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Anlise computarizada de espermatozides: reviso de literatura

Computer-assisted sperm analysis (CASA): a review
D.L. Matos1, A.A. Arajo, I.G. Roberto, R. Toniolli
Programa de Ps-graduao em Cincias Veterinrias FAVET/UECE
Universidade Estadual do Cear, Campus do Itaperi, CEP: 60700-000, Fortaleza-CE
1
Correspondncia: dadamatos@hotmail.com.br

Resumo
A avaliao da motilidade e morfologia so essenciais na anlise da qualidade do smen. A anlise
desses parmetros tem sido baseada na avaliao subjetiva, resultando em variaes de at 60%. Para reduzir a
subjetividade, sistemas automticos de anlise seminal (CASA) vm sendo desenvolvidos, fornecendo
confiabilidade e velocidade de obteno dos dados, mas seu uso limitado devido necessidade de validao
dos dados, controle de qualidade e padronizao das anlises. A uniformizao desse instrumento permitir a
comparao de resultados e fornecer subsdios para melhorar as biotecnias da reproduo. Diante de sua
importncia, faremos uma breve reviso das informaes disponveis sobre esta tecnologia, abordando o
funcionamento, as vantagens e aplicaes do CASA.
Palavras-chave: anlise computadorizada de smen, motilidade espermtica, morfologia espermtica.
Abstract
The assessment of sperm motility and morphology are essential for examination of sperm quality. The
analysis of these parameters has been based on subjective evaluation, resulting in variations of up to 60%. To
reduce the subjectivity, computer-assisted sperm analysis (CASA) have been developed providing reliability and
speed for semen analysis, but its use is limited due the need of validation of data, quality control and
standardization. The uniformity of this instrument will allow comparison of results and provide allowance to
improve the biotechnologies of reproduction. In view of its importance, we will make a brief review about this
methodology, approaching the function of the CASA, benefits of its use and applications.
Keywords: Computer-assisted sperm analysis (CASA), sperm motility, sperm morphology.
Introduo
O CASA (Computer Assisted Sperm Analysis) um sistema automtico (hardware e software) utilizado
para visualizar, digitalizar e analisar imagens sucessivas, fornecendo informaes acuradas, precisas e
significativas do movimento individual de cada clula bem como de subpopulaes de clulas espermticas
(Amann e Katz, 2004).
A anlise da motilidade e morfologia espermtica tm sido apontadas por muitos autores como
importante ferramenta na seleo de um ejaculado, sendo a determinao da porcentagem de espermatozides
mveis, o teste mais utilizado para predizer a qualidade seminal (Verstegen et al., 2002).
Tradicionalmente, a quantificao da qualidade espermtica tem sido baseada na avaliao subjetiva,
usando estimativa visual de parmetros como motilidade massal e individual, contudo, estudos relatam existir
uma variao de 30 a 60% na estimativa desses parmetros devido limitao do ser humano em quantificar as
diferentes subpopulaes espermticas na amostra (Amann e Hammerstedt, 1980; Verstegen et al., 2002).
Para reduzir a subjetividade, nos ltimos 15 anos, sistemas automticos para anlise computadorizada
de smen (CASA) vm sendo desenvolvidos com o objetivo de fornecer dados acurados da motilidade de cada
espermatozide e resumo estatstico das subpopulaes (Verstegen et al., 2002). Este equipamento pode ainda
ser utilizado para mensurar o nmero de clulas por unidade de volume e ser modificado para capturar dados
aproximados para classificao morfomtrica de cada clula examinada (Amann e Katz, 2004).
Os diferentes instrumentos CASA tm demonstrado altos nveis de preciso e confiana usando
diferentes metodologias de classificao que fornecem uma grande ferramenta para melhorar nosso
conhecimento e habilidade para analisar espermatozides (Verstegen et al., 2002), tornando-se essencial
pesquisa, ao treinamento de pessoal e padronizao entre laboratrios (Amann e Hammerstedt, 1980).
Diante da sua importncia, faremos aqui, uma breve reviso do estado atual do conhecimento da
tecnologia CASA, abordando seu funcionamento, aplicaes, vantagens, limitaes e impactos na biologia
espermtica e clnica.

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Recebido: 5 de junho de 2008
Aceito: 23 de junho de 2009

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Evoluo da metodologia de anlise espermtica computadorizada

No incio da dcada de 40, estudiosos tiveram a necessidade de obter dados objetivos na porcentagem
de espermatozides mveis e informaes sobre a velocidade do movimento dessas clulas. Acreditavam que, se
fossem obtidos dados precisos do movimento espermtico, seria possvel predizer o potencial de fertilidade de
um macho ou selecionar o melhor procedimento para preparao do espermatozide (Amann e Katz, 2004).
Entre os vrios mtodos de avaliao idealizados, Lord Rothschild, ainda na dcada de 40, introduziu o
uso de fotografias em tempo real, usando iluminao de campo escuro para criar imagens da trajetria do
movimento do espermatozide e, manualmente, determinar a velocidade de deslocamento (Verstegen et al.,
2002; Amann e Katz, 2004).
Esse sistema e outros desenvolvidos na mesma poca eram incapazes de mensurar a velocidade
individual das clulas, o que s foi possvel a partir de 1978, quando surgiu o primeiro sistema automtico capaz
de avaliar a trajetria do movimento espermtico baseado na avaliao individual (Verstegen et al., 2002;
Amann e Katz, 2004).
Vale ressaltar que o pioneiro Expert Vision desenvolvido pela Motion Analysis Corporation, Santa
Rosa, Califrnia, mais tarde chamado Cell Track, no era um sistema especfico para esse tipo de anlise
(Amann e Katz, 2004).
O primeiro sistema CASA para comercializao desenvolvido especificamente para avaliao da
motilidade espermtica foi o CellSoft (CRYO Resources, Montgomery, New York) comercializado por volta
de 1985 para uso em laboratrio de pesquisa e laboratrios mdicos (Mack et al.,1988). Em 1986, surgiu o HTM
2000 Hamilton-Thorn Research, Beverly, Massachusetts, tambm desenvolvido especificamente para esse tipo
de anlise (Amann e Katz, 2004).
Em 1992, surgiu o HTM-IVOS Sperm Analyzer, um sistema integrado de computador e microscpio
que permitia a aquisio de imagens digitalizadas, fornecendo classificao automtica dos movimentos
espermticos, informando porcentagem de mveis, mdia de velocidade e porcentagem de progressivos (IguerOuada e Verstegen, 2001).
Atualmente, a HTM disponibiliza verses como HTM-IVOS 10 e HTM-CEROS 12.1. A verso
HTM-IVOS 10 proposta para avaliao do smen humano, mas j foi validado para outras espcies como a
canina. A verso HTM-CEROS 12.1 permite ainda avaliar morfologia e morfometria espermtica (IguerOuada e Verstegen, 2001). Atualmente em adio ao HTM, existe outro sistema comercial de CASA, o SMCMA (Stromberg-Muka Band Feilnback, Germany; Davis e Katz, 1993), entre outros disponveis no mercado.
Independente do fabricante, os diferentes instrumentos so baseados em princpios similares, mas
diferem em termos de ptica usada e de software para a identificao do espermatoszide e a construo da
trajetria, respectivamente (Kraemer et al., 1998).
Nos ltimos anos, relatos utilizando esse sistema tm aumentado significativamente, e a principal
espcie no qual tem sido utilizado a humana. Os centros de avaliao da fertilidade em humanos tem usado
este equipamento para avaliao da qualidade espermtica para posterior uso em biotcnicas da reproduo e
para estudar a existncia ou no de correlao da qualidade espermtica (morfologia e motilidade) com a
fertilidade (Verstegen et al., 2002).
Em medicina veterinria, o CASA ainda no uma prtica rotineira. Embora j seja verificada sua
validao em vrias espcies como bovina, suna, esse sistema ainda no est inteiramente padronizado para
todas as espcies de animais (Verstegen et al., 2002).
Vantagens e desvantagens da tcnica
O sistema adequado para quantificar um grande nmero de clulas com padro de motilidade
heterogneo em um curto perodo de tempo (Mack et al., 1988; Farrel et al., 1996), fornecendo dados de
concentrao de espermatozides/mL, morfologia, motilidade e velocidade, detectando mudanas suts nos
parmetros sob vrias condies experimentais (Kraemer et al., 1998).
Alm da execuo do exame, o sistema permite a catalogao de pacientes num banco de dados, assim
como, o armazenamento de informaes relevantes, criando um ambiente de trabalho caracterizado pela
confiabilidade, versatilidade, facilidade de manuseio e de configurao. As avaliaes so rapidamente
executadas, e os resultados so facilmente catalogados, permitindo que seja atingido alto nvel de automao em
laboratrios, clnicas, empresas e universidades.
Embora o sistema tenha muitas vantagens, ele apresenta algumas desvantagens que tornam seu uso
limitado (Verstegen et al., 2002): o elevado custo do equipamento e a necessidade de validao, o controle de
qualidade e a padronizao das avaliaes realizadas (Davis e Katz, 1993).

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Aplicaes do sistema CASA

Resultados significativos tm sido obtidos em pesquisas bsicas, o que no teria sido possvel sem a
tecnologia CASA. O sistema tem demonstrado ser uma ferramenta til no monitoramento da qualidade
espermtica de amostras submetidas a diferentes tratamentos experimentais (Farrel et al., 1996), na pesquisa de
novos diluidores seminais, crioprotetores ou outros tipos de processamento (Amann e Katz, 2004).
tambm valioso na quantificao da hiperativao, no estabelecimento da relao entre qualidade do
smen do doador e a verdadeira fertilidade da amostra e nas avaliaes gerais da convenincia do uso de machos
para reproduo (Farrel et al., 1996; Verstegen et al., 2002).
Funcionamento do CASA
No mtodo de anlise espermtica computadorizada, a avaliao de motilidade em seus diversos
parmetros realizada rigorosamente por um sistema estroboscpico de alta preciso totalmente controlado por
computador. Utiliza-se vdeomicrografia que faz o monitoramento constante e anlise seqencial do movimento
do espermatozide (Mortimer, 2000; Amann e Katz, 2004).
Embora seja o flagelo a parte do espermatozide que origina a motilidade, os sistemas automticos
avaliam o movimento da cabea, porque tecnicamente mais fcil acompanhar esse movimento do que o do
flagelo (Amann e Katz, 2004).
Isso porque a freqncia do batimento flagelar muito alta (acima de 80 batimentos por segundo para
espermatozide humano lavado), sendo ento necessrio, pelo menos, 200 observaes por segundo para
mensurar o padro do batimento flagelar corretamente. Atualmente, os sistemas de vdeo analisam 25-60
imagens/s, ou seja, usam uma menor freqncia que a necessria para avaliao do batimento flagelar,
impossibilitando a aquisio de boas imagens. J a cabea no se move to rapidamente como a cauda, o que
possibilita a obteno de imagens relativamente claras, utilizando a tecnologia de vdeo convencional (Mortimer,
2000).
Por meio do uso de microscpio com contraste de fase, as clulas espermticas so mais claramente
visualizadas no meio onde elas se encontram, o que permite a deteco e o rastreamento dessas clulas. O
processo de deteco automtica das clulas, denominado segmentao, ento realizado pelo sistema
comparando a intensidade da imagem adquirida com um limiar de intensidade pr-estabelecido (Mortimer,
2000).
O tamanho mnimo e mximo aceitvel para a cabea do espermatozide de cada espcie padronizado
pelo sistema, e o computador ir reconhecer um objeto que cair dentro da faixa de tamanho de cabea
espermtica pr-estabelecida. Partculas presentes na imagem com tamanho abaixo deste limiar sero
considerados parte do fundo (Mortimer, 2000).
Anlise das imagens e obteno dos parmetros de motilidade
Para a anlise da motilidade propriamente dita, primeiro cada imagem captada pela cmera acoplada ao
microscpio convertida em imagem digital, e a organizao seqencial de diversas imagens digitais do origem
a um filme. Cada conjunto de imagens captadas em diversos campos de observao da amostra espermtica em
avaliao so automaticamente analisadas (Donald et al.,1988).
O software reconhece as clulas e desenha para cada espermatozide uma seqncia completa do
movimento para reconstituir sua trajetria, classificando-a conforme os padres definidos como: mvel no
progressivo, linear lento, linear rpido e imvel (Mortimer, 2000).
Em seguida, uma srie de outras caractersticas de movimento espermtico calculada, fornecendo
parmetros de motilidade como: porcentagem de mveis, velocidade curvilnea (VCL), velocidade mdia da
trajetria (VAP), velocidade linear progressiva (VSL), retilinearidade (STR) e linearidade (LIN). Estes valores
so usados para diferenciar os padres do movimento espermtico (Mortimer, 2000).
Quando o CASA usado, todos os espermatozide em um campo de viso e suas trajetrias so
reconstrudas simultaneamente. Todas as clulas espermticas de um campo so identificadas e avaliadas antes
que as imagens do prximo campo, captadas na seqncia, sejam analisadas (Donald et al.,1988).
Parmetros da motilidade espermtica avaliados pelo CASA
De acordo com Verstegen et al. (2002) os parmetros reportados pelo CASA so:
Velocidade curvilnea (VCL- m/s): a velocidade da trajetria real do espermatozide. sempre a
maior das trs velocidades e serve como elemento de clculo para a linearidade.
Velocidade linear progressiva (VSL- m/s): a velocidade mdia em funo da linha reta estabelecida
entre o primeiro e o ltimo ponto da trajetria do espermatozide. sempre a mais baixa das trs velocidades.

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Velocidade mdia da trajetria (VAP- m/s): a velocidade da trajetria mdia do espermatozide. Em

casos onde a trajetria da cabea espermtica muito regular e linear com pouco movimento lateral da cabea, a
VAP quase a mesma que a VSL, porm com trajetrias irregulares, no lineares ou onde existe um alto grau de
movimento lateral, a VAP ser maior que a VSL.
Amplitude de deslocamento lateral da cabea (ALH - m): a amplitude do deslocamento mdio da
cabea do espermatozide em sua trajetria real. A mensurao desse parmetro esta relacionada com a
capacidade de penetrao na zona pelcida do vulo, assim, a ALH um dos parmetros que tem efeito sobre a
fertilizao.
Freqncia de batimento flagelar cruzado (BCF- Hz): o nmero de vezes que a cabea do
espermatozide cruza a direo do movimento. Se existem mais batimentos/segundos que imagens/segundos,
ento, a BCF ir ser subestimada.
Retilinearidade (STR - %): a relao percentual entre VSL e VAP. Estima a proximidade do percurso
da clula a uma linha reta.
Linearidade (LIN - %): Relao percentual entre VSL e VCL, ou seja, a porcentagem de clula que
tem index linear > 0.7, ngulo absoluto menor que 25 e ngulo algbrico menor que 3. Quanto mais o
espermatozide se afasta da velocidade em linha reta, menor ser sua linearidade (Mortimer, 2000).
Os valores de velocidade so determinados como percurso relevante percorrido em um perodo de
tempo e so representados em m/s, enquanto os valores de LIN, e STR so determinados como raio dos valores
de velocidade (Amann e Katz, 2004).
Avaliao da hiperativao espermtica
A hiperativao um processo que o espermatozide apresenta durante o seu progresso no oviduto da
fmea, sendo descrito como um movimento vigoroso, no progressivo, no linear e est relacionado com o
processo de capacitao e fertilizao (Verstegens et al., 2002).
Durante a hiperativao, o padro e o vigor da trajetria do espermatozide so alterados, passando a
ser caracterizados por uma larga amplitude do batimento flagelar, aumento mdio do movimento lateral da
cabea e cauda do espermatozide associados tambm com uma motilidade lenta ou no progressiva de baixa
freqncia de batimento flagelar (Mortimer e Mortimer, 1990; Suarez, 1996; Kay e Robertson, 1998; Verstegen
et al., 2002).
A mensurao objetiva desse processo fisiolgico pode ser usada como biomarcador no apenas na
predio da fertilidade, mas tambm na avaliao de agentes farmacolgicos administrados para tratar
infertilidade masculina e monitorar o efeito dos contraceptivos na funo espermtica (Kay e Robertson, 1998).
A avaliao da hiperatividade do espermatozide utilizando o sistema CASA possvel a partir do uso
de alta freqncia. O uso de 60Hz permitiu melhor discriminao entre motilidade progressiva e motilidade
hiperativada quando comparada a anlises feitas a 30Hz (Mortimer e Swan, 1995, citado por Cancel et al.,
2000).
O uso da alta freqncia de capatao de imagens combinado com o aumento da resoluo do sistema
ptico e do uso de melhores computadores, tornaram eficiente o registro da trajetria dos espermatozides com
alta velocidade e trajetria irregular, que at ento eram difceis de ser analisados (Cancel et al., 2000).
No smen humano, o espermatozide hiperativado aquele que apresenta: VCL 70m/s, ALH
7m, LIN 30% e VSL 30 m (Mortimer e Mortimer, 1990; Verstegen et al., 2002).
Avaliao da morfologia espermtica
A classificao da morfologia do espermatozide tem se tornado uma parte integral da rotina da anlise
de smen. A razo disso que a morfologia espermtica um importante indicador de fertilidade, tanto em
homens como em animais, alm de ser um bom indicador para danos espermticos conseqentes de agentes
fsicos ou qumicos (Verstegen et al., 2002; Garcia-Herreros et al., 2006).
Segundo Hirai et al. (2001), a anlise automtica da morfometria espermtica tem sido aplicada em
vrias espcies incluindo a bovina (Gravance et al., 1996), a caprina (Gravance et al., 1995), a ovina (Gravance
et al., 1998) e a humana (Davis e Katz, 1993).
Esses sistemas so programados para classificar objetos e diferenciar imagens das clulas espermticas
do detrito seminal e/ou superposio de clulas, medindo parmetros como dimetro mximo, dimetro mnimo,
rea da cabea, porcentagem de acrossomo (obtido dividindo rea do acrossomo pela rea da cabea) e fator de
elipse (obtido dividindo-se o dimetro mnimo da cabea pelo mximo), que so utilizados para classificar as
clulas segundo sua forma em: normal (formato de cabea regular), afilada, redonda, macro, micro ou amorfo
(cabea irregular).
Mesmo sendo uma avaliao objetiva, o sistema CASA apresenta variao nos resultados entre 11 e
23%, o que pode ser atribuda a fatores como preparao da amostra incluindo tcnica de fixao e tcnica de

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colorao, bem como fatores como correta iluminao, foco, aumento, sistema de classificao, interpretao e
experincia do profissional (Hirai et al., 2001; Verstegen et al., 2002).
CASA e avaliao da fertilidade
A habilidade do espermatozide para migrar atravs do trato reprodutivo da fmea e penetrar no ocito
depende da resistncia exercida pela secreo presente no trato genital feminino e do potencial hidrodinmico
conferido pela curvatura flagelar. Sua fora de propulso definida pelas propriedades cinemticas dessas
clulas, o que pode levar a diferenas na eficincia de migrao entre espermatozides de alguns machos (Cox et
al., 2006).
A motilidade espermtica comumente apontada como uma das mais importantes caractersticas
associadas com a habilidade fertilizante do espermatozide (Cox et al., 2006), porm, quando mensurada
microscopicamente, no bem correlacionada com a fertilizao in vivo ou in vitro, pois alm do erro humano
durante a avaliao subjetiva desse parmetro, existe ainda a limitao do mtodo para avaliar detalhadamente
as caractersticas do movimento espermtico (Liu et al., 1991).
Nos ltimos anos, os sistemas de avaliao automtica tm mostrado ser uma ferramenta til na
avaliao das propriedades cinemticas do espermatozide de forma individual do ejaculado, mostrando grande
potencial para predizer a fertilidade do macho, por meio da correlao da velocidade de natao do
espermatozide com a fertilizao de ocito in vitro e in vivo (Cox et al., 2006).
Na tentativa de correlacionar os parmetros do CASA com a taxa de fertilizao, verificou-se que os
valores de VAP, VSL e VCL so significativamente maiores em amostras que produzem mais de 50% de ocitos
fertilizados do que naquelas onde a taxa de fertilizao de ocito menor que 50% (Verstegen et al., 2002).
Amostras com elevados valores desses parmetros de velocidade e de LIN e BCF apresentam melhor migrao e
penetrao no muco cervical (Mortimer, 2000; Verstegen et al., 2002).
Entretanto, entre os parmetros cinemticos fornecidos pelo o CASA, a VCL e a ALH tm mostrado
grande correlao com taxa de fertilizao pela maioria dos estudos. Parmetros como BCF e LIN tm revelado
correlao positiva com a taxa de prenhez em alguns estudos, mas correlao negativa em outros (Verstegen et
al., 2002).
Espermatozides humanos com boa capacidade de penetrao no muco cervical apresentam um grupo
de propriedades cinemticas semelhantes a: VAP = 25m/s e ALH = 4,5m (Mortimer, 2000) enquanto, em
caprinos, espermatozides com velocidade eficiente na migrao do muco cervical in vitro apresentam LIN >
50% e ALH = 4,8m (Cox et al., 2006).
Outro parmetro preditivo de fertilidade a porcentagem de espermatozides mveis. Em varres com
leitegadas maiores que 10 leites, foi observado alta porcentagem de espermatozides mveis, cerca de 93%,
enquanto em varres, com tamanho de leitegada menor, a porcentagem de espermatozides mveis registrado foi
em torno de 80% (Hirai et al., 2001).
Fatores que influenciam a anlise automtica
Vrios fatores podem gerar uma variabilidade na estimativa dos parmetros das caractersticas dos
espermatozides mensurados pelo CASA, entre os quais podem-se citar: experincia do observador,
identificao da espcie, acurcia da cmara utilizada, temperatura de anlise, tempo entre a colheita da amostra
e sua anlise, mtodo de processamento da amostra, instrumento usado, concentrao espermtica e freqncia
de aquisio de imagens (Davis e Katz, 1993; Farrel et al., 1996; Mortimer, 2000).
Experincia do observador
importante que o observador seja treinado e experiente para reconhecer e desconsiderar dados de
velocidade de movimento resultante de alteraes momentneas que porventura possam ocorrer (Verstegen et
al., 2002).
O observador deve ter habilidade para perceber que o sistema pode no diferenciar a cabea do
espermatozide de outras clulas ou detritos, eventualmente presentes na amostra avaliada, nesses casos, as
estimativas podem ser verificadas manualmente por ele a fim de se evitar que dados de concentrao espermtica
e porcentagem sejam superestimados e inseguros (Mortimer, 2000).
Identificao da espcie
O sistema apresenta uma configurao diferente para cada espcie, assim o primeiro passo fazer a
identificao correta da espcie e da amostra porque parmetros estabelecidos para a anlise de smen puro, por
exemplo, difere do smen lavado ou descongelado, da mesma forma que os parmetros estabelecidos para a
espcie suna diferem da usada para a bovina. Baseado nisso, as caractersticas de motilidade no devem ser

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vistas como valores absolutos, devendo ser interpretados de acordo com parmetros estabelecidos (Verstegen et
al., 2002).
Acurcia da cmara utilizada
A profundidade da cmara pode afetar a estimativa da concentrao ou influenciar a expresso de
motilidade por restringir o deslocamento ou por levar interaes das clulas com as suas paredes (Verstegen et
al., 2002). Assim, ela deve ser profunda o suficiente para que o padro de motilidade seja avaliado (Kay e
Robertson, 1998).
Temperatura de anlise
A temperatura influencia a motilidade do espermatozide,. baseados nisso, estudos em diferentes
espcies foram realizados para determinar qual a temperatura ideal para se realizar as anlises no sistema CASA,
sendo recomendada por vrios autores, a temperatura corporal de 37 e 38 C para algumas espcies (Verstegen et
al., 2002).
Efeito da concentrao
A concentrao espermtica tambm tem influncia nos resultados do CASA. Estudos com smen
humano e de animais tm demonstrado que o sistema CASA no eficaz para avaliaes de amostras
espermticas com alta ou baixa concentrao, assim para uma correta anlise, a concentrao espermtica deve
estar entre 20 a 50 x106/ml (Budworth et al., 1987; Davis e Katz, 1993).
Efeito da diluio e diluidores
O efeito das solues de diluio sobre os parmetros de cintica tem sido pouco estudado, mas tem
sido demonstrado que a diluio e o tipo de meio diluidor podem afetar a anlise de motilidade (Farrel et al.,
1996). Por exemplo, gotculas de lipdeos da gema de ovo podem ser contadas se estas possurem a mesma
dimenso da cabea de um espermatozide..
Efeito do tempo entre a colheita da amostra e sua anlise
Com relao influncia do tempo de incubao, Farrel et al. (1996),verificaram o declnio na
velocidade espermtica durante incubao de 2 horas, registrando reduo de 3-6% na porcentagem de
espermatozides mveis em amostras de smen humano e de camundongo. O mesmo foi observado avaliando
smen resfriado de bovino (Tardif et al., 1997) e de suno (Holt et al.,1997). Assim, aconselhvel que a
avaliao da amostra seja realizada em um curto perodo de tempo aps colheita ou processamento a fim de
evitar erros de leitura por subestimar parmetros de motilidade e de velocidade.
Efeito da freqncia de aquisio de imagens
Segundo Mortimer et al. (1988 citado por Kraemer et al., 1998), a freqncia de aquisio de imagens
tambm importante. Mortimer (2000), demonstrou que a reconstruo da trajetria pode ser influenciada pelo
nmero de imagens capturadas por segundo, assim, algumas trajetrias podem parecer simples quando
reconstitudas a 30 imagens/segundo, mas complexas quando reconstitudas a 60 imagens/segundo. Isso ocorre
porque o aumento da freqncia de captura de imagens resulta em mais informaes da trajetria afetando o
aspecto do movimento espermtico.
Davis e Katz (1993) demonstraram que em baixa freqncia de aquisio de imagens, erros nos valores
mdios de ALH, LIN, VCL e BCF eram de 0,9, 57, 33 e 33% respectivamente, mas quando a freqncia foi
aumentada para 60 Hz os erros eram reduzidos para 0,05, 11, 9,5 e 8.9%, respectivamente, assim, .uma melhora
significativa na acurcia das avaliaes foi encontrada quando a freqncia de aquisio foi aumentada de 30
para 60Hz.
Segundo Mortimer e Swan (1995), citados por Cancel et al., (2000), o uso de 60Hz, permite uma
melhor discriminao entre a motilidade progressiva e a motilidade hiperativada em espermatozide humano
quando comparado a anlises feitas a 30Hz.
Mtodos de processamento
Processos como lavagem, capacitao, congelao, descongelao, diluio e resfriamento tm efeito
substancial sobre os parmetros analisados, o que pode levar a variabilidade de resultados nas amostras avaliadas

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antes e depois de diferentes tratamentos, assim, o avaliador deve considerar essas observaes ao interpretar os
resultados obtidos.
Tardif et al. (1997) verificaram o aumento do deslocamento lateral da cabea espermtica aps
resfriamento do smen bovino. Mack et al. (1988), verificaram melhora em todos os parmetros cinemticos,
exceto LIN, aps lavagem do smen humano.
Um estudo na espcie suna, comparando anlises de smen fresco e descongelado, mostrou no existir
diferena significativa entre elas em relao aos dados de ALH, BCF, STR e LIN, mas verificou uma queda da
motilidade total de 93% para 51% e da motilidade progressiva de 64 para 21%, provocados pela criopreservao
(Eriksson e Rodriguez-Martinez, 2000).
Controle de qualidade e validao
Para que ocorra o desenvolvimento dessa tecnologia e seja possvel a comparao, a interpretao e a
reproduo de resultados, muitos autores tm mencionado a necessidade da padronizao de procedimentos para
manipulao do smen. Embora vrias modificaes no procedimento sejam necessrias para diferentes
espcies, os princpios para as avaliaes da qualidade espermtica utilizando o CASA so similares para todas
as espcies de mamferos (Farrel et al., 1996; Amann e Katz, 2004; Garcia-Herreros et al., 2006).
As amostras de smen com concentraes maiores do que a recomendada pelo fabricante devem ser
diludas a concentraes entre 20-50 x 106 espermatozides/mL, mas diluidores a base de leite ou gema de ovo,
que contem partculas com tamanho similar a cabea do espermatozide, devem ser evitados, porque no so
diferenciadas dos espermatozides imveis (Verstegen et al., 2002).
Todas as anlises devem ser realizadas a temperatura fisiolgica de cada espcie, a cmara deve ter
profundidade adequada, com no mnimo 10m de profundidade e avaliaes bsicas de smen podem ser feitas a
30Hz, mas as amostras com espermatozides mais rpidos devem ser avaliadas a 60Hz (Davis e Katz, 1993;
European Society of Human Reproduction and Embryology - ESHRE, 1998).
Aps a anlise, o usurio deve verificar se todos os espermatozides mveis no campo de viso tiveram
suas trajetrias reconstrudas e recomendado fazer uma avaliao comparativa entre a anlise automtica e a
subjetiva (Eshre, 1998; Verstegen et al., 2002). Mesmo com essas recomendaes gerais, at que seja
desenvolvido um apropriado procedimento de controle de qualidade e mtodos de calibrao do instrumento
CASA, a comparao de resultados entre laboratrios ser limitada (Davis e Katz, 1993).
Consideraes finais
Nos ltimos anos, tem sido rpido o desenvolvimento de equipamentos e procedimentos para facilitar a
anlise automatizada de espermatozides. O CASA permite uma mensurao objetiva de diferentes
caractersticas da clula espermtica, mostrando alto nvel de preciso e segurana, sendo atualmente utilizado
como uma ferramenta para melhorar o nosso conhecimento e habilidade para manipular espermatozides,
abolindo a subjetividade das anlises realizadas pelo mtodo convencional.
A futura uniformizao e a padronizao desse instrumento daro a oportunidade de analisar,
objetivamente, resultados de motilidade e morfometria espermtica, definindo universalmente valores aceitos
como normais e dando subsdio para melhorar a aplicao das biotcnicas da reproduo.
Agradecimentos
Fundao Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (FUNCAP), pelo suporte
financeiro.
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