD. 32 CFR Partes 626, 627 Programa de Segurana da Defesa Biolgica: (http://www.gpo.gov) Comit Nacional dos Padres de Laboratrios Clnicos (NCCLS) Normas aprovadas para a proteo de trabalhadores de laboratrios aos agentes de risco biolgico e doenas infecciosas transmitidas pelo sangue, fludos corpreos e tecido. Dezembro de 1997, NCCLS Doc. M29-A (ISBN1-56238-339-6. http://www/ exoffice@nccls.org ). Institutos Nacionais de Sade Normas do NIH para Molculas de DNA Recombinante: http://www.NIH.gov/od/orda/toc.html Escritrio do NIH para Atividades com DNA Recombinante http://www.NIH.gov/od/orda
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APNDICE F
Segurana do Laboratrio e Resposta de Emergncia para Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia

Normas tradicionais de segurana laboratorial enfatizam o uso de boas prticas de trabalho, equipamento de conteno adequado, dependncias bem projetadas e controles administrativos que minimizem os riscos de uma infeco acidental ou ferimentos em trabalhadores de laboratrio e que evitem a contaminao do meio ambiente. Embora os laboratrios clnicos e de pesquisas possam conter uma variedade de materiais biolgicos, qumicos e radioativos perigosos, at o momento, existem poucos relatrios sobre o uso intencional de quaisquer destes materiais para ferir trabalhadores 1, 2, 3, 4, 5,6 de laboratrios ou outras pessoas . Entretanto, h uma crescente preocupao sobre o possvel uso de materiais biolgicos, qumicos e radioativos como agentes 7, 8 para o terrorismo ,. Em resposta a essas preocupaes, as seguintes normas orientam essas questes de segurana laboratorial (por exemplo, preveno da entrada de pessoas no autorizadas em reas laboratoriais e preveno da remoo no autorizada de agentes biolgicos perigosos). Os seguintes itens so oferecidos como normas para os laboratrios que usam agentes biolgicos ou toxinas capazes de causarem doenas srias ou fatais aos homens e aos animais. A maioria destes laboratrios estaria trabalhando sob condies de Nveis de Biossegurana 3 ou 4 descritas nas Sees II e III. Porm, os laboratrios de pesquisa, de produo e os clnicos que trabalham com patgenos recentemente identificados, patgenos animais de alto nvel, e/ou toxinas no cobertas pelas recomendaes dos Nveis de Biossegurana 3 ou 4 devero tambm seguir essas normas para minimizar as oportunidades de remoo acidental ou intencional destes agentes de um laboratrio.
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Apndice F
1. Reconhecer que a segurana do laboratrio est relacionada, mas diferente de um laboratrio seguro. Envolver profissionais com experincia em segurana e proteo para avaliao e desenvolvimento das recomendaes para um dado local ou laboratrio. Revisar as normas e os procedimentos de segurana regularmente. A administrao dever revisar as normas para garantir que esto adequadas para as condies atuais e consistentes com outras normas e procedimentos amplos do local. Os supervisores do laboratrio devero assegurar que todos os trabalhadores e visitantes de um laboratrio entendam os requisitos de segurana e sejam treinados e equipados para seguirem os procedimentos estabelecidos. Rever as normas e os procedimentos quando ocorrer um incidente ou quando uma nova ameaa for identificada. 2. Acesso controlado s reas onde agentes biolgicos ou toxinas estejam sendo usadas ou armazenadas. As reas dos laboratrios e de tratamento de animais devero ser separadas das reas pblicas dos edifcios onde se encontram localizadas. As reas do laboratrio ou de cuidados animais devero ser trancadas todas s vezes. Os cartes-chaves ou dispositivos similares devero ser usados para permitir a entrada s reas do laboratrio e as de cuidado do animal. Todas as entradas (incluindo as entradas para visitantes, trabalhadores de manuteno, trabalhadores para realizao de reparos e outros que precisarem entrar ocasionalmente) devero ser registradas por um dispositivo semelhante a um carto-chave (prefervel) ou atravs de assinatura no livro de entrada.
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Apndice F
Somente os trabalhadores necessrios para a realizao de um trabalho devero receber permisso para entrar somente nas reas e nas horas que um trabalho em particular for realizado. a. O acesso para estudantes, cientistas, etc, dever ser limitado ao horrio em que os funcionrios regulares estiverem presentes. b. O acesso para a limpeza, manuteno e consertos rotineiros dever ser limitado ao horrio em que os funcionrios estiverem presentes. Os freezers, geladeiras, cabines e outros containers onde estoques de agentes biolgicos, materiais clnicos ou radioativos devero ser guardados, devero ser trancados quando no estiverem vista dos trabalhadores (por exemplo, quando localizados em reas de armazenamento no freqentadas regularmente). 3. Saber quem est nas reas do laboratrio. Os supervisores e diretores do local devero conhecer todos os trabalhadores. Dependendo dos agentes biolgicos envolvidos e do tipo de trabalho a ser desenvolvido, deve-se fazer uma reviso da limpeza e da segurana antes que novos funcionrios sejam designados para a rea de trabalho. Todos os trabalhadores (incluindo estudantes, cientistas visitantes e outros trabalhadores temporrios) devero usar crachs de identificao. Estes crachs devero conter no mnimo uma fotografia, o nome do indivduo e a data de vencimento deste crach. O uso de marcadores colorido ou de outros smbolos facilmente identificvel sobre os crachs seria teis para a identificao para indicar a liberao para a entrada em reas restritas (por exemplo, laboratrios de NB-3 ou 4, reas de tratamento de animal). Os visitantes devero ser identificados com crachs e devero ser acompanhados ou autorizados a entrarem usando os mesmos procedimentos como os usados para trabalhadores.
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Apndice F
4. Saber quais os materiais que esto sendo trazidos para dentro da rea laboratorial. Todos os materiais devero ser verificados (visualmente ou por raios-x) antes de serem trazidos para dentro do laboratrio. Os pacotes contendo amostras, substncias bacterianas ou isoladas, ou toxinas devero ser abertos em uma cabine de segurana ou em outro dispositivo de conteno adequado. 5. Saber quais materiais esto sendo removidos da rea laboratorial. Os materiais/toxinas biolgicas que sero removidos para outros laboratrios devero ser embalados e rotulados de acordo com todos os regulamentos locais, federais e internacionais aplicveis9. a. As licenas necessrias (por exemplo, PHS, DOT, DOC, USDA) devero ser obtidas antes que os materiais sejam acondicionados e rotulados. b. Os recipientes (de preferncia) ou o local de recebimento dos materiais devero ser conhecidos pelo remetente, e este remetente dever fazer um esforo para assegurar que os materiais sejam enviados para um local equipado com recursos para manipular estes materiais com segurana. O transporte manual de materiais e toxinas biolgicas para outros laboratrios considerado inadequado. Se os materiais ou toxinas biolgicas a serem carregadas manualmente forem transportados por carregadores comuns, todos os regulamentos devero ser seguidos. Materiais contaminados ou possivelmente contaminados devero ser descontaminados antes de sarem da rea do laboratrio. Os materiais qumicos e radioativos devero ser
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Apndice F
descartados de acordo com os regulamentos locais, federais e estaduais. 6. Tenha um plano de emergncia. O controle do acesso s reas do laboratrio poder fazer com que os procedimentos de emergncia sejam dificultados. Este fato dever ser considerado quando os planos de emergncia forem desenvolvidos. a. Uma avaliao da rea laboratorial pelos funcionrios do local, com profissionais de fora, se necessrio, para a identificao dos aspectos de segurana e proteo devero ser conduzidos antes que um plano de emergncia seja desenvolvido. b. Os administradores, diretores, principais pesquisadores e trabalhadores do laboratrio e os trabalhadores responsveis pela segurana do local devero estar envolvidos no planejamento de emergncia. c. A polcia, o corpo de bombeiro ou outras pessoas envolvidas em situaes de emergncia devero ser informados quanto aos tipos de materiais biolgicos em uso nas reas laboratoriais e devero dar uma assistncia no planejamento dos procedimentos de emergncia nas reas laboratoriais. d. Os planos devero incluir a proviso de uma notificao imediata dos diretores e trabalhadores do laboratrio e pessoas encarregadas pela segurana, ou outros indivduos quando ocorrer uma emergncia, de maneira que possam lidar com as questes de biossegurana caso ocorra.
O planejamento de emergncia laboratorial dever ser coordenado com planos de expanso. Fatores como ameaas de bombas, problemas climticos (furaco e inundao), terremotos, falta de energia e outros desastres naturais (ou no naturais) devero ser considerados quando o plano de emergncia estiver sendo desenvolvido.
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Apndice F
7. Possua um protocolo para relato de incidentes. Os diretores do laboratrio, em cooperao com os encarregados pela segurana e proteo do local, devero ter normas e procedimentos no local para relatar e investigar os incidentes ou possveis incidentes (por exemplo, visitantes sem documentos, desaparecimento de substncias qumicas, telefonemas incomuns ou ameaadores).
Referncias: 1.
2.
3.
4.
5.
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7. 8.
9.
Torok T J, et al. A large community outbreak of salmonellenosis caused by intentional contamination of restaurant salad bars. JAMA 1997; Vol. 278; 389-395. Kolavic SA, et al. An Outbreak of Shigella dysenteriae Type 2 Among Laboratory Workers due to Intentional Food Contamination. JAMA 1997; Vol 278; 396-398. Report to Congress on abnormal Occurrences with occurred between July and September 1995, 3rd Event: NIH Incident, Federal Register, February 26, 1996, Vol.61, N 38, pp. 71237124. U.S Nuclear Regulatory Commission, NUREG 1535, Ingestion of Phosphorous-32 at MIT, Cambridge, MA Identified on August 19, 1995. U.S Nuclear Regulatory Commission, Preliminary Notification of Event or Unusual Occurrence PNO-1-98-052, Subject: Intentional Ingestion of Iodine 125 Tainted Food (Brown University), November 16, 1998. National Institutes of Health (NIH) Issuance of Directors Decision: The NIH Incident, Federal Register, September 24, 1997, 62 (185): 50018-50033. Atlas RM, Biological weapons Pose Challenge for Microbiology Community. ASM News 1998: Vol 64; 383-389. Ruys, Theodorus, New York: Laboratory Design principles. In: Handbook of Facilities Planning. Ruys, T, ed. New York: Van Nostrand Reinhold, 1990; 257-264. U.S Public Health Service. Final Rule: Additional Requirements for Facilities Transferring or Receiving Select Agents. Federal Register, Oct. 24, 1996; 61 FR 29327.
255
APNDICE G
Gerenciamento Integrado de Roedores e de Insetos

O gerenciamento de roedores e de insetos uma parte importante na administrao de um local de pesquisa. Muitos insetos, como mosquitos e baratas, podem ser vetores e espalhar mecanicamente os patgenos de doenas e comprometem o meio ambiente de pesquisa. Mesmo a presena de insetos incuos contribui para as condies fora dos padres sanitrios. A abordagem mais comum para o controle de roedores e de insetos tem sido a aplicao de produtos qumicos, como uma medida preventiva ou remediadora. Os tratamentos com pesticidas podem ser eficazes e podem ser necessrios como uma medida corretiva, mas tm resultados limitados a longo prazo quando usados sozinhos. As aplicaes de pesticidas tambm apresentam potencial de contaminao para o meio ambiente de pesquisa, atravs da aerolizao e volatilizao do pesticida. Para controlar os roedores e os insetos e para minimizar o uso de pesticidas, necessrio empregar um programa de abordagem que integre os servios de limpeza, de manuteno e de controle de roedores e de insetos. Este mtodo de controle freqentemente chamado de gerenciamento integrado de roedores e de insetos(GIRI). O objetivo primrio de um programa GIRI de prevenir os problemas causados pelos roedores e insetos, atravs do gerenciamento do meio ambiente local de maneira que o torne menos propcio para a infestao de roedores e de insetos. Juntamente com as aplicaes limitadas de pesticidas, o controle conseguido atravs de estratgias de intervenes administrativas e operacionais retroativas para corrigirem condies que propiciem o surgimento de roedores e de insetos. O GIRI um servio baseado em estratgias. A deciso de implementar um programa GIRI dever se basear no somente no custo dos servios, mas tambm na eficcia dos componentes do servio. O GIRI especfico para cada local e cada programa dever ser idealizado conforme o meio ambiente onde ser aplicado. Os servios de GIRI em um laboratrio sero diferentes daqueles
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aplicados em um edifcio de escritrios ou em um local de tratamento de animais. Os programas de gerenciamento integrado de roedores e de insetos (GIRI) so baseados nos vrios componentes, que esto inter-relacionados e que contribuem para o gerenciamento do meio ambiente de pesquisa para controlar os roedores e os insetos. So eles:
Projeto do Local: A incluso de questes e requisitos para o gerenciamento de roedores e de insetos no planejamento, no projeto e na construo, proporcionam a oportunidade de incorporar caractersticas que auxiliam a impedir a presena de roedores e de insetos, a minimizar o seu habitat e a promover condies sanitrias adequadas. Isto poder ajudar a reduzir a necessidade de futuros servios corretivos de gerenciamento de roedores e de insetos, que podem ser um obstculo para as operaes de pesquisa. Monitoramento: Armadilhas, inspees visuais e entrevistas com os funcionrios so usadas para identificao das reas e condies que possam abrigar roedores e insetos. O monitoramento a atividade central de um programa de GIRI e usado no lugar de tratamentos preventivos com pesticidas. Manuteno do Local e do Saneamento Bsico: Muitos dos problemas com roedores e insetos podem ser prevenidos ou corrigidos ao usarmos um saneamento adequado, reduzindo a desordem e o habitat destes. A manuteno de registros das deficincias estruturais e das condies de manuteno do local pode ajudar a detectar problemas e determinar se as aes corretivas foram concludas de maneira satisfatria.
Comunicao: Um membro da equipe do laboratrio pode ser designado para se reunir com os funcionrios do gerenciamento de roedores e de insetos, para assist-los nas resolues de questes especficas do laboratrio, que tenham impacto sobre o gerenciamento de roedores e de insetos. As informaes sobre
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Apndice G
as atividades de roedores e de insetos, e recomendaes sobre as prticas e condies do local que possam impactar o gerenciamento de roedores e de insetos, devem ser retransmitidos verbalmente ou por escrito para aquelas pessoas. O treinamento dos indivduos em questes relacionadas identificao, biologia e condies sanitrias pode tambm promover a compreenso e a cooperao com os objetivos do programa de GIRI.
Manuteno de Registros: Um livro de registro pode ser usado para anotar a atividade dos roedores e dos insetos, e as condies pertinentes ao programa de GIRI. Este livro poder conter os protocolos e procedimentos para os servios de GIRI naquela instalao, folhas de dados sobre a segurana dos pesticidas, rtulos dos mesmos, registros de tratamento; planos para o uso, relatrios de pesquisa, etc. Controle de Roedores e de Insetos sem o Uso de Pesticidas: Os mtodos de controle como o uso de armadilhas, calafetagem ou vedao, lavagem e congelamento podem ser aplicados de forma segura e eficientemente, quando usados juntamente com condies sanitrias e reparos estruturais adequados. Controle de Roedores e de Insetos usando Pesticidas: As aplicaes preventivas dos pesticidas devero ser desencorajadas, e os tratamentos devero ficar restritos s reas de atividade conhecida de roedores e dos insetos. Quando os pesticidas so aplicados, deve-se usar e aplicar produtos menos txicos, de melhor eficcia, de maneira segura. Avaliao e Garantia de Qualidade do Programa: A reviso do programa e a garantia da qualidade devero proporcionar uma avaliao contnua e objetiva das atividades e da eficcia do GIRI. Isto feito para assegurar que o programa esteja realmente controlando os roedores e os insetos, e atendendo as necessidades bsicas do programa da instalao e de seus ocupantes. Baseado nesta reviso, os protocolos de
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gerenciamento de roedores e de insetos podem ser modificados e novos procedimentos podem ser implementados.
Percia Tcnica: Um entomologista qualificado pode fornecer um guia tcnico til no desenvolvimento e implementao de um programa GIRI. As pessoas responsveis pelo gerenciamento de roedores e de insetos devero ser licenciadas e certificadas atravs de uma agncia regulamentadora adequada. Segurana: Ao limitar o espectro dos tratamentos com pesticidas e ao usarmos prticas de controle sem pesticidas, o programa de GIRI poder conseguir minimizar o potencial de exposio do meio ambiente de pesquisa e da equipe de funcionrios ao pesticida.
Antes de iniciar qualquer tipo de programa de controle de roedores e de insetos, o desenvolvimento de uma estrutura operacional para os servios GIRI poder ajudar a promover a colaborao entre especialistas no controle e o pessoal do local. Esta estrutura pode tambm ser usada para incorporar as restries de instalao fsica laboratorial e questes operacionais e processuais dentro do programa de GIRI. Um programa eficaz de gerenciamento de roedores e de insetos uma parte integral da administrao das instalaes laboratoriais. Ao incluir uma poltica de GIRI nos procedimentos de operao padro de instalaes laboratoriais, aumentaremos a conscientizao do programa. O treinamento sobre os princpios e prticas do gerenciamento estrutural (indoor) integrado ao gerenciamento de roedores e de insetos e as informaes sobre o programa do GIRI esto disponveis atravs de muitas fontes. Algumas delas so: os departamentos de entomologia de universidades, escritrios de extenso municipal, Sociedade Entomolgica dos EUA, departamentos estaduais de agricultura, associaes estaduais de controle de roedores e de insetos, estoques de equipamentos para controle de roedores e de insetos e consultores de gerenciamento de roedores e de insetos ou firmas de gerenciamento de roedores
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e de insetos. H tambm cursos por correspondncia em vrias universidades e cursos curtos e conferncias de treinamento sobre o gerenciamento estrutural de roedores e de insetos. Informao Adicional: Urban Entomolgy. 1996. Insect and mite Pests in the Human Environment. W.H. Robinson. Chapman and Hall. New York. Advances in Urban Pest Management. 1986. Gary W. Bennett and John M. Owens, eds. Van Nostrand Reinhold Company. New York. Common Sense Pest Control. 1991. Least-toxic solutions for four home, garden, pests and community. William Olkowski, Sheila Daar, Helga Olkowski. The Taunton Press., Inc., Internet: Associao Nacional de Controle de Roedores e de Insetos: http://www.pestworld.org Rede de Biocontrole: http://www.bioconet.com
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Trabalhos com Clulas e Tecidos Humanos e de Outros Primatas O Centers for Disease Control and Prevention e o National Institutes of Health gostariam de expressar agradecimentos a Frank P. Simione, M.S. e Jane Caputo, B.A. da American Type Culture Collection (ATCC), uma organizao global de biocincia dedicada aos padres biolgicos e biodiversidade, por suas contribuies na preparao deste Apndice.
Pelo menos 24 casos documentados de infeco em funcionrios de laboratrio que manipulam culturas de clulas primrias (por exemplo, clulas renais do macaco rhesus) ocorreram 1, 2 nos ltimos 30 anos . Embora um nmero limitado de infeces adquiridas em laboratrio tenha sido relatado como resultado da manipulao de clulas humanas e de outros primatas, h um risco significativamente maior em adquirir uma infeco pelo HIV ou HBV atravs da exposio ao sangue humano e outros lquidos 3,4,5 corporais . Por esta razo, a OSHA desenvolveu um padro para 6 patgenos do sangue. Os procedimentos foram publicados para 7,8 reduzir a contaminao de culturas celulares com microorganismos 9 ou com outras clulas.
Riscos Potenciais em Laboratrios: Os riscos potenciais laboratoriais associados s clulas e tecidos humanos incluem os patgenos do sangue HBV e HIV, assim como agentes tais como Mycobacterium tuberculosis que podem estar presentes nos tecidos pulmonares humanos. Outras clulas e tecidos de primatas tambm 10 apresentam riscos aos trabalhadores de laboratrios. Riscos potenciais aos trabalhadores de laboratrios so apresentados por clulas transformadas por agentes virais, como as SV-40, EBV ou a HBV, assim como as clulas que carregam material gentico viral. As clulas humanas tumorignicas tambm podem oferecer 11 potenciais riscos como resultado de uma auto-inoculao. Prticas Recomendadas: Clulas humanas e de outros primatas devero ser manipuladas usando as prticas e a conteno do Nvel de Biossegurana 2. Todo o trabalho dever ser realizado em uma cabine de segurana biolgica e todo o material dever
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ser descontaminado pela autoclave ou desinfetado antes de ser 12,13,14,15 descartado. Todos os funcionrios que trabalham com clulas e tecidos humanos devero ser registrados no Programa de Patgenos do Sangue, e devero trabalhar de acordo com as normas e polticas 16 estabelecidas pelo Plano Institucional de Controle da de Infeco. Os empregados devero fornecer uma amostra do soro, permitir a sua imunizao contra o vrus da hepatite B e serem avaliados por um profissional da rea de sade depois de qualquer exposio incidental. Referncias: 1. Davidson, W.L. and Hummler, K. 1960. B-virus infection in man. Annals of the New York Academy of Science 85 : 9970-979 2. National Research Council, 1989. Safe handling of infectious agents. In: Biosafety in the laboratory, Prudent Practices for the Handling and Disposal of Infectious Material, NRC, National Academy Press, Washington, D.C. Pg 13-33. 3. McGarrity, G.J. and C.L. Hoerner. Biological Safety in the Biotechnology Industry. In: Laboratory Safety: Principles and Practice. ASM Press, Washington, D.C., 1995. 4. Centers for Disease Control. 1988. Update: Universal Precautions for Prevention of Transmission Human Immunodeficiency Virus, Hepatitis B Virus and Other Bloodborne Pathogens in Healthcare Settings. MMWR, 37: 377-382, 387, 388. 5. Centers for Disease control and Prevention, 1989. Guidelines for Prevention of Transmission of Human Immunodeficiency Virus and Hepatitis B Virus to Healthcare and Public Safety Workers. MMWR 38, N S-6. 6. U.S Department of Labor, Occupational safety and Health Administration. 1991. Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens. 29 CFR Part 1910. 1030:231-243. 7. McGarrity, G.J. and Coriell, L.L. 1971. Procedures to reduce contamination of cells cultures. In vitro 6(4): 257-265. 8. McGarrity, G.J. 1976. Spread and control of mycoplasmal infection of cell culture. In vitro 12: 643-648. 9. Nelson Rees, W.A., Daniels, D.W., and Flandermeyer, R.R. 1981. Cross-Contamination of Cells in Culture. Science 212: 446-452. 10. McGarrity, G.J. and C.L. Hoerner. 1995 (3). 11. Weiss, R.A. 1978. Why cell biologists should be aware of ge262
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12. 13.
14. 15.
16.
netically transmitted viruses. National Cancer Institute Monograph 48: 183-189. Barkley, W.E. 1979. Safety considerations in the cell culture laboratory. Methods Enzymol. 58: 6-54. Grizzle, W.E. and Sarah S. Polt. 1988. Guidelines to avoid personnel contamination by infective agents in research laboratories that use human tissues. Journal of Tissue Culture Methods. 11: 191-199. Caputo, J.L 1988. Biosafety procedures in cell culture. Journal of Tissue Culture Methods 11: 233-227. Caputo J.L. Safety procedures. In: R. Ian Freshney and Mary G. Freshney, Eds, Culture of Immortalized Cells, Wiley-Liss, Inc. 1996. Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens (6).
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Normas para o Trabalho com Toxinas de Origem Biolgica

Em reconhecimento ao crescente nmero de laboratrios biomdicos e microbiolgicos que trabalham com toxinas de origem biolgica, apresentamos as seguintes normas para o trabalho com estas toxinas. O material abaixo foi adaptado do Programa de Segurana da Defesa Biolgica, Requisitos de Segurana Tcnica (DA 1 Pamphlet 385-69) e do Apndice A do United States Department of Labor Occupational Safety and Health Association rule Occupational 2 Exposure to Hazardous Chemicals in Laboratories . Os gerentes de laboratrios e os encarregados pela segurana das instalaes devero ser encorajados a utilizar as referncias relacionadas abaixo e a consultar peritos neste assunto antes de usar qualquer toxina, para assegurar que as instalaes, equipamento de conteno, normas e procedimentos, programas de treinamento de pessoal e protocolos de vigilncia mdica especficos para a toxina e o para o laboratrio so adequados.
Geral
As instalaes, equipamento e procedimentos laboratoriais para o trabalho com toxinas de origem biolgica devero refletir o nvel intrnseco de perigo imposto por uma toxina em particular, assim como os riscos potenciais inerentes s operaes realizadas. Se a toxina e os agentes infecciosos forem usados, os dois devero ser levados em considerao quando o equipamento de conteno for selecionado e os procedimentos e normas forem escritos. Caso sejam usados animais, as prticas de segurana animal tambm devero ser consideradas.
Prticas Padres
As prticas padres relacionadas nos NB - 2 e 3 devero ser revisadas e incorporadas aos protocolos para o trabalho com as toxinas.
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Prticas especiais
As prticas especiais relacionadas no NB - 2 e 3 devero ser revisadas e incorporadas aos protocolos apropriados para o trabalho com as toxinas. 1. Cada laboratrio dever desenvolver um plano de higienizao qumica especfico para a (s) toxina(s) usada(s) naquele laboratrio. O plano de higienizao qumica dever: 1) identificar os perigos que sero encontrados no uso normal da toxina, e os perigos que podero ser encontrados no caso de um vazamento ou outro acidente, e 2) especificar as prticas e normas a serem usadas para minimizar os riscos (por exemplo, equipamento de conteno e proteo individual, gerenciamento de vazamentos, gerenciamento de 3 exposies acidentais e vigilncia mdica) . O treinamento especfico para o uso de toxinas dever ser exigido e documentado para todos os funcionrios de laboratrios que trabalham com as toxinas antes que o trabalho com este elemento seja iniciado e a partir da, em intervalos de tempo. Um sistema de controle de inventrio dever ser adotado. As toxinas devero ser guardadas em salas de armazenamento, cabines ou freezers trancadas quando no estiverem sendo usados. O acesso s reas que contm toxinas dever ficar restrito s pessoas que trabalham no local. A preparao de recipientes primrios contendo estoques de solues de toxinas e manipulaes de containers primrios de formas secas de toxinas devero ser conduzidas em uma coifa qumica a vapor, em uma cabine com luvas (glove box), em uma cabine de segurana biolgica ou em um sistema de conteno equivalente aprovado pelo
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2.
3. 4.
5.
6.
Apndice I
responsvel pela segurana. A filtrao do ar liberado atravs de filtros HEPA e/ou atravs de carvo poder ser necessria, dependendo da toxina. 7. O usurio dever verificar o fluxo de ar no interior da coifa ou da cabine de segurana biolgica antes de iniciar o trabalho. Todo trabalho dever ser feito dentro de uma rea efetiva da coifa ou da cabine de segurana biolgica. Quando as toxinas esto sendo usadas, a sala dever conter um aviso indicando Toxinas em Uso Somente Pessoas Autorizadas. Qualquer solicitao especial para a entrada no recinto dever ser colocada na entrada da sala. Somente os funcionrios cuja presena necessria devero ser permitidos enquanto as toxinas estiverem sendo usadas. Todas as operaes de alto risco devero ser conduzidas na presena de duas pessoas experientes. Cada um dever estar familiarizado com os procedimentos aplicveis, mantendo o contato visual um com o outro e pronto a prestar socorro no caso de um acidente. Antes que os recipientes sejam removidos da sala, da coifa, cabines ou da cabine com luvas (glove box) o exterior do recipiente primrio fechado dever ser descontaminado e colocado em um container secundrio limpo. As toxinas devero ser transportadas somente em containers a prova de vazamentos. As roupas e equipamentos de proteo contaminados ou potencialmente contaminados devero ser descontaminados utilizando mtodos conhecidos pela eficcia contra toxinas antes de serem removidos do laboratrio para que possam ser desprezados, limpos ou consertados. Caso a descontaminao no seja possvel/prtica, os materiais (por exemplo, luvas usadas) devero ser descartados como lixo txico. Os materiais contaminados com agentes infecciosos
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8.
9.
10.
11.
12.
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e as toxinas devero tambm ser autoclavados ou convertidos em no infecciosos de outra maneira antes de deixar o laboratrio. 13. O interior da coifa, da cabine com luvas (glove box) ou da cabine dever ser descontaminado periodicamente, por exemplo, no final de uma srie de experimentos relacionados. At que seja descontaminada, a coifa, a cabine com luvas (glove box) ou a cabine dever conter um aviso indicando que toxinas esto sendo usadas e que o acesso ao equipamento e utenslios ficam restritos aos funcionrios autorizados.
Equipamento de Segurana
As normas para o uso de equipamento de segurana relacionados nos Nveis de Biossegurana 2 e 3 (veja Seo III) devero ser revisadas e incorporadas adequadamente nos protocolos para o trabalho com as toxinas. 1. Quando utilizando coifas a vapor com abertura frontal ou cabine de segurana biolgica, roupa de proteo, incluindo as luvas e uma capa descartvel que cubra o corpo e tenha manga comprida (jaleco, avental ou traje semelhante) dever ser usado de maneira que as mos e os braos estejam completamente cobertos. Uma proteo para os olhos dever ser utilizada se um sistema de conteno que possua uma abertura na frente for usado. Outro equipamento poder ser necessrio, dependendo das caractersticas da toxina e do sistema de conte no. Por exemplo, use uma proteo respiratria adicional se a formao de aerossis ocorrer e se no for possvel o uso de um equipamento de conteno ou de outros controles de engenharia de segurana.
2.
3.
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Apndice I
4.
Quando manipular formas secas de toxinas que sejam eletrostticas: a. No use luvas (como as de ltex) que ajudem a formar eletricidade esttica. b. Use uma glove box ou uma cabine com luvas ou em uma cabine de segurana biolgica de Classe III.
5.
Quando manipular toxinas que sejam perigosas para a membrana percutnea (irritantes, provocam necrose no tecido ou que sejam extremamente txicas para a exposio dermatolgica), selecione luvas que sejam conhecidas por serem impermeveis toxina. Considere a toxina e o diluente quando for selecionar luvas e outras roupas de proteo. Se agentes infecciosos e as toxinas forem usadas juntamente com um sistema experimental, considere as duas quando for selecionar os equipamentos e roupas de proteo.
6.
7.
Instalaes do Laboratrio
As recomendaes de instalao do laboratrio relacionadas para os Nveis de Biossegurana 2 e 3 (veja a Seo III) e os padres da OSHA* devero ser revisados e incorporados de forma apropriada nos protocolos para o trabalho com toxinas. 1. Linhas de Vcuo. Ao usar as linhas de vcuo juntamente com sistemas de conteno de toxinas, estas devero ser protegidas com um filtro HEPA para prevenir a entrada de toxinas nas linhas. Os ralos das pias devero ser tambm protegidos quando os aspiradores de gua forem usados.
Referncias 1. Department of the Army, DOD, 32 CFR Parts 626, 628 Biological Defense Safety Program.
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Apndice I
2.
United States Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration.. 29 CFR Part 1910 Occupational Safety and Health Standards. United States Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration. 29 CFR Part 1910. (2). United States Department Occupational Safety and Health Administration. 29 CFR Part 1910. (2)
3.
4.
Referncias Adicionais American Industrial Hygiene Association - Biosafety Reference Manual. Heinsohn P.A.; Jacobs R.R., Concoby B.A. (eds) American Industrial Hyigiene Association, Fairfax. 1995 National Research Council. Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Disposal of Chemicals. National Academy Press, Washington D. C. 1995 CRC Handbook of Toxicology. Derelanko M.J., Hollinger M.A.; (eds) CRC Press, Boca Raton 1995. Ellenhorns Medical Toxicology: Diagnosis and Treatment of Human Poisoning. Ellenhorn M.J., Schonwald S., Ordog G., Wasserrberger J., Williams and Wilkins, Baltimore 1997
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NDICE REMISSIVO
ndice Remissivo
Agentes bacterianos ..................................................................100 Agentes parasitrios ..................................................................142 Trematdeo ............................................................. 145, 146 Agentes virais ................................................... 171, 180, 181, 261 Agulhas e seringas ......................................................... 25, 34, 45 Antraz ................................................................................ 100, 236 Arbovrus e Arenavrus .................................................... 208, 212 Ascaris spp. ...................................................................... 147, 148 Avaliao dos riscos ........... 12, 15, 82, 87, 88, 90, 94, 96,99, 206 Bacillus anthracis .......................................................................100 Bacillus subtilis ............................................................................. 12 Besnoitia besnoiti ......................................................................245 Bioterrorismo ................................................................................ iv BMBL ..........................................................................................242 Bordetella pertussis .......................................................... 101, 128 Botulismo ........................................................................... 107,108 Bovino ............................................................................... 110, 155 Abortus .................................................................... 103, 246 Canis ....................................................................... 103, 128 Melitensis ................................................ 103, 128, 129, 245 Suis ..................................................................................103 Brucelose .......................................................................... 1, 2, 103 CSB ............................................ 9, 10, 13, 14, 179, 224, 226, 228 Cabines de Segurana Biolgica (CSB) .............................. 9, 224 Classe I ................... 9, 10, 17, 73, 100, 120, 135, 188, 224, 225, 226, 228, 229, 230 Classe II .......... 10, 17, 27, 37, 39, 42, 48, 57, 77, 224, 225, 227, 229, 233, 233, 234 Classe III . 10, 15, 37, 40, 41, 46, 48, 50, 51, 53, 73, 78, 79, 83, 84, 100, 174, 179, 224, 227, 228, 228, 268 Calomys spp ..............................................................................220 Campylobacter .......................................................... 105, 129, 130 Caudriose ..................................................................................246 Cercopithecus spp. .................................................................... 220 Chimpanzs ............................ 152, 153, 155, 174, 176, 183, 220,
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Citomegalovrus ................................................................ 180, 181 Clostridium ........................................................................ 107, 108 Coccidioides immitis ................................................................... 133 Clera ........................................................................... 1, 126, 136 Condios .................................................................... 133, 134, 138 Conteno ....... 5, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 21, 22, 27, 29, 30, 33, 35, 37, 41, 46, 48, 49, 50, 52, 53, 54, 56, 65, 69, 71, 73, 75, 79, 82, 84, 94, 97, 98, 99, 100, 102, 103, 104, 105, 106, 108, 109, 110, 111, 113, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 125, 126, 127, 143, 144, 148, 166, 172, 173, 176, 181, 182 183, 184, 186, 189, 192, 197, 207, 213, 215, 216, 221, 224, 225, 227, 228, 238, 240, 245, 250, 253, 261, 264, 265, 268, viii Conteno primria ............ 8, 11, 12, 41, 45, 69, 75, 84, 97, 102, 108, 121, 122, 127, 143, 144, 148, 176, 181, 189, 197, 224 Conteno secundria .................................................................. 8 Coriomeningite linfoctica ..........................................................183 Coxiella burnetti .................................................. 14, 165, 169, 170 Cryptococcus neoformans ............................................... 125, 140 Descontaminao ... 11, 14, 20, 22, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 39, 41, 42, 45, 46, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 70, 73, 75, 78, 79, 87, 100, 108, 154, 158, 193, 215, 228, 248, 266 Dengue ..................................................................... 205, 207, 215 Difteria ........................................................................................109 Doena da Floresta de Kyasanur .................................... 220, 221 Ebola ................................................................... 88, 220, 221, 222 Encefalite ..................... 2, 14, 173, 177, 212, 213, 215, 218, 219, 220, 221, 246 Encefalomielite eqina ............................. 206, 207, 211, 212, 214 Envio .......................104, 109, 112, 127, 133, 134, 166, 168, 172, 174, 188, 208, 211, 221, 238, 239 Equipamento de segurana ..... 4, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 19, 21, 27, 30, 36, 48, 68, 73, 74, 84, 175, 205, 207, 212, 214, 219, 267 Escherichia coli ................................................................. 110, 130 Fasciola spp ..............................................................................145 Febre amarela ................................. 211, 212, 214, 215, 236, 218 Febre maculosa das Montanhas Rochosas .............................167 Febre hemorrgica de Omsk ....................................................221 Febre de Pontiac ....................................................................... 115 Febre Q ........................................................................ 3, 165, 166
271
Febre tifide ..............................................................................123 Filovrus ............................................................ 215, 219, 220, 221 Filtro HEPA ................................ 39, 52, 56, 57, 78, 224, 225, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 268 Francisella tularensis ........................................................ 111, 130 Giardia spp ................................................................................ 143 Hantavrus ......................................................................... 171, 216 Heliobacter pylori .............................................................. 112, 130 Hepatite ................ 2, 3, 12, 13, 16, 24, 33, 66, 71, 88, 89, 96, 99, 153, 166, 174, 175, 176, 177, 236, 262 Herpesvrus ................................................................ 93, 180, 181 Histoplasma ...................................................................... 135, 246 Capsulatum ............................................................. 135, 136 Farciminosum ................................................................... 245 Imunoprofilaxia .................................................................... 96, 236 Influenza ..................................................... 97, 181, 182, 201, 245 Instalaes Animais ..................................................................... 94 Kuru .................................................................. 151, 153, 162, 195 Laboratrios Clnicos ............ 2, 13, 14, 16, 30, 61, 103, 249, 250 Laboratrio escafandro ..................... 48, 53, 54, 57, 79, 174, 179 Legionella pneumophila ................................................... 115, 131 Leishmania spp................................................................. 142, 143 Lepra .................................................................................. 116, 118 Listeria monocytogenes ................................................... 114, 130 Limpeza ............ 21, 22, 29, 35, 36, 38, 49, 54, 55, 64, 69, 76, 84, 91, 193, 252, 256 Luvas ............... 10, 14, 19, 21, 23, 28, 31, 36, 37, 45, 63, 67, 78, 73, 75, 83, 100, 104, 107, 114, 115, 121, 125, 127, 137, 138, 143, 147, 154, 155, 157, 158, 160, 175, 176, 179, 189, 190, 191, 196, 198, 207, 225, 227, 228, 229, 235, 265, 266, 267, 268 Machupo ........................................................................... 220, 221 Malaria ....................................................................................... 148 Marburg ................................................... 3, 15, 88, 220, 222, 223 Metacercria ..................................................................... 145, 146 Meyer e Eddie ................................................................................ 1 Moldes ........................................................................................160 Mycobacterium ............................ 14, 116, 117, 118, 119, 245, 261 asiaticum .......................................................................... 118 bovis ................................................ 117, 118, 119, 120, 246
272
fortuitum ........................................................................... 118 kansasii ............................................................................ 118 leprae ............................................................... 116, 117, 118 malmoense ....................................................................... 118 marinum ........................................................................... 118 scrofulaceum .................................................................... 118 simiae .......................................... 7, 118, 177, 180, 181, 200 szulgai .............................................................................. 118 tuberculosis ............................... 5. 6, 7, 14, 17, 96, 117, 118 119, 120, 261 ulcerans ........................................................................... 118 xenopi ............................................................................... 118 Mycoplasma agalactiae ............................................................. 246 Mycoplasma mycoides ............................................................... 245 Naegleria ............................................................................. 12, 144 fowleri ............................................................................... 144 gruberi ................................................................................ 12 Neisseria ........................................................................... 120, 121 Meningitis .................................................................. 121, 132, 201 Nveis de Biossegurana (NB) ..................................................... 11 Nvel de Biossegurana 1 ............................... 11, 12, 19, 22 Nvel de Biossegurana 2 ................... 13, 16, 17, 22, 30, 98 99, 100, 102, 103, 104, 105, 106, 108, 109, 110, 111, 113, 115, 116, 117, 118, 119, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 133, 134, 135, 136, 137,138, 142, 144, 145, 147, 148, 152, 153, 154, 155, 165, 167, 172, 175, 176, 178, 181, 182, 183, 185, 187, 189, 196, 198, 205, 206, 207, 208, 211, 213, 224, 261 Nvel de Biossegurana 3 ........... 14, 30, 31, 34, 40, 98, 99, 100, 102, 103, 104, 107, 108, 111, 116, 120, 121, 122, 123, 127, 134, 136, 152, 155, 166, 167, 176, 179, 184, 186, 189, 192, 197, 205, 207, 212, 214, 215, 217, 218, 219, 220, 227 Nvel de Biossegurana 4 ............. 4, 14, 15, 41, 42, 43, 47, 48, 52, 57, 179, 218, 219, 221 Nvel de biossegurana animal 1 ...................................... 61 Nvel de biossegurana animal 2 .... 65, 100, 102, 105, 106, 108, 109, 110, 113, 115, 117, 118, 120, 123, 124, 126, 133,
273
134, 135, 136, 137, 138, 167, 168, 175, 176, 184, 185 Nvel de biossegurana animal 3 ............ 70, 103, 111, 112, 166, 184 Nvel de biossegurana animal 4 ...................................... 79 Normas .............................. 4, 5, 20, 23, 24, 25, 27, 31, 32, 34, 41, 62, 63, 65, 67, 68, 71, 72, 73, 74, 79, 81, 82, 87, 88, 91, 157, 179, 193, 194, 236, 238, 245, 248, 249, 250, 251, 255, 262, 264, 265, 267 Nova droga de pesquisa .................................................. 108, 236 Objetos cortantes ................ 22, 26, 34, 35, 46, 63, 161, 192, 228 Patgenos ......................... 5, 12, 13, 16, 17, 34, 44, 94, 152, 154, 177, 189, 192, 239, 245, 247, 248, 250, 256, 261, 262, ii Patgenos Animais ............................................. 17, 245, 247, 250 Patgenos do sangue ............................. 177, 239, 248, 261, 262 Prticas laboratoriais .............................................................. 9, 19 Pipetagem ............................................................... 20, 23, 31, 103 Poliovrus .......................................................... 184, 185, 186, 201 Poxvrus .................................................................... 186, 187, 188 Praga .........................................................................................245 Precaues universais ............................................. 4, 88, 93, 191 Presbytis spp. ............................................................................220 Primatas .............. 64, 68, 117, 119, 124, 147, 167, 174, 175, 176, 179, 183, 184, 190, 191, 192, 194, 195, 220, 221, 261, iii Prions .............................. 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 161, 163, 164, 195, ix Protozorios parasitas ...................................................... 142, 143 Pseudomonas ................................................................... 104, 246 Pseudomallei .................................................................... 104 Projeto da instalao .............................................................. 8, 40 Psittaci ............................................................................... 105, 106 Quantidades de produo ................... 97, 98, 116, 121, 122, 123 Reaes Alrgicas ..................................................................... 147 Retrovrus .................................................. 93, 189, 191, 193, 194 Rickttsia ...................................................................................168 akari ................................................................................. 166 australis ............................................................................166 conorii ............................................................................... 166
274
coxiella burnetii ......................................... 14, 165, 169, 170 grupo da febre maculosa ................................................. 166 mooseri ............................................................................166 prowazekii ......................................................................... 166 rickettsii ........................................................... 167, 169, 170 Riscos laboratoriais ...................................... 96, 97, 113, 157, 214 Salmonella ................................................................ 122, 123, 132 SALS ......................................... 61, 205, 206, 212, 213, 215, 216, 217, 218, 219, 220 Schistosoma spp. ......................................................................145 Shiguella spp. ............................................................................124 Sfilis .................................................................................. 124, 125 Smio ..........................................................................................194 Sujeira .......................................................................................... 21 Taenia solium .............................................................................146 Ttano ................................................................................... 1, 109 Tatus .......................................................................................... 117 Tecnologias do DNA recombinante ............................................. 92 Transporte e Transferncia de agentes biolgicos ..................238 Toxinas de origem biolgica ......................................................264 Toxides ....................................................................................... 96 Toxoplasma spp. ................................................................. 13, 143 Treponema pallidum ......................................................... 124, 132 Trypanosoma ............................................................ 132, 148, 246 Cruzi ................................................................ 142, 143, 148 Evansi ............................................................................... 246 Vivax ................................................................................. 246 Tuberculose ............................... 1, 2, 3, 24, 33, 99, 117, 119, 248 Tularemia .......................................................... 1, 2, 111, 130, 236 Vacinas ...................... 8, 12, 88, 96, 97, 102, 103, 104, 105, 107, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 168, 175, 177, 180, 184 196, 198, 205, 207, 212, 214, 236, 237 Vacnia ........................................................................ 93, 186, 187 Varola ........................................................... 3, 167, 187, 245, 246 Vigilncia ............................. 27, 36, 44, 47, 62, 66, 68, 71, 73, 74, 79, 81, 83, 91, 100, 120, 168, 169, 189, 194, 264, 265
275
Vrus Hendra ..................................................................... 173, 174 Vrus da doena de Borna ........................................................ 245 Vrus da estomatite vesicular ....................................................197 Vrus da febre efemeral ............................................................. 246 Vrus da febre do Vale Rift ........................................................ 214 Vrus da Imunodeficincia humana ................................ 4, 98, 189 Vrus da raiva ................................................................... 188, 189 Vrus Junin .......................................................... 90, 214, 215, 220 Yersinia pestis ............................................................................126
276

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FUNASA

Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia

Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia

Braslia, outubro de 2001

JARBAS BARBOSA DA SILVA JUNIOR Diretor do CENEPI / FUNASA

Mark L. Eberhard, Ph.D.

Thomas Folks, Ph. D.

Bradford Kay, Dr.P.H.

Richard C. Knudsen, Ph.D.

C.J. Peters, M.D.

Chefe da Diviso de Patgenos Especiais Centro Nacional de Doenas Infecciosas

Margaret A.Tipple, M.D.

Chefe do Programa de Atividades Externas Secretaria da Sade e Segurana

Instituto Nacional de Sade John Bennett, M.D.

Deborah E. Wilson, Dr.P.H.

Peter J. Gerone, Sc.D

Peter Jahrling, Ph.D.

Thomas Kost, Ph.D.

Editor tcnico Marie J. Murray Editor-Escritor Atlanta, GA

SEO I Introduo .............................................................................. SEO II Princpios de Biossegurana ..................................................

100 100 133 142 150 165 171 205

224 229 230 231 232 233 234 235

15. 16. 17. 18.

Prticas Padres em Microbiologia

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB1

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB1

Prticas Especiais Nenhuma Equipamento de Segurana (Barreiras Primrias)

Instalaes Laboratoriais (Barreiras Secundrias)

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB2

Prticas Padres de Microbiologia

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB2

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB2

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB2

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB2

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB2

C. Equipamento de Segurana (Barreira Primria)

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB2

D. Instalaes Laboratoriais (Barreiras Secundrias)

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB2

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB3

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB3

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB3

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB3

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB3

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB3

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB3

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB3

Instalaes do Laboratrio (Barreiras Secundrias)

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB3

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB3

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB3

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB4

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB4

Prticas Padres de Microbiologia

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB4

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB4

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB4

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB4

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB4

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB4

Equipamento de Segurana (Barreiras Primrias)

Laboratrio Cabine (veja Apndice A)

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB4

Nveis de Biossegurana Laboratorial NB4