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Captulo
1. Introduo
Os mtodos usados para determinar as exigncias nutricionais dos animais
monogstricos tm sido: o mtodo dose-resposta, o qual determina as exigncias
com base na resposta do desempenho dos animais alimentados com dietas
contendo nveis crescentes do nutriente estudado; e o fatorial, baseado no
princpio de que o animal necessita de nutrientes para a manuteno dos processos
vitais e atividades, crescimento e/ou produo.
O mtodo tradicionalmente utilizado para definir as exigncias dos monogstricos
tem sido o dose-resposta, por ser prtico e mais fcil de ser executado. Entretanto,
fatores como ambiente, clima e gentica afetam a determinao das exigncias,
dificultando o estabelecimento dos nveis nutricionais, sendo necessrio repetir as
pesquisas em vrias condies para melhor definio das exigncias.
As Tabelas de Exigncias Nutricionais de Aves e Sunos tm estabelecido as
recomendaes nutricionais na maioria dos estudos realizados com base no
mtodo dose-resposta (NRC, 1994 e Tabelas Brasileiras para Aves e Sunos, 2005).
Por outro lado, as recomendaes nutricionais para sunos pelo NRC (1998) so
baseadas em modelos para o crescimento e reproduo. Esses modelos foram
elaborados pelo mtodo fatorial, nos quais as exigncias so estimadas pela
soma dos nutrientes utilizados para cada funo (mantena, acrscimo de
protena e produo).
Neste captulo, sero apresentados e discutidos os principais aspectos a serem
considerados ao aplicar o mtodo dose-resposta para determinar as exigncias
dos animais monogstricos.
157
Larbier e Leclercq (1992) definem a
exigncia mnima de um nutriente como
sendo a quantidade do mesmo partir da
qual no haver resposta no desempenho
animal. Segundo esses autores, a resposta
no desempenho uma funo linear do
consumo do nutriente (Figura 1). A
inclinao da reta representa a exigncia
para o crescimento, isto , a quantidade
de nutriente necessria por unidade de
ganho; e a interseco da reta no eixo x
representa a exigncia de mantena, isto
, a quantidade do nutriente somente para
manuteno quando o ganho de peso do
animal for nulo.
158
3. Mtodo dose-resposta
O mtodo dose-resposta baseado na resposta do animal ao aumento na
ingesto de um determinado nutriente. Segundo Euclydes e Rostagno (2001), a
adio de um nutriente limitante na rao, mantendo nveis adequados dos
demais nutrientes, promove crescimento do animal at que sua exigncia seja
atendida. A partir da, existir uma faixa de estabilizao no crescimento e, em
seguida, dependendo do nutriente, poder ocorrer uma perda de peso do animal
(Figura 2). O fenmeno resultante do acrscimo de um nutriente na rao,
partindo de nveis baixos at nveis elevados, pode ser descrito em quatro fases
distintas: a) inicial nessa fase, o acrscimo do nutriente garante apenas a
sobrevivncia do animal (mantena), pois os nveis so insuficientes para permitir
o crescimento; b) resposta os animais comeam a apresentar crescimento,
melhor eficincia alimentar, at um nvel no qual estabiliza a produo; c) estvel
- nessa fase, os nveis do nutriente no apresentam resposta produo ou
toxidez proveniente do excesso. Embora para o animal possa ser considerada
uma fase tima, do ponto de vista econmico esses nveis no so recomendveis;
d) txico o nvel elevado do nutriente pode causar reduo na produo em
conseqncia de efeitos, tais como interao, antagonismos, etc.
A maioria dos trabalhos realizados para definir os nveis nutricionais das dietas
para os monogstricos utiliza o mtodo dose-resposta; entretanto, os
pesquisadores tm usado diferentes critrios para interpretar os resultados,
levando a variaes nas concluses dos nveis recomendados.
A seguir sero apresentadas as opes para analisar os dados obtidos em
ensaios dose-resposta, bem como sero discutidas as vantagens e limitaes de
cada procedimento. Para ilustrar, sero mostrados exemplos de experimentos com
aves alimentadas com dietas contendo diferentes nveis de aminocidos; entretanto,
os modelos matemticos podem ser usados para avaliar nveis de minerais, vitaminas
ou drogas promotoras do crescimento com qualquer espcie animal.
3.1.1. Comparao das mdias dos tratamentos
159
No estabelecimento do delineamento experimental, devem ser levados em
conta os aspectos mencionados no Captulo 1 (Planejamento dos experimentos),
como as diferenas entre os animais, as condies das instalaes experimentais
e o nmero de animais disponveis. importante controlar todas as fontes de
variao, definir um nmero adequado de repeties e animais por repetio
estabelecendo um delineamento adequado para isolar as fontes de variao e
detectar os possveis efeitos dos tratamentos.
160
de varincia seguida de um teste de comparao de mdias. Conforme
mencionado no Captulo 1, h vrios testes que podem ser utilizados, como
Teste t, Scheffe, Duncan, Student-Newman-Keuls e Tukey. Contudo, h uma srie
de restries ao uso destes testes quando aplicados em dados provenientes de
ensaios dose-resposta.
Morris (1989), em sua reviso sobre os procedimentos usados para interpretar
os resultados em ensaios de alimentao, considera inadequado o teste de
comparao mltipla por dois motivos: primeiro porque no deve ser usado
quando os tratamentos so de natureza quantitativa; e segundo, porque o uso
convencional de 5% de probabilidade inapropriado para estimar o melhor ponto.
Por outro lado, necessrio um alto grau de confiana quando no se obtm
uma grande diferena entre as doses avaliadas.
Pack (1996) tambm
menciona que esses testes,
quando aplicados ao nvel
convencional de 5% de
probabilidade, so bastante
conservadores para detectar
pequenas diferenas. Por
exemplo, diferenas de 0,02
a 0,03 pontos na converso
alimentar, importante do
ponto de vista econmico, no
so detectadas pelos testes de
mdia, conforme pode ser
constatado na Figura 3.
Considerando os dados
apresentados na Figura 3,
Euclides e Rostagno (2001)
comentam a dificuldade de eleger o nvel timo de metionina usando o teste
de mdias. Constata-se diferena apenas entre o nvel 0,75% e 0,88%, 0,91%
e 0,95%. Os nveis 0,77%, 0,79%, 0,82% e 0,85% so estatisticamente iguais a
0,75% e 0,95%. Dessa forma, impossvel definir o nvel timo de nutrientes
usando testes de mdias como recurso estatstico.
Segundo esses autores, dois aspectos estatsticos devem ser considerados
quando se aplica o teste de mdias para definir o nvel timo. O primeiro a
significncia do teste F. Considerando-se um exemplo hipottico apresentado na
Tabela 1, existem 7 graus de liberdade (gl) para o efeito de nvel de metionina
(oito nveis), o quadrado mdio (QM) para o efeito de metionina obtido pela
diviso da soma de quadrados pelos 7 gl. A diviso do QM do efeito da metionina
pelo QM residual fornece o F para avaliao da significncia. Se o valor de F no
apresentar significncia, nenhum teste de mdia precisa ser aplicado. Estes 7 gl
podem ter efeitos significativos de regresses lineares, quadrticas que so
ignorados se os gl no so decompostos. No segundo aspecto para aplicao do
teste de mdias, a pressuposio bsica a independncia entre os nveis ou
Mtodos de pesquisa em nutrio de monogstricos
O modelo LRP tem como princpio a Lei de Liebig que se baseia na idia de
que a produo pode ser inibida devido a um elemento limitante. Com um
comportamento ascendente, o crescimento abruptamente se estabiliza,
representado por uma paralela ao eixo das abscissas. Dessa forma, a Lei de
Liebig uma funo formada por dois conjuntos de dados: um compe a parte
ascendente da curva, e o outro rene os dados que mantm o crescimento estvel
(Braga, 1983).
De acordo com o autor, os critrios para o ajustamento do modelo LRP aos
dados so: a inclinao da reta pode ser determinada por dois ou mais pontos; o
plat representado pela mdia aritmtica dos pontos que o compe; o nvel
timo determinado pelo ponto de interseco entre a reta e o plat; o melhor
modelo aquele cuja soma dos quadrados dos desvios a menor.
Com base nesses critrios, o autor recomenda um procedimento para o
ajustamento do LRP aos dados obtidos em ensaios dose-resposta (ver Braga,
1983). No entanto, uma maneira mais fcil e rpida para ajustar os dados ao
modelo por meio de Softwares SAS (SAS Institute, 1996) pelo procedimento
PROC NLIN ou SAEG (Universidade Federal de Viosa, 1997) segundo o
procedimento Regresses (Linear Response Plateau).
A Figura 4 ilustra esse modelo baseado no aumento linear do ganho de peso
das aves com o acrscimo do nvel de metionina+cistina da rao at alcanar um
ponto em que no h resposta adicional, isto , atinge um plat. O nvel otimo
definido pelo ponto de quebra, onde a reta encontra-se com o plat (0,645%).
Morris (1989) critica este modelo por levar a falsas dedues sobre o nvel
timo. Conforme o autor, a resposta individual do animal corresponde ao modelo
broken line e tem o mesmo princpio para calcular a exigncia de um nutriente
pelo mtodo fatorial, Y = aW + bP; em que Y a exigncia; aW a exigncia
Mtodos de pesquisa em nutrio de monogstricos
161
tratamentos. Nos ensaios dose-resposta no possvel considerar essa
independncia, uma vez que a resposta esperada a observada no nvel anterior,
acrescida ou reduzida de um valor. Portanto, os testes de mdia no se aplicam
para esse tipo de ensaio.
162
Pack (1996) menciona que, embora o modelo broken line tenha um bom
ajuste estatstico, no
considera os aspectos
fisiolgicos do animal e a
lei de reduo dos retornos
e, portanto, em muitos
casos, subestima a dose
tima. Apesar do modelo
broken line estimar o nvel
timo, no considera os
aumentos que poderiam
justificar
melhorias
adicionais no desempenho. O autor recomenda
um modelo no linear
(exponencial) que pode
descrever melhor as Figura 5 -Relao entre consumo do nutriente e
pequenas melhorias no resposta na produo para uma populao, em que as
desempenho animal com respostas individuais dos animais ajustam-se ao modelo
os incrementos das doses. broken line ( Adaptado de Morris, 1989).
Mtodos de pesquisa em nutrio de monogstricos
A Figura 6 mostra a
relao do ganho de peso das
aves em funo dos nveis de
metionina + cistina da rao,
em que a resposta mxima
obtida ao nvel de 0,765% de
metionina + cistina.
163
Em um estudo para determinar exigncia de lisina para sunos, Coelho et
al. (1987) mostraram que, quando os nveis crescentes desse aminocido
promoveram crescimento linear at um plat, o modelo descontnuo LRP foi
vantajoso para estimar as exigncias. Entretanto, quando a configurao dos
dados foi do tipo contnuo cncavo ou convexo, a exigncia de lisina foi
subestimada pelo modelo. As respostas que apresentam essa configurao,
em virtude do complexo sistema fisiolgico do animal, devem usar outros
modelos para estimar as exigncias de um nutriente.
164
Segundo Morris (1989),
um dos problemas do modelo
quadrtico que este prediz a
reduo na resposta alm da
dose tima, proporcionando um
falso ajuste aos dados. Isso
ocorre quando determinados
nutrientes reduzem a produo
quando fornecidos em excesso,
mas h uma faixa em que o
nutriente pode ser fornecido em
excesso sem causar prejuzo no
desempenho. Alm disso, a Figura 7 - Modelos quadrticos ajustados aos dados
forma da curva quadrtica pode obtidos por Morris e Blackburn (1982). Uma curva
variar com as doses escolhidas. foi ajustada com os 10 nveis e a outra curva com
Ao escolher uma faixa restrita apenas 6 nveis de met+cist (Adaptado de Morris,
de dietas, o pesquisador pode 1989).
ter uma parbola evitando um
plat mais estendido. Isso pode ser um argumento para justificar o modelo, mas
perigoso, porque pressupe que o pesquisador tenha uma idia de onde o nvel
otimo ir ocorrer. Assim, a forma da curva quadrtica varia de acordo com a
faixa dos nveis selecionados. Como pode ser observado na Figura 7, a curva
estimada com apenas 6 pontos proporciona a dose tima de 776 mg met+cist
para mxima produo de ovos, inferior dose tima (900 mg met+cist) estimada
a partir da curva obtida com todos os pontos.
3.1.4. Modelos no lineares
165
A relao do ganho de
peso das aves em funo do
nvel de metionina + cistina,
conforme
o
modelo
exponencial, apresentada
na Figura 8, em que o nvel
timo definido por 95% da
resposta assinttica.
166
Sakomura, N.K. & Rostagno, H.S.
Assumindo os preos
de R$0,55/kg de rao,
R$4,50/kg de DL-metionina e R$1,20 o preo
obtido por kg de frango
produzido, o nvel de
metionina + cistina na
rao que proporciona o
mnimo custo por kg de GP
(R$1,05) e a maior margem
bruta (R$0,15) de 0,77%,
conforme demonstrado na
Figura 10.
Figura 10 - Representao grfica do nvel timo de
metionina + cistina na dieta do ponto de vista
econmico, com base no custo do alimento/kg de
ganho de peso e na margem bruta para as aves Isa
Label de 1 a 28 dias (Anlises realizadas pelo psgraduando, UNESP-Jaboticabal. Jefferson Costa de
Siqueira).
Outros modelos no
lineares tm sido usados
para explicar a resposta
animal, como as funes
polinmio inverso ou
logstica.
167
A vantagem desse modelo que a curva leva em considerao a
variabilidade entre os animais, alm disso no muda entre os experimentos e
independe dos tratamentos experimentais (Morris, 1989). Assim, ao ajustar
o Modelo de Reading com apenas alguns nveis avaliados, ele proporciona a
mesma dose tima quando aplicado com todos os nveis avaliados. O contrrio
ocorre quando se ajustam os dados ao modelo quadrtico. No Modelo de
Reading, os coeficientes das equaes representam as eficincias de utilizao
dos nutrientes para mantena e produo. Conseqentemente, esse modelo
apresenta trs vantagens: a) o modelo gerado com os animais experimentais
pode ser extrapolado para estimar a curva resposta de outro grupo de animais
com diferentes potenciais de produo; b) possvel aplicar o modelo em
uma srie de dados de diversos experimentos e estimar melhor os coeficientes;
c) pode-se obter as eficincias de utilizao dos nutrientes com dados de um
ensaio de alimentao.
168
169
de 0,727%. Os modelos quadrtico com plat e o exponencial estimaram exigncias
semelhantes (0,665 e 0,666%, respectivamente). Tendo em vista que todos os
modelos proporcionaram ajustes adequados aos dados, recomenda-se nesse caso,
os dois ltimos modelos para definir o nvel timo de metionina + cistina.
170
3.2. Aplicao dos modelos para determinar exigncias nutricionais
Probab.
0,00151
0,00001
NS
converso alimentar
Quadrados
F
mdios
calculado
0,0524084
11,253
0,0358562
7,699
0,0019498
0,419
0,0046572
Probab.
0,00237
0,01353
NS
171
Lisi =
172
Tabela 6 -Desdobramento dos GL de tratamento para ganho de peso.
Graus de
Soma de
Quadrados
F
Fontes de R2
Variao
Liberdade
Quadrados
mdios
calculado
Lisina
3
9.208,020
3.069,340
8,265
Linear
0,72
1
6.602,094
6.602,094
17,777
Quadrat. 0,99
1
2.549,690
2.549,690
6,865
Cbico
1,00
1
56,235
56,235
0,151
Sexo
1
23.707,850
23.207,850
62,490
Sexo x lisina
3
795,267
265,089
0,714
Resduo
16
5.942,121
371,383
Total
23
39.653,258
Probab.
0,00151
0,00066
0,01856
NS
0,00001
NS
173
Lis influencia de fato, a varivel GP. Outra alternativa testar os coeficientes
s da equao de regresso, separadamente, pelo teste T. Optou-se por
analisar a equao de regresso por meio da anlise de varincia (Teste F).
174
Tabela 9 - Anlise de varincia da regresso da CA em funo do nvel de Lisina.
Fontes de
Graus de
Soma de
Quadrados
F
Variao
Liberdade
Quadrados
mdios
calculado Probab.
Devido a
Regresso
2
0,1019919
0,050995940
6,25
0,0074
Resduo
21
0,1714541
0,008164548
^ =^
^ =
^
^ Lis para estimar a reta e Y
Os modelos usados foram: Y
2 para
i
0
1
i
i
^
o plat; em que: 2 = estimativa do valor mximo ou mnimo para GP ou CA,
respectivamente. O ponto de interseco das retas (break-point ou ponto de
^ - ^
^.
quebra), foi obtido por: Lis = (
0)/
2
1
No desenvolvimento do modelo, foram feitas vrias regresses e plats usandose diferentes combinaes dos pontos, sendo a combinao que melhor se ajustou
s mdias dos tratamentos definida como aquela que forneceu a menor soma de
quadrado dos desvios (Tabela 10).
Tabela 10 - Resultado das possveis combinaes de retas e plats para ajustar os
dados de GP das aves, pelo modelo LRP.
N de ptos N de ptos Soma de Quadrados Intercepto Coeficiente Plat
na equao no plat
dos Desvios
2
3
61,1338348
288,0728
318,2321 602,8954
2
2
4,6246305
288,0728
318,2321 605,9644
3
2
130,2989807
389,9078
203,8109 605,9644
3
1
125,6743469
389,9078
203,8109 604,4437
4
1
434,3201904
464,4827
123,6228 604,4437
175
Mtodo dose-resposta para determinar exigncias nutricionais
176
Tabela 13 - Somas de quadrados dos desvios da reta e do plat, soma de quadrados dos
desvios totais para o modelo que proporcionou o melhor ajuste para o CA.
Intercepto
Coeficiente
Dados
Soma de Quadrados
SQD dos desvios
Total
Reta
2,6847
-0,905
3
0,0020
0,0020
Plat
1,8360
1
0,0000
X=
b b 2 4a(c y)
2a
O nvel timo de lisina foi definido por meio das respectivas equaes:
Ganho de peso: 605,9644 = -281,998+1598,12 Lis-715,774 Lis2
Converso alimentar: 1,836 = 5,90205 7,77436 Lis + 3,63325Lis2
Aplicando-se a frmula citada acima para obter as interceces das equaes
quadrticas com o plat, determinou-se a exigncia de lisina digestvel para GP
pelo primeiro intercepto (1,041%) (Figura 17). Para CA, conforme observado
na Figura 18, no foi possvel determinar o nvel de lisina por esse modelo,
uma vez que no houve intercepto da quadrtica com o plat do LRP. Isso ocorreu
em razo da falta de ajuste do LRP aos dados de CA. Apesar do modelo no
proporcionar bom ajuste para CA, para o ganho de peso teve um excelente
ajuste, o nvel timo foi intermedirio aos nveis proporcionados pelo LRP e
quadrtico. Isso demonstra a coerncia do modelo, uma vez que o LRP subestima
e o quadrtico superestima o nvel timo.
177
178
R2
1,00
0,99
0,99
0,92
0,65
0,41
179
4. Mtodos para determinar exigncias dos aminocidos
180
Fisher e Morris (1970) propuseram uma tcnica alternativa para avaliar
aminocidos denominada Tcnica de Diluio da Dieta. Este mtodo consiste
em diluir seqencialmente uma dieta alta em protena com uma dieta
isoenergtica, livre de protena. Gous (1980) descreve a tcnica como um mtodo
melhorado, baseando-se no princpio de que essa tcnica proporciona resultados
mais vlidos do que a tcnica de suplementao.
DMello (1982), usando dados obtidos por Gous (1980) pela tcnica da diluio
da dieta e dados oriundos da tcnica de suplementao por Boomgaardt e Baker
(1973), constatou que a resposta no crescimento dos animais com o aumento na
ingesto de lisina foi semelhante entre as duas tcnicas. O autor concluiu que
no se justificava o argumento de que a tcnica de diluio seria uma melhor
alternativa em razo das deficincias da tcnica de suplementao.
DMello (2003) menciona que as duas tcnicas tem suas limitaes, mas podem
ser usadas para determinar o nvel timo dos aminocidos. Ressalta que, apesar
das duas tcnicas proporcionarem respostas compatveis com o crescimento
animal, a tcnica da diluio promove diferenas nos nveis de protena das
dietas diludas. Alguns trabalhos tm demonstrado que as diferenas nos nveis
proticos tm refletido nas exigncias dos aminocidos (Morris et al., 1987 e
Vieira et al., 2004). A reduo da utilizao do aminocido limitante com o
aumento da protena das dietas ocorre por causa do imbalano dos aminocidos.
Por outro lado, o autor relata, conforme dados do estudo de DMello (1990)
empregando a tcnica de suplementao, que o imbalano moderado e o
severo no afetaram a utilizao do primeiro aminocido limitante. A base
bioqumica do efeito da protena sobre as respostas dos aminocidos no
crescimento das aves ainda no est esclarecida. Resultados de algumas pesquisas
realizadas com as duas tcnicas, diluio e suplementao, indicam que a variao
na concentrao de um aminocido afeta a deposio de gordura na carcaa das
aves.
Segundo DMello (2003), uma srie de fatores, como temperatura ambiente,
estresse imunolgico, sexo, idade, espcie e outros fatores da dieta podem
afetar a resposta das aves com a variao de um aminocido na dieta. O autor
menciona que alguns fatores podem afetar o consumo e outros a eficincia de
utilizao do aminocido avaliado. Fatores relacionados dieta, como energia
e imbalano dos aminocidos, afetam o consumo; outros, como antagonismos
entre os aminocidos de cadeia ramificada ou entre os bsicos, como lisina e
arginina, afetam a utilizao dos aminocidos. Para isolar esses fatores,
recomenda-se avaliar as respostas em funo do consumo do aminocido e no
da sua concentrao na dieta. Fatores que reduzem a eficincia de utilizao
desse nutriente podem ser verificados se a resposta avaliada em funo da
ingesto do aminocido e tambm pelo comportamento das curvas respostas.
Considerando-se as limitaes e crticas ao mtodo dose-resposta, outros
conceitos e mtodos tm sido propostos para estudar os aminocidos, tendo
como base o conceito de protena ideal.
181
4.1. Conceito de protena ideal
182
A razo para o uso desse conceito nas formulaes para os animais
fundamentada no fato de que a relao entre a lisina e os outros aminocidos
essenciais permanece inalterada, em grande parte, apesar de uma srie de
fatores dietticos, ambientais e genticos poderem afetar as exigncias dos
aminocidos (Baker e Han, 1994).
184
Tabela 15 - Efeito da relao met. + cis. dig. / lis. dig. sobre a converso alimentar
e rendimento de fil de peito em frangos de corte Cobb machos de 22 a 35 dias de idade.
M+C / Lis (%)
Converso (g/g)
Rendimento de Fil (%)
64 (0,659)1
1,788
23,74
68 (0,700)
1,742
24,14
72 (0,742)
1,690
24,05
76 (0,783)
1,690
24,26
80 (0,824)
1,689
24,38
1,665
24,33
Controle positivo2
CV (%)
1,61
3,58
Modelos
Relao M+C/Lis (%)
Quadrtico
77,0
ns
95% da resposta quadrtica
73,2
Quadrtico + Plat
73,9
LRP
72,6
Relao M+C dig. / Lis. dig. e contedo (%) de M+C dig. entre parnteses e Lis. dig. da dieta
(1,03%). 2Controle positivo contendo M+C dig. (0,880%) e Lis dig. (1,10%) .(Paez, 2007).
1
Outros critrios podem ser usados para definir os nveis ideais de aminocidos.
Os primeiros trabalhos publicados, utilizando a excreo de uria pelos sunos e
de cido rico pelas aves para avaliar qualidade da protena ou nveis nutricionais
de aminocidos, foram publicados por Brown e Cline (1974) e por Miles e
Featheston (1976). A metodologia baseada no aumento da produo destes
compostos quando ocorre deficincia ou imbalano dos aminocidos. A
suplementao do primeiro aminocido limitante, promovendo melhor
balanceamento, aumenta a sntese de protena e reduz o catabolismo dos demais
aminocidos no limitantes, havendo reduo na excreo de uria ou cido
rico que so os produtos finais do catabolismo dos aminocidos. Dessa forma,
a excreo de uria nos mamferos ou cido rico nas aves, podem ser utilizadas
para determinar os nveis nutricionais do primeiro aminocido limitante. A uria
pode ser determinada tambm no sangue, sendo recomendado um jejum de 5
horas aps a alimentao a fim de coletar o sangue para maximizao do teor
de uria no sangue. Entretanto, Rodrigueiro et al. (2000) indicam que a
determinao da concentrao de cido rico como forma de estudar o
metabolismo dos aminocidos pode esbarrar no alto coeficiente de variao,
sendo, portanto, considerado um fator limitante para a tomada de decises
quanto s estimativas de exigncias nutricionais.
O mesmo princpio se aplica para a determinao da concentrao do
aminocido limitante no plasma dos animais. Em vrios trabalhos, foi verificado
que a adio de um aminocido na dieta, em nveis abaixo da exigncia do
animal, no ocasiona alterao significativa na concentrao do aminocido
no plasma, mas, quando a adio compatvel com a exigncia ou em excesso,
Mtodos de pesquisa em nutrio de monogstricos
185
fil de peito, os nveis de metionina + cistina na dieta recomendados foram
menores que para converso alimentar, pois no houve efeito dos nveis de
metionina+cistina digestvel sobre o rendimento de fil de peito dos frangos
de corte.
186
o nvel plasmtico aumenta bruscamente. Pode-se concluir que, quando o nvel
plasmtico do aminocido em estudo comea a aumentar, este pode ser
estabelecido para definir a sua exigncia diettica.
Esses critrios foram utilizados por Pinheiro et al. (1986) para determinar a
exigncia de lisina de porcas lactantes. Os autores forneceram 5 nveis de lisina a
porcas em lactao por dois perodos de 4 dias e determinaram, no ltimo dia de
cada perodo, os nveis de lisina e uria no plasma e a excreo de uria na urina
nas ltimas 24 horas. A Tabela 16, mostra os nveis recomendados de lisina
total nas dietas de porcas em lactao com base nos resultados obtidos de uria
no plasma e na urina e de lisina plasmtica. As metodologias laboratoriais facilitam
sobremaneira as pesquisas com animais adultos, pois, para realizar medidas do
desempenho, seria necessrio um grande nmero de porcas por longos perodos,
o que dificultaria a realizao de outras pesquisas em uma granja experimental
de sunos.
Tabela 16 - Efeito do nvel diettico de lisina total sobre a uria e lisina plasmtica
e excreo urinria de uria em porcas em lactao.
Dieta Lisina
Uria Plasmtica
Uria
Lisina Plasmtica
Total (%)
(mg/100mL)
Urinria (g/dia)
(mg/100mL)
0,566
32,78 ab
40,14 ab
1,26 c
0,646
25,83 c*
34,41 b
1,21 c
0,726
30,51 b
24,68 c*
1,52 bc*
0,806
29,48 bc
24,68 c
1,77 b
0,886
32,22 ab
32,29 bc
2,06 a
* Exigncia recomendada para cada parmetro. Pinheiro et al. (1986).
Fontes et al. (2000) alimentaram leitoas (60 a 95 kg) com dietas contendo
diferentes nveis de lisina e avaliaram parmetros de desempenho, de carcaa e
a uria no soro. Os autores verificaram que a exigncia de lisina estimada com a
converso alimentar e uria no soro foram similares, entretanto a estimativa do
nvel de lisina na dieta para menor deposio de gordura na carcaa foi 15%
superior (Tabela 17). Os coeficientes de variao dos diferentes parmetros
usados para estimar as exigncias nutricionais das leitoas mostram que a
converso alimentar apresentou o menor coeficiente, e os de deposio de protena
e de gordura na carcaa os maiores valores, sendo intermediria a variao da
uria no soro. Esses resultados sugerem que, nos estudos realizados para definir
nveis nutricionais para melhoria da deposio protica e reduo na deposio
de gordura, as repeties e o nmero de animais por repetio deve ser aumentado
para poder detectar as diferenas entre os tratamentos experimentais.
4.5. Protocolo proposto para determinar o nvel timo de lisina em
dietas formuladas com base na protena ideal
Delineamento experimental
O nmero de repeties, animais por repetio e distribuio dos animais
devem seguir os princpios apresentados no Captulo 1 para cada espcie
animal. A definio dos tratamentos depende do mtodo a ser empregado.
Mtodos de pesquisa em nutrio de monogstricos
Efeito Quadrtico (P<0,01). 2ns. 3Efeito Linear (P<0,01). Fontes et al. (2000).
Dietas experimentais
As dietas podem ser formuladas pela tcnica da suplementao ou da diluio.
Pela tcnica da suplementao, formulada uma dieta basal deficiente em
lisina, mas deve atender as exigncias nutricionais de energia, vitaminas e
minerais. Os demais aminocidos devem estar em propores adequadas para
manter as relaes ideais com a lisina. A basal suplementada com lisina e os
demais aminocidos para manter a relao ideal.
Na Tabela 18, so apresentados exemplos de suplementao da lisina e
demais aminocidos na dieta basal. Entretanto, em dietas prticas, h uma
certa dificuldade em manter a mesma relao ideal dos aminocidos em todas
as dietas. Conforme exemplo apresentado, medida que os nveis de lisina das
raes so aumentados, os aminocidos que se tornam limitantes devem ser
suplementados por fontes sintticas, de forma que as relaes ideais propostas
por Rostagno et al. (2005) sejam atendidas. Por esse mtodo de formulao,
observa-se que as dietas com os nveis mais elevados so aquelas que mais se
aproximam das relaes exatas, pela necessidade de suplementao da maior
parte dos aminocidos, enquanto os primeiros nveis so aqueles que mais
extrapolam as relaes ideais.
As formulaes pela tcnica da diluio consistem em formular uma dieta
com alto nvel de lisina e, conseqentemente, dos demais aminocidos que so
estabelecidos conforme o perfil ideal; e outra dieta de diluio com os mesmos
teores de energia, minerais e vitaminas, mas isenta de protena e aminocidos
(Tabela 19). A mistura das duas dietas em propores adequadas fornece os
nveis de lisina a serem avaliados, mantendo as mesmas relaes dos aminocidos
em todas as dietas. Essa tcnica permite manter o mesmo perfil dos
aminocidos em todas as dietas, como pode ser verificado no exemplo de
formulao apresentado na Tabela 20. Entretanto, a restrio dessa tcnica
a variao dos nveis de protena da dieta que variam conforme as diluies.
Isso pode ser amenizado com a incluso, na dieta isenta de aminocidos
(diluente), de uma fonte de nitrognio, como o cido glutmico.
187
Tabela 17 - Efeito do nvel de lisina diettica sobre variveis, medidas em leitoas de 60
a 95 kg.
Lisina na Dieta,
Converso
Uria no
Deposio, g/dia
Soro1 mg/dL
Protena2
Gordura3
%
Alimentar1
0,75
2,73
35,80
153,9
232,1
0,85
2,55
33,67
156,0
238,6
0,95
2,42
30,32
153,8
226,4
1,05
2,46
27,80
156,8
161,6
1,15
2,53
32,82
161,8
182,5
Exigncia de Lis
1,00
1,00
0,75
1,15
CV, %
4,02
6,40
14,06
14,12
188
Tabela 18 - Dietas experimentais formuladas pela tcnica da suplementao para avaliar
os nveis de lisina, mantendo a relao ideal dos aminocidos para frangos de corte na
fase inicial. Raes isoenergticas e isoproticas com os aminocidos na proporo
ideal.
Ingredientes (%)
Nveis de lisina digestvel (%)
0,85
0,97
1,09
1,21
Basal
91,932
91,932
91,932
91,932
L-lisina HCl
0,153
0,306
0,459
DL- metionina
0,105
0,193
0,282
0,370
L-treonina
0,027
0,106
0,187
L- valina
0,064
0,155
L- Arginina
0,022
0,149
cido glutmico
7,932
7,570
6,975
5,992
Amido
0,031
0,125
0,313
0,756
Total
100,00
100,00
100,00
100,00
Aminocidos digestveis
aa/lis
aa/lis
aa/lis
aa/lis
Lisina, % (100)1
0,850 1,00 0,970 1,00 1,090 1,00 1,210 1,00
Metionina+cistina,% (72) 0,612 0,72 0,698 0,72 0,785 0,72 0,871 0,72
Triptofano,% (16)
0,195 0,23 0,195 0,20 0,195 0,18 0,195 0,16
Treonina,% (65)
0,605 0,71 0,631 0,65 0,709 0,65 0,787 0,65
Arginina,% (105)
1,123 1,32 1,123 1,16 1,145 1,05 1,271 1,05
Valina,% (75)
0,754 0,89 0,754 0,78 0,818 0,75 0,908 0,75
Fenilalanina,% (63)
0,823 0,97 0,823 0,85 0,823 0,76 0,823 0,68
Composio basal (%): milho = 58,100; Farelo de soja = 28,549; Fosfato biclcico = 1,741;
Calcrio = 1,113; Sal = 0,437; leo de soja = 1,722; Premix mineral e vitamnico = 0,200;
Cloreto de colina (70%) = 0,070. Composio Nutricional (%): EM (kcal/kg) = 3.000; PB (%)
= 22,50; Ca (%) = 0,940; Pd (%) = 0,42; Na (%) = 0,190. 1Protena Ideal recomendada por
Rostagno et al. (2005).
Tabela 19 - Raes formuladas para obter as dietas com nveis crescentes de lisina
aplicando-se a tcnica da diluio.
Ingredientes
Raes a serem misturadas
Concentrada (1,21% de lisina)
Isenta (diluente)
Milho
54,755
Farelo de soja
38,348
leo Soja
2,970
Calcrio
1,106
0,999
Fosfato biclcico
1,660
2,270
Sal comum
0,434
0,481
DL- metionina
0,270
L-lisina HCl
0,149
L-treonina
0,038
L- valina
L- Arginina
Premix mineral
0,100
0,100
Premix vitamnico
0,100
0,100
Cloreto de colina 70%
0,070
0,070
Amido
82,689
Inerte
13,291
Total
100,00
100,00
Critrios respostas
As respostas em ensaios dose-resposta so baseadas no desempenho
animal. Para os animais em crescimento, as caractersticas mais avaliadas
so o ganho de peso e a converso alimentar. Para frangos de corte, um
parmetro de importncia econmica o rendimento de peito; no caso de
sunos em crescimento, o rendimento de carcaa, a espessura de toucinho e
a rea de olho de lombo so variveis importantes.
A excreo de cido rico em aves ou uria nos sunos, assim como a deposio
protica, so tambm utilizadas para estimar as exigncias dos aminocidos.
A deposio protica corporal determinada pela tcnica do abate
comparativo. Um grupo de animais abatido para medir a composio corporal
inicial e, no final, um grupo de animais alimentados conforme os tratamentos
so abatidos para determinar a composio corporal final. Pela diferena entre
a composio protica final e inicial, calcula-se a deposio protica.
Anlises dos dados
O primeiro procedimento a anlise de varincia com a decomposio dos
tratamentos em regresso polinomial. Se for detectada a significncia para a
regresso, os dados podem ser ajustados pelos modelos quadrtico, exponencial
e LRP (linear response plateau). Na escolha do modelo, deve ser considerado
o ajuste dos dados e os aspectos mencionados sobre os modelos (ver 3.1.
Interpretao da resposta dos animais nos ensaios dose-resposta).
Depois de definir o modelo, o critrio para determinar o nvel timo depende
do modelo utilizado. Para o LRP, o ponto de interseco da reta com o plat.
Para o modelo quadrtico, o nvel timo estabelecido como sendo aquele que
promover a mxima resposta. Pode tambem usar o critrio de 95% do nvel que
proporcionou a mxima resposta pelo modelo quadrtico. Para o exponencial,
um valor arbitrrio de 95% a 99% da mxima resposta tem sido usado como
Mtodos de pesquisa em nutrio de monogstricos
189
Tabela 20 - Dietas experimentais formuladas pela tcnica da diluio usando-se as
dietas da Tabela 19 para avaliar os nveis de lisina, mantendo a relao ideal dos
aminocidos. Raes isoenergticas variando os nveis de PBl.
Ingredientes (%)
Nvel de lisina digestvel (%)
0,85
0,97
1,09
1,21
Concentrada
70,248
80,138
90,083
100,000
Isenta
29,752
19,862
9,917
Total
100,00
100,00
100,00
100,00
Aminocidos digestveis
AA/lis.
AA/lis.
AA/lis.
AA/lis.
Protena Bruta (%)
15,932
18,110
20,301
22,486
Lisina,% (100)1
0,850 1,00 0,970 1,00 1,090 1,00 1,210 1,00
Metionina+cistina,% (72) 0,612 0,72 0,698 0,72 0,785 0,72 0,871 0,72
Triptofano ,% (16)
0,174 0,20 0,198 0,20 0,223 0,20 0,247 0,20
Treonina,% (65)
0,553 0,65 0,631 0,65 0,709 0,65 0,787 0,65
Arginina,% (105)
1,001 1,18 1,142 1,18 1,283 1,18 1,425 1,18
Valina,% (75)
0,655 0,77 0,747 0,77 0,840 0,77 0,932 0,77
Fenilalanina,% (63)
0,716 0,84 0,817 0,84 0,919 0,84 1,020 0,84