AVALIAO DA BIODEGRADAO DE BIODIESEL.

Danilla Marques Oliveira, UNESP, danilla_allinad@yahoo.com.br Fabiana Aparecida Henckein, UNESP, fabi.henc@gmail.com Marcela Miura Satow, UNESP, marcela.satow@gmail.com Dejanira de Franceschi Angelis, UNESP, dangelis@rc.unesp.br Alex Fernando Almeida,UNESP, afa_micro@yahoo.com.br Ariane Christine Degasperi Bertoletti, UNESP, aribertoletti@yahoo.com.br Mariane Aparecida Messetti, UNESP, mari_messetti@ig.com.br Ricardo Consigliero Guerra, UNESP, guerra.ricardo@gmail.com Thiago Junqueira Roncon, UNESP, thiagoroncon@hotmail.com

RESUMO
A adio de 2% de biodiesel ao leo diesel, impulsionou a produo de biodiesel e consequentemente o risco de acidentes ecolgicos provocados por possveis derramamentos. Como as pesquisas neste setor so escassas, medidas para remediao da rea contaminada ainda so desconhecidos. Portanto este trabalho visa analisar a atividade microbiana sobre amostras de solo de aterro sanitrio contendo biodiesel, e associadas a consrcios microbianos, para uma possvel biorremediao. A produo de CO2 foi quantificada pela tcnica de respirometria, utilizando-se Respirmetros de Bartha & Pramer. Verificou-se que a atividade microbiana foi favorecida nas amostras contendo biodiesel com o consrcio microbiano.

Palavras-chave: biodegradao, biodiesel, respirometria.

1. INTRODUO Nos ltimos tempos, tm crescido a preocupao com o meio ambiente, em especial, com os impactos decorrentes de derrames de petrleo6. A determinao governamental de uma adio de 2% de biodiesel ao leo diesel j utilizado, tambm comea a causar preocupao com seu impacto no meio ambiente. Sendo o solo um dos ambientes que eventualmente podero ser atingido, muitas tcnicas de recuperao podero ser explorados. Um dos melhores processos para recuperar solos contaminados fazer uso de microrganismos capazes de degradar compostos txicos no processo de biorremediao4. Biorremediao pode ser definida como o uso de microrganismos vivos para remoo de poluentes do solo, gua e gases5,6. Assim, faz-se necessrio estudar a dinmica da biodegradao desse novo resduo (biodiesel), que comea a ser incorporado ao cotidiano do brasileiro. A medida quantitativa de respirao do solo considerada como indicadora da atividade microbiana, bem como do efeito de toxicidade e da biodegradao de compostos orgnicos adicionados ao solo. A respirao pode ser avaliada mediante quantificao do oxignio consumido do gs carbnico produzido, durante a biodegradao. A quantificao do gs carbnico produzido pode ser efetuada em sistemas de fluxo contnuo ou em sistemas fechados. O respirmetro de Bartha um sistema fechado utilizado para quantificar a respirao de um solo no qual adicionou-se resduo: a seguir espera-se que quanto maior a produo de CO2 maior ser a biodegradao3. O presente estudo objetivou avaliar o processo de biodegradao de biodiesel, mediante a evoluo de CO2, verificando a capacidade de biodegradao de microrganismos naturalmente presentes no solo proveniente do aterro sanitrio do Municpio de Rio Claro, assim como verificar uma possvel melhora na eficincia do processo mediante adio de inoculo misto previamente preparado.

2. MATERIAL E MTODOS O ensaio respiromtrico foi realizado de acordo com a norma L 6.350 da CETESB3. A umidade do solo foi ajustada para 70% da capacidade de campo. O experimento foi executado com trs repeties para cada tratamento seguindo a Tabela 1:

Tabela 1 - Protocolo de organizao do experimento em 8 tratamentos.

Tratamentos Solo de Aterro Sanitrio (50g) Biodiesel ( 5mL) Pool microbiano (5 mL) 1 x 2 x x 3 x x 4 x x x

A avaliao do desenvolvimento de microrganismos foi realizada mediante contagem das Unidades Formadoras de Colnias por grama de solo seco (UFC/g/ss). Pesou-se 10g de solo e colocou-se em 90 mL de soluo salina esterilizada. A seguir homogeneizou-se em shaker durante 15 minutos e deixou-se em decantao por mais 5 minutos. O lquido sobrenadante foi adequadamente diludo para as contagens de bactrias e fungos em meio PCA e meio Sabouraud, respectivamente. As placas de petri para contagem de bactrias foram mantidas a 36 1oC e as de fungos a 28 1oC5. Para a contagem das UFC/g/ss verificou-se o peso seco do solo, com a secagem de 10g deste em estufa 105C por duas horas2.
A Tampa da Cnula; B - Cnula; C Rolha de borracha; D Brao lateral; E Soluo de KOH; F Amostra a ser degradada; G Frasco de vidro de 300 mL; H Vlvula; I Tampo de suporte; J Cal sodada (filtro de CO2)

FIGURA 1 RESPIRMETRO DE BARTHA & PRAMER

3. RESULTADOS E DISCUSSO Verificou-se que a associao do biodiesel com o pool de microrganismos produziu maior quantidade de CO2 e de carbono biodegradado. Os respirmetros contendo solo e associao microbiana produziram mais CO2 e carbono que o controle (somente solo). Apenas com biodiesel obteve-se a segunda maior quantidade de CO2 produzido e de carbono biodegradado, seguido do pool (Figura 2).

CO2 acumulado
4000 3500 3000 mol de CO2 2500 2000 1500 1000 500 0 0 1 5 12 19 27
em

C biodegradado
5000

mol de C

4000 3000 2000 1000 0 1 5 12 19 27 39 69 Periodo de incubao (dias)

39

69

Perodo de incubao dias

controle

biodiesel

bio+em

biodiesel

Bio+em

EM

FIGURA 2 - Grficos do CO2 acumulado e dos C biodegradado dos testes com biodiesel, pool microbiano e a associao destes incubados em frascos de Bartha & Pramer pelo perodo de 69 dias.

A Figura 3 mostra que o tratamento mais eficiente foi aquele em que se associou o biodiesel e o pool microbiano (5,1%), assim como apresentado nos resultados citados acima.
Eficincia de Biodegradao
6,0 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 0,0 Tratamentos

Biodiesel Bio+EM

FIGURA 3 - Grfico da Eficincia de Biodegradao com biodiesel e a associao deste com um pool microbiano incubados em frascos de Bartha & Pramer pelo perodo de 69 dias.

Ao trmino dos experimentos efetuou-se a quantificao total de bactrias e fungos mostradas (Tabela 2). A tabela registra que o nmero de bactrias aumentou no decorrer do experimento, como esperado se comparado com a evoluo de CO2 do ensaio de respirometria. Os meios de cultura utilizados foram Plate Count Agar (PCA), Potato Dextrose Agar (PDA) e Sabouraud, para amostrar os diferentes grupos de bactrias e fungos existentes nos tratamentos. Para a contagem final emprega-se o meio de Sabouraud, em virtude da baixa recuperao inicial dos fungos.
Tabela 2 Contagem inicial e final de (UFC/g de solo) bactrias heterotrficas e fungos do ensaio de biodegradao.
Bactrias Tratamentos Solo Solo + EM Solo + Biodiesel Solo +EM + Biodiesel Inicial- 10 4,15 1,95 10,6 4,25
2

Fungos
4

Final - 10 51,82 206,91 7,23 52,5

Inicial - 10 0,66 0,37 -

Final - 106 7,52 45,24 0,32 1,19

Na Tabela 3 so apresentados parmetros qumicos e composio granulomtrica do solo empregado no ensaio respiromtrico. Os resultados mostram que o solo utilizado apresenta caractersticas de composio predominantemente argilosa, assim os fatores concentrao e difuso do oxignio podem ter limitado o potencial de biodegradao, uma vez que solos mais arenosos apresentam caractersticas que permitem melhor oxigenao do solo, estimulado a biodegradao aerbia1.
TABELA 3 Caracterizao fsica e qumica do solo.
mg/d mmolc/dm3 Tfsa g/dm Composio de areias pH MO COT Pres K Ca Mg grossa fina argila limo 4,1 5 2898,6 3 0,6 8 5 18,6 28,6 30,1 22,1 39 22608,7
3

Solo Solo+Biodiesel

S 10

micronutrientes - mg/dm Na Fe Mn Cu Zn 7 4 1,1 0,1 0,7

B 0,5

4. CONCLUSO Este trabalho permite concluir que a adio de um pool microbiano auxilia na biodegradao do biodiesel. Verificou que o combustvel estudado de difcil degradao, pois a eficincia de biodegradao foi baixa. Torna-se necessrio novos estudos sobre sua biodegradao pela microbiota do solo. Solos que apresentem composio mais rica em areia, podem contribuir com resultados permitindo melhor compreenso da biodegradao do biodisel.

5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1 - ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR - 10.004: Resduos Slidos Classificao. Rio de Janeiro, 2004. 63p. 2 -COMPANHIA DE TECNOLOGIA E SANEAMENTO AMBIENTAL. Norma Tcnica L6.245: Solos Coleta e preparao de amostras Procedimentos. So Paulo, 1984. 25p. 3 - COMPANHIA DE TECNOLOGIA DE SANEAMENTO AMBIENTAL. Norma tcnica L 6.350: Solos Determinao da Biodegradao de Resduos Mtodo respiromtrico de Bartha. So Paulo, 1990, 15p. 4 - KATAOKA, A. P. A. G. Biodegradao de resduo oleoso de refinaria de petrleo por microrganismos isolados de landfarming. 2001. 202 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Aplicada) Instituto de Biocincias, Universidade Estadual Paulista, Rio Claro.

5 - PELCZAR, M. J., CHAN, E. C. S., KRIEG, N. R. Microbiologia conceitos e aplicaes. V. 2. 2a ed. So Paulo: Makron Books, 1996. 6 - ROSATO, Y. B. Biodegradao do petrleo In: MELO, I. S.; AZEVEDO, J. L. (Org.) Microbiologia ambiental. Jaguarina:EMBRAPA, 1997. Cap.14, p.307-334.