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Ministrio da Sade
Secretaria de Vigilncia em Sade
Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais
MINISTRIO DA SADE
MINISTRO DE ESTADO DA SADE
Jos Gomes Temporo
SECRETARIA DE VIGILNCIA EM SADE
Gerson Oliveira Penna
DEPARTAMENTO DE DST, Aids e Hepatites Virais
Dirceu Bartolomeu Greco
UNIDADE DE LABORATRIO ULAB
Lilian Amaral Inocncio
COORDENAO DO TELELAB ULAB
Nvea Orm de Oliveira Guedes
Nbia Gonalves Dias
COORDENAO De produo do PROJETO TELELAB 2009/2010
Maria Luiza Bazzo UFSC
AUTORES:
Elaine Sanae Sumikawa
Leonardo Rapone da Motta
Lilian Amaral Inocncio
Luiz Alberto Peregrino Ferreira
Maria Luiza Bazzo
Miriam Franchini
Mirthes Ueda
REVISO TCNICA
Neiva Sellan Lopes Gonales
Projeto Grfico, edio e diagramao
Virtual Publicidade Ltda.
Design Instrucional
Luciane Sato
Ilustraes E FOTOS INDITAS
Maurcio Muniz
fotos dos vdeos
Projeto Telelab 2009/2010
TIRAGEM: 1 edio 2010 6000 exemplares
permitida a reproduo parcial ou total desde que citada a fonte.
Produo, distribuio e informaes:
Ministrio da Sade
Secretaria de Vigilncia em Sade
Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais
0800 61 24 36
www.aids.gov.br/telelab
telelab@aids.gov.br ou telelab.sangue@aids.gov.br
Sfilis: Estratgias para Diagnstico no Brasil. Braslia: Ministrio da Sade, Coordenao de Doenas Sexualmente Transmissveis e Aids. 2010. 100 p.
(Srie TELELAB)
Apresentao
Seja bem-vindo (a) ao Sistema de Educao a Distncia TELELAB.
Os cursos foram elaborados dentro de uma abordagem que favorece a
aquisio de conhecimentos e o repensar da prtica profissional.
Para o sucesso da aprendizagem e a garantia de um excelente
aproveitamento, alm de assistir ao vdeo, leia este manual e releia as
informaes sempre que tiver dvidas em sua prtica diria.
Neste manual Sfilis Estratgias para Diagnstico no Brasil so
apresentados aspectos histricos da sfilis e do seu diagnstico laboratorial,
a histria natural, seu agente etiolgico e os testes utilizados para o
diagnstico laboratorial. So descritos, ainda, os procedimentos e cuidados
para os testes mais comumente utilizados no Brasil e a interpretao de
seus resultados.
Desejamos que este curso seja um incentivo para repensar e
aperfeioar a sua prtica. Releia os contedos deste manual e assista ao
vdeo sempre que precisar.
Bons estudos!
TELELAB | Sfilis 3
4 TELELAB | Sfilis
Consideraes gerais
Agora voc faz parte do Sistema de Educao a Distncia TELELAB
para profissionais da sade envolvidos no diagnstico laboratorial das doenas
sexualmente transmissveis, da infeco pelo HIV/Aids e das hepatites virais.
O projeto TELELAB foi criado para levar at voc informaes
indispensveis para que o seu trabalho seja realizado nos padres de
qualidade estabelecidos pelo Ministrio da Sade.
Guarde este Manual para consultar sempre que necessrio.
Ele seu, use-o!
Vdeo e manual:
Certificado:
6 TELELAB | Sfilis
Sumrio
Introduo..................................................................................................................................... 9
Captulo 1: Histria da sfilis e dos testes para o diagnstico
laboratorial................................................................................................................................. 11
Primeiros escritos sobre a sfilis.................................................................................13
Quando surgiram os testes laboratoriais da sfilis.........................................14
Captulo 2: A histria natural da sfilis: fases evolutivas e o
surgimento de anticorpos............................................................................................... 17
Descoberta do agente etiolgico da sfilis........................................................19
Treponema pallidum.........................................................................................................19
A histria natural da doena......................................................................................20
O diagnstico laboratorial da sfilis........................................................................24
Captulo 3: Testes para o diagnstico laboratorial da sfilis..................25
Testes treponmicos.......................................................................................................27
Testes no treponmicos.............................................................................................27
O fenmeno de prozona..............................................................................................28
Diferenas entre os testes no treponmicos e os treponmicos.....28
Tcnicas utlizadas nos testes para o diagnstico da sfilis.......................29
Os exames laboratoriais para o diagnstico da sfilis primria.............30
Captulo 4: Teste no treponmico de floculao e seus procedimentos...31
Os testes de floculao..................................................................................................33
Testes de floculao e sua composio antignica.....................................35
Principais caractersticas dos testes de floculao.......................................35
Escolha do teste de floculao para diagnstico da sfilis.......................36
Captulo 5: A reao de VDRL com amostra de soro..................................... 37
Ao 1 Organizao dos materiais necessrios para o teste de VDRL......40
Ao 2 Preparar os protocolos de trabalho..................................................41
Ao 3 Preparar a suspenso antignica de VDRL...................................42
Ao 4 Calibrar a agulha...........................................................................................43
Ao 5 Utilizar soros controle................................................................................45
TELELAB | Sfilis 7
Introduo
A sfilis uma enfermidade sistmica, exclusiva do ser humano,
conhecida desde o sculo XV, e seu estudo ocupa todas as especialidades
mdicas.
Tem como principal via de transmisso o contato sexual, seguido
pela transmisso vertical para o feto durante o perodo de gestao de uma
me com sfilis no tratada ou tratada inadequadamente. Tambm pode
ser transmitida por transfuso sangunea.
A apresentao dos sinais e sintomas da doena muito varivel e
complexa. Quando no tratada, evolui para formas mais graves, podendo
comprometer o sistema nervoso, o aparelho cardiovascular, o aparelho
respiratrio e o aparelho gastrointestinal.
Embora o tratamento com penicilina seja muito eficaz nas fases
iniciais da doena, mtodos de preveno devem ser implementados, pois
adquirir sfilis expe as pessoas a um risco aumentado para outras DST,
inclusive a Aids.
O nmero de casos de sfilis vem aumentando no Brasil e, por
isso, todos os profissionais da rea da sade devem estar atentos s suas
manifestaes.
Nesse contexto, o diagnstico laboratorial desempenha papel
fundamental no combate sfilis, por permitir a confirmao do diagnstico
e o monitoramento da resposta ao tratamento.
Finalmente, lembre-se que o resultado de todo exame laboratorial
deve ter qualidade e que isso s ser possvel se houver padronizao
dos processos, controle da qualidade, desde a aquisio dos insumos e
reagentes at a emisso do resultado, treinamento e comprometimento
dos profissionais envolvidos.
TELELAB | Sfilis 9
Captulo 1
12 TELELAB | Sfilis
TELELAB | Sfilis 13
3. Lange
descobriu a
reao do ouro
coloidal para o
diagnstico da
neurossfilis.
5. Obtidos os
preparados
de antgenos
cardiolipinalecitinacolesterol
quimicamente
purificados.
1907
1912
1941
2. Michaells
descreveu uma
nova reao
baseada no
fenmeno da
floculao.
4. Pangborn
isolou o
componente
ativo de
natureza
fosfolipdica
(cardiolipina)
de extrato de
corao bovino.
7. Deacon
descreveu a
reao FTA
(Anticorpo
Treponmico
Fluorescente).
1946
6. Tcnica de
diagnstico
VDRL.
1957
9A. Teste
imunoenzimtico
ELISA.
1965
8. Rathiev
desenvolve
a tcnica de
hemaglutinao
inidireta ou
passiva.
1970
10. Testes de
quimioluminescncia.
1990
2000
14 TELELAB | Sfilis
TELELAB | Sfilis 15
16 TELELAB | Sfilis
Captulo 2
18 TELELAB | Sfilis
Nesse captulo voc conhecer o agente etiolgico da sfilis Treponema pallidum a histria
natural da doena com suas diferentes fases evolutivas e o aparecimento dos anticorpos em cada
uma delas.
Treponema Pallidum
Sfilis primria
Descrio:
Aps a infeco, ocorre um perodo de incubao entre 10 e 90 dias. O
primeiro sintoma o aparecimento de uma leso nica no local de entrada da
bactria. A leso denominada cancro duro ou protossifiloma indolor, tem a
base endurecida, contm secreo serosa e muitos treponemas. A leso primria
se cura espontaneamente, num perodo aproximado de duas semanas.
As leses sifilticas facilitam a entrada do vrus da imunodeficincia
humana HIV. As anlises de pacientes com infeco simultnea por
HIV e T. pallidum indicam alteraes tanto na resposta imune humoral G
20 TELELAB | Sfilis
Diagnstico laboratorial:
Na sfilis primria, o diagnstico laboratorial pode ser feito pela
pesquisa direta do Treponema pallidum por microscopia de campo escuro,
pela colorao de Fontana-Tribondeau, que utiliza sais de prata, e pela
imunofluorescncia direta. Os anticorpos comeam a surgir na corrente
sangunea cerca de 7 a 10 dias aps o surgimento do cancro duro, por isso
nessa fase os testes sorolgicos so no-reagentes.
O primeiro teste a se tornar reagente em torno de 10 dias da evoluo
do cancro duro o FTA-abs, seguido dos outros testes treponmicos e no
treponmicos.
Quanto mais precocemente a sfilis primria for tratada maior ser
a possibilidade dos exames sorolgicos tornarem no-reagentes. Porm,
mesmo aps a cura, os testes treponmicos podem permanecer reagentes
por toda a vida.
Sfilis secundria
Descrio:
Quando a sfilis no tratada na fase primria, evolui para sfilis
secundria, perodo em que o treponema j invadiu todos os rgos
e lquidos do corpo. Nesta fase, aparece como manifestao clnica o
exantema (erupo) cutneo, rico em treponemas e se apresenta na forma
de mculas, ppulas ou de grandes placas eritematosas branco-acinzentadas
denominadas condiloma lata, que podem aparecer em regies midas do
corpo.
Diagnstico laboratorial:
Na sfilis secundria, todos os testes sorolgicos so reagentes e os
testes quantitativos tendem a apresentar ttulos altos. Aps o tratamento
nessa fase, os testes treponmicos permanecem reagentes por toda
TELELAB | Sfilis 21
Sfilis latente
Descrio:
Se no houver tratamento, aps o desaparecimento dos sinais
e sintomas da sfilis secundria, a infeco entra no perodo latente,
considerado recente no primeiro ano e tardio aps esse perodo. A sfilis
latente no apresenta qualquer manifestao clnica.
Diagnstico Laboratorial:
Nessa fase todos os testes sorolgicos permanecem reagentes e
observa-se uma diminuio dos ttulos nos testes quantitativos.
Para diferenciar esta fase da infeco primria deve-se pesquisar no
lquor a presena de anticorpos, utilizando-se o VDRL. Evidencia-se sfilis
latente quando o VDRL reagente no lquor, acompanhado de baixos
ttulos no soro.
Sfilis terciria
Descrio:
A sfilis terciria pode levar dez, vinte ou mais anos para se manifestar.
A sfilis terciria se manifesta na forma de inflamao e destruio de
tecidos e ossos. caracterizada por formao de gomas sifilticas, tumoraes
amolecidas vistas na pele e nas membranas mucosas, que tambm podem
acometer qualquer parte do corpo, inclusive no esqueleto sseo. As
manifestaes mais graves incluem a sfilis cardiovascular e a neurossfilis.
Diagnstico Laboratorial:
Nesta fase os testes sorolgicos habitualmente so reagentes e os
ttulos dos testes no treponmicos tendem a ser baixos, porm podem
22 TELELAB | Sfilis
TELELAB | Sfilis 23
Ateno
Sempre que suspeitar de sfilis congnita deve-se fazer VDRL no
lquor da criana.
Ateno
Quando no se pode estabelecer clinicamente a fase da sfilis
deve-se fazer um teste treponmico e um no treponmico.
Note ainda que o diagnstico laboratorial da sfilis por meio de
exames sorolgicos sempre realizado em duas etapas:
triagem e;
confirmatria.
Neste manual voc conhecer os procedimentos indicados para a
combinao dos testes das duas etapas.
24 TELELAB | Sfilis
Captulo 3
26 TELELAB | Sfilis
Testes treponmicos
So testes que empregam como antgeno Treponema pallidum, e
detectam anticorpos antitreponmicos. Esses testes so feitos apenas
qualitativamente.
Testes no treponmicos
So testes que detectam anticorpos no treponmicos, anteriormente chamados de anticardiolipnicos, reagincos ou lipodicos G .
Esses anticorpos no so especficos para Treponema pallidum, porm
esto presentes na sfilis.
Os testes no treponmicos podem ser:
Qualitativos: rotineiramente so utilizados como testes de triagem
para determinar se uma amostra reagente ou no.
Quantitativos: so utilizados para determinar o ttulo dos anticorpos
presentes nas amostras que tiveram resultado reagente no teste
qualitativo e tambm para o monitoramento da resposta ao
tratamento.
O fenmeno de prozona
a ausncia de reatividade em uma amostra que, embora contenha
anticorpos no treponmicos, quando testada sem diluir, ou mesmo em
baixas diluies, apresenta resultado no reagente.
Esse fenmeno decorre da relao desproporcional entre quantidade
dos antgenos e dos anticorpos presentes na reao no treponmica,
gerando resultados falso-negativos.
Ocorre nas amostras de doentes com sfilis, em virtude da elevada
quantidade de anticorpos presentes. Esse fenmeno no observado nos
testes treponmicos.
observado principalmente na sfilis secundria, fase em que h
produo de grande quantidade de anticorpos.
28 TELELAB | Sfilis
Testes
Floculao
Aglutinao
Testes Rpidos TR
Imunoenzimticos (ELISA)
Imunocromatogrficos
Testes Rpidos TR
TELELAB | Sfilis 29
Testes
Imunofluorescncia indireta
Hemaglutinao
Aglutinao de partculas
Imunoenzimticos e suas
variaes
Imunocromatografia e fluxo
lateral
Testes rpidos
Testes moleculares
PCR
30 TELELAB | Sfilis
Captulo 4
Teste no treponmico de
floculao e seus procedimentos
32 TELELAB | Sfilis
Teste no treponmico de
floculao e seus procedimentos
Neste captulo voc vai conhecer detalhes das metodologias dos testes no treponmicos
disponveis no pas, seu funcionamento, suas indicaes de uso e os cuidados que se deve ter
para obter resultados precisos e confiveis.
Os testes de floculao
Princpio metodolgico dos testes de floculao
Os testes de floculao baseiam-se em uma suspenso antignica que
contm cardiolipina, colesterol e lecitina. No preparo da suspenso antignica,
a ligao desses componentes ocorre ao acaso e resulta na formao de
estruturas arredondadas denominadas de micelas. Veja na figura abaixo.
Cardiolipina
Lecitina
Colesterol
Anticorpos no treponmicos
Cardiolipina
Lecitina
Colesterol
Observao da floculao
Essa ligao vista na forma de flocos ou grumos, grandes ou pequenos,
que podem ser visualizados a olho nu em alguns testes e em outros com
auxlio de microscpio. Veja na Figura 4 algumas fotos da reao de VDRL
feitas em microscpio ptico comum em aumento de 100 vezes.
Presena de floculao
Ausncia de floculao
RPR
(Rapid Plasma Reagin)
USR
(Unheated Serum Reagin)
TRUST
(Toluidine Red Unheated Serum Test)
Composio antignica
cardiolipina (0,03%);
colesterol (0,9%); e
lecitina (0,21+/-0,1%).
cardiolipina;
colesterol;
lecitina;
cloreto de colina para eliminar a necessidade de
inativao da amostra;
EDTA para aumentar a estabilidade da suspenso
antignica; e
carvo para permitir a leitura da reao a olho nu.
cardiolipina;
colesterol;
lecitina;
cloreto de colina; e
EDTA.
cardiolipina;
colesterol;
lecitina;
cloreto de colina;
EDTA;
corante vermelho de toluidina para permitir a
leitura da reao a olho nu.
TELELAB | Sfilis 35
Testes
VDRL
RPR
USR
TRUST
Lquor
Sim
No
No
No
Plasma
No
Sim
No
Sim
Soro
Sim
Sim
Sim
Sim
Sim
No
No
No
No
Sim
Sim
Sim
Leitura em microscpio
Sim
No
Sim
No
Leitura a olho nu
No
Sim
No
Sim
Sim
Sim
Sim
Sim
8 horas
Meses
Meses
Meses
Estabilidade da suspenso
Ateno
O VDRL o nico teste de floculao que pode ser utilizado para
pesquisa de anticorpos no treponmicos no lquor.
36 TELELAB | Sfilis
Captulo 5
A reao de VDRL
com amostra de soro
38 TELELAB | Sfilis
A reao de VDRL
com amostra de soro
O VDRL um dos testes no treponmicos muito utilizado no Brasil. Neste captulo voc conhecer
em detalhes a reao do VDRL feita com a suspenso antignica preparada a partir do antgeno
concentrado para o teste em amostras de soro.
Ateno
Antes de iniciar seu trabalho voc deve consultar os protocolos
de Procedimentos Operacionais Padro POP. Eles descrevem
detalhadamente:
os procedimentos que devem ser realizados para cada conjunto
diagnstico;
as instrues de uso e os cuidados a serem adotados em cada
equipamento que ser utilizado;
O passo a passo de aes para cada atividade.
Veja a seguir a sequncia de aes recomendadas para voc fazer um
teste VDRL.
AO 1 Organizar os
materiais necessrios
AO 2 Preparar os
protocolos de trabalho
AO 3 Preparar a
suspenso antignica
AO 6 Validar a
suspenso antignica
AO 5 Utilizar soros
controle
AO 4 Calibrar a agulha
AO 7 Realizar reao de
VDRL qualitativa
AO 8 Realizar reao de
VDRL quantitativa
AO 9 Anotar os resultados
e liberar os resultados
40 TELELAB | Sfilis
Ateno
Verifique sempre o nvel de gua do banho-maria e se a
temperatura est em 56C.
10
11
12
10
11
12
Dicas importantes:
Mantenha os POP atualizados, fazendo as alteraes sempre que
o fabricante fizer modificaes na bula.
Observe se houve alterao dos procedimentos recomendados
pelo fabricante para testes de diferentes lotes.
Observe se os procedimentos variam quando o conjunto diagnstico
utilizado com amostras diferentes como, por exemplo, VDRL no
soro ou no lquor.
TELELAB | Sfilis 41
Ateno
O antgeno concentrado est dissolvido em lcool. Se o frasco ficar
aberto vai ocorrer sua evaporao e mudana na concentrao
do antgeno.
Dicas importantes:
Prepare sempre o volume de 5,0ml de suspenso antignica,
seguindo o procedimento descrito no quadro INSTRUES
PARA PREPARO DA SUSPENSO ANTIGNICA, mesmo que a
quantidade de amostras a ser analisada seja pequena.
Se houver um grande nmero de amostras na sua rotina laboratorial,
prepare duas, trs ou mais suspenses antignicas com o volume
total de 5ml cada.
No prepare volumes superiores a 5 ml em um mesmo Erlenmeyer.
Nunca altere os volumes da salina tamponada e do antgeno
recomendados pelo fabricante;
Jamais utilize tampas de borracha no Erlenmeyer porque ocorre a
desestabilizao das micelas;
Evite pipetas de plstico para a preparao da suspenso antignica
porque o antgeno pode se aderir ao plstico;
A qualidade da reao de VDRL depende do preparo da suspenso
antignica.
Ao 4 Calibrar a agulha
Veja, a seguir, como calibrar a agulha que ser usada na seringa para
adicionar a suspenso antignica na reao de VDRL:
1. Corte o bisel de uma agulha de calibre 18G (gauge), de tal
maneira que a estrutura metlica da agulha no fique amassada
ou inadequada para uso;
2. Faa a calibrao da agulha executando os passos descritos a
seguir:
a) Coloque a agulha em uma seringa de vidro de 1ml ou 2ml;
TELELAB | Sfilis 43
Ateno
Mantenha os soros controles congelados a -20C.
Ateno
Jamais teste as amostras dos usurios sem ter validado a
suspenso antignica.
Veja a seguir o passo a passo dessa tarefa, utilizando soros controle
positivo com ttulo 16 ou diluio 1/16 com a execuo das diluies
diretamente na lmina de VDRL:
1. Faa seu protocolo de trabalho marcando a posio do controle
negativo e das diluies do controle positivo;
TELELAB | Sfilis 45
Validao da suspenso
antignica
1 Neg
2 Pos puro
3 Pos 1/2
4 Pos 1/4
5 Pos 1/8
6 Pos 1/16
7 Pos 1/32
10
11
12
10
11
12
Legenda:
Neg = controle negativo; Pos puro = controle positivo puro
Negativo
Positivo puro
Despreze
50 l
Ateno
Caso a suspenso antignica no tenha produzido o resultado
esperado ela no ser validada. Nesse caso, prepare outra
suspenso antignica e repita o procedimento de validao com
os controles positivo e negativo. No utilize suspenses que
no passaram no teste de validao.
Dicas importantes:
No misture a suspenso antignica fazendo-a passar pela
seringa e agulha, pois pode haver quebra das micelas e perda da
reatividade;
TELELAB | Sfilis 47
VDRL qualitativo
1
10
11
12
1 Neg
3 Amostra
usurio 1
pura
4 Amostra
usurio 1
1/8
5 Amostra
6 Amostra 7 Amostra
usurio 2
usurio 3
usurio 2
pura
pura
1/8
9
11
10
8 Amostra
usurio 3
1/8
12
2 Pos puro
Legenda:
Neg = controle negativo; Pos puro = controle positivo puro.
Usurios 1, 2 e 3 = identificao da amostra de cada usurio.
48 TELELAB | Sfilis
50l soro
350l soluo salina
Ateno
Se a amostra de soro puro no apresentar reatividade, mas a
amostra diluda a 1/8 apresentar, ter ocorrido o fenmeno de
prozona.
VDRL qualitativo
4 Amostra
usurio 1
1/2
6 Amostra 7 Amostra
5 Amostra
usurio 1
usurio 1
usurio 1
1/8
1/4
1/16
10
9
11
8 Amostra
usurio 1
1/32
12
1 Neg
1
10
11
12
2 Pos puro
Legenda:
Neg = controle negativo; Pos puro = controle positivo puro.
Usurios 1, 2 e 3 = identificao da amostra de cada usurio.
Amostra do paciente
Negativo
Positivo puro
Soro 1/2
Despreze
50 l
1/4
1/8
1/16 1/32
Ateno
O laudo dever estar de acordo com o disposto na Resoluo
RDC n 302/ANVISA, de 13 de outubro de 2005, suas alteraes,
ou outro instrumento legal que venha a substitu-la.
52 TELELAB | Sfilis
Captulo 6
A reao de VDRL
em amostras de lquor
54 TELELAB | Sfilis
A reao de VDRL
em amostras de lquor
A realizao do VDRL em amostras de lquor uma ferramenta fundamental para o diagnstico
da sfilis congnita ou da neurossfilis.
Para analisar amostras de lquor o preparo do antgeno sofre algumas modificaes, conforme
voc ver a seguir.
Ateno
Somente o VDRL pode ser utilizado para testar amostras de
lquor.
No teste amostras de lquor com conjuntos diagnsticos que
no tenham sido padronizados para utilizao nesse tipo de
amostra.
Antes de realizar o teste, certifique-se de que o kit que voc
dispe permite testar amostras de lquor.
Leia as instrues do fabricante do produto antes de iniciar o
teste.
TELELAB | Sfilis 55
Como fazer
Execute os seguintes passos:
56 TELELAB | Sfilis
TELELAB | Sfilis 57
Ateno
Para calibrar a agulha utilizada para pipetar a suspenso
antignica do VDRL no lquor voc deve seguir os mesmos
procedimentos detalhados anteriormente na ao 4 para o VDRL,
no captulo 5. Observe ainda que:
O calibre da agulha de 22G.
A agulha estar calibrada se voc contar 50 gotas (1) para cada
0,5ml de suspenso antignica modificada, correspondente a
10l por gota.
Como fazer
1. Organize seu protocolo de trabalho;
2. Pipete 50l do lquor em uma demarcao da lmina escavada
de Kline;
3. Homogeneze cuidadosamente a suspenso antignica
modificada;
4. Pipete 10l da suspenso antignica modificada na demarcao
da lmina que contm o lquor;
5. Coloque a lmina no agitador orbital durante 8 minutos, com
agitao de 180 rpm;
6. Faa a leitura da reao em microscpio ptico com objetiva de 10X
e ocular de 10X, imediatamente aps o trmino da agitao:
58 TELELAB | Sfilis
Ateno
Utilize 10l de suspenso antignica modificada;
A reao dever ser agitada a 180rpm por 8 minutos.
VDRL no lquor
No
Sim
8 horas
2 horas
17l
10l
4 minutos
8 minutos
Plana
Escavada
TELELAB | Sfilis 59
Ateno
Os testes de floculao s devem ser realizados em ambientes
com temperatura ambiente entre 23C e 29C. Temperaturas fora
dessa faixa desestabilizam a reao, o que pode gerar resultados
falso-positivos ou falso-negativos.
60 TELELAB | Sfilis
Captulo 7
Controle de qualidade
dos testes de floculao
62 TELELAB | Sfilis
Controle de qualidade
dos testes de floculao
Como bom profissional, voc sabe que a qualidade dos resultados fundamental na prtica
laboratorial. Para ter a garantia de que o seu trabalho foi executado corretamente, importante
adotar medidas de controle de qualidade que permitam avaliar a execuo de cada etapa do
trabalho realizado.
Neste captulo voc ver procedimentos que devem ser adotados para que os resultados
produzidos sejam confiveis e possam ser reproduzidos.
Soros controle
Soros controle utilizados
Voc dever utilizar soros controle produzidos no seu laboratrio ou
adquiridos de fonte idnea, e no somente os soros controle dos conjuntos
diagnsticos (kit), pois:
Nem todos os conjuntos diagnsticos vm com controles positivos
e negativos.
Os controles que acompanham os kits nem sempre tm volume
suficiente para voc realizar o teste quantitativo todas as vezes em
que prepara a suspenso antignica e testa suas amostras.
Um laboratrio dedicado s Boas Prticas sempre inclui soros controle
produzidos no prprio estabelecimento. importante que voc
registre, diariamente, os resultados obtidos com os seus controles.
Desse modo, poder observar qualquer alterao na qualidade do
reagente que est utilizando ou problemas que ocorram na reao,
tendo, assim, a possibilidade de tomar as providncias cabveis
para corrigir o erro.
TELELAB | Sfilis 63
64 TELELAB | Sfilis
Ateno
O procedimento de congelar e descongelar vrias vezes um soro
faz com que o ttulo diminua.
TELELAB | Sfilis 65
66 TELELAB | Sfilis
Ateno
As recomendaes acima valem tambm para o teste TRUST.
TELELAB | Sfilis 67
68 TELELAB | Sfilis
Captulo 8
Testes treponmicos
70 TELELAB | Sfilis
Testes treponmicos
Neste capitulo voc conhecer os testes treponmicos mais utilizados, suas indicaes de uso e as
limitaes dessas metodologias. Os testes treponmicos FTA-abs, MHA-TP/TPHA/TPPA e ELISA
foram desenvolvidos inicialmente para confirmar resultados positivos obtidos previamente
com testes no treponmicos.
Atualmente, os ELISA e suas variaes, por permitirem automao, tambm so utilizados como
testes de triagem em laboratrios ou em hemocentros que possuem grande rotina.
TELELAB | Sfilis 71
Porque utilizado
considerado o teste de referncia ou padro ouro dentre
os testes treponmicos.
Pode ser feito com amostras de soro ou plasma.
FTA-abs (Fluorescent
treponemal antibody
absorption)
Testes de hemaglutinao
ou aglutinao indireta ou
passiva
Imunoenzimticos
ELISA, incluindo os
quimioluminescentes
Testes Rpidos TR
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Anticorpo
treponmico da
amostra
Conjugado Fluorescente
A reao de FTA-abs
1. No FTA-abs, o antgeno utilizado Treponema pallidum subsp
pallidum (cepa Nichols), que fixado nas demarcaes de uma
lmina de vidro.
2. A amostra de soro utilizada deve ser inativada a 56C por 30
minutos.
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Ateno
Utilize sempre um controle positivo e um controle negativo em
toda a lmina de FTA-abs.
Ateno
Se houver constatao de que h problemas com o antgeno de
T. pallidum ou com o conjugado fluorescente:
Primeiro, descarte os problemas de m conservao e de prazo
de validade vencido dos reagentes.
Caso tudo esteja correto, entre em contato com o fornecedor
e solicite a troca do reagente problema.
Se aps a adoo dessas medidas o resultado permanecer inconclusivo,
sugere-se o uso de outra metodologia e, se possvel, a coleta de uma nova
amostra.
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Ateno
Utilize ponteiras estreis na preparao do conjugado para evitar
sua contaminao.
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Dicas:
Antes de iniciar a reao, leia atentamente as recomendaes do
fabricante do kit quanto necessidade de:
inativar o soro;
diluir a amostra com soluo adsorvente ou sorbent;
utilizar 2 mercaptoetanol para adsorver fator reumatide ou
outros interferentes da reao;
utilizar controles com hemcias ou partculas de gelatina sem
antgenos na sua superfcie.
Alm disso:
retire a eletricidade esttica da placa de reao, passando uma
gaze mida embaixo desta antes de iniciar a incubao, para
evitar resultados falso-positivos;
incube a reao em local onde no haja vibrao, para evitar
que ligao dos anticorpos s hemcias ou s partculas
de gelatina seja desfeita, o que causa resultados falsonegativos.
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Ateno
Lembre-se que voc no pode reutilizar as placas de
microtitulao para fazer esta reao. Placas usadas devem ser
descartadas.
Rea
gen
te
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No
reag
ente
nclu
s
ivo
Inco
TELELAB | Sfilis 79
Saiba mais
Para conhecer o princpio metodolgico dos testes ELISA e de
Quimioluminescncia faa o curso da Srie TELELAB HIV
Estratgias para diagnstico no Brasil.
80 TELELAB | Sfilis
Captulo 9
82 TELELAB | Sfilis
TELELAB | Sfilis 83
Saiba mais
Acompanhe no site do Departamento de DST, Aids e Hepatites
virais www.aids.gov.br a legislao vigente para a utilizao
dos testes rpidos.
Teste rea T
Amostra rea A
TELELAB | Sfilis 85
Ateno
Se no houver formao de linha colorida na rea C o teste
INVLIDO, independentemente do resultado obtido na rea T.
Nesse caso o teste deve ser repetido.
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Ateno
No utilize kits com prazo de validade vencido.
Lembre-se que os componentes do kit podem ter prazos de
validade diferentes. Todos os itens devem ser verificados antes
de sua utilizao.
No misture componentes provenientes de kits ou caixas de
lotes diferentes.
Utilize os volumes corretos da amostra e dos outros
reagentes.
Saiba mais
Para saber quais kits esto registrados:
acesse o site www.anvisa.gov.br.
Clique em PRODUTOS PARA SADE.
Alm disso, para a escolha considere tambm:
Qual amostra pode ser utilizada no teste e se a sua estrutura de
coleta adequada;
A quantidade diria de testes que voc ir realizar;
Condies para estocar as amostras coletadas por puno venosa,
caso voc pretenda utilizar este tipo de amostra;
TELELAB | Sfilis 87
Ateno
As amostras obtidas por puno digital podem ser colhidas
em qualquer local, desde que respeitadas as normas de
biossegurana: uso de EPI, antissepsia das mos e do local da
puno, entre outros.
88 TELELAB | Sfilis
Captulo 10
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Ateno
Ttulos baixos tambm so encontrados:
na sfilis primria, quando os anticorpos esto circulando em
baixas concentraes.
na sfilis latente no tratada.
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6 meses
12 meses
30 meses
16,5%
11,4%
6,6%
27,6%
17,0%
8,4%
Ateno
A infeco pelo Treponema pallidum no confere imunidade,
por isso um indivduo pode contrair sfilis tantas vezes quantas
for exposto ao agente etiolgico.
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Ateno
No descuide de sua prpria segurana. Lembre-se que voc
vai lidar com material potencialmente infectante.
Glossrio
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Referncias
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