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SRIES EM BIOTECNOLOGIA

volume 3

BIODEGRADAO DE HIDROCARBONETOS
Nei Pereira Jr.;
Edelvio de B. Gomes &
Adriana Ururahy Soriano

1 edio
Rio de Janeiro, 2009

SRIES EM BIOTECNOLOGIA

volume 3

Biodegradao de Hidrocarbonetos

P 436 t
Pereira Jr., Nei (editor-autor)
Biodegradao de Hidrocarbonetos / Nei Pereira Jr., Rio de
Janeiro:
Escola
de
Qumica/UFRJ;
FAPERJ;
CNPq;
PETROBRAS 2009.
75 p.: il. (Sries em Biotecnologia, v.3)
ISBN: 978-85-903967-5-8
Inclui bibliografia.
1.

Biodegradao. 2.Hidrocarbonetos. 3. Biotratamento.

I. Pereira Jr., Nei. II. Gomes, Edelvio de Barros. III. Soriano,


Adriana Ururahy.
III. Ttulo. IV. Srie.
CDD 660

BREVE NOTA BIOGRFICA DOS AUTORES


Nei Pereira Jr. Professor Titular da Escola de Qumica da UFRJ; Engenheiro

Qumico (EQ/UFRJ, 1977); Mestre em Tecnologia de Processos Bioqumicos


(EQ/UFRJ, 1982) e Doutor em Biotecnologia (The Victoria University of
Manchester, UK, 1991). Ingressou como docente na Escola de Qumica da UFRJ
em 1978, na qual atua no ensino de graduao e de ps-graduao, pesquisa e
extenso na rea de Engenharia Bioqumica. Coordena trabalhos de pesquisa
acadmica e tecnolgica nos Laboratrios de Desenvolvimento de Bioprocessos e
Bioprodutos do Departamento de Engenharia Bioqumica, em temticas variadas,
como a produo de biocombustveis, enzimas, antibiticos, edulcorantes, cidos
orgnicos, biossurfactantes, incluindo tambm estudos voltados ao biotratamento
de efluentes e resduos recalcitrantes industriais. Possui diversas publicaes em
peridicos cientficos de relevncia internacional e nacional, bem como patentes.
J orientou 70 teses (44 de mestrado e 26 de doutorado) e, atualmente, orienta
8 estudantes de doutorado e 7 de mestrado no Programa de Ps-graduao da
EQ/UFRJ. o coordenador nacional da Rede Temtica em Bioprodutos da
PETROBRAS. Foi recentemente agraciado com os Prmios: PETROBRAS Inventor
2005, 2006 e 2007; Tese Ouro (2006), concedido pela Escola de Qumica por ter
atingido a orientao de 50 teses em seu Programa de Ps-graduao e Prmio
ABIQUIM Pesquisador de destaque 2006.

Edelvio de Barros Gomes Bacharel em Cincias Biolgicas pela


Universidade Federal Rural de Pernambuco (2001); Mestre em Biotecnologia de
Produtos Bioativos pela Universidade Federal de Pernambuco (2004); Doutor em
Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos pela Universidade Federal do Rio
de Janeiro (2008), tendo realizado a sua tese na temtica Biotratamento de
Resduo Oleoso da Indstria do Petrleo por Batelada Seqencial e Avaliao da
Ecotoxicidade. Atua nas reas de Biotecnologia Ambiental (nfase em
Biotratamento de Resduos do Setor Petrolfero e da Indstria de Papel-Celulose)
e Ecotoxicologia.

Adriana Ururahy Soriano graduada em Engenharia Qumica pela


Universidade Federal do Rio de Janeiro (1993), Doutora em Tecnologia de
Processos Qumicos e Bioqumicos pela Universidade Federal do Rio de Janeiro
(1998). Coordenadora do Grupo de Resduos e reas Impactadas da Gerncia de
Biotecnologia e Tratamentos Ambientais do Centro de Pesquisas Leopoldo A.
Miguez de Melo (CENPES) da Petrobrs. Atua nas reas de Biotratamento de
Resduos e Tecnologias de Remediao de Solos Contaminados por Petrleo,
Derivados e Biocombustveis.

APRESENTAO

Este terceiro volume de Sries em Biotecnologia tem por objetivo


apresentar aos estudantes de graduao e s pessoas interessadas nos temas
diversos da Biotecnologia Ambiental, os principais aspectos relacionados
biodegradao de compostos hidrocarbnicos.
A problemtica da contaminao dos ambientes por hidrocarbonetos de petrleo
recorrente. Tentativas de reduo ou minimizao dos impactos causados pela
presena destes compostos em solos, aqferos, ambientes marinhos e no ar
atmosfrico, tm suscitado providncias de carter emergencial bem como
medidas mitigadoras de mdio e longo prazos. Neste contexto, os processos de
natureza biolgica (bioprocessos) surgem como tecnologia emergente e
promissora, revelando-se como processos eco-compatveis.
Entretanto, para a efetivao dos bioprocessos no tratamento de resduos e
contaminantes de natureza hidrocarbnica se fazem necessrios: o entendimento
dos mecanismos utilizados pelos microrganismos para a degradao dessas
substncias;
o
conhecimento
dos
principais
aspectos
fsico-qumicos
influenciadores da ao microbiana e a investigao das caractersticas das
substncias que sejam preditoras de sua susceptibilidade biodegradao.
Os Laboratrios de Desenvolvimento de Bioprocessos (LADEBIO) da Universidade
Federal do Rio de Janeiro tm acumulado experincia ao longo dos ltimos 14
anos na temtica do biotratamento de resduos hidrocarbnicos, focalizando seus
estudos no tratamento ex situ de borras de refinarias e de resduos de terminais
de
armazenamento
e
distribuio
de
combustveis
de
petrleo.
Concomitantemente, tambm tm sido desenvolvidas pesquisas no mbito da
produo de biossurfactantes e sua aplicao como coadjuvantes na
biodegradao de leos pesados.
Apresentamos neste volume de forma didtica e sucinta, com base na nossa
vivncia e estudos, os principais aspectos qumicos, fsico-qumicos, bioqumicos
e ambientais relacionados degradao biolgica dos hidrocarbonetos de
petrleo. Adicionalmente, discorremos sobre a investigao dos riscos ambientais
inerentes presena dos resduos oleosos da indstria do petrleo nos ambientes
aquticos, mediante a utilizao de testes de ecotoxicidade.
Desta forma, nosso principal intento despertar o interesse dos estudantes e do
pblico em geral para o tema, mostrando as diretrizes para que possam realizar
estudos mais aprofundados, se assim o desejarem. Boa leitura!

Os Autores
6

SUMRIO

1. Introduo

2. Origem e Composio Qumica do Petrleo

3. Caractersticas Fsico-qumicas Influentes na Contaminao Ambiental

4. Classificao dos Grupos de Hidrocarbonetos do Petrleo e Suas


Interaes com o Ambiente

10

4.1. Influncia dos Hidrocarbonetos do petrleo nos Ambientes Aquticos

13

4.2. Deslocamento dos Hidrocarbonetos do Petrleo no Solo

15

4.3. Hidrocarbonetos do Petrleo no Ar

15

5. Tecnologias de Remediao

17

5.1. Processos Biticos de Remediao

17

5.2. Processos Abiticos de Remediao

20

6. Microbiologia Associada Degradao de Hidrocarbonetos

23

6.1. Microrganismos Degradadores de Hidrocarbonetos

23

6.2. Aspectos Bioqumicos da Biodegradao de Hidrocarbonetos

28

6.3. Fenmenos Interfaciais

48

7.

Aspectos Fsico-qumicos
Hidrocarbonetos

8. Estudos de
Hidrocarbonetos

Ecotoxicologia

e
e

Ambientais

da

Biodegradao

de

57

Avaliao

da

Ecotoxicidade

dos

59

8.1 Diferenas entre Ecotoxicologia e Toxicologia Ambiental

59

8.2 Algumas Definies em Ecotoxicologia

60

8.3 Organismos-teste

62

8.4 Ensaios de Ecotoxicidade Utilizando a Frao Solvel em gua dos


Hidrocarbonetos
8.5 Consideraes Acerca dos Estudos de Ecotoxicologia

64
64

9. Consideraes Finais

67

10. Referncias Bibliogrficas Recomendadas

68

BIODEGRADAO DE HIDROCARBONETOS
Nei Pereira Jr.; Edelvio de B. Gomes &
Adriana Ururahy Soriano
1. Introduo
Nos ltimos 30 anos as atenes da academia e dos gestores ligados
ao setor petrolfero tm se voltado para a soluo de problemas relacionados
presena dos hidrocarbonetos de petrleo no meio ambiente. Neste perodo,
incidentes envolvendo liberao de grandes quantidades de petrleo ou derivados
deram vazo a um sem-nmero de estudos de campo e em escala de bancada.
No entanto, sabido que as primeiras investigaes de cunho cientfico de que se
tm registro no mbito da biodegradao de hidrocarbonetos remontam desde a
dcada de 1940, com a clssica reviso de Zobel, datada de 1947 (ZOBEL apud
URURAHY, 1998).
Em termos prticos, na ocorrncia de um incidente como derramamento ou
vazamento de leo, as primeiras providncias a serem tomadas so de natureza
fsica (geralmente, remoo mecnica). Em seguida, podem ser utilizados
produtos qumicos (surfactantes qumicos) para disperso do leo. Em tese, as
tcnicas biotecnolgicas so utilizadas em um terceiro momento, para a
biotransformao do material restante, podendo chegar mineralizao,
fenmeno caracterizado pela converso dos hidrocarbonetos em gs carbnico
(CO2) e gua. Tais tcnicas podem ser in situ, ocorrendo no local, a exemplo da
atenuao natural, bioaumento e bioestimulao; e ex situ, onde o material
tratado fora do local. Nestes casos, podem ser utilizadas biopilhas e biorreatores.
O emprego das tecnologias de biorremediao e dos biotratamentos aos
ambientes contaminados por petrleo e seus derivados fundamenta-se nas
habilidades e potencialidades bioqumicas de uma grande quantidade de gneros
microbianos, que, atuando em conjunto podem transformar substncias mais
complexas e recalcitrantes em substncias menos txicas e mais compatveis do
ponto de vista ambiental. Para tal, fatores como: caractersticas culturais dos
microrganismos; aclimatao; suplementao de nitrognio e fsforo (relao
C:N:P); tamanho de inculo; disponibilidade de gua; aerao; pH; temperatura;
estrutura qumica dos compostos, entre outros, so fundamentais na efetividade
do processo de biodegradao dos hidrocarbonetos. Assim, quando se tenciona a
estimulao da degradao de hidrocarbonetos por microrganismos, devem-se
levar em conta todos esses fatores, quer seja isoladamente, quer seja suas
interfaces.
Antes, porm, de entendermos os mecanismos e os aspectos relacionados
biodegradao, importante percebermos quais as caractersticas composicionais
dos hidrocarbonetos que esto presentes no petrleo, como podem ser
classificados estes compostos, que caractersticas fsicas e qumicas podem
interferir no seu deslocamento nos diferentes ambientes e como estes compostos
podem interagir com os diferentes ambientes.
8

2. Origem e Composio Qumica do Petrleo


O petrleo constitudo por uma mistura complexa de compostos
orgnicos como olefinas, n-alcanos, parafinas ramificadas, parafinas cclicas,
compostos aromticos, compostos oxigenados e compostos sulfurados. Contudo,
os hidrocarbonetos so majoritrios. A frao lquida total do petrleo
denominada de leo cru, a qual constituda de quatro classes principais de
hidrocarbonetos: saturados, aromticos, resinas e asfaltenos (FLOODGATE, 1984;
GLAZER & NIKAIDO, 1995). O Instituto Americano do Petrleo (API) classifica
quimicamente os hidrocarbonetos do petrleo em dois grandes grupos: o grupo
dos compostos saturados e o grupo dos compostos insaturados. Nesta
classificao, os compostos aromticos e os compostos olefnicos esto includos
como compostos insaturados. Os compostos saturados so referidos tambm
como alcanos ou parafinas, e entre eles encontram-se os alcanos de cadeia
aberta ou n-alcanos; os alcanos de cadeia ramificada ou isoalcanos; e os alcanos
cclicos ou cicloalcanos (figura 1) (API, 2001).

Hidrocarbonetos do Petrleo

Saturados

Isoalcanos

n-alcanos

Insaturados

Cicloalcanos

Aromticos

Olefinas

Figura 1: Classificao qumica dos hidrocarbonetos do petrleo.


(Fonte: API, 2001).
importante observarmos que, no obstante sua origem biognica, que remonta
do perodo permiano a partir de organismos presentes em mares rasos (cerca de
280 a 245 milhes de anos), as caractersticas originais do petrleo foram
modificadas ao longo dos sculos por processos geolgicos e, mais recentemente
nos ltimos dois sculos, por aes antrpicas. Estas aes, embora ocorridas em
um curto perodo de tempo (quando comparado ao perodo de formao do
petrleo), tm sido responsveis pela acelerao da formao de novos
compostos que so lanados no ambiente e que, por sua vez, so mais
recalcitrantes e txicos que os compostos de origem (ATLAS & BARTHA, 1972;
ATLAS, 1995a; ATLAS, 1995b).

3. Caractersticas Fsico-qumicas Influentes na Contaminao Ambiental


A natureza qumica da fonte hidrocarbnica poluente e as
peculiaridades do ambiente em que ela se encontra, so responsveis pela
extenso e velocidade da contaminao, pela disperso do poluente, e
conseqentemente, pelos danos causados aos ecossistemas. Assim, ambientes
diferentes, respondem de forma diferente a um mesmo contaminante, da mesma
forma que um mesmo ambiente pode reagir de formas diferentes a diferentes
contaminantes.
Sabe-se que o deslocamento de uma mistura hidrocarbnica em um determinado
ambiente constitui em um parmetro importante quando se deseja avaliar os
riscos ambientais. este deslocamento que ir resultar na exposio em menor
ou maior grau dos seres humanos ou do ambiente s substncias qumicas
danosas. Algumas caractersticas fsico-qumicas dos hidrocarbonetos tm efeito
direto sobre seu deslocamento. As mais influentes so:
a) Solubilidade em gua: Esta propriedade talvez o mais importante fator
determinante do transporte de hidrocarbonetos nas guas residurias e nas
guas superficiais;
b) Volatilidade: A volatilidade dos hidrocarbonetos determinante da
movimentao dessas substncias atravs do ar atmosfrico e de outros gases;
c) Densidade: A densidade de um hidrocarboneto ou de uma mistura de
hidrocarbonetos empregada para calcular as quantidades em massa dessas
substncias presentes na mistura, podendo ser expressa em densidade API, a
qual representa a medida da massa especfica mdia da mistura ou massa
especfica de um dado hidrocarboneto isoladamente. A densidade do
hidrocarboneto ou da mistura hidrocarbnica em API inversamente proporcional
massa especfica a 60F (15C) e expressa por um dgito variando de 9 a 50,
tendo como unidade o grau API (API). No Brasil, a unidade utilizada para
representar a densidade ou massa especfica dos hidrocarbonetos de petrleo o
quilograma por metro cbico (kg/m3) ou o grama por centmetro cbico (g/cm3)
(ANP, 2000). Como ponto de referncia, a gua possui densidade 10 API;
d) Viscosidade: Este parmetro representa a medida da resistncia interna de um
fluido ao seu escoamento. Materiais altamente viscosos (com viscosidade maior
que a da gua) no escoam facilmente sob fora da gravidade, ao contrrio da
gua, que tendo menor viscosidade escoa mais facilmente. A viscosidade de um
fluido tende a decrescer com o aumento da temperatura;
e) Ponto de orvalho: Representa a temperatura abaixo da qual um determinado
leo no escoa de modo bem definido. O ponto de orvalho para muitos leos
ocorre a partir da precipitao de parafinas, onde uma espessa massa
interligante formada. leos isentos de parafinas, por exemplo, possuem ponto
de orvalho que dependem apenas da viscosidade, tendendo a se solidificarem,
formando um material vtreo, na medida em que a temperatura diminui e a
viscosidade aumenta. Ao contrrio, muitos leos crus com altas concentraes de
parafinas, podem apresentar-se como slidos j a temperaturas em torno dos
32C (API, 2001; PLICE, 1948; WSPA, 1993).
A movimentao de uma mistura hidrocarbnica lquida no ambiente, logo
depender da interao entre estes cinco principais parmetros supracitados. A
liberao de hidrocarbonetos lquidos na superfcie de um solo insaturado pode
10

resultar na migrao vertical atingindo prontamente o lenol fretico. Este


movimento vertical ser influenciado pela densidade, viscosidade e pelo ponto de
orvalho da mistura hidrocarbnica. Por exemplo, um determinado leo com
elevado de ponto de orvalho, pode apresentar-se muito viscoso para mover-se
verticalmente no solo em um ambiente de clima frio, mesmo que sua baixa
densidade sugira que esta movimentao seja vivel. Se na mistura
hidrocarbnica existem volteis, os compostos hidrocarbnicos individuais podem
ser liberados no espao entre os poros do solo. Se essa liberao ocorre numa
magnitude suficientemente grande, os hidrocarbonetos lquidos podem atingir
rapidamente a lmina capilar sobre o lenol fretico e se espalhar
horizontalmente. A extenso desse espalhamento inicialmente controlada pela
saturao e permeabilidade relativa na sub-superfcie.
Entre outras interaes, h de se considerar a solubilidade das substncias que
chegam ao lenol fretico. Tambm fica claro que, essas relaes no esto
totalmente
estabelecidas
e
que
muitas
propriedades
apresentam
comportamentos diferentes do esperado, sendo necessrio estudo detalhado de
cada caso (API, 2000a; API, 2000b; API, 2001).
4. Classificao dos Grupos de Hidrocarbonetos do Petrleo e Suas
Interaes com o Ambiente
Como conseqncia direta da composio qumica, diferentes grupos
de hidrocarbonetos de petrleo apresentam diferenas quanto disposio nos
ambientes. Desta forma, fraes distintas do petrleo, como leos crus, produtos
refinados, condensados e resduos oleosos, apresentam maneiras singulares de
se movimentarem nos ambientes, como descritas a seguir:
leos Crus: Em 1993, a Western States Petroleum Association dos Estados
Unidos (WSPA) em estudo comparativo, relacionou as caractersticas fsicoqumicas de diferentes leos crus, gasolinas e leos dieseis, s suas
caractersticas ambientais (WSPA, 1993). Constatando que alguns leos crus,
inclusive, so menos densos que a gua (densidade em torno de 0,85g.cm-3 e
0,98g.cm-3). Devido grande variabilidade entre os leos crus de diferentes
origens, a densidade pode assumir valores com diferenas significativas. Valores
tpicos de densidade variam entre 10 e 45 API. Os leos apresentam-se em
geral como lquidos viscosos a temperaturas e presses de superfcie com ponto
de orvalho tipicamente alto a temperaturas mais baixas. A temperatura e o ponto
de orvalho so extremamente importantes devido sua implicao direta na
fluidez, que impedir a percolao rpida atravs do solo em pases de clima
temperado em determinadas pocas do ano.
Produtos Refinados: Os produtos refinados derivados dos leos crus possuem
densidade geralmente menor que 1,0g.cm-3 e valores de densidade API entre 15
e 62. As solubilidades desses produtos em gua tendem a aumentar em
proporcionalidade direta com o aumento da densidade API, obedecendo
seguinte gradao: gasolina > querosene > diesel n2 > leo combustvel n2 >
leo combustvel n6. A viscosidade dos produtos refinados aumenta em funo
da massa molecular e do ponto de ebulio, aumentando da gasolina (menor
viscosidade e ponto de ebulio) para o leo lubrificante (maior viscosidade e
ponto de ebulio). O ponto de orvalho dos refinados depende da frao
11

parafnica do leo cru, embora geralmente o ponto de orvalho aumente junto


com o aumento da viscosidade.
A Tabela 1 mostra algumas fraes de produtos refinados e suas respectivas
temperaturas de ebulio e faixas de nmeros de tomos de carbonos presentes.
Condensados: Embora no exista muita informao disponvel sobre as
propriedades fsico-qumicas dos condensados, estas misturas hidrocarbnicas em
geral apresentam densidade API maior que 45. Esta informao sugere que
estes produtos no so viscosos temperatura ambiente, e que so
relativamente volteis e solveis em gua. Ao mesmo tempo, dados
composicionais, em um levantamento realizado com quatro condensados,
revelaram a presena de alcanos de alta massa molecular (HAWTHORNE et al.,
1998). A presena desses alcanos tende a aumentar a densidade e a viscosidade,
e diminuir a solubilidade e a volatilidade da mistura hidrocarbnica.
Tabela 1: Faixas de temperaturas de ebulio e tomos de carbono de acordo
com a frao destilada (Fonte: API, 2001).
FRAO
(PRODUTO
DESTILADO)

FAIXA DE
EBULIO
(C)

TOMOS
DE
CARBONO

Gasolina
Nafta
Querosene
leo diesel
leos pesados
Lubrificantes

30-200
100-200
150-250
160-400
315-540
425-540

5 -10
8-12
11-13
13-17
19-25
20-45

Resduos de Explorao e Produo (E&P), de Refino e de Produtos Refinados:


Devido natureza composicional diversificada dos resduos oleosos, torna-se
praticamente impossvel uma avaliao de suas propriedades fsico-qumicas
puras, como observado para os leos crus e para os produtos refinados.
Resduos de E&P possuem caractersticas semelhantes as do leo cru, contendo,
porm, expressivas concentraes de sal originrio da gua de formao
associada ao petrleo. Os resduos de refino tambm apresentam caractersticas
semelhantes as do leo cru, contudo, apresentam em geral, menor salinidade e
maior teor de metais. A maioria desses resduos consiste de uma matriz slida ou
lquida contendo hidrocarbonetos originados de leo cru ou de gs natural (Figura
2 e Tabela 2).
Nestes casos, o objeto de investigao passa a ser a tendncia que esses
hidrocarbonetos tm de serem liberados a partir dessa matriz complexa para o
ambiente, atravs das guas residurias ou dos gases do solo. As propriedades
fsicas de importncia, relacionadas s substncias qumicas presentes nos
resduos so: a) soro/dessoro; b) solubilidade; c) volatilidade; d) saturao
do solo. Alm destas propriedades, deve-se observar tambm, aquelas inerentes
matriz do resduo, como alguns slidos especficos, por exemplo, que podem
estabelecer maior fora de ligao com determinados compostos de que com
outros (AMELLAL, 2001; WSPA, 1993).
12

Figura 2: Aspecto de amostra de borra oleosa de refino.


(Fonte: URURAHY, 1998).

Tabela 2: Tipos de borra e suas respectivas composies em percentual de gua,


leo e slidos (adaptado de URURAHY, 1998).

Tipo de Borra
Borra de fundo de tanque

Pequeno porte

Grande porte
Borra de dessalgadora

Pequeno porte

Grande porte
Borra de SAO

Pequeno porte

Grande porte
Lodos de tratamento

Filtrao

Centrifugao

Biolgico
Slops e derramamentos
Derramamentos lquidos
Derramamentos asflticos
Graxas, resinas e parafinas
Borras com chumbo

leo

Composio (% p/p)
gua
Slidos

30 60
40 - 60

40 70
40 - 60

5
30 40

85
30 40

10
20 40

10 20
10 40

50 80
60 90

10 30
5 20

10
8 10
0,1 0,5

70
80 90
80 90

20
10 12
10 12

30 40
100
100
-

1-10

60 70
90

Com relao aos Resduos de Produtos Refinados, verifica-se que suas


propriedades fsicas esto diretamente relacionadas as do produto original (como
o Diesel e a gasolina), e por isso so mais leves, mais solveis em gua e menos
recalcitrantes. Assim, resduos de leo diesel ou gasolina, tero propriedades
semelhantes as da gasolina ou do leo diesel que os originou (Figura 3 e Tabela
13

3). Estes resduos so denominados genericamente de borras de claros.


Como conseqncia, o deslocamento dos hidrocarbonetos presentes nesses
resduos estar susceptvel aos mesmos princpios que determinam o
deslocamento dos produtos refinados ou mesmo dos leos crus.

Figura 3: Amostra de resduo de fundo de tanque de leo diesel.


(Fonte: GOMES, 2008).
Tabela 3: Propriedades fsico-qumicas de amostra de resduo de fundo de tanque
de leo diesel. Fonte: GOMES (2008).

Propriedade

Unidades

Valores
observados

Valores tpicos
(leo diesel)

Mtodo

Kg/m3

854,20

820,0 880,0

ASTM D1298

Ponto de fulgor

90,00

60 (mnimo)

Viscosidade a
40C

cSt

4,33

1,6 6,0

Adimensional

4,00

3,0 (mximo)

No possui

Material
slido em
suspenso

Claro, lmpido
e isento de
material slido
em suspenso

Densidade

Cor ASTM
Aspecto visual

4.1.

Influncia
Aquticos

ASTM D93
ASTM D445

dos

Hidrocarbonetos

do

Petrleo

nos

ASTM D1500
-

Ambientes

Devido ao espalhamento lateral do leo, dificuldade de sua


conteno na superfcie da gua e aos danos causados biota marinha, maior
ateno dada aos derrames ocorridos em ambientes aquticos. Nestes
ambientes, o petrleo provoca a morte de peixes, aves marinhas e outras formas
14

de vida. O leo derramado pode permanecer por mais ou menos tempo em uma
determinada rea, dependendo da corrente marinha, da sua composio e de
uma srie de fatores, tais como: Fatores fsicos - sendo um dos mais importantes
a turbulncia da gua; Fatores qumicos especial ateno dada ao fenmeno
da fotodecomposio, e fatores biolgicos, sobretudo a biodegradao.
Esse conjunto de fatores e condies determinar o percurso do petrleo e seus
derivados no mar, bem como seu grau de ecotoxicidade e seu tempo de
persistncia no ambiente marinho (ATLAS, 1984).
As guas dos mares e oceanos so constitudas de uma mistura complexa de sais
cuja concentrao varia de acordo com a estao do ano e a regio geogrfica.
Esta variao associada degradao qumica e fsica do petrleo contribui para
a formao de centenas de compostos complexos, com graus especficos de
toxicidade e recalcitrncia.
Descargas de leo no mar, apesar de serem quase sempre em maior quantidade
do que em terra, so mais susceptveis biodegradao. Devido ao menor tempo
de residncia das guas dos mares, o leo nessas reas tem mais facilidade de
ser biodegradado do que em reas prximas a esturios, onde o tempo de
residncia das guas bem maior, causando maiores danos biota local. O
aporte de minerais e de oxignio, que so fatores de elevada importncia na
biodegradao de hidrocarbonetos de petrleo, esto diretamente relacionados
ao tempo de residncia da gua (ATLAS, 1984).
Grande parte das descargas de petrleo e de seus derivados se d por lavagens
de tanques de navios em alto mar. Aps a descarga do produto, os tanques so
cheios com a gua do mar (gua de lastro), para que seja mantida a estabilidade
do navio. Antes de fazer uma nova carga com produto, essa gua descartada
no mar, e com ela so descartadas algumas dezenas de milhares de litros de
petroderivados. Outra forma, bem mais drstica, se d pelo vazamento de
produto por naufrgios decorrentes de rupturas na estrutura do navio. Em
regies prximas a terminais porturios h grande susceptibilidade a esses
derrames.
O petrleo encontrado no ambiente marinho em quatro estados: filme, soluo,
emulso e em grumos. Muitos tipos de leos so espalhados rapidamente e
reduzidos a uma camada muito fina. A espessura dessa camada em uma rea de
guas paradas depende da taxa de evaporao, da tenso superficial do leo e da
gua do mar neste local. O acmulo de hidrocarbonetos nesta camada afeta
diretamente a vida marinha que se encontra imediatamente abaixo dela. Os
grumos so encontrados em tamanhos variados, sendo depositados no fundo do
mar devido ao seu peso, e essas partculas se acumulam e se complexam,
formando uma camada de material altamente recalcitrante sobre o sedimento
(MARTY & SALIOT, 1976).
Nos rios e lagos, o petrleo e seus derivados podem persistir por mais tempo,
dependendo da natureza do leo e da sua composio, alm do tempo de
residncia da gua, que nesses casos bem maior que nos mares e oceanos. Por
exemplo, os leos leves, que so ricos em material txico constitudo por
aromticos volteis, permanecem menos tempo que os leos pesados e os
combustveis martimos. Os leos crus, por sua vez, so menos susceptvel
biodegradao do que os seus derivados (ATLAS & BARTHA, 1972).
15

4.2.

Deslocamento dos Hidrocarbonetos do Petrleo no Solo

Sabe-se que no solo, o leo alm de sofrer processo de


fotodecomposio, percola e pode atingir o lenol fretico. Em ambientes
terrestres, a distribuio dos derivados lquidos de petrleo pontual, com
espalhamento lateral pouco extenso e de fcil controle. A rea atingida no solo
bem pequena quando comparada rea de mesma quantidade de poluente
derramado no mar ou mesmo em lagoas.
Os principais problemas da contaminao em solo esto relacionados ao
espalhamento vertical (percolao), devido ao constante risco de atingir o lenol
fretico (CORSEUIL et al 1997). A natureza fsico-qumica do solo e o tamanho de
suas partculas influenciam diretamente na percolao e na degradao do
poluente. Fraes de argila e silte-argila, por exemplo, so mais susceptveis
formao de complexos com hidrocarbonetos policclicos aromticos que as
fraes de areia. Tal fenmeno se deve no somente granulometria, mas
tambm presena de filossilicatos que so capazes de formar complexos com
substncias cclicas de baixa massa molecular e alquil-substitudas (AMELLAL et
al., 2001; NOCENTINI et al., 2000; IJAH, 1998; IJAH & ANTAI, 2003). Desta
forma, filossilicatos tendem a retardar a migrao de poluentes orgnicos
aumentando, por sua vez, a sua reteno na matriz porosa.
Tambm o teor de matria orgnica afeta o comportamento de hidrocarbonetos
no solo, uma vez que apresentam elevada afinidade com estes contaminantes.
O grau de saturao do meio outro fator importante para o processo de
migrao e biodegradao de petrleo e derivados no solo, j que parte do
contaminante
se particiona no mesmo e a
biodegradao ocorre
preferencialmente em presena de gua embora o oxignio (fundamental
degradao aerbia) apresenta baixa solubilidade em gua.

4.3.

Hidrocarbonetos do Petrleo no Ar

No ar, os hidrocarbonetos de petrleo podem ser encontrados como


pequenas partculas dispersas, ou como componentes de material particulado
complexo. Sua concentrao varivel, porm, em reas prximas a fontes fixas
de contaminao tende a ser maior.
Em especial, os hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA) tm sido bastante
estudados quanto sua disperso e ocorrncia (Figura 4a e b). Um dos mais
importantes fatores de risco que deve ser levado em conta quando se pensa em
contaminao do ar a exposio aos carcinognicos carreados pelo ar, como os
HPA, que geralmente ocorrem prximo aos pontos de emisso como automveis,
indstria de refino, transporte de petrleo e derivados, sobretudo de querosene
de aviao (KANIKKANAN, 2004).
O nvel de exposio aos HPA de fontes biognicas baixo quando comparado
com outras fontes, como tabaco, por exemplo. A meia vida dos HPA espalhados
pelo ar da ordem de dias, mas pode ser maior quando so associados ao
material particulado do ar. O material particulado poluente do ar formado por
uma mistura complexa e heterognea de compostos (metais, sais, material
16

carbnico, compostos orgnicos volteis, HPA) e componentes biolgicos


(bactrias, endotoxinas, fungos) que podem ser acoplados ao centro
hidrocarbnico, que serve como um ncleo de condensao (BILLET et al., 2008).

naftaleno

fluorene

acenafteno

acenaftileno

antraceno
pireno

fenantreno

fluoranteno

Figura 4a: Alguns hidrocarbonetos policclicos aromticos.

criseno

coroneno

benzo[a]pireno

perileno

colorantreno

Figura 4b: Alguns hidrocarbonetos policclicos aromticos.


17

Os HPA associados a materiais particulados so mais danosos aos seres humanos


do que as fraes isoladas desses hidrocarbonetos. Isto se deve ao fato de que os
HPA de alta massa molecular so predominantes na fase particulada.
Outra fonte importante de contaminao do ar atmosfrico nas metrpoles o
gs liquefeito de petrleo (GLP), que consiste em uma mistura em propores
variveis de propano e butano.

5.

Tecnologias de Remediao

Uma grande variedade de tecnologias utilizadas na remediao de


ambientes impactados por petrleo e seus derivados conhecida. Diante de um
incidente envolvendo a liberao de grandes quantidades de petrleo ou produtos
derivados, as medidas tomadas inicialmente so de natureza fsica, atravs de
remoo mecnica do leo. Em seguida, podem ser utilizadas substncias
qumicas capazes de dispersar o contaminante, os surfactantes qumicos. Em
ltima instncia, lana-se mo das medidas de remediao, dentre as quais se
destacam as tcnicas biotecnolgicas.

5.1.

Processos Biticos de Remediao

A biorremediao um conjunto de tcnicas biotecnolgicas em


que se utilizam microrganismos ou produtos e processos microbianos para a
reduo de impactos causados ao meio ambiente por contaminantes (ATLAS,
1995a).
Quanto ao local onde ocorre, o processo de biorremediao pode ser classificado
como:
Biorremediao in situ: o tipo de biorremediao que ocorre no local onde
houve o derrame ou contato massivo com o contaminante, e os microrganismos
presentes no stio conduzem o processo de biodegradao. Pode ocorrer com a
adio de nutrientes para aumentar a taxa de biodegradao, sendo esse
procedimento chamado de bioestimulao, ou com a adio de microrganismos
exgenos ao ambiente, procedimento conhecido como bioaumento (Figura 5).

Figura 5: Bioaumento.
18

Como exemplos de tecnologias de biorremediao in situ, destacamos a


tecnologia de atenuao natural monitorada.
Biorremediao ex situ: modalidade de biorremediao que envolve a remoo
do material contaminado para outra rea na qual este tratado.
Dentre as tecnologias de biorremediao ex situ, citam-se:

Landfarming

Alguns autores se referem a essa tecnologia de tratamento biolgico de resduos


como uma tecnologia de biorremediao mista, a qual aplicada sobre o solo,
reduzindo a concentrao de constituintes de petrleo presentes neste, atravs
de processo de biorremediao. Esta tecnologia envolve o espalhamento da
camada superficial do solo contaminado escavado (no mais que 1,5 metros)
promovendo a atividade microbiana aerbia, podendo ser auxiliada pela
bioestimulao, com adio de minerais e gua (figura 6).
Espcies bacterianas comprovadamente degradadoras de hidrocarbonetos de
petrleo podem ser adicionadas ao processo para aumentar a taxa de
degradao. A magnificao da atividade microbiana aumenta a degradao dos
compostos adsorvidos. O solo deve ser bem misturado para aumentar o contato
entre os compostos orgnicos e os microrganismos e fornecer o oxignio
necessrio degradao biolgica aerbica. Dependendo da taxa de degradao,
os solos com histrico de contaminao com compostos hidrocarbnicos, e que
esto sendo biotratados tambm podem ser reaplicados ao stio contaminado a
intervalos regulares ajudando a amplificar a atividade biolgica.
A tecnologia landfarming praticada h cerca de 100 anos, e na indstria do
petrleo, h cerca de 30 anos. Os hidrocarbonetos mais volteis e fraes de
leos de menor massa molecular tendem a evaporar durante o processo de
revolvimento do solo, enquanto que a reduo dos compostos mais pesados se
d essencialmente por atividade microbiana aerbia (HARMSEM, 1991; RAAG,
2000).

Compostagem ou Biopilha

Tambm chamadas clulas de compostagem e pilha de biorremediao. Este


tratamento consiste no envolvimento do solo contaminado com petrleo em
montes ou pilhas, e a estimulao da atividade aerbia microbiana com a adio
de minerais e gua. Temperatura e pH podem tambm ser controlados para
magnificar a biodegradao. As reas tratadas so providas de cobertura
impermevel (geralmente) para reduzir as perdas por lixiviao para as reas de
solo no contaminado. H duas configuraes possveis: esttica e dinmica. No
primeiro caso a aerao promovida por sistema de distribuio de ar ou vcuo,
e no segundo caso por revolvimento peridico. Estas pilhas que tm um sistema
de ventilao por onde o ar passa, podem situar-se a seis metros e devem ser
cobertas para prevenir encharcamentos e evaporao. Se existirem compostos
volteis, o ar deve ser tratado. Podem receber materiais estruturantes como
serragem, palha etc. As biopilhas so similares ao landfarming, sendo que, neste
ltimo, o solo aerado atravs de ps e escavadeiras (Figura 6).

19

Figura 6: Revolvimento do solo durante aplicao de tecnologia landfarming.


(Fonte: Desler Inegniera y Servicios Ambientales. Acesso 11-01-2009.
www.desleronline.com).

Biorreatores

O emprego de biorreatores ocorre principalmente quando se necessita tratar


resduos oleosos lquidos provenientes de tanques de armazenamento de
combustveis, ou quando se deseja tratar lodos e borras de produo e refino de
petrleo (Figuras 7 e 8). Para estas finalidades, diferentes modos de operao de
biorreatores tm sido estudados, tanto em escala de bancada como em escala
piloto. Sistemas operados por batelada simples, bateladas seqenciais, bateladas
alimentadas, processos contnuos e biorreatores em srie, so exemplos dos mais
amplamente estudados. Os modos operacionais influenciam sobremaneira na
eficincia do processo de degradao do poluente. Consideraes importantes
devem ser feitas quando da escolha do modo de operao. A natureza do resduo
poluente tambm deve ser levada em considerao. Por exemplo, um sistema
utilizado para tratar um poluente que seja txico a baixas concentraes pode
atingir baixas taxas de degradao se o processo for conduzido por batelada
simples. J o modo de operao por batelada seqencial, preconiza alimentao
do biorreator com quantidade fixa de material, e logo aps um dado perodo de
tempo (perodo de reao) ocorre a descarga do material tratado e a adio de
uma nova carga na mesma quantidade inicial, propiciando uma exposio
gradativa da microbiota ao resduo e possibilitando a ocorrncia de aclimatao.
Esse modo parece ser mais interessante, sobretudo quando se deseja avaliar a
biodegradao do resduo a cada perodo de reao e quando se quer investigar a
influncia da microbiota aclimatada nas mudanas nessas taxas ao longo da
batelada.
Entre os modos de operao por batelada seqencial e o modo contnuo, as
vantagens e desvantagens associadas relacionam-se principalmente capacidade
de remoo da carga orgnica e aos requerimentos operacionais. Embora o modo
de operao por batelada seqencial em muitos casos seja mais efetivo do ponto
de vista das altas taxas de biodegradao atingidas, demanda maior
complexidade operacional, ao contrrio do modo contnuo, que prev a
alimentao constante do biorreator.
20

Figura 7: Modelo de biorreator utilizado para tratamento de borras de refinaria


(Fonte: URURAHY, 1998).

Figura 8: Aspecto de resduo oleoso aps 120 horas tratado em biorreator


operado por batelada seqencial (Fonte: GOMES, 2008).

5.2.

Processos Abiticos de Remediao

Os processos abiticos de descontaminao de reas poludas so


definidos como aqueles que envolvem mtodos qumicos ou fsicos de remoo de
poluentes.
Os mtodos qumicos mais comuns so: a neutralizao, a
precipitao, oxidao, aplicao de surfactantes e a extrao por solventes
(KOVALICK, 1991; PIA et al., 2002; YERUSHALMI et al., 2003). H de se
ressaltar ainda a remoo por separadores de gua e leo, que um mtodo
mecnico simples baseado na diferena de densidade entre a gua e a fase
oleosa apolar.
21

Alguns processos abiticos ocorrem naturalmente, no dependendo de aplicao


de mtodos fsicos ou qumicos, como o caso da evaporao. A fotoxidao ou
fotodecomposio outra forma natural de atenuao do poluente, que
observvel em locais contaminados, sendo esse processo um dos mais
importantes na transformao do petrleo nos ambientes aquticos (PATEL et al.,
1979; FERNANDES, 1994).
Em muitos casos comum utilizar tecnologias de biorremediao
concomitantemente com outras tecnologias de remediao. preciso conhecer a
natureza qumica bem como as caractersticas fsico-qumicas do contaminante e
as caractersticas do ambiente contaminado. Assim, cada ambiente contaminado
requer uma combinao de procedimentos que permitam a otimizao do
processo de remediao.
Destacamos aqui algumas dessas tecnologias em que se pode lanar mo dos
princpios fsicos, qumicos e biolgicos concomitantemente:

Lavagem de solo

Baseia-se na utilizao de lquidos (em geral gua, ocasionalmente combinada


com solventes) e processos mecnicos para a lavagem de solos. Os solventes so
selecionados de acordo com sua habilidade de solubilizar contaminantes
especficos e de acordo com seus efeitos sade e ao meio ambiente. Este
processo separa a frao mais fina do solo (silte-argila) da poro de maior
granulometria. Uma vez que os contaminantes orgnicos tendem a ligar-se s
fraes mais finas, a separao destas fraes reduz significativamente a
contaminao do solo. A menor frao de solo que contm a maioria de partculas
silte e argila pode ser tratada separadamente por diferentes mtodos como
incinerao ou biorremediao, ou ainda descartada de acordo com a legislao
vigente. Cabe ressaltar que, a afirmao de que a menor frao do solo
constituda em sua maioria de partculas silte-argila, no ser verdadeira para
solos tropicais, aplicando-se a solos de pases de clima temperado. Esta
tecnologia pode ser combinada com outras. Os grupos de contaminantes-alvos,
inclui compostos orgnicos semi-volteis, petrleo e resduos de combustveis,
metais pesados, bifenilas policloradas, HPA e pesticidas.

Extrao de vapores do solo

Tambm conhecida como extrao a vcuo, tem sido bastante aceita e


reconhecida por apresentar boa relao custo-benefcio na remediao de solos
insaturados contaminados com compostos orgnicos semi-volteis e volteis.
Envolve a instalao de poos horizontais e/ou verticais na rea da contaminao
do solo. So utilizados sopradores de ar para auxiliar no processo. O vcuo
aplicado atravs dos poos no local prximo fonte de contaminao a fim de
evaporar o constituinte voltil o qual retirado por um poo de extrao
adjacente. Os vapores extrados so tratados (em geral por adsoro com
carbono) antes de serem liberados na atmosfera (USEPA, 1995a). O aumento do
fluxo de ar atravs da superfcie promovido por esse sistema tambm estimula a
biodegradao dos contaminantes, em especial aqueles que so menos volteis
(USEPA, 1996; 1998). Outra utilizao deste processo no tratamento de guas
residurias, atravs de bombeamento de gua e espargimento simultneo de ar
(Figura 9).
22

Figura 9: Ilustrao de um sistema de extrao de vapores do solo.

Dessoro Trmica

uma tecnologia de tratamento de resduos inovadora na qual o solo


contaminado escavado, peneirado, e aquecido para liberar o petrleo de seus
interstcios (USEPA, 1995b). As temperaturas de aquecimento do solo variam
numa faixa de 100 a 600C, para que aqueles contaminantes que possuem ponto
de ebulio nesta faixa vaporizem e se separem. Os contaminantes vaporizados
so ento coletados e tratados por outros mtodos. H uma ligeira confuso
conceitual que se faz em relao dessoro trmica e a incinerao: dessoro
trmica no objetiva destruir os compostos orgnicos, mas sim transform-los
em uma forma mais tratvel, enquanto que a incinerao objetiva destruir o
contaminante. O real processo de dessoro trmica envolve o aquecimento do
solo em uma cmara onde os contaminantes orgnicos e alguns metais so
vaporizados. A partir da, um gs ou um sistema de vcuo transporta o material
vaporizado para tratamento fora do stio contaminado. Se ocorrer a oxidao no
lugar da vaporizao, o processo se transforma em incinerao. Com base na
temperatura da cmara de vaporizao, o processo pode ser classificado como:
dessoro trmica de baixa temperatura ou dessoro trmica de alta
temperatura.
Apesar da grande quantidade de tecnologias conhecidas atualmente, se faz
necessrio o conhecimento do maior nmero de variveis possveis em relao ao
stio contaminado e ao poluente, para que uma tcnica seja escolhida com
segurana e preciso. Somente desta forma possvel chegar ao maior nvel de
eficincia (REDDY et al., 1999; KHAN et al., 2004).
Portanto, mesmo dispondo-se de muitas tecnologias, a escolha da mais adequada
depender pelo menos de cinco fatores fundamentais:
23

i.
ii.
iii.
iv.
v.

6.

Caractersticas do stio contaminado;


Requerimentos regulatrios legais;
Custos;
Tempo total do processo;
Riscos ambientais envolvidos e as metas de remediao de acordo com
tais riscos.
Microbiologia Associada Degradao de Hidrocarbonetos

Para melhor compreenso e utilizao dos processos microbianos na


degradao de poluentes orgnicos, se faz necessrio conhecer no s os
microrganismos envolvidos, mas tambm os mecanismos por eles utilizados bem
como os fenmenos fsicos, qumicos e bioqumicos relacionados. Como em
qualquer processo em que se empregam microrganismos fundamental a
otimizao dos parmetros relacionados aos nutrientes, fornecimento de
oxignio, pH entre outros. Particularmente, a biodegradao de compostos
orgnicos envolve a biodisponibilidade e a toxicidade destes substratos.
Analisaremos aqui, os principais tpicos relacionados microbiologia associada
degradao de hidrocarbonetos:
A) Microrganismos degradadores de hidrocarbonetos;
B) Aspectos bioqumicos da biodegradao;
C) Fenmenos interfaciais.

6.1.

Microrganismos Degradadores de Hidrocarbonetos

Uma grande diversidade microbiana est associada degradao de


hidrocarbonetos do petrleo, principalmente espcies bacterianas e fngicas,
sobre as quais existe uma extensa lista de trabalhos e revises bibliogrficas. As
contribuies relativas de bactrias e fungos para mineralizao de
hidrocarbonetos tm sido relatadas desde a dcada de 1940, com a clssica
reviso de Zobel, em 1947 (Zobel apud URURAHY, 1998) que investigou mais de
100 espcies as quais so representativas de 30 gneros, que tem habilidade de
degradar hidrocarbonetos. Muitos outros trabalhos e revises sobre
microrganismos degradadores de hidrocarbonetos do petrleo foram produzidos
ao longo das dcadas subseqentes (ZAJIC & SUPPLISSON, 1972; SONG et al.,
1986; FEDORAK et al., 1984; OKPOKWASILI & AMANCHUKWU, 1988;
ROSENBERG, 1991). Song et al. (1986), por exemplo, observaram que em solo
arenoso sem histrico de contaminao, 82% de n-hexadecano foi mineralizado
por bactrias, enquanto que fungos mineralizaram 13% desse hidrocarboneto. De
forma similar, em outros trabalhos, bactrias foram evidenciadas como mais
eficientes degradadoras do que fungos leveduriformes. Complementarmente,
poucos trabalhos reportam que espcies de leveduras sejam melhores
degradadoras que espcies bacterianas (WALKER et al., 1978; ROSENBERG,
1991; IJAH, 1998).
Atlas (1981), em uma reviso, faz um relato de inmeras experincias que
apresentam gneros e espcies microbianas isoladas de ambientes contaminados
por leo cru. Grande parte destes trabalhos reflete preocupaes com
derramamentos de leo. Como marco, o acidente ocorrido com o petroleiro
24

Torrey Canyon em 1967 impulsionou a produo de inmeras pesquisas e


isolamentos de microrganismos.
Acidentes ocorridos com outros petroleiros
como: Exxon Valdez, Amoco Cadiz, IXTOC I e Maersk Navigator, tambm
serviram de base para comparaes e estudos de caso (ATLAS, 1981b; ATLAS,
1995a; ATLAS, 1995b; GUPTA et al, 1996).
Desta forma, uma grande variedade de gneros de microrganismos degradadores
isolados de ambientes aquticos ou mesmo de solos e sedimentos em regies
costeiras, passa a ser conhecida. Bartha & Atlas (1977) isolaram de ambientes
aquticos, 22 gneros de bactrias, 14 de fungos e 1 de alga. Entre outros, foram
isolados os gneros: Pseudomonas, Achromobacter, Arthrobacter, Micrococcus,
Nocardia,
Vibrio,
Acinetobacter,
Brevibacterium,
Corynebacterium,
Flavobacterium, Candida, Rhodotorula e Sporobolomyces. Com base nos
trabalhos de Englert & Kenzie (1993) e Atlas (1984), podemos listar os principais
gneros de bactrias e fungos encontrados associados degradao de
hidrocarbonetos de petrleo (Tabela 4).
Nas ltimas trs dcadas, porm, a utilizao de tcnicas moleculares, a exemplo
daquelas baseadas no emprego do DNA ribossomal (rDNA), deu uma nova
dimenso aos estudos de ecologia microbiana e, conseqentemente, ao
conhecimento da microbiota associada degradao de hidrocarbonetos. A partir
da, os microbiologistas verificaram que as populaes microbianas naturais so,
de fato, muito maiores e muito mais diversas do que se imaginava antes, quando
as informaes baseavam-se em tcnicas dependentes do cultivo. Esta nova
dimenso extensiva aos microrganismos envolvidos na degradao de
poluentes orgnicos, uma vez que o ambiente natural d suporte a uma grande
variedade de microrganismos com potencialidades degradadoras, que ainda no
foram identificados, e que por sua vez, desempenham um papel fundamental na
biorremediao (WATANABE, 2001; WATANABE, 2002). De tal modo, as
informaes moleculares passaram a ser utilizadas no desenvolvimento de
estratgias que visam magnificao da biorremediao (especialmente na
bioaumentao), avaliao das conseqncias da presena do poluente sobre
as populaes naturais (avaliao dos riscos microbiota nativa) e avaliao da
dinmica das populaes presentes no processo (LI et al, 2008).
Estudos clssicos de biodegradao de poluentes orgnicos principiam pelo
isolamento de um ou mais microrganismos capazes de degradar um determinado
poluente-alvo. Como nem todas as espcies microbianas so de fato cultivveis,
estes isolados representam uma frao muito pequena das populaes totais.
Estima-se que apenas 1 a 10% dos microrganismos podem ser isolados por
tcnicas clssicas (ROSADO, 1997; WATANABE, 2001). Por outro lado,
ferramentas moleculares como a Eletroforese em Gel com Gradiente de
Desnaturantes (DGGE) (Figuras 9 e 10) e a Eletroforese em Gel com Gradiente
de Temperatura (TGGE), tm sido cada vez mais aplicadas na determinao
direta da diversidade gentica de populaes microbianas presentes em
ambientes contaminados. Estas metodologias se baseiam na eletroforese dos
produtos da reao em cadeia da polimerase (PCR) de genes da subunidade 16S
do rDNA, em gis de poliacrilamida, contendo um gradiente crescente de agentes
desnaturantes (no caso do DGGE), ou de temperaturas (no caso do TGGE). Os
genes das subunidades 16S esto presentes em todos os organismos e a partir
deles pode-se diferenciar uma espcie bacteriana de outra. Os fragmentos que
possuem o mesmo tamanho e seqncias nucleotdicas diferentes podem ser
separados em bandas no eletroferograma, baseando-se na diferena de
25

mobilidade das molculas aps desnaturao qumica ou trmica de seus


domnios (Figuras 10 e 11). Desta forma, o nmero de bandas fornecidas por
DGGE ou por TGGE pode ser utilizado como um estimador da abundncia das
espcies no ambiente submetido presena do poluente orgnico, bem como da
persistncia de algumas espcies durante o processo (Li et al., 2008).

Tabela 4: Gneros de microrganismos degradadores (Fontes: ATLAS, 1984;


ENGLERT & KENZIE, 1993)
Bactrias
Achromobacter, Acinetobacter,
Anthrobacter, Bacillus,
Brevibacterium,
Chromobacterium,
Corynebacterium, Cytiphaga,
Flavobacterium, Micrococcus,
Mycobacterium, Nocardia,
Proteus, Pseudomonas, Sarcina,
Serratia, Spirillum,
Streptomyces, Vibrio,
Xanthomonas.

Fungos
Acremonium, Aspergillus, Aureobasidium,
Beauveria, Botrytis, Candida,
Chrysosporium, Cladosporium,
Cochliobolus, Cylindrocarpon,
Debaryomyces, Fusarium, Geotrichum,
Glicocladium, Graphium, Humicola,
Monilia, Mortierella, Paecilomyces,
Penicillium, Phoma, Rhodotorula,
Saccharomyces,Scolecobasidium,
Sporobolomyces, Sprotrichum, Spicaria,
Tolypocladium, Torulopsis, Trichoderma,
Verticillium.

50

100

Figura 10: Dendrograma indicando relao parental entre membros da


comunidade microbiana mista presentes em resduo oleoso tratado, prevalentes
ao longo do processo conduzido por batelada seqencial. (Fonte: GOMES, 2008).

26

Figura 11: Dendrograma e eletroferograma indicando a estrutura da comunidade


microbiana antes de contaminao com leo (C_0; C_15; C_30; C_90;180;
C_270; C360) e depois da contaminao com leo(CO_0; CO_15; CO_30;
CO_90;180; CO_270; CO_360) em tempos de amostragens de 0, 15, 30, 90,
180, 270 e 360 dias. (Fonte: EVANS et al. 2004).
Watanabe (2001), em uma reviso, apresenta alguns grupos de microrganismos
identificados por tcnicas moleculares, os quais esto associados degradao de
hidrocarbonetos, ao tratamento de guas residurias e oxidao de metano.
So levantados trabalhos nos quais filotipos afiliados subclasse (alfa) do
grupo Proteobacteria (-Proteobacteria) aparecem com freqncia nos
fingerprints obtidos por DGGE a partir de amostras de sedimentos
contaminados com leo, o que sugere associao desses filotipos degradao
dos hidrocarbonetos presentes no leo. Em outros trabalhos, como o de Gross et
al. (2000), que estuda sedimento contaminado por leo na costa da Noruega,
relatada a presena majoritria de filotipos provenientes da subunidade 16S
rDNA afiliados subclasse (gama), -Proteobacteria, sobretudo representando
os gneros Pseudomonas e Cycloclasticus, encontrados em sedimento arenoso
contaminado com leo aditivado com fertilizante. Li et al. (2006), em um estudo
da dinmica microbiana durante a biodegradao de hidrocarbonetos de petrleo,
mostra a ligao da subclasse -Proteobacteria e particularmente da famlia
Sphingomonadaceae degradao de leo diesel.
Estudos do impacto da bioestimulao e da contaminao por petrleo na
diversidade bacteriana de solo tm mostrado que as mudanas na comunidade
em solo contaminado so maiores quando comparadas s mudanas na
comunidade presente em solo bioestimulado no contaminado. importante
observar que a utilizao dessas tcnicas moleculares bastante til na indicao
do momento em que ocorrem mudanas significativas na comunidade a partir da
introduo da mistura hidrocarbnica no meio estudado (EVANS et al., 2004).
27

A utilizao dos estudos de ecologia molecular microbiana por tcnicas como as


de DGGE associada aos biotratamentos de resduos em biorreatores favorece a
investigao das mudanas na comunidade microbiana responsveis pela
degradao do poluente orgnico, podendo-se com isto, por exemplo, inferir em
que momento do processo poderemos fazer ajustes nas condies qumicas e
fsico-qumicas do meio reacional para favorecer a determinados grupos
microbianos.
Outra caracterstica importante nos estudos de ecologia microbiana associada aos
biotratamentos a possibilidade de avaliao do impacto causado na diversidade
microbiana pela adio de resduos oleosos ou outros materiais recalcitrantes.
Li Hui et al. (2007), estudando a dinmica das mudanas na estrutura da
comunidade microbiana durante a degradao de compostos de petrleo,
verificaram que o nmero de bandas de DGGE decresceu de 40 para 25, quando
as concentraes de leo testadas chegaram a valores de 5.000mg/kg de solo,
confirmando com isso que a altas concentraes os compostos recalcitrantes
promovem uma presso seletiva na comunidade.
Igualmente, verifica-se tambm a importncia assumida pelas investigaes dos
perfis da comunidade microbiana por DGGE no delineamento de culturas mistas
com elevado potencial degradador de hidrocarbonetos de petrleo.
Daz-Ramirez et al. (2007), em trabalho recente, avaliaram a atividade
degradadora de dez isolados microbianos frente a diferentes hidrocarbonetos de
petrleo, analisando os perfis em gis de cada tratamento e observado as
seqncias prevalentes em cada situao. Desta forma, os autores propuseram
um consrcio microbiano com base nas habilidades degradadoras particulares de
cada microrganismo.
Condies preconizadas por processos ex situ em biorreator permitem a
adaptao de alguns grupos de microrganismos da comunidade presentes nas
misturas hidrocarbnicas colocando-os em evidncia pelas suas capacidades de
tolerar e, principalmente, degradar os hidrocarbonetos do resduo. Nesse caso o
alvo so os reflexos que as mudanas na comunidade podem vir a ter na
efetividade do processo.
Convm salientar que investigaes da dinmica das mudanas na comunidade
no refletem apenas os microrganismos ativos presentes no resduo, mas sim
todo o rDNA encontrado no meio reacional. Desta forma, citamos, como exemplo,
processos conduzidos por bateladas seqenciais onde destacamos que as bandas
reveladas nos gis de DGGE refletem a dominncia de grupos, no significando
que alguns grupos anteriores, que so evidenciados no incio dos processos,
possam ter desaparecido nas etapas subseqentes, mas sim que tenham
diminudo significativamente sua populao. Do contrrio, muitos grupos que so
verificados em todas as etapas dos processos, podem no necessariamente estar
ligados biodegradao, mas sim ao acmulo de biomassa, uma vez que, no
caso das bateladas seqenciais, trabalha-se com a biomassa acumulada ao longo
do processo, sendo esta mantida na fase aquosa durante todos os ciclos.
Por certo, conveniente afirmar a partir das constataes de Eichner et al.
(1999), que o nmero e intensidade das bandas de DGGE no so iguais ao
nmero e abundncia de gentipos dentro da comunidade microbiana devidos s
caractersticas da filogenia baseada no 16S rDNA e tendncia amplificao do
PCR a partir de misturas parentais complexas.
28

possvel que as bandas representem as espcies mais abundantes, mais ativas,


ou aquelas cujo DNA seja mais extravel, ou ainda todas essas alternativas ao
mesmo tempo. Ainda no existe consenso com relao a qual dessas
possibilidades a mais propensa a acontecer. Entretanto, tem-se observado que
a tcnica de DGGE bastante sensvel e rpida para a investigao das
mudanas na estrutura da comunidade. Para os estudos de biodegradabilidade ou
biotratamento em biorreatores, sobretudo quando da conduo do processo por
bateladas seqenciais, onde possvel a avaliao do material tratado a cada
ciclo, esta tcnica revela-se como uma ferramenta que pode ser amplamente
utilizada na investigao dos agentes biodegradadores, bem como na otimizao
das condies de tratamento com base nas capacidades de cada espcie
isoladamente.
6.2.

Aspectos Bioqumicos da Biodegradao de Hidrocarbonetos

O fenmeno da biodegradao de hidrocarbonetos tem como


fundamentao a capacidade que muitos microrganismos possuem de utilizar tais
substncias como nica fonte de carbono e energia (ATLAS, 1981, ATLAS, 1984,
ALEXANDER, 1994). Embora muitos mecanismos de biodegradao sejam
conhecidos, alguns aspectos precisam ser ainda elucidados. Portanto, a
bioqumica da degradao de hidrocarbonetos est longe de ser um tema trivial.
Contudo, algumas generalizaes podem ser feitas:
i)

Hidrocarbonetos alifticos so em geral mais facilmente biodegradados que


os aromticos;

ii)

Hidrocarbonetos alifticos de cadeia normal so mais fceis de serem


biodegradados que os de cadeia ramificada. A introduo de uma
ramificao dentro de uma molcula do hidrocarboneto diminuir sua
biodegradabilidade;

iii)

Hidrocarbonetos saturados so mais susceptveis degradao que os


insaturados. A presena de dupla ou tripla ligao carbono-carbono dificulta
a biodegradao;

iv)

Hidrocarbonetos alifticos com tamanho de cadeia a partir de 8 tomos de


carbono so mais facilmente degradados tanto menor seja o tamanho de
sua cadeia. O comprimento de cadeia timo para a biodegradao parece
ser de dez a vinte tomos de carbono.

Biodegradao de Hidrocarbonetos Alifticos

Um grande nmero de bactrias, fungos e leveduras mostram-se capazes de


metabolizar os hidrocarbonetos alifticos e por este motivo, muitos vm sendo
estudados acerca de suas fisiologias, sobretudo no que diz respeito aos
mecanismos de assimilao de contaminantes e aos processos metablicos
responsveis pela iniciao do catabolismo dos mesmos. Os hidrocarbonetos
alifticos representam, para os microorganismos, uma fonte de substrato em
potencial. Esta classe engloba substncias gasosas (como metano e etano),
lquidas e slidas, sendo que o estado lquido prevalece em compostos de at 20
tomos de carbono, patamar alm do qual predominam os slidos. O estado
fsico em muito responsvel pela susceptibilidade ao ataque microbiano.
29

Existem, no entanto, algumas excees citadas na literatura, as quais


normalmente resultam das aes cometablicas. A degradao de asfaltenos
(que isoladamente revelam acentuada recalcitrncia) por culturas bacterianas
mistas, em ambientes contendo n-alcanos de 12 a 18 tomos de carbono, ilustra
este fenmeno. O cometabolismo evidencia, portanto, a influncia da
heterogeneidade composicional sobre as taxas de degradao, tanto do leo
como um todo, como das suas fraes isoladamente (LEAHY & COLWELL, 1990).
Em alguns casos, as taxas de assimilao e de mineralizao dos poluentes so
proporcionais s concentraes dos compostos presentes e seguem a cintica
Monodiana. o caso da degradao de alguns aromticos leves, de solubilidade
em gua relativamente alta, tais como o tolueno. O modelo cintico no vlido,
no entanto, para outros hidrocarbonetos insolveis. O consumo de substncias
aromticas de maior massa molecular tende a ser controlado pela solubilidade e
no pela concentrao.
Os hidrocarbonetos alifticos englobam tanto cadeias lineares, como ramificadas.
No entanto, todos os compostos so insolveis e hidrofbicos, caractersticas
facilmente explicveis, pelo fato de s existirem ligaes do tipo carbono-carbono
e carbono-hidrognio. Coerentemente, a solubilidade inversamente
proporcional massa molecular e exerce influncia marcante nas taxas de
metabolizao da matria orgnica. Algumas das propriedades fsicas de
parafinas e olefinas podem ser observadas na tabela 5.
A partir das observaes feitas, pode-se afirmar que os agentes degradadores
desta classe de compostos apresentam diferentes afinidades pelos substratos. Em
geral compostos gasosos e lquidos so mais rapidamente atacados, muito
embora hidrocarbonetos lquidos de baixa massa molecular confiram certo efeito
inibitrio sobre os microorganismos, face ao carter solvente dos mesmos. No
outro extremo, parafinas de C20 a C40 normalmente obstruem a ao
microbiana, exatamente pelo fato de serem slidas e hidrofbicas. No toa
que so reportadas na literatura como graxas (BANERJI et al., 1995).
Geralmente, a degradao s pode ser iniciada sob condies de aerobiose, uma
vez que as reaes envolvendo as enzimas oxigenases parecem ser
indispensveis para a ativao metablica das molculas de alcano, que, alis,
so as substncias mais estudadas desta classe.
Na literatura podem ser encontrados alguns estudos relativos degradao de
hidrocarbonetos alifticos, sob condies de anaerobiose. No entanto, os estudos
a respeito dos mecanismos envolvidos demonstram, ainda hoje, grande
controvrsia. Portanto, face esta realidade e tendo em vista a maior
representatividade da aerobiose, as rotas metablicas em anaerobiose no sero
aqui exploradas.
Os alcanos de cadeia normal so degradados primariamente por oxidao do
grupo metil terminal, seguido de uma clivagem da molcula na regio entre o
segundo e o terceiro carbono da cadeia (-clivagem). Outras vias como a
oxidao subterminal pela metanooxigenase encontrada em Pseudomonas
methanica, tambm tm sido documentadas. A reao inicial na degradao do
grupo metil envolve a adio direta do oxignio ao carbono terminal do
hidrocarboneto. Esta reao mediada por oxigenases. A adio do oxignio ao
carbono primrio promove a formao de um lcool primrio, que oxidado a
aldedo e finalmente transformado em cido graxo. Um fragmento longo de dois
30

carbonos terminais clivado produzindo o acetil CoA, que entra na via metablica
do ciclo de Krebs. Uma repetio seqencial destas reaes resulta na completa
oxidao da molcula de hidrocarboneto. Na Figura 12, observa-se a seqncia
de reaes proposta como via de degradao de alcanos (BAKER & HERSON,
1994).

Tabela 5: Propriedades fsicas de algumas parafinas e olefinas.


(Fonte: URURAHY, 1998)
Composto

No de
tomos
de C

MM
(g/mol)

Ponto
de
Fuso
(oC)

Ponto
de
Ebulio
(oC)

Solubilidade
(mg/L)

Etano
n-hexano
n-decano
n-hexadecano
n-eicosano
n-hexacosano
2-metilpentano
2,2,4-trimetilpentano
4-metiloctano
1-hexeno
trans-2-hepteno
1-octeno

2
6
10
16
20
26
6
8
9
6
7
8

30,1
86,2
128,3
226,4
282,6
366,7
86,2
114,2
128,3
84,2
98,2
112,2

- 172,0
-94,3
-31,0
19,0
36,7
56,4
-154,0
-107,2
---139,8
-109,5
-121,3

-88,6
68,7
174,0
287,0
343,0
412,2
60,3
127,0
142,0
63,5
98,0
121,0

63,70
12,30
0,05
5,2x10-5
3,1x10-7
1,3x10-10
13,8
2,4
0,12
50,0
15,0
2,7

A presena de ramificaes na molcula de alcano dificulta a -clivagem e torna a


molcula refratria biodegradao. O pristano (2,6,10,14-tetrametil
pentadecano), por exemplo, extremamente resistente biodegradao devido
s suas ramificaes. Como mostrado na Figura 13 genericamente teremos as
possveis rotas de oxidao de alcanos de cadeia normal e ramificada, levando
inicialmente, produo de alcois primrios e secundrios.
Alcanos de cadeia ramificada tendem a apresentar degradabilidade inferior,
quando comparados aos n-alcanos. Inclusive, no processo de degradao de
misturas de hidrocarbonetos, a presena de alcanos lineares geralmente reprime
a utilizao, pelos microorganismos, dos compostos ramificados. Pode-se
estabelecer com pequena margem de erro a relao entre as estruturas dos
alcanos ramificados e suas respectivas degradabilidades: compostos densamente
ramificados apontam para a recalcitrncia, em particular os -ramificados
(anteiso-) e os ramificados quaternrios, devido ao impedimento estrico
oferecido s enzimas envolvidas na oxidao. Obviamente, esta afirmao
generalizante e no contempla, portanto, todos os casos. Por outro lado, vrias
ocorrncias e excees a essa regra vm sendo evidenciadas, estando hoje a
recalcitrncia muito mais ligada carncia de estudos mais aprofundados. Um
exemplo desta contradio o pristano (hidrocarboneto isoprenoide, de 19
tomos de carbono, cuja nomenclatura 2,6,10,14-tetrametilpentadecano). Este
composto costuma ser empregado como padro interno em anlises de amostras
31

de hidrocarbonetos, devido ao seu elevado grau de persistncia, quando dos


processos de degradao de leo cru e de derivados do petrleo. No entanto, sua
mineralizao por espcies de Brevibacterium, Corynebacterium e Rhodococcus
foi bastante estudada, alm de claramente elucidada. Foi demonstrado que sua
metabolizao pode ocorrer por ou -oxidao, tal como sugerido na Figura 14.

AH2
CH3(CH2)10CH3

COOH(CH2)10CH3

CH2OH(CH2)10CH3
O2

ATP CoA

+
NAD+ NADH

H2O
FAD

AMP
CO-CoA(CH2)10CH3

CO-CoACH=CH(CH2)8CH3

NAD+ NADH + H+
CO-CoACH2COH(CH2)8CH3

COCoA(CH2)9CH3 + CH3COCoA

H2 O

FADH2

CoA

CO-CoACH2C=O(CH2)8CH3

Ciclo de Krebs

Figura 12: Reaes de degradao de n-alcanos (BAKER & HERSON, 1994).


Da mesma forma, verificou-se tambm a degradao de outros alcanos
ramificados complexos, tais como o fitano, norpristano e farnesano, como nicas
fontes de carbono e de energia, por Rhodococcus sp. Em todos estes casos, as
unidades isopropil das molculas so oxidadas a lcoois terminais e, a posteriori,
aos cidos correspondentes. Outro mecanismo de decomposio destas
substncias parece ser adotado, no entanto, por Mycobacterium sp.: o ataque
inicial no ocorre apenas nos grupos isopropil, muito embora os produtos da
oxidao sejam sempre lcoois terminais.
Alguns pesquisadores reportaram uma rota diversa envolvendo a utilizao de
2,2,4,4,6,8,8-heptametilnonano como fonte nica de carbono e energia, por
cultura microbiana mista, de origem marinha. O desaparecimento do composto
foi relativamente rpido, tendo sido detectados como nicos metablitos
intermedirios alguns cidos graxos de cadeia linear. A via em questo
compreende a oxidao do referido composto na posio , resultando na cetona
correspondente, posteriormente oxidada a um ster. O ster, aps hidrlise,
entra na seqncia comum de -oxidao. Assim sendo, ressalta-se que muitos
outros alcanos altamente ramificados podem ser consumidos, sempre que o
carbono estiver disponvel para o ataque.

32

Oxidao terminal
CH3CH2(CH2)nCH2CH3
NADH+H+
O2
NAD+
CH3CH2(CH2)nCH2CH2OH
NAD

Oxidao sub-terminal

CH3CH2(CH2)nCHOHCH3

O2

NADH+H+
CH3CH2(CH2)nCH2CHO
NAD

Omega oxidao

O2

CH3CH2(CH2)nCHOHCH3

O2
NADH+H+
CH3CH2(CH2)nCH2COOH

CH3CH2(CH2)nC=OCH3

HOCH2CH2(CH2)nCH2COOH
O2

CH3CH2(CH2)n-1 + -CH2CH2C=OCH3
H2O

HOOCH2CH2(CH2)nCH2COOH
ATP
CoA
AMP + Pi

CH3CH2(CH2)n-1CH2OH + HOOCCH3

Beta oxidao

Ciclo de Krebs
CH3CH2(CH2)n-1COOH

Acetil CoA
Figura 13: Rotas de oxidao dos alcanos de cadeia normal e ramificada.
(Fonte: URURAHY, 1998).
PRITCHARD et al. (1996) foram mais cuidadosos ao afirmar que a biodegradao
do pristano e do fitano claramente ocorre na natureza, se mostrando apenas
lenta quando comparada taxa de consumo de alcanos lineares que apresentam
tempos de reteno em colunas cromatogrficas semelhantes (C17 e C18,
respectivamente). Os autores explicam que justamente esta diferena de
susceptibilidade ao ataque microbiano a responsvel pela utilizao das relaes
C17/pristano e C18/fitano como indicadoras da ocorrncia da biodegradao. O
conceito se baseia na idia de que os processos abiticos no provocam perdas
diferenciadas em termos de alifticos e ramificadas, j que estes se comportam
quimicamente de maneira similar. Logo, a variao das relaes C17/pristano e
C18/fitano ao longo do tratamento decorrem, conservativamente, da ao
microbiana.
33

Pristano
Pristanoato

COO
Pristanodioato

OOC

COO

COO
4,8,12 trimetiltridecanoato

C3

OOC

COO
2,6,10- trimetiltridecanodioato

COO
2,6,10 trimetilundecanoato

C2
OOC

Metabolismo subsequente?

COO

2,6,10- trimetilundecanodioato
C2
COO
OOC
2,6- dimetilnonanodioato

succinato

C2
C3

metil malonato
C2

OOC
COO
2,6- dimetilheptanodioato

OOC
COO
2 - metilheptanodioato

OOC

COO

Figura 14: Rotas de degradao do pristano.


(Fonte: URURAHY, 1998).

A oxidao dos hidrocarbonetos alifticos insaturados no ocorre da mesma


forma que a dos alcanos. Muitos estudos de degradao de alcenos tm
focalizado molculas que contm dupla ligao no carbono terminal. Esta posio
permite vrios mecanismos de ataque e diversas maneiras de degradao de
alcenos tm sido observadas (SEEGER et al, 1997). A metabolizao dos alcenos
pode ser iniciada tanto atravs do ataque dupla ligao, como a partir de uma
reao de oxidao, analogamente aos n-alcanos. Reconhece-se, portanto,
quatro importantes mecanismos para a etapa inicial: ataque da enzima oxigenase
ao grupo metila terminal (levando formao de lcoois e de cidos insaturados
correspondentes), ataque subterminal, oxidao da dupla ligao gerando o
epxido correspondente e oxidao da dupla ligao resultando no diol
correspondente. O esquema bsico do processo metablico preliminar se
encontra na Figura 15, no entanto, deve-se ter em mente que os
microorganismos podem ser capazes de realizar mais de uma destas vias.
34

CH3(CH2)nCH=CH2
HOCH2(CH2)nCH=CH2

CH3(CH2)nCH-CH2
O

HOOC(CH2)nCH=CH2

CH3(CH2)nCHOH-CH2OH
CH3(CH2)nCHOH-COOH
CH3(CH2)nCOOH + CO2

HOCH2(CH2)nCH-CH2
O
Figura 15: Rotas de degradao de alcenos (Fonte: URURAHY, 1998)
Os cicloalcanos so particularmente resistentes ao ataque microbiano. Inclusive,
compostos alicclicos complexos, tais como os tripentacclicos apresentam-se
como os mais persistentes, quando dos derramamentos de petrleo no meioambiente. No entanto, muitas revises apontam casos de degradao oxidativa e
co-oxidativa de cicloalcanos substitudos ou no. Grande parte dos cicloalcanos
no substitudos serve como alvo para as aes cometablicas, dando origem a
cetonas ou lcoois. Uma vez oxigenados, o processo de deteriorao destes
compostos prossegue, havendo a clivagem dos anis. Contraditoriamente, a
degradao de cicloalcanos substitudos parece ocorrer prontamente. Nestes
casos, o ataque inicial se d na posio da substituio, formando um
intermedirio cclico de cido carboxlico. A partir da, a metabolizao, segundo
descobertas recentes, passa pela gerao de um intermedirio aromtico,
seguida pela clivagem do anel em questo (ATLAS, 1981).
ENGLERT & KENZIE (1993) destacam que a mineralizao dos cicloalcanos, por
ser extremamente complexa, requer a ao de consrcios microbianos. Alm
disto, compostos de menos de dez tomos de carbono, em especial os de 5, 6 e 7
tomos, exercem efeitos altamente txicos sobre as membranas celulares,
enquanto sistemas contendo quatro ou mais anis condensados so degradados
muito lentamente. Para se ter uma idia de tal complexidade, listaremos as
principais etapas do processo de assimilao destas fontes de carbono pelos
microorganismos:
1)

A princpio, os cicloalcanos so transformados nos lcoois cclicos


correspondentes, que ento sofrem uma desidrogenao, se transformando
em cetonas (as reaes em questo so catalizadas, respectivamente, pelas
enzimas ciclo-desidrogenases e monooxigenases);

2)

Numa etapa posterior, h a lactonizao do anel por monooxigenases e a


abertura do mesmo pela lactona-hidrolase. Tais mecanismos podem ser
ilustrados atravs da representao da via catablica do ciclohexano na
Figura 16, que tanto seguida por espcies do gnero Nocardia quanto
Pseudomonas.
35

OH

O
O

COOH
(CH2)4

Acetil CoA

COOH

Figura 16: Degradao do ciclohexano. Fonte: ATLAS (1984).

ATLAS (1984) exemplifica, ainda, a transformao de vrios cicloalcanos


substitudos, por Pseudomonas aeruginosa, em lcoois cclicos (Figura 17).

CH3

CH3

OH
CH2CH2CH3

CH2CH2CH3

OH
CH3

CH3

CH3CHCH3

CH3CHCH3

OH
OH

Figura 17: Degradao de ciclohexanos substitudos.


Fonte: ATLAS (1984).

3)

Os lcoois, por sua vez, vo a cetonas, que sofrem, posteriormente, uma


lactonizao (Figura 18).
36

OH

O
(CH2)nCH3

(CH2)nCH3
CH3(CH2)nCH(CH2)3C=O
O

Figura 18: Formao de cetonas a partir de alcois cclicos e posterior


lactonizao. Fonte: ATLAS (1984).
Muito embora se conclua pelo exposto que as vias catablicas envolvidas na
degradao de hidrocarbonetos alicclicos apresentam acentuada semelhana, os
estudos destas so fundamentais para avaliao do consumo de poluentes
derivados do petrleo, uma vez que as substncias cclicas costumam se
apresentar de forma abundante, em termos de composio percentual, nos leos
crus (de 22 a 67% v/v, contra 27 a 72% v/v de parafinas e 6 a 14% v/v de
aromticos).

Biodegradao de Hidrocarbonetos Aromticos

Os hidrocarbonetos aromticos caracterizam-se por possuir uma elevada energia


de ressonncia, que resulta em considervel estabilidade termodinmica. Esta
estabilidade, por sua vez, reflete-se nas demais propriedades qumicas,
diferenciando, marcadamente, os referidos compostos dos hidrocarbonetos
alifticos e alicclicos.
Hidrocarbonetos aromticos como benzeno, tolueno, etilbenzeno e xileno so
encontrados, predominantemente, nas fraes leves de petrleo, como a
gasolina, muito embora possam tambm estar presentes em quantidades sob a
forma de traos, em diversas fraes pesadas. Estes compostos so largamente
empregados nos mais variados setores da indstria, sendo que a produo anual
dos mesmos chega a ultrapassar cifras de milhes de toneladas por ano (SMITH,
1990). Face freqente liberao destas substncias na natureza, os estudos
quanto sua biodegradabilidade tm se tornado freqente.
A degradao aerbica de aromticos por bactrias foi demonstrada pela primeira
vez em meados de 1900 (ALEXANDER, 1994). H um nmero elevado de vias
metablicas envolvidas na degradao de aromticos.
O benzeno degradado primeiro pela converso em catecol ou em
protocatecolato. O ncleo aromtico nesses compostos subseqentemente
aberto por uma dessas duas vias: a ortoclivagem (via do 3-oxodipato) ou pela
metaclivagem. A ortoclivagem envolve a clivagem de catecol ou protocatecolato
entre os dois grupos hidroxil. Este processo leva formao dos respectivos
compostos: muconato e mucolactona, os quais so tambm metabolizados a 4oxadipato enol-lactona e depois ao 3-oxiadipato (beta-cetoadipato). O
metabolismo procede formao do acetil-CoA e succinato.
Na metaclivagem, por outro lado, a clivagem inicial do anel ocorre adjacente ao
grupo hidroxil, formando o semi-aldedo 2-hidroxil-mucnico como produto inicial
da clivagem do anel. Subseqentemente, a orto e metaclivagem do anel
aromtico procedem formao de piruvato, formiato, e acetaldedo, que vo
alimentar o ciclo de Krebs.
37

A Figura 19 mostra a seqncia de reaes para a formao do catecol e


protocatecolato, proveniente da degradao de benzeno e de poli-aromticos
(antraceno, fenantreno e naftaleno), e na Figura 20 esto apresentados os
esquemas das reaes de orto e metaclivagem do anel aromtico (SEEGER et al.
1997; BAKER & HERSON, 1994).
Os compostos benznicos alquil substitudos (tolueno, etilbenzeno) so
inicialmente oxidados utilizando uma das vias existentes. Se o ataque inicial
ocorrer no anel aromtico, formado o alquil-catecol, o qual pode ser clivado
utilizando-se a meta ou a ortoclivagem. Se o grupo alquil for oxidado
inicialmente, quase sempre so formados cidos carboxlicos aromticos. Por
exemplo, a oxidao inicial da alquil-substituio do p-xileno leva formao do
cido tolico. Esse cido carboxlico aromtico pode ser convertido em
homoagentisato ou gentisato. A clivagem do anel aromtico ocorre,
subseqentemente, com a formao de intermedirios como fumarato e
acetoacetato, que alimentam o ciclo de Krebs (ALEXANDER, 1994).
Segundo SMITH (1990), o tolueno, produto da substituio mais simples do
benzeno, pode ser tanto atacado no anel (Bacillus sp. termotolerante), como
sofrer a hidroxilao do grupo metila e formar catecol. J a metabolizao por
Pseudomonas de monoalquilbenzenos com grupamento de 2 a 7 tomos de
carbono, tanto lineares como ramificados (isopropilbenzeno, isobutilbenzeno,
sec-butilbenzeno, terc-butilbenzeno e terc-amilbenzeno), se d exclusivamente
atravs do ataque direto ao anel, ataque este intermediado por enzimas
dioxigenases, que so codificadas a nvel plasmidial. A partir de 7 tomos de
carbono, a via preferencial passa a ser a de ataque inicial ao grupamento e no
mais ao anel benznico.
Descobertas recentes apontam para a biodegradao dos ismeros do xileno
(meta e para) por bactrias do gnero Pseudomonas. Primeiro se passa a
oxidao de um dos grupos metila, levando aos metilbenzillcoois
correspondentes, tolualdedos, cidos tolulicos e metilcatecis. Os catecis
resultantes sofrem, ento, meta-clivagem. Uma alternativa a estas vias consiste
no ataque direto pelas dioxigenases, gerando o cis-dihidrodiol correspondente e
consequente aparecimento do catecol substitudo (3,6-dimetilcatecol para o pxileno
e
3,5-dimetilcatecol
para
o
m-xileno),
por
intermdio
das
enzimasdesidrogenases. Membros de gnero Nocardia so capazes, ainda, de
cometabolizar os trs ismeros do xileno, muito embora p- e m-xileno sofram
orto-clivagem, enquanto o-xileno, meta-clivagem. Da mesma forma,
Pseudomonas stutzeri e espcies do gnero Corynebacterium possuem a
capacidade de utilizar o o-xileno atravs da meta-clivagem.
Existem poucos registros acerca da biodegradao de alquenilbenzenos, embora
se produza elevada quantidade de estireno na indstria petroqumica. No
entanto, sabe-se que algumas bactrias crescem em estireno e metilestirenos,
que servem como fontes nicas de carbono e de energia.
Estudos sobre bifenilas vm crescendo em importncia face s freqentes
ocorrncias de contaminaes do meio-ambiente em todo o mundo por
compostos policlorados (PCB) deste tipo. Tais compostos se mostram bastantes
resistentes biodegradao, embora alguns actinomicetes consigam utiliz-los
completamente. Os mecanismos envolvidos, no entanto, no foram totalmente
elucidados.
38

(a )
B e nzeno
a ntra ceno , fe na ntre no
na fta leno

COO H

OH
OH

OH

C liva ge m d o a nel

Ca te c o l
CH 3
COO H

OH

B e nzoa to

To lueno

F e no l

(b )
C H3
C OO H

C OO H
C OO H
P - To lua to

C liva ge m do a ne l

OH
P - Hidro xibe nzo a to

OH
OH

C OOH

P ro to c a te c o la to

C OO H

B enzoa to
O CH 3
OH
V anilato

Figura 19: Degradao do benzeno: (a) catecol e (b) protocatecolato.


Fonte: SEEGER et al. (1997).
39

(a)
Catecol

(+)- muconolactona

cis, cis- cido mucnico


OH

3-cetoadipato enol lactona

COOH
COOH

COOH
C

OH

beta- cetoadipato
O

beta - cetoadipil coA


O

COOH
COOH

COOH

acetil-CoA
CH3

CO-SCoA

COOH

succinato
COOH

C O
COOH

SCo

Ciclo de Krebs

(b)
semialdedo-2 hidroximucnico

Catecol
OH

COOH
COOH

OH

OH

4-hidroxi-2-oxivalerato
CH2

COOH
CH3

COOH

OH
2-oxipent-4-enato

OH

acetaldedo piruvato
CH3
CH3
C O
HC O +
CH3

Ciclo de Krebs

Figura 20: Clivagem do anel: (a) Ortoclivagem (b) Metaclivagem.


Fonte: BAKER & HERSON (1994).

Biodegradao de Hidrocarbonetos Poliaromticos

Os hidrocarbonetos poliaromticos (HPA) constituem a classe de compostos


orgnicos perigosos que contm dois ou mais anis benznicos condensados,
podendo se apresentar sob forma linear, angular ou, ainda, em forma de cacho.
Dentre as diferentes origens dos HPA, destacam-se os resduos oleosos
provenientes de tanques de estocagem de refinarias. O desaparecimento dos HPA
pode ser causado por diferentes fatores, tais como volatilizao, fotooxidao,
oxidao qumica, bioacmulo, adsoro em partculas slidas, lixiviao e
degradao microbiana. Uma representao esquemtica pode ser visualizada na
Figura 21.
40

Volatilizao

HPA

Fotoxidao
Sedimentao
Bioacumulao

Degradao inicial
biotransformao
detoxificao (?)

Oxidao qumica CO2

Remoo

Mineralizao

Figura 21: Rotas de degradao dos HPA.


Fonte: CERNIGLIA (1992).

Estes compostos exercem, de maneira geral, efeitos carcinognicos e


mutagnicos, alm de tenderem recalcitrncia, devido elevada
hidrofobicidade e conseqente baixa solubilidade em gua. Os efeitos mais
comuns so: alteraes do DNA (DA); troca de cromatdeos irmos (SCE);
aberraes cromossomiais (CA) e sntese descontrolada do DNA (UDS). Ressaltase que a persistncia costuma agravar-se medida que aumenta o nmero de
anis na molcula, o que pode ser verificado na Figura 22. A biodegradao
destas substncias por culturas puras ou por comunidades microbianas pode se
estender desde o que se denomina transformao parcial, passando pela
destoxificao, at a mineralizao. Assim sendo, muito embora a incinerao
tenha sido, at hoje, o processo mais utilizado para destruir parte dos HPA, a
biorremediao vem ganhando fora, traduzindo-se como alternativa bastante
interessante efetuao dos tradicionais processamentos trmicos.
Conhece-se atualmente, uma grande variedade de bactrias, fungos e algas que
apresentam a habilidade de metabolizar HPA. Os gneros e espcies mais
representativos
encontram-se
largamente
listados
na
literatura,
(CERNIGLIA, 1992). Ressalta-se, no entanto, que a susceptibilidade ao ataque
microbiano inversamente proporcional ao nmero de anis condensados
compreendidos na molcula do contaminante e diretamente proporcional sua
solubilidade em gua.
Os processos de degradao de HPA como o naftaleno, fenantreno, antraceno e
acenafteno j serviram como objetos de muitos estudos, o que contribuiu em
muito para a elucidao das vias bioqumicas envolvidas. Ao contrrio,
entretanto, pouco se sabe sobre a ao microbiana sobre os compostos
poliaromticos de maior complexidade; quando disponveis como nicas fontes de
carbono e de energia. Mesmo assim, existem fortes indicativos de que o consumo
de tais substncias segue vias similares ao das estruturas monocclicas.
41

peso molecular, solubilidade(mg/L) e Genotoxicidade:

naftaleno

128,2

31,7

acenafteno

154,2

3,9

antraceno

178,2

0,07

----

fenantreno

178,2

1,3

----

fluoranteno

202,3

pireno

0,26

202,3

0,14

----

+Ames

fracamente carcinognico

Ames; UDS; SCE

benzo[a]antraceno
228,3

benzo[a]pireno

252,3

0,002

0,003

Ames; CA;SCE +carcinognico

Ames; CA;SCE+UDS+carcinognico

Figura 22: Relao entre a quantidade de anis dos HPA e os efeitos deletrios.
Fonte: CERNIGLIA (1992).
42

Quanto aos mecanismos de transformao destes substratos, foi descoberto que,


tanto para organismos procariontes como eucariontes, faz-se necessria a
presena de oxignio molecular para dar incio ao ataque enzimtico. Outros
sistemas enzimticos como os das enzimas metanooxigenases e das
ligninaperoxidases tambm surgem como participantes ativos no catabolismo dos
hidrocarbonetos poliaromticos. Da mesma forma, o envolvimento de plasmdios
na degradao do naftaleno e do fenantreno tambm foi relatado; muito embora
pouco se saiba, ainda, sobre os mecanismos genticos e regulatrios ligados ao
consumo de HPA de alta massa molecular. Bactrias e fungos apresentam
algumas diferenas quanto forma de ataque dos substratos em questo:
enquanto os fungos filamentosos lanam mo da etapa de hidroxilao para dar
incio destoxificao, a maioria das bactrias utiliza a oxidao como ponto de
partida para a fisso dos anis e posterior assimilao. Chama-se ateno para o
fato de que ambos, no entanto, apresentam acentuada estreo-seletividade. Nas
Figuras 23 a e b podem ser verificadas as vias catablicas fngicas e
bacterianas envolvidas na biodegradao dos poliaromticos.

a)
Fungos
O2

xido de areno
dioxigenases

Bactrias
O2
R

R
HPA

R
rearranjo no
enzimtico

monoxigenases
R

b)

OH

fenol

trans-dihidrodiol
R

OH

OH

epoxidohidrolase
cis-dihidrodiol
OH

OH

NAD+

NAH + H+

catecol
OH

desidrogenase

OH
clivagem meta

clivagem orto

COOH

cido cis-cis mucnico

CHO
COOH

COOH
R
R

OH

semi-aldedo 2 hidroxi-mucnico

Figura 23: a) Via catablica fngica e b) bacteriana.


Fonte: CERNIGLIA (1992).
43

A espcie de fungo no ligninoltico estudado com mais sucesso foi o


Cunninghamella elegans, que emprega enzimas citocromo P-450 monooxigenases
para incorporar um tomo de oxignio no ncleo aromtico e levar o outro tomo
gua. Esta espcie mostrou-se capaz de realizar a oxidao de derivados
substitudos por grupamentos metil, nitro e flor a trans-dihidrodiis, fenis,
quinonas, tetralonas e conjugados destes metablitos primrios. interessante
destacar que, embora pequenas quantidades de metablicos mutagnicos e
carcinognicos tenham sido encontradas durante o metabolismo de HPA por esta
espcie de fungos, a maior parte dos produtos de transformao exerce efeito
mais brando que os compostos iniciais, fato este que revela o poder
destoxificante desta espcie. Outras espcies de fungos foram pesquisadas,
envolvendo enzimas diversas, como as ligninas peroxidases em Phanerochaete
chrysosporium.
Em ambos os casos (ao fngica ou bacteriana), a metabolizao de compostos
poliaromticos envolve o oxignio molecular. Microorganismos procariotas
utilizam enzimas dioxigenases a fim de incorporar ambos os tomos do oxignio
molecular nos ncleos aromticos, o que leva formao de cis-hidrodiis, os
quais, por sua vez, so desidrogenados estereoespecificamente pelas enzimas
cis-dihidrodiol desidrogenases, que rearomatizam os ncleos benznicos,
produzindo intermedirios dihidroxilados. A subseqente fisso, que depende da
existncia de duas hidroxilas nas posies orto ou para, tambm catalisada por
dioxigenases altamente estereoseletivas. Assim sendo, se as hidroxilas se
encontram posicionadas, uma com relao outra, em orto, a clivagem
oxigenoltica pode ocorrer entre os dois grupos hidroxil (atravs da ao de
enzimas orto ou intradiol dioxigenases) ou na adjacncia dos mesmos (por meta
ou extradiol dioxigenases), tal como demonstrado na Figura 24.

R1

R1

R2

OH

R2

COOH

Enzimas intradiol

COOH
OH
R1

R1
R2

OH

OH

R2

Enzimas extradiol
COOH
OH

CHO

OH

OH

OH

=O

COOH

Figura 24: Clivagem oxigenoltica do anel mono e poliaromticos.


Fonte: CERNIGLIA (1992).
44

Destaca-se ainda, o cometabolismo de HPA por bactrias metanotrficas,


realizado, por exemplo, pela espcie Methylococcus trichosporium. Para
exemplificar o processo de degradao de poliaromticos de baixo peso
molecular, costuma-se utilizar o naftaleno. As reaes de transformao
encontram-se representadas na Figura 25.
Como j foi explanado, a recalcitrncia de um HPA, quando do ataque
microbiano, diretamente proporcional a sua massa molecular e ao seu
coeficiente de partio octanol:gua (log Kow), e inversamente proporcional sua
solubilidade em gua. Desta forma compostos leves como o naftaleno, possui
curto tempo de meia-vida, enquanto os de alta massa molecular, como o
benzo[a]pireno, persistem indefinidamente. Um esquema comparativo deste fato
se encontra representado na Figura 26.

OH

OH

O2

naftaleno

OH

OH

H
-

2H + 2e
2H + 2ecis-dihidrodiol naftaleno
1,2 dihidroxi naftaleno

O H2O

COOH

cido cis-o-hidroxibenzalpirvico

OH

OH

OH
fisso do
anel

CH3COCOOH

HO

OH

salicilaldedo

COOH
=
O

COOH

-O
H

-O
H

O2

COOH
OH

CHO

cido saliclico

cido gentsico

COOH

OH
figura 20
catecol

OH

Figura 25: Clivagem de poliaromticos de baixa massa molecular.


Fonte: SMITH (1990).

45

<

<
naftaleno
(2,4 a 4,4)

fenantreno
(4 a 18)

<

<
pireno
(34 a 90)

2 metilnaftaleno
(14 a 20)

3 metilcolantreno
(87 a 200)

benzo[a]pireno
(200 a 300)

Figura 26: Recalcitrncia de poliaromticos de alta massa molecular


(tempo de meia-vida em semanas). Fonte: CERNIGLIA (1992).

Em processos de biodegradao, o tempo de meia-vida definido como o tempo


necessrio para que haja a mineralizao de 50% da matria orgnica, quando
submetida ao microbiana.
de se esperar que o tempo de meia-vida aumente com o grau de condensao
dos hidrocarbonetos poliaromticos, j que o ataque microbiano se d em um
anel de cada vez.
Embora as vias de degradao para compostos de mais de trs anis j tenham
sido propostas, at hoje se tm poucas informaes acerca da utilizao
microbiana de tais poluentes. Mesmo assim, a biotransformao dos HPA
tetracclicos fluoranteno e pireno por microorganismos eucariotas se encontram
relatadas, assim como foram isoladas algumas espcies de bactrias com
propriedades oxidativas e co-oxidativas destas substncias.
Pesquisas em laboratrio demonstraram a habilidade de Mycobacterium sp no s
de mineralizar substancialmente fluoranteno, naftaleno e pireno em cultura pura,
como tambm de proporcionar o aumento do consumo destes poluentes em
culturas mistas, de microorganismos nativos de um determinado sedimento. A
Figura 27 apresenta as vias propostas para o catabolismo do pireno por
Mycobacterium sp.
A biodegradao dos compostos em questo pode variar desde simples oxidao,
passando por intermedirios, at a mineralizao completa. Sob o ponto de vista
toxicolgico, devem-se levar em conta os efeitos destes produtos intermedirios
no meio-ambiente, no que tange questo da ameaa tanto sade humana,
quanto integridade do ecossistema.
46

Biodegradao de Asfaltenos

A metabolizao dos asfaltenos no muito bem entendida, uma vez que as


estruturas altamente complexas so de difcil anlise, demandando metodologias
qumicas nada convencionais. Pode-se afirmar, portanto, que a elucidao dos
processos bioqumicos envolvendo tais compostos se constitui, ainda hoje, no
maior desafio no campo de pesquisas referentes biodegradao do petrleo.
A prpria definio de material asfaltnico no muito precisa. Normalmente, os
critrios que estabelecem a caracterizao dos mesmos baseiam-se na
solubilidade. De uma maneira simplificada, rotula-se como asfalteno uma
substncia aromtica de alto peso molecular, comumente encontrada no petrleo
e em borras de petrleo, insolvel em n-heptano, em excesso de ter de petrleo
e em gasolinas leves. esta a diferena de solubilidade que distingue, por
exemplo, resinas neutras de asfaltenos. Ambos, no entanto, so solveis em
benzeno, clorofrmio e dissulfeto de carbono (MOORE et al., 1965). Devido a esta
similaridade, asfaltenos e resinas freqentemente ocorrem associados,
associao esta que se configura em partculas coloidais de 35 e 45 , nas quais
o material asfltico ocupa o centro das micelas e as resinas, a periferia. No h,
entretanto, interface distinta. Embora a estabilidade das partculas coloidais
asfaltnicas seja atribuda a resinas a elas adsorvidas, o fato dos asfaltenos
serem carregados eletricamente tambm contribui para a estabilizao de
emulses. A simples neutralizao da carga negativa dos asfaltenos promovida,
por exemplo, por uma acidificao do meio, pode acarretar em sua precipitao
na superfcie de partculas slidas e na conseqente formao de camadas
altamente protetoras. Por outro lado, a considervel polaridade promove repulso
das cargas como um todo, dificultando a coalescncia das gotas e a formao de
uma nica fase.
Alguns estudos mostraram que existe uma grande tendncia do material
asfaltnico ser atrado para a interface gua-leo, que se torna particularmente
suscetvel acidificao. Na medida em que o meio se acidifica, ocorre um
enrijecimento e corrugao deste filme, que pode ser permanente ou no,
dependendo do leo em questo (MOORE et al., 1965). Este fenmeno tem
significativa importncia em sistemas multifsicos de tratamento biolgico, nos
quais a formao de uma interface rgida e de baixa permeabilidade pode
dificultar o ataque microbiano e se contrapor aos fluxos de transferncia de
massa.
As maiores preocupaes com esta classe de composto advm da sua elevada
complexidade estrutural, que responsvel em grande parte pelo alto grau de
persistncia na natureza. Nas refinarias, comum destinar as fraes asfaltnicas
produo de asfalto, porm difcil separ-lo de resduos tais como borras
oleosas. As pequenas quantidades de asfaltenos presentes nestes resduos, cujo
reaproveitamento muito pouco vivel economicamente, podem, no entanto,
dificultar, e muito, o tratamento biolgico dos resduos em questo. A aplicao
da borra como um todo nas fbricas de asfalto tambm no favorvel, na
medida em que a variabilidade composicional pode resultar em asfaltos
facilmente oxidveis e quebradios ou que dem origem a pavimentos ondulados
e no uniformes.

47

O2
OH
H

pireno

HOOC

HO
H

OH

COOH

OH

CO2

cis 4,5 pireno dihidrodiol


O2
H
OH

HO

HO

HOOC

HO

COOH

4 fenantroato
CO2

HOOC

HO
HOOC

HO

OH

HO

HOOC
O

via Kiyohara

HOOC

HOOC

HO

HO

fitalato

via Evans

4 hidroxi perinaftenona
HOOC

HO

COOH
HOOC

HO

cinamato

Figura 27: Catabolismo do pireno. Fonte: CERNIGLIA (1992).


48

Biodegradao de Misturas Complexas de Poluentes Recalcitrantes

Os mecanismos de biodegradao podem ser bastante alterados,


sobretudo em meios contendo diferentes poluentes e espcies microbianas
distintas. muito difcil prev-los quando se estuda, por exemplo, um resduo to
complexo quanto uma borra oleosa proveniente de refinaria de petrleo. De
maneira concisa, pode-se dizer que as caractersticas qumicas, as interaes
entre as substncias, a potencialidade microbiana e as condies ambientais
ditam, em conjunto, o grau de biodegradabilidade de uma mistura de poluentes.
Quanto recalcitrncia de um composto de origem antropognica, sabe-se que
funo do baixo grau de similaridade entre este composto e um composto
comumente encontrado na natureza. Este fato decorre da falta ou inadequao
de aparato enzimtico necessrio para o seu metabolismo. Desta forma, at que
a populao microbiana local no esteja preparada para utilizar fonte de carbono
e energia at ento desconhecidas, o poluente tende a persistir no meioambiente. O preparo da microbiota, por assim dizer, poder vir de uma
modificao do composto original, de tal forma que o torne reconhecvel, ou aps
a ocorrncia de alteraes genticas que possibilitem a flora microbiana
biodegradar o contaminante. Obviamente, estratgias tomadas pelo homem
podem acelerar ou mesmo proporcionar a ocorrncia de um ou ambos os
eventos.
Muitas vezes, ocorre a degradao de novas substncias por parte dos
microorganismos. Este fenmeno freqentemente encarado como um indicador
do grau de tolerncia exibida por enzimas a alteraes estruturais dos substratos.
Em contrapartida, sistemas enzimticos mais rgidos, ou de maior especificidade,
no sendo capazes de reconhecer o substrato, por sua vez no promovem a
ligao enzima-substrato, tornando o poluente inatacvel. Substratos, por
exemplo, que alteram o equilbrio de cargas do centro ativo das enzimas,
normalmente no so reconhecidos por elas. Por outro lado, h registros de que
aes enzimticas fortuitas ou gratuitas podem ocorrer, mesmo que no haja
a garantia de que a rota metablica de degradao envolvida possa acomodar
todos os produtos sucessivos de degradao. Neste caso particular, aumenta a
probabilidade de completa mineralizao do composto teoricamente xenobitico
em meios de alta biodiversidade. Por outro lado, a eventual perda da similaridade
no decorrer do processo fatalmente leva degradao incompleta e formao
de produtos mais ou menos txicos que o original. Como se pode perceber, o
assunto profundo e extenso e para que seja compreendido, fazem-se
necessrias discusses de ordem qumica, bioqumica e biolgica.
Um mapeamento dos principais fenmenos biolgicos pode ajudar tambm, a
proporcionar condies para a maximizao da atividade biolgica, quando do
desenvolvimento de processos biolgicos de tratamento.
6.3

Fenmenos Interfaciais

A biodegradao de hidrocarbonetos de petrleo ocorre em um sistema


multifsico composto por matria orgnica insolvel, gua, sais e
microrganismos. Neste sistema, a interface gua-leo bastante distinta, por
causa da imiscibilidade das fases aquosa e oleosa. A compreenso dos fenmenos
ocorridos nesta interface permite fazer o controle dos processos de assimilao
de compostos orgnicos, bem como a otimizao de parmetros nutricionais e
respiratrios.
49

Segundo Rosemberg (1991), a assimilao de hidrocarbonetos exige


hidrofobicidade da superfcie celular, embora nem todos os microrganismos que
possuem esta hidrofobicidade so degradadores de hidrocarbonetos e nem todos
os degradadores de hidrocarbonetos so capazes de sobreviver em superfcie
oleosa (RON & ROSEMBERG, 2001; 2002).
O grau de solubilidade dos hidrocarbonetos de petrleo um fator importante
para avaliar o mecanismo utilizado pelos microrganismos na degradao. Na
Tabela 6, esto apresentadas as solubilidades de alguns hidrocarbonetos
encontrados no petrleo e seus derivados (ALEXANDER, 1994).
Tabela 6: Solubilidade em gua de Alguns Hidrocarbonetos do Petrleo
(Alexander, 1994).
Grupo
Hidrocarbonetos alifticos

Hidrocarbonetos aromticos

Composto
Heptano
Octano
Nonano
Decano
Hexadecano
Eicosano
Naftaleno
Bifenil
Acenafteno
Antraceno
Fenantreno
Pireno
Criseno
1,2 Benzopireno

Solubilidade
(mg.L-1)
2,9x100
6,6x10-1
2,2x10-1
5,2x10-2
2,0x10-5
1,1x10-6
3,1x101
7,2x100
4,3x100
5,0x10-2
1,1x100
1,3x10-1
2,0x10-3
5,3x10-3

Existem trs mecanismos atravs dos quais se explica a assimilao de


hidrocarbonetos por via microbiana. Estes mecanismos focalizam a forma como o
hidrocarboneto transferido do ambiente superfcie da clula, e depois
transportado atravs da membrana para regies intracelulares por ao
enzimtica (ALEXANDER, 1994; URURAHY, 1998). Tais mecanismos so:
a)

Utilizao do composto orgnico apenas na fase aquosa

O microrganismo capaz de utilizar apenas as molculas que esto dissolvidas


na fase aquosa. Estes microrganismos so comumente encontrados associados a
substratos de baixa solubilidade. A presena de substncia ou mistura de
substncias de baixa solubilidade na fase aquosa pode ser medida pelo
coeficiente de partio octanol-gua (Kow), que a razo entre a quantidade da
substncia que est efetivamente dissolvida em octanol e a quantidade que est
dissolvida em gua, em um sistema com quantidades iguais de gua e octanol.
Desta forma, a utilizao de substrato disponvel apenas na fase aquosa comum
em substncias com baixos valores de Kow. O crescimento microbiano (decorrente
da degradao do poluente) est condicionado disponibilidade do composto
orgnico a estes microrganismos, presumivelmente no produtores de
biossurfactantes. Para que haja uma degradao efetiva, necessrio que a taxa
de dissoluo espontnea seja maior que a taxa de biodegradao. Quando
ocorre um aumento significativo de biomassa, a demanda biolgica de carbono
50

excede a taxa de dissoluo espontnea da substncia e a atividade microbiana


ficar limitada a esta taxa de dissoluo.
b)

Contato direto dos microrganismos com a fase no-aquosa

Os microrganismos aderem diretamente superfcie da fase oleosa e


metabolizam os seus constituintes. Bactrias que crescem em hidrocarbonetos
alifticos em soluo aquosa freqentemente se fixam ao substrato orgnico e, se
este se encontra sob a forma de gotculas, as clulas retidas por estas gotculas
tambm podem formar aglomerados. Para muitos microrganismos, a aderncia
da clula um pr-requisito para a degradao.
c)

Excreo de produtos que induzem a formao de gotculas de


substrato menores que 1m

Em muitos casos evidenciada a produo de substncias que so capazes de


aumentar a taxa de consumo de substrato oleoso. Nestes casos, a taxa de
biodegradao aumenta concomitantemente com a biomassa e no h
dependncia direta da taxa de dissoluo espontnea da fase no-aquosa. Estas
substncias so chamadas de biossurfactantes, ou bioemulsificantes, e sua
produo aumenta o coeficiente de partio da substncia para a fase aquosa,
potencializando a taxa de biodegradao. Os surfactantes de um modo geral so
molculas anfiflicas, que possuem uma poro hidroflica e outra hidrofbica. Em
baixas concentraes, os surfactantes so solveis em gua e a proporo em
que se aumenta a concentrao, os surfactantes se agregam em micelas. A
menor concentrao em que se observa a produo de micelas chamada de
concentrao micelar crtica (CMC).

Regio
hidroflica

Regio
hidrofbica

Figura 28: Representao esquemtica de uma micela


(Fonte: ALEXANDER, 1994).
As micelas so formadas por uma regio interna hidrofbica e uma regio
externa hidroflica (Figura 28). A poro terminal hidroflica fica voltada para o
meio aquoso. O substrato hidrofbico no-solvel fica presumivelmente
incorporado no interior da micela aparentando estar dissolvido na fase aquosa.
Este fenmeno conhecido como pseudossolubilizao, uma vez que a gotcula
oleosa est retida na regio interna da micela e no est dissolvida na fase
aquosa. Muitos microrganismos degradadores de alcanos ou de leo cru,
51

excretam agentes emulsificantes que induzem a formao de gotculas de


substrato, de tamanhos que variam entre 0,1 e 1,0m.
Nota-se que, termodinamicamente, o mecanismo (c) oferece uma maior
estabilidade. Contrariamente, o (b) revela uma elevada instabilidade, tendendo
coalescncia. A coalescncia, por sua vez, finda por retardar o processo de
biodegradao. J o (a) dificilmente ocorre devido baixa solubilidade em gua
da maior parte dos hidrocarbonetos (com exceo dos aromticos e gasosos). O
contato direto prevalece em sistemas onde no h formao de metablitos
emulsificantes extracelulares. Diversamente, a pseudosolubilizao justamente
fruto da ao de tais metablitos. claro que ambos os mecanismos (b e c)
podem ser verificados simultaneamente; se houver uma fase oleosa pouco
dispersa (mecanismo b) e outra pseudosolubilizada (mecanismo c). GOSWAMI &
SINGH (1991) em seus estudos acerca do comportamento de duas diferentes
linhagens de Pseudomonas, verificaram que uma delas no produzia
biosurfactante, embora apresentasse propriedades superficiais tais, que
garantiam uma aderncia firme fase rica em hidrocarbonetos. Ficou claro,
portanto, o predomnio do mecanismo (b) na assimilao da fonte de carbono.
Paralelamente, testes com o mesmo substrato, porm com outra linhagem,
levaram a observaes opostas: capaz de produzir um agente emulsificante
poderoso, esta ltima solubilizava o hidrocarboneto, assimilando-o, assim,
atravs do mecanismo (c).
Baseado no carter hidroflico, os biosurfactantes podem ser agrupados nas
seguintes classes: Glicolipdios, Lipopeptdios, cidos Graxos, Fosfolipdios e
Lipdios Neutros. A maior parte neutra ou carregada negativamente. O carter
aninico se deve aos grupos carboxilados. Raros surfactantes apresentam
funes amina, que lhes conferem, portanto, comportamento catinico. A classe
mais representativa a de glicolipdios, sintetizados por microorganismos como
Actinomycetos, Rhodococcus erytropolis e Nocardia corynebacteroides. Algumas
linhagens de Pseudomonas aeruginosa tambm so capazes de produzir
biosurfactantes glicolipdicos (GUERRA-SANTOS et al., 1984). Lipopeptdios, por
sua vez, so produzidos por Bacillus subtilis, Pseudomonas fluorescens, Serratia
marcescens, entre outros.
Cabe ressaltar que apenas um limitado nmero de bactrias e leveduras capaz
de produzir compostos interfacialmente ativos, estando esta capacidade
relacionada habilidade de tais microorganismos em utilizar hidrocarbonetos
como fonte de carbono. Em contrapartida, sabe-se, tambm, que a gerao dos
biosurfactantes no se encontra necessariamente associada ao crescimento.
Exemplo curioso deste fato de que alguns bioemulsificantes (como os
produzidos por Bacillus subtilis) parecem estar ligados, simplesmente,
metabolizao de matria orgnica solvel em gua, ao invs de resultarem da
necessidade de se provocar a pseudosolubilizao dos substratos oleosos
presentes no meio.
As enzimas envolvidas na sntese de surfactantes
encontram-se, de maneira geral, reprimidas em clulas ativas ou em
crescimento. a exausto, limitao ou carncia, seja ela relativa s fontes de
carbono, nitrognio ou fsforo, que leva desrepresso das enzimas do seu
metabolismo secundrio. Desta maneira, as clulas lanam mo da produo e
excreo dos bioemulsificantes como forma de driblar uma situao de profundo
stress nutricional. Outros agentes surfactantes, como steres de trealose e
cidos coinomiclicos so similares aos constituintes da parede celular e esto
associados ao processo de adaptao dos microorganismos s condies do meio.
52

Entretanto, independente do mecanismo especfico de formao, as substncias


em questo podem promover o crescimento microbiano em hidrocarbonetos,
sendo que algumas delas possuem, at mesmo e paradoxalmente, propriedades
antibiticas. De forma resumida, os microorganismos produzem bioemulsificantes
em situaes nas quais apenas os mecanismos de adeso no garantem o seu
crescimento. Se de maneira geral esta produo incorre em uma melhora da
reologia do sistema, alm de estimular a biodegradao, factvel que a adio
biosurfactantes a poluentes pouco solveis em gua, aumentar a disponibilidade
no caso da no produo de agentes tensoativos pela populao presente.
Ocorre que o pr-tratamento de leo com agentes emulsificantes tanto pode
inibir, quanto estimular a sua biodegradao (ROSENBERG et al., 1992). HOMMEL
(1990) relatou que microorganismos como Candida lipolytica e Acinetobacter
calcoaceticus, apesar de serem espcies produtoras de bioemulsificantes, so
fortemente inibidas pela adio de certos surfactantes. Este fenmeno se
encontra provavelmente correlacionado represso de seus equipamentos
enzimticos. Enquanto os biosurfactantes inicos provocam a pseudosolubilizao
de alcanos e aumentam a rea superficial das gotculas de leo, os no inicos
promovem a hidrofobicidade da superfcie celular, facilitando a aderncia e o
subsequente transporte passivo de alcanos para o interior da clula.
De acordo com a classificao de Zajic & Mahomedy (1984), podem-se dividir os
biossurfactantes em: glicolipdeos, lipossacardeos, lipopeptdeos, fosfolipdios e
cidos graxos. A Figura 29 mostra dois exemplos de glicolipdios: soforolipodio e
raminolipdio.
A recuperao de ptroleo em poos maduros pode ser conduzida por processos
mecnicos (injeo de gua) (Enhanced Oil Recovery - EOR) ou por processos e
produtos microbianos (Microbiologically Enhanced Oil Recovery - MEOR). Quando
se aplica o processo MEOR, lana-se mo de microrganismos que produzem uma
variedade de biomolculas como biossurfactantes, polissacardeos, capazes de
reduzirem a tenso interfacial entre a rocha e o leo, o que promove a
movimentao do mesmo atravs dos poros das rochas (BANAT et al., 2000). A
recuperao por MEOR pode chegar a percentuais prximos a 62% (MAKKAR &
CAMEOTRA 1997).
Finalmente, estas molculas anfiflicas apresentam importante papel no processo
de biorremediao de solos impactados, emulsionando hidrocarbonetos,
aumentando a solubilidade e disponibilizando-os para a biodegradao realizada
pelos microrganismos autctones (BANAT et al., 2000; SHULGA et al., 2000); na
limpeza de reservatrios de leo, promovendo a reduo da viscosidade de
metais pesados e a formao de emulses leo/gua, facilitando a recuperao e
transporte em oleodutos (BANAT et al., 2000).
H pelo menos duas maneiras pelas quais os biossurfactantes esto envolvidos
na biodegradao de hidrocarbonetos: atravs do aumento da superfcie de
contato do material oleoso e do aumento da biodisponibilidade do hidrocarboneto.
Neste ltimo caso, o biossurfactante atua na dessoro das molculas do
hidrocarboneto de baixa solubilidade (RON & ROSEMBERG, 2002).

53

Figura 29: Estruturas de biossurfactantes (esquerda: soforolipdio; direita:


raminolipdio) (Fonte: GOMES, 2008).

Muito embora se d bastante ateno importncia da manuteno das


condies de favorecimento do crescimento microbiano, a grande parte dos
estudos neste campo ainda negligencia a questo dos fenmenos de transporte
dos nutrientes, do oxignio e outras substncias entre o meio e as clulas. No
entanto, os mecanismos de transporte, em especial aqueles que se do na
interface, desempenham papel fundamental e at mesmo controlador nos
processos de assimilao dos mais diversos compostos pelos microorganismos;
podendo ocorrer tanto atravs do fluxo convectivo como por difuso.
Como se sabe, a biodegradao de hidrocarbonetos se d em um sistema
multifsico, que envolve gases (O2/CO2), material orgnico insolvel em gua,
gua, sais dissolvidos, slidos e microorganismos. Devido imiscibilidade do leo
na gua, a interface leo/gua se torna bem distinta, favorecendo a atrao de
clulas com maior carter hidrofbico. Logicamente, o organismo que tiver
relativa hidrofobicidade conjugada habilidade de metabolizar hidrocarbonetos
vai obter mais vantagens desta adeso (NEUFELD et al., 1980). Esta adeso
interface ideal, pois da mesma forma que os agentes decompositores buscam a
fonte de carbono na fase orgnica, eles tambm necessitam de nutrientes e de
oxignio (indispensvel aos processos oxidativos de degradao) que se
encontram disponveis na fase aquosa. Logo, com o propsito de solucionar as
questes nutricionais e respiratrias, tanto bactrias quanto fungos tendem a se
desenvolver, justamente na interface gua/leo. Por este motivo, meios
emulsionados propiciam o estabelecimento de uma densa populao microbiana.
Quanto adeso de organismos a gotas de leo, ao contrrio do que
freqentemente se pensa, no so apenas as bactrias degradadoras de
hidrocarbonetos que exibem esta propriedade, e nem todos os microorganismos
consumidores deste tipo de matria orgnica so capazes de se estabelecer em
superfcies oleosas (ROSENBERG, 1991). o caso de Pseudomonas aeruginosa,
espcie reconhecidamente hbil em consumir fontes de carbono hidrocarbnicas.
Desta forma, a metabolizao do substrato no parece ser a nica razo de ser
do crescimento de bactrias em interfaces gua-leo. O fator que controla o
fenmeno de adeso a hidrofobicidade que os microorganismos podem
apresentar. Assim sendo, ensaios de adeso microbiana a hidrocarbonetos vm
54

servindo como importante ferramenta na avaliao do grau de hidrofobicidade


das superfcies celulares.
Alm dos desafios decorrentes do estabelecimento dos microorganismos em
sistemas to complexos, surge tambm a dificuldade de mant-los em
concentraes compatveis com a necessidade de se obter altas converses dos
poluentes. neste ponto que surge o potencial de utilizao de mtodos de
imobilizao celular.
A alta hidrofobicidade oferecida pela membrana celular de algumas espcies
bacterianas causada pela presena de substncias hidrofbicas no polares, de
origem graxa, que favorecem a migrao da clula para a fase oleosa. J
espcies que no possuem hidrofobicidade to acentuada so capazes de se
estabelecer na interface leo/gua e de retornar fase aquosa.
NEUFELD et al. (1980) demonstraram que no incio do processo de biodegradao
de hexadecano por Acinetobacter calcoaceticus em reator (primeiras dez horas)
toda a populao se encontrava aderida fase orgnica, fenmeno comprovado
analiticamente e visualizado pelo clareamento do meio reacional quando da
interrupo da agitao e da aerao, clareamento este provocado pela total
concentrao das clulas na fase orgnica sobrenadante. A situao se alterou
entre 10 e 18 horas de operao, quando 85% das clulas haviam migrado da
fase orgnica e da interface para a fase aquosa. Tal alterao foi acompanhada
por decrscimos das tenses interfacial e superficial, entre 10 e 14 horas de
teste. A referida queda de tenso superficial coincidiu com a produo de
bioemulsificantes durante a fase exponencial de crescimento, a qual totalizou 13
horas. Neste estudo, os pesquisadores verificaram que ao criarem condies de
agitao, aerao e concentraes de substrato favorveis, foi possvel magnificar
uma habilidade biolgica da espcie em questo, bastante til assimilao do
hidrocarboneto, muito embora no tenham relacionado as mudanas ocorridas no
meio extenso da biodegradao.
Os agentes emulsificantes facilitam a biodegradao, j que aumentam, atravs
da formao de gotculas, a superfcie de contato entre as fases de interesse. Tal
caracterstica foi verificada por ROJAS (1993), que aps ter isolado algumas
bactrias do petrleo, pertencentes ao gnero Pseudomonas, pde associar a
produo de biosurfactantes ao grau de biodegradao de leo cru pesado. As
substncias com poder surfactante levam organizao dos hidrocarbonetos em
pequenas micelas, aumentando sua solubilidade e favorecendo o adensamento
celular. Conseqentemente, as taxas de consumo sofrem incrementos
significativos (BURY & MILLER, 1993). Contraditoriamente, para alguns autores,
os biosurfactantes so biopolmeros que de maneira geral no reduzem a tenso
interfacial, embora dificultem a coalescncia de gotas de leo (HOMMEL, 1990).
Podemos citar como exemplo o EMULSAN (biopolmero excretado pela bactria
Acinetobacter calcoaceticus quando em meio de crescimento base de etanol ou
alcanos) e do LIPOSAN (produzido em meios contendo alcanos de cadeia longa,
metabolizados por Candida lipolytica).
A maioria dos autores, no entanto, afirma que a ocorrncia de biosurfactantes
promove justamente a queda da tenso superficial da fase aquosa, estabilizando,
com isto, as emulses de leo em gua (COOPER & GOLDENBERG, 1987). Esta
queda de tenso comum em processos de degradao de hidrocarbonetos, nos
quais os microorganismos presentes passam a produzir agentes tensoativos
55

extracelulares, compostos por uma mistura de cidos carboxlicos e lipdios


neutros, tais como steres, lcoois e glicerdios. As microemulses podem ser
geradas a partir de agitao, embora as gotculas voltem a coalescer. J as
microemulses provocadas pela ao microbiana tendem estabilidade,
aumentando o transporte de hidrocarbonetos.
Os bioemulsificantes em geral apresentam uma composio similar da parede
celular dos microorganismos. Alguns, no entanto, possuem estrutura definida: a
poro lipoflica usualmente hidrocarbnica, formada por um ou mais cidos
graxos, que podem ser saturados, insaturados, hidroxilados ou ramificados. Este
cido graxo se liga ao grupo hidroflico, atravs de uma ponte glicosdica, estrica
ou amdica.
Hommel (1990) exemplificou a ao positiva de surfactantes extracelulares no
processo de biodegradao de uma mistura de hidrocarbonetos, por uma
populao bacteriana oriunda do solo, em reatores agitados. Naturalmente,
primeiro ocorreu o consumo de componentes solveis em gua. Em seguida, a
produo de biosurfactantes coincidiu com a quase completa exausto dos
alcanos. Neste caso, a adio de diferentes bioemulsificantes ao sistema gerou a
duplicao da taxa de degradao dos poluentes. Alm disto, a fase de adaptao
foi reduzida e, posteriormente, observou-se a degradao do agente emusificante
adicionado, concomitantemente sntese de glicolipdios com poderes
surfactantes. Resultados menos favorveis foram obtidos por Foght et al. (1989)
quando do pr-tratamento de leo cru com EMULSAN: a comparao entre o grau
de biodegradao em amostras pr-tratadas e no tratadas revelou que a ao
do emulsificante comprometia o processo, uma vez que reduzia o consumo dos
contaminantes. Em termos de alcanos lineares e outros hidrocarbonetos
saturados, a queda da extenso da biodegradao alcanou patamares de 50 a
90%, tanto em sistemas constitudos por populaes mistas, quanto por culturas
puras. J para os compostos aromticos houve um decrscimo da degradao de
90% em culturas mistas, sendo que as culturas puras no foram afetadas pelo
EMULSAN, tendo mesmo sido ligeiramente estimuladas.
Uma aplicao dos bioemulsificantes realmente inovadora vem sendo posta em
prtica no Instituto Colombiano del Petrleo - ECOPETROL. DAZ & GROSSO (em
documento de circulao interna no datado) citam que os biosurfactantes
produzidos por espcies do gnero Pseudomonas tm auxiliado no transporte de
hidrocarbonetos pesados em tubulaes, na preparao de combustveis no
convencionais a partir de leos combustveis pesados, na biodegradao de
borras oleosas, assim como em vrios outros segmentos da indstria, como por
exemplo na lixiviao de minerais, na agricultura, em alimentos, bebidas,
frmacos, couro, papel, txteis e cosmticos. Nota-se, por a que o nmero de
utilidades dos biosurfactantes se amplia, trazendo consigo novas perspectivas ao
ramo da biotecnologia.
Neste contexto, no se pode deixar de apresentar a possibilidade de emprego de
agentes surfactantes de origem sinttica, no caso especfico de tratamento de
borras oleosas. Um agente tensoativo sinttico hoje bastante empregado o
TWEEN 80 (polyoxyethylene sorbitan monooleate). A pr-solubilizao de
hidrocarbonetos pesados com este emulsificante foi realizada com sucesso por
Janiyani et al. (1993): atravs da quantificao do carbono orgnico total (TOC)
na fase aquosa, foi possvel a observao do incremento da carga orgnica nesta
fase aps adio de TWEEN, o que evidenciou o processo de solubilizao. O
56

trabalho apontou para a facilitao do ataque dos hidrocarbonetos pelos


microorganismos, resultado da solubilizao dos componentes do leo em gua,
embora nenhum teste posterior tenha sido feito, a fim de verificar possveis
inibies por parte deste surfactante, ou mesmo a provvel utilizao do mesmo
como fonte alternativa de carbono, em detrimento da matria orgnica presente.
Outro fator que influencia a extenso da biodegradao e tambm est
relacionado aos fenmenos interfaciais disponibilidade de nutrientes.
Rosenberg et al. (1992) chamaram a ateno para o fato de que da mesma
forma que a microbiota desenvolve mecanismos de coeso s gotculas de leo,
ela tambm capaz de provocar a dessoro das fontes j esgotadas. Esta
habilidade imprescindvel continuidade da degradao. Tais pesquisadores
apontaram a questo nutricional como a maior limitante da biorremediao.
Segundo eles, a alta solubilidade dos sais de fosfato e das fontes de nitrognio
em gua ocasiona uma rpida diluio dos mesmos, causando a perda de
eficincia do processo em sistemas abertos. A fim de contornar este problema, foi
sugerido o uso de fertilizantes hidrofbicos, a base de polmeros modificados de
uria-formaldedo. Os polmeros so passveis de despolimerizao, efetuada por
microorganismos, sempre que liberados aos poucos no meio de crescimento.
Um fertilizante oleoflico muito estudado em derrames no mar foi o INIPOL
EAP22, uma microemulso de leo em gua, contendo cido oleico, lauril-fosfato,
2-butoxil-1-etanol, uria e gua. O uso deste tipo de fertilizante, no entanto,
trouxe uma srie de desvantagens: contendo grandes quantidades de cido
olico (que alis passou a servir como uma fonte alternativa de carbono), esta
substncia tornou-se responsvel pelo aumento da relao C:N no ambiente.
Alm disto, suspeitou-se que o emulsificante poderia oferecer perigo ao
ecossistema marinho. Adicionalmente, assim que o fertilizante entrava em
contato com a gua, a emulso se quebrava, liberando uria para a fase aquosa
e deixando o nitrognio indisponvel aos microorganismos. Como conseqncia
destes problemas, a utilizao de tais compostos, que j se encontrava limitada a
casos de acidentes ou derrames, restringiu-se ainda mais. No caso de sistemas
fechados (tratamento de efluentes oleosos), seu emprego no foi nem cogitado,
face s facilidades de manuteno das condies nutricionais ideais.
Uma forma de minimizar as questes de transferncia e de suplantar as
limitaes impostas pelos fenmenos interfaciais seria substituir clulas ntegras
por enzimas e efetuar o tratamento de poluentes em solventes orgnicos e no
dispersos em gua.
Alguns trabalhos j citam a degradao de compostos aromticos, por via
enzimtica, em sistemas compostos por solventes orgnicos miscveis gua,
como
o
metanol,
isopropanol,
N,N-dimetilformamida,
acetonitrila
e
tetrahidrofurano (VAZQUEZ-DUHALT et al., 1994). claro que nestes processos
no h limitaes quanto transferncia de massa, no entanto, torna-se
necessria a prvia formulao biolgica da enzima, alm da sua separao e
purificao. Passam a existir, portanto, outros empecilhos, ditados pela
especificidade das prprias enzimas, pelo risco de perda de atividade e pela
elevao substancial do custo de processo.

57

7.

Aspectos Fsico-qumicos
Hidrocarbonetos

Ambientais

da

Biodegradao

de

Como descrito anteriormente, a biodegradao de materiais orgnicos


no ambiente mediada geralmente por bactrias e fungos. As bactrias possuem
caractersticas metablicas diversas que as colocam num grupo de
microrganismos de reconhecida atividade degradadora. Variabilidade gentica,
crescimento rpido e facilidade para se aclimatar rapidamente em diversos
ambientes so as principais caractersticas. Essas caractersticas so
fundamentais na seleo de microrganismos para processos de biorremediao. A
otimizao de parmetros como: pH, nutrientes, oxignio e temperatura
possibilitam um melhor desempenho dos microrganismos na biodegradao. Uma
mxima eficincia nesse processo de biodegradao levar a mineralizao do
poluente com a produo de CO2 e gua (FRANKENBERGER Jr, 1992; ATLAS &
BARTHA, 1972).
Citaremos aqui alguns aspectos de relevncia para a biodegradao.

Disponibilidade de Oxignio

Geralmente, sob condies aerbicas, a biorremediao ocorre mais facilmente.


Regies prximas superfcie do solo tm demonstrado maior taxa de
biodegradao, enquanto que em regies mais profundas verifica-se que estas
taxas diminuem.

Presena de Matria Orgnica

A presena de matria orgnica pode indicar a presena de elementos


alternativos que aumentam a taxa de biodegradao (IJAH, 1998). Este
fenmeno, largamente estudado, comumente chamado de cometabolismo
(ATLAS, 1984; ALEXANDER, 1994; MAIER, 1999). Atentamos para esta
conceituao, levando em considerao as discusses suscitadas por Alexander
(1994), nas quais o autor chama a ateno para algumas discordncias de ordem
semntica. Classicamente, o termo cometabolismo tem sido utilizado para
descrever o fenmeno em que microrganismos utilizam mais de um substrato.
Nesta viso, cometabolismo se refere unicamente ao fenmeno em que os
microrganismos assimilam um substrato que no utilizado para o crescimento,
mas que metabolizado na presena de um segundo substrato que d suporte ao
crescimento. A idia de cometabolismo aqui adotada, entretanto, aquela
utilizada na obra de Alexander (1994), Biodegradation and Biodeterioration,
cuja conceituao, por sua vez, est respaldada e fundamentada nos diversos
trabalhos que nesta obra esto discutidos. Segundo este autor, cometabolismo
a transformao de um composto orgnico por um microrganismo inapto a
utiliz-lo (ou inapto a utilizar algum de seus constituintes) como fonte de carbono
e energia. Desta forma, por exemplo, um determinado microrganismo pode
oxidar compostos orgnicos sem crescer sua populao s expensas desta
oxidao e, por sua vez, os compostos oxidados estaro bioquimicamente
disponveis a outro grupo de microrganismos. Este segundo grupo de
microrganismos cresce s expensas desses compostos oxidados e os degrada a
molculas de tamanhos diferentes as quais podero ser substrato para
crescimento de outro grupo e assim sucessivamente. A idia de co, neste
conceito, refere-se atuao conjunta de dois ou mais grupos microbianos. Na
58

conceituao clssica, a idia de co, parece estar ligada apenas ao fato de


termos mais de um substrato envolvido no fenmeno.

Disponibilidade de Nitrognio e Fsforo

Bactrias heterotrficas e fungos, alm de uma fonte de carbono, necessitam


para o crescimento, de um outro grupo de nutrientes e de um aceptor de
eltrons. Este aceptor de eltrons o O2 para os aerbios, mas pode ser nitrato,
sulfato, CO2, ferro frrico ou compostos orgnicos para bactrias que tm
habilidades para utilizar essas substncias como aceptor de eltrons no processo
de metabolizao da fonte de energia. Muitas bactrias ou fungos requerem
baixas concentraes de vitaminas, aminocidos, vitaminas lipossolveis, que so
molculas orgnicas chamadas de fatores de crescimento. A ausncia dessas
molculas no ambiente pode prejudicar o crescimento microbiano (ATLAS &
BARTHA 1972). Descargas de leo por vazamentos acidentais de tanques de
navios, em ambientes marinhos e estuarinos, tm suscitado muitos estudos a
respeito das condies nutricionais em tais ambientes. Estas investigaes
mostram que a degradao do leo em gua do mar mais rpida quando
compostos base de nitrognio e fsforo so adicionados (FERNANDES, 1994;
RAMADAN, 1990).

Temperatura

A temperatura varia de ambiente para ambiente e de acordo com a sazonalidade.


Para um determinado aumento ou decrscimo de temperatura a magnitude da
resposta quanto biodegradao varia com o ambiente e com o tipo de poluente,
o que refletido na fisiologia dos microrganismos envolvidos. Em geral,
temperaturas ideais para a biodegradao esto na faixa entre 20 e 35C (LEAHY
& COLWELL, 1990).

pH

Para a maioria dos microrganismos envolvidos no processo de biorremediao, a


faixa de pH mais favorvel para o seu crescimento se situa entre 6,0 e 8,0 com
um valor timo em torno de 7,0, sendo que os fungos so mais tolerantes
condies cidas. Em solos, os valores de pH podem ser muito variados,
estendendo-se desde de 2,5 a 11,0 em solos cidos e em desertos alcalinos,
respectivamente. Esse parmetro nesses valores extremos influencia
negativamente a capacidade dos microrganismos degradarem hidrocarbonetos
em solo (ATLAS,1998; LEAHY & COLWEL, 1990).

Salinidade

Alta salinidade parece afetar negativamente a atividade microbiana. sabido que


os fungos resistem menos s condies de alta salinidade do que as bactrias.
Em ambientes costeiros, a biorremediao afetada pela alta concentrao salina
(YANG et al., 1999; DELARCO & FRANA, 1999).

Atividade de gua

A atividade de gua se refere quantidade de gua que efetivamente est


disponvel para os microrganismos no processo de biodegradao. Esta atividade
est condicionada ao tipo de solo e estrutura do poluente (DIBBLE & BARTHA,
1976).
59

Alm dos fatores j mencionados, pode-se citar ainda um fator bitico


importante, que a predao por protozorios. Alguns protozorios so
predadores naturais de bactrias e sua presena, muitas vezes, inevitvel no
ambiente que precisa ser biorremediado (RAMADAM et al., 1990).

8.

Estudos de Ecotoxicologia
Hidrocarbonetos

Avaliao

da Ecotoxicidade

dos

O domnio da toxicologia inclui a compreenso dos tipos de efeitos


causados pelas substncias, os processos bioqumicos e fisiolgicos responsveis
por esses efeitos, as sensibilidades relativas dos diferentes tipos de organismos
exposio a estas substncias e a toxicidade relativa das diferentes substncias e
classes de substncias. Porm a ecotoxicologia estuda a existncia das formas de
toxicidade nos organismos e a relao de tais organismos no ambiente, atravs
de testes especficos com organismos padro, selecionados de acordo com
critrios definidos, baseando-se entre outras coisas, nos nveis trficos aos quais
estes organismos pertencem (BAIRD et al., 1996; CHAPMAN, 1995; CHAPMAN,
2002).
Desta
forma,
substncias
reconhecidamente
txicas
como
hidrocarbonetos, por exemplo, que freqentemente so encontradas causando
contaminao nos diversos ambientes, devem ser avaliadas quanto sua
ecotoxicidade.
Faremos aqui uma abordagem sucinta do tema ecotoxicologia, mostrando
primeiramente a diferenciao entre toxicologia ambiental e ecotoxicologia, e em
seguida apresentando alguns termos mais comuns utilizados neste campo. Por
fim, mostraremos alguns critrios de seleo de organismos-teste e avaliao da
ecotoxicidade de misturas hidrocarbnicas.

8.1

Diferenas entre Ecotoxicologia e Toxicologia Ambiental

Durante muito tempo, estudos toxicolgicos do ambiente tm sido caracterizados


como estudos de toxicologia ambiental. Tais estudos so conduzidos
independentemente
de
consideraes
ecolgicas
e
subseqentemente
comparados com estudos ecolgicos por aproximao. Porm, muitas
consideraes sobre ecologia, so em geral mais extrnsecas do que intrnsecas e
estes testes clssicos, embora conduzidos com organismos que podem ser
facilmente isolados e testados, no levam em conta a significncia ecolgica, ou
lhe confere uma importncia quase sempre secundria (INGERSOLL et al., 1997).
Entretanto, uma mudana de paradigma surge no campo da observao dos
efeitos txicos das substncias, assumindo crescente importncia na predio e
avaliao dos riscos ao meio ambiente e s comunidades, levando em conta os
aspectos fisiolgicos e, sobretudo as relaes trficas dos organismos-teste. O
termo toxicologia ambiental d lugar ao termo ecotoxicologia, que
compreende a integrao entre os domnios da toxicologia e da ecologia, e tem
por objetivo entender e predizer os efeitos das substncias txicas nas
comunidades naturais sob condies realsticas de exposio (CHAPMAN, 2002).
Os primeiros estudos no campo da ecotoxicologia surgiram junto com a
necessidade de se estabelecer critrios para estudar os efeitos txicos de
determinadas substncias poluentes sobre a biota, a fim de se ter um controle da
60

emisso de poluentes no ambiente, ou de se estabelecer parmetros para saber


quais os nveis tolerveis de poluio (ABEL, 1991; CHAPMAN, 1995; CHAPMAN,
2002). Freqentemente, as maiores dificuldades encontradas tm sido as de se
determinar a abrangncia de tais efeitos nos organismos e a representatividade
que esses efeitos observados para um grupo de organismos possam ter para uma
comunidade. Os efeitos txicos das substncias nos organismos vivos podem se
manifestar em diferentes nveis: sub-celular ou celular, nos tecidos, nos rgos
ou no organismo inteiro. Embora o conhecimento do mecanismo de ao seja
muito importante para fins de estudos meramente toxicolgicos, por si s, no
o bastante para predizer danos biota susceptvel exposio ao poluente
(ABEL,1991).
O surgimento da ecotoxicologia em contraposio toxicologia ambiental sugere
um novo olhar sobre os testes clssicos de toxicidade realizados com espcies
isoladas, os quais no visam relacionar os efeitos das substncias txicas sobre
as comunidades ou sobre a combinao de espcies pertencentes a nveis trficos
diferentes. Algumas espcies testadas de forma combinada, podem inclusive
resultar em uma reduzida toxicidade quando comparadas com espcies isoladas,
e membros de uma comunidade podem magnificar seu desempenho funcional
alm do que seria esperado de uma simples contribuio aditiva de cada membro
da comunidade.
Existe uma preocupao que parece emblemtica na toxicologia ambiental, que
so os custos com os testes e a concentrao da substncia txica. Para a
toxicologia ambiental, o foco, em primeira instncia, no a soluo dos
problemas relacionados ecotoxicologia, mas sim a soluo dos problemas
relacionados ao teste. Em contrapartida, a preocupao da ecotoxicologia ,
sobretudo, com os custos de uma deciso incorreta, os quais sero to maiores
quanto forem os nveis de destruio causados pelas substncias ou mesmo por
desequilbrios entre os membros da comunidade, uma vez que a substncia
txica , em ltima anlise, apenas um dos aspectos avaliados pela
ecotoxicologia.

8.2

Algumas Definies em Ecotoxicologia

A seguir, mostraremos as definies de alguns termos recorrentes empregados


nos estudos de Ecotoxicologia e nos ensaios / testes de Ecotoxicidade.
Agente txico: substncia ou outro material, tal como formulao qumica,
efluente lquido, ou gua do mar superficial ou intersticial que pode causar efeitos
danosos quando em contato com organismos-teste (Nascimento et al., 2002).
CE50: Estimativa da concentrao da amostra utilizada que causa um efeito subletal a cinqenta por cento dos organismos expostos (Nascimento et al., 2002).
Ciclo de vida: Fases, mudanas ou estgios pelos quais um organismo passa
durante a vida desde a etapa de clula ovo at a fase reprodutiva (Nascimento et
al., 2002).

61

CI50: Estimativa da concentrao da amostra utilizada que causa um efeito


inibitrio a cinqenta por cento dos organismos-teste durante o perodo de
exposio s condies do teste (Nascimento et al., 2002).
CL50: Estimativa da concentrao da amostra utilizada que letal para cinqenta
por cento dos organismos expostos, sob condies especficas, no perodo do
teste. Pode ser estatisticamente ou graficamente determinada.
Concentrao de Efeito No-Observado (CENO): Maior concentrao de
agente txico que no causa efeito deletrio estatisticamente significativo sobre o
organismo-teste, durante o tempo experimental de exposio, s condies do
teste.
Concentrao de Efeito Observado (CEO): Menor concentrao de algum
agente txico que causa efeito deletrio estatisticamente significativo sobre os
organismos-teste, num determinado perodo de exposio, s condies do teste.
Contaminante e poluente: Podem ser descritos separadamente, mas so
freqentemente utilizados como sinnimos. Ambos so empregados para
descrever substncias qumicas que so encontradas em nveis acima daqueles
que normalmente seriam esperados. Poluentes tm o potencial de causar danos,
enquanto que contaminantes so necessariamente danosos. Esta talvez uma
distino no muito fcil de fazer. Se um contaminante ou no poluente, pode
depender do seu nvel no ambiente e o organismo ou sistema a ser considerado.
Desta forma, uma substncia em particular pode ser um contaminante em
relao a uma espcie, mas poluente em relao outra. Por fim, na prtica
muitas vezes fica difcil de demonstrar que o dano no est sendo causado, e
freqentemente poluente e contaminante tornam-se sinnimos.
Efeito agudo: Efeito deletrio causado por agentes txicos aos organismos
vivos, num curto perodo de exposio.
Efeito crnico: Efeito deletrio causado por agentes txicos aos organismos
vivos, que normalmente manifesta-se aps dias ou anos, dependendo do ciclo
vital da espcie estudada.
Efeito sub-letal: Resposta a um agente txico, em uma concentrao que est
abaixo do nvel que causa morte.
Eluio: Dessoro provocada por um fluxo de lquido ou de gs atravs de um
adsorvente.
Organismo-teste: Organismo utilizado no teste de toxicidade / avaliao da
ecotoxicidade.
TIE: Toxicity Identification Evaluation: a expresso consagrada na lngua
inglesa usada para designar os Estudos de Avaliao da Toxicidade e
Identificao dos Agentes Txicos. Consiste de uma srie de procedimentos
utilizados para identificar agentes qumicos especficos, responsveis pela
toxicidade de uma amostra composta.
Toxicidade: Capacidade inerente a uma substncia ou amostra ambiental de
causar um efeito deletrio a organismos vivos.
Toxicidade aguda: Condio na qual os efeitos observveis aos organismosteste ocorrem em curto espao de tempo.
62

Toxicidade crnica: aquela que resulta da exposio contnua a uma


substncia.
Xenobitico: Esse termo usado para de descrever compostos que so
incomuns a um determinado organismo, ou seja, tais compostos no
desempenham nenhum papel na bioqumica normal deste organismo. Uma
substncia que normal para um organismo pode ser estranha para outro, o que
nos faz inferir que os xenobiticos podem ocorrer naturalmente ou podem ser
resultantes de aes antrpicas (Walker et al 1996). O termo xenobitico
muitas vezes tambm usado para descrever substncias estranhas ao ambiente
ou exgenas (Rmbke & Moltmann 1995).

8.3

Organismos-teste

H dois temas-chave nos estudos de ecotoxicidade: as respostas crnicas e


agudas e os critrios para seleo das espcies. Para escolher o organismo
padro, so necessrios alguns critrios. Um deles a disponibilidade do
organismo no ambiente. Este critrio leva em conta a existncia em grande
quantidade do organismo e a sua relao direta com o equilbrio do ambiente,
porm pode apresentar falha com relao exatido dos resultados e a
aproximao das condies realsticas (CHAPMAN, 1995; 2002).
A substncia txica pode atuar direta ou indiretamente no organismo-teste. De
forma direta, causa mortalidade em curto prazo e, indiretamente, causa
toxicidade aguda em produtores ou consumidores primrios, ou toxicidade
crnica em nveis trficos subseqentes. Desta forma, para uma resposta mais
abrangente faz-se necessrio o estudo da toxicidade da substncia nos quatro
nveis trficos: produtor, consumidor primrio, consumidor secundrio e
decompositor (CALOW, 1996).
Chapman (1999) sugere critrios para seleo de organismos-teste, dos quais
listamos a seguir os mais comumente referidos pela maioria dos autores:
I.

Os organismos devem pertencer a espcies chaves ou dominantes, que


sero identificadas por estudos de comunidade de base;

II.

Disponibilidade do organismo o organismo deve estar razoavelmente


disponvel;

III.

Os endpoints devem ser toxicologicamente e ecologicamente relevantes;

IV.

As respostas devem ser consistentes e mensurveis em relao aos


txicos testados;

V.

Os organismos devem ser facilmente testados em campo e laboratrio.

A ecotoxicologia marinha tem ganhado grande destaque, sobretudo devido ao


fato de que os grandes centros urbanos mundiais localizam-se em sua grande
maioria no litoral e desta forma, o aporte de substancias txicas poluentes aos
ambientes marinhos muito grande. Agregando-se a este cenrio a grande
visibilidade dos incidentes envolvendo a liberao de hidrocarbonetos nos mares
e oceanos, optamos por citar aqui alguns organismos marinhos ou de ambientes
estuarinos e dulciaqcolas utilizados em testes de toxicidade para avaliao
63

ecotoxicolgica, que
hidrocarbnicas.

so

empregados

em

ensaios

envolvendo

misturas

Microalgas
As microalgas planctnicas habitam as camadas de superfcie de todas as guas
interiores e marinhas. So os principais produtores de matria orgnica para os
demais organismos aquticos. As diferentes espcies de microalgas respondem
de forma diferente aos compostos dissolvidos. A espcie mais adequada dever
ter: alta taxa de crescimento; respostas fisiolgicas bem conhecidas quanto a
fatores abiticos como radiao luminosa, temperatura e salinidade;
necessidades nutricionais bem conhecidas; pequena variabilidade gentica e
fenotpica; disponibilidade de obteno em cultivo; boa caracterizao
taxonmica e facilidade de manuseio em laboratrio.
As espcies costeiras mais utilizadas so: Phaeodactylum tricornutum,
Skeletonema costatum, Minutocellus polimorphus, Thalassiossiria pseudonana,
Dunaliella tertiolecta, Tetraselmis chuii, Chaetoceros calcitrans. Entre outras
espcies dulciaqcolas a espcie Pseudokirchneriella subcaptata a mais
utilizada (Figura 30).

Figura 30: Frascos com cultura crescida de P. subcaptata (Fonte: Gomes, 2008)

Ostras e Mexilhes

Testes de toxicidade com embries de ostras, mexilhes e outros bivalves vm


sendo realizados desde a dcada de 1960, nos Estados Unidos, Canad e em
alguns pases da Europa. Em pases de clima temperado so usados embries de
algumas espcies de bivalves na avaliao da toxicidade de compostos qumicos
e amostras de gua e sedimentos contaminados, coletados em campo. Mytilus
edulis, Mytills galloprovicialis, Crassostrea virginica, Crassostrea gigas Mercenaria
mercenria so as espcies mais utilizadas nesses pases.
No Brasil, testes de toxicidade com espcies de ostra Crassostrea rhyzophorae e
de mexilho Perna perna j so bastante utilizados, necessitando porm, de
testes mais abrangentes envolvendo maior nmero de espcies nativas (Figura
31).
64

Ensaios com estgios embriolarvais destes organismos so importantes no


diagnstico da contaminao ambiental por se tratarem de fases mais sensveis
do ciclo de vida.

Echinodermatas

Estudos com a utilizao de gametas de ourio-do-mar vm sendo realizados


desde a dcada de 1960. Caractersticas como amplo conhecimento da
embriologia, facilidade de obteno e manuseio, e ainda, o sincronismo do seu
desenvolvimento fazem do ourio-do-mar um excelente indicador biolgico.
Testes com embries de algumas espcies de ourio-do-mar foram padronizados
pela US-EPA em 1991 e pela Environment Canada em 1992.
No Brasil, testes de toxicidade crnica so realizados com embries das espcies
Echinometra lucunter e Lytechinus variegatus (Figuras 32 e 33).

Crustceos

Testes com crustceos como Artemia sp., misidceos (crustacea: Mysidacea) so


realizados com base na sensibilidade a vrios agentes txicos, na facilidade do
seu manuseio e cultivo, desenvolvimento direto e ciclo de vida curto (Figura 34).
Em particular, testes com misidceos no Brasil tm sido utilizados para avaliar a
toxicidade de produtos qumicos.

8.4

Ensaios de Ecotoxicidade Utilizando a Frao Solvel em gua dos


Hidrocarbonetos

Os testes de toxicidade desempenham um papel muito importante na deteco


de contaminantes potencialmente danosos ao meio ambiente. Os hidrocarbonetos
de petrleo so em sua grande maioria pouco solveis em gua, e como tem sido
evidenciado e discutido em seces anteriores, as substncias de menores
massas moleculares, em geral, possuem maior solubilidade e maior toxicidade.
A dissoluo de uma mistura hidrocarbnica como a gasolina, por exemplo,
ocorre quando compostos mono e dicclicos aromticos bem como compostos
polares so incorporados frao solvel em gua. A absoro da frao solvel
em gua, acompanhada da incorporao de quantidades sub-letais de
hidrocarbonetos, representa a rota de exposio geradora dos efeitos txicos
primrios no fitoplncton e na maioria dos embries de invertebrados.
Em particular, os testes envolvendo hidrocarbonetos de petrleo, prevem a
utilizao da frao solvel em gua (FSA) desses hidrocarbonetos. Tais testes
seguem metodologias consagradas de extrao da FSA. Em geral, utilizam-se
frascos tipo Mariott, nos quais o material adicionado a meio de cultura ou gua
do mar sinttica, ou mesmo gua do mar esterilizada, sob agitao durante um
dado perodo de tempo aps o qual retirada uma alquota da fase aquosa
(Figura 35).

8.5

Consideraes Acerca dos Estudos de Ecotoxicologia

Embora os estudos de ecotoxicologia apontem para uma avaliao global e mais


realstica dos efeitos das substncias txicas sobre os organismos, observvel a
65

existncia de uma lacuna entre as respostas fisiolgicas dos organismos e as


concentraes das substncias txicas obtidas atravs do emprego de
metodologias de extrao e quantificao. Se, por um lado, os testes
ecotoxicolgicos indicam as concentraes letais ou txicas efetivas de
determinadas substncias para os organismos, por outro lado, fenmenos
qumicos relacionados s interaes ocorridas entre as substncias qumicas e a
matriz qual elas esto ligadas, podem tornar tais substncias menos
biodisponveis embora as metodologias analticas de extrao e quantificao
culminem numa resposta indicativa de altos valores de concentrao. Assim,
muitas vezes os valores das concentraes das substncias encontrados
mediante emprego de anlises qumicas no esto relacionados diretamente a
uma resposta txica, mas sim a uma magnificao da extrao. Igualmente, as
determinaes analticas no so capazes de prever os efeitos sinergsticos entre
diferentes substncias (ARAJO & NASCIMENTO, 1999). Diante destas
constataes, novos esforos esto sendo empreendidos na perspectiva de
convergir respostas fisiolgicas e qumicas, para que se estabeleam novos
parmetros avaliativos de ecotoxicidade; parmetros estes que sejam
integradores e abrangentes, sem perder, contudo o carter prtico.

Figura 31: Estgios embriolarvais de C. rhizophorae (Fonte: GOMES, 2008)

Figura 32: Estgio embriolarvar de E. lucunter (Fonte: Gomes, 2008)


66

Figura 33: Espcimes adultos de E. lucunter (Fonte: Gomes, 2008).

Figura 34: Espcie Artemia salina (Fonte: www.akvaryum.com).

Resduo

Figura 35: Extrao da frao solvel em gua em frascos tipo Mariott


(Fonte: GOMES, 2008).
67

9. Consideraes Finais

Todos os avanos recentes na Biotecnologia Ambiental concernentes


aos tratamentos de resduos do setor petrolfero convergem para a utilizao
cada vez mais freqente dos recursos modernos da Biologia Molecular, bem como
das tcnicas e estudos de Ecotoxicologia.
Dadas as exigncias crescentes no mbito da qualidade ambiental dos resduos
gerados nas diversas etapas da cadeia produtiva do petrleo, os tratamentos
desses resduos devem levar em conta mais do que nunca, a efetividade dos
processos relacionada qualidade ambiental. Os objetivos do emprego de
tcnicas biotecnolgicas no tratamento de resduos apontam, por tanto, para a
obteno de altas taxas de biodegradao associadas a uma reduo a nveis
tolerveis de ecotoxicidade. Por outro lado, novas estratgias de seleo e
investigao de espcies microbianas envolvidas na biodegradao de
hidrocarbonetos, so sustentadas por tcnicas moleculares. importante
salientarmos que, com o advento do emprego destas tcnicas, um nmero ainda
maior de microrganismos tem sido encontrado associado ao fenmeno da
biodegradao. Alm disso, esses mtodos e tcnicas tm sido utilizados com
sucesso na composio de pool ou consrcios de microrganismos degradadores.
No que concerne ao processo propriamente dito, as tendncias indicam a
conduo de processos ex situ que priorizem a realimentao do biorreator com
carga orgnica poluente a fim de se explorar a aclimatao de microrganismos
potencialmente degradadores. Ao mesmo tempo, estas condies devem ser mais
aproximadas das condies operacionais em que ocorrem os descartes. De
maneira mais ampla, h tambm uma tendncia utilizao de processos
biticos e abiticos combinados.
No menos importante, a contribuio dos estudos da utilizao de
biossurfactantes na biodisponibilizao e biodegradadao de hidrocarbonetos.
Neste sentido, da inovao, os Laboratrios de Desenvolvimento de Bioprocessos
(LADEBIO) da UFRJ buscam posicionar-se dianteira das pesquisas no mbito
da Biotecnologia Ambiental, a fim de melhorar os tratamentos de resduos e
borras oleosas provenientes do setor petrolfero, respaldando-se, sobretudo nas
bases biotecnolgicas e da engenharia de bioprocessos.
Com base nas suas pesquisas no campo do tratamento de borras oleosas de
refino e produo, de borras de derivados, e ainda da produo de
biossurfactantes com vistas otimizao da remoo de hidrocarbonetos, que o
LADEBIO vem fortalecendo seu patrimnio intelectual e projetando-se para uma
posio de destaque nesta temtica.

68

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74

Os Laboratrios de Desenvolvimento de Bioprocessos


(LADEBIO) da Escola de Qumica da
Universidade Federal do Rio de Janeiro
Os temas de pesquisa desenvolvidos no LADEBIO advogam uma mudana de
paradigma das atividades econmicas, em particular dos processos de produo industrial,
integrando os princpios e estratgias de qualidade total com os requisitos de qualidade
ambiental.
As linhas de pesquisa coordenadas pelo Professor Nei, ao longo de 30 anos de experincia,
so caractersticas da sua rea de especializao e esto ligadas ao Desenvolvimento de
Bioprocessos, envolvendo, em sua grande maioria, trabalhos de natureza tericoexperimental, com aplicao prtica. So temas de estudo: o desenvolvimento de processos
visando produo de biocombustveis, enzimas, poliis, antibiticos, bioinseticidas,
biossurfactantes, cidos orgnicos, aromas e fragrncias, bem como o desenvolvimento de
processos biolgicos para o tratamento de resduos e efluentes industriais.
Como ferramentas para o desenvolvimento de bioprocessos nos projetos do LADEBIO, as
seguintes estratgias so comumente adotadas: seleo e melhoramento de linhagens
(naturalmente ocorrentes ou recombinantes), construo de biocatalisadores timos;
otimizao de meios; modos de operao e cintica de bioprocessos; imobilizao de clulas
e enzimas; caracterizao e aplicao de bioprodutos, como tambm a avaliao do
desempenho de biorreatores.
Devido caracterstica tecnolgica das pesquisas do LADEBIO, em todos os trabalhos
estabelecem-se compromissos com o desenvolvimento de bioprocessos que possam ser
transformados em realidade industrial. Alm disso, estudos envolvendo a gesto tecnolgica
so realizados a fim de se ter uma viso mais ampla e identificar tendncias e desafios dos
diferentes segmentos ligados Biotecnologia, como por exemplo: estudos de Prospeco
Tecnolgica para a produo de combustveis e outras substncias qumicas com base nas
matrias-primas renovveis (Biorrefinaria), Transgenia, Biodiversidade, Meio Ambiente e
Patente. Devido natureza muldisciplinar da rea Biotecnolgica, um grande nmero de
trabalhos desenvolvido em parceria com outros grupos de pesquisa da prpria UFRJ e de
outras instituies de ensino e pesquisa externas, e tambm com empresas.
O conjunto de nossas atividades tem gerado resultados que hoje alimentam consrcios de
pesquisa entre nossos laboratrios e Universidades e Centros de pesquisa nacionais e
internacionais, tendo sido os Laboratrios de Bioprocessos da EQ/UFRJ credenciados pelo
Programa Ibero-Americano de Cincia e Tecnologia para o Desenvolvimento (IBEROEKACYTED/Espanha). Tem propiciado, tambm, interaes entre a Universidade e a Indstria,
como o caso de projetos que vem sendo desenvolvidos em parcerias com a PETROBRAS,
ARACRUZ CELULOSE, BIONASA e OXITENO. Estas parcerias tm se constitudo em um
excelente exerccio, no s para a busca de solues para as empresas, mas tambm para a
gerao de conhecimento e formao de recursos humanos altamente capacitados para o
desenvolvimento tecnolgico em nosso pas.
Contato:
Nei Pereira Jr., PhD
Professor Titular
Escola de Qumica CT/UFRJ
Departamento de Engenharia Bioqumica - LADEBIO sala E 121
Cidade Universitria - Ilha do Fundo - Rio de Janeiro RJ
Cep: 21949-900
Tels: 0XX.21.2562 7644/7645/7646
Fax: 0XX.21.2562 7616
e-mail: nei@eq.ufrj.br

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LINHAS DE PESQUISA

Biotecnologia de Materiais
Lignocelulsicos
Processos com
Microrganismos
Recombinantes
Gesto
Biotecnolgica

Tecnologia da
Produo de
Antibiticos

Biotecnologia
Ambiental

Desenvolvimento
de Bioprocessos

Agregao de Clulas:
Fenomenologia e
Aplicao

Biotransformao
Novas Bebidas
Fermentadas e Alimentos
Funcionais de Frutos da
Biodiversidade Amaznica

INFRA-ESTRUTURA LABORATORIAL
LADEBIO
Laboratrios de Desenvolvimento de Bioprocessos

CENTRAL
ANALTICA
SINFOBIO
Sistema de Informao
de Biomassas
LABENGBIO
Laboratrio de Engenharia
Bioqumica

LAPROENZ
Laboratrio de Produo
Enzimtica

LABSBIM
Laboratrio de Sistemas
Biolgicos Imobilizados

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Agradecimentos as seguintes instituies e empresas pelo apoio


financeiro:

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