MESQUITA, ANA CARLA Uso das Tcnicas de Oxidao Qumica e Biodegradao na Remoo de Alguns Compostos Orgnicos Recalcitrantes [Rio

de Janeiro] 2004 XIII, 158 p. 29,7 cm (COPPE/UFRJ, D.Sc., Engenharia Civil, 2004) Tese - Universidade Federal do Rio de Janeiro, COPPE 1. Degradao de Contaminantes I. COPPE/UFRJ II. Ttulo ( srie )

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Resumo da Tese apresentada COPPE/UFRJ como parte dos requisitos necessrios para a obteno do grau de Doutor em Cincias (D.Sc.)

USO DAS TCNICAS DE OXIDAO QUMICA E BIODEGRADAO NA REMOO DE ALGUNS COMPOSTOS RECALCITRANTES Ana Carla Mesquita Maro/2004

Orientador: Marcio de Souza Soares de Almeida Programa: Engenharia Civil O objetivo deste trabalho foi o de avaliar diferentes tcnicas de degradao de poluentes orgnicos encontrados no ambiente. A primeira parte da tese enfoca a degradao de HPAs e PCBs por bactrias isoladas da regio da Baa de Guanabara e o uso do Reagente de Fenton na degradao de PCBs. A segunda parte avalia e compara a eficincia da remoo de PCE por soluo de KMnO4 e biosurfactante em ensaios de coluna. Os resultados da primeira parte mostram que as bactrias isoladas so capazes de degradar HPAs com mais de trs anis aromticos. O uso do Reagente de Fenton na degradao de PCB mostrou eficincia de 46% na remoo de tomos de cloro. Os resultados dos ensaios de coluna, executados na segunda parte da tese, mostram que a injeo de 74 volumes de vazios de soluo 25 mM de KMnO4 foi capaz de remover 65% do PCE retido na coluna e que o MnO2 gerado durante a reao entre o PCE e o KMnO4 responsvel pela diminuio da permeabilidade do meio. Verificou-se tambm que o aumento da constante de degradao do PCE est relacionado ao aumento da concentrao de KMnO4 na soluo de injeo. A bactria Acinetobacter sp. foi utlizada para produo de biosurfactante. Nos ensaios de coluna foi possvel remover 44% do PCE com injeo de 30 volumes de vazios da soluo de biosurfactante. Alm disso, ensaios de biodegradao de PCE utilizando as bactrias isoladas, com e sem adio de biosurfactante, biosurfactante. indicaram que o biosurfactante no provocou inibio dos microrganismos, porm, houve maior consumo de PCE nas amostras onde no havia

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Abstract of Thesis presented to COPPE/UFRJ as a partial fulfillment of the requirements for the degree of Doctor of Science (D.Sc.)

THE USE OF CHEMICAL OXIDATION AND BIODEGRADATION TECHNIQUES TO REMOVE SOME RESISTANT ORGANIC COMPONDS Ana Carla Mesquita March/2004

Advisor: Marcio de Souza Soares de Almeida Department: Civil Engineering The objective of this work is to evaluate the different techniques of degradation of organic pollutants found in the environment. The first part of the thesis focuses on the degradation of HPAs and PCBs by bacteria isolated in the region of Guanabara Bay and on the use of Fenton Reagent in the degradation of PCBs. The second part evaluates and compares the efficiency of removal of PCE by KMnO4 solution and biosurfactant through column tests. The results of the first part show that the bacteria isolated are capable of degrading HPAs that consist of more than three aromatic rings. The use of Fenton Reagent in the degradation of PCB is 46% efficient in the removal of atoms of chlorine. The results of the column tests, executed for the second part of the thesis, show that the injection of 74 pore volumes of 25mM KMnO4 solution removed 65% of the PCE contained in the column and that the MnO2 generated during the reaction between the PCE and the KMnO4 is responsible for the diminishing permeability observed. Furthermore, the column tests showed that the constant of degradation of the PCE increases associated with increasing concentration of the injected KMnO4 solution. The bacteria Acinetobacter sp. was utilised for producing the biosurfactant. In the column tests it was possible to remove 44% of the PCE by injecting 30 pore volumes of biosurfactant solution. Moreover, biodegradation tests of the PCE utilising the isolated bacteria, with and without the biosurfactant, indicated that the biosurfactant does not affect the microorganisms, however, there was greater consumption of the PCE in the tests without biosurfactant.

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To my sweet heart Paul Dimmock

AGRADECIMENTOS

Aos meus queridos amigos de tantos anos Tadeu e Bira. Joo Paulo, Glria e Steve pela amizade e pacincia, companheiros durante as infinitas anlises de laboratrio. Aos meus amigos Adriana, Dude, Elisa, Beth, Edu, Marcelo, May, Indu, obrigada pelo apoio e carinho. Ao Dr. Kenichi Soga por me mostrar novos caminhos. As minhas anjinhas Patica e Estherzinha.

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NDICE
1. Introduo ...............................................................................................1
1.1 Relevncia da Pesquisa ...............................................................................1 1.2 Objetivo ........................................................................................................4 1.3 Captulos da Tese ........................................................................................5

PARTE I ...................................................................................................................6 2. Hidrocarbonetos Poliaromticos & Bifenilas Policloradas ......................7

2.1 Introduo ......................................................................................................7 2.2 Hidrocarbonetos Poliaromticos (HPAs) ........................................................9 2.2.1 Rota dos HPAs no Ambiente .........................................................10 2.2.2 Efeitos Toxicolgicos .....................................................................13 2.2.3 Valores de Referncia para Contaminao por HPAs ..................15 2.2.4 Biodegradao de HPAs ...............................................................16 2.3 Bifenilas Policloradas (PCBs) ......................................................................19 2.3.1 Propriedades Fsico-Qumicas dos PCBs .....................................22 2.3.2 Rota dos PCBs no Ambiente .........................................................24 2.3.3 Efeitos Toxicolgicos .....................................................................25 2.3.4 Valores de Referncia para Contaminao por PCBs ..................26 2.3.5 Tratamento de reas Contaminadas por PCBs ............................27 2.4 Resumo do Captulo ....................................................................................31 3. Tcnicas de Remediao que Utilizam Biorremediao e Reagente de

Fenton ..............................................................................................................32
3.1 Lquidos no miscveis em gua (NAPLs) ..................................................32

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3.1.1Comportamento dos NAPLs no Solo .............................................32 3.1.2 Tcnicas de Remediao .............................................................34 3.2 Biorremediao ............................................................................................36 3.2.1 Fatores Fsico-Qumicos que Influenciam o Processo de Biodegradao ............................................................................38 3.2.2 Etapas do Processo de Biorremediao .....................................43 3.2.3 Casos Prticos ............................................................................44 3.3 Processos Oxidativos Avanados ..............................................................47 3.3.1 Reagente de Fenton ....................................................................47 3.4 Comentrios Finais ....................................................................................52

4. Materiais e Mtodos I ..........................................................................................53

4.1 Determinao dos Pontos de Coleta .........................................................53 4.2 Isolamento de Microrganismos ..................................................................54 4.2.1 identificao dos Microrganismos ...............................................56 4.3 Ensaios de Biodegradao ........................................................................56 4.3.1 Biodegradao de HPAs .............................................................56 4.3.2 Biodegradao de PCBs .............................................................57 4.4 Degradao de PCBs Utilizando Reagente de Fenton ..............................58 4.5 Determinaes Quantitativas .....................................................................58 4.5.1 Extrao e Quantificao de PCBs nas Amostras de Solo .........58 4.5.2 Extrao e Quantificao de PCBs nos Ensaios de Biodegradao ............................................................................60 4.5.3 Contagem de Cluas ..................................................................60 4.5.4 Extrao e Quantificao de HPAs nos Ensaios de Biodegradao ............................................................................60 4.5.5 Teor de Cloreto ..........................................................................61

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5. Resultados e Discusses de Remediao de HPAs e PCBs ........................63

5.1 Solo da rea do lixo ...............................................................................63 5.2 Identificao dos Microrganismos ..............................................................67 5.3 Ensaios de Biodegradao ........................................................................69 5.3.1 Biodegradao de HPAs .............................................................69 5.3.2 Biodegradao de PCBs .............................................................72 5.4 Degradao de PCBs Utilizando Reagente de Fenton .............................76 5.5 Concluses Parciais ..................................................................................79

PARTE II ...................................................................................................................80 6. Tetracloroetileno ...............................................................................................81

6.1 Introduo .................................................................................................81 6.2 Propriedades Fsico-Qumicas ..................................................................81 6.3 Aplicaes do PCE ...................................................................................82 6.4 Rota do PCE no Ambiente ........................................................................83 6.5 Valores de Referncia para Contaminao por PCE ................................86 6.6 Efeitos Toxicolgicos .................................................................................86 6.7 Degradao de PCE no Ambiente .............................................................86 6.8 Resumo do Captulo ..................................................................................89

7. Tcnicas de Remediao Utilizando Permanganato de Potssio e Biosurfactante ...................................................................................................90

7.1 Permanganato de Potssio .......................................................................90 7.1.1 Fatores Fsico-Qumicos que Influenciam o Processo de Oxidao .....................................................................................91 7.1.2 Etapas do Processo de Oxidao in situ ....................................91

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7.1.3 Casos Prticos ..........................................................................95 7.2 Tensoativos ..............................................................................................97 7.2.1 Interface Slido / Lquido ..........................................................100 7.2.2 Comportamento no Solo ...........................................................101 7.2.3 Aplicao ..................................................................................103 7.2.4 Biosurfactante ..........................................................................104 7.3 Comentrios Finais .................................................................................110

8. Material e Mtodos II .......................................................................................111

8.1 Caracterizao da Areia ..........................................................................111 8.1.1 Anlise Granulomtrica ............................................................111 8.1.2 Permeabilidade .........................................................................111 8.2 Ensaio de Coluna Oxidao Qumica por Permanganato ....................111 8.2.1 Saturao da Coluna ................................................................111 8.2.2 Ensaio de Oxidao Qumica ...................................................113 8.2.3 Extrao de PCE ......................................................................114 8.3 Ensaio com Traador de Brometo ..........................................................114 8.4 Determinaes Quantitativas ..................................................................114 8.4.1 Quantificao de PCE ..............................................................114 8.4.2 Quantificao de Brometo ........................................................115 8.4.3 Quantificao de KMnO4 ..........................................................115 8.5 Produo de Biosurfactante ....................................................................115 8.5.1 Acinetobacter ............................................................................115 8.5.2 Rhodococcus ............................................................................116 8.6 Purificao do Biosurfactante (Ac) ..........................................................117 8.7 Purificao do Biosurfactante (R) ............................................................117 8.8 Dosagem de Surfactante Mtodo Fenol / Sulfrico ..............................117

8.9 Determinao da Tenso Superficial e Interfacial ...................................118 8.10 Ensaios de Batelada Surfactante / PCE .............................................118 8.11 Ensaio de Coluna Surfactante PCE .................................................119 8.11.1 Saturao da Coluna ...............................................................119 8.11.2 Ensaio de Solubilizao e/ou Mobilizao por Biosurfactante .........................................................................119 8.11.3 Extrao de PCE ....................................................................119

9. Resultados e Discusses de Remediao do PCE .....................................120

9.1 Caracterizao da Areia ..........................................................................120 9.2 Oxidao Qumica por KMnO4 .................................................................120 9.2.1 Anlise do Efluente ..................................................................121 9.2.2 Ensaio de Traador ..................................................................123 9.2.3 PCE Removido .......................................................................124 9.3 Solubilizao / Mobilizao usando Biosurfactante ................................129 9.3.1 Determinao da Tenso Superficial e Interfacial ....................129 9.3.2 Ensaios de Batelada Surfactante / PCE ................................130 9.3.3 Ensaio de Coluna Comparao entre Ac e R ........................131 9.3.4 Ensaio de Coluna Comparao entre Ac e KMnO4 ...............132 9.4 Biodegradao de PCE ...........................................................................134 9.5 Concluses Parciais ................................................................................135

10. Concluses e Sugestes .............................................................................136

10.1 Concluses ............................................................................................136 10.2 Sugestes para Pesquisas Futuras .......................................................139

11. Bibliografia .......................................................................................................140 ANEXO .....................................................................................................................151

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LISTA DE SIGLAS
CETESB Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental do Estado de So Paulo CONAMA Conselho Nacional de Meio Ambiente do Brasil CMC Concentrao crtica micelar (Critical Micell Concentration) GPR Radar de penetrao no solo (Ground Penetration Radar) HLB Balano hidroflico-hidrofbico HPA Hidrocarbonetos poliaromticos NAPL Lquidos no miscveis em gua (Non Aqueous Phase Liquid) PCB Bifenila policlorada PCE Tetracloroetileno PL4 Ponto de coleta da rea do lixo onde foi encontrado PCB na fase livre (Duque de Caxias RJ) R Ponto de coleta referente a Praia da Ribeira (Ilha do Governador RJ) USEPA United States Environmental Protection Agency

LISTA DE SMBOLOS
A seo da amostra de solo Ac biosurfactante produzido por Acinetobacter h altura da carga hidrulica k coeficiente de permeabilidade K1 constante de degradao do PCE Koc coeficiente de adsoro no solo Kow coeficiente de partio octanol/gua

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L comprimento da amostra de solo n porosidade Q vazo R biosurfactante produzido por Rhodococcus t tempo Vv volume de vazios o potencial eltrico

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1. INTRODUO
1.1 RELEVNCIA DA PESQUISA
Nos ltimos 200 anos verificou-se o rpido crescimento da populao por todo o planeta, resultando na necessidade de quantidades cada vez maiores de combustveis, desenvolvimento da indstria qumica e farmacutica, de fertilizantes e pesticidas para sustentar e melhorar a qualidade de vida. Embora muitas dessas substncias qumicas sejam utilizadas ou destrudas, um grande percentual lanado na atmosfera, gua e solo, representando um risco potencial para o meio ambiente e conseqentemente um risco para a vida humana. A poluio se tornou inaceitvel para a sociedade, aumentando a preocupao com os seus efeitos sobre o meio ambiente. Preocupaes com a qualidade do ar e das guas so antigas, mas as preocupaes com solos contaminados s se tornaram evidente no final da dcada de 70. Infelizmente impossvel reverter todos os danos causados ao ambiente utilizando tcnicas de remediao. As estratgias modernas de gerenciamento tm dado nfase minimizao de resduos, reciclagem e remediao em preferncia disposio dos resduos no meio ambiente. O relatrio de reas contaminadas no estado de So Paulo, publicado pela CETESB em maio de 2002, nos d um retrato da situao do subsolo de umas das regies mais industrializadas do pas. Dos 255 casos registrados, 60% esto relacionados a contaminao por combustveis (gasolina e diesel), 15% a solventes clorados, 5% a solventes orgnicos no clorados e 3% a hidrocarbonetos poliaromticos. Os outros casos envolvem pesticidas e metais pesados. Das 153 reas contaminadas por combustveis, 24% no definiram nenhum processo de remediao (135 so provenientes de postos de gasolina), nas outras 76% esto sendo empregadas tcnicas de remediao (bombeamento e tratamento 44%, remoo da fase livre 16%). No caso da contaminao por solventes clorados, a situao ainda mais crtica, somente em 29% dos casos foi proposta alguma tcnica de remediao. Tambm para solventes clorados a tcnica mais utilizada foi bombeamento e tratamento. Um ponto muito importante que deve ser considerado na escolha da tcnica, no somente o percentual de eficincia do mtodo e sim a quantidade de contaminante que permanece no ambiente sem causar nenhum risco ao ambiente e a sade humana. Muitos so os casos em que o mtodo remove ou

destri a maior parte dos contaminantes presentes no meio. Contudo, deve ser observado se o contaminante que no foi removido ou o produto de reao formado durante o processo de remediao continua oferecendo risco a sade humana. de domnio pblico que a Legislao Brasileira (Resoluo CONAMA 20/86) contempla somente padres de qualidade para gua. No que diz respeito s substncias que devem ser monitoradas somente a quantidade de fenis e de surfactantes so regulamentadas. Todas as outras substncias orgnicas, comprovadamente nocivas ao ambiente e aos seres vivos no foram ainda regulamentadas. Cabe ao rgo fiscalizador utilizar o bom senso e as normas internacionais como as da Agncia Americana de Proteo Ambiental e a do Ministrio de Planejamento Territorial e Meio Ambiente da Holanda para definir os nveis de descontaminao que devem ser alcanados. Tambm responsabilidade da sociedade, principalmente a comunidade cientfica, sugerir e monitorar as aes tomadas pelos rgos fiscalizadores e empresas. A persistncia de xenobiticos1 orgnicos no ambiente um problema de importncia pblica, cientfica e legislativa, devido ao seu potencial txico, mutagnico, carcinognico e habilidade de se acumular na cadeia trfica. No passado a poluio qumica no solo foi tratada utilizando processos fsicos e qumicos, que provaram ser muito dispendiosos e muitas vezes ineficientes. Os microrganismos, mais do que qualquer outra classe de organismos, tem a habilidade nica de interagir qumica e fisicamente com uma grande variedade de compostos naturais e sintticos, levando mudana estrutural ou at completa degradao da molcula. O desenvolvimento relativamente recente da biorremediao contribuiu para aumentar as alternativas de remediao in situ e ex situ de reas contaminadas. Tratamentos ex situ envolvem a remoo fsica da matriz contaminante para reatores, pilhas de compostagem ou lagoas. Muitas tcnicas (e.g., aterro de disposio, incinerao) apenas diluem ou seqestram o contaminante, ou o transferem para outro ambiente. Por outro lado, a biorremediao pode ser considerada como a tcnica mais efetiva e menos nociva ao ambiente, desde que resulte na transformao parcial ou completa do xenobinte orgnico em biomassa microbiana e subprodutos incuos (SEMPLE et al., 2001).

Molculas estranhas ao ambiente. Substncia qumica sinttica encontrada num sistema biolgico, mas de origem no biognica.

Os processos oxidativos avanados (POA) englobam uma srie de tecnologias emergentes, algumas delas recentes, outras resgatadas de conhecimentos de domnio pblico, que tm como uso em comum o uso do radical hidroxila (HO) na oxidao de contaminantes presentes em matrizes de interesse ambiental. Os POAs aparecem como tecnologia alternativa, extremamente competitiva no cenrio ambiental, e tm sido aplicados com sucesso na descontaminao in situ de solos, desinfeco de gua, na remoo de cor e de contaminantes orgnicos em efluentes industriais, alm de uma vasta gama de aplicaes na destruio de passivos ambientais. A remediao de compostos recalcitrantes ou de contaminantes adsorvidos na matriz do solo pode necessitar da adio de agentes qumicos, tal como os tensoativos, que promovem a solubilizao e/ou mobilizao dos contaminantes. Os tensoativos so agentes tensoativos capazes de baixar a tenso superficial e interfacial de lquidos. Os biosurfactantes so produzidos por um grande nmero de microrganismos, como por exemplo as bactrias, que representam uma grande diversidade de molculas e estruturas qumicas. A grande vantagem dos biosurfactantes em relao aos tensoativos qumicos a de serem potencialmente menos txicos e mais biodegradveis (SHAFI e KANA, 1995; BARKAY et al., 1999, TOREN et al., 2001). Contudo, o resultado de cada uma dessas tcnicas est diretamente relacionado com as propriedades fsico-qumicas do contaminante. Por exemplo, a eficcia da biorremediao est associada biodisponibilidade do contaminante, de preferncia se o contaminante estiver solvel em gua. Muitas vezes o composto extremamente txico, o que vai inibir o crescimento de um grande nmero de microrganismos. Nesses casos necessria a utilizao de tcnicas combinadas a fim de melhorar a eficincia da remediao.

1.2 OBJETIVO
O objetivo deste trabalho foi o de selecionar e avaliar tcnicas de remediao que envolvem a transformao de compostos recalcitrantes (HPAs, PCBs e PCE) em substncias incuas ou que aumentem a solubilidade e a mobilidade desses compostos na matriz do solo. Dentro desse quadro a primeira parte do estudo envolveu a tcnica de biorremediao na degradao de hidrocarbonetos poliaromticos e bifenilas policloradas. A rea da Baa de Guanabara possui reas bastante favorveis proliferao de microrganismos capazes de degradar compostos persistentes (MESQUITA, 1994; CRAPEZ et al., 2000). Esse fato o resultado de anos de descaso nos lanamentos e vazamentos de hidrocarbonetos de petrleo na regio da Ilha do Governador, onde se encontra um dos mais antigos locais de estocagem de um distribuidora de combustveis na Paria da Ribeira. Outro local a regio de Duque de Caxias, onde foi instalada a Refinaria de Duque de Caxias e outras empresas petroqumicas. A idia foi isolar um grupo de microrganismos adaptados s condies fsicas e qumicas de regies tropicais e adaptados s altas concentraes de hidrocarbonetos aromticos e organo-clorados. Devido alta toxicidade e baixa solubilidade das bifenilas policloradas foi necessrio estudar uma outra tcnica, que combinada biorremediao seria possvel promover a eficincia na degradao. A segunda parte do trabalho envolveu a comparao do comportamento de um contaminante orgnico mais denso que a gua no solo, entre a tcnica de lavagem de solo utilizando o biosurfactante produzido na primeira fase e a tcnica de oxidao qumica que utiliza soluo de permanganato como agente oxidante.

1.3 CAPTULOS DA TESE

Esse trabalho se constitui em captulos que compreendem o comportamento de poluentes orgnicos mais densos que a gua no ambiente assim como tcnicas que podero ser utilizadas na remediao de reas contaminadas por estes. O Captulo 2 traz a avaliao do problema ambiental relativo contaminao por hidrocarbonetos poliaromticos (HPAs) e bifenilas policloradas (PCBs), rotas e degradao. O Captulo 3 apresenta as tcnicas de biodegradao e oxidao qumica por Reagente de Fenton na degradao de HPAs e PCBs. No Captulo 4 as metodologias analticas empregadas nos ensaios de biodegradao e oxidao qumica so descritas detalhadamente, com o objetivo de facilitar o desenvolvimento de outros trabalhos. O Captulo 5 apresenta e discute os resultados obtidos nos ensaios de biodegradao de HPAs e PCBs assim como os de oxidao qumica de PCBs. Assim como algumas concluses parciais. O Captulo 6 faz um histrico da produo e utilizao de tetracloroetileno (TCE), rotas no ambiente e vias de degradao. No Captulo 7 so apresentadas a tcnicas para remoo de PCE, na fase livre, em meio poroso: oxidao qumica por permanganato de potssio e biosurfactante. No Captulo 8 as metodologias analticas empregadas nos ensaios de coluna utilizando permanganato e biosurfactnate. O resultados dos ensaios de coluna utilizando permanganato de potssio e biosurfactante so apresentatos no Captulo 9. As concluses e consideraes finais so relatadas no Captulo 10.

PARTE I

2. HIDROCARBONETOS POLICLORADAS
2.1 INTRODUO

POLIAROMTICOS

BIFENILAS

O sculo XX foi marcado pela introduo de uma grande quantidade de novas substncias orgnicas no ambiente. Normalmente, tomos de carbono e outros componentes elementares dessas molculas foram sendo reciclados atravs da transformao microbiana. Contudo, muitas dessas substncias qumicas so muito persistentes quando lanadas no ambiente. Os Poluentes Orgnicos Persistentes (POPs) so substncias persistentes que se bioacumulam e representam risco a sade humana e ambiental. amplamente aceito que o uso de substncias txicas, persistentes e que bioacumulam, no pode ser considerado uma prtica sustentvel. Contudo, por diferentes razes sociais e econmicas essas substncias ainda esto em uso ou so lanadas no meio ambiente, ou ambos. Existem evidncias da capacidade dessas substncias serem transportadas para regies onde nunca foram usadas ou produzidas, colocando em risco todo o planeta. A comunidade internacional tem se mobilizado para que sejam tomadas aes globais urgentes a fim de reduzir e eliminar o lanamento dessas substncias. A Conferncia das Naes Unidas sobre Meio Ambiente e Desenvolvimento (UNCED), realizada em junho de 1992, sancionou a Agenda 21, com um plano de ao para o desenvolvimento sustentvel do planeta. O Captulo 19 da Agenda 21 direcionado ao gerenciamento de substncias txicas, fortalecendo a coordenao internacional de atividades relacionadas ao gerenciamento de produtos qumicos promovendo a troca de informaes sobre cuidados, usos e emisses dessas substncias. O Conselho Governamental do Programa Ambiental das Naes Unidas (UNEP), na sua 19 sesso realizada em fevereiro de 1997 determinou que 12 substncias (POPs) devero ser banidas a fim de reduzir riscos sade humana e ambiental, sendo elas: PCBs, dioxinas e furanos, aldrin, endrin, dieldrin, DDT, clordano, hexaclorobenzeno, mirex, toxafeno e heptacloro. O possvel destino dos contaminantes orgnicos e seus metablitos no meio ambiente incluem a volatilizao, biodegradao, transferncia para organismos, ligaes entre as partculas do solo e percolao para o lenol fretico (Figura 2.1). As interaes solo - contaminante ocorrem atravs de vrios tipos de foras interativas, como dipolo-

dipolo, dipolo / dipolo-induzido e pontes de hidrognio. A matria orgnica presente no solo considerada o fator dominante da interao entre o solo e o contaminante orgnico (PIGNATELLO et al. 1998).

volatilizao bioacumulao

processos biolgicos,

Contaminante Orgnico
fsicos e qumicos

Produto de Degradao

MINERALIZAO

CO2 e H2O

interaes no solo percolao

Figura 2.1: Esquema do destino de contaminantes orgnicos no ambiente (adaptado de SAMPLE et al., 2001).

Uma dos principais problemas causado pelos POPs est relacionado propriedade lipoflica dos compostos, fazendo com que eles se acumulem nos tecidos adiposos de animais e seres humanos. A concentrao deles tambm vai aumentando medida que se aproximam do topo da cadeia alimentar. Por serem semivolteis podem ser transportados por milhares de quilmetros, depositando-se em reas onde essas substncias nunca foram utilizadas. Podem tambm se acumular no sedimento e lentamente mover-se para corpos dgua, conseqentemente afetando os animais que retiram seus alimentos dessas reas (CONNELL, 1988). Por exemplo, existe uma tendncia s populaes do rtico de serem muito mais afetadas que as de qualquer outra parte do planeta. Devido baixa temperatura dos plos, as substncias presentes na atmosfera ao atingirem essas reas tendem a precipitar. Outrossim, a baixa variedade da dieta alimentar, que se baseia na pesca e caa de animais do local. Os efeitos causados sade dessas populaes so impressionantes: cncer,

distrbios do sistema reprodutivo, problemas de desenvolvimento e do sistema imunolgico.

2.2 HIDROCARBONETOS POLIAROMTICOS (HPAS)

A dcada de 1970 vai ser lembrada como o perodo em que a sociedade civil e o meio cientfico se conscientizaram do impacto que a tecnologia e fatores associados tiveram sobre a sade humana. No Brasil, somente na dcada de 80, iniciou-se um processo de conscientizao. Em particular, algumas substncias qumicas passaram por uma severa investigao a fim de determinar seus efeitos biolgicos em termos de potencial carcinognico, mutagnico, teratognico2 ou outros efeitos txicos que possam afetar o comportamento, reproduo, longevidade ou a sade em geral. Um grupo dessas substncias qumicas que recebe redobrada ateno o dos hidrocarbonetos poliaromticos (HPAs), provavelmente o contaminante ambiental mais comum no nosso planeta. Durante os ltimos 3 sculos, a relao entre a alta incidncia de cncer nas reas urbanas e industriais muito maior que na zona rural, e a exposio de seres humanos a HPAs estimularam uma srie de pesquisas sobre fontes geradoras, bioacumulao, metabolismo e disposio em ecossistemas aquticos e terrestres. O termo HPA geralmente se refere a hidrocarbonetos (substncias formadas por carbono e hidrognio) que contm dois ou mais anis benznicos fundidos na forma linear, angular ou agrupados (Figura 2.2). Muitos HPAs podem conter grupos alquil ou nitro como substituinte ou podem ser consideradas como molculas heterocclicas quando um dos carbonos substitudo por nitrognio, oxignio ou enxofre. Os HPAs so compostos hidrofbicos e a sua persistncia no ambiente principalmente devida a sua baixa solubilidade em gua. O aumento do nmero de anis aromticos geralmente faz com que haja a diminuio da solubilidade e o aumento da hidrofobicidade do HPA, alm de diminuir a volatilidade do composto (Tabela 2.1).

Agente fsico ou qumico causador de monstruosidade.

Os HPAs so formados naturalmente durante o processo geolgico termal e durante a queima de vegetao. Contudo, as principais fontes de HPAs no meio ambiente so de origem antropognica, particularmente a queima de combustveis fsseis, processos de pirlise, derramamento de produtos de petrleo e incinerao de lixo (BLUMER, 1976). O destino dos HPAs na natureza influenciado por uma srie de fatores que determinam a taxa de degradao e a extenso do metabolismo, como: propriedades fsico-qumicas dos HPAs (peso molecular, solubilidade em gua, volatilidade, presena de grupos funcionais, concentrao); pH do meio; temperatura; concentrao de oxignio; salinidade; tipo de sedimento; e nutrientes.

Naftaleno

Acenafteno

Acenaftileno

Fluoreno

Antraceno

Fenantreno

Pireno

Benzo[a]antraceno

Benzo[a]pireno

Figura 2.2: Estruturas de HPAs

2.2.1 ROTA DOS HPAS NO AMBIENTE A rota principal de transporte dos HPAs feita atravs da atmosfera. Resultados de monitoramento ambiental mostraram que concentraes de HPAs so da ordem de poucos nanogramas por metro cbico de ar. Os veculos motorizados - automveis,

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caminhes e nibus - tambm contribuem para o aumento para a poluio atmosfrica com HPAs atravs da exausto de gases, partculas de pneu e leo lubrificante. Durante o processo de combusto, os veculos que utilizam o leo diesel so a maior fonte de HPAs de baixo peso molecular para a atmosfera, enquanto os veculos movidos a gasolina so fonte de HPAs de alto peso molecular (HOLLIGER, 1997).

Tabela 2.1: Propriedades fsico-qumicas de alguns HPAs (The Merck Index, 1996).

HPA

N de anis aromticos

Ponto de Ponto de Solubilidade Fuso ( C) 101 216 11 158 149 255 179 262 222 163 Ebulio ( C) 340 340 250 400 360 488 496 524 536 1,29 0,07 0,26 0,014 0,14 0,002 0,0038 0,0005 0,0003 0,062 (mg/l)

Log Kow *
( )

Presso de Vapor
(Pa a 20 C)

Fenantreno Antraceno Fluoranteno Benzo[a]antraceno Pireno Criseno Benzo[a]pireno Dibenzo[a,h]antraceno Benzo[g,h,i]perileno Indeno[1,2,3-c,d]pireno
( )

3 3 4 4 4 4 5 5 6 6

4,46 4,45 5,33 5,61 5,32 5,61 6,04 5,97 7,23 7,66

0,0853 0,0267 8,0 x 10-4 6,6 x 10-7 9,1 x 10-5 8,4 x 10-5 6,7 x 10-5 1,3 x 10-8 1,3 x 10-8 1,3 x 10-8

* Kow: coeficiente de partio octanol/gua

Os HPAs so caracterizados pela baixa solubilidade em gua e alto coeficiente de partio octanol-gua. Devido a essa hidrofobicidade natural, os HPAs se acumulam nas partculas finas e na matria orgnica do sedimento marinho, tornando-o assim, um reservatrio de HPAs. Esse acmulo nos sedimentos marinhos pode ser proveniente de vrias fontes, incluindo deposio atmosfrica, produo off-shore, transporte de petrleo e lanamento de esgoto. A concentrao de HPAs no sedimento marinho varia de algumas ng/Kg at g/Kg, dependendo da proximidade de reas industriais, correntes martimas e guas servidas. A concentrao de HPAs em solos contaminados de reas industriais varia

11

em funo da atividade, do tipo de solo, constituintes do solo e grau de saturao do local (Tabela 2.2).
Tabela 2.2: Concentrao de HPAs em solos contaminados. (RIVM, 1989)) Concentrao de HPA no solo (mg / kg) das Indstrias: Produo de Creosoto Naftaleno Acenaftileno Acenafteno Fluoreno Fenantreno Antraceno Fluoranteno Pireno Criseno Benzo[a]antraceno Benzo[a]pireno Dibenzo[a,h]antraceno 2451 12 33 82 92 15 14 106 171 317 33 16 88 1131 33 650 1595 334 682 642 614 3925 49 1368 1792 4434 3307 1629 1303 481 2 225 379 156 2174 491 345 186 43 87 156 53 137 99 Preservao de Madeira Fbrica de Gs Petroqumica Produo de Gs (EUA) 97 28 49 14 26 11 73 47 15 Produo de Gs (Frana) 28 2 4 51 58 195 173 52

HPA

A concentrao de HPAs no solo de pases industrializados revelou um aumento desde meados de 1800, com um pico entre 1950 e 1960. Um estudo feito por JONES et al. (1992) em amostras de solo da Inglaterra, mostrou um aumento de concentrao de HPAs prximo aos centros urbanos. Mas a combusto antropognica de combustveis fsseis e o longo alcance do transporte atmosfrico, contriburam para a disperso de HPAs no ambiente. Observa-se que quando HPAs alquil substitudos predominam nos sedimentos, eles so provenientes de derivados de petrleo, mas

12

quando predominam HPAs sem grupos substituintes, a origem de processo de combusto. Alm do ar, sedimento marinho e solo, os HPAs podem se acumular em organismos marinhos. A entrada de HPAs em organismos marinhos est ligada biodisponibilidade (ex.: partio entre sedimento, gua e alimento), e fisiologia do organismo, sendo influenciada pelo tamanho do organismo, taxa de ingesto, taxa de crescimento, permeabilidade da membrana, taxa de ventilao, tempo de residncia no intestino e regulao osmtica. Na Tabela 2.3 pode-se ver alguns exemplos de acmulo de HPAs em diversos organismos marinhos de vrias regies do planeta. Os HPAs podem ser eliminados dos organismos por difuso passiva ou por excreo de substncias polares, produzidos em algum processo metablico envolvendo HPAs. A presena de HPAs em plantas pode expor indiretamente o homem atravs da cadeia alimentar. Deposies atmosfricas de HPAs sobre plantas, em alguns casos, podem ser assimiladas pelo homem. Se o HPA penetrar na clula, ele pode se transformar em -O-glicosdeo e -O-glucorondeo conjugados; contudo, o destino dessas molculas e seus derivados nas folhas ainda no foram elucidados. Vrios fatores podem influenciar o acmulo de HPAs nas plantas: propriedade fsica do HPA, espcie e estrutura da planta e condies ambientais concentrao atmosfrica de HPAs e temperatura (CONNELL, 1988).

2.2.2 EFEITOS TOXICOLGICOS Estudos de laboratrio mostram que ratos que foram alimentados com alta concentrao de HPA tiveram dificuldades de se reproduzir, assim como a sua prole. Essa prole apresentou uma alta taxa de filhotes com defeitos de formao e baixo peso corporal. No se sabe se esses problemas ocorrem com os humanos. Estudos utilizando animais tambm mostraram que HPAs podem causar efeitos nocivos pele, fluido corporal, e na habilidade de combater doenas aps longo e curto tempo de exposio. Nenhum desses efeitos foi ainda observado em humanos. O metabolismo dos HPAs nos mamferos pode ser observado em muitos tecidos como fgado, pulmo, rins, placenta, trato intestinal, e pele via citocromo P450.

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Tabela 2.3: Concentrao de HPAs detectadas em organismos marinhos de vrias partes do planeta. (adaptado de NEFF, 1985). Organismo Peixe Pseudopleuronectes americans Scophthalmus aquosas Arophysate chuss Moluscos Mytilus edulis Mytilus edulis Mytilidae Litorina littorea Patella vulgata Cardium edule Crustceos Cancer irroratus Homarus americans Homarus americans Esponja do Mar Halichondria panicea Diatomcea Navicula phyllepta Alga Fucus vesiculosus Fucus serratus Noruega Noruega 284 4665 456 2964 Holanda 454 Noruega 769 Golfo de Nova Iorque Golfo de Nova Iorque Nova Esccia 52 1600 129 367 97 88100 Noruega Esccia Noruega Noruega Noruega Itlia 500 12845 54 2803 5000 225000 595 1135 674 15462 198 205 Golfo de Nova Iorque Golfo de Nova Iorque Golfo de Nova Iorque 14 - 315 18 536 143 412 Local de Coleta HPA (ng / g)

Algumas pessoas que respiraram ou manusearam misturas de HPAs por longos perodos de tempo desenvolveram cncer. Animais de laboratrio desenvolveram diversos tipos de cncer quando em contato com HPAs: por via respiratria cncer de pulmo, por ingesto cncer de estomago, ou quando aplicados sobre a pele cncer de pele. O departamento americano de Administrao de Segurana e Sade Ocupacional (OSHA) estipulou um limite mximo de 0,2 mg de HPAs por metro cbico de ar em ambiente de trabalho. O limite de exposio permissvel para leo mineral contendo HPAs de 5 mg/m3 em um perodo mdio de exposio de 8 horas (Agency for Toxic Substances and Disease Registry, 1996).

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2.2.3 VALORES REFERNCIA PARA CONTAMINAO POR HPAs O Brasil ainda no possui uma poltica ou legislao a nvel federal para proteo ou remediao de solos e guas subterrneas. Os parmetros utilizados so os mesmos de potabilidade da Portaria do Ministrio da Sade 1.469, de 29/12/2000. Algumas iniciativas, em termos de legislao, esto sendo tomadas em nveis locais, como o caso da So Paulo (GUIMARES, 2003). Dos HPAs, somente o naftaleno citado na lista da CETESB, como valores entre 15 e 90 ppm para solo e de 100 ppb para gua subterrnea. Contudo, a norma holandesa especifica limites para HPAs, e no somente o naftaleno, conforme a Tabela 2.4.

Tabela 2.4a: Valores referncia para solos segundo a Norma Holandesa.

Concentrao em peso seco (mg/kg) Tipo de Solo Concentrao de HPAs em solo com 0% de teor de argila e 0% de matria orgnica Concentrao de HPAs em solo com 25% de teor de argila e 10% de matria orgnica 1,0 20,5 40,0 Referncia 0,2 Alerta 4,1 Interveno 8,0

Tabela 2.4b: Valores referncia para guas subterrneas segundo a Norma Holandesa.

gua Subterrnea Substncia Naftaleno Fenantreno Antraceno Fluoranteno Benzo(a)antraceno Criseno Benzo(a)pireno

Concentrao em peso seco (g/L) Referncia 0,1 0,02 0,02 0,005 0,002 0,002 0,001 Alerta 35 2,5 2,5 0,5 0,25 0,026 0,026 Interveno 70 5,0 5,0 1,0 0,5 0,05 0,05

15

2.2.4 BIODEGRADAO DE HPAs Desde a dcada de 1970, pesquisadores vm demonstrando que bactrias, fungos e algas possuem atividades catablicas3 que podem ser utilizadas na remediao de reas contaminadas por HPAs (Tabela 2.5).

Tabela 2.5: HPAs oxidados por diferentes espcies de bactrias (adaptado de CERNIGLIA, 1992). Substncia Acinetobacter Naftaleno paucimobilis, Rhodococcus Beijernickia Acenafteno Microrganismo calcoacticus, Burkholderia sp., sp., P. cepacia, Alcaligenes Comomonas renale, denitrificans, testosteroni, sp., Mycobacterium sp., Pseudomonas putida, P. fluorescens, P. Corynebacterium putida, P. Moraxella Bu.

Streptomyces sp. fluorescens, Cepacia, Cycloclasticus sp., Neptunomonas naphthovorans, Alcaligenes eutrophus, Alcaligenes paradoxas Aeromonas Fenantreno sp., A. faecalis, A.denitrificans, Arthrobacter polychromogenes, Beijernickia sp., Micrococcus sp., Mycobacterium sp., P. putida, P. paucimobilis, P. aeruginosa, Rhodococcus sp., Vibrio sp., Nocardia sp., Flavobacterium sp., Acinetobacter sp., Bacillus sp., Comamonas testosteroni, Acidovorax delafieldii Beijernickia Antraceno Gordona sp. Aeromonas Fluoranteno paucimobilis, denitrificans, Bu. Mycobacterium Rhodococcus sp., sp., P. putida, P. Cepacia, Acinetobacter sp., P. putida, Bu. Cepacia, Arthrobacter sp., Acinetobacter sp., Comamonas testosteroni, Sphingomonas sp.,

calcoaceticus, Acidovorans delafieldii, Gordona sp., Pasteurella sp. Aeromonas denitrificans, Mycobacterium sp., Rhodococcus sp., P. Pireno paucimobilis, P. cepacia, Stenotrophomonas maltophilia, Acinetobactec calcoaceticus Rhodococcus sp., P. marginalis, P. paucimobilis, Stenotrophomonas Criseno maltophilia, Acinetobacter calcoaceticus, Agrobacterium sp., Bacillus sp., Burkholderia sp. Benzo[a]antraceno Aeromonas denitrificans, Beijernickia sp., P.putida, P paucimobilis, Stenotrophomonas maltophilia, Agrobacterium sp., Bacillus sp.

Dibenzo[a,h]antraceno P. paucimobilis, Stenotrophomonas maltophilia.

Atividade de degradao ou quebra de molculas para produo de energia.

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Atualmente, a biorremediao tem demonstrado ser efetiva na remediao de solos contaminados com HPAs de baixo peso molecular. Embora a falta de atividade microbiolgica para HPAs de alto peso molecular seja atribuda a fatores especficos de campo, como biodisponibilidade do contaminante, nutriente, potencial redox, etc., o fator limitante pode ser a falta de microrganismos capazes de degradar os compostos com mais de quatro anis aromticos. Embora exista uma grande diversidade de organismos capazes de degradar HPAs de baixo peso molecular, como naftaleno, acenafteno e fenantreno, apenas poucos gneros so capazes de degradar HPAs de alto peso molecular como o b[a]pireno (BOOPATHY, 2000). Acredita-se que as bactrias oxidem preferencialmente hidrocarbonetos aromticos que vo do benzeno ao benzo[a]pireno. No processo oxidativo so gerados cisdihidrodiois pelo processo de incorporao de tomos de oxignio ao anel aromtico tendo as dioxigenases como catalisador. Os cis-diidrodiis so rearomatizados pela ao da enzima cis-diidrodiol desidrogenase. Em seguida, o cis-diidrodiol oxidado a catecol, que substrato para outras dioxigenases que levam quebra do anel aromtico. O caminho oxidativo orto envolve a quebra entre os tomos de carbono dos dois grupos hidroxlicos, formando o cido cis,cis-mucnico. No caminho oxidativo meta quebra a ligao entre o carbono hidroxilado e o carbono adjacente, formando o 2-hidroximucnico semialdedo, conforme a Figura 2.3. O produto final desse processo de degradao resulta na produo de succinato, acetil CoA, cidos pirvico e actico, e aldedos, todos eles utilizados por microrganismos na sntese de constituintes celulares e energia (Ciclo do cido Tricarboxlico). Os subprodutos dessas reaes so CO2 e gua. Uma vez que o primeiro anel aromtico hidroxilado do HPA degradado (cido pirvico e CO2), o segundo anel enzimaticamente processado da mesma maneira. Contudo, muitas molculas de alto peso molecular (benzo[a]pireno) so degradadas com dificuldade, devido a baixa solubilidade, grande energia de ressonncia e toxicidade.

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H O2 dioxigenase benzeno cis-dihidrodiol OH OH H

NAD+ desidrogenase NADH + H

+

OH

OH

Caminho META Caminho ORTO HOOC HOOC cido cis, cis-mucnico O2 CHO COOH OH semialdedo 2-hidroximucnico
H 2O HCOOH O

COOH COOH cido -cetoadpico CoA HOOC - CH 2 - CH 2 - COOH cido succnico + Acetil CoA
O

COOH

cido 2-ceto-4-pentenico

CH3 - C -COOH cido pirvico + acetaldedo

Figura 2.3: Metabolismo microbiano da quebra de anel aromtico pelo caminho ORTO e META (adaptado de CERNIGLIA, 1986).

Os fungos, por outro lado, oxidam os HPAs em trans-diidrodiis, similar oxidao feita pelo sistema enzimtico dos mamferos (Figura 2.4). Estudos feitos com organismos procariticos e eucariticos indicaram que microrganismos fotossintticos tambm so capazes de hidroxilar compostos aromticos (CERNIGLIA, 1986).

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H O2
citocromo P450

OH
rearranjo no enzimtico

O H
H 2O Epxido Hidrolase

O - sulfato

O-glicosdeo

H OH OH H O - glucorondeo

trans - dihidrodiol

Figura 2.4: Caminho metablico utilizado pelos fungos na degradao de compostos aromticos (adaptado de CERNIGLIA, 1986).

19

2.3 BIFENILAS POLICLORADAS

Os compostos organoclorados so uma classe de substncias, em sua ampla maioria sintticas, que incluem diversos tipos de pesticidas, solventes e outras substncias de uso industrial. As bifenilas policloradas (PCBs) so fluidos dieltricos no condutores que foram amplamente utilizadas na indstria por mais de 50 anos, pois acreditava-se que eram compostos no inflamveis e inertes (Figura 2.5).

(meta) 3 (para) 4 5

(orto) 2

Cl
2' 3' 4' 6' 5'

Cl Cl

Cl

1 6

1'

Ex.:

Cl

Clx

Cly

2,3,2',3',4' pentaclorobifenila

Figura 2.5: Estrutura bsica da bifenila com a numerao das posies de substituio dos hidrognios por molculas de cloro.

Entretanto, acidentes em vrias partes do mundo provaram que a combusto de PCBs pode formar subprodutos como dioxinas e furanos que so compostos extremamente txicos. Embora os PCBs estivessem sendo usados desde 1929, somente em 1966, os PCBs foram identificados como contaminantes ambientais durante a anlise de extratos de solo para quantificar DDT e seus metablitos. Contudo, somente na dcada de 1970 que se estabeleceu a ampla distribuio dos PCBs no ambiente (MIHRI e MARSAC, 1997). Na Frana, o uso de PCBs como aditivo foi proibido em 1975. Em 1987, foi proibida a venda e aquisio de PCBs ou aparelhos contendo mais de 100 ppm. No ano de 1992 o limite de tolerncia baixou para 50 ppm. Nos Estados Unidos a produo de PCBs foi encerrada em 1977 devido a evidncias de acmulo no meio ambiente e por causar efeitos nocivos a sade. A maioria dos pases ocidentais baniu a produo e restringiu a comercializao e uso. Contudo, grandes quantidades de PCBs continuam em uso e seu manuseio, destruio, e reposio ainda ocorrem nas indstrias supracitadas. Fica claro que os PCBs so poluentes comuns nos ecossistemas globais, e podem ser identificados no ar, gua, solo, animais e em sangue, leite e tecidos adiposos de seres humanos.

20

A primeira sntese de PCB foi feita em 1881, mas a produo industrial comeou nos EUA apenas em 1929. Essas molculas so formadas a partir do benzeno e do cloro gasoso, em duas etapas: 1. Sntese do ncleo de bifenila por desidrogenao de duas molculas de benzeno a 800C; 2. Clorao progressiva do ncleo de bifenila, pelo ataque do cloro gasoso anidro a 100 C, catalisada por cloreto frrico ou limalha de ferro. Durante a reao possvel verificar o aumento de massa da mistura reacional. A reao interrompida quando o produto da reao atinge a massa correspondente ao teor de cloro desejado na mistura. Embora existam diferentes processos de purificao, o produto final pode apresentar contaminao por produtos mais txicos como policloro dibenzofuranos (PCDF) e policloro dibenzodioxinas (PCDD) exemplificados na Figura 2.6. A toxicidade dessas substncias chega a ser 500 vezes maior que PCBs puros.

Clx

Cly

Clx

Cly

Policlorodibenzodioxina (PCDD)

Policlorodibenzofurano (PCDF),

Figura 2.6: Estrutura molecular das molculas produzidas na pirlise dos PCBs.

Os PCBs eram comercializados por muitos pases sob diferentes marcas: Aroclor (Monsanto, EUA), Phnoclor e Pyralne (Prodelec, Fraa), Clophen (Bayer, Alemanha), Apirolio (Caffaro, Itlia) e Kanechlor (Kanegafuchi Chemical, Japo), sendo a Monsanto o maior produtor mundial. As misturas de PCBs mais comum eram o Aroclor 1242, 1248, 1254 e 1260, contendo 42, 48, 54 e 60% de cloro em peso, respectivamente. O Aroclor continha alm da mistura de PCBs, cloro benzenos e seqestrantes de oxignio.

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2.3.1 PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS DOS PCBs Os PCBs formam uma classe de 209 compostos qumicos diferenciados, chamados de congneres, no qual pode existir de um a dez tomos de cloro ligados a bifenila. A frmula emprica dos PCBs C12H10-nCln, onde varia entre 1 e 10. A frmula estrutural da molcula de bifenila e o sistema numrico dos tomos de carbono de cada anel podem ser observados na Figura 2.6. A Tabela 2.6 mostra como os PCBs podem ser subdivididos pelo grau de clorao, por exemplo, os 24 diferentes compostos de PCB com 3 tomos de cloro so chamados de ismeros do grupo triclorobifenil e que tambm podem ser denominados por PCB 16 a PCB 39, dependendo da posio dos tomos de cloro na molcula de bifenila. necessrio o conhecimento das propriedades fsico-qumicas dos PCBs para o desenvolvimento de modelos de transporte e para avaliar o movimento e destino dos PCBs em stios contaminados. A Tabela 2.7 apresenta os parmetros chave na modelagem do transporte de PCBs no solo e na gua, que incluem o peso especfico, a viscosidade e a presso de vapor para movimento na atmosfera, sendo que esses trs parmetros so funes da temperatura.
Tabela 2.6: Frmula, nmero de congneres, massa molecular dos diferentes ismeros de PCBs.

Frmula Estrutural C12H9Cl C12H8Cl2 C12H7Cl3 C12H6Cl4 C12H5Cl5 C12H4Cl6 C12H3Cl7 C12H2Cl8 C12H1Cl9 C12Cl10

Grau de Clorao 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

N de Congneres 3 12 24 42 46 42 24 12 3 1

N IUPAC dos Congneres 1-3 4 - 15 16 - 39 40 81 82 127 128 169 170 193 194 205 206 208 209

Massa Molecular (uma) 188,65 233,1 257,54 291,99 326,43 360,88 395,32 429,77 464,21 498,66 18,79 31,77 41,30 48,56 54,30 58,93 62,77 65,98 68,73 71,10 % Cloro

22

A solubilidade dos PCBs em gua extremamente baixa, tambm so igualmente insolveis em glicerol e glicis, mas podem ser solubilizados em leos vegetais, gordura animal e por alguns solventes orgnicos - hidrocarbonetos, lcoois, steres e teres. Eles se decompem a temperaturas superiores a 300 C. A temperaturas superiores 500 C, comeam a ser produzidas pequenas quantidades de PCDD e PCDF. A Tabela 2.8 apresenta o comportamento dos PCBs em meio aquoso (METCALF, et al, 1988; BAIRD, 2004).

Tabela 2.7: Propriedades de estado dos grupos de ismeros de PCBs (METCALF et al., 1988). Ponto de Fuso (C) 71 25 77,9 24,4 149 28 87 47 180 76,5 124 77 150 122 149 159 162 182 206 305,9 Ponto de Ebulio (C) 256 285 312 337 360 381 400 417 432 445 456 Presso de Vapor
(Pa a 25 C)

Grupo de Ismeros Bifenila Monoclorobifenila Diclorobifenila Triclorobifenila Tetraclorobifenila Pentaclorobifenila Hexaclorobifenila Heptaclorobifenila Octaclorobifenila Nonaclorobifenila Decaclorobifenila

Estado Fsico slido slido / lquido slido / lquido slido / lquido slido / lquido slido / lquido slido / lquido slido / lquido slido / lquido slido / lquido slido

Densidade 1,0 1,1 1,3 1,4 1,5 1,5 1,6 1,7 1,7 1,8 1,8

Viscosidade (mPas a 25C)

4,9 1,1 0,24 0,054 0,012 2,6 x 10-3 5,8 x 10-4 1,3 x 10-4 2,8 x 10-5 6,3 x 10-6 1,4 x 10-6

17 20 28 56 200 1,5 x 103 2,9 x 104 > 106 > 106 > 106 > 106

23

Tabela 2.8: Propriedades ambientalmente relevantes dos grupos de ismeros de PCBs (NORSTROM, 1988).

Taxa de Grupo de Ismeros Solubilidade em H2O a 25 C (mg / L) Log Kow Fator de Bioconcentrao em Peixes Evaporao a 25 C (g/ (m2 h))

Bifenila Monoclorobifenila Diclorobifenila Triclorobifenila Tetraclorobifenila Pentaclorobifenila Hexaclorobifenila Heptaclorobifenila Octaclorobifenila Nonaclorobifenila Decaclorobifenila

9,3 4,0 1,6 0,65 0,26 0,099 0,038 0,014 5,5 x 10-3 2,0 x 10-3 7,6 x 10-4

4,3 4,7 5,1 5,5 5,9 6,3 6,7 7,1 7,5 7,9 8,3

1000 2500 6300 1,6 x 10

4

0,92 0,25 0,065 0,017 4,2 x 10-3 1,0 x 10-3 2,5 x 10-4 6,2 x 10-5 1,5 x 10-5 3,5 x 10-6 8,5 x 10-7

4,0 x 104 1,0 x 105 2,5 x 105 6,3 x 105 1,6 x 106 4,0 x 106 1,0 x 107

2.3.2 ROTA DOS PCBs NO AMBIENTE No passado, o uso de PCBs como aditivo em vrios produtos, combinado com a disposio no controlada de equipamentos eltricos, resultou na contaminao macia do meio ambiente. Segundo a Agncia Americana de Proteo Ambiental (US EPA) a produo mundial de PCBs at 1980 foi da ordem de 109 Kg sendo que o destino final de 108 Kg foi o meio ambiente. Calcula-se que 106 Kg de PCBs circulam pela atmosfera anualmente. Em termos gerais, os PCBs so compostos altamente resistentes degradao e uma vez liberados no meio ambiente, tendem a se acumular nos organismos e tambm a se biomagnificar ao longo da cadeia alimentar. Por serem molculas lipoflicas, acumulam-se nas clulas gordurosas dos animais. Os PCBs so ingeridos por pequenos organismos e peixes. Esses por sua vez so apanhados por outros animais que se alimentam desses organismos marinhos. Os PCBs se acumulam nos peixes e nos mamferos marinhos, alcanando nveis que podem chegar a milhares de vezes

24

maiores que os da gua. Como por exemplo o estudo realizado nos Grandes Lagos em 1991, mostrando que a concentrao de PCBs nas gaivotas 50000 vezes maior que no fitoplncton da gua. De maneira similar, os nveis de PCBs durante os anos 80, nos ovos do pssaro andorinha-de-Forster, em Green Bay, Winsconsin, eram cerca de 180000 vezes maior que os valores de PCBs encontrados em gua (BAIRD, 2004). Uma vez na atmosfera os PCBs podem percorrer longas distncias e se depositarem em reas muito longe daquela de onde foram liberados. Na gua, uma pequena quantidade de PCB se dissolve mas a maior parte fica ligada matria orgnica e ao sedimento de fundo (BROWN e WAGNER, 1990).

2.3.3 EFEITOS TOXICOLGICOS Os PCBs presentes no ambiente tornou-se matria de preocupao devido ao seu impacto potencial a sade humana, particularmente no que se refere ao crescimento e desenvolvimento. Qualquer avaliao sobre efeitos adversos dos PCBs sade humana deve considerar os seguintes fatores: rota de exposio, durao da exposio e composio da mistura de PCBs. Dependendo dessas variveis os efeitos e os grupos sujeitos exposio podem ser muito diferentes (SAFE, 1986). Os PCBs mais txicos so aqueles que no tm tomos de cloro, ou apenas um, na posio orto aos carbonos que unem os anis (3,3,4,4-tetra-, 3,3,4,4,5-penta- e 3,3,4,4,5,5-hexaclorobifenila), por assumirem a forma coplanar e por se aproximarem do estereoismero de alta toxicidade: 2,3,7,8-tetraclorodibenzo p-dioxina (TCDD). Os compostos mais ativos so substitudos nas posies para e meta em ambos anis. Estudos em trabalhadores que foram expostos a essa substncia mostram alteraes no sangue e na urina que podem indicar problemas de funcionamento do fgado. Animais que consumiram alimentos contaminados com alta concentrao de PCB por um curto perodo de tempo, ou apresentaram problemas de fgado ou morreram. A dose letal para a maioria das espcies animais acima de 1000 mg/kg. Os animais que consumiram alimentos com pequenas quantidades de PCB por um perodo de semanas ou meses, desenvolveram vrios tipos de doenas, incluindo anemia, perda

25

de peso corporal, atrofia do bao e do timo4, enfraquecimento do sistema imunolgico, problemas reprodutivos e de m formao congnita, toxicidade drmica cloracne5, carcinogenese, efeitos hepatotxicos, induo de diversos sistemas enzimticos (ex.: citocromo P 450 monoxigenase dependente), alm de alteraes de comportamento. Alguns levantamentos de trabalhadores expostos a PCB foram associados a cncer de fgado e trato biliar. Ratos que ingeriram alimentos contendo altos nveis de PCB por dois anos desenvolveram cncer de fgado. A EPA e a Agncia Internacional de Pesquisa de Cncer (IARC) determinaram que PCBs so provveis agentes carcinognicos para os seres humanos.

2.3.4 VALORES DE REFERNCIA PARA CONTAMINAO POR PCBs A EPA determinou que a concentrao mxima de PCBs em gua potvel de 0,5 g/L. O departamento americano de Administrao de Alimentos e Drogas (FDA) determinou que a concentrao de PCBs em alimentos como ovos, peixe, carnes e laticnios no devem ultrapassar 0,2 a 0,3 mg/kg. Segundo a Norma Holandesa o valor mximo para PCBs em guas subterrneas de 0,01 g/L. Os valores para solo esto indicados na Tabela 2.9.

Tabela 2.9: Valores referncia para PCBs em solos, segundo a Norma Holandesa. Concentrao em peso seco (mg/kg) Tipo de Solo Concentrao de PCBs em solo com 0% de teor de argila e 0% de matria orgnica Concentrao de PCBs em solo com 25% de teor de argila e 10% de matria orgnica 0,02 0,5 1,0 Referncia 0,004 Alerta 0,1 Interveno 0,2

Timo - glndula endcrina dos mamferos localizadas atrs do esterno que faz parte tambm do sistema de maturao de clulas brancas do sangue, como os linfcitos T. O timo mais importante nos fetos e crianas do que nos adultos.

Cloracne o efeito dos PCBs na pele, como uma grande acne que aparece por todo o corpo. uma doena tpica de pessoas que trabalham com organoclorados e que se manifestou, por exemplo, aps o acidente de Cubato em 1998.

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2.3.5 TRATAMENTO DE REAS CONTAMINADAS POR PCBs Apesar de todas as precaues o risco de vazamento ou incndio em um capacitor ou transformador pode ocorrer a qualquer momento, resultando em uma possvel contaminao ambiental por PCBs e derivados dibenzofurano policlorado (PCDF) e dibenzo-p-dioxina policlorada (PCDD). Conseqentemente, aqueles que possuem equipamentos ou materiais que contenham PCBs tm a necessidade de dispor esse material. A disposio em aterros no elimina o risco de contaminao e tambm no permitida para concentraes de PCBs acima de 500 mg/Kg. O reconhecimento do aumento de reas contaminadas por PCBs, chamou a ateno de indstrias e governos na canalizao de esforos nos processos de descontaminao. Segundo WADE (1988), duas perguntas bsicas devem ser feitas aps a constatao da contaminao: Qual o grau de exposio individual, e quais os riscos que ela representa como resultado da exposio? Qual o nvel de descontaminao necessrio para permitir o retorno s atividades de uso? Os grupos envolvidos nesse processo geralmente incluem: rgos oficiais do governo; Partes responsveis; Empresas contratadas para descontaminar; e Consultores.

Acredita-se que no haja migrao de PCBs para reas distantes da fonte de contaminao, devido alta viscosidade destes compostos, os quais so altamente absorvidos por componentes calcrios e matria orgnica presentes no solo. Ainda assim, no entanto, os PCBs devem ser removidos a fim de prevenir a entrada dessas substncias na cadeia alimentar. Na remediao de reas contaminadas por PCBs, usualmente so aplicadas tcnicas de escavao e remoo, seguida de incinerao. Outras opes como lavagem de solo ou destruio in situ, necessitam de aprovao do rgo regulamentador. O tratamento in situ uma alternativa escavao, remoo e incinerao. A Battelle Pacific Northwest desenvolveu o processo de vitrificao de solo para aprisionar e

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destruir PCBs. Esse processo utiliza dois grandes eletrodos a 1700 C, fundindo, pirolizando e vaporizando compostos orgnicos. Os gases produzidos so coletados e o resduo slido fica inerte no local. Segundo GUERTIN (1988) a eficincia do processo de 99,95%. Os processos de estabilizao e confinamento so utilizados no para remediar, e sim para conter e limitar a difuso do contaminante para outros extratos no poludos. Dentre os processos de tratamento ex situ, o procedimento de incinerao atualmente o mtodo de descontaminao e destruio de PCBs mais usado industrialmente. A combusto dos PCBs pelo oxignio atmosfrico gera basicamente cido clordrico gasoso. O monxido de carbono (CO) e o xido nitroso (NO2) tambm podem ser formados devido ao dficit de oxignio (combusto incompleta) ou excesso de oxignio (oxidando o nitrognio atmosfrico), respectivamente. Nenhum composto do tipo PCDF ou PCDD foi detectado a temperaturas acima de 1000o C. Mtodos biolgicos aplicados recuperao de reas contamiandas por compostos organoclorados tm sido objetos de estudo desde a dcada de 1970, quando foram descobertas bactrias capazes de utilizar a bifenila como fonte de carbono e energia, e de degradar PCBs. A Tabela 2.9 mostra os microrganismos identificados por MIHIRI e MARSAC (1997) e DERCOV et al. (1999) como capazes de degradar PCBs.

Tabela 2.9: Lista de alguns microrganismos capazes de degradar PCBs (adapatdo de MHIRI e MARSAC, 1997, DERCOV et al., 1999).

Microrganismos Bactria Achromobacter sp., Acinetobacter sp., Alcaligenes eutrophus, Alcaligenes faecalis, Arthrobacter sp., Corynebacterium sp., Pseudomonas cepacia, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas paucimobilis, Pseudomonas putida, Pseudomonas testosteroni, Rhodococcus erythropolis, Rhodococcus globerulus Phanerochaete chrysosporium

Fungo

O ataque microbiano molcula de PCB pode ser feito por via aerbia ou anaerbia. As diferentes enzimas das vias metablicas necessrias degradao so especficas

28

ao nvel de cromossoma ou de plasmdeo6. As enzimas responsveis pela degradao aerbia dos PCBs so muito parecidas com as utilizadas no metabolismo de outros xenobiontes aromticos e clorofenis. A Figura 2.7 mostra que a principal via de degradao aerbia dos PCBs por microrganismos ocorre em vrias etapas.

Etapa 1

Cl
O2

Cl

- 2H

Cl

H
2,3 bifenil dioxigenase 2,3 dihidrodiol

OH desidrogenase OH H
2,3 dihidrxi-bifenil desidrogenase

OH OH

O2

Cl COOH
+ H 2O

Cl

hidrolase

OH

COOH
(cido cloro benzico)

COOH

Etapa 2
COOH H2O

O COOH 4-hidrxi-2-oxivalerato aldolase

O H

OH

2-hidroxipenta-2,4dietanoato hidrogenase

HO

+
O
do e de as tal ogen e c r a sid de

O OH O

SCoA

Figura 2.7: Degradao aerbia de PCBs por bactrias (adaptado de SYLVESTRE, 1995).

Plasmdeo: elemento gentico extra cromossomal presentes no ncleo de uma clula. No essenciais sobrevivncia, mas que podem conferir vantagem seletiva s clulas que os apresentam (PELCZAR et al. 1980).

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Na Etapa 1 o ncleo da bifenila vai sofrer duas oxigenaes sucessivas, seguido de clivagem na posio meta. O cido clorobenzico formado menos susceptvel degradao que a molcula de PCB (SYLVESTRE, 1995). O cido clorobenzico que gerado na Etapa 1, Figura 2.7, tende a se acumular dentro dos microrganismos, mas ele pode ser atacado por uma dioxigenase depois por uma desidrogenase, formando clorocatecol. A quebra do clorocatecol pode ser feita em orto ou meta produzindo, respectivamente, a mineralizao do composto clorado ou a formao de um produto txico, como pode ser observado na Figura 2.8.

COOH

HOOC

OH OH

OH

clivagem orto
OH

1
Cl Cl H

Cl

B
clivagem meta

cido clorobenzico

CO2

clorocatecol

A
O COOH O Cl COOH COOH Cl

OH

6 6
HOOC O O HOOC Cl

Cl

COOH COH

Cl

Produto Txico

O O

COOH COOH O

Cl - succinato
Cl

Ciclo do cido Tricarboxlico

Enzima 1: 1, 2-dioxigenase Enzima 2: 3, 5-ciclo hexadieno-1,2-diol-carboxilato desidrogenase Enzima 3: catecol-1,2-dioxigenase Enzima 4: catecol-2,3-dioxigenase Enzima 5: muconato cicloisomerase Enzima 6: muconolactonaisomerase Enzima 7: dienolactona hidrolase Figura 2.8: Principais vias metablicas de degradao do cido clorobenzico.

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O mecanismo de desalogenao redutiva por bactrias anaerbias no muito bem conhecido. Acredita-se que as bactrias utilizem os PCBs como aceptores de eltrons. Os eltrons so introduzidos entre as ligaes C Cl, levando liberao do on cloro e a adio do on hidrognio ao tomo de carbono. A reao pode ser escrita da seguinte forma: R Cl + H+ + 2e- R H + Cl-

Os tomos de cloro das posies meta e para so removidos preferencialmente pelas bactrias anaerbias. Os ons H+ utilizados no processo de desalogenao so provenientes da gua e no de um substrato orgnico (CHEN et al., 1988; COMMANDEUR e PARSONS, 1990; MHIRI e MARSAC, 1997).

2.4 RESUMO DO CAPTULO

Neste captulo foram apresentados contaminantes do tipo HPAs e PCBs, que se tornaram uns dos principais contaminantes ambientais devido a prticas negligentes de uso e disposio final. Ao longo de vrias dcadas, muitos desses compostos tm dado origem a problemas ambientais devido sua toxicidade, persistncia, hidrofobicidade e capacidade de bioacumular. Tambm foi abordado o comportamento e rotas desses contaminantes no ambiente, os efeitos a sade humana e alguns processos de degradao.

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3. TCNICAS DE REMEDIAO QUE UTILIZAM BIORREMEDIAO E REAGENTE DE FENTON

3.1 LQUIDOS NO MISCVEIS EM GUA (NAPLs)
3.1.1 COMPORTAMENTO DE NAPLs NO SOLO O processo de migrao de contaminantes orgnicos no solo controlado pelas propriedades fsico-qumicas da(s) substncia(s) e pelas caractersticas do local. O solo um sistema complexo constitudo por trs fases: (1) gases, (2) lquidos e (3)slidos. Com relao aos componentes orgnicos e inorgnicos do solo, importante ressaltar que os slidos inorgnicos, como os argilominerais, contm superfcies carregadas negativamente e exibir grande capacidade de troca catinica. A matria orgnica do solo tambm funciona como superfcie reativa que ajuda na reteno de contaminantes orgnicos. O tamanho e espessura dos poros, a proporo entre gua e ar nos poros, so exemplos de fatores especficos que afetam a mobilidade do contaminante no solo. Dependendo das caractersticas da rea e das propriedades fsico-qumicas do solo, os contaminantes do terreno podem estar mveis ou imveis. Na zona no saturada, que vai da superfcie at a zona saturada, a contaminao por compostos orgnicos no miscveis em gua (NAPLs) pode estar na fase vapor, dissolvidos ou na fase livre no aquosa. J os aqferos podem ser contaminados pelos compostos solveis em gua, que migram da zona saturada (ALLARD et al. 1997). Os NAPLs podem ser divididos em duas categorias: os menos densos que a gua LNAPLs, e os mais densos que a gua - DNAPLs (Figura 3.1). Os LNAPLs migram verticalmente atravs do solo a partir de uma fonte superficial, por gravidade, atravs da zona no saturada do solo. A fase livre ou fase mvel do LNAPL ao atingir o lenol dgua permanece sobre a franja capilar ou flutuando sobre o nvel dgua, gerando uma pluma de LNAPL. Parte dessa pluma se dissolve pelo contato permanente com a gua, gerando uma pluma dissolvida na gua subterrnea. Quando a quantidade de NAPL muito pequena, todo o contaminante pode ficar retido nos poros como fase residual. Os LNAPLs no ultrapassam o nvel dgua devido sua densidade menor que a da gua. Ao rebaixar-se o nvel dgua, por qualquer motivo, o LNAPL sobrenadante desce junto com a superfcie do lenol. Ao retornar o nvel
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posio anterior, parte do LNAPL, fica retida sob a forma de gnglios, agora na zona saturada. Esses gnglios permanecem no interior do solo como fase residual, de difcil remoo e localizao, mantendo-se como uma fonte contnua de contaminao ao se dissolverem na gua subterrnea.

Partcula de solo NAPL residual

gua

Aqfero heterogneo
Fonte de DNAPL

Aqfero homogneo
Fonte de LNAPL Superfcie do terreno

Pluma dissolvida NAPL residual Poo de produto livre Pluma de vapor LNAPL

Lenol fretico

Subsolo No-saturado

Pluma de vapor DNAPL Camada impermevel

Subsolo saturado

Difuso de contaminantes Direo de fluxo da gua subterrnea

NAPL em meio fraturado (rocha ou argila)

Figura 3.1: Diferentes caminhos dos contaminantes orgnicos no ambiente

Os DNAPLs ultrapassam a superfcie da zona saturada e continuam migrando at encontrarem uma camada de permeabilidade muito baixa, onde permanecem sob a forma de poas (pools), que so regies de alta saturao residual. Podem ainda romper a estrutura da camada de baixa permeabilidade e penetrar atravs de fissuras. Por esse motivo os DNAPLs atingem grandes profundidades e so de mais difcil remediao que os LNAPLs. Devido heterogeneidade do solo, a distribuio dos DNAPLs no subsolo irregular, o que torna sua remediao mais difcil, quando comparado aos LNAPLs (MARIZ, 2000). Outro fator relevante para descrever o destino do composto orgnico no meio ambiente o coeficiente de partio octanol/gua (Kow), que tambm est relacionado ao coeficiente de adsorso no solo (Koc) e ao fator de bioconcentrao nas espcies aquticas. O Kow definido como a concentrao de um contaminante qumico na fase octanol em relao concentrao na fase aquosa num sistema bifsico octanol/gua. O composto cujo Kow menor que dez, pode ser considerado relativamente hidroflico; isto , ele tende a ter alta solubilidade em gua, baixo coeficiente de adsorso no
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sedimento, e pequeno fator de bioconcentrao. O composto cujo Kow > 4 considerado hidrofbico e tende a se acumular nas superfcies orgnicas, como solo e espcies aquticas.

3.1.2 TCNICAS DE REMEDIAO Dependendo do tipo do contaminante, da rea contaminada, e dos recursos e tecnologias disponveis, pode-se optar pelo uso de tcnicas de remediao in situ ou ex situ. A diferena bsica entre esses dois processos o local onde o contaminante vai ser tratado. A Tabela 3.1 resume e compara uma srie de tcnicas de remediao para compostos orgnicos na forma de piscinas ou plumas, fornecendo uma estimativa de custos. Fica evidenciado que as tcnicas que envolvem processos biolgicos so, em geral, as de menor custo. So vrias as tcnicas de remediao existentes (SCHACKELFORD, 1999) e foge ao escopo deste trabalho a reviso destas tcnicas. Sero abordadas aqui algumas das tcnicas mais usadas para o caso de DNAPLs. Por exemplo, no processo de bombeamento e tratamento7, o bombeamento ocorre no local da contaminao (in situ), mas a remediao do material bombeado ocorre em outro local (ex situ). A tcnica de bombeamento e tratamento tem sido usada na limpeza da fonte ou da pluma de contaminao, a fim de evitar a migrao para o lenol fretico por dissoluo ou disperso. Uma conteno hidrulica para a pluma possvel atravs do uso do sistema de bombeamento e tratamento, mas a limpeza total da rea contaminada requer longos perodos de tempo e conseqentemente alto custo. Este tipo de tcnica s vivel para solos cuja permeabilidade maior que 10-4 cm/s. A eficincia do processo de bombeamento e tratamento pode ser melhorada com o uso de tcnicas combinadas: injeo de tensoativos, co-solvncia, oxidao qumica e biorremediao (LANGWALDT et al. 2000).

ou pump-and treat - Processo de bombeamento da gua de subsuperfcie para a um sistema de coleta na superfcie, atravs de sistema de poos instalados na zona saturada. O material coletado posteriormente tratado por uma ou mais tcnicas de remediao (SCHACKELFORD, 1999) 34

Tabela 3.1: Tecnologias de tratamento de compostos orgnicos (adaptada de SCHACKELFORD (1999) e SEABRA (1997)).
TECNOLOGIAS Biorremediao de solo Biorremediao Superficial Bioventilao Extrao de Vapor Atenuao Natural Landfarming Biopilha Bio-reator Incinerao Proc. Trmicos Aterro de Cobertura Injeo em poos profundos Solidificao Estabilizao Biorremediao de aqferos Air Sparging Bioslurping Fitorremdiao de comp. Orgnicos Paredes de Lama (Barreiras) Extrao de 2 fases (Bomb.) Lavagem do solo Ex Situ Ex Situ Ex Situ In Situ In Situ In Situ In Situ In Situ In Situ In Situ Ex Situ In Situ Ex Situ Tratamento Tratamento Tratamento Tratamento Conteno Conteno Tratamento Tratamento Conteno Conteno Tratamento Disposio Disposio Qumico Fsico Biolgico Fsico Fsico Biolgico Biolgico Fsico Qumico Biolgico Fsico Livre Dissolvida Todas Todas, exceto dissolvida Todas Livre Dissolvida Livre Dissolvida Adsorvida, Vapor.,Cond. 100 a 160/m
3

TIPO In Situ In Situ In Situ In Situ In Situ Ex Situ Ex Situ Ex Situ Ex Situ

CATEGORIA Tratamento Tratamento Tratamento Tratamento Tratamento Tratamento Tratamento Tratamento Tratamento

PROCESSO Biolgico Biolgico Biolgico Fsico Biolgico, Fs.,Qum. Biolgico Biolgico Biolgico Trmico

FASES Todas Adsorvida Condensada Adsorvida Livre Adsorvida Livre Todas Adsorvida, Vapor.,Cond. Adsorvida, Vapor.,Cond. Adsorvida Vapor.,Cond. Adsorvida Vapor.,Cond. Adsorvida Vapor.,Cond. Adsorvida Vapor.,Cond. Todas

CUSTO (US$) 30 a 100 /m 30 a 70/m

3 3

10 a 70/ m

65 a 130/ m zero

135 a 270/m 40 a 200/ton 130 a 200/m

200 a 1000/ton 25 a 30/ m

2

170 a 340/m 10 a 20/m

3

100 a 160/m 225.000/m 30 a 50/m

3

450 a 750/m

85.000 a 500.000/m

O uso das tcnicas de biorremediao e de oxidao qumica por Reagente de Fenton no tratamento de reas contaminadas por compostos orgnicos bem recente (GUERIN, 2000). Conseqentemente, existe pouca informao sobre resultados e eficincia no tratamento de poluentes/mistura de poluentes. Ento os compostos orgnicos mais estudados por essas tcnicas so: os hidrocarbonetos de petrleo monoaromticos (benzeno, tolueno, xileno e etil-benzeno), explosivos (TNT), clorofenis (PCP - pentaclorofenol), pesticidas (cido 2,4 dicloro fenoxiactico e
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diazinon)

hidrocarbonetos

poliaromticos

(HPAs

antraceno,

criseno,

benzo[a]pireno) e solventes clorados (tetracloroetileno e tricloroetileno). As estruturas qumicas de alguns desses compostos podem ser observadas na Figura 3.2.

OH NO2 NO2 Cl Cl

Cl

Cl Cl

Benzeno

Tolueno
NO2

Trinitrotolueno (TNT)

Pentaclorofenol

O - CH2COOH

S
O P O N O

Cl

Cl

cido 2,4 dicloro fenoxiactico

Diazoin

Figura 3.2: Estrutura qumica dos contaminantes de solo e gua mais estudados.

3.2 BIORREMEDIAO
A tcnica de biorremediao consiste no emprego de microrganismos, com ajuda de fatores ambientais, visando a degradao de compostos txicos em produtos neutros que no iro agredir o meio ambiente. A tcnica de biorremediao de solo vem sendo usada h vrios sculos em processos de compostagem de resduos orgnicos, para produzir condicionadores de solo ou adubo. Desde a dcada de 1940 o processo de biorremediao, como tcnica de degradao de contaminantes orgnicos, vem sendo usado na industria de petrleo para tratar resduos do processo de refino. O processo de biorremediao pode ser executado ex situ (i.e. land-farming, bio-pilha, bio-reatores) ou in situ. No processo ex situ o material removido (solos escavados,

36

efluentes, slidos) tratado em sistema aberto ou fechado, utilizando microrganismos na degradao do contaminante. Uma das alternativas a disposio do solo contaminado em clulas ou em reas abertas para a disperso de nutrientes e microrganismos, alm da aerao do sistema. Os principais gastos com o sistema so: escavao e remoo do material contaminado, rea para disposio do solo contaminado, anlises qumicas peridicas para avaliao do mtodo, eficincia do mtodo de oxigenao do sistema. O processo in situ tem como objetivo criar um ambiente favorvel ao crescimento e desenvolvimento de microrganismos capazes de degradar o contaminante no local. O processo envolve projeto e instalao de sistemas de suprimento de nutrientes, microrganismos (no caso da bioaumentao) e oxignio (para estimular processos aerbios) ou nitrognio (para processos anaerbios) em subsuperfcie (MURPHY et al., 1999). A gua doce e do mar, solo e efluentes domsticos possuem grande quantidade e diversidade de comunidades microbianas que demonstram capacidade de degradar molculas xenobiticas. Embora a capacidade de degradao de um organismo ou consrcio seja necessria, a sua mera existncia no o suficiente. Alm disso, as condies devem auxiliar a degradao de modo a aumentar a eficincia do processo. Quando o tempo e as condies so favorveis, mesmo que originalmente no exista nenhuma via metablica, possvel degradar um composto orgnico sinttico ou xenobitico. Por outro lado, clulas bacterianas tendem a limitar a quantidade de cdigos genticos s necessidades presentes, mas a capacidade gentica de certas bactrias ampla e essa caracterstica confere uma vantagem seletiva quando ocorrem mudanas nas condies ambientais, ou por conferir melhor velocidade de crescimento pela bactria portadora, ou por transferir esse cdigo gentico as outras bactrias - atravs de plasmdeos (BARATHI e VASUDEVAN, 2001). Segundo HHENER et al. (1998) existem, no mnimo, quatro vias diferentes que resultam em uma bactria capaz de degradar um certo composto ou grupo de compostos em um determinado stio: 1. A flora microbiana natural ser exposta molcula xenobitica por tempo suficiente de forma a expressar mudanas nos genes capazes de codificarem enzimas para degradao de um composto. Esse tipo de
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evoluo ocorre a todo o momento, mas relativamente lenta. Como conseqncia, a comunidade microbiana passa a ter as vias degradativas, mas a degradao pode ser insuficiente devido ao nmero reduzido de clulas ou baixa atividade; 2. A flora microbiana natural que est adaptada s condies locais, exposta a molculas xenobiticas. Com o tempo as bactrias trocam genes com capacidade degradativa com outras clulas bacterianas prximas. Assim, a transferncia gentica pode ser feita por conjugao, transduo ou transformao. Do ponto de vista da biorremediao, esse tipo de evoluo relativamente lento, mas pode ser melhorado; 3. Como o item 2, a flora microbiana natural pode ser equipada com a capacidade degradativa. Uma vez que o contaminante conhecido, o grupo de genes pode ser introduzido. Se no houver nenhum gen natural, ele pode ser construdo. As cepas de laboratrio podem ser usadas como doadoras, tanto para transferir a capacidade para as cepas isoladas do stio contaminado, ou por introduo de doadores no local e deixar a transferncia ocorrer; 4. Uma bactria capaz de degradar o contaminante isolada do stio contaminado. Contudo, a cepa precisa ser capaz de competir com a flora natural do stio a ser remediado.

3.2.1 FATORES FSICO-QUMICOS QUE INFLUENCIAM O PROCESSO DE BIODEGRADAO Mesmo que o microrganismo possua habilidade para degradar o contaminante existem muitas razes para que esse composto seja degradado lentamente ou no. Entre as razes citam-se: aceptor de eltrons, nutrientes, gua, pH, temperatura e tipo de solo, os quais sero discutidos nos itens abaixo.

3.2.1.1 ACEPTORES DE ELTRONS

Na maioria dos casos, a biodegradao do contaminante depende de atividade aerbia dos microrganismos, embora existam alguns processos que utilizem a
38

biorremediao anaerbia. Muitas vezes, os contaminantes podem servir como doadores ou aceptores de eltrons nas reaes bioqumicas redox, podendo ser parcialmente transformados ou mineralizados. Devido a maior quantidade de energia produzida durante o processo de respirao aerbia, o oxignio o aceptor de eltrons preferido, quando presente. Quando o oxignio livre se torna limitante, os microrganismos passam a usar o oxignio proveniente do nitrato (NO3-) e depois continuam a usar outras formas de oxignio que estejam presentes na regio (SO4-2). As formas oxidadas de ferro e mangans (Fe+3 e Mn+4) tambm podem ser utilizadas como aceptores de eltrons. As formas reduzidas de mangans e ferro (Mn+2 e Fe+2) so capazes de capturar o oxignio, tornando possvel o desenvolvimento de microrganismos anaerbios estritos, como os sulfato redutores e os metanognicos (PELCKZAR, 1980). A Figura 3.3 apresenta a seqncia dos processos microbianos em funo do potencial redox do meio. Na matriz do solo, o oxignio est presente nos vazios dos poros. O solo pode vir a ficar deficiente de oxignio, ou anxico, devido s dificuldades de difuso do O2, quando os poros so preenchidos por gua. Em geral, necessrio um mnimo de 10% de ar na matriz do solo, para manter a atividade aerbia. O aumento do nvel de oxignio no solo pode ser obtido, evitando a saturao com gua. Para garantir a quantidade de oxignio necessrio para manter o crescimento aerbio, podem ser usadas tcnicas de injeo de ar ou perxido de hidrognio (H2O2). O uso de perxido limitado, porque em concentraes acima de 100 ppm ele se torna txico aos microrganismos. Outro problema que o perxido tende a se decompor rapidamente na presena de alguns componentes do solo: H2O2 O2+ H2O Condies anaerbias podem ser usadas para degradar compostos clorados - txicos aos microrganismos aerbios - embora a taxa de degradao seja muito baixa. Aps a etapa anaerbia, pode ser implementado o tratamento aerbio para completar a degradao do composto parcial ou totalmente clorado, assim como outros contaminantes presentes (POLLARD et al., 1994).

39

Potencial REDOX (V) 1,0

Aerbio (O2 como aceptor de eltrons)

Diminuio da energia gerada durante o processo de transferncia de e- (respirao)

O2 + 4H+ + 4e- 2H2O

2NO3- + 12H+ + 10e- N2 + 6H2O MnO2(s) + HCO3- + 3H+ MnCO3(s) + 2H2O

0,5
Anaerbio

0,0

FeOOH(s) + HCO3- + 2H+ + 2e- FeCO3(s) + 2H2O SO4-2 + 9H+ + 8e- HS- + 4H2O 2CO2 + 8H+ + 8e- CH4 + 2H2O 2CO2 + 8H+ + 8e- CH3COOH + 2H2O 2H+ + 2e- H2

Substratos Primrios

-0,5

Figura 3.3: Seqncia dos processos microbianos, em funo do Potencial REDOX (SMITH e McVEY, 1999).

3.2.1.2 NUTRIENTES

Os nutrientes necessrios, em ordem decrescente, para o crescimento celular so: nitrognio, fsforo, potssio, enxofre, magnsio, clcio, mangans, ferro, zinco, cobre e elementos trao. Se os nutrientes no esto disponveis em quantidade suficiente, a atividade microbiana ficar limitada. O nitrognio pode estar presente no solo sob as formas inorgnicas e orgnicas. A forma inorgnica do nitrognio no solo inclui amnia, nitrato, nitrito e xido nitroso. As formas orgnicas ocorrem como aminocidos ou protenas. Em geral, a forma preferida pelos microrganismos a amnia. Quando outras formas de nitrognio esto

40

presentes, elas so convertidas em amnia, para depois serem assimiladas. O fsforo freqentemente limitado devido a sua baixa solubilidade. Em solos orgnicos, o fsforo encontrado no hmus, enquanto a frao inorgnica ocorre em vrias combinaes com ferro, alumnio, clcio e flor. Os compostos inorgnicos so normalmente pouco solveis em gua. Os fosfatos reagem com as argilas formando complexos insolveis de complexos argilo-fosfatados. As formas mais comuns de fosfato no solo so (H2PO4)- e (HPO4)
2

. Em solos cidos, o fosfato precipita na forma

de fosfato de alumnio e ferro, enquanto em solos neutros ou alcalinos ele precipitado na forma de fosfato de clcio. De maneira geral, o fosfato solvel em solos cujo pH vai de 5,5 a 7,0 (ATLAS, 1981; LEAHY et al., 1990).

3.2.1.3 GUA

A gua funciona como veculo de transporte no qual matria orgnica e nutrientes atravessam a parede celular dos microrganismos e leva os sub produtos do metabolismo para fora da clula. O excesso de gua pode ser limitante por inibir a passagem de oxignio pelo solo, a no ser que se esteja querendo trabalhar com condies anaerbias. A gua est presente no solo sob trs formas: livre, capilar e higroscpica. A gua livre aquela que pode se mover livremente atravs do solo. Ela pode deslocar o oxignio da matriz do solo, desenvolvendo condies anxicas. Em stios contaminados, o movimento dessa gua o principal responsvel pelo transporte de materiais para camadas inferiores de solo, podendo at chegar ao aqufero. A gua capilar aquela presente nos poros da matriz do solo quando o solo no est saturado. Essa gua a que est disponvel para os microrganismos. A gua higroscpica representa a gua que est interagindo com a superfcie da matriz do solo. Essa gua extremamente difcil de ser removida do solo e geralmente no est biologicamente disponvel (KING et al., 1992).

3.2.1.4 pH

A solubilidade dos nutrientes e a atividade microbiana esto diretamente ligadas ao pH do solo. A biodegradao de um contaminante por bactrias hetertrofas tipicamente acelerada no pH neutro ou prximo dele. Podemos encontrar valores de pH do solo que vo desde 2.5 (reas de minerao) a 11 (desertos alcalinos). Os valores de pH do solo, em geral, so cidos, assim em muitos projetos de biorremediao, existe a necessidade de neutralizar a acidez do solo de modo a elevar o pH prximo
41

neutralidade. A tcnica mais usada para elevar o pH do solo a adio de cal. A quantidade da cal necessria no determinada somente pelo pH do solo. preciso levar em considerao outros fatores como: textura, quantidade de matria orgnica e capacidade de troca catinica. Os dois fatores mais influenciam na diversidade microbiana, em geral, so o pH e a capacidade de tamponamento do solo.

3.2.1.5 TEMPERATURA

A atividade microbiana est diretamente relacionada com a temperatura. As taxas de reaes metablicas aumentam com aumento de temperatura, sendo que a faixa tima se situa entre 20 e 30C. A temperatura tambm est relacionada com a diminuio do contaminante pelo processo de evaporao. A solubilidade dos contaminantes aumenta com o aumento de temperatura, e a solubilidade do oxignio diminui com o aumento de temperatura (ATLAS, 1981; SONG et al., 1990).

3.2.1.6 SOLO

A textura do solo afeta a permeabilidade, a umidade, e a densidade. A textura do solo deve ser levada em considerao. Para garantir que a adio de oxignio, a distribuio de nutrientes e que a umidade sejam mantidas de maneira efetiva. Por exemplo, solos argilosos so difceis de aerar e resultam numa baixa concentrao de oxignio, dificultando a distribuio e homogeneizao dos nutrientes. Esse tipo de solo tambm capaz de reter gua por longos perodos de tempo aps a precipitao. Durante um longo perodo de chuvas a umidade do solo ficar maior que a necessria ao tratamento. Por outro lado, durante o perodo de seca a umidade ficar abaixo da faixa tima para o crescimento microbiano. Em geral, a biodegradao de contaminantes no solo otimizada quando a umidade do solo est entre 50 e 75% da capacidade de campo8. importante enfatizar que os nveis de umidade devem estar relacionados capacidade de campo e no ao percentual de gua no solo. Se esse fato no for observado, estaro sendo utilizados nveis excessivos de gua no solo, reduzindo assim, o nvel de oxignio disponvel (KING et al., 1992, STURMAN et al., 1994).

Quantidade de gua remanescente no solo aps a gua livre ter sido drenada. 42

3.2.2 ETAPAS DO PROCESSO DE BIORREMEDIAO A biorremediao exerce um papel essencial na explicao da diminuio da concentrao de compostos orgnicos no solo. A mineralizao ou a converso do composto orgnico em substncias inorgnicas pode ser quase que totalmente atribuda ao dos microrganismos. Mas tambm fica claro que os seguintes questionamentos devem ser respondidos antes de se optar pela biorremediao: Quais os compostos presentes e quais devem ser removidos? Que limite de concentrao deve ser alcanado? Os microrganismos a serem usados devem ser endgenos ou exgenos? ALLARD e NEILSON (1997) sugerem exemplos que servem como base para preparar a estratgia de execuo que compreende as seguintes etapas: (1) estudos bsicos de laboratrio, (2) microcosmo usando material do local, e (3) avaliao do sistema em larga escala. importante ressaltar a necessidade da interao da engenharia, da qumica, da microbiologia e da geologia desde o comeo de todo o processo. (1) Ensaios de Laboratrio Os ensaios de laboratrio podem utilizar microrganismos endgenos ou exgenos. Avalia-se o potencial dos microrganismos na degradao do contaminante em estudo levando-se em considerao: taxa de degradao do composto e determinao dos metablitos; parametrizao das necessidades nutricionais (N, P, K) para o melhor desempenho dos microrganismos; ensaio de ecotoxicidade com os subprodutos da degradao se houver. Para os microrganismos exgenos necessrio estabelecer se h alguma relao de competio ou predadora por parte dos microrganismos endgenos. Essa relao pode ser estabelecida por testes de antagonismo.

43

(2) Experimentos em Microcosmo Esses experimentos devem ser preparados utilizando material coletado do stio contaminado para simular condies aerbias, microaerfilas e anaerbias. Os resultados vo fornecer informao suficiente da cintica de reao, necessria operao em larga escala. As informaes mais relevantes so: taxa de decaimento do contaminante; estabilidade dos metablitos e sua toxicidade a biota; determinao de algum composto persistente; estabilidade do sistema aps operao prolongada.

(3) Operao de Campo Nessa etapa essencial avaliao de risco ambiental. Os stios contaminados no possuem as mesmas caractersticas e nem o mesmo tipo de exposio. O tratamento individualizado dos stios possibilita melhor alocao de recursos na remediao e maior proteo ao meio ambiente. Alm disso deve-se visar reduo de riscos, pelo menos, a nveis gerenciveis. A participao de engenheiros e gelogos fundamental na etapa de execuo, principalmente quando se torna necessrio otimizar solues dos ensaios anteriores no campo. aconselhvel avaliar outras tcnicas alternativas para aplicar no campo. Todos os problemas intrnsecos do aumento de escala devero ser resolvidos, o que inclui: mobilidade dos microrganismos, substrato e nutrientes; transporte de oxignio ou outro aceptor de eltron; e a estabilidade do sistema.

3.2.3 CASOS PRTICOS Um bom exemplo da aplicao do processo de biorremediao apresentado por DOTT (1995) - uma rea contaminada por resduo de leo de uma antiga refinaria. Cerca 60000 t de solo estava altamente contaminado por leo, sendo que 1000 litros de leo estavam na fase livre sobre o lenol fretico. A biorremediao do subsolo e da gua subterrnea foi feita por tcnicas in situ e ex situ, monitorada microbiolgica e quimicamente. Foram construdas cinco pequenas reas de teste (5 x 10 m, por 10 m
44

de profundidade), nas quais eram cercados por paredes impermeabilizantes de 11 m de profundidade. Cada uma dessas reas estava equipada com poos de monitoramento e bombeamento. Na rea 1 foi introduzido o KNO3 como aceptor de eltrons, na rea 2 o O2 e na rea 3 o H2O2. As outras duas reas foram usadas como controle. Alm disso, em todas as cinco reas era injetada soluo tampo contendo sais de NH4+ e PO4-3. Aps um ano de remediao foi possvel verificar que a concentrao de leo nas reas tratadas com O2 e H2O2 foi reduzida em 70%, enquanto a rea que recebeu tratamento com KNO3 a concentrao final de leo foi mesma que a das reas controle. Um outro ponto observado foi diferena no tempo de degradao do leo em laboratrio e em campo. Os resultados obtidos em laboratrio em 21 dias, s foram alcanados em campo num perodo de 300 dias. O processo de biorremediao vem sendo amplamente utilizado com sucesso em reas contaminadas por HPAs. Contudo, misturas complexas de HPAs podem favorecer a degradao de compostos com menos de quatro anis, enquanto os compostos com mais de quatro anis permanecem no ambiente. Por esse motivo muito importante fazer o monitoramento da concentrao de todos os compostos presentes durante todo o processo de biorremediao. FREIDIEKER et al. (1994) fizeram o estudo da rea de uma antiga fbrica de pesticidas. Durante 30 anos de produo de pesticida (principalmente lindano9 e cido 2,4,5,triclorofenoxiactico) os subprodutos de reao eram lanados na rea de aterro da fbrica, que com o tempo atingiram o aqfero. Amostras da zona no saturada apresentaram concentraes de compostos orgnicos halogenados na faixa de 1-20 g/kg de solo, enquanto na zona saturada o valor caiu para 3,1-5,5 g/kg de solo. As amostras do aqufero (9-30m) estavam contaminadas com 0,03-0,3 g/kg de solo. Foram instalados uma planta piloto de sistema de tratamento de gua e um conjunto de poos (injeo e bombeamento) sobre a rea contaminada. Um poo de bombeamento foi instalado no centro da rea. A gua bombeada passava pelo sistema de tratamento e era reintroduzida no solo atravs de cinco poos de injeo instalados a uma distncia de 3 m do poo de bombeamento. Vrios poos de monitoramento tambm foram instalados. O sistema de tratamento dgua possua dois filtros para remoo de substncias responsveis pela turvao assim como

hexacloro ciclo hexano HCH 45

precipitados de compostos de ferro na forma oxidada, um filtro biolgico e um filtro de carvo ativado. O filtro biolgico funcionava como um bioreator. O filtro de carvo era responsvel pela remoo de compostos que no eram degradados biologicamente. A durao da operao foi de 300 dias, sendo que fosfato foi adicionado no bioreator e em subsuperfcie aps 113 dias de operao, e oxignio aps 195 dias. Ensaios prvios de laboratrio mostraram que as bactrias autctones possuam habilidade em degradar uma srie de compostos halogenados aromticos e alifticos. Compostos que estavam presentes no campo em concentraes elevadas foram facilmente degradados nos ensaios de laboratrio. Contudo, os resultados da biorremediao in situ mostraram que no houve degradao significativa dos compostos clorados, ao contrrio dos resultados obtidos com o sistema de tratamento do material bombeado. Parte do contaminante removido estava adsorvida no carvo ativado, uma poro menor estava adsorvida s partculas coloidais do filtro para remoo de ferro. A maior poro do contaminante foi mineralizada no bioreator colonizado pelas bactrias autctones. Alguns compostos foram eliminados preferencialmente, como foi o caso do 1,2,4 triclorobenzeno. Como o aqufero estava contaminado basicamente por 1,2,4 triclorobenzeno, pode-se considerar que o sistema de tratamento utilizando bateria de filtros seria efetivo. Segundo MHIRI e MARSAC (1997) o processo biorremediao ideal para PCBs seria associar a degradao aerbia na superfcie e a degradao anaerbia no subsolo. Conceitualmente, duas tcnicas poderiam ser aplicadas: Estabelecer um fluxo de solvente ascendente contnuo a fim de levar os PCBs para as camadas superiores do solo para tratamento ex situ; Criar um ambiente de degradao anaerbia no solo, injetando, por exemplo, nitrognio gasoso para adaptar as bactrias, depois tornar a mesma rea oxidante (injetando ar) e ento inocular microrganismos aerbios. A forte resistncia dos PCBs mais clorados a biodegradao constitui, atualmente, um obstculo implementao de um sistema de reabilitao eficaz. Existem tambm estratgias visando oxidao qumica ou fsica dos PCBs mais clorados, a fim de torn-los mais biodegradveis. Estudos recentes mostraram que o uso do Reagente
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de Fenton (H2O2 e FeSO4) seguido de inoculao bacteriana, aumentou em seis vezes a mineralizao do composto 2,4,2,4-tetraclorobifenil.

3.3 PROCESSOS OXIDATIVOS AVANADOS

Estratgias para controlar o avano da contaminao em aqferos contendo DNAPLs geralmente focam a remoo das piscinas e zonas residuais ou limitam o avano da pluma. A completa restaurao do aqfero contaminado requer a remoo da pluma e da fonte de contaminao. A aplicabilidade da tecnologia de remediao deve ser avaliada em termos de reduo do risco que pode ser alcanada pela sua implementao. Se parte do DNAPL permanecer na matriz do solo aps o uso da tcnica o aqfero poder continuar contaminado por tempo indeterminado, apresentando valores acima dos limites estabelecidos pela legislao. Em outras palavras, para que a reduo do risco atinja nveis significativos, necessrio que seja feita a remoo quase que total da fonte de contaminao. Dentro de um nmero limitado de tcnicas de remediao disponveis para solos contaminados, as tcnicas de remediao in situ como lavagem de solo, extrao por vapor, e esgotamento, so meras tcnicas de separao; sendo necessrio o tratamento posterior do material removido. Tcnicas de biorremediao in situ so normalmente utilizadas na destruio de certos compostos orgnicos, contudo, muitos contaminantes chegam a ser txico aos microrganismos. Os Processos Oxidativos Avanados (POAs) in situ so tcnicas que promovem o aumento da transferncia de massa da fonte de contaminao pela destruio dos compostos orgnicos. Vrios agentes oxidants tm sido utilizados, dentre eles o oznio (O3), perxido (H2O2), reagente de Fenton (Fe+2 / H2O2) e permanganato (MnO4-) (CHAMARRO et al., 2001). As tcnicas de oxidao utilizando reagente de Fenton, permanganato e oznio so as que mais se destacam dentre os Processos Oxidativos Avanados.

3.3.1 REAGENTE DE FENTON

3.3.1.1 FUNDAMENTOS

O perxido de hidrognio (H2O2) tem sido usado como agente oxidante para alguns compostos orgnicos por ser adequado a uma srie de aplicaes na preveno de

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contaminao. Contudo, o perxido de hidrognio sozinho no um bom oxidante para a maioria das substncias orgnicas. Em geral, a combinao do perxido de hidrognio com a luz UV, sais de ferro ou oznio geram radicais hidroxila (HO). De fato, a mistura de sais ferrosos com perxido de hidrognio conhecida como Reagente de Fenton, produzindo radicais hidroxila com grande poder oxidante na degradao de contaminantes txicos. Alm disso, o oxignio liberado na decomposio do perxido aumenta a capacidade degradao dos microrganismos (LU, 2000). Em 1894 H.J.H. Fenton relatou que ons ferrosos, na presena de perxido de hidrognio, promoviam a oxidao do cido mlico. Quarenta anos aps a descoberta de Fenton, Merz e Waters propuseram relaes estequiomtricas que poderiam ser aplicadas na determinao da susceptibilidade de vrios substratos ao ataque do radical hidroxila e os produtos de transformao dos seus intermedirios equaes 3.1 segundo WALLING, 1975.
K1 K2 K3 K4

H2O2 + Fe+2
. HO + Fe+2 . HO + RH . R + Fe+3

. Fe+3 + HO + HO

(3.1 a) (3.1 b) (3.1 c) (3.1 d) (3.1 e) (3.1 f)

Fe+3 + HO H2O + R

Fe+2 + produto

2R

K5

Dmero
K6

. R + Fe+2

Fe+3 + RH

O radical hidroxila gerado por uma cadeia de mecanismos, e reage de maneira rpida e no seletiva com a maioria dos compostos orgnicos pela abstrao de hidrognio ou adio a ligao insaturada C = C. No ataque a ligaes C H por radicais hidroxila, a ordem de seletividade carbono tercirio > carbono secundrio > carbono primrio, porm a reatividade pode aumentar com grupos doadores de eltrons (-OH, -OR, amidas), e pode diminuir com a presena de grupos eletronegativos (cido actico, acetona, halo lcoois). O carbnion gerado pelo ataque do radical hidroxila reage com o O2 para formar organo-perxidos (ROO) que pode se decompor, formando HO2, ou um produto oxigenado.

48

Estudos sobre a oxidao de compostos aromticos pelo mtodo de Fenton indicam a existncia de trs principais grupos de intermedirios chamados de: espcies aromticas oxigenadas, produtos de acoplamento e produtos de abertura de anel. muito importante que se faa um estudo da toxicidade dos produtos de reao, de forma a avaliar a aplicabilidade do mtodo como tecnologia de remediao. Solos contaminados por gasolina e tratados com reagente de Fenton sugerem que os compostos aromticos podem ser mais rapidamente oxidados que os compostos alifticos, indicando que o mtodo pode ser utilizado como tecnologia de degradao da frao mais txica da gasolina (BTEX) (LUNAR et al., 2000). Existem, porm, espcies que mostram resistncia oxidao pelo Reagente de Fenton. Essas espcies so pequenos alcanos clorados (tetracloroetano, tricloroetano), n-parafinas e cidos carboxlicos de cadeia curta (cido actico, oxlico, maleico e malnico). O que chama ateno nesses cidos que eles so produtos de oxidao tpicos da fragmentao de molculas maiores, e alm disso, so metablitos primrios dos ciclos energticos da maioria dos organismos vivos (CHAMARRO et al., 2000). Quando o processo utiliza os Reagentes de Fenton combinados com radiao UVVisvel, chamado de reao Foto-Fenton. Esse processo capaz de aumentar a eficincia na degradao dos compostos orgnicos devido contnua regenerao do ferro (II) via foto-reduo do ferro (III) equao 3.2. Os comprimentos de onda mais importantes nas reaes Foto-Fenton ficam entre 300 e 400 nm, sendo que as emisses solares comeam em 300 nm (KRUTZLER et al., 1999; NOGUEIRA e GUIMARES, 2000; CHEN et al., 2001). Fe+3 + H2O + h Fe+2 + H+ + HO

(3.2)

Inmeros ons metlicos nas suas formas reduzidas (Cu+1, Ti+3, Co+2) tambm possuem caractersticas oxidantes nas reaes de Fenton e por isso, a mistura desses metais com perxido de hidrognio denominada de reagentes Tipo-Fenton. A maior vantagem do processo de Fenton sobre os outros sistemas de produo de radicais hidroxila a sua simplicidade, os reagentes so de fcil aquisio, baixo custo, e os produtos de reao no agridem o meio ambiente. Um ponto comum nos estudos de degradao de compostos txicos utilizando o mtodo de Fenton a

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mineralizao incompleta do composto orgnico envolvido. Como resultado, o uso da oxidao qumica pelo mtodo de Fenton deve ser combinado com outro tipo de tratamento, como a biorremediao.
3.3.1.2 FATORES DE INFLUNCIA NAS REAES DE FENTON

Para o sucesso das reaes de Fenton devem ser estudados os seguintes parmetros: concentrao de perxido de hidrognio, ons ferrosos e frricos, e o pH do sistema. A concentrao de perxido e de ons ferro vai variar em funo do tipo e concentrao do contaminante. Nas reaes com molculas organocloradas, o radical hidroxila ataca o anel aromtico do p-cloro fenol, por exemplo, quebrando a aromaticidade e formando cido clordrico - como pode ser observado na Figura 3.4. Em geral, o grande problema na utilizao de qualquer tcnicade oxidao in situ, inclusive o Reagente de Fenton, reside na dificuldade de contato entre o DNAPL e o oxidante. Dessa forma, como grande quantidade de massa na forma de piscinas ou mesmo residual (gnglios), a remediao comprometida caso no seja utilizado outra tcnica para disponibilizar o DNAPL.

OH

OH

OH

+ HO

.
Cl HO

.
O

+ HCl

Cl

Figura 3.4: Degradao do p-clorofenol pelo radical hidroxila.

Os valores de pH influenciam na gerao de radicais hidroxila e tambm na eficincia da oxidao. Para valores de pH acima de quatro a degradao diminui, porque o ferro precipita na forma de hidrxido. Excesso de perxido pode provocar auto decomposio, formando gua e oxignio e a recombinao dos radiais hidroxila, por isso o perxido deve ser adicionado a mistura numa concentrao tima a fim de alcanar as maiores taxas de degradao. LU et al. (2000) observaram que o timo das reaes ferro-catalizados ocorre em pH 3. WATTS et al. (2000) demonstrou que para ambientes reduzidos contaminados com
50

leo diesel, a faixa de pH entre 2 e 3 foi mais eficiente, mantendo solveis os ons ferro. Segundo UTSET et al. (2000) a formao de radicais hidroxila no pH > 3 tem sido questionada, apontando a existncia de complexos Fe(II)-H2O2 como responsveis pelo ataque de molculas orgnicas. Em solues cidas, a adio a uma ligao dupla ou a extrao de um hidrognio assumida como o primeiro passo do ataque do radical hidroxila s espcies orgnicas. GHALY et al. (2001) avaliaram o efeito do pH na degradao do p-clorofenol. No pH 3 houve 100% de degradao utilizando Fe(III) e 98% utilizando Fe(II), no pH 5 a taxa de degradao caiu para 74% com Fe(II) e 68% com Fe(III). As condies de pH baixo limitam o uso dos Reagentes de Fenton na remediao de solos. Pelos resultados obtidos por WATTS et al. (2000), possvel tratar a frao aromtica da gasolina (BTX) em pH prximo a neutralidade, viabilizando o projeto do tratamento in situ. LEE et al. (1998) propuseram o uso do mtodo de Fenton na remediao de solo altamente contaminado por antraceno (500 mg/kg de solo), onde o etanol utilizado como solvente. Aps o pr-tratamento do solo com reagente de Fenton, foi avaliada a habilidade dos microrganismos isolados da rea contaminada, em degradarem os produtos de oxidao (principalmente a antraquinona). Os resultados do efeito do etanol como solvente no processo de oxidao podem ser observados na Tabela 3.3. A biodegradao do anteraceno segue o seguinte caminho metablico: ANTRACENO ANTRAQUINONA CIDO FITLICO Nos ensaios de laboratrio utilizando as cepas isoladas da rea contaminada, foi possvel verificar que 90% da antraquinona foi degradada em 30 dias, sendo que apenas 30% do antraceno foi degradado no mesmo perodo de tempo. Essa facilidade dos microrganismos degradarem a antraquinona mostra claramente o valor da utilizao do Reagente de Fenton como pr-tratamento de solos contaminados.

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Tabela 3.3: Degradao do antraceno em etanol e em guaa, no processo de oxidao pelo Ragente de Fenton (LEE et al., 1998). Conc. Antraceno antes Conc. Antraceno depois oxidao por Fenton (mg/l)

Antraceno Degradado
(%)

Solvente

oxidao por Fenton (mg/l)

Etanol gua destilada

a b c

666,7 4,5b 659,1 9,2c

> 0,1 0,005 587,9 4,5

99,9 10,8

0,5M Fe+2 (0,6ml) e 30% H2O2 (0,9ml) Antraceno totalmente dissolvido A maior parte do antraceno no estava dissolvida

3.4 COMENTRIOS FINAIS

Como foi citada anteriormente, a tcnica de biorremediao vem sendo bastante utilizada em reas contaminadas por hidrocarbonetos e compostos clorados. Mesmo assim, importante observar que para cada caso necessrio que seja feito um estudo minucioso da rea (i.e. tipo de solo, nutrientes, nvel do lenol fretico, populao bacteriana) para que o resultado da aplicao seja o mais eficiente possvel. Mas tambm deve-se ter em mente que toda tcnica tem limitaes e que, as vezes, necessrio lanar mo de outras tecnologias (i.e. co-solvente, oxidao qumica) para se alcanar os nveis de descontaminao desejados.

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4. MATERIAIS E MTODOS I
4.1 DETERMINAO DOS PONTOS DE COLETA
As reas de estudo esto localizadas na Baa de Guanabara. Uma das reas est localiza ao fundo da Baa, numa regio de mangue, s margens do rio Estrela em Duque de Caxias. O local era utilizado como aterro de resduos das indstrias que operavam ao seu redor. Segundo relato de antigos funcionrios da fbrica, foram enterrados na rea, denominada de lixo, cinco tambores metlicos contendo PCBs, de 200 L de capacidade cada. A rea tambm recebeu grandes quantidades de subprodutos da fabricao de polmeros entre eles hidrocarbonetos aromticos. Foram definidos cinco pontos de amostragem denominados: PL4, PL3, PL2, 32S e 43S (Anexo 1). A retirada de amostras deformadas foi feita utilizando o equipamento GEOPROBE. Foram retiradas amostras de solo a cada metro at a profundidade de 4 m para anlise de contaminao por PCB Uma amostra composta do solo foi enviada para o laboratrio da EMBRAPA Solos RJ para determinao de teor de matria orgnica, enxofre total, ctions trocveis, teor de fsforo e nitrognio pela. Anlise de metais pesados na gua intersticial, curva granulometria e densidade dos gros foram executadas no Laboratrio de Geotecnia, COPPE / UFRJ. A outra rea escolhida foi a Praia da Ribeira, Ilha do Governador RJ, que recebe um aporte dirio de hidrocarbonetos de petrleo (oriundos de indstrias petroqumicas e da estao das barcas) alm de esgoto domstico in natura. Estudos feitos por MESQUITA (1994) mostraram que trs espcies de bactrias isoladas desta rea, foram capazes de degradar petrleo cru em ensaios de simulao de derramamento, utilizando sedimento arenoso no saturado. A partir desses resultados optou-se por coletar amostras de sedimento da mesma regio, a fim de isolar microrganismos capazes de degradar compostos orgnicos persistentes, e que pudessem ser utilizados posteriormente nos ensaios de biorremediao. Os locais de amostragem esto indicados na Figura 4.1.

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DETALHE (B) (A) RIO DE JANEIRO

BAA DE GUANABARA

NITERI

Detalhe (B)
Indstrias Petroqumicas

rea de Estudo Refinaria

Aterro de Gramacho BAA DE GUANABARA

Figura 4.1: As setas indicam os locais de coleta de amostra. (A) rea do lixo Duque de Caxias; (B) Praia da Ribeira, Ilha do Governador.

4.2 ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS

As amostras de sedimento da Praia da Ribeira e rea do lixo foram coletadas em frasco estril e preservadas em geladeira a 4C. Para o isolamento dos microrganismos, foram colocados 10 g de amostra de sedimento em frasco erlenmeyer de 500 mL, contendo 100 mL de meio mineral de composio (g/L): KH2PO4 0,5; Na2HPO4 1,4; NH4NO3 1,0; MgSO4.7H2O 0,1;

54

CaCl2.2H2O 0,02; MnSO4.H2O 0,03. O pH do meio foi ajustado para 7,5. Petrleo cru foi usado como fonte de carbono, adicionado gota a gota at formao de um filme na superfcie do meio. O cultivo foi incubado a 30C, sob agitao (72 batidas por minuto), por 48h. Aps crescimento dos microrganismos procedeu-se o enriquecimento, atravs de seis cultivos sucessivos no mesmo meio para garantir a adaptao dos microrganismos fonte de carbono (Figura 4.2). Ao final do sexto cultivo foi retirada uma alquota da soluo, que sofreu diluies sucessivas em soluo salina para posterior plaqueamento.

(A)

(B)

(C)

Figura 4.2: (A) representa o controle, sem adio de bactrias. (B) e (C) rmostram os estgios de degradao do leo aps duas e uma semana de incubao, respectivamente.

O plaqueamento foi feito em meio especfico para bactrias degradadoras de compostos aromticos, composto por meio mineral descrito anteriormente acrescido de 2% de agar-agrar. Como fonte de carbono foram utilizados cristais de naftaleno adicionados na parte interna da tampa da placa de petri. O material semeado foi incubado a 30C por sete dias. O resultado do crescimento em placa pode ser observado na Figura 4.3. As cepas que cresceram no meio de nafteleno foram isoladas por meio da tcnica de esgotamento. A manuteno das cepas isoladas foi feita em tubo rosqueado contendo meio de cultura slido inclinado, de mesma composio do meio usado para

55

isolamento, acrescido de glicose.

Aps o crescimento a 30C por sete dias, foi

adicionado glicerol estril e preservados a 4C para posterior identificao.

Figura 4.3: Plaqueamento da amostra coletada na Ilha do Governador RJ.

4.2.1

IDENTIFICAO DOS MICRORGANISMOS

As amostras isoladas foram codificadas (B1 - sedimento de mangue; B2 - sedimento de mangue; C - Ilha do Governador; D - Ilha do Governador; G - Ilha do Governador; H Ilha do Governador; I - Ilha do Governador) e enviadas ao Laboratrio de Entereobactrias da Fundao Oswaldo Cruz e a Fundao de Culturas Tropicais Andr Tosello.

4.3 ENSAIOS DE BIODEGRADAO

4.3.1 BIODEGRADAO DE HPAs

Para a determinao do potencial de degradao de hidrocarbonetos de petrleo em funo do tempo, utilizando os microrganismos isolados, foram montados sistemas aerbios, em duplicata, em frascos erlenmeyer de 50 mL de capacidade, contendo 20 mL de meio mineral (MM) adicionado de clulas e aproximadamente 0,1 g de petrleo cru.

56

Foram feitos dois ensaios de biodegradao, um utilizando as cepas isoladas da Ilha do Governador (1ensaio) e outro as cepas da regio de mangue (2 ensaio). O tempo de durao de cada ensaio foi de 282 e 327 horas respectivamente. A incubao foi feita temperatura ambiente sob agitao. A fim de quantificar as possveis perdas por evaporao, foram preparados sistemas contendo apenas meio mineral e petrleo cru. No preparo do inculo, as clulas provenientes de 5 mL do cultivo, em fase exponencial de crescimento, foram separadas por centrifugao, lavadas 3 vezes com soluo salina e resuspensas em 5 mL de utilizou-se em torno de 108 clulas. A cada 24h eram coletados dois frascos de cada ensaio para extrao e quantificao dos HPAs (item 4.5.4). meio mineral. Em todos os sistemas

4.3.2

BIODEGRADAO DE PCBs

Para a avaliao da degradao de PCBs foram montados sistemas anaerbios para comparar a eficincia das bactrias isoladas da Praia da Ribeira e as bactrias isoladas da rea do lixo. Os ensaios foram feitos em duplicata, utilizando frascos de penicilina de 50 mL de capacidade, contendo 30 mL de meio redutor de composio (g/L): Na2HPO4 1,5; KH2PO4 0,5g; NaNO3 1,5; acetato de sdio 1,0; NH4Cl 0,9; Na2S.10H2O 0,38; MgSO4.7H2O 0,1; MnSO4.H2O 0,03; CaCl2.2H2O 0,02; resazurina como indicador de anaerobiose 0,001; e Aroclor 1242 como fonte de carbono (0,15 g/L). Uma vez lacrado o frasco, a purga de oxignio era feita com nitrognio. O preparo do inculo de clulas foi feito utilizando a mistura de bactrias isoladas da Praia da Ribeira (R) e a mistura de clulas isoladas da regio de mangue (PL4). A determinao da concentrao de PCB foi feita aps 280 dias de incubao. A escolha do meio redutor est relacionada s condies de subsuperfcie onde foi encontrada a contaminao por PCB na rea do lixo. Tambm foram feitos ensaios utilizando etanol como co-solvente na biodegradao de PCB, a fim de aumentar a solubilidade do PCB em gua. Os ensaios foram montados em triplicata, de forma idntica ao anterior, variando apenas a fonte de carbono. Nesses ensaios utilizou-se a proporo etanol/gua de 0,015 e 0,075, mas manteve57

se a concentrao de PCB constante (0,5 g/L). A determinao da concentrao de PCB no meio foi feita com 15 e 30 dias.

4.4 DEGRADAO DE PCBs UTILIZANDO REAGENTE DE FENTON

O objetivo desses ensaios de degradao de PCBs utilizando Reagente de Fenton foi determinar a melhor proporo de FeSO4:H2O2 em diferentes valores de pH para degradar PCB. Foram preparadas as solues de ferro em diferentes valores de pH (2,5; 5,5; e 6,8). Todos os ensaios foram feitos em duplicada. Em frasco Erlenmeyer eram colocados 30 mL de soluo de H2SO4 acrescido de FeSO4 previamente pesado. Aps homogeneizao da soluo adicionava-se PCB utilizando micro-seringa e a quantidade adicionada era conferida atravs da pesagem do frasco, antes e aps a adio do contaminante. Em seguida adicionava-se a soluo de perxido cuidadosamente pela parede do frasco. Aps 90 minutos eram feitas as anlises de teor de cloreto nas amostras.

4.5 DETERMINAES QUANTITATIVAS

4.5.1 EXTRAO E QUANTIFICAO DE PCBs NAS AMOSTRAS DE SOLO Pesou-se 4 g, em duplicata, de cada amostra de solo mido em um bquer pequeno e seguido de adio de slica gel 60 (cerca de 2 gramas de slica gel por grama de amostra). Aps misturar bem com uma esptula, a mistura amostra/slica gel foi colocada num tubo com filtro de vidro no extrator de Soxhlet. Para a extrao foram utilizados 15mL de uma mistura de n-hexano/benzeno 3:1 e mais 2 mL de isooctano (P.A., Merck). Para garantir uma temperatura suficientemente alta para o refluxo, usou-se folha de alumnio como isolante. A extrao durou cerca de 2 horas. A mistura de n-hexano/benzeno foi evaporada preferencialmente usando um aparelho de destilao de Kuderna-Danish. Os ltimos resduos de benzeno foram evaporados ventilando a soluo com nitrognio puro at o volume se reduzir at cerca de 0,5 ml. Foram colocados 7 g do agente dessulfurizante (45 g de sulfito de sdio; 5 g de hidrxido de sdio; 395 g de xido de alumnio alcalino) numa coluna cromatogrfica, que foi eluda com 15 ml. O extrato concentrado foi transferido para o topo da coluna
58

contendo o agente dessulfurizante, assegurando a transferncia completa com cerca de 1 ml de n-hexano. O concentrado foi deixado em repouso durante cerca 15 minutos. Utilizou-se 20mL n-hexano na eluio da amostra. O eluato foi coletado em balo volumtrico de 50mL, adicionando-se 2 mL de isoctano. O volume foi completado com n-hexano. Pipetou-se 25 mL da soluo dessulfurada contida no balo de 50 mL para um frasco coletor grande. O volume foi reduzido at 0,5 mL utilizando corrente de nitrognio. Adicionou-se 0,5 mL da soluo do padro interno octacloronaftaleno-OCN (200 g/L) para posterior anlise utilizando cromatografia gasosa (JAPENGA et al., 1987). O aparelho utilizado nas anlises cromatogrficas foi o cromatgrafo a gs com detector de captura de eltrons (CG-DCE) da marca Shimadzu, modelo GC-14B, fonte radioativa de 63Ni, acoplado a um injetor automtico Shimadzu AOC-17. As condies de anlise foram: - Coluna capailar de slica fundida Shimadzu CBP1 (SE-30: polidimetilsiloxana), com 25 m de comprimento; 0,25 m de espessura de filme; ID: 0,22 mm; OD: 0,33 mm; - Gs de arraste: hidrognio ultra puro (99,999%), com fluxo de 1,5 mL.min-1 (purga do septo) e 15 mL.min-1 no injetor; - Gs do detector: nitrognio ultra puro (99,999%), com fluxo de 30 mL.min-1; - Injetor: 300o C, sem diviso de fluxo (splitless por 30 s); - Detector: 310o C. - Programao de temperatura do forno: iniciou a 110o C, onde permaneceu por 1 minuto. A temperatura foi aumentada at 170o C a 20o C.min-1, depois foi aumentada at 290o C a 7,5o C.min-1, sendo o tempo final da corrida de 20 minutos. Utilizou-se o software Borwin 1.2 para a integrao dos cromatogramas e clculo de concentrao dos PCBs. Para quantificao dos PCBs comparou-se o tempo de reteno e a rea de cada composto nos cromatogramas com os de um cromatograma da soluo padro contendo os PCBs 28, 52, 101, 118, 153, 138 e 180. A concentrao desses compostos foi calculada por meio de um fator de resposta (F), oriundo da soluo padro de PCBs, onde so conhecidas as concentraes de seus componentes: F = ([C] x Ppi) / (Pc x [PI])

59

Onde [C]: concentrao do composto na soluo padro (g.L-1); Ppi: rea do pico do padro interno OCN; Pc: rea do pico do composto e [PI]: concentrao do padro interno OCN (g.L-1). Posteriormente, calculou-se a concentrao do composto na amostra em estudo (Ca): [Ca] (g.L-1) = (F x [PIa] x Vfa x PCa )/ Ppia onde F: fator de resposta; [PIa]: concentrao do padro interno OCN na amostra (g.L-1); Vfa: volume final da amostra (mL); PCa: rea do pico do composto na amostra; Ppia: rea do pico do padro interno OCN na amostra.

4.5.2 EXTRAO E QUANTIFICAO DE PCBs NOS ENSAIOS DE BIODEGRADAO Ao final dos ensaios de biodegradao de PCBs as amostras foram extradas trs vezes com 10 mL de n-hexano, em funil de separao. Aps extrao, as amostras eram analisadas por cromatografia gasosa. As condies para as anlises cromatogrficas so apresentadas no Item 4.5.1.

4.5.3 CONTAGEM DE CLULAS As contagens de clulas foram realizadas pelo Laboratrio de Microbiologia, do Departamento de Biologia Marinha UFF, utilizando a tcnica de epifluorescncia (Parrington et al., 1993).

4.5.4 EXTRAO E QUANTIFICAO DE HPAs NOS ENSAIOS DE BIODEGRADA-O Ao final dos ensaios de biodegradao de HPAs as amostras foram extradas trs vezes com 10 mL de n-hexano, em funil de separao. Aps extrao, as amostras eram analisadas por cromatografia lquida.

60

O aparelho utilizados nas anlises foi o cromatgrafo lquido de alta eficincia (HPLC) com detector de UV-VIS da marca SHIMADZU modelo SPD-10A com duas bombas LC-10AT e LC-10AS. As condies de anlise foram: - Coluna Shimadzu SHIM-PACK CLC-ODS (M), 25 cm x 4,6 mm Di, 5m de partcula e poro de 120 ; - Fase mvel: solventes acetonitrila e gua (80:20), com fluxo de 1,8 mL.min-1 e presso de 144 kgf; - Comprimento de onda do detector: 250/300 nm (duas corridas por amostra). - Amostra: injeo loop de 20 L. Utilizou-se o software Borwin 1.2 para a integrao dos cromatogramas e clculo de concentrao dos compostos. Para quantificao dos compostos comparou-se o tempo de reteno e a rea de cada composto nos cromatogramas com os de um cromatograma de uma soluo padro de HPAs. A concentrao dos compostos foi calculada por meio de um fator de resposta (F), oriundo da soluo padro de HPAs, onde so conhecidas as concentraes de seus componentes: F = ([C] x Ppi) / (Pc x [PI]) Onde [C]: concentrao do composto na soluo padro (g.L-1); Ppi: rea do pico do padro interno benzo (b) crizeno; Pc: rea do pico do composto e [PI]: concentrao do padro interno BBC (g.L-1). Posteriormente, calculou-se a concentrao do composto na amostra em estudo (Ca): [Ca] (g.L-1) = (F x [PIa] x Vfa x PCa )/ Ppia onde F: fator de resposta; [PIa]: concentrao do padro interno BBC na amostra (g.L-1); Vfa: volume final da amostra (mL); PCa: rea do pico do composto na amostra; Ppia: rea do pico do padro interno BBC na amostra.

4.5.5 TEOR DE CLORETO A determinao do teor de cloreto dos ensaios de degradao de PCB pelo Reagente de Fenton foi feita segundo o mtodo de Skongsted et al.(1979). Foram preparadas as seguintes solues: - Soluo padro de cloreto 1000 ppm: foram dissolvidos 1,618g de NaCl, seco em estufa a 180C por 1 hora, em 1 L de gua deionizada;

61

- Soluo padro de 10 ppm: foram dissolvidos 5 mL da soluo padro 1000 ppm de cloreto em 500 mL de gua deionizada; Soluo de sulfato frrico amoniacal: foram dissolvidos 8,28 g de FeNH4(SO4)2.12H2O em 114 mL de HNO3 concentrado. Posteriormente a soluo foi diluda para 200 mL com gua deionizada; - Soluo de tiocianato de mercrio: foram dissolvidas 0,75 g de Hg(SCN)2, grau reagente, em 250 mL de etanol 95%. A soluo ficou sob agitao por 1 hora, seguido de filtrao utilizando membrana de acetato de celulose 0,45m. Foram pipetados 1 mL de cada amostra, referente aos ensaios de degradao utilizando reagente de Fenton, em balo volumtrico de 25 mL. A cada amostra foi adicionado 2 mL da soluo de FeNH4(SO4)2, 2 mL da soluo de Hg(SCN)2 e posteriormente avolumados. As leituras em espectrofotmetro foram feitas aps 10 min no comprimento de onda de 460 nm.A curva de calibrao de cloreto foi feita utilizando a soluo padro de cloreto em cinco diferentes diluies, alm de um branco. O aparelho utilizado foi o espectrofotmetro Bausch & Lomb Spectronic 20D. A determinao da concentrao de cloreto (mg/L) foi feita utilizando a curva de calibrao de absorbncia x concentrao de cloreto.

62

5. RESULTADOS E DISCUSSES DE REMEDIAO DE HPAS E PCBS

5.1 SOLO DA REA DO LIXO
Das amostras de solo coletadas na rea do lixo, foram feitas anlises de nutrientes, micro nutrientes, metais e caracterizao do solo na profundidade de 4 metros. Os resultados das anlises esto apresentados na Tabela 5.1. A curva de caracterizao granulomtrica pode ser observada na Figura 5.1.

ABNT
100 90 80 PORCENTAGEM PASSANDO 70 60 50 40 30 20 10 0

ARGILA

SILTE
PENEIRAS:
270

AREIA
FINA 200 100 60 MDIA 40 GROSSA 30 20 10

PEDREGULHO

FINO 4

MDIO 3/8 1/2 3/4 1

GROSSO 11/2 2 3

0 10 20 30 40 50 60 70

LIXO

80 90 100

0.001

0.01

0.1

10

100

DIMETRO DAS PARTCULAS (mm)

Figura 5.1: Curva granulomtrica do solo amostrado na rea do lixo a 4 metros de profundidade.

A escolha da profundidade de 4m para as anlises de solo est relacionada profundidade onde foi encontrado PCB na fase livre, como pode ser observado na Figura 5.2.

PORCENTAGEM RETIDA

63

Tabela 5.1a: Resultado das anlises qumicas da amostra de solo do lixo a 3 metros de profundidade.

Elemento Nitrognio (N) Fsforo (P) Potssio (K) Alumnio (Al) Sdio (Na) Mangans (Mn) Ferro (Fe) Clcio (Ca) Cdmio (Cd) Magnsio (Mg)

Concentrao (mg/kg) 1900 125 1287 0 8855 8,88 119 186 1,24 363

Tabela 5.1b: Resultado das anlises de caracterizao da amostra de solo do lixo a 3 metros de profundidade.

Parmetro Umidade mdia do solo pH Matria orgnica (ataque qumico) Densidade real dos gros

Valor 122,56% 7,7 22% 2,474

Segundo MIRANDA NETO (2002), que fez a caracterizao geotcnica do solo da rea do lixo, os dois primeiros metros so constitudos por uma camada de aterro argilo-arenoso, seguido de uma espessa camada de argila orgnica que vai de 2 a 8 metros de profundidade, como pode ser observado no perfil geotcnico da Figura 5.3. O valor da densidade real dos gros abaixo do tpico (2,65 a 2,70) deve-se, aparentemente, presena de grande quantidade de matria orgnica no solo.

64

Figura 5.2: (A) ponto PL4 no momento de retirada de amostra entre 3 e 4 metros de profundidade. A haste est coberta por um lquido viscoso e brilhante. (B) lquido viscoso recolhido da haste, para anlise cromatogrfica.

Figura 5.3: Perfil geotcnico da rea do lixo (adaptado de Miranda Neto, 2002).

Dos cinco pontos de coleta da rea do lixo foram feitas anlises para determinar e quantificar a presena de PCBs. Os resultados das anlises das concentraes dos

65

PCBs 28, 52, 101, 118, 153, 138 e 180 nas amostras de solo dos pontos PL2, PL3, PL4, 32S e 43S podem ser observadas no AnexoI. Pela Figura 5.4 observa-se que a maior concentrao de PCBs (406 ppb) est localizada no ponto PL4. Nos pontos PL2 (2 e 4 m) e 43S (2 m) os valores de PCBs esto acima do limite de 20 ppb definidos como limpos pela Norma Holandesa (Tabela 2.9). Nos postos PL2, 32S e 43S os valores de PCBs so maiores nas amostras coletadas a 2 metros do que nas amostras coletadas a 4 metros de profundidade.

400

Concentrao total de PCB (ppb)

350 300 250 200 150 100 50 0 PL2 - 2m PL2 - 4m PL3 - 4m PL4 - 2m PL4 - 4m 32S - 2m 3m 32S - 4m 43S - 2m 43S - 4m

Pontos de amostragem

Figura 5.4: Concentrao total de PCBs nos pontos de coleta da rea do lixo. A linha cheia representa a concentrao mxima de PCBs em solo limpo, e a linha pontilhada representa o nvel de qualidade do solo acima do qual representa riscos a sade humana (Norma Holandesa, para solos com 25% de argila e 10% de matria orgnica).

Os altos teores de matria orgnica (22%) e de argila (65%) no solo, associados baixa solubilidade em gua e a alta viscosidade dos PCBs (ver Tabela 2.8), contriburam para o retardamento da pluma de contaminao. Os PCBs so compostos lipoflicos que se ligam a matria orgnica do solo, por ligao covalente ou por ponte de hidrognio, formando um sistema estvel. Quanto maior o tempo de exposio do contaminante, mais estvel a ligao com o solo. Logo, o processo

66

predominante no aumento da zona de contaminao, o processo de difuso (STRUMAN et al., 1995). Como a argila orgnica tem baixa permeabilidade, os PCBs migram lentamente atravs do solo. Por esse motivo, acredita-se que a migrao descendente no pacote de argila orgnica seja pouco crtica. Acredita-se que devido composio do solo na faixa de 0 a 2 metros, argila arenosa, foi possvel que a pluma de PCBs migrasse vertical e horizontalmente. Os nveis de PCBs encontrados no ponto PL2 indicam situao de alerta (acima de 0,5 mg / kg). O ponto PL2 o que fica mais prximo ao canal que passa pela rea do lixo (Anexo 1), onde existe uma populao de caranguejos. Atualmente esta rea est sendo estudada pelo grupo do Museu Nacional / UFRJ em conjunto com o Laboratrio de Radio Istopos / UFRJ para determinar a biodiversidade das espcies de fauna, e quais espcies esto sendo afetadas pela presena de PCBs no ambiente (i.e. taxa de reproduo, tamanho dos espcimes). Embora a maioria dos pontos amostrados esteja abaixo do limite de interveno (1,0 mg/kg), j foi possvel detectar a presena de PCBs em animais que vivem no local. Que esse fato funcione como uma alerta. preciso que sejam tomadas medidas para remoo da fonte de PCBs e posteriormente, eliminao da pluma contaminao. Caso contrrio essa fonte de contaminao permanecer por dcadas, ou at centenas de anos, se espalhando lentamente aumentando a rea de contaminao. Nesse caso, a concentrao e o nmero de espcies contaminadas aumentaro a cada nvel da cadeia alimentar, at chegar ao homem. Procurando apresentar alternativas viveis para eliminao da contaminao de casos como esses, foram realizados ensaios de biodegradao e oxidao qumica de compostos como PCBs e HPAs.

5.2 IDENTIFICAO DE MICRORGANISMOS

A primeira etapa na seleo de mtodos capazes de remediar reas contaminadas por compostos recalcitrantes consiste no isolamento de microrganismos biodegradadores de hidrocarbonetos poliaromticos. A Praia da Ribeira um local que recebe aporte de hidrocarbonetos de petrleo desde 1913, quando foi instalado o primeiro depsito de leo. Com o passar dos anos, o quadro foi agravando com a instalao de outras indstrias petroqumicas, o terminal das barcas e esgoto domstico. Todos esses fatores contriburam para o desenvolvimento de diferentes

67

espcies de microrganismos capazes de degradar HPAs. Por outro lado, a presena recente de PCBs na rea do lixo associada alta concentrao do contaminante no ponto de coleta, contribuiu para a baixa diversidade de microrganismos aptos a degradar compostos persistentes. A Tabela 5.2 mostra o resultado dos testes de identificao dos microrganismos isolados da rea do lixo e da Praia da Ribeira.

Tabela 5.2: Lista de microrganismos isolados da rea do lixo no ponto PL4 (B1 e B2) e da Praia da Ribeira (C, D, G, H, I) capazes de degradar HPAs.

Amostra B1 B2 C D G H I

Gram Positivo Positivo Negativo Negativo Positivo Negativo Positivo

Microrganismo Aneurinibacillus migulanus Microbacterium sp. Pseudomonas vesicularis Achromobarter sp. Bacillus sp. Acinetobacter sp. Bacillus pumilus

A Praia da Ribeira apresentou maior diversidade de microrganismos degradadores de HPAs que a rea do lixo. Alguns autores (SHIARIS, 1989; SONG et al., 1989; AELION et al., 1991; FREDRICKSON et al., 1991; LINDSTROM et al., 1991; STURMAN et al., 1995) relacionam a biodiversidade ao tempo de exposio do ambiente ao contaminante. Isso significa que quando um local recebe uma alta concentrao de um ou mais contaminantes, h uma reduo drstica no nmero de microrganismos. A populao remanescente passou pelo processo seletivo, podendo ter capacidade de degradar o composto ou ser resistente ao mesmo. Com o tempo, esses microrganismos podem vir a incorporar genes que aumentem a sua capacidade de degradao ou de sntese de substncias que facilitem a entrada de compostos insolveis para dentro da clula (i.e. biosurfactantes). Tambm pode haver troca de informaes genticas entre diferentes espcies de microrganismos (PELCZAR et al., 1980). Esse processo de adaptao lento e contnuo.

68

5.3 ENSAIOS DE BIODEGRADAO

No processo de degradao de compostos recalcitrantes, na maioria das vezes, um nico microrganismo no capaz de mineralizar o contaminante. Para aumentar a taxa de degradao e reduzir o tempo do contaminante no meio, devem ser usadas diferentes espcies de microrganismos, alm da suplementao do meio com nutrientes e ajuste de pH (MESQUITA, 1994; KASTANEK et al., 1999).

5.3.1 BIODEGRADAO DE HPAs A concentrao inicial dos HPAs utilizados no 1 e no 2 ensaios esto listados na Tabela 5.3.

Tabela 5.3: Concentrao inicial dos HPAs analisados no 1 e no 2 ensaio. Composto ANTa Concentrao Inicial (g/L)
a

FENb

CRIc

B[b]Fd

B[k]Fe

B[a]Pf

853

3336

3435
e

6240

6805

3206

antraceno, b fenantreno, c criseno, d benzo[b]fluoranteno,

benzo[b]fluoranteno, f

benzo[a]pireno.

Os resultados de biodegradao de HPAs utilizando cepas da Praia da Ribeira so apresentados na Figura 5.5. Observa-se que os compostos com 3 anis aromticos (antraceno e fenantreno) so os primeiros a serem degradados no perodo de 42 horas, permanecendo estvel at o final do ensaio. A partir de 50 horas verifica-se o consumo gradual dos compostos de 4 e 5 anis, sendo a degradao do criseno (4 anis) a mais significativa.

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1 Ensaio de Biodegradao

A ntraceno Fenantreno Criseno B [b]fluo ranteno B [k]fluo ranteno B [a]pireno

Percentual do Composto no Degradado (%)

100 80 60 40 20 0 0 50 100 150 200 250 300

350

Tempo (h)

Figura 5.5: Ensaio de degradao de HPAs utilizando as cepas isoladas da Praia da Ribeira. Os smbolos , | e representa os compostos com 3, 4 e 5 anis aromticos, respectivamente.

No 2 ensaio (Figura 5.6) percebe-se que os microrganismos consomem inicialmente o antraceno. A medida em que a abundncia do antraceno reduz para 25% da concentrao inicial, o fenantreno e os outros compostos de 4 e 5 anis comeam a ser consumidos. A diferena principal no resultado dos dois ensaios que os microrganismos da rea do lixo so mais eficientes na degradao de compostos com 5 anis, no caso, o B[a]pireno.

70

2 Ensaio de Degradao
A ntraceno Fenantreno Criseno B [b]fluo ranteno

100 Percentual Degradado (%)

B [k]fluo ranteno

80

B [a]pireno

60

40

20

0 0 50 100 150 200 250 300 350 Tem po (h)

Figura 5.6: Ensaio de degradao de HPAs utilizando as cepas isoladas da rea do lixo. Os smbolos , | e representa os compostos com 3, 4 e 5 anis aromticos, respectivamente.

A Tabela 5.4 apresenta os resultados obtidos no 1 e no 2 ensaio, assim com os estudos de biodegradao realizados por HEITKAMP e CERNIGLIA (1989), DOTT et al. (1995), ALLARD e NEILSON (1997) e JUHASZ (1997) utilizando cepas de bactrias isoladas de reas contaminadas por hidrocarbonetos de petrleo. Observase que a quantidade de HPAs degradados no 1 e no 2 ensaio so os mais significativos. Segundo SHIRARIS (1989), para degradar 3,3 mg de benzo[a]pireno foram necessrios 82 dias de incubao. No entanto, no 1 ensaio foram degradados 0,7 mg de benzo[a]pireno em 12 dias e 1,08 mg em 14 dias. Mostrando que a taxa de utilizao do benzo[a]pireno foi maior e que os microrganismos esto adaptados aos HPAs. Acredita-se que sero alcanados melhores resultados na degradao de compostos com mais de 3 anis aromticos se o tempo de incubao das cepas da Praia da Ribeira e da rea do lixo for maior. Outrossim, seria o uso de substncias que aumentassem a biodisponibilidades desses compostos (tensoativos ou cosolventes).

71

Tabela 5.4: Resultado dos ensaios de degradao de HPAs por bactrias.

% Biodegradado
Durao do Ensaio 1 Ensaio 2 Ensaio HEITKAMP e CERNIGLIA (1989) DOTT et al. (1995) ALLARD e NEILSON (1997) JUHASZ (1997) (i) in situ; (e) ex situ 1 ano 63 dias 336 horas 300 dias 36 (i) 69 (e) 8 (i) 74 (e) 76 (i) 50 (e) 20 a 30 35 2 50 a 70 282 horas 327 horas ANT 91,8 96,8 FEN 82,5 79 CRI 68,4 50,8 B[a]P 24 33,9 HPA total -

Embora a concentrao final dessas substncias no meio ainda esteja muito acima dos valores estabelecidos pela Norma Holandesa, importante salientar que o ensaio utilizou petrleo na fase livre, situao semelhante a um derramamento. Nos casos onde os HPAs estejam em fase residuais ou dissolvidos, acredita-se que o uso desses microrganismos como tcnica de remediao seja bastante eficiente.

5.3.2 BIODEGRADAO DE PCBs No primeiro ensaio de biodegradao de PCBs foram utilizandas somente as bactrias isoladas da rea do lixo, incubadas por um perodo de 280 dias. Os resultados esto representados na Tabela 5.5. Segundo a taxa de degradao de cada PCB, pode-se concluir que o tempo mdio para atingir os limites da Norma Holandesa seria, no mnimo, de 500 dias de incubao. Como a biodisponibilidade o fator regulador da degradao dos contaminantes orgnicos persistentes (ALEXANDER e ALEXANDER, 2000), optou-se por adicionar um co-solvente (etanol) a fim de aumentar a solubilidade do PCB no meio. O etanol funciona como uma ponte entre a gua e o PCB, dessa forma uma quantidade maior de PCB estar disponvel em soluo.

72

Tabela 5.5: Biodegradao de PCBs utilizando cepas isoladas da rea do lixo aps 280 dias de incubao. Concentrao inicial de 150 mg/L de Aroclor 1242. Taxa de degradao PCB (ng.mL .dia )
-1 -1

Total biodegradado (%)

28 52 101 118 153 138 180

0,3005 0,1315 0,0359 0,0245 0,0190 0,0111 0,0006

40,32 35,38 29,42 28,64 27,80 26,71 21,62

Utilizando duas propores diferentes de etanol em gua (0,013 e 0,066) realizou-se ensaios de biodegradao com as cepas da Praia da Ribeira e da rea do lixo, durante 30 dias. Procurou-se assim, avaliar a influncia da concentrao do cosolvente no processo de degradao. A Tabela 5.6 mostra como o etanol exerce influncia favorvel degradao dos PCBs. - Ensaios com as cepas da rea do lixo Comparando as taxas de degradao entre o ensaio sem adio de etanol com os ensaios utilizando etanol nas propores de 0,013 e 0,066, observa-se que houve aumento significativo em quase todas as taxas exceto para o PCB 28. Acredita-se que como os PCBs com maior nmero de tomos de cloro se tornam mais solveis, no h ataque preferencial ao PCB que mais solvel (no caso o PCB 28 com 2 tomos de cloro) e mais fcil degradao. - Ensaios com as cepas da Praia da Ribeira Como no foi feito ensaio prvio de degradao de PCBs sem adio de etanol, comparou-se somente a diferena entre as taxas de degradao. Observou-se que o aumento da concentrao de etanol no meio elevou a taxa de degradao dos PCBs em at 8,7 vezes.

73

Tabela 5.6: Comparao entre as taxas de degradao dos PCBs utilizando as cepas da rea do lixo (PL4) e da Praia da Ribeira (R) utilizando propores de etanol em gua de 0,013 e 0,066. Os ensaios foram realizados em 30 dias. Taxa de degradao EtOH / H2O 0,013 (ng.mL .dia )
-1 -1

Taxa de degradao EtOH / H2O 0,066 (ng.mL-1.dia-1)

PCB 28 52 101 118 153 138 180

PL4 0,2712 0,1708 0,1893 0,1313 0,1266 0,0953 0,0072

R 0,1668 0,1424 0,0715 0,0374 0,0369 0,0268 0,0081

PL4 2,1827 1,2207 0,8683 0,6714 0,5563 0,3397 0,0284

R 1,6876 0,8987 0,6234 0,4938 0,3948 0,2352 0,0246

As cepas da rea do lixo mostraram ser mais eficiente na degradao de PCBs do que as cepas da Praia da Ribeira, provavelmente por terem sido isoladas de uma regio contaminada por esse tipo de composto. Fato esse que pode ser explicado pela exposio desses microrganismos molcula de PCB por tempo suficiente de forma a expressar mudanas nos genes capazes de codificarem enzimas para degradao. Entretanto, o aumento na concentrao de etanol no meio exerce efeito maior na taxa de degradao das cepas isoladas da Praia da Ribeira que as das cepas de rea do lixo. O resultado das anlises de degradao de PCB totais est representado na Figura 5.7. SYLVESTRE (1995) realizou ensaios de biodegradao de Aroclor 1242, utilizando um inculo contendo a bactria Comomonas testosteroni B-356 mais o biosurfactante produzido pela bactria Acinetobacter faecalis. O resultados dos ensaios mostraram que o uso de um biosurfactante, que promove a solubilizao do PCB no meio, e de uma bactria especializada na degradao de PCBs, foram suficientes para, em 22 dias de incubao, degradar 28% do PCB total em soluo. Valor semelhante foi alcanado utilizando as cepas PL4 no ensaio utilizando etanol como co-solvente, na proporo de 0,013.

74

80

PCB total biodegradado (%)

70 60 50 40 30 20 10 0 0,013 0,066

R PL4

EtOH / H2O

Figura 5.7: Comparao dos processos de biodegradao de PCB (Aroclor 1242) pelas bactrias isoladas da Praia da Ribeira e rea do lixo, utilizando diferentes propores de etanol/gua. R e PL4 representam os ensaios utilizando as cepas da Praia da Ribeira e rea do lixo, respectivamente. Os ensaios foram realizados em 30 dias.

KASTANEK et al. (1999) realizou ensaio de biodegradao de um solo contaminado por PCBs na concentrao de 590 mg/kg de solo seco. Para o ensaio foi utilizado um bioreator de 15
10

m3

de

capacidade,

onde

foram

mantidas

condies

de

metanognese . O meio de cultura continha sulfato de amnia, cuja finalidade era a de reduzir a tenso interficial entre o PCB e gua para 5 mN/m, e um co-substrato para ativar o processo de declorinao. Aps 30 dias foi quantificado o percentual de PCB degradado. Na Tabela 5.7 so confrontados os resultados obtidos por Kastanek et al. e os ensaios utilizando etanol como co-solvente a 0,066. Verifica-se que o uso do sulfato de amnia, mais o indutor metablico produzem um resultado semelhante aos resultados obtidos nos ensaios utilizando etanol como co-solvente. Fica evidenciado que para a degradao de PCBs fundamental o uso de uma substncia que aumente a solubilidade do composto em gua.

10

Condio anaerbia onde h formao de CH4 a partir de H2 e CO2.

75

Tabela 5.7: Comparao dos resultados obtidos por KASTANEK et al. (1999) e os ensaio de degradao utilizando etanol como co-solvente na proporo de 0,066. Todos os ensaios tiveram durao de 30 dias. PCB 28 52 101 118 153 138 180 % Degradado
KASTANEK et al. (1999)

% Degradado R 49,1 47,9 50,4 53,6 51,5 49,7 58,1

% Degradado PL4 63,4 65,0 70,1 72,9 72,6 71,7 67,0

60,4 54,0 49,0 54,4 46,0 50,0 30,0

Todos esses resultados mostram como importante a disponibilizao do PCB para os microrganismos. Assim como o biosurfactante produzido pela bactria A. faecalis, o sulfato de amnia e o etanol tambm realizaram esse papel nos ensaios citados anteriormente. Contudo, os resultados dos ensaios onde o etanol foi usado como cosolvente, so bastante promissores. Porm, no se pode esquecer da importncia da seleo dos microrganismos que serviro como inculo no processo de degradao. As cepas oriundas de reas contaminadas por PCB mostraram uma maior taxa de degradao. Pode-se ento concluir que o uso das cepas PL4 mais a adio de etanol no meio, na proporo de 0,066/1, mostrou-se mais eficiente no processo de degradao de PCBs.

5.4 DEGRADAO DE PCBs UTILIZANDO REAGENTE DE FENTON

O Reagente de Fenton poderia ser utilizado como um meio de acelerar a decomposio dos PCBs antes de lanar mo da degradao microbiana. Foram feitos ensaios a fim de avaliar qual proporo entre os ons ferro, perxido de hidrognio e pH, seria a mais eficiente na remoo dos tomos de cloro presentes nas molculas de PCBs. No primeiro ensaio de degradao de PCB por Reagente de Fenton (FEN1), as concentraes de PCB e de perxido foram mantidas constantes em todos os ensaios, 60 mg/L e 0,40 g/l, respectivamente. O pH inicial do meio foi ajustado para 2,5, variando-se somente a concentrao de ferro no meio. Observando a Figura 5.8
76

percebe-se que abaixo da concentrao de 0,117 g/L de ons ferro, no houve alterao na eficincia de remoo de cloro, mantendo-se constante em 35%. Ainda que o melhor resultado tenha sido obtido utilizando on ferro na concentrao de 0,117g/L, optou-se por trabalhar a uma concentrao mais baixa, j que a legislao determina que a concentrao de ferro em guas subterrneas seja 300 g/L (CETESB, 2001). Nessa nova srie de ensaios, manteve-se a concentrao de ferro constante (5 mg/L) e variou-se o pH e a concentrao de perxido de hidrognio. Como a idia inicial era usar o Reagente de Fenton in situ, torna-se importante verificar se a reao ocorreria em pH acima de 2,5, alm de trabalhar na menor concentrao de ferro e perxido de hidrognio para que o custo do processo seja o menor possvel.

50 45 40

% de Cl - removido

35 30 25 20 15 10 5 0 0,1170 0,1110 0,0100 0,0050

Concentrao de Fe +2 (g/L)

Figura 5.8: Ensaio de degradao de PCB (Aroclor 1242) utilizando Reagente de Fenton (FEN1). O pH inicial da soluo 2,5 e concentrao de H2O2 de 0,40 g/L.

A Figura 5.9 apresenta o resultado dos ensaios de degradao de PCB utilizando Reagente de Fenton. As maiores quantidades de cloro removidas ocorreram na faixa de pH de 6,78 (pH da gua deionizada). Na concentrao de 0,13 g/L de perxido a pH 6,78 foi removida a maior quantidade de cloro da estrutura dos PCBs (46%). Com base nesses resultados, pode-se afirmar que a melhor proporo de on ferro / perxido de hidrognio de 0,09 mM de ferro para 3,8 mM de perxido, em pH 6,78. importante ressaltar que ao final da reao, para todas as propores de ons ferro e

77

perxido, o pH do meio baixou para 1. Alm disso, a reao bastante violenta e exotrmica.

50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 0,20 0,27

% Cl - removido

pH

Figura 5.9: Ensaio de degradao de PCB (Aroclor 1242) utilizando Reagente de Fenton, utilizando diferentes concentraes de H2O2 e variando o pH. Concentrao inicial de on ferro de 0,005 g/L.

Muitos dos trabalhos visam a total degradao da molcula, outros visam apenas remoo do tomo de cloro da molcula. KRUTZLER et al. (1999) sugere a proporo de 0,75 mM Fe / 45 mM H2O2 na degradao da molcula de cloro fenol. No trabalho realizado por UTSET et al. (2000), foram utilizadas as propores de 0,36 mM Fe / 1,4 mM H2O2 na degradao de anilina. ENGWALL et al. (1998) conduziu ensaios de laboratrio para degradar pentaclorofenol, utilizando a proporo de 10 mM Fe / 50 mM H2O2. Outros autores (NOGUEIRA e GUIMARES, 1999; LUNAR et al., 2000; SABBI e KIWI, 2000; MOHAMADIN, 2001; NAM et al., 2001) mencionam diferentes propores para outros tipos de contaminantes. Fica claro, que para cada tipo de contaminante existe uma proporo ideal de Fe / H2O2. Os resultados obtidos nos presentes ensaios, sugerem que o Reagente de Fenton pode vir a ser usado como um pr-tratamento de reas contaminadas por PCBs. Melhores resultados podero ser obtidos caso a tcnica de biorremediao seja

6,78

5,5

2,5

0,13

(g /

L)

78

aplicada em seguida, pois a reduo do nmero de cloros das molculas de PCB ir contribuir para o aumento da taxa de degradao e, conseqentemente, diminuir o tempo de tratamento. Entretanto, aps a reao de Fenton torna-se necessria correo do pH do meio para um valor prximo a neutralidade, uma vez que o pH 1,0 no favorvel ao crescimento de bactrias heterotrficas.

5.5 CONCLUSES PARCIAIS

Os resultados acima apresentados indicam que os microrganismos especializados auxiliam no processo de degradao de HPAs. Contudo, a taxa de degradao de compostos aromticos com mais de cinco anis bastante lenta (0,08 mg.L-1.dia-1) se comparado dos compostos de trs anis aromticos (0,19 mg.L-1.dia-1). Em casos onde a presena de compostos de mais de cinco anis for predominante deve-se calcular o tempo de aplicao da tcnica de biorremediao em funo desses compostos ou utilizar uma substncia capaz de aumentar a solubilidade dos mesmos. Situao semelhante foi observada na biodegradao de PCBs, onde o aumento do nmero de cloros na molcula de bifenila diminui a taxa de degradao do composto. O uso de etanol como co-solvente, aumentou a taxa de degradao assim como diminuiu a diferena entre elas, mostrando a importncia da biodisponibilidade do contaminante no processo de biorremediao. O Reagente de Fenton pode vir a ser usado como pr-tratamento de reas contaminadas por PCBs, porm so necessrios alguns cuidados para que o resultado do tratamento no seja desfavorvel. A remoo de tomos de cloro da molcula de PCB favorece a degradao (Tabela 5.7). Porm necessrio ajustar o pH do meio para valores prximos da neutralidade, de forma a favorecer o crescimento microbiano hetertrofo. Devido concentrao de ferro do solo da rea do lixo estar em torno de 119 mg/kg, poderiam ser feitos outros ensaios utilizando o prprio solo da rea do lixo como fonte de ferro para os ensaios de degradao de PCB por Reagente de Fenton.

79

PARTE II

80

6. TETRACLOROETILENO
6.1 INTRODUO

Em 1870 o benzeno passou a ser usado nas lavanderias de lava seco na Europa e Estados Unidos como solvente nas mquinas de limpeza. Mais tarde descobriram que a gasolina pura possua melhor ao no processo de remoo de sujeira, alm de ser mais barata e de fcil aquisio. Contudo a gasolina, assim como o benzeno, deixava um forte odor nas roupas alm de provocarem freqentemente combusto e exploses. Em 1940 o tetracloreto de carbono (CCl4) e o tricloroetileno (C2HCl3) substituram o benzeno e a gasolina, as mquinas de limpeza funcionavam perfeitamente com os solventes clorados no inflamveis. Aps a Segunda Grande Guerra o tetracloroetileno passou a ser o solvente mais utilizado na lavagem a seco (LOHMAN, 2002). A primeira sntese do tetracloroetileno (PCE) foi feita em 1821 mas somente em 1925 foi produzido comercialmente nos Estados Unidos. A produo anual cresceu rapidamente, passando de 500 toneladas em 1941 para 340000 toneladas em 1980. Entre 1980 e 1993 a produo de percloroetileno caiu mais de 60%. Entre 1996 e 1999 a produo voltou a crescer, passando de 125000 para 142000 toneladas. A demanda projetada para 2003 de 152000 toneladas (10 Relatrio de Substncias Carcinognicas EPA 2003). No ano de 2000 foram produzidas 950000 toneladas de PCE, das quais 290000 toneladas foram consumidas pela Comunidade Europia. Existem trs grandes companhias que produzem PCE nos Estados Unidos (Dow Chemical, PPG Industries e Vulcan Chemicals), na Europa os principais produtores so a Basf e Bayer AG (Alemanha), Enichem SPA (Itlia) e ICI (Reino Unido).

6.2

PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS

O tetracloroetileno um lquido incolor, no inflamvel que pertence classe de substncias denominada de compostos orgnicos volteis (VOCs)11, pois o PCE evapora facilmente para o ar. Outras caractersticas do PCE esto citadas na Tabela 6.1.

A presena de VOCs assim como os xidos nitrosos na atmosfera condicionam a formao da camada de oznio (BAIRD, 2004)

11

81

Tabela 6.1: Principais caractersticas do PCE. Sinnimos Comuns Frmula Molecular Ponto de Fuso Ponto de Ebulio Solubilidade em gua Densidade Koc Kow Presso de Vapor Constante de Henry PCE, C2Cl4 - 19 C 121 C 150 mg/L a 25 C 1,623 665 3,40 18,47 mm Hg a 25 C 1,8 x 10-2 atm m3/mol percloroetileno, tetracloreto de

etileno, perc, perclene, tetraleno

6.3

APLICAES DO PCE

O maior uso do PCE nos Estados Unidos e Europa nas lavanderias de lava a seco e operaes txteis, que corresponde a aproximadamente 60% de todo PCE. Este produto tambm usado na produo de clorofluorcarbonos; nas operaes de remoo de gordura de componentes eletrnicos, na formulao de aerosois, como solvente de sabes, tintas de impresso, adesivos, selantes, polidores e lubrificantes. A Tabela 6.2 mostra a estimativa do destino de PCE nos Estados Unidos em 1991. A tendncia a diminuio na produo de PCE devido aos acordos internacionais limitando o uso e produo de algumas substncias (Protocolo de Montreal e a Diretiva de Emisso de Solventes), a reciclagem de solventes e a diminuio da produo do CFC-113 (gs freon 113).

Tabela 6.2: Estimativa do destino de PCE nos EUA em 1991.

Usos do PCE Lava a seco e moinho txtil Produo de CFC Desengurdurante de componentes eletrnicos Outros
Fonte: Mannsville 1992.

% PCE 60 20 15 5

82

No Brasil o PCE mais utilizado nas indstrias qumica, farmacutica e eletrnica. A Tabela 6.3 nos mostra um perfil das indstrias paulistas que contaminaram o subsolo utilizando PCE ou um dos seus derivados e as aes tomadas em termos de remediao.

6.4

ROTA DO PCE NO AMBIENTE

A indstria de lava a seco um dos principais responsveis pela contaminao de guas subterrneas nos Estados Unidos e Europa. Tipicamente, uma loja de lava a seco gera por dia de 4 a 7 litros de gua contaminada com PCE. A maioria das lojas de lava seco despeja essa gua contaminada no sistema de esgoto. Rachaduras e vazamentos nos tanques de armazenagem e na tubulao de esgoto podem resultar na migrao do PCE, contaminando grandes extenses, podendo at afetar a qualidade da gua quando atinge o lenol fretico. PCE e TCE foram detectados em mais de 50% das reas de Superfundos nos Estados Unidos no ano de 1996, alm de serem os dois solventes clorados mais freqentemente detectados em guas de abastecimento. De acordo com o inventrio de Substncias Qumicas Txicas lanadas no ambiente, elaborado pela EPA, entre 1987 e 1993 os vazamentos de PCE para o solo e gua totalizam 450 toneladas. Em muitas dessas reas os solventes clorados esto presentes na forma de DNAPLs, o que os torna uma fonte de contaminao por um longo prazo e difcil de remover. (Greenpeace Report, 2000; MACKINNON et al., 2002). Devido a sua volatilidade e uso final do PCE, 80-85% do que usado anualmente lanado na atmosfera e apenas 1% na gua. Os lanamentos ocorrem primeiramente por evaporao durante o processo de manipulao ou dos efluentes e unidades de processamento dos fabricantes. Em 1992, mais de 5579 toneladas de PCE foram lanados na atmosfera, 4,5 toneladas em corpos hdricos, 5,9 toneladas no subsolo, e 4 toneladas na superfcie do solo. Emisses atmosfricas de reas contaminadas, medidas a 1,5 metro do solo, detectaram concentraes de PCE de at 1,7 ppb. Amostras de guas superficiais do lago St. Clair, no Canad, continham mais de 0,473 ppb proveniente de resduos industriais, e gua de poos prximos a lojas de lava a seco. No Japo alcanaram nveis de at 27 ppm. Mtodos de reciclagem de PCE produzem resduos que se lanados em aterros, podem contaminar o solo no processo de lixiviao.

83

Tabela 6.3: lista de empresas que cadastraram contaminao por solventes clorados no estado de So Paulo (CETESB, maio 2002).

Empresa
Adecom Qumica LTDA Ashland Resinas LTDA Aterro DAEE Aterro Industrial Mantovani, S/C LTDA Basf S/A Bras-Lub Ind Brasileira de Lubrificantes LTDA Carbocloro S/A indstrias Qumicas CIESP Diretoria Geral de Cubato Cilag Farmacutica LTDA Ciquine Companhia Petroqumica CISP Centro Industrial Shell Paulnea Clariant S/A Daimlerchrysler do Brasil LTDA (So Bernardo) Daimlerchrysler do Brasil LTDA (Campinas) Dibal Armazns Gerais S/A DIBAL III Dow Qumica S/A Ecadil indstria Qumica S/A Federal Mogul Electrical do Brasil LTDA IQB Indstria Qumica Brasileira LTDA Johnson & Johnson Indstria e Comrcio LTDA Magneti Marelli Escapamentos LTDA Panex S/A Indstria e Comrcio Petrobras DTCS (Ex Tedep) Qumica Industrial Supply LTDA Rede Ferroviria Federal S/A Rhodia do Brasil LTDA (Cubato) Rhodia do Brasil LTDA (So Vicente) Shell do Brasil Indstria e Comrcio LTDA Singer do Brasil Indstria e Comrcio LTDA Solvay Indupa do Brasil S/A Solventex Indstria Qumica LTDA Sulfabras S/A indstria Qumica Transtechnology Brasil LTDA Truck Washing Lavadora de Caminhes LTDA USA Chemical Indstria e Comrcio LTDA Valeo Sistemas Automotivos LTDA

Soluo Adotada
SPRD SPRD SPRD SPRD Remoo do solo contaminado e barreira hidrulica SPRD Bombeamento e tratamento de guas subterrneas e remoo de solo SPRD Bombeamento e tratamento de guas subterrneas, barreira hidrulica e oxidao qumica Remoo da fase livre Barreira Hidrulica, remoo de solos contaminados SPRD SPRD Extrao e tratamento de vapores, bombeamento e tratamento de guas subterrneas, confinamento geotcnico SPRD SPRD SPRD Bombeamento e tratamento de guas subterrneas SPRD Bombeamnetoe tratamento de guas subterrneas SPRD SPRD SPRD SPRD SPRD Bombeamento e tratamento de guas subterrneas Confinamento geotcnico, bombeamento e tratamento de guas subterrneas Remoo enterrados) SPRD Confinamento Geotcnico, barreira hidrulica, remoo da fase livre Remoo de resduos e barreira reativa piloto SPRD SPRD SPRD SPRD Bombeamento e tratamento de guas subterrneas dos resduos (solo contaminado e tanques

* SPRD sem processo de remediao definido

84

O PCE se volatiliza rapidamente para a atmosfera quando lanado no solo ou na superfcie da gua, o que est de acordo com sua constante de Henry (1,8 x 10-2 atm m3/mol). A meia vida da volatilizao do PCE em guas superficiais estimada em 7 dias para poos, 1,4 dia para rios e 5,6 dias para lagos. Soro e desoro de PCE no solo vo depender do teor de matria orgnica, temperatura, saturao e salinidade. Uma vez lanado PCE no solo, a camada superficial no saturada do solo, responsvel por 97% da soro, contudo em solos saturados 26% migra para o lenol fretico (Relatrio das Foras Armadas Americanas - 1989). No ar o PCE degradado na atmosfera por reaes fotoqumicas (produzindo radicais hidroxila) ou podendo tambm retornar a superfcie por ao da chuva. A meia vida estimada de 96 dias; fognio e cloreto de cloroacetil so os produtos de degradao mais comuns, sendo o fognio mais txico que o prprio PCE. No solo estima-se que a maior parte do PCE fique adsorvida devido ao alto coeficiente de absoro (Koc= 665), indicando a persistncia do PCE por meses ou anos. Tambm pode ocorrer degradao microbiolgica, mas a contribuio dos microrganismos no decaimento da concentrao de PCE no solo vai variar em funo dos parmetros fsico-qumicos e da microbiota do local. Na gua a volatilizao do PCE a rota principal. A hidrlise ocorre muito lentamente ou apenas em temperaturas elevadas. A degradao fotoltica e a desalogenao ocorrem em pequenas propores. Quando o ser humano exposto ao PCE, a rota principal pela via respiratria, sendo a absoro via gastrintestinal menos comum. O PCE rapidamente absorvido pelo sangue quando aspirado e a quantidade absorvida est relacionada concentrao no ar, massa corprea, nvel de atividade durante a exposio e tempo de exposio. O PCE no bem absorvido pela pele, no caracterizando como rota de exposio. Aps inalao o PCE seqestrado pela gordura corporal por sua caracterstica lipoflica. metabolizado no fgado pelo citocromo P-450, transformando-se em cido tricloroactico (TCA) e o tricloroetanol.

85

6.5

VALORES DE REFERNCIA PARA CONTAMINAO POR PCE

De acordo com o padro para gua potvel da Agncia Americana de Proteo Ambiental (US EPA) a concentrao mxima para cada um desses compostos no deve exceder 5 g/L. Quando comparado a solubilidade do PCE e TCE em gua, 150 mg/L e 1100 mg/L respectivamente, verifica-se que a diferena entre a solubilidade dos compostos e o padro estabelecido fica entre cinco e seis ordens de grandeza.

6.6

EFEITOS TOXICOLGICOS

A alta concentrao de PCE, especialmente em ambientes fechados e com pouca ventilao, pode causar tonturas, dor de cabea, sonolncia, confuso mental, nusea, dificuldade de fala e de locomoo e at morte. Estes sintomas ocorrem na maioria dos casos em ambiente de trabalho ou no uso do PCE como entorpecentes. Nas indstrias onde os trabalhadores so expostos a baixas concentraes de PCE, observou-se alteraes no sistema nervoso. O resultado dos estudos com trabalhadoras mostrou uma maior incidncia em problemas menstruais e abortos espontneos que as mulheres no expostas. Estudos feitos com animais, conduzidos com concentraes muito acima do que a maioria das pessoas exposta, mostram que o PCE pode causar danos ao fgado e aos rins. A exposio a altos nveis de PCE pode causar morte de fetos de rata. Tambm foram observadas mudanas de comportamento de bebs de ratos que inspiraram PCE durante a gravidez. O Departamento de Sade e Servios Humanos (DHHS) dos Estados Unidos determinou que PCE pode ser considerado como carcinognico. O PCE tambm pode causar tumores de fgado e rins em ratos.

6.7

DEGRADAO DE PCE NO AMBIENTE

Para avaliar se um composto qumico pode causar dano ambiental, a persistncia no ambiente freqentemente usada como indicador de tempo de exposio. Muitos procedimentos de avaliao de risco focam na identificao de compostos persistentes. Contudo, a maioria dos procedimentos ignora o fato da exposio estar relacionada aos produtos de degradao desses compostos. Dependendo do produto de degradao a rea atingida e os riscos relacionados sade humana podem aumentar. Os produtos de transformao so formados pela degradao bitica ou abitica do composto me. Na Figura 6.1 pode-se observar o esquema de transformao do PCE no ambiente. As linhas cheias representam as reaes de

86

transformao no solo e na gua; as linhas pontilhadas representam a transformao no ar. As linhas horizontais pontilhadas separam o composto de origem das geraes de degradao. A Tabela 6.4 mostra a importncia de cada rota individual (nmeros sobre as setas) que expressa em termos de percentual de formao em um meio especfico. A transformao do PCE que lanado no ambiente leva formao de dois produtos de reao. Primeiro so formados etilenos menos clorados (TCE, dicloroetileno - DCE, cloreto de vinila -VC) atravs de reaes de desalogenao redutiva em ambientes anaerbios, como por exemplo, um solo saturado. A segunda via a formao de cidos cloroacticos (tricloroactico, dicloroactico e monocloroactico) a partir da hidrlise do cloridrato de cido tricloroactico, formado na troposfera e que retorna a superfcie da terra misturado na gua da chuva (FENNER et al, 2003).

Tabela 6.4: Percentual de formao de produtos de reao de PCE no solo na gua e no ar. Nmero da Reao Reao 1 PCE COCl2 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 PCE TCAC TCAC COCl2 TCE COCl2 TCE DCA TCAC TCA PCE TCE TCE DCE DCE VC PCE TCA TCA DCA DCA MCA Formao no solo (%) 0 0 0 0 4 100 0 0 0 15 30 30 Formao na gua (%) 0 0 0 0 4 100 10 10 10 15 30 30 Formao no ar (%) 90 10 20 28 50 80 0 0 0 0 0 0

87

Composto de Origem

Cl C Cl C

Cl Cl
percloroetileno

1a. Gerao

7 Cl 3 10 Cl 3C Cl 4 6 H C Cl
tricloroetileno

O C Cl

O
fosgnio

cloridrato do cido tricloroactico

Cl C Cl
Cl 3C C

O O
cido tricloroactico

CO2 + HCl

2a. Gerao

8 H C Cl C Cl
dicloetileno

5 H

11 O
Cl2 HC

cido dicloroactico

3a. Gerao

9 H C H C Cl
cloreto de vinila

12 H
ClH2C C
cido cloroactico

O O

CO2, HCl, H2O

CO2, HCl, H2O

Figura 6.1: Esquema de transformao do PCE na gua e no solo (seta com linha cheia) e no ar (seta pontilhada). Figura adaptada de FENNER et al., 2003.

A biodegradao de PCE, TCE, DCE e VC pode ocorrer tanto em meio aerbio com em meio anaerbio, gerando sub-produtos atravs de vrios caminhos metablicos. A biodegradao vai depender das condies do meio e dos microrganismos (Item 3.2). Os produtos de biodegradao so geralmente negligenciveis em termos de risco para a sade humana. A transformao aerbia ocorre, geralmente, na parte superior do solo, onde existe uma concentrao de oxignio disponvel suficiente, e a

88

transformao anaerbia ocorre nas partes mais profundas do solo, guas subterrneas e sedimentos devido baixa concentrao de oxignio. A possvel relao entre a rota de biodegradao, a meia-vida do composto formado e o coeficiente de partio est representada na Tabela 6.5.

Tabela 6.5: Meia-vida e coeficiente de partio de PCE, TCE, DCE e VC a 20o C (YEH e KASTENBERG, 1991).

I. Meia-vida em dias
Composto PCE TCE DCE VC Ar 47 3,7 1,8 1,2 Superfcie do solo 54 43 53 80 Solo profundo 108 86 106 160 gua 30 90 6 5 gua 108 86 106 160 Sedimento 54 43 53 80 superficial subterrnea

II. Coeficiente de Partio PCE Ar / gua Solo superficial/gua Solo profundo / gua Rocha / gua subterrnea Sedimento / gua Biota / solo superficial Peixe / gua 0,0096 8,74 0,36 0,105 9,83 0,57 31 TCE 0,039 3,02 0,13 0,036 5,79 1,65 10,6 DCE 0,87 1,46 0,061 0,017 1,64 3,42 3,6 VC 0,98 1,37 0,057 0,016 1,54 3,66 1,17

6.8 RESUMO DO CAPTULO

O PCE um organoclorado de baixa solubilidade e mais denso que a gua (DNAPL). No Brasil h vrios casos de contaminao por PCE cujo processo de remediao no foi definido. O processo de degradao do PCE no ambiente ocorre naturalmente no ar, na gua e no solo, podendo tambm ser biodegradado em condies aerbia e anaerbia.

89

7.

TCNICAS

DE

REMEDIAO

DE

PCE

UTILIZANDO

PERMANGANATO DE POTSSIO E BIOSURFACTANTE

Os resultados obtidos na Parte I mostram que o uso do Reagente de Fenton no recomendvel na remediao de guas subterrneas e de solo contaminados em subsuperfcie. Como a maioria dos casos de contaminao por DNAPLs est relacionada contaminao de subsolo e lenol fretico, foi necessrio avaliar uma outra tcnica capaz de transformar o PCE em uma substncia incua, sem que fosse necessrio alterar o pH do meio. Outro ponto relevante na remediao de reas contaminadas por DNAPLs a dificuldade de remover o contaminante pelo processo de bombeamento e tratamento. Mesmo nos processos de biorremediao fundamental que a solubilidade do DNAPLs aumente, de modo a diminuir o tempo de tratamento. Dentro dessa matriz de limitaes foi possvel chegar a duas alternativas. Uma delas a utilizao de permanganato de potssio como agente oxidante, um produto comum e barato capaz de degradar o PCE em CO2 e H2O, alm de diminuir a permeabilidade do meio pela precipitao do xido de mangans limitando a transferncia de massa do contaminante. A alternativa foi a de utilizar o biosurfactante produzido pelo Acinetobacter sp. PD22 para aumentar a solubilidade do PCE em meio aquoso e aumentar a mobilidade do contaminante no solo.

7.1 PERMANGANATO DE POTSSIO

O permanganato um agente oxidante de compostos orgnicos que contm ligao dupla entre tomos de carbono, grupo aldedo e hidroxila. O on permanganato forma uma ponte com a dupla ligao carbono-carbono, encontrada nos alcenos clorados, formando um composto instvel conhecido como hidropermanganato diester. Esse intermedirio pode reagir por diferentes mecanismos incluindo hidroxilao, hidrlise ou quebra da ligao dupla. Nas condies normais de pH e temperatura, a ligao dupla carbono-carbono quebrada espontaneamente e os intermedirios so convertidos em dixido de carbono (YAN e SCHWARTZ, 1999; HUANG et al., 2001). Existem duas formas de permanganato, o permanganato de potssio (KMnO4) e o permanganato de sdio (NaMnO4). As equaes de oxi-reduo com KMnO4 com varias espcies de etenos clorados podem ser escritas da seguinte forma:

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Percloroetileno (PCE) 4KMnO4 + 3C2Cl4 + 4H2O 6CO2 + 4MnO2 + 4K+ + 12Cl- + 8H+ Tricloroetileno (TCE) 2KMnO4 + C2HCl3 2CO2 + 2MnO2 + 2K+ + 2Cl- + H+ Dicloroetileno (DCE) 8KMnO4 + 3C2H2Cl2 + H+ 6CO2 + 8MnO2 + 8K+ + 16Cl- + 2H2O Cloreto de Vinila (VC) 10KMnO4 + 3C2H3Cl 6CO2 + 10MnO2 + 10K+ + 3Cl- + 7OH- + H2O (eq. 7.4) (eq. 7.3) (eq. 7.2) (eq. 7.1)

Dixido de mangans (MnO2) um mineral naturalmente encontrado nos solos. Se a precipitao de MnO2 no solo durante a reao for excessiva, por reduzir a permeabilidade do solo, limitando o fluxo subterrneo. Embora o MnO2 seja insolvel em gua, o manganato (Mn+4) pode ser reduzido a Mn+2 em pH acido (< 2) ou condies redox. O on cloreto (Cl-) liberado durante a reao pode ser convertido em Cl2 sob condio extremamente redox, o qual reage instantaneamente com a gua intersticial e lenol dgua formando cido hipocloroso (HOCl). O permanganato tambm pode ser usado no tratamento de compostos orgnicos que possuem hidroxila, como lcoois primrios e secundrios, assim como cidos orgnicos. Essas reaes ocorrem mais facilmente em pH alcalino, onde a abstrao do hidrognio gera uma carga negativa no tomo de oxignio. O permanganato atacado pela carga negativa, resultando numa reao de oxidao que transforma o composto em aldedo, cetona ou cido carboxlico. A oxidao qumica de contaminantes uma tecnologia que tem tido sucesso quando aplicada no tratamento ex situ de aqferos contaminados por tricloetileno (TCE) e tetracloroetileno (PCE). Os agentes oxidantes aplicados nesses casos incluem o oznio (O3), H2O2, Reagente de Fenton e KMnO4 (MACKINON e THOMSON, 2002). No Brasil, Nobre e Nobre (1999) avaliaram a eficincia do KMnO4 na na remediao in situ e ex situ de diferentes DNAPLs. Os resultados indicaram grande potencial para oxidao de alcenos clorados. Porm, para alcanos halogenados a taxa de destruio observada foi de menor intensidade.

91

7.1.1 FATORES FSICO-QUMICOS QUE INFLUENCIAM NO PROCESSO DE OXIDAO O on permanganato capaz de oxidar compostos orgnicos atravs de diferentes caminhos de reao. O caminho escolhido pela reao vai depender da estrutura do substrato e da acidez da soluo. A oxidao do PCE parece acontecer de maneira semelhante reao alcenos-permanganato (HOOD et al., 2000; HUANG et al., 2002). A Figura 7.1 apresenta um desenho esquemtico da reao de oxidao do PCE pelo permanganato em diferentes condies de pH. A etapa inicial da reao ocorre quando o on permanganato reage com a ligao dupla (C=C) para formar o ster hipo-permanganato cclico como composto intermedirio. As reaes subseqentes envolvem a competio entre o premanganato e os ons hidroxila pelo composto intermedirio. Os diferentes caminhos de reao podem resultar na formao de glicis, aldedos, cetonas e cidos carboxlicos. Em meio alcalino so formados cisdiis, em meio neutro ou levemente alcalino os produtos predominantemente formados so as -hidroxi cetonas. Em meio cido, as reaes ocorrem para formar compostos carbonilados. Dependendo da concentrao do agente oxidante (permanganato) na soluo, os produtos finais da reao so CO2, MnO2 e HCl (NORUELDIN et al., 1997; HUANG et al., 2001; HUANG et al., 2002). Estudos sobre a cintica da reao realizados por YAN e SCHWARTZ (1999) e HOOD et al. (2000) mostram que a reao de etenos clorados por permanganato pode ser considerada de primeira ordem, e independente do pH e fora inica. Contudo, a taxa de degradao dos etenos clorados pelo permanganato inversamente proporcional ao nmero de cloros ligados ao eteno. O fato que o cloro como substituinte do hidrognio retarda a reao, o que consistente com a idia da adio de grupo eletroflico. A alta deficincia de eltrons na ligao C=C induzida pela presena de quatro tomos de cloro na molcula de PCE, reduzem a taxa de ataque eletroflico pelo MnO4 . Por esse motivo, a degradao do PCE lenta e a constante da reao a menor comparada com TCE, DCE. O uso de soluo tampo (pH > 8) favorece a neutralizao do cido formado durante a reao (HCl), alm de reagir com o CO2, formando bicarbonato sal solvel. A oxidao de alcenos, em geral, ocorre na fase aquosa devido ao fato de que KMnO4 no ser solvel na maioria dos hidrocarbonetos.
-

92

Figura 7.1: Oxidao de alcenos com permanganato caminhos de reao (adaptado de HUANG et al., 2002 ).

7.1.2

ETAPAS DO PROCESSO DE OXIDAO IN SITU

Para que a tcnica de oxidao por permanganato possa ser utilizada in situ necessrio que sejam feitos estudos prvios de caracterizao da rea para avaliar se

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as condies de campo so propcias a utilizao da tcnica. Entre as mais importantes, deve-se destacar: a geoqumica e os estudos de bancada. Os dados geoqumicos do local so necessrios para estimar a dosagem de oxidante que dever ser empregada, alm de estabelecer as condies inicias de concentrao do contaminante a fim de avaliar a eficincia do tratamento do solo e/ou gua subterrnea. A seguir apresentada uma lista de parmetros que devem ser medidos. Compostos Orgnicos Volteis: ajudam a estabelecer uma condio referncia no monitoramento da migrao de gases; Massa de contaminante: a estimativa da massa de contaminante, o que tambm inclui a presena de fase livre. Essa estimativa essencial na instalao de poos de injeo da soluo oxidante; Matria Orgnica Natural: a matria orgnica presente no solo/gua subterrnea ir consumir parte da soluo oxidante, por isso deve ser levado em considerao para os clculos de dosagem de concentrao da soluo de permanganato; Demanda Qumica de Oxignio: fornece uma idia de quanto o meio ir consumir da soluo oxidante na oxidao de compostos reduzidos (metais) e matria orgnica; pH do solo e/ou gua subterrnea: os valores de pH so necessrios no preparo da soluo tampo que ser injetada junto com o permanganato, alm de ajudar no monitoramento da reao; Condutividade hidrulica: ajuda a estimar a zona de influncia e a velocidade da gua subterrnea. Essa informao mais a taxa de degradao ajudam a estimar o espaamento entre os poos; Caracterizao do solo: necessria para avaliar a aplicabilidade da tcnica. Por exemplo, para solos argilosos a maioria das tcnicas de oxidao so desfavorecidas, uma vez que o contato do agente oxidante com o contaminante fica limitado pela difuso; Gradiente hidrulico: utilizado para estimar o fluxo subterrneo, zona de influncia e posicionamento dos poos. O gradiente natural pode ser modificado a fim de aumentar a zona de influncia;

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Concentrao de mangans solvel na gua subterrnea: os dados de concentrao de Mn+2 antes do uso do permanganato funciona como valor de referncia. Em reas onde h captao de gua para abastecimento, deve ser avaliada a influncia da precipitao de MnO2 e da possvel formao de Mn+2 durante a reao (caso no haja um controle de pH durante a reao);

Impurezas do permanganato: o permanganato disponvel comercialmente possui traos de metais pesados, incluindo cromo. Se a rea onde se pretende aplicar a tcnica for adjacente a captao de gua para abastecimento, deve ser avaliado o potencial de contaminao da gua subterrnea por metal pesado. (ITRC, 2001)

A remediao in situ dificilmente projetada e implementada baseada somente na caracterizao da rea durante a fase de investigao. A aplicabilidade da tcnica deve ser primeiramente conduzida em escala laboratorial. O resultado dos ensaios de bancada que vo ajudar na escolha da tcnica e na determinao das condies de execuo (concentrao da soluo, taxa de injeo, concentrao da soluo tampo). Alm disso, possvel gerar dados que ajudem a projetar a distncia entre os poos.

7.1.3 CASOS PRTICOS O uso do permanganato na oxidao de TCE e PCE in situ foi feito pela primeira vez por Vella e Veronda em 1992. Ensaios de coluna realizados por SCHNARR et al. (1998) mostraram alta eficincia na remoo de TCE e PCE (>90%) aps injetar 93 volumes de vazios com soluo de permanganato a uma concentrao de 63 mM. O resultado de dois ensaios piloto, feitos numa segunda etapa em um aqfero isolado por uma barreira hidrulica, provaram que o processo de dissoluo o fator determinante na taxa de remoo do DNAPL. Tambm ficou provado que a taxa de dissoluo durante o processo de injeo da soluo oxidante maior que durante o fluxo com gua. Associados ao processo de dissoluo esto a distribuio do DNAPL em subsuperfcie e a heterogeneidade do solo. SCHROTH et al. (2001) realizaram 3 ensaios de coluna para verificar o efeito da precipitao do MnO2, produo de gs (CO2) e dissoluo do TCE em meio poroso, resultante reao da oxidao utilizando soluo de permanganato a 5 mM com e sem adio de fosfato bsico de sdio (Na2HPO4) a 300 mM. Os resultados dos ensaios

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mostram que foi gerada uma grande quantidade de CO2 e precipitao de MnO2 durante fluxo da soluo de permanganato, reduzindo conseqentemente, a porosidade do meio em 96% e conseqentemente, provocando a ruptura do meio, seguido de entupimento da coluna. Porm durante a injeo de soluo de permanganato acrescida de Na2HPO4 observou-se uma menor produo de gs e precipitao de MnO2 de forma homognea em toda a coluna. Neste ensaio a permeabilidade do meio reduziu 53%, mostrando que a utilizao de uma soluo tampo (Na2HPO4), que mantenha a faixa de pH entre a neutralidade e levemente alcalino, pode ajudar a aumentar a eficincia da oxidao in situ. NELSON et al. (2001) estudaram o processo geoqumico que acompanha a reao de oxidao entre o permanganato e o PCE. Foram feitos ensaios injetando soluo de permanganato a 63 e 103 mM em um aqfero de areia no confinado contaminado com PCE. O efeito da injeo foi monitorado utilizando poos multi-nveis. Verificou-se que na rea onde havia PCE em fase residual, o HCl liberado durante a reao reagiu com a calcita e a dolomita dissolvidas, tamponando o pH na faixa entre 5,8 e 6,5 e liberando clcio, magnsio e CO2. Na rea onde a concentrao do PCE era menor, o permanganato permaneceu no aqfero por mais de 14 meses. O pH da gua intersticial aumentou gradualmente para 9 e 10, como resultado da oxidao da gua pelo KMnO4 obteve-se:

4 KMnO4 + 4 H2O 3 O2 + 4 MnO2(s) + 4 KOH + 2 H2O

(eq. 7.5)

Um ponto importante o efeito tampo do solo rico em carbonatos durantes as reaes de oxidao de DNAPLs in situ. Onde originalmente o DNAPL estava presente as amostras de solo mostraram que MnO2 gerado durante a reao cobriu os gros dos minerais do aqfero, formando camadas negras de xido de mangans na areia. MACKINNON e THOMSON (2002) realizaram um ensaio de laboratrio utilizando tanque 2D para avaliar a eficincia do uso de permanganato como agente oxidante de piscinas de PCE. O tanque foi preenchido com slica (d60 = 0,149 mm e d10 = 0,0085 mm) sobre uma camada de p de slica ao fundo, simulando uma zona bidimensional de areia saturada sobre uma barreira impermevel. O PCE foi injetado no sistema de forma a formar uma piscina de DNAPL sobre a camada impermevel. O experimento utilizou uma soluo de permanganato na concentrao de 63 mM que foi injetada a

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uma velocidade real de poro de 0,21 m/dia, durante 146 dias. Antes e aps o fluxo da soluo oxidante foram feitos ensaios com traador para verificar possveis alteraes de fluxo e porosidade do meio. Ao final do experimento foram coletadas amostras de solo para quantificar o PCE remanescente e MnO2 precipitado. Os resultados das anlises mostraram que 55% do PCE na fase livre permaneceu no tanque, e que a maior parte do material oxidado estava localizado prximo ao ponto de injeo do permanganato. Os depsitos de MnO2 reduziram o fluxo da soluo oxidante sobre a piscina de PCE, reduzindo tambm a transferncia de massa do PCE na fase livre para a soluo aquosa.

7.2 TENSOATIVOS
Os tensoativos so molculas que possuem uma parte polar e outra apolar (Figura 7.2), tambm conhecida como substncias anfiflicas. A palavra anfiflica tem origem latina; amphi significa dualidade e philos significa atrao. As substncias tensoativas so classificadas em aninicas, no inicas e catinicas, de acordo com a carga exibida pela poro polar da molcula. Os ons tm uma forte afinidade pela gua devido s atraes eletrostticas entre a carga do on e os dipolos da gua. Alm disso, so capazes de carrear longas cadeias carbnicas (parte apolar) para dentro da soluo.

ou
Frao Polar Frao Apolar

Figura 7.2: Representao esquemtica da molcula de tensoativo.

As molculas tensoativas possuem duas propriedades fundamentais: As molculas saem da soluo para se posicionar nas interfaces (ex.: ar/lquido, lquido/lquido) com orientao especfica tambm conhecida como adsoro;

97

Formam agregados orientados, tambm conhecidos como micelas. A formao de micelas em soluo que conferir as propriedades de detergncia e solubilizao.

Numa soluo em que a concentrao de tensoativo baixa, as molculas existem na forma de monmeros. A frao polar incapaz de fazer ponte com o hidrognio da gua, afetando o equilbrio do sistema. A resultante o aumento da entropia no entorno da frao apolar da molcula de tensoativo, aumentando a energia livre (G) do sistema. Esse aumento da energia livre pode ser minimizado quando a frao apolar sai total ou parcialmente da soluo aquosa fenmeno da adsoro (SHAWN, 1976). Na interface slido/lquido, a polaridade do slido em relao ao lquido que vai decidir que parte do tensoativo vai adsorver sobre a superfcie slida. Quando a concentrao do tensoativo vai aumentando, os monmeros vo saturando a interface, e depois acumulam na soluo. Cada vez que uma nova molcula adicionada soluo, a interao desfavorvel entre a frao apolar e as molculas de gua vo aumentando at o ponto aonde os monmeros vo agregando, reduzindo a energia livre do sistema, formando micelas. Onde a frao apolar est orientada para o centro da estrutura e a frao polar para o solvente no caso de soluo aquosa (Figura 7.3). O tamanho da micela vai depender da natureza da parte apolar do tensoativo. (SALAGER, 1994).

Monmeros

Micelas

Figura 7.3: Estruturas de organizao das molculas de tensoativo.

A concentrao de tensoativo na qual a termodinmica do sistema tensoativo-solvente favorece a formao de micelas chamado de concentrao crtica micelar (CMC)12.
12

Iniciais do termo em ingls: Critical Micelle Concentration

98

Em concentraes acima do CMC o tensoativo consegue aumentar a solubilidade de compostos orgnicos cuja solubilidade em gua baixa (ie., o composto orgnico incorporando no interior da micela), contudo, a tenso superficial da soluo permanece constante (Figura 7.4). Segundo KULASOORIA et al. (2002), por exemplo, a solubilidade do PCE em gua aumentou 134 vezes em uma soluo a 4% de tensoativo no-inico (Tween 80), quando comparando relativamente ao limite de solubilidade do PCE em gua que de 150 mg/L. A concentrao crtica micelar varia, na soluo aquosa, em funo da estrutura do tensoativo, da temperatura da soluo, da presena de eletrlitos e compostos orgnicos. O tamanho da frao apolar da molcula de tensoativo um fator importante e geralmente o CMC decresce com o aumento da hidrofobicidade da molcula. Os tensoativos aninicos em soluo aquosa possuem CMC muito maior que os tensoativos no-inicos e catinicos com o mesmo grupo apolar. Uma CMC tpica de tensoativo aninico como o alquilbenzeno sulfonato, cuja cadeia carbnica possui de C11 a C13 de aproximadamente 1,2 mM (410 mg/L). Para um tensoativo no-inico tpico, como um lcool linear etoxilado, onde a cadeia carbnica C12, o CMC de 0,06 mM, que corresponde a 19 mg/L aproximadamente. A presena de eletrlitos na soluo pode diminuir o CMC pela formao de uma barreira em volta da frao polar do tensoativo. Isso faz com que a soluo aquosa se torne um ambiente termodinamicamente menos favorvel para os monmeros, forando-os a formarem micelas numa concentrao mais baixa que em gua pura. O efeito de eletrlitos em soluo mais evidente com tensoativos aninicos e catinicos (HAIGH, 1996). Quanto maior a cadeia carbnica da frao apolar do tensoativo, maior a tendncia das molculas de adsorverem entre a superfcie ar-gua, diminuindo assim a tenso superficial da soluo. Para uma srie homloga de tensoativos, onde se deseja reduzir igualmente a tenso superficial de uma soluo diluda, necessrio aumentar trs vezes a concentrao do tensoativo para cada grupo adicional de CH2.

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CMC Solubilidade

Propriedade Fsica

Tenso Superficial

Tenso Interfacial

Concentrao de Tensoativo

Figura 7.4: Diagrama esquemtico da variao de tenso superficial, interfacial e solubilidade do composto orgnico com a concentrao de tensoativo.

7.2.1

INTERFACE SLIDO/LQUIDO

Quando a gota de um lquido colocada sobre uma superfcie slida ela pode se espalhar totalmente sobre a superfcie ou permanecer como gota com um ngulo de contato definido com a superfcie slida. O ngulo de contato zero resulta das foras de atrao entre o lquido/slido que so iguais ou maiores que aquelas entre lquido/lquido. O espalhamento da gua sobre uma superfcie slida hidrofbica pode ser melhorado pela ao de agentes tensoativos. Para sries homlogas de tensoativos como os alquil-sulfatos, alquil-aril sulfonatos, o melhor resultado de molhabilidade obtido quando so utilizados tensoativos com cadeias carbnicas contendo oito tomos de carbono (C8), embora as espcies com cadeias carbnicas mais longas tenham uma maior atividade superficial. O maior parte dos contaminantes orgnicos hidrofbico, logo a sua remoo da matriz do solo deve ser considerada um fenmeno de ngulo de contato , mostrado na Figura 7.5 a. A adio de tensoativos reduz o ngulo de contato na interface tripla

100

solo/composto orgnico/gua. Como resultado, o composto orgnico se enrola (roll-up effect) podendo ser facilmente separado (Figura 7.5 b).

(a)
gua

(b)
Adio de Surfactante

leo slido

Figura 7.5: Esquema de comportamento do composto orgnico antes e aps adio de tensoativo.

Os tensoativos que se adsorvem nas interfaces slido/gua e leo/gua sero os melhores detergentes. A adsoro na interface ar/gua provocando a reduo de tenso superficial e formao de espuma, o que no necessariamente um indicador de eficincia.

7.2.2

COMPORTAMENTO NO SOLO

A soro possui um papel importante no comportamento dos tensoativos no solo. Tensoativos catinicos tendem a adsorver fortemente em argilas e material coloidal assim como na matria orgnica. Os tensoativos aninicos, por outro lado, tendem a se ligar fracamente ao solo, sendo que grande parte permanece na fase aquosa. Em pH cido, quando a superfcie do solo est menos carregada negativamente, a adsoro do tensoativo aninico aumenta. A afinidade entre a parte polar dos tensoativos e o solo est relacionada a teoria da dupla camada difusa (MITCHEL, 1993). A teoria relaciona a distribuio dos contraons na localidade de uma superfcie carregada, que em contato com um meio polar, atinge um mximo no valor do potencial eltrico na rea da superfcie. O excesso de contra-ons prximos superfcie carregada, provoca uma diminuio na concentrao desses contra-ons no restante da soluo, resultando na queda abrupta do potencial com o aumento da distncia da superfcie (Figura 7.6). O aumento da concentrao de eletrlitos e o aumento da valncia do contra-on produzem efeito ainda maior na espessura efetiva da dupla camada difusa.

101

Como as interaes da dupla camada esto diretamente relacionadas ao potencia eltrico (0), os ons em soluo so determinantes no processo de floculao. Em pH cido a soluo est carregada positivamente pela absoro de H+ ou ctions, em pH alcalino a soluo est carregada negativamente pela absoro de ons OH- ou nions. Em pH neutro a soluo no possui carga, floculando. Tambm existe uma forte correlao entre aumento da adsoro de tensoativo aninico e alta concentrao de matria orgnica no solo. A adsoro de tensoativos no-inicos influenciada pelo teor de carbono orgnico no solo. Assim como a adsoro de tensoativos aninicos, a caracterstica dos no-inicos de permanecer na gua intersticial com potencial para interagir como os compostos orgnicos hidrofbicos (NAPLs).

Potencial Eltrico

1/k

Distncia

Figura 7.6: Representao esquemtica da dupla camada eltrica difusa.

A solubilizao de NAPLs um fenmeno que est diretamente ligado formao de micelas. Como foi mencionado anteriormente, de se esperar que a CMC do tensoativo na gua intersticial seja menor que na gua pura, pois a presena de sais dissolvidos na gua aumenta a fora inica da soluo. Contudo, esse fenmeno provocar o aumento da adsoro do tensoativo na superfcie do solo, fazendo com que uma quantidade maior de tensoativo seja adicionado ao solo para atingir a CMC.

102

7.2.3

APLICAO

Os tensoativos tm sido usados industrialmente como adesivos, floculantes, espumantes, de-emulsificantes e penetrantes. Na indstria petroqumica eles so tradicionalmente usados na extrao de leo. Nesse caso, os tensoativos aumentam a solubilidade dos componentes do petrleo ou diminuem a tenso interfacial, promovendo a mobilizao do petrleo. Tambm so usados na flotao de minrio. As propriedades mais importantes num tensoativo em processos industriais incluem o aumento da solubilidade de compostos pouco solveis em gua, reduo da tenso superficial, molhabilidade13 e produo de espuma. reas contaminadas representam uma ameaa ambiental, principalmente nas grandes reas industriais. Por essa razo, muitas tcnicas de descontaminao foram desenvolvidas ao longo dos anos. Mas recentemente, os tensoativos tm sido usados nos processos de lavagem de solo na remoo de NAPLs. Uma das grandes vantagens da utilizao dessa tcnica o aumento da solubilidade dos NAPLs, acelerando o processo de biodegradao (MULLIGAN et al., 2001). Muitos fatores podem influenciar na eficincia da lavagem de solo com tensoativos. Entre elas esto: a dureza da gua subterrnea, adsoro em argilas e biodegradabilidade muito alta (pode anular o efeito do tensoativo, embora o fator biodegradabilidade seja importante para evitar acmulo no solo). Os fatores principais que devem ser considerados na escolha do tensoativo na lavagem de solo so: - eficincia na remoo do contaminante; - custo; - biodegradabilidade do composto e dos produtos de degradao; - baixa disperso no solo; - efeitos txicos em seres humanos, animais e plantas; e - reciclagem.

13

Propriedade de aumentar o ngulo de contato entre lquido e slido.

103

Todos esses fatores devem ser estabelecidos previamente em laboratrio antes de serem executados ensaios de campo. Para reduzir o risco de contaminao, so usados tensoativos com grau alimentar (TMAZ, DOWFAX, Aerosol, Tween), aprovados pelo departamento americano de alimentos e drogas (FDA). A aprovao pela FDA, contudo, no garante que o tensoativo ou os produtos de degradao seja seguro e dentro dos padres da legislao (BOVING e BRUSSEAU, 2000).

7.2.4

BIOSURFACTANTES

Alguns tensoativos so conhecidos como biosurfactantes. Essas molculas podem ser produzidas por bactrias, leveduras e fungos filamentosos utilizando vrios substratos incluindo acares, leos, alcanos, e resduos. Eles so sintetizados como subprodutos metablicos. As molculas anfiflicas so a espinha dorsal das membranas celulares, garantindo o transporte e troca de material na clula. Nas clulas superiores as lecitinas e o cido gliclico so os compostos mais conhecidos. Nos microrganismos so os fosfolipdios, glicolipdeos, lipopeptdeos e lipopolisacardeos. Como estrutura molecular eles possuem: a) frao apolar: cidos graxos hidroxilados e lcoois graxos que podem ser saturados ou insaturados; b) frao polar: mono, oligo ou polisacardeos, peptdeos ou protenas. Muitas vezes os microrganismos produzem substncias anfiflicas que so lanadas para fora da clula, a fim de facilitar a entrada de compostos pela membrana celular ou para aumentar a biodisponibilidade de um substrato no meio. Tambm existem situaes onde a produo de biosurfactantes est associada a interao das clulas com superfcies slidas (SHAFI e KHANA, 1995).

104

Uma caracterstica importante dos biosurfactantes est relacionada abundncia relativa das fraes polares e apolares. Os biosurfactantes podem ser classificados de acordo com o balano hidroflico-hidrofbico (HLB)14, pois essa relao afeta as propriedades fsico-qumicas das molculas. Em geral, as molculas com baixo HLB so lipoflicas, enquanto as de HLB alto so mais solveis em gua. A Tabela 7.1 mostra os usos de surfactantes no-inicos para diferentes valores de HLB.

Tabela 7.1: Usos de tensoativos no-inicos para diferentes valores de HLB (SHAWN, 1976).

HLB <3 36 79 8 15 13 15 15 18 Filmes de superfcie

Usos Emulsificantes gua em leo Espalhamento de lquidos em superfcies slidas Emulsificantes leo em gua Detergentes Solubilizantes

A classificao dos surfactantes sintticos tem como base os grupamentos polares, os biosurfactantes so classificados com base na natureza bioqumica do composto. Os biosurfactantes podem ser classificados em cinco categorias: - Glicolipdeos: so geralmente carboidratos combinados com cidos alifticos de cadeia longa ou cidos alifticos hidroxilados (ex.: trealose, soforo e raminolipdeo). Eles esto envolvidos na entrada de hidrocarbonetos de baixa polaridade em clulas microbianas; - Liposacardeos: um exemplo desse tipo de bioemulsificante extracelular o
EMULSAN,

com alto peso molecular e solvel em gua produzido pela bactria

hidrocarbonoclstica Acinetobacter calcoaceticus;

14

O valor de HLB uma indicao da solubilidade do leo ou da gua na soluo. Quanto menor o valor de HLB, maior a solubilidade do leo na soluo.

105

- Lipopeptdeos: o SURFACTIN, produzido pelo Bacillus subtilis, o biosurfactante mais potente que j foi relatado. So bastante eficazes na reduo de tenso superficial e interfacial; - Fosfolipdeos: embora estejam presentes em todos os microrganismos, existem poucos exemplos de produo extracelular. Os mais conhecidos so produzidos por Corynebacterium lepus; - cidos graxos e lipdeos neutros: so protenas hidrofbicas, como o cido ustilgico e os cidos corinomiclicos. Os microrganismos produtores de surfactante mais conhecidos esto listados na Tabela 7.2, assim como alguns exemplos dessas estruturas podem ser observados na Figura 7.7.

Tabela 7.2: Microrganismos produtores de biosurfactante (LANG, 2002).

Bactria Acinetobacter sp. Acinetobacter radioresistens Alcanivorax borkumensis Arthrobacter sp. Bacillus sp. Clostridium sp. Corynebacterium sp. Nocardia e Rhodococcus Pseudomonas sp.

Tipo de Surfactante EMULSAN; cidos graxos; mono e di-glicerdeos ALASAN Glicolipdeo Glicolipdeo; glicopeptdeo; heteropolisacardeo Surfactin; raminolipdeo; polimixim; antibiticos Lipdeos neutros Acil-glicoses; complexo de protenas-polisacardeos; fosfolipdeo; cidos corinemiclicos; cidos graxos Lipdeos neutros e cidos graxos; traloses dimicolatas; polisacardeos VISCOSIN; ORNITIN; glicolipdeos

106

Figura 7.7: Exemplos de estruturas de biosurfactantes. (a) Estrutura de um diraminolipdeo de Pseudomonas. R = H e R = CH3 para cido e metil-raminolipdeo respectivamente. (b) Estrutura de trealose-lipdeo produzidopor Arthrobacter sp. (c) Estrutura do
SURFACTIN

produzido por Bacillus subtilis (Adaptado de CHRISTOFI e

IVSHINA, 2002).

7.2.4.1 PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS

A tenso superficial definida como a fora que age na superfcie de um lquido promovendo a minimizao da rea superficial. Tanto os surfactantes sintticos como os biosurfactantes so capazes de reduzir a tenso superficial da gua (72 mN/m) para valores na faixa entre 47 e 27 mN/m (Tabela 7.3). As medidas de tenso superficial so comumente usadas para monitorar o crescimento microbiano e existe uma grande quantidade de informaes na literatura sobre tenso superficial e propriedades de emulsificao para alguns microrganismos. Contudo, difcil comparar os dados publicados com um microrganismo especfico, pois o crescimento e a produo de surfactante esto associados ao meio de cultura, pH, fonte de carbono e aerao. Um dos fatores que controlam a produo de biosurfactante a qualidade e a quantidade da fonte de carbono (solvel em gua, hidrocarbonetos ou leos) e nitrognio (NH4+, NO3-, uria ou aminocidos) no meio de cultura ou ambiente natural.

107

Tabela 7.3: Comparao da tenso superficial e CMC entre biosurfactantes e surfactantes sintticos. Natureza do Surfactante biolgico biolgico biolgico biolgico biolgico biolgico sinttico sinttico sinttico sinttico Surfactante Rhodococcus rubber glicolipdeo Rhodococcus dicorinomicolato Rhodococcus erythropolis trealose tetraester Pseudomonas aeruginosa raminolipdeo Torulopsis bambicola soforolipdeo Bacillus subtilis surfactin Dodecil Sulfonato de Sdio (SDS) Brometo de Cetiltrimetilamnio Tween 20 n-Alquil Benzeno Sulfonato 26 29 33 27 37 30 30 47 15 50-200 82 23 2120 1300 600 590 erythropolis trealose Tenso Superficial (mN/m) 26,8 36 54 4 CMC (mg/L)

Umas das vantagens do uso de biosurfactantes nos processos de remediao so a de serem ecologicamente mais aceito que os surfactantes sintticos; a biodegradabilidade; e a baixa toxicidade (Tabela 7.4).

Tabela 7.4: Toxicidade de biosurfactantes comparada aos surfactantes sintticos. Natureza do Surfactante biolgico biolgico biolgico sinttico sinttico sinttico sinttico Rhodococcus rubber AC 235 glicolipdeo Rhodococcus erythropolis trealose dicorinomicolato Pseudomonas aeruginosa raminolipdeo Acetato de nonilfenol-(oxido de etileno)9 (EQ9) Estearato de sacarose (DK50) Finasol OSR-5 Inipol EAP 22 Surfactante *CE50 (mg/L) 650 49 50 78 67 7 0,004

*CE concentrao efetiva onde 50% dos microrganismos morrem.

108

7.2.4.2 PRODUO E RECUPERAO DE BIOSURFACTANTE

As bactrias hidrocarbonoclsticas podem ser facilmente isoladas de reas contaminadas por hidrocarbonetos de petrleo e, provavelmente, algumas delas sero capazes de produzir surfactante. No isolamento usam-se hidrocarbonetos alifticos e aromticos como nica fonte de carbono em meio mineral. Estudos revelaram um grande nmero de microrganismos isolados por essa tcnica, como as espcies de Rhodococcus, Acinetobacter, Pseudomonas, e outros gneros, so capazes de produzir biosurfactante (ROY et al., 1997; BARKAY et al., 1999; CHRISTOFI e IVISHINA, 2000). A recuperao e concentrao do biosurfactante do meio de cultura que vo determinar a viabilidade da produo em grande escala. Geralmente, a baixa concentrao e a estrutura do biosurfactante limitam a extrao. Diferentes mtodos so usados nos processos de isolamento como a ultracentrifugao, ultrafiltrao, precipitao por cido ou sal, extrao pro solvente e adsoro em cromatografia. Uma grande variedade de solventes (ex.: metanol, etanol, ter etlico, acetona, clorofrnio, diclorometano) tem sido usada na forma pura ou combinada nos processos de extrao. As misturas mais efetivas so aquelas que utilizam clorofrmio e metanol, que facilitam no ajuste de polaridade da molcula que se pretende extrair. Contudo, o uso dessas substncias em grande escala demandam grandes volumes de solvente o que torna o processo caro e por outro lado est sendo gerado resduo de solvente clorado (KIM et al., 1996; KUYUKINA et al., 2001).
7.2.4.3 APLICAES

Devido as suas propriedades fsico-qumicas, os biosurfactantes so mais adequados que a maioria dos surfactantes sintticos para o uso na indstria petroqumica, o que explica porque a maior parte da produo de biosurfactantes (estimada entre 400 a 500 toneladas/ano) usada em processos relacionados indstria petroqumica. Lamas e fraes de leo pesado que se acumulam no fundo dos tanques de armazenagem de leo so altamente viscosos ou depsitos slidos, que no podem ser retirados pelo mtodo convencional de bombeamento. Normalmente esse tipo de limpeza requer lavagem com solvente ou limpeza manual, sendo ambos perigosos e caros. Uma alternativa para esse processo de limpeza a formao de uma emulso leo-em-gua pelo uso de surfactantes, promovendo a remoo da lama pelo processo de bombeamento e recuperando o resduo aps a quebra da emulso. A
109

aplicao de biosurfactantes nesse processo foi identificada no incio da dcada de 70. Nos anos 80 foram relatados os primeiros estudos em pequena escala do uso do
EMULSAN

(produzido pelo Acinetobacter calcoaceticus) na limpeza de vasos

contaminados por leo (BOGNOLO, 1999). A formao de emulses leo-em-gua estveis pela ao microbiana pode promover a degradao do leo, pois a diluio do composto em gua aumenta a disponibilidade do nutriente. No solo possvel promover o fenmeno da solubilizao atravs do estimulo da populao microbiana autctone para a produo de surfactante. A inoculao de microrganismos produtores de surfactante tambm uma alternativa. Contudo existem processos de competio entre os microrganismos autctones e os inoculados, assim como o tempo de adaptao as condies ambientais. Em processos de remediao in situ no necessrio o uso do biosurfactante purificado, uma vez que os nutrientes do meio de cultura, alm das bactrias produtoras de surfactante ajudam a promover a biodegradao. Por razes bvias, se a fonte de carbono da produo de biosurfactante for um hidrocarboneto (ex.: n-hexadecano, nparafinas) recomendvel que seja feita a remoo dos hidrocarbonetos do meio de cultura para que a soluo possa ser utilizada na recuperao de solo e/ou lenol fretico contaminados (ROY et al., 1997).

7.3 COMENTRIOS FINAIS

Vrios tensoativos tm sido testados em diferentes tipos de solo e poluentes. Embora os tensoativos estimulem a degradao de poluentes hidrofbicos, ainda no h uma tendncia geral para a utilizao desses resultados. Por esse motivo necessrio que seja feito um nmero maior de ensaios de laboratrio. Os resultados obtidos podero auxiliar em situaes de campo mais complicadas. A aplicao de tensoativos de solo. uma das poucas tecnologias que aumenta a

biodisponibilidade do poluente e poder ser usado juntamente com a biorremediao

110

8. MATERIAL E MTODOS II
8.1 CARACTERIZAO DA AREIA
8.1.1 ANLISE GRANULOMTRICA A granulometria do material foi determinado atravs do ensaio de peneiramento segundo o procedimento descrito pela norma NBR 7181/84 (Anlise Granulomtrica). A amostra foi inicialmente seca em estufa a 105C por 24h para a correta determinao da frao fina da areia. 8.1.2 PERMEABILIDADE A permeabilidade da areia foi medida em laboratrio atravs do mtodo de carga constante, onde uma amostra de solo colocada entre dois reservatrios de gua, cujos nveis de gua so mantidos constantes e com uma diferena de altura h. O coeficiente de permeabilidade (k) foi determinado medindo-se a quantidade de gua que atravessou em um determinado tempo a amostra de solo, de seo e altura conhecidas, atravs da seguinte equao: QL Ah

k= Onde: Q = vazo (cm3.s-1) L = comprimento da amostra de solo (cm) A = seo da amostra de solo (cm2) h = altura da carga hidrulica (cm)

8.2 ENSAIO DE COLUNA OXIDAO QUMICA POR KMnO4

8.2.1 SATURAO DA COLUNA Os ensaios foram conduzidos em coluna de vidro com 30 cm de comprimento e 5cm de dimetro interno. Para cada ensaio, a coluna foi preenchida com areia lavada e seca. A areia era pluviada pelo topo da coluna utilizando um copo com um orifcio na base de 2 mm de dimetro. Durante o processo de preenchimento da coluna era feita compactao da areia pelo processo de vibrao. Para reter a areia dentro da

111

coluna, foram utilizadas tampas de Teflon nas duas extremidades, seladas por um anel de borracha, Figura 8.1.

(A)

(B)

Figura 8.1: Coluna de vidro preenchida com areia. (A) entrada superior e (B) entrada inferior.

Aps o fechamento da coluna, determinou-se o peso seco da coluna mais areia. Uma vez determinado o peso seco, iniciou-se a injeo de gua destilada pela entrada inferior, utilizando bomba peristltica, a uma vazo de 0,7 mL/min. Aps saturao verificou-se o peso da coluna. O processo de injeo de gua s terminou quando se obteve peso constante na coluna, admitindo-se como condio de saturao. A determinao do volume de vazios (Vv) da coluna dado pela expresso: Peso coluna saturada Peso coluna seca Peso especfico da gua

Vv =

Uma vez saturada a coluna, foi injetado PCE (grau analtico, pureza > 99%, Aldrich Chemical), tambm no sentido base -topo, a 0,7 mL/min. Para fins de visualizao foi adicionado 0,01 g/L de corante Oil-Red (Fisher Scientific) ao PCE. Para determinar a

112

quantidade de PCE injetado era necessrio coloc-lo em uma proveta graduada de 250 mL. Quando o PCE atingiu o topo da coluna, registrou-se o volume de PCE injetado na coluna. Em seguida, injetou-se gua pela entrada superior, purgando PCE na fase livre pelo fundo da coluna. O PCE purgado era recolhido em proveta de 250 mL graduada. A injeo de gua foi interrompida quando no havia PCE saindo na fase livre no efluente da coluna. Registrou-se o volume de PCE purgado. A determinao do volume de PCE residual na coluna obtida pela expresso: PCE residual = PCE injetado PCE purgado

8.2.2 ENSAIO DE OXIDAO QUMICA Foram realizados experimentos de oxidao qumica atravs da utilizao de soluo KMnO4 em diferentes concentraes (1, 5, 25 mM). As solues foram preparadas a partir da dissoluo do sal de KMnO4 (grau analtico, Riedel-de-Han) em soluo 250 mM de Na2HPO4 (grau analtico, Sigma-Aldrich) a pH 9. A soluo de Na2HPO4 foi utilizada a fim de manter o pH do meio na faixa alcalina para neutralizar o cido gerado durante a reao e tambm evitar a formao de CO2. As amostras de efluente coletadas para anlise cromatogrfica eram feitas em frascos de vidro contendo soluo 1N de Na2S2O3 (grau analtico, Baker). A soluo de Na2S2O3 era utilizada com a finalidade de interromper a reao entre PCE e o KMnO4. Os frascos eram fechados e identificados para posterior anlise cromatogrfica. Todas as solues aquosas utilizadas nos experimentos foram preparadas com gua deionizada. A injeo da soluo de permanganato foi feita imediatamente aps o ensaio com o traador conservativo (item 8.3), no sentido topo-base na vazo de 2,0 mL/min. Para cada ensaio de oxidao, foi injetado o correspondente a 74 volumes de vazios de soluo de permanganato, com durao aproximada de 120 horas. Os ensaios foram feitos ininterruptamente. Amostras do efluente foram coletadas em intervalos de tempo de 30 minutos para determinao de pH, concentrao de PCE e KMnO4. Ao final da injeo de soluo de permanganato, foi feita lavagem da coluna com quatro volumes de vazios de gua deionizada, seguida de outro ensaio com traador conservativo.

113

8.2.3 EXTRAO DO PCE Ao final do ensaio o PCE que no reagiu foi extrado com n-hexano para posterior quantificao por cromatografia gasosa (item 8.4.1).

8.3 ENSAIO COM TRAADOR DE BROMETO

Esse ensaio avalia o impacto da precipitao de MnO2 na permeabilidade do meio e da remoo de PCE da coluna, baseado na mudana do tempo de reteno de Br na coluna, antes e depois da injeo de soluo oxidante. Foi utilizada soluo 300 ppm de KBr (grau analtico, Sigma-Aldrich), injetada no sentido topo-base da coluna durante 30 minutos, a uma vazo de 2,5 mL/min. Amostras do efluente foram coletadas em frascos de vidro com tampa rosqueada, em intervalos de 5 minutos, durante 120 minutos, para posterior anlise de quantificao de brometo (Br). A partir do grfico de concentrao de Br x tempo, determina-se a diferena de tempo entre os mximos das duas curvas.

8.4 DETERMINAES QUANTITATIVAS

8.4.1 QUANTIFICAO DE PCE A concentrao de PCE nas amostras de efluente baseou-se na quantificao feita utilizando-se cromatografia gasosa. O aparelho utilizado na anlise foi um cromatgrafo a gs com detector de ionizao de chama, da marca Agilent, modelo 6850. As condies de anlise foram: - Coluna capilar de slica fundida HP1 Agilent Technologies: 30 m de comprimento; 0,32 m de espessura de filme. - Gs de arraste: hlio (99,99%), com fluxo de 20 mL.min-1 e presso de 18,42 psi no injetor. - Gs do detector: ar e hidrognio (99,99%), com fluxo de 40 mL.min-1 e 400 mL/min respectivamente - Injetor: 150o C, sem diviso de fluxo (splitless)
114

- Detector: 250o C - Programao de temperatura no forno: iniciou a 60o C, onde permaneceu por 3 minutos. A temperatura foi aumentada at 95o C a 35oC.min-1, sendo o tempo final de corrida de 5 minutos. - Volume de amostra injetado: 50 L de head space. A concentrao de PCE nas amostras baseou-se na quantificao feita utilizando-se curva de calibrao.

8.4.2 QUANTIFICAO DE Br As medidas de concentrao de Br das amostras de efluente do ensaio de traador (Item 8.3) foram feitas utilizando eletrodo de brometo modelo Cole Palmer Combination Electrode, acoplado a medidor porttil modelo Oakton Ion 5 / Acorn series meters.

8.4.3 QUNTIFICAO DE KMnO4 As concentraes de KMnO4 foram determinadas utilizando espectrofotmetro modelo Unicam 8620 UV/Visible, no comprimento de onda de 526nm, a partir de curva de calibrao de KMnO4 em gua.

8.5 PRODUO DE BIOSURFACTANTE

8.5.1.ACINETOBACTER Para a produo de biosurfactante (Ac) utilizou-se a cepa de Acinetobacter sp. isolada da praia da Ribeira. As cepas foram retiradas dos tubos de Agar inclinado (item 3.2) e inoculadas em meio especfico para Acinetobacter (Baumann, 1968). As amostras ficaram sob agitao por 3 dias a temperatura ambiente. Em seguida, as bactrias foram inoculadas em meio especfico para produo de biosurfactante, de composio (g/L): acetato de sdio tri hidratado 3,0; KNO3 3,0; MgSO4 0,2; em soluo tampo 0,04 M KH2PO4-Na2HPO4 a pH 5,5. A cultura foi mantida em agitao por 7 dias a temperatura ambiente, adquirindo o aspecto mostrado na Figura 8.2. Ao final dos sete dias, era retirada uma alquota do meio de cultura para nova inoculao no meio

115

especfico para produo de biosurfactante. O material restante era separado para posterior purificao.

Figura 8.2: Aparncia do meio de cultura para produo de biosurfactante Ac aps crescimento bacteriano.

8.5.2 RHODOCOCCUS Para a produo de biosurfactante (R) utilizou-se a cepa de Rhodococcus I24 isolada de um campo petrolfero nos Estados Unidos pelo grupo de pesquisa do Dr. John Archer (Laboratrio de Gentica da Universidade de Cambridge). As cepas foram inoculadas em meio lquido de composio (g/L): Na2HPO4 6,0; KH2PO4 3,0; NaCl 1,0; (NH4)2SO4 4,0; MgSO4 0,2; FeSO4.7H2O 0,02g; FeCl3 0,002; MnSO4.H2O 0,002 a pH 7. Como fonte de carbono foi utilizada glicose na concentrao de 100 mM. Tambm foi adicionado ao meio 20 mL por litro da soluo de oligoelementos de composio (g/L): ZnSO4.7H2O 0,5; CuCl2.2H2O 0,2; Na2B4O7.10H2O 0,2; (NH4)7Mo6O24.4H2O 0,1. A cultura foi mantida sob agitao por 5 dias a temperatura de 28C. Ao final do quinto dia, era retirada uma alquota do meio de cultura para nova inoculao no meio lquido e o material restante era separado para posterior purificao.

116

8.6 PURIFICAO DO BIOSURFACTANTE (Ac)

O material separado no item anterior era transferido para erlenmeyer e levado fervura por 30 minutos. Aps resfriamento a soluo era filtrada em funil de buchner, utilizando papel de filtro Whatman 42. O material filtrado era colocado em garrafa estril e preservado em geladeira temperatura de 5C.

8.7 PURIFICAO DO BIOSURFACTANTE (R)

O material separado no item A.4 era transferido para tubos de centrfuga para posterior centrifugao a 4000 rpm por 15 minutos. Aps centrifugao, separava-se o sobrenadante e descartava-se o precipitado. Posteriormente, filtrava-se o sobrenadante em membrana 0,45 m, de acetato de celulose. O filtrado era estocado em geladeira a temperatura de 5C.

8.8 DOSAGEM DE SURFACTANTE MTODO FENOL SULFRICO

As bactrias do gnero Acinetobacter e Rhodococcus sintetizam biosurfactantes contendo acares (Shafi & Khana, 1995, Kim et al., 1996, Toren et al., 2001). A tcnica de dosagem de carboidrato total foi usada para determinar a concentrao de surfactante na soluo. Inicialmente preparou-se a soluo padro de glicose utilizando 0,01 mg de glicose (P.A., Fischer) em 100 mL de gua destilada. Utilizando a soluo padro de glicose, foram preparadas 6 diluies: 10, 20, 30, 40, 50 e 60 mg/L. Em tubo de ensaio, adicionou-se 2mL de cada soluo de glicose, 1,0 mL de soluo 5% de fenol e 5 mL de cido sulfrico concentrado (Merck). Para o branco usou-se 2 mL de gua destilada, 1,0 mL de soluo 5% de fenol e 5 mL de de cido sulfrico. Todas as solues foram preparadas em triplicata. Aps 10 minutos de reao, os tubos foram colocados em banho de gua por mais 15 minutos. A leitura de absorbncia foi feita em espectrofotmetro, no comprimento de onda de 492 nm. O aparelho utilizado foi o Espectrofotmetro Bausch & Lomb Spectronic 20D. A determinao da concentrao da amostra foi feita da seguinte maneira: em tubo de ensaio, adicionou-se 2mL de soluo de surfactante, 1,0 mL de soluo de fenol e 5,0 mL de cido sulfrico. Aps 10 minutos de reao, os tubos foram colocados em
117

banho de gua por mais 15 minutos. A leitura de absorbncia foi feita em espectrofotmetro, no comprimento de onda de 492 nm. As amostras eram preparadas em triplicata. A determinao da concentrao de glicose na soluo de surfactante (mg/L) foi feita utilizando a curva de calibrao de absorbncia x concentrao de glicose.

8.9 DETERMINAO DE TENSO SUPERFICIAL E INTERFACIAL

A determinao das tenses interfacial e superficial do surfactante foi feita pelo mtodo da gota pendente. Os ensaios foram realizados pelo Departamento de Polmeros e Colides da Universidade de Cambridge, utilizado o aparelho FT200 flexible video system. Esse aparelho capaz de capturar o comportamento esttico e dinmico das interaes entre lquidos. As tenses superficiais e interfaciais dos biosurfactantes foram calculadas entre a soluo de biosurfactante e ar, e a soluo de biosurfactante e PCE, respectivamente (Wege et al., 2002).

8.10 ENSAIOS DE BATELADA SURFACTANTE / PCE

A determinao da solubilidade de PCE nos surfactantes Ac e R foi feita por ensaio de batelada (Figura 8.3). Em frascos rosqueados, selados com septos de silicone e liner de Teflon, foram colocados 20 mL de biosurfactante e PCE em quantidades que variavam de 0,01 a 1g. O material foi deixado sob agitao por 48 horas a temperatura de 20C. Foram coletados 5 mL de soluo de cada frasco, seguido de trs extraes com 5 mL de n-hexano. A fase orgnica foi reservada para posterior quantificao por cromatografia gasosa (item 8.4.1).

118

soluo Ac

PCE

Figura 8.3: Ensaio de determinao do aumento da solubilidade de PCE em soluo de biosurfactante Ac.

8.11 ENSAIO DE COLUNA SURFACTANTE / PCE

8.11.1 SATURAO DA COLUNA A saturao da coluna foi feita de acordo com o Item 8.2.1.

8.11.2 ENSAIO DE SOLUBILIZAO/MOBILIZAO POR BIOSURFACTANTE Foram realizados experimentos atravs da utilizao de biosurfactante (Ac e R). As solues de biosurfactantes foram preparadas de acordo com o Item 8.5, e purificadas de acordo com os Itens 8.6 e 8.7. A injeo da soluo de biosurfactante foi feita imediatamente aps o ensaio com o traador conservativo (item 8.3), no sentido topobase na vazo de 0,7 mL/min. Para cada ensaio foi injetado o correspondente a 10 volumes de vazios de soluo de biosurfactante. Amostras do efluente foram coletadas em intervalos de tempo de 30 minutos para determinao da concentrao de PCE. Ao final da injeo da soluo de biosurfactante, foi feita lavagem da coluna com 4 volumes de vazios de gua deionizada, seguida de outro ensaio com traador conservativo.

8.11.3 EXTRAO DO PCE Ao final do ensaio o PCE que no foi solubilizado/mobilizado foi extrado com nhexano para posterior quantificao por cromatografia gasosa (Item 8.4.1).

119

9. RESULTADOS E DISCUSSES DE REMEDIAO DO PCE

9.1 CARACTERIZAO DA AREIA
A areia utilizada nos experimentos pode ser caracterizada a partir da curva granulomtrica que pode ser observada na Figura 9.1. A areia foi classificada como areia mdia (D10= 0,4 mm; D50= 0,51 mm; D60/D10= 1,3) e cujo coeficiente de permeabilidade de 3,9 x 10-5 m.s-1.

ABNT
100 90 80 PORCENTAGEM PASSANDO 70 60 50 40 30 20 10 0

ARGILA

SILTE
PENEIRAS:
270

AREIA
FINA 200 100 60 MDIA 40 GROSSA 30 20 10

PEDREGULHO

FINO 4

MDIO 3/8 1/2 3/4 1

GROSSO 11/2 2 3

0 10 20 30 40 50 60 70

AREIA FRAO C

80 90 100

0.001

0.01

0.1

10

100

DIMETRO DAS PARTCULAS (mm)

Figura 9.1: Curva granulomtrica da areia frao C.

9.2 OXIDAO QUMICA POR KMnO4

Foram realizados 6 ensaios de oxidao de PCE por soluo de permanganato de potssio nas concentraes de 1, 5, 25 mM. As condies iniciais de cada experimento so mostradas na Tabela 9.1, com valor mdio para peso especfico seco da areia de 21,4 kN/m3.

PORCENTAGEM RETIDA

120

Tabela 9.1: Condio experimental dos ensaios de coluna utilizando permanganato de potssio. Parmetro Soluo de KMnO4 (mM) Volume de vazios (mL) Porosidade Saturao PCE (%) Ensaio Ox 1 25 198,3 0,34 16,6 Ensaio Ox 2 5 193,3 0,33 20,7 Ensaio Ox 3 1 197,9 0,34 16,2 Ensaio Ox 4 25 199,5 0,34 17,04 Ensaio Ox 5 5 195,5 0,33 17,5 Ensaio Ox 6 1 201,8 0,34 15,18

9.2.1 ANLISE DO EFLUENTE A Figura 9.2 mostra o resultado das anlises de PCE no efluente durante os ensaios de oxidao com KMnO4. Nos ensaios onde foram utilizadas as solues 1 e 5 mM de KMnO4 praticamente no houve variao na concentrao mdia de PCE. A concentrao de PCE no efluente variou entre 53,6 4,8 mg/L e 54,3 5,7 mg/L para as solues de injeo de KMnO4 a 5mM e a 1 mM, respectivamente. No ensaio onde foi utilizada soluo de KMnO4 a 25 mM o valor mdio da concentrao de PCE no efluente caiu para 39,6 6,1 mg/L.

100
KMnO4 1mM

80

KMnO4 5mM KMnO4 25mM

PCE (mg/L)

60

40

20

fim da injecao de solucao oxidante

0
0 20 40 60 80 100

Volume de Vazios

Figura 9.2: Concentrao de PCE no efluente, em funo do volume de vazios de soluo injetada, durante os ensaios de oxidao por KMnO4. Os intervalos entre as leituras referem-se aos horrios noturnos.

121

A Figura 9.3 mostra a taxa de utilizao de KMnO4 em funo do volume de vazios de soluo injetada, onde Co a concentrao inicial de KMnO4 e C a concentrao de KMnO4 no efluente. Pode-se verificar que cerca de 80% do permanganato injetado nos sistemas no foi consumida e que o aumento de 5 vezes na concentrao de KMnO4 no representa o correspondente aumento da taxa de consumo de KMnO4 durante a reao. A Figura 9.4 apresenta os resultados de pH medidos no efluente durante as os ensaios de oxidao do PCE por soluo de KMnO4. O pH do efluente nos ensaios onde foram utilizadas solues 5 e 25 mM de KMnO4 foi de 7,8, aproximadamente. importante ressaltar que as solues de KMnO4 eram preparadas a pH 9,0. No ensaio onde foi utilizada soluo de KMnO4 a 1 mM, o valor mdio do pH no efluente de 8,6. Embora haja diferena nos valores de pH do efluente, verifica-se que o comportamento do pH estvel ao longo da injeo de soluo oxidante.

1.0 0.8 KMnO4 (C/Co) 0.6 0.4

KMnO4 1mM

0.2 0.0 0 20 40

KMnO4 5mM KMnO4 25mM

60

80

Volume de Vazios

Figura 9.3: Taxa de KMnO4 no consumido em funo do volume de vazios de soluo injetada, durante os ensaios de oxidao por KMnO4. Os intervalos entre as leituras referem-se aos horrios noturnos.

122

9.0 8.5 8.0

pH

7.5 7.0 6.5 6.0 0 20 40 60 80

KMnO4 1mM KMnO4 5mM KMnO4 25mM

Volume de Vazios
Figura 9.4: Variao de pH no efluente durante a injeo da soluo de KMnO4. Os intervalos entre as leituras referem-se aos horrios noturnos.

9.2.2

ENSAIO DE TRAADOR

A variao da permeabilidade dos meios porosos foi estimada a partir da diferena entre o tempo que o traador atravessa a coluna, antes e aps a injeo de soluo oxidante. Nos experimentos onde foram utilizadas solues de KMnO4 a 5 e 1 mM, a reduo de permeabilidade ficou em 18% e 10% , respectivamente. As Figuras 9.5 e 9.6 mostram a concentrao relativa (C/Co) do traador em funo do tempo, antes e aps a injeo de 74 volumes de vazios de soluo de KMnO4 a 5 e 1 mM. Nos experimentos onde se utilizou soluo de KMnO4 25mM, no foi possvel medir a passagem do traador atravs da coluna. Acredita-se que o entupimento da coluna durante a injeo da soluo de KBr, pode ter sido provocado pelo excesso de partculas de MnO2 no meio. Durante o ensaio de oxidao a vazo de entrada, que mantida constante durante todo o ensaio atravs da bomba peristltica, de 2,0 mL/min. Como no ensaio com traador a vazo de entrada de 2,5 mL/min, a velocidade de Darcy aumentada de 25%, o que vai promover o deslocamento das partculas de MnO2 eventualmente provocando o entupimento da coluna durante o ensaio.

123

KMnO4 5mM
1

antes
0,8 Br- (C/Co)

depois

0,6

0,4

0,2

0 0 20 40 60 80 100 120 140 Tempo (min)

Figura 9.5: Variao da concentrao de brometo no efluente pelo tempo no ensaio utilizando soluo 5 mM de KMnO4.

KMnO4 1 mM

antes depois

0,8

Br - (C/Co)

0,6

0,4

0,2

0 0 20 40 60 80 100 120 140 Tempo (min)

Figura 9.6: Variao da concentrao de brometo no efluente pelo tempo no ensaio utilizando soluo 1 mM de KMnO4.

9.2.3 PCE REMOVIDO Ao final dos ensaios de oxidao o PCE que no foi oxidado era quantificado (PCE
final).

A determinao do PCE

removido

era feita pela diferena entre o PCE

inicial

124

(quantidade injetada na coluna) e o PCE

final

(quantidade extrada da coluna aps

removido

ensaio de oxidao). A Tabela 9.2 apresenta os valores de PCE

e a

concentrao de PCE no efluente obtidos nos ensaios de oxidao por KMnO4.

Tabela 9.2: Resultados de reduo de PCE na coluna aps injeo de soluo oxidante.

Ensaio Ox 1 Ox 2 Ox 3 Ox 4 Ox 5 Ox 6
(a)

KMnO4 (mM) 25

PCE no efluente (mg/L)(a) 59,3 44,0 41,3 63,2 45,7 39,5

PCE removido (%) 65.8 29.8 26.3 64,3 32,3 23,1

5
1 25 5 1

valor mdio de PCE no efluente aps injeo de soluo oxidante.

Os melhores resultados de oxidao de PCE foram obtidos utilizando a soluo 25mM de KMnO4. com a de PCE na coluna em 65,8%. Nos ensaios onde foram utilizadas solues de KMnO4 nas concentraes de 1 e 5 mM, observa-se que para baixas concentraes de KMnO4 seria necessrio o aumento do volume de soluo injetada, o que significa aumentar tambm o tempo de injeo, para alcanar valores semelhantes ao dos ensaios utilizando KMnO4 a 25 mM. Ao mesmo tempo, verfica-se que a eficincia do processo no satisfatria na eliminao da fonte de contaminao, se comparados com os padres internacionais (i.e. British Environmental Agency). Os valores permitidos para PCE em corpos hdricos no ultrapassam 10 g/L, e nesse caso, o PCE residual, aps uso de soluo oxidante, continuaria como fonte de contaminao a longo termo, gerando um efluente no mnimo 400 vezes acima do limite permissvel. A partir dos dados obtidos durante os ensaios (concentrao de PCE e KMnO4) foi possvel determinar a contribuio da reao de oxidao no aumento da solubilidade do PCE. A solubilidade do PCE em soluo calculada atravs da soma da concentrao mdia de PCE no efluente com a quantidade de PCE que reage com o permanganato. Quer dizer, a diferena entre a concentrao de KMnO4 na entrada da coluna menos a concentrao de sada, representa a quantidade de KMnO4 que reagiu com PCE. Utilizando a equao 7.2 (Captulo 7) possvel determinar a

125

quantidade de PCE consumida durante a reao. A Figura 9.7 mostra o comportamento do PCE em soluo em funo da concentrao da soluo de KMnO4.

450 PCE em soluo (mg/L) 400 350 300 250 200 150 100 50 0 0 5 10 15 KMnO4 (mM) 20 25 30 y = 9,7393x + 150,19 R2 = 0,9997

Figura 9.7: Aumento da solubilidade do PCE em funo da concentrao de KMnO4 na soluo.

Analisando a Figura 9.7 verifica-se que entre 1 e 25 mM de KMnO4 a reao apresenta um perfil linear, segundo a equao: PCE em soluo (mg/L) = 9,74 x KMnO4 (mM) + 150 (eq. 9.1)

Estudo realizado por HOOD et al. (2000) e HUANG et al. (2001) mostram que a reao quando a concentrao de KMnO4 est em excesso em relao ao PCE e se mantm constante durante a reao, a reao se comporta como pseudo primeira ordem. Ou seja, a substncia A se transforma em B, onde K1 o constante de degradao de A (LADD, 1998). A
K1

Sendo que a velocidade de degradao de A pode ser expressa pela equao 9.2. d[A]t / dt = - K1 [A]t (eq. 9.2)

126

Nesse caso, assume-se que no tempo t = 0 as concentraes das espcies so [A]0 e 0, respectivamente, logo, a eq. 9.1 pode ser integrada para: [A]t = [A]0 e (-K1 t) Onde: [A]0 a concentrao de PCE no tempo 0, obtida pela eq. 9.1 [A]t a concentrao de PCE na sada da coluna t o tempo em que a soluo de permanganato leva para atravessar a coluna K1 constante de degradao do PCE Com os valores de PCE obtidos pela equao 9.1, o valor mdio da concentrao de PCE medida no efluente e o tempo que a soluo de KMnO4 atravessava a coluna foi possvel determinar o K1 do PCE nas concentraes de KMnO4 de 1, 5 e 25 mM. A Tabela 9.3 apresenta os valores K1 em funo da concentrao de KMnO4. Como pode ser observado, os valores de K1 aumentam em funo do aumento da concentrao da soluo de KMnO4. (eq. 9.3)

Tabela 9.3: Valores do coeficiente de velocidade de degradao (Cv) de PCE em funo da concentrao de permanganato na soluo.

KMnO4 (mM) 1 5 25

K1 (10-4s-1) 1,7 2,3 3,9

Embora os resultados obtidos estejam muito acima dos padres de qualidade ambiental, so bastante promissores. De maneira geral, os ensaios mostram que para a obteno de melhores resultados de degradao de PCE em fase residual, necessria a utilizao de solues concentradas de KMnO4. Contudo, grande parte do permanganato no consumida durante o processo de injeo. Em termos prticos, poder-se-ia pensar na reinjeo da soluo de permanganato no sistema, a fim de minimizar os gastos com matria prima. A adio de Na2HPO4 a 250 mM

127

mostrou ser eficiente na manuteno do pH do sistema na faixa alcalina e evitando a formao CO2 dentro da coluna. O aumento de presso dentro da coluna poderia provocar a ruptura e alterao das propriedades hidrulicas do meio poroso, como foi verificado previamente por SCHNARR et al. (1998). Outro dado importante a diminuio na permeabilidade do meio. Se a taxa de converso de MnO4- em MnO2 dentro da coluna for aumentada, a superfcie de contato do PCE na fase livre com o meio aquoso diminuir, reduzindo a transferncia de massa de PCE para o meio aquoso. A Figura 9.8 mostra a diferena na colorao da areia antes a aps a reao com KMnO4. A colorao marrom da areia, aps o ensaio de oxidao, est relacionada quantidade de MnO2 precipitado.

1 mM

5 mM

Areia Original 25 mM
Figura 9.8: Alterao da colorao da areia ao final dos ensaios. A colorao marrom representa a cobertura dos gros de areia com MnO2.

Existe uma rea potencial de estudo relativa ao reaproveitamento da soluo de permanganato coletada no efluente. Uma vez garantida a eliminao do PCE na soluo efluente, a remoo do material precipitado, a correo da concentrao de KMnO4 e viabilidade econmica dessa operao, no haveria nenhum impedimento na reinjeo da soluo. Os valores de K1 obtidos nos ensaios de degradao podero ser utilizados em programas de modelagem numrica para prever o deslocamento da
128

pluma, melhor distribuio de poos de injeo e bombeamento e estimar o tempo de durao do processo, entre outros.

9.3 SOLUBILIZAO E MOBILIZAO USANDO BIOSURFACTANTE

9.3.1 DETERMINAO DE TENSO SUPERFICIAL E INTERFACIAL A anlise de acares totais foi usada para determinar a concentrao do biosurfactante na soluo de injeo. A concentrao de acares nas solues de Ac e R, determinada pelo mtodo fenol sulfrico, foram de 29,4 e 42,7 mg/L respectivamente. O resultado dos ensaios de tenso superficial pode ser observado na Figura 9.9.

80 70

16 14 12 10 8

Tenso Superficial (mN/m)

60 50 40 30 20 10 0 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 Tens.Sup. R Tens.Sup. Ac Vol. gota R Vol.gota Ac

( )
6 4 2 0

4000

Tempo (s)
Figura 9.9: Determinao da tenso superficial e volume da gota dos biosurfactantes Ac e R pelo mtodo da gota pendente. A linha pontilhada representa o valor da tenso superficial da gua. () representa o ponto de mudana de viscosidade do biosurfactante R.

O biosurfactante R reduz a tenso superficial da gua de 72 para 20 mN/m e Ac de 72 para 40mN/m. Contudo, ao final do experimento com R, foi observado que aps os 15 primeiros minutos do ensaio de gota pendente, houve mudana na viscosidade da amostra (lquido para gel). O mesmo fato que no foi observado com Ac.

Volume da gota ( L )

129

Os ensaios de tenso interfacial mostraram que Ac e R reduzem a tenso interfacial de PCE e gua de 44 para 20 e 25 mN/m, respectivamente (Figura 9.10).

45

Tenso Interfacial PCE/gua (mN/m)

40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 200 400 600 800

Ac R

Tempo (s)

Figura 9.10: Determinao da tenso interfacial entre PCE e os biosurfactantes Ac e R, pelo mtodo da gota pendente. A linha pontilhada representa o valor da tenso interfacial gua/PCE.

9.3.2 ENSAIOS DE BATELADA SURFACTANTE / PCE O resultado dos ensaios de batelada utilizando biosurfactante e PCE so apresentados na Tabela 9.4. O biosurfactante R capaz de aumentar a solubilidade do PCE em 8,5 vezes maior que a solubilidade do PCE em gua deionizada, enquanto que e o biosurfactante Ac capaz de aumentar a solubilidade do PCE em apenas 7 vezes.

Tabela 9.4: Resultados dos ensaios de batelada entre biosurfactante e PCE. Biosurfactanate R Ac Solubilidade PCE em gua (mg/L) 150 150 Solubilidade PCE no biosurfactante (mg/L) 1275 1050

130

9.3.3 ENSAIO DE COLUNA COMPARAO ENTRE Ac E R Nos ensaios de coluna observou-se que a forma de remoo do PCE feita pelo biosurfactante Ac foi condies experimentais dos ensaios de coluna utilizando os biosurfactantes Ac e R. A quantidade de PCE removida por solubilizao foi maior no experimento utilizando R que Ac (Figura 9.11). Entretanto, Ac foi capaz de promover a mobilizao do PCE na matriz de solo. Donde se conclui que a reduo da tenso interfacial entre gua/PCE promovida por Ac suficiente para reduzir o ngulo de contato na interface tripla solo/PCE/gua. Como resultado, o PCE se enrola podendo ser facilmente separado. O resultado da extrao do PCE que no foi removido da coluna pela injeo do biosurfactante o ensaio que utilizou o biosurfactante R removeu apenas 3,5% do PCE, pelo mecanismo de solubilizao. Ac removeu 23% do PCE, sendo que 2/3 do PCE foi removido por mobilizao. diferente da feita por R. A Tabela 9.5 mostra as

Tabela 9.5 Condio experimental dos ensaios. Parmetro Soluo de biosurfactante Volume de vazios (mL) Porosidade Condio residual de PCE na coluna (%) PCE na coluna aps injeo de surfactante (%) Ensaio Bio 1 R 198,3 0,34 17,9 17,3 Ensaio Bio 2 Ac 191,6 0,33 17,1 13,2

Como o biosurfactante Ac mostrou melhor eficincia na remoo de PCE, optou-se por produzir uma quantidade maior desse produto. Os novos ensaios tiveram como objetivo avaliar a eficincia na remoo de PCE com um volume maior do biosurfactante Ac e comparar os resultados com os ensaios de oxidao qumica utilizando permanganato.

131

Solubilizao de PCE
1400 1200 1000

PCE (mg/L)

800 600 400 200 0 0 2 4 6 8 10

Ac R

Volume de Vazios
Figura 9.11: Concentrao de PCE no efluente nos ensaios de coluna utilizando biosurfactante Ac e R.

Os ensaios com traador mostram que houve aumento na permeabilidade dos dois sistemas. No ensaio utilizando Ac a permeabilidade do meio aumentou em 14% e no ensaio utilizando R no houve alterao significativa de permeabilidade.

9.3.4 ENSAIO DE COLUNA COMPARAO ENTRE Ac E KMnO4 Nessa etapa foram realizados trs ensaios de coluna utilizando Ac na remoo de PCE. As condies iniciais e finais de cada ensaio podem ser observadas na Tabela 9.6. A Figura 9.12 mostra o esquema de injeo de Ac em coluna saturada com PCE. Pode-se observar a alterao de cor da soluo de Ac antes e depois de passar pela coluna. A aparncia lmpida do efluente indica que uma parte do material coloidal est ficando retida na coluna.
Tabela 9.6: Condies iniciais e finais do ensaio de coluna utilizando Ac. O volume de Ac injetado em cada ensaio corresponde a 30 volumes de vazios.

Ensaio Ac 1 Ac 2 Ac 3

Volume de vazios (mL) 209,2 204,2 201,6

Porosidade (n) 0,35 0,35 0,34

Saturao de PCE (%) 36 22 26

PCE removido (%) 41 47 45

132

(D)

(A) (B)

(C)

Figura 9.12: Esquema de injeo da soluo de biosurfactante Ac em coluna contaminada por PCE. (A) Soluo de injeo, (B) efluente, (C) bomba peristltica e (D) coluna saturada com PCE.

Os resultados obtidos nos Ensaios Ac indicam que com a injeo de 30 volumes de vazios, aproximadamente 6 litros de Ac, foi possvel remover, em mdia, 44% do PCE. Comparando com o resultado obtido no Ensaio Bio 2 (Item 9.3.3) pode-se dizer que a quantidade de PCE removido da coluna no proporcional quantidade de surfactante injetado. Exemplificando:

Ensaio Bio 2 Ensaio Ac

Injeo de 10 Vv ---------------------- 23% de remoo de PCE Injeo de 30 Vv ---------------------- 44% de remoo de PCE

Por esse motivo difcil estimar qual seria o volume necessrio de Ac para remover PCE aos nveis estabelecidos pela legislao.

133

Comparando as tcnicas de remediao por permanganato de potssio e surfactante pode-se dizer que: - a oxidao qumica por permanganato destri o contaminante durante o processo de injeo; - o surfactante solubiliza / mobiliza o contaminante durante o processo de injeo, masa soluo efluente precisa ser tratada posteriormente para eliminar o contaminante; - a oxidao qumica promove a precipitao de MnO2 nos pontos onde havia a presena de PCE, levando a reduo da permeabilidade do meio. O que diminuir a transferncia de massa entre a fonte e o fluxo subterrneo; e - a reduo de PCE nos poros da coluna favorece o aumento da porosidade do meio, o que poder aumentar a transferncia de massa do contaminante por aumentar a superfcie de contato.

9.4 BIODEGRADAO DE PCE

O objetivo dos ensaios de biodegradao era verificar a influncia de Ac na degradao de PCE. Foi utilizado o mesmo grupo de bactrias dos ensaios de biodegradao de HPAs e PCBs (PL4). A Tabela 9.7 apresenta os resultados obtidos nos ensaios de biodegradao de PCE.

Tabela 9.7: Ensaio de biodegradao de PCE em sistemas (a) bactrias PL4 e (b) bactrias em soluo de Ac. 15 dias PCE degradado Sistema Bactria 1 Bactria 2 Bactria 3 Bact. + Ac 1 Bact. + Ac 2 Bact. + Ac 3 PCE inicial (mg) 9,9 10,5 10,3 10,0 10,0 10,4 20,4 18,6 21,2 24,2 22,6 20,3 (%) PCE inicial (mg) 10,9 10,1 9,6 10,1 10,2 9,7 46,6 47,6 43,5 34,3 32,7 33,8 30 dias PCE degradado (%)

134

Observa-se que no meio onde s havia bactrias o consumo de PCE em 15 dias foi semelhante ao sistema que continha bactrias e Ac. Com 30 dias de ensaio essa relao muda, o meio onde havia somente bactrias passa a degradar mais PCE que o meio contendo bactrias e Ac. Fica claro que Ac no possui nenhum efeito inibidor as bactrias utilizadas nos ensaios. Contudo, esperava-se que o consumo de PCE no sistema contendo Ac fosse maior que no sistema contendo apenas bactrias, pois o aumento de solubilidade do PCE no meio aumentaria a biodisponibilidade, aumentando tambm o consumo. Esse resultado indica que a presena de uma fonte de carbono contendo acares, promove competio entre os substratos.

9.5 CONCLUSES PARCIAIS

Utilizando a eq. 9.1 possvel determinar a solubilidade do PCE durante a reao com KMnO4 na faixa de 1 a 25 mM, e que essa solubilidade aumenta com o aumento da concentrao de KMnO4. A constante de degradao do PCE (K1) aumenta em funo do aumento da concentrao de KMnO4 na soluo, mostrando que quanto maior a concentrao de PCE em soluo, maior ser a velocidade de degradao. Os ensaios de traador mostraram que nos experimentos onde foram utilizadas solues de KMnO4 a 5 e a 1 mM, a reduo de permeabilidade ficou em 18% e 10% , respectivamente. E para os ensaios onde foi utilizado KMnO4 a 25 mM houve entupimento da coluna. A reduo da permeabilidade do meio pode ser usada como um fator positivo, pois o MnO2 vai precipitar narea onde h maior concentrao de PCE, agindo como uma barreira hidrulica. O biosurfactante produzido pela bactria Acinetobacter (Ac) capaz aumentar a solubilidade de PCE em soluo em at 7,5 vezes. Os ensaios de coluna mostram que a injeo de 30 volumes de vazios de soluo de Ac capaz de remover 44% do PCE injetado na coluna. Alm disso, Ac um produto que no inibe o crescimento bacteriano, ou seja, biodegradvel.

135

10. CONCLUSES E SUGESTES

A correta avaliao do impacto causado por contaminantes persistentes est associada a uma boa amostragem e a correta anlise do solo, alm da avaliao da fauna e da flora do local. A escolha dos melhores pontos de amostragem s possvel com ajuda da geofsica (equipamentos do tipo GPR, eletroresistivmetro e cone ambiental). A anlise correta s poder ser feita com um bom conhecimento do contaminante, isto , propriedades fsico-qumicas, interao solo-contaminante e rotas no ambiente, assim como o uso das tcnicas de extrao apropriadas. Outro fator importante observar os dados das anlises, no se baseando somente nos valores de referncia. Esses valores nos auxiliam a ter bom senso, mas a questo ambiental vai alm de nmeros, pois muitas vezes o prprio ambiente nos d sinais de algo errado est acontecendo. necessria a formao de equipes interdisciplinares onde bilogos, qumicos, geofsicos e engenheiros possam trabalhar em conjunto, trocando informaes, pois nenhum desses profissionais isoladamente poder apresentar um diagnstico ou uma soluo para problemas relacionados ao meio ambiente. O julgamento incorreto de uma rea contaminada poder condenar a mdio ou curto prazo toda a biota do local e conseqentemente a populao que vive ao redor da rea;

10.1 CONCLUSES
Diversos compostos foram estudados utilizando diferentes tcnicas e cujos resultados sero resumidos abaixo: (1) Os resultados dos ensaios de biodegradao de HPAs indicam que as bactrias isoladas da Praia da Ribeira e da rea do lixo podero vir a ser usadas em processos de biorremediao de hidrocarbonetos de petrleo, tanto in situ como ex situ. Contudo, necessrio manter as condies timas para o desenvolvimento dos microrganismos. (2) Uma soluo para o problema de contaminao por PCBs na rea do lixo seria, primeiramente, a remoo da fonte de contaminao (PCB na fase livre) no ponto PL4. Num segundo momento entraria a montagem de sistemas de injeo e bombeamento com soluo de 0,066 de etanol em gua, para promover a biodisponibilizao dos PCBs retidos na frao orgnica do solo. A injeo da soluo de etanol deve ser
136

associada a bioaumentao das bactrias locais, que iro promover a degradao dos PCBs na fase aquosa, aproveitando a potencialidade da microflora local no processo de biorremediao in situ. Ao redor da rea de tratamento dever ser instalada uma barreira hidrulica, a fim de evitar o aumento da rea contaminada. (3) As taxas de degradao obtidas nos ensaios de biodegradaode HPAs e PCBs podero ser utilizadas como dados de entrada em programas de modelagem numrica (i.e. Bioscreen) para estimar o tempo de tratamento, deslocamento da pluma de contaminao e disposio dos poos de bombeamento e injeo. (4) Os resultados dos ensaios utilizando o Reagente de Fenton na desalogenao de PCBs mostraram a dificuldade de controle da reao. O volume de O2 liberado, o aumento brusco de temperatura e a produo de cido clordrico no so aconselhveis no tratamento de reas contaminadas em subsuperfcie. Outro fato que deve ser avaliado a toxicidade dos produtos de degradao gerados durante a reao de oxidao, no analisando nesse trabalho, que podero ser lanados na atmosfera ou dissolvidos na gua intersticial, causando problemas de contaminao em outras reas. O melhor uso do Reagente de Fenton seria o tratamento ex situ (i.e. reatores) onde podero ser controlados parmetros como temperatura, produo de gases e pH. O uso do Reagente de Fenton in situ s seria recomendvel em casos onde a contaminao estivesse na camada superficial do solo. (5) Para que a tcnica de Reagente de Fenton seja usada com pr-tratamento de biorremediao, necessrio que seja feita correo do pH para valores na faixa da neutralidade, para que no haja inibio do crescimento microbiano. (6) Os ensaios de coluna so um excelente recurso para auxiliar na escolha da tecnologia de remedio (e.i. oxidao qumica, biodegradao) a ser utilizada e para servir de base para os ensaios de campo. Os ensaios de laboratrio podem utilizar o solo da rea que ir ser tratada, podendo tambm, simular as condies de contaminao encontradas em campo. Ajudando a projetar o trabalho de campo. (7) O uso de permanganato na degradao de PCE apresenta uma srie de vantagens se comparado ao uso de biosurfactante. Dentre elas a diminuio da permeabilidade do meio e a destruio do PCE durante a passagem da soluo atravs do solo contaminado.

137

(8) Os dados de taxa de oxidao de PCE gerados nos ensaios de coluna podero auxiliar na concepo de projetos de remediao, isto : espaamento entre as bombas de injeo e suco; tempo de tratamento; e velocidade de injeo.

(9) Quanto melhor for concepo do projeto, maior a garantia de eliminao do PCE na soluo efluente existir. Assim, com a remoo do material particulado (MnO2) e a correo da concentrao de KMnO4, no haveria nenhum impedimento na reinjeo da soluo, o que diminuiria o consumo de permanganato no processo. (10) A utilizao de biosurfactantes na remoo de contaminantes da matriz do solo mostra-se bastante promissora. Contudo, so necessrios estudos mais aprofundados quanto estrutura da molcula e suas propriedades fsico-qumicas. S assim ser possvel determinar as melhores condies do uso e aplicaes dos biosurfactantes. (11) Os resultados apontam que vivel a produo de biosurfactante utilizando um meio de cultura simples, cuja fonte de carbono pode ser um acar ou acetato, sem que sejam necessrios gastos com solventes e equipamentos sofisticados no processo de purificao do produto. (12) Tanto os ensaios de oxidao qumica quanto os de biorremediao mostraram que nenhuma tcnica eficiente se usada isoladamente. Muitas vezes necessrio o uso combinado de tcnicas para que os nveis de contaminao fiquem dentro dos valores estabelecidos na legislao ou durante a fase de implantao do projeto. (13) Ficou claro tambm, que o aumento da solubilidade do DNAPL fundamental para aumentar a eficincia dos mtodos de remediao que foram estudados (biorremediao e oxidao qumica).

138

10.2 SUGESTES PARA PESQUISAS FUTURAS

Os dados de taxa de biodegradao de HPAs e PCBs gerados nesse trabalho podero ser usados em ferramentas numricas para estudo de casos reais. Uma outra etapa seria utilizar uma rea piloto onde possa ser simulada um caso real de contaminao para verificar a eficincia da biorremediao in situ. O mesmo pode ser aplicado para o Reagente de Fenton, o que ser de grande valia na determinao das condies de solo aps aplicao da tcnica (i.e. alterao de permeabilidade, produo de gases). O conhecimento da cintica de produo do biosurfactante Ac (crescimento microbiano, concentrao de surfactante, variao do pH do meio e mudana da tenso superficial com o tempo) ajudaria na otimizao do processo de produo, alm da identificao completa da molcula, determinao do CMC e comportamento em relao a outros contaminantes orgnicos. Os resultados de oxidao por permanganato tambm podero ser usados em programas de modelagem numrica. Assim como ensaios em sistemas 2 e 3D devero se executados para melhor compreenso do comportamento da pluma e alterao da permeabilidade do meio.

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150

ANEXO

151

Detalhe

32 S

43 S

PL 2

PL 3 PL 4

(z) Localizao dos pontos de coleta da rea do lixo (Figura adaptada de Miranda Neto, 2002).

152

153

154

Propriedades fsico-qumicas de alguns HPAs, PCB 1242 e PCE (fonte http://www.chemfinder.com)

Substncia

Peso Molecular

Frmula Qumica

Constante de Henry (atm.m3/mol) a 25C

Solubilidade (mg/L) a 25C

Log Koc

Antraceno Benzo[g,h,i]perileno Benzo[a]pireno Dibenzo[a,h]antraceno Fenantreno Fluoranteno Indeno[1,2,3 cd]pireno PCB 1242 PCE

178,24 276,34 252,32 278,36 178,24 202,26 276,34 154 a 358 165,83

C14H10 C22H12 C20H12 C22H14 C14H10 C16H10 C22H12 C12HxCly C2Cl4

6,51 x 10-5 1,4 x 10-7 < 2,4 x 10-6 7,33 x 10-9 2,56 x 10-5 0,0169 2,96 x 10-20 5,6 x 10-4 0,0153

0,075 0,00026 0,0038 0,00249 1,18 0,265 0,062 0,24 150

4,41 6,89 5,6 6,29 6,22 3,72 4,62 7,49 3,71 2,42

155

Concentrao de PCBs - Ponto PL2

20 P L2 - 2m

Concentrao (ppb)

16 12 8 4 0 P CB -28 P CB -52 P CB -101 P CB -118 P CB -153 P CB -138

P L2 - 4m

P CB -180

PCB

Concentrao dos congneres de PCB no ponto PL2 a 2 e 4 metros de profundidade.

Concentrao de PCBs - Ponto PL3

0.70 0.60 P L3 - 4m

Concentrao (ppb)

0.50 0.40 0.30 0.20 0.10 0.00 P CB -28 P CB -52 P CB -101 P CB -118 P CB -153 P CB -138 P CB -180

PCB

Concentrao dos congneres de PCB no ponto PL3 a 4 metros de profundidade.

156

Concentrao de PCBs - Ponto PL4

180 160

Concentrao (ppb)

140 120 100 80 60 40 20 0 P CB -28 P CB -52 P CB -101 P CB -118 P CB -153 P CB -138 P CB -180 P L4 - 2m P L4 - 4m

PCB

Concentrao dos congneres de PCB no ponto PL4 a 2 e 4 metros de profundidade.

Concentrao de PCBs - Ponto 32S

5

Concentrao (ppb)

32S - 2m 3m 32S - 4m

0 P CB -28 P CB -52 P CB -101 P CB -118 P CB -153 P CB -138 P CB -180

PCB

Concentrao dos congneres de PCB no ponto 32S a 2 e 4 metros de profundidade.

157

Concentrao de PCBs - Ponto 43S

10 8 43S - 2m 6 4 43S - 4m

Concentrao (ppb)

2 0 P CB -28 P CB -52 P CB -101 P CB -118 P CB -153 P CB -138 P CB -180

PCB

Concentrao dos congneres de PCB no ponto 42S a 2 e 4 metros de profundidade.

158