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volume 3
BIODEGRADAO DE HIDROCARBONETOS
Nei Pereira Jr.;
Edelvio de B. Gomes &
Adriana Ururahy Soriano
1 edio
Rio de Janeiro, 2009
SRIES EM BIOTECNOLOGIA
volume 3
Biodegradao de Hidrocarbonetos
P 436 t
Pereira Jr., Nei (editor-autor)
Biodegradao de Hidrocarbonetos / Nei Pereira Jr., Rio de
Janeiro:
Escola
de
Qumica/UFRJ;
FAPERJ;
CNPq;
PETROBRAS 2009.
75 p.: il. (Sries em Biotecnologia, v.3)
ISBN: 978-85-903967-5-8
Inclui bibliografia.
1.
APRESENTAO
Os Autores
6
SUMRIO
1. Introduo
10
13
15
15
5. Tecnologias de Remediao
17
17
20
23
23
28
48
7.
Aspectos Fsico-qumicos
Hidrocarbonetos
8. Estudos de
Hidrocarbonetos
Ecotoxicologia
e
e
Ambientais
da
Biodegradao
de
57
Avaliao
da
Ecotoxicidade
dos
59
59
60
8.3 Organismos-teste
62
64
64
9. Consideraes Finais
67
68
BIODEGRADAO DE HIDROCARBONETOS
Nei Pereira Jr.; Edelvio de B. Gomes &
Adriana Ururahy Soriano
1. Introduo
Nos ltimos 30 anos as atenes da academia e dos gestores ligados
ao setor petrolfero tm se voltado para a soluo de problemas relacionados
presena dos hidrocarbonetos de petrleo no meio ambiente. Neste perodo,
incidentes envolvendo liberao de grandes quantidades de petrleo ou derivados
deram vazo a um sem-nmero de estudos de campo e em escala de bancada.
No entanto, sabido que as primeiras investigaes de cunho cientfico de que se
tm registro no mbito da biodegradao de hidrocarbonetos remontam desde a
dcada de 1940, com a clssica reviso de Zobel, datada de 1947 (ZOBEL apud
URURAHY, 1998).
Em termos prticos, na ocorrncia de um incidente como derramamento ou
vazamento de leo, as primeiras providncias a serem tomadas so de natureza
fsica (geralmente, remoo mecnica). Em seguida, podem ser utilizados
produtos qumicos (surfactantes qumicos) para disperso do leo. Em tese, as
tcnicas biotecnolgicas so utilizadas em um terceiro momento, para a
biotransformao do material restante, podendo chegar mineralizao,
fenmeno caracterizado pela converso dos hidrocarbonetos em gs carbnico
(CO2) e gua. Tais tcnicas podem ser in situ, ocorrendo no local, a exemplo da
atenuao natural, bioaumento e bioestimulao; e ex situ, onde o material
tratado fora do local. Nestes casos, podem ser utilizadas biopilhas e biorreatores.
O emprego das tecnologias de biorremediao e dos biotratamentos aos
ambientes contaminados por petrleo e seus derivados fundamenta-se nas
habilidades e potencialidades bioqumicas de uma grande quantidade de gneros
microbianos, que, atuando em conjunto podem transformar substncias mais
complexas e recalcitrantes em substncias menos txicas e mais compatveis do
ponto de vista ambiental. Para tal, fatores como: caractersticas culturais dos
microrganismos; aclimatao; suplementao de nitrognio e fsforo (relao
C:N:P); tamanho de inculo; disponibilidade de gua; aerao; pH; temperatura;
estrutura qumica dos compostos, entre outros, so fundamentais na efetividade
do processo de biodegradao dos hidrocarbonetos. Assim, quando se tenciona a
estimulao da degradao de hidrocarbonetos por microrganismos, devem-se
levar em conta todos esses fatores, quer seja isoladamente, quer seja suas
interfaces.
Antes, porm, de entendermos os mecanismos e os aspectos relacionados
biodegradao, importante percebermos quais as caractersticas composicionais
dos hidrocarbonetos que esto presentes no petrleo, como podem ser
classificados estes compostos, que caractersticas fsicas e qumicas podem
interferir no seu deslocamento nos diferentes ambientes e como estes compostos
podem interagir com os diferentes ambientes.
8
Hidrocarbonetos do Petrleo
Saturados
Isoalcanos
n-alcanos
Insaturados
Cicloalcanos
Aromticos
Olefinas
FAIXA DE
EBULIO
(C)
TOMOS
DE
CARBONO
Gasolina
Nafta
Querosene
leo diesel
leos pesados
Lubrificantes
30-200
100-200
150-250
160-400
315-540
425-540
5 -10
8-12
11-13
13-17
19-25
20-45
Tipo de Borra
Borra de fundo de tanque
Pequeno porte
Grande porte
Borra de dessalgadora
Pequeno porte
Grande porte
Borra de SAO
Pequeno porte
Grande porte
Lodos de tratamento
Filtrao
Centrifugao
Biolgico
Slops e derramamentos
Derramamentos lquidos
Derramamentos asflticos
Graxas, resinas e parafinas
Borras com chumbo
leo
Composio (% p/p)
gua
Slidos
30 60
40 - 60
40 70
40 - 60
5
30 40
85
30 40
10
20 40
10 20
10 40
50 80
60 90
10 30
5 20
10
8 10
0,1 0,5
70
80 90
80 90
20
10 12
10 12
30 40
100
100
-
1-10
60 70
90
Propriedade
Unidades
Valores
observados
Valores tpicos
(leo diesel)
Mtodo
Kg/m3
854,20
820,0 880,0
ASTM D1298
Ponto de fulgor
90,00
60 (mnimo)
Viscosidade a
40C
cSt
4,33
1,6 6,0
Adimensional
4,00
3,0 (mximo)
No possui
Material
slido em
suspenso
Claro, lmpido
e isento de
material slido
em suspenso
Densidade
Cor ASTM
Aspecto visual
4.1.
Influncia
Aquticos
ASTM D93
ASTM D445
dos
Hidrocarbonetos
do
Petrleo
nos
ASTM D1500
-
Ambientes
de vida. O leo derramado pode permanecer por mais ou menos tempo em uma
determinada rea, dependendo da corrente marinha, da sua composio e de
uma srie de fatores, tais como: Fatores fsicos - sendo um dos mais importantes
a turbulncia da gua; Fatores qumicos especial ateno dada ao fenmeno
da fotodecomposio, e fatores biolgicos, sobretudo a biodegradao.
Esse conjunto de fatores e condies determinar o percurso do petrleo e seus
derivados no mar, bem como seu grau de ecotoxicidade e seu tempo de
persistncia no ambiente marinho (ATLAS, 1984).
As guas dos mares e oceanos so constitudas de uma mistura complexa de sais
cuja concentrao varia de acordo com a estao do ano e a regio geogrfica.
Esta variao associada degradao qumica e fsica do petrleo contribui para
a formao de centenas de compostos complexos, com graus especficos de
toxicidade e recalcitrncia.
Descargas de leo no mar, apesar de serem quase sempre em maior quantidade
do que em terra, so mais susceptveis biodegradao. Devido ao menor tempo
de residncia das guas dos mares, o leo nessas reas tem mais facilidade de
ser biodegradado do que em reas prximas a esturios, onde o tempo de
residncia das guas bem maior, causando maiores danos biota local. O
aporte de minerais e de oxignio, que so fatores de elevada importncia na
biodegradao de hidrocarbonetos de petrleo, esto diretamente relacionados
ao tempo de residncia da gua (ATLAS, 1984).
Grande parte das descargas de petrleo e de seus derivados se d por lavagens
de tanques de navios em alto mar. Aps a descarga do produto, os tanques so
cheios com a gua do mar (gua de lastro), para que seja mantida a estabilidade
do navio. Antes de fazer uma nova carga com produto, essa gua descartada
no mar, e com ela so descartadas algumas dezenas de milhares de litros de
petroderivados. Outra forma, bem mais drstica, se d pelo vazamento de
produto por naufrgios decorrentes de rupturas na estrutura do navio. Em
regies prximas a terminais porturios h grande susceptibilidade a esses
derrames.
O petrleo encontrado no ambiente marinho em quatro estados: filme, soluo,
emulso e em grumos. Muitos tipos de leos so espalhados rapidamente e
reduzidos a uma camada muito fina. A espessura dessa camada em uma rea de
guas paradas depende da taxa de evaporao, da tenso superficial do leo e da
gua do mar neste local. O acmulo de hidrocarbonetos nesta camada afeta
diretamente a vida marinha que se encontra imediatamente abaixo dela. Os
grumos so encontrados em tamanhos variados, sendo depositados no fundo do
mar devido ao seu peso, e essas partculas se acumulam e se complexam,
formando uma camada de material altamente recalcitrante sobre o sedimento
(MARTY & SALIOT, 1976).
Nos rios e lagos, o petrleo e seus derivados podem persistir por mais tempo,
dependendo da natureza do leo e da sua composio, alm do tempo de
residncia da gua, que nesses casos bem maior que nos mares e oceanos. Por
exemplo, os leos leves, que so ricos em material txico constitudo por
aromticos volteis, permanecem menos tempo que os leos pesados e os
combustveis martimos. Os leos crus, por sua vez, so menos susceptvel
biodegradao do que os seus derivados (ATLAS & BARTHA, 1972).
15
4.2.
4.3.
Hidrocarbonetos do Petrleo no Ar
naftaleno
fluorene
acenafteno
acenaftileno
antraceno
pireno
fenantreno
fluoranteno
criseno
coroneno
benzo[a]pireno
perileno
colorantreno
5.
Tecnologias de Remediao
5.1.
Figura 5: Bioaumento.
18
Landfarming
Compostagem ou Biopilha
19
Biorreatores
5.2.
Lavagem de solo
Dessoro Trmica
i.
ii.
iii.
iv.
v.
6.
6.1.
Fungos
Acremonium, Aspergillus, Aureobasidium,
Beauveria, Botrytis, Candida,
Chrysosporium, Cladosporium,
Cochliobolus, Cylindrocarpon,
Debaryomyces, Fusarium, Geotrichum,
Glicocladium, Graphium, Humicola,
Monilia, Mortierella, Paecilomyces,
Penicillium, Phoma, Rhodotorula,
Saccharomyces,Scolecobasidium,
Sporobolomyces, Sprotrichum, Spicaria,
Tolypocladium, Torulopsis, Trichoderma,
Verticillium.
50
100
26
ii)
iii)
iv)
carbonos terminais clivado produzindo o acetil CoA, que entra na via metablica
do ciclo de Krebs. Uma repetio seqencial destas reaes resulta na completa
oxidao da molcula de hidrocarboneto. Na Figura 12, observa-se a seqncia
de reaes proposta como via de degradao de alcanos (BAKER & HERSON,
1994).
No de
tomos
de C
MM
(g/mol)
Ponto
de
Fuso
(oC)
Ponto
de
Ebulio
(oC)
Solubilidade
(mg/L)
Etano
n-hexano
n-decano
n-hexadecano
n-eicosano
n-hexacosano
2-metilpentano
2,2,4-trimetilpentano
4-metiloctano
1-hexeno
trans-2-hepteno
1-octeno
2
6
10
16
20
26
6
8
9
6
7
8
30,1
86,2
128,3
226,4
282,6
366,7
86,2
114,2
128,3
84,2
98,2
112,2
- 172,0
-94,3
-31,0
19,0
36,7
56,4
-154,0
-107,2
---139,8
-109,5
-121,3
-88,6
68,7
174,0
287,0
343,0
412,2
60,3
127,0
142,0
63,5
98,0
121,0
63,70
12,30
0,05
5,2x10-5
3,1x10-7
1,3x10-10
13,8
2,4
0,12
50,0
15,0
2,7
AH2
CH3(CH2)10CH3
COOH(CH2)10CH3
CH2OH(CH2)10CH3
O2
ATP CoA
+
NAD+ NADH
H2O
FAD
AMP
CO-CoA(CH2)10CH3
CO-CoACH=CH(CH2)8CH3
NAD+ NADH + H+
CO-CoACH2COH(CH2)8CH3
COCoA(CH2)9CH3 + CH3COCoA
H2 O
FADH2
CoA
CO-CoACH2C=O(CH2)8CH3
Ciclo de Krebs
32
Oxidao terminal
CH3CH2(CH2)nCH2CH3
NADH+H+
O2
NAD+
CH3CH2(CH2)nCH2CH2OH
NAD
Oxidao sub-terminal
CH3CH2(CH2)nCHOHCH3
O2
NADH+H+
CH3CH2(CH2)nCH2CHO
NAD
Omega oxidao
O2
CH3CH2(CH2)nCHOHCH3
O2
NADH+H+
CH3CH2(CH2)nCH2COOH
CH3CH2(CH2)nC=OCH3
HOCH2CH2(CH2)nCH2COOH
O2
CH3CH2(CH2)n-1 + -CH2CH2C=OCH3
H2O
HOOCH2CH2(CH2)nCH2COOH
ATP
CoA
AMP + Pi
CH3CH2(CH2)n-1CH2OH + HOOCCH3
Beta oxidao
Ciclo de Krebs
CH3CH2(CH2)n-1COOH
Acetil CoA
Figura 13: Rotas de oxidao dos alcanos de cadeia normal e ramificada.
(Fonte: URURAHY, 1998).
PRITCHARD et al. (1996) foram mais cuidadosos ao afirmar que a biodegradao
do pristano e do fitano claramente ocorre na natureza, se mostrando apenas
lenta quando comparada taxa de consumo de alcanos lineares que apresentam
tempos de reteno em colunas cromatogrficas semelhantes (C17 e C18,
respectivamente). Os autores explicam que justamente esta diferena de
susceptibilidade ao ataque microbiano a responsvel pela utilizao das relaes
C17/pristano e C18/fitano como indicadoras da ocorrncia da biodegradao. O
conceito se baseia na idia de que os processos abiticos no provocam perdas
diferenciadas em termos de alifticos e ramificadas, j que estes se comportam
quimicamente de maneira similar. Logo, a variao das relaes C17/pristano e
C18/fitano ao longo do tratamento decorrem, conservativamente, da ao
microbiana.
33
Pristano
Pristanoato
COO
Pristanodioato
OOC
COO
COO
4,8,12 trimetiltridecanoato
C3
OOC
COO
2,6,10- trimetiltridecanodioato
COO
2,6,10 trimetilundecanoato
C2
OOC
Metabolismo subsequente?
COO
2,6,10- trimetilundecanodioato
C2
COO
OOC
2,6- dimetilnonanodioato
succinato
C2
C3
metil malonato
C2
OOC
COO
2,6- dimetilheptanodioato
OOC
COO
2 - metilheptanodioato
OOC
COO
CH3(CH2)nCH=CH2
HOCH2(CH2)nCH=CH2
CH3(CH2)nCH-CH2
O
HOOC(CH2)nCH=CH2
CH3(CH2)nCHOH-CH2OH
CH3(CH2)nCHOH-COOH
CH3(CH2)nCOOH + CO2
HOCH2(CH2)nCH-CH2
O
Figura 15: Rotas de degradao de alcenos (Fonte: URURAHY, 1998)
Os cicloalcanos so particularmente resistentes ao ataque microbiano. Inclusive,
compostos alicclicos complexos, tais como os tripentacclicos apresentam-se
como os mais persistentes, quando dos derramamentos de petrleo no meioambiente. No entanto, muitas revises apontam casos de degradao oxidativa e
co-oxidativa de cicloalcanos substitudos ou no. Grande parte dos cicloalcanos
no substitudos serve como alvo para as aes cometablicas, dando origem a
cetonas ou lcoois. Uma vez oxigenados, o processo de deteriorao destes
compostos prossegue, havendo a clivagem dos anis. Contraditoriamente, a
degradao de cicloalcanos substitudos parece ocorrer prontamente. Nestes
casos, o ataque inicial se d na posio da substituio, formando um
intermedirio cclico de cido carboxlico. A partir da, a metabolizao, segundo
descobertas recentes, passa pela gerao de um intermedirio aromtico,
seguida pela clivagem do anel em questo (ATLAS, 1981).
ENGLERT & KENZIE (1993) destacam que a mineralizao dos cicloalcanos, por
ser extremamente complexa, requer a ao de consrcios microbianos. Alm
disto, compostos de menos de dez tomos de carbono, em especial os de 5, 6 e 7
tomos, exercem efeitos altamente txicos sobre as membranas celulares,
enquanto sistemas contendo quatro ou mais anis condensados so degradados
muito lentamente. Para se ter uma idia de tal complexidade, listaremos as
principais etapas do processo de assimilao destas fontes de carbono pelos
microorganismos:
1)
2)
OH
O
O
COOH
(CH2)4
Acetil CoA
COOH
CH3
CH3
OH
CH2CH2CH3
CH2CH2CH3
OH
CH3
CH3
CH3CHCH3
CH3CHCH3
OH
OH
3)
OH
O
(CH2)nCH3
(CH2)nCH3
CH3(CH2)nCH(CH2)3C=O
O
(a )
B e nzeno
a ntra ceno , fe na ntre no
na fta leno
COO H
OH
OH
OH
C liva ge m d o a nel
Ca te c o l
CH 3
COO H
OH
B e nzoa to
To lueno
F e no l
(b )
C H3
C OO H
C OO H
C OO H
P - To lua to
C liva ge m do a ne l
OH
P - Hidro xibe nzo a to
OH
OH
C OOH
P ro to c a te c o la to
C OO H
B enzoa to
O CH 3
OH
V anilato
(a)
Catecol
(+)- muconolactona
COOH
COOH
COOH
C
OH
beta- cetoadipato
O
COOH
COOH
COOH
acetil-CoA
CH3
CO-SCoA
COOH
succinato
COOH
C O
COOH
SCo
Ciclo de Krebs
(b)
semialdedo-2 hidroximucnico
Catecol
OH
COOH
COOH
OH
OH
4-hidroxi-2-oxivalerato
CH2
COOH
CH3
COOH
OH
2-oxipent-4-enato
OH
acetaldedo piruvato
CH3
CH3
C O
HC O +
CH3
Ciclo de Krebs
Volatilizao
HPA
Fotoxidao
Sedimentao
Bioacumulao
Degradao inicial
biotransformao
detoxificao (?)
Remoo
Mineralizao
naftaleno
128,2
31,7
acenafteno
154,2
3,9
antraceno
178,2
0,07
----
fenantreno
178,2
1,3
----
fluoranteno
202,3
pireno
0,26
202,3
0,14
----
+Ames
fracamente carcinognico
benzo[a]antraceno
228,3
benzo[a]pireno
252,3
0,002
0,003
Ames; CA;SCE+UDS+carcinognico
Figura 22: Relao entre a quantidade de anis dos HPA e os efeitos deletrios.
Fonte: CERNIGLIA (1992).
42
a)
Fungos
O2
xido de areno
dioxigenases
Bactrias
O2
R
R
HPA
R
rearranjo no
enzimtico
monoxigenases
R
b)
OH
fenol
trans-dihidrodiol
R
OH
OH
epoxidohidrolase
cis-dihidrodiol
OH
OH
NAD+
NAH + H+
catecol
OH
desidrogenase
OH
clivagem meta
clivagem orto
COOH
CHO
COOH
COOH
R
R
OH
semi-aldedo 2 hidroxi-mucnico
R1
R1
R2
OH
R2
COOH
Enzimas intradiol
COOH
OH
R1
R1
R2
OH
OH
R2
Enzimas extradiol
COOH
OH
CHO
OH
OH
OH
=O
COOH
OH
OH
O2
naftaleno
OH
OH
H
-
2H + 2e
2H + 2ecis-dihidrodiol naftaleno
1,2 dihidroxi naftaleno
O H2O
COOH
cido cis-o-hidroxibenzalpirvico
OH
OH
OH
fisso do
anel
CH3COCOOH
HO
OH
salicilaldedo
COOH
=
O
COOH
-O
H
-O
H
O2
COOH
OH
CHO
cido saliclico
cido gentsico
COOH
OH
figura 20
catecol
OH
45
<
<
naftaleno
(2,4 a 4,4)
fenantreno
(4 a 18)
<
<
pireno
(34 a 90)
2 metilnaftaleno
(14 a 20)
3 metilcolantreno
(87 a 200)
benzo[a]pireno
(200 a 300)
Biodegradao de Asfaltenos
47
O2
OH
H
pireno
HOOC
HO
H
OH
COOH
OH
CO2
HO
HO
HOOC
HO
COOH
4 fenantroato
CO2
HOOC
HO
HOOC
HO
OH
HO
HOOC
O
via Kiyohara
HOOC
HOOC
HO
HO
fitalato
via Evans
4 hidroxi perinaftenona
HOOC
HO
COOH
HOOC
HO
cinamato
Fenmenos Interfaciais
Hidrocarbonetos aromticos
Composto
Heptano
Octano
Nonano
Decano
Hexadecano
Eicosano
Naftaleno
Bifenil
Acenafteno
Antraceno
Fenantreno
Pireno
Criseno
1,2 Benzopireno
Solubilidade
(mg.L-1)
2,9x100
6,6x10-1
2,2x10-1
5,2x10-2
2,0x10-5
1,1x10-6
3,1x101
7,2x100
4,3x100
5,0x10-2
1,1x100
1,3x10-1
2,0x10-3
5,3x10-3
Regio
hidroflica
Regio
hidrofbica
53
57
7.
Aspectos Fsico-qumicos
Hidrocarbonetos
Ambientais
da
Biodegradao
de
Disponibilidade de Oxignio
Temperatura
pH
Salinidade
Atividade de gua
8.
Estudos de Ecotoxicologia
Hidrocarbonetos
Avaliao
da Ecotoxicidade
dos
8.1
8.2
61
8.3
Organismos-teste
II.
III.
IV.
V.
ecotoxicolgica, que
hidrocarbnicas.
so
empregados
em
ensaios
envolvendo
misturas
Microalgas
As microalgas planctnicas habitam as camadas de superfcie de todas as guas
interiores e marinhas. So os principais produtores de matria orgnica para os
demais organismos aquticos. As diferentes espcies de microalgas respondem
de forma diferente aos compostos dissolvidos. A espcie mais adequada dever
ter: alta taxa de crescimento; respostas fisiolgicas bem conhecidas quanto a
fatores abiticos como radiao luminosa, temperatura e salinidade;
necessidades nutricionais bem conhecidas; pequena variabilidade gentica e
fenotpica; disponibilidade de obteno em cultivo; boa caracterizao
taxonmica e facilidade de manuseio em laboratrio.
As espcies costeiras mais utilizadas so: Phaeodactylum tricornutum,
Skeletonema costatum, Minutocellus polimorphus, Thalassiossiria pseudonana,
Dunaliella tertiolecta, Tetraselmis chuii, Chaetoceros calcitrans. Entre outras
espcies dulciaqcolas a espcie Pseudokirchneriella subcaptata a mais
utilizada (Figura 30).
Figura 30: Frascos com cultura crescida de P. subcaptata (Fonte: Gomes, 2008)
Ostras e Mexilhes
Echinodermatas
Crustceos
8.4
8.5
Resduo
9. Consideraes Finais
68
Petroleum
Pollutants.
International
69
70
71
72
73
74
75
LINHAS DE PESQUISA
Biotecnologia de Materiais
Lignocelulsicos
Processos com
Microrganismos
Recombinantes
Gesto
Biotecnolgica
Tecnologia da
Produo de
Antibiticos
Biotecnologia
Ambiental
Desenvolvimento
de Bioprocessos
Agregao de Clulas:
Fenomenologia e
Aplicao
Biotransformao
Novas Bebidas
Fermentadas e Alimentos
Funcionais de Frutos da
Biodiversidade Amaznica
INFRA-ESTRUTURA LABORATORIAL
LADEBIO
Laboratrios de Desenvolvimento de Bioprocessos
CENTRAL
ANALTICA
SINFOBIO
Sistema de Informao
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