Mtodos de estudo

da Clula
Prof. Fredson Serejo

Microscopia
O microscpio um
instrumento que permite
observar objetos no
visveis a olho nu.

Isto se consegue atravs

de um sistema ptico
composto por lentes
de cristal que aumentam
a imagem do objeto.

Microscopia de Luz
Evoluo do microscpio de luz
Galileu Galilei
inventou o Telescpio no
sculo XVI duas lentes
num tubo

Microscopia de Luz
Evoluo do microscpio de luz

Leeuwenhoek,
final de 1600

Microscopia de Luz
Evoluo do microscpio de luz

Robert Hooke

Microscopia de Luz
Evoluo do microscpio de luz

sculo XVII

objetivas variando de 4X a 100X

Microscopia de Luz

Microscpio monocular do incio modelo Zeiss, incio sculo XX

Louis Pasteur = microrganismos

Microscopia de Luz

Microscopia de Luz

Microscpio ptico, Microscpio composto ou

Microscpio de Campo claro

um instrumento usado pelo estudante de

citologia, histologia e outras disciplinas
que estudam microrganismos ou objetos
com medidas micromtricas e serve

para aumentar a imagem.

Basicamente, constitudo por uma

parte mecnica e uma parte

ptica.

Parte Mecnica
Tubo
Coluna ou brao
Revlver

Platina

Parafuso
Macromtrico
Parafuso
Micromtrico
Base ou p

 Parte Mecnica

Base ou p suporte
Coluna ou brao apoio paras as estruturas
Tubo pea de ligao entre a ocular e o revlver
Revlver pea giratria que contm as lentes
objetivas
Platina suporta a preparao
Parafuso Macromtrico, de passo largo, para
movimento de grande amplitude
Parafuso Micromtrico, de pequeno passo,
destinado a focar o material

Parte ptica
Lentes
oculares

Lentes
objetivas

Condensador

Parte ptica

Condensador, concentra os raios

luminosos objeto

possui um diafragma de dimetro

modificvel, proporciona uma maior ou menor
intensidade luminosa

Lentes objetivas, prximas do objeto,

projetam a imagem ampliada do objeto em
direo a ocular

Lente ocular, funciona como uma lupa,

amplia a imagem fornecida pela objetiva

Parte ptica

CONDENSADOR geralmente
negligenciado - no interfere no
aumento da imagem, mas ele influencia
em sua nitidez e riqueza de detalhes
Age no LIMITE DA RESOLUO do
sistema ptico, embora esta propriedade
dependa principalmente das lentes
objetivas

LIMITE DE RESOLUO
LR de um microscpio a
capacidade de:
Separar detalhes

Produzir imagens separadas de

partculas muito prximas
a menor distncia que deve existir
entre dois pontos para que eles
apaream separado

 As objetivas trazem outras informaes

160 ou 170, indica em milmetro o comprimento do
tubo do microscpio, onde devem ser usadas as
objetivas para que dem melhores resultados.
0,17, distncia de trabalho, que significa o tamanho
da lamnula, para a qual as aberraes so corrigidas.

Cdigos de cores das lentes objetivas

Aumento

Cores

4X ou 5X
10X
40 ou 50X

Vermelho
Amarelo
Azul claro

100X
Imerso leo

Branco

Imagem real ampliada e invertida

 Outros tipos de microscpios

Microscpios pticos MO
Microscpio de Contraste de Fase
Microscpio de Campo Escuro
Microscpio de Fluorescncia
Microscpio de Polarizao

Microscpio Eletrnico ME

Microscpio de contraste de fase clulas vivas

Usa as propriedades da

refrao da luz
Refrao a passagem da
luz de um meio para outro.

Microscpio de contraste
de fase transforma
diferentes fases
luminosas em diferentes
intensidade luminosa

Microscopia de luz convencional

Microscopia de contraste de fase

Microscpio de campo escuro

Objetiva

LUZ

Condensador
substitudo por um
condensador de fundo
escuro

A preparao iluminada
por raios oblquos

CONDENSADOR

A clula fica com

aparncia brilhante e o
fundo escuro

Microscopia de campo escuro - clulas de sangue.

Microscpio de Polarizao
2 raios de luz = Raios polarizados

Quando um raio de luz

atravessa certas substncias
do nosso corpo acontece
uma dupla refrao
Substncias como dentes,
ossos, fibras de colgeno e
outras possuem um estado
cristalino, arranjo molecular
interno
Prisma utiliza as propriedades
de um nico raio eliminando o
outro

Microscpio de luz polarizada:

Fibras de colgeno exibem
birrefringncia (brilhantes ou
amarelas).

Microscpio de Fluorescncia
Utiliza luz fluorescente
permite detectar protenas
ou estruturas marcadas
com compostos
fluorescentes
Similar ao MO, exceto pela
luz empregada Luz
ultra-violeta e pelos 2
conjuntos de filtros que
desviam os raios do olho do
observador.

Cultivo de astrcitos. Imunofluorescncia verde contra GFAP

(protena de filamentos intermedirios) e azul (unio com DNA)
Alberts et al. Biologa Molecular de la clula. (1996) p. 856.

Microscopia Eletrnica

Microscopia Eletrnica
Inventado em 1932,
na Alemanha, Ernest
Ruska e Max Knoll
Utiliza eltrons,
comprimento de onda
muito pequeno, limite
de resoluo 1.000X
menor que
microscpio de luz

Microscopia eletrnica, msculo estriado cardaco.

Medidas
Unidade de medida

Smbolo

Valor

Micrmetro

m
nm

0,001 mm

Nanmetro

0,000001 mm (10-6
mm) ou 10-3 m

M. E. de Varredura

M. E. de Transmisso

No laboratrio...

Epitlio pavimentoso estratificado queratinizado

Epiderme, cobre o corpo.

Glndulas sudorparas

Glndulas sebceas

Glndulas
sebceas

Glndulas
sudorpara