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FOSFATASE ALCALINA
PRINCPIO DE AO Metodologia: Roy Modificado. A Fosfatase Alcalina presente na amostra hidrolisa o substrato de timolftalena monofosfato, liberando timolftalena e fosfato inorgnico, em um tempo pr-determinado de 10 minutos. A atividade enzimtica proporcional quantidade de timolftalena formada, que medida colorimetricamente. Com a adio do Reagente de Cor, a reao enzimtica inativada e a timolftalena adquire cor azul. Como o substrato e o produto da reao apresentam cores diferentes, em meio alcalino, a colorao final constituda por uma mistura de cores. ALP Timolftalena monofosfato + H2O Timolftalena + H3PO4 Mg+ AMOSTRA Preparo do Paciente Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas. Amostras utilizadas Soro ou plasma (heparina) obtido livre de hemlise. Estabilidade e armazenamento da amostra O analito estvel 07 dias entre 2 e 8 C e 30 dias a 10 C negativos. Volume ideal utilizado para anlise (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise). Volume mnimo utilizado para anlise (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise). Critrios para rejeio da amostra No usar amostras com fortes sinais de hemolise e nem com presena de contaminao bacteriana. Fazer referncia ao manual ou POP de coleta, separao e distribuio de material. REAGENTE UTILIZADO FOSFATASE ALCALINA CATLOGO: K019 ANVISA: 10269360104

QUIBASA QUMICA BSICA Ltda Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Tel.: (31) 3427.5454 - Fax (31) 3427.2999 e-mail: bioclin@bioclin.com.br site: www.bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira Componentes do kit Nmero 1 - Substrato - conservar entre 15 e 30 C. Aps o manuseio conservar entre 2 e 8 C em frasco bem vedado para evitar evaporao. O reagente pode apresentar turvao ou precipitado, fato que no interfere na sua qualidade. Agitar antes de usar.Contm: Timolftalena monofosfato 40 mmol/L, solubilizante e estabilizador. Nmero 2 - Tampo - conservar entre 15 e 30 C. Aps o uso, fechar o frasco para evitar contaminao com CO2 do ar. Contm: Dietanolamina 0,3 mol/L pH 9,9, Citrato de sdio 10 mmol/L, surfactante e ativador. Nmero 3 - Reagente de Cor - conservar entre 15 e 30 C. Contm: Carbonato de sdio 150 mmol/L e Hidrxido de sdio 100 mmol/L. Nmero 4 - Padro 40 UI - conservar entre 15 e 30 C. Aps o manuseio conservar entre 2 e 8 C em frasco bem vedado para evitar evaporao. Contm: Timolftalena 0,4 mmol/L (40 UI) e solubilizante.

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Estabilidade Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo quando conservados de acordo com a temperatura recomendada. Evitar a contaminao do produto durante o uso para no afetar a sua estabilidade. CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS 1- Somente para uso diagnstico in vitro; 2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos; 3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes; 4 - Colunas deionizadoras saturadas liberam gua alcalina, ons diversos e agentes oxidantes e redutores, que podem alterar de forma significativa os resultados; 5 - O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio; 6 - O Reagente N 3 deve ser manuseado com cuidado, pois apresenta ao corrosiva; 7 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os critrios de biossegurana de acordo com a legislao vigente. EQUIPAMENTOS Tcnica Manual Condies de Reao Equipamento: Espectrofotmetro ou colormetro Leitura: Comprimento de onda 590 nm (580-590) Banho - maria Pipetas para medir amostras e reagentes Cronmetro PROCEDIMENTO Procedimento Manual Marcar 3 tubos de ensaio com as letras B (Branco), P (Padro), A (Amostra) e proceder como a seguir: Branco Reagente N 1 50 L Reagente N 2 500 L Reagente N 4 Incubar a 37 C por 2 minutos. Amostra Homogeneizar e incubar a 37 C por exatamente Reagente N 3 2,0 mL Padro 50 L 500 L 50 L 10 minutos 2,0 mL Amostra 50 L 500 L 50 L 2,0 mL

Homogeneizar bem e determinar a absorbncia da Amostra e do Padro em 590 nm (580 - 590), acertando o zero com o Branco. A cor estvel por 60 minutos. CLCULOS Fosfatase Alcalina (U/L) = Absorbncia da amostra x 40 Absorbncia do padro Como a reao de cor segue a lei de Lambert Beer, pode-se usar o Fator de calibrao: Fator de calibrao = Concentrao padro (40 U/L) Absorbncia do padro U/L = Absorbncia da amostra x Fator de calibrao Os resultados sero expressos em U/L. RESULTADOS Unidade de Medida : U/L Fator de Converso de Unidades (U/L para SI): Kat/L = U/L de Fosfatase alcalina x 0,0167

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CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de catlogo. Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados. Controle Interno Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits.

Deve ser prtica rotineira do Laboratrio Clnico o uso de soro controle para checar a preciso e exatido das dosagens. Deve ser de 5% o erro mximo permitido em relao aos valores pr-estabelecidos para os controles.

Citar POP para controle interno. Controle Externo Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade. Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo Definir como os dados de controle so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. VALORES DE REFERNCIA Os valores de referncia em U/L, para o presente mtodo, foram obtidos atravs da determinao da Fosfatase Alcalina em populaes sadias do sexo masculino e feminino. Adultos: 12 a 43 U/L Crianas at 12 anos: 56 a 156 U/L Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever criar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao atendida. SIGNIFICADO CLNICO A Fosfatase Alcalina est presente em altas concentraes nos ossos, fgado, intestino e placenta. Constitui um til indicador de doenas hepticas e de doenas sseas associadas com hiperatividade osteoblstica. Condies em que a Fosfatase Alcalina est aumentada: nas doenas hepticas e do trato biliar, na metstase do fgado e metstase ssea, na acromegalia, no hipertireoidismo, no raquitismo, na mononucleose infecciosa, na doena de Paget (atividade osteoblstica) e no crescimento sseo fisiolgico. Valores diminudos da Fosfatase Alcalina podem ser observados no hipotireoidismo, retardo de crescimento nas crianas, hipofosfatasia (erro metablico inato), desnutrio grave.

LINEARIDADE Linearidade A reao linear at 500 U/l. Para valores maiores, diluir o soro com Cloreto de sdio 0,85%, repetir a dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. LIMITAES DO MTODO A metodologia no pode ser adaptada em aparelhos de automao. Interferncias No utilizar amostras hemolisadas ou lipmicas, pois tais amostras podem elevar falsamente os resultados. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1 - COLEMAN, C. M.; STROJE, R. C.: Clin. Chem. Acta 13: 401, 1966. 2 - ROY, A. V.: Clin. Chem. 16:431, 1970. 3 - ZAK, B.: Clin Chim. Acta 3: 328, 1958. 4 - BRITTENHAM, G.: Clin Chim. Acta. 91: 203, 1979. 5 - TONKS, D. B.: Chim. Acta 2: 393, 1983. 6 - CARL, A. B. and EDWARD, R. A.: Tietz Textbook of Clinical Chem 2nd ed., 1994, 1942-1943.

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Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias

Assinatura

Data __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__ __/__/__

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