Gentica Bsica

Prof. Dr. Geison S Izdio

Diversidade da estrutura
(4 nucleotdeos em qualquer ordem)

Deve permitir uma replicao fiel

Deve ser capaz de mudar em raras

ocasies

A sequncia de nucleotdeos deve

ser usada para produzir protenas

Ciclo celular

Fases:
(mdia para um ciclo de 24 horas)

G1: 12 horas
S: 7 a 8 horas (replicao do DNA)
G2: 3 a 4 horas (crescimento celular)
M: 1 a 2 horas (mitose)
Total: 24 horas

Deve permitir uma replicao fiel

DNA molde
A estrutura do DNA carrega a informao necessria para perpetuar sua sequncia.

FIEL e PRECISA para garantir ESTABILIDADE

ULTRA RPIDA

REPLICAO

Processo requer a separao das fitas e a incorporao coordenada

de novos nucleotdeos.

No momento da replicao uma grande maquinaria celular requerida.

Como o modelo de replicao? (Conservativo, semi ou dispersivo)

Em 1958, dois jovens cientistas chamados Meselson e Stahl realizaram um

experimento para elucidar este ponto.

N15

N14

N14

Meselson e Stahl (1958)

E.coli cultivada em meio contento N15 ou N14

Como as bases so trazidas para a dupla hlice?

Arthur Kornberg (1959) isolou a DNA polimerase de E. Coli

A sntese da nova fita sempre se d no sentido 5-3

Estrutura molecular das polimerases

Lewin, Genes IX, Cap 18

movimento bloqueado c/ pareamento incorreto

O pareamento com nucleotdeos corretos o mais favorvel energeticamente.

Polimerase necessita de uma extremidade iniciadora perfeitamente pareada para continuar
alongando a cadeia.
Alberts et al, Cap 5

Stio cataltico de polimerizao e edio esto indicados. No modo edio a polimerase muda a
conformao, o DNA libera-se do molde e o nucleotdeo retirado (exonuclease 3-5)

Alberts et al, Cap 5

DNA polimerase: enzima capaz de sintetizar 1 nova fita de DNA a partir de 1 fita molde
Somente algumas delas participam da replicao: s vezes chamadas de DNA replicases
Algumas so enzimas independentes e outras so partes de grandes complexos
Em bactrias, todas possuem atividade de exonuclease 3-5 que remove bases erradas

1 identificada. Isolada por Kornberg em 1959. Apenas um polipeptdeo. Atividade

enzimtica predominante. Sintetiza a partir de uma clivagem.

Vrias subunidades codificadas por vrios genes. nica replicase (Cairns e DeLucia, 69)

Lewin, Genes IX, Cap 18, pg. 431

Eucariotos

Responsvel pela iniciao

Responsveis pela replicao nuclear

Eucariotos contm muito

mais polimerases

Replicases so
heterotetrmeros

Reparadoras so mais
simples

Lewin, Genes IX, Cap 18, pg. 447

Timina marcada com H3

Vrios tempos/ciclos
Lise para auto radiografia

1963 John Cairns The bacterial

chromosome and its manner of
replication as seen by
autoradiography
encontra a forquilha de
replicao no DNA (previso
de Watson e Crick)

Dupla hlice bastante estvel na temperatura ambiente

DNA-helicase
at 1000 pb/s

DNA-helicase + SSB + primase

Lewin, Genes IX, Cap 18

Alberts et al, Cap 5

As DNA-polimerases no conseguem iniciar cadeias de novo

RNAse H
+
DNA-pol.
+
DNA-ligase

Eucariotos: primers de ~10 bases a intervalos de 100-200 bases na fita descontnua

DNA ligase
Liga a extremidade 3 com a 5 de fragmentos vizinhos

A reao energeticamente desfavorvel promovida pela hidrlise do ATP em duas etapas

Alberts et al, Cap 5

Alberts et al, Cap 5

Para que a DNA-polimerase possa terminar um fragmento de Okasaki e em seguida iniciar outro, ela se dissocia
rapidamente do molde, o que dificultaria a sntese de longas fitas.
A cinta deslizante mantm a polimerase firmemente associada e permite o seu rpido deslocamento.

Alberts et al, Cap 5

(ver animao em http://bcs.whfreeman.com/iga8e/default.asp?s=&n=&i=&v=&o=&ns=0&uid=0&rau=0

http://www.youtube.com/watch?v=OnuspQG0Jd0