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* bolsista CAPES
So Carlos - SP
2012
Ficha catalogrfica elaborada pelo DePT da
Biblioteca Comunitria da UFSCar
Nicomedes e Maria
momentos importantes da
minha vida.
EPGRAFE
mritos.
Albert Einstein
AGRADECIMENTOS
LISTA DE ABREVIATURAS
Deslocamento qumico
C1 Suco comercial 01
C2 Suco comercial 02
C3 Suco comercial 03
d8 Tempo de mistura
DMP Dimetilprolina
EM Espectrometria de massas
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vii
Lista de Abreviaturas
ns Nmero de promediaes
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viii
Lista de Tabelas
LISTA DE TABELAS
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ix
Lista de Figuras
LISTA DE FIGURAS
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x
Lista de Figuras
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xi
Lista de Figuras
Figura 4.2.2.1. Grfico de escores PC1 (79%) versus PC2 (11%) das
amostras de suco de laranja do grupo comercial analisados pelo mtodo 50
A....................................................................................................................
Figura 4.2.2.2. Grfico de pesos das componentes principais um (01) e
dois (02) das amostras de suco de laranja comercial destacando-se as 52
variveis de maior importncia na separao do mtodo A..........................
Figura 4.2.2.3. Grfico de escores PC1 (68%) versus PC2 (10%) das
amostras de suco de laranja do grupo comercial analisados pelo mtodo 53
B....................................................................................................................
Figura 4.2.2.4. Grfico de pesos das componentes principais um (01) e
dois (02) das amostras de suco de laranja comercial destacando-se as 55
variveis de maior importncia na separao do mtodo B..........................
Figura 4.2.2.5. Grficos de quantificao relativa para os cidos: frmico,
succnico, pirvico, actico e ltico para as amostras de suco de laranja 58
comercial........................................................................................................
Figura 4.2.2.6. Grfico de escores PC1 (70%) versus PC2 (22%) das
59
amostras de suco de laranja do grupo natural analisadas pelo mtodo A....
Figura 4.2.2.8. Grfico de escores PC1 (59%) versus PC2 (17%) das
62
amostras de suco de laranja do grupo natural analisadas pelo mtodo B....
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xii
Lista de Figuras
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xiii
Resumo
RESUMO
DQ - UFSCar
Abstract xiv
ABSTRACT
DQ - UFSCar
xv
Sumrio
SUMRIO
LISTA DE ABREVIATURAS......................................................................... vi
LISTA DE TABELAS..................................................................................... viii
LISTA DE FIGURAS..................................................................................... ix
RESUMO ...................................................................................................... xiii
ABSTRACT................................................................................................... xiv
1. INTRODUO...................................................................................... 1
1.1. A laranja.............................................................................................. 1
1.1.1. A histria da laranja............................................................................. 1
1.1.2. Classificao dos citros....................................................................... 2
1.1.3. Tipos de suco de laranja...................................................................... 2
1.1.4. A importncia do suco de laranja na economia brasileira................. 3
1.1.5. Degradao em suco de laranja.......................................................... 5
a) Fatores microbiolgicos............................................................................. 5
b) Fatores enzimticos................................................................................... 7
c) Fatores qumicos....................................................................................... 7
1.2. Ressonncia Magntica Nuclear RMN............................... 8
1.2.1. A RMN em anlise de misturas complexas................................. 9
1.2.2. Anlise de suco de frutas via RMN .................................................... 10
1.2.3. Supresso do sinal da gua................................................................ 12
1.3. Quimiometria aplicada RMN de 1H..................................... 15
1.3.1. Anlise de Componentes Principais (PCA)......................................... 16
1.3.2. Regresso multivariada....................................................................... 17
a) Regresso por Componentes Principais (PCR)........................................ 18
b) Regresso por Mnimos Quadrados Parciais (PLS)............................... 18
2. OBJETIVOS.............................................................................. 20
3. MATERIAIS E MTODOS........................................................ 21
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xvi
Sumrio
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1
Introduo
1. INTRODUO
1.1. A laranja
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2
Introduo
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3
Introduo
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4
Introduo
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5
Introduo
a) Fatores microbiolgicos
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6
Introduo
OH
H
O
HO H
H
Leveduras
HO CH3CH2OH + CO2
OH
OH
H
Glicose Etanol Dixido de
carbono
O
Bactrias
CH3CH2OH + O2 + H2O
H3C OH
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7
Introduo
b) Fatores enzimticos
Pectinesterase
R-COO-CH3 + H2O R-COOH + CH3-OH
c) Fatores qumicos
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8
Introduo
O O
HO O
O O
+ 2H+ + 2
CH 2OH CH 2OH
HO O
HO HO
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9
Introduo
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10
Introduo
cafs42,43, tomates44 e cerveja34 tem sido estudadas pelas tcnicas de RMN aliada a
mtodos quimiomtricos.
Recentemente, as tcnicas hifenadas como a CLAE-RMN
(Cromatografia Lquida de Alta Eficincia acoplada Ressonncia Magntica
Nuclear), CLAE-RMN-EM (Cromatografia Lquida de Alta Eficincia acoplada
Ressonncia Magntica Nuclear e Espectrometria de Massas) e CLAE-EPS-RMN
(Cromatografia Lquida de Alta Eficincia combinado com Extrao por por Fase
Slida acoplada Ressonncia Magntica Nuclear), tm sido utilizadas para
analisar e identificar compostos qumicos individualmente e em misturas
complexas30,45-47.
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11
Introduo
HO
CH3 OH
H3C
+ OH
N O
O
O OH
.HCl
OH
- HO
O
Dimetilprolina Florina
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12
Introduo
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13
Introduo
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14
Introduo
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15
Introduo
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16
Introduo
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17
Introduo
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18
Introduo
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19
Introduo
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20
Objetivos
2. OBJETIVOS
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21
Materiais e Mtodos
3. MATERIAIS E MTODOS
Tabela 3.1. Informaes das amostras comerciais de suco de laranja descritas pelos
fabricantes.
Suco comercial 01
28/02/2011 28/08/2011
(Fabricante 01)
Suco comercial 02
No consta 07/08/2011
(Fabricante 02)
Suco comercial 03
12/04/2011 12/10/2011
(Fabricante 3)
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22
Materiais e Mtodos
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23
Materiais e Mtodos
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24
Materiais e Mtodos
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25
Materiais e Mtodos
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26
Materiais e Mtodos
Hz, em F1 de 4.464 Hz, 20.161 Hz e 36.049 Hz, nmero de promediaes (ns) igual
32, 64 e 90, respectivamente.
Os parmetros a seguir foram os mesmos para as medidas de gCOSY
45, gHSQC, gHMBC: tempos de espera entre cada aquisio de 2 s (d1), com 256
pontos durante a aquisio (td) em F1 e 4.096 pontos durante a aquisio em F2, no
processamento foram utilizados 1.024 pontos (si) em F1 e 4.096 pontos em F2.
3.7. Anlises quimiomtricas
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27
Materiais e Mtodos
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28
Resultados e Discusses
4. RESULTADOS E DISCUSSES
Regio dos Fenlicos Regio dos Acares Regio dos Aminocidos e cidos Orgnicos
(I) (II) (III)
gua
Residual
10.0 9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 ppm
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29
Resultados e Discusses
Sacarose Sacarose
Sacarose +
Frutose
Frutose
Sacarose
c. Ctrico
Sacarose
c. Mlico
Arginina
DMP + GABA
c. Ctrico + c. Qunico
Etanol
c. Mlico
Prolina
Prolina Alanina
gua c. Mlico DMP
Residual + GLX
Valina
Arginina
DMP
?
?
5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
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30
Resultados e Discusses
ppm
1.0
1.5
Prolina
GLX 2.0
Arginina
c. Qunico
c. Ctrico 2.5
DMP
Arginina 3.0
GABA
3.5
DMP Arginina
Sacarose
Etanol
Alanina 4.0
DMP c. Qunico
4.5
c. Mlico
Sacarose 5.5
6.0
6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 ppm
Figura 4.1.3. Viso geral do mapa de correlao 1H-1H (gCOSY 45) de uma
amostra de suco de laranja pra Rio.
ppm
6.8
Tirosina
7.0
7.2
7.4
Fenilalanina
7.6
7.8
ppm
8.0
4
8.2
6
8.4
Arginina 8
8.6
9 8 7 6 5 4 3 ppm
8.6 8.5 8.4 8.3 8.2 8.1 8.0 7.9 7.8 7.7 7.6 7.5 7.4 7.3 7.2 7.1 7.0 6.9 6.8 6.7 ppm
1 1
Figura 4.1.4. Viso expandida do mapa de correlao H- H (gCOSY 45) de uma
amostra de suco de laranja pra Rio.
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31
Resultados e Discusses
Figura 4.1.5. Viso geral do mapa de correlao 1H-13C a uma ligao (gHSQC) da
amostra de suco de laranja comercial 02.
Figura 4.1.6. Viso geral do mapa de correlao 1H-13C a longa distncia ( gHMBC)
da amostra de suco de laranja comercial 02.
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32
Resultados e Discusses
1
H ppm
gHSQC gHMBC
Cdigo Metablitos (multiplicidade, gCOSY 13 13
( C ppm) ( C ppm)
J Hz)
0,98 (d, 7,00) -- 19,7 32,0
1 Valina
1,03 (d, 7,00) -- 20,8 32,0
1,88 1,94
1,60 1,78 (m) 26,9 43,5
3,24 3,28
1,60 1,78
1,88 1,94 (m) -- --
3,78 3,80
6 Arginina
1,60 1,78
3,24 3,28 (m) -- 26,9
7,20 7,25
2,46-2,51
1,93-1,95 (m) 25,3 33,9; 41,7
3,00-3,04
1,93-1,95
cido -aminobutrico 25,3; 41,7;
7 2,46-2,51 (m) 33,9
(GABA) 180,2
3,00-3,04
1,93-1,95
3,00 -3,04 (m) -- --
2,46-2,51
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33
Resultados e Discusses
4,04 4,06
2,32 2,34
2,02 2,05 (m) -- 26,8; 177,0
4,14 4,15
2,02 2,05
10 Prolina 2,32 2,34 (m) -- 26,8
4,14 4,15
2,02 2,05
4,14 4,15 (m) -- --
2,32 2,34
2,46-2,51
3,69-3,72
2,46-2,51
2,27-2,30 (m) -- --
4,06-4,09
2,13- 2,19
Dimetilprolina
11 2,46-2,51 (m) -- --
(DMP)
2,27-2,30
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34
Resultados e Discusses
46,5; 76,8;
2,80 (d, 15,60) 2,94 46,5
176,9; 180,3
16 cido Ctrico
46,5; 76,8;
2,94 (d, 15,60) 2,80 46,5
176,9; 180,3
3,23 (dd, 7,80;
4,63 77,2 78,7; 98,8
10,70)
17 -Glicose
4,63 (d, 7,80) 3,23 98,8 77,2; 78,7
6,15 (m) -- -- --
21 Florina
6,21 (m) -- -- --
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35
Resultados e Discusses
O
O O
OH
HO HO
1H OH
H OH 1H
6,71 ppm O
1
H 2,65 ppm;
8,30 ppm 13C
O 32,2 ppm
1H
O
O
2,21 ppm;
1
H
13C H3C 2,07 ppm;
27,9 ppm OH
13C H3C OH
23,4 ppm
O
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36
Resultados e Discusses
OH 1H
1H 7,41 ppm
6,89 ppm H
H
1H
2,51-2,56 ppm
1H H
7,32 ppm
OH O
1
H OH
H 7,18 ppm H
HO
H2N H2N
H H O HO OH
H 1H
2,11-2,20 ppm
HO O HO O
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37
Resultados e Discusses
1H
3,65 ppm;
1H O
13C
60,5 ppm
H H 1,39 ppm;
13C H
22,5 ppm
H3C
1H H3C OH 13C OH
1,17 ppm; 72,6 ppm
13C
19,8 ppm OH
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38
Resultados e Discusses
13C 1H
180,3 ppm 4,47 ppm;
O OH O OH 13C
O O 70,3 ppm
13C H
13C 177,7 ppm
OH
H1 H'1 176,9 ppm
HO
HO OH
13C OH H
H2 76,8 ppm 1H
H O
H'2
2,76 ppm 1H
2,86 ppm
1H H1,H1 = 2,80 ppm 13C 46,5 ppm
1H H2,H2 = 2,94 ppm 13C 46,5 ppm
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39
Resultados e Discusses
1H
1,03 ppm;
13C
20,8 ppm
CH3 O OH O
13C H
1
32,0 ppm H
1,32 ppm;
H3C OH 13C H C 13C OH
22,3 ppm 3
1H 68,7 ppm
0,98 ppm;
H
NH2 NH2
13C
19,7 ppm
1H
Valina 3,84 ppm O Treonina
13
1H H C
1,48 ppm; H3C 177,7 ppm
13C
13C
OH
18,9 ppm
53,1 ppm
H2N
Alanina
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40
Resultados e Discusses
OH OH
H H
O 1H O
HO H 5,23 ppm; HO H
H 13
HO H
HO H C OH
95,0 ppm 13
13C C
OH H OH H 1H
75,6 ppm H OH 78,7 ppm
1H
1H 4,63 ppm;
3,52-3,55 ppm; 3,23 ppm; 13C
13C 13C 98,8 ppm
74,3 ppm 77,2 ppm
- glicose - glicose
1
OH H
13C H 5,40 ppm;
72,3 ppm 13C 13C
O 95,0 ppm 65,3 ppm
HO H CH2OH CH2OH
HO H H O OH O OH
13
C 13C
13C
H H OH
1
75,4 ppm O OH 106,2 ppm
3,56 ppm; 13C H OH 84,3 ppm H
13C 106,2 ppm
73,9 ppm CH2OH 1H H CH2OH
1H 3,97-4,00 ppm; 13C
4,20 ppm; 13C 13C 65,3 ppm
13
C OH H 64,0 ppm OH H 1H
72,2 ppm
79,4 ppm 1H 13C 4,10 ppm;
4,04 ppm; 77,2 ppm 13C
13C 78,0 ppm
Sacarose 77,2 ppm Frutose
O
N
OH HO O
H
1
H
8,63-8,66 ppm NH2
N 1H
H 7,52-7,56 ppm
Histidina 5-Hidroximetilfurfural
HO H 1H
6,21 ppm OH
OH
O
H 1 H O OH
6,15 ppm
OH
HO H
1H
6,21 ppm
Florina
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41
Resultados e Discusses
1H 1H
NH 3,24-3,28 ppm; O 1,93-1,95 ppm; O
13C 13C 13C
43,5 ppm 30,6 ppm 25,3 ppm 13C
H2N 180,2 ppm
H2N NH OH OH
1H 1H
13C
1,60-1,78 ppm; H 1H
H2N 41,7 ppm 2,46-2,51 ppm;
13C 13C
26,9 ppm 3,78-380 ppm
33,9 ppm
Arginina GABA
1H
3,09 ppm;
13C 1H
48,9 ppm 3,29 ppm;
H3C CH3 13C
54,9 ppm
13C + H
70,3 ppm N
N
O O
13
C 13C
26,8 ppm 177,0 ppm
OH H OH
1H H 1H
2,32-2,34 ppm 2,02-2,05 ppm
Dimetilprolina Prolina
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42
Resultados e Discusses
Figura 4.2.1.1. Grfico de linhas dos dados de RMN de 1H para os grupos de suco
de laranja comercial e natural, analisados pelo mtodo A por PCA.
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43
Resultados e Discusses
A Figura 4.2.1.2.
4.2. apresenta o grfico de escores das amostras dos
grupos de suco de laranja comercial e natural, analisados pelo mtodo A. Conforme
pode ser observado existe uma forte tendncia entre as amostras dos grupos de
suco de laranja comercial e natural em se agruparem.
agrupar Dentro do grupo de suco de
laranja natural possvel observar uma
uma tendncia de separao entre os
o cinco (5)
tipos de sucos estudados, ocorrendo apenas
apena sobreposio entre as variedades de
suco de laranja murcote e Bahia. No suco de laranja comercial tambm ocorre essa
tendncia de separao entre os sucos comerciais estudados, onde o suco
comercial 01 apresenta-se
se separado dos demais, enquanto que o suco comercial 02
e 03 apresentam-se
se sobrepostos. A soma dos valores obtidos para as trs primeiras
componentes principais [PC1 (54%), PC2 (28%) e PC3 (9%)] apresentou explicao
de 91% do total da varincia do banco de dados. A componente principal dois (PC2)
foi responsvel por essa separao, sendo que os valores positivos de PC2 atuaram
com maior influncia no grupo de suco comercial e os valores negativos atuaram
com maior influncia no grupo de suco natural.
Suco Comercial
01
Laranja
Lima
Laranja
Lima da Prsia Suco Comercial
02 e 03
Laranja
Murcote e Bahia
Laranja
Pera Rio
Figura 4.2.1.2. Grfico de escores PC2 (28%) versus PC3 (9%) das amostras de
suco de laranja do grupo comercial e natural, analisados pelo mtodo A.
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44
Resultados e Discusses
Figura 4.2.1.3. Grfico de pesos das componentes principais dois (02) e trs (03)
das amostras de suco de laranja comercial e natural destacando-se as variveis de
maior importncia na separao do mtodo A.
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45
Resultados e Discusses
Figura 4.2.1.4. Grfico de linhas dos dados de RMN de 1H para os grupos de suco
de laranja comercial e natural, analisados pelo mtodo B por PCA.
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46
Resultados e Discusses
A Figura 4.2.1.5.
4.2.1.5 apresenta o grfico de escores das amostras dos
grupos de suco de laranja comercial e natural, analisados pelo mtodo B. A soma
dos valores obtidos para as trs primeiras componentes principais [PC1 (55%), PC2
(12%) e PC3 (9%)] apresentou uma explicao de 76% do total da varincia do
banco de dados. Conforme pode ser observado existe tendncia de agrupamento
entre as amostras dos grupos de suco de laranja comercial e natural. Apesar de no
haver uma separao clara, as amostras do grupo de suco de laranja natural tm
tendncia em se agruparem nos valores positivos da componente principal um (PC1)
e nos valores negativos da componente principal trs (PC3). Contudo, as amostras
do grupo de suco de laranja comercial tm tendncia em se agruparem nos valores
positivos da componente principal trs (PC3) e nos valores negativos da
componente principal um (PC1). Dentro
o dessa tendncia de separao dos grupos
de suco de laranja possvel observar a separao no grupo de suco de laranja
comercial 02 das demais amostras de suco de laranja comercial 01 e 03 que
apresentam sobrepostas. Para as amostras de suco de laranja natural
n possvel
observar uma tendncia de separao entre os cinco (5) tipos de sucos estudados,
ocorrendo apenas uma pequena sobreposio entre as variedades de suco de
laranja Lima da Prsia e Lima.
Lima
Suco
Comercial 02
Suco Comercial
01 e 03
Laranja Pera
Rio
Laranja
Murcote
Laranja Lima Laranja Lima
Laranja da Prsia
Bahia
Figura 4.2.1.5. Grfico de escores PC1 (55%) versus PC3 (9%) das amostras de
suco de laranja do grupo comercial e natural, analisados pelo mtodo B.
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47
Resultados e Discusses
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48
Resultados e Discusses
Figura 4.2.1.6. Grfico de pesos das componentes principais um (01) e trs (03) das
amostras de suco de laranja comercial e natural destacando-se as variveis de
maior importncia na separao do mtodo B.
DQ - UFSCar
49
Resultados e Discusses
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50
Resultados e Discusses
Suco
Comercial 01
Suco
Comercial 02
Suco
Comercial 03
Figura 4.2.2.1. Grfico de escores PC1 (79%) versus PC2 (11%) das amostras de
suco de laranja do grupo comercial analisados pelo mtodo A.
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51
Resultados e Discusses
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52
Resultados e Discusses
Figura 4.2.2.2. Grfico de pesos das componentes principais um (01) e dois (02)
das amostras de suco de laranja comercial destacando-se as variveis de maior
importncia na separao do mtodo A.
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53
Resultados e Discusses
Suco
Comercial 02
Suco
Comercial 03
Suco
Comercial 01
Figura 4.2.2.3. Grfico de escores PC1 (68%) versus PC2 (10%) das amostras de
suco de laranja do grupo comercial analisados pelo mtodo B.
DQ - UFSCar
54
Resultados e Discusses
DQ - UFSCar
55
Resultados e Discusses
Figura 4.2.2.4. Grfico de pesos das componentes principais um (01) e dois (02)
das amostras de suco de laranja comercial destacando-se as variveis de maior
importncia na separao do mtodo B.
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56
Resultados e Discusses
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57
Resultados e Discusses
cido Frmico cido Succnico cido Pirvico cido Actico cido Ltico
Tempo
0 15 0 15 0 15 0 15 0 15
(dias)
C1A 0,058 0,050 0,096 0,108 0,135 ND 0,276 0,209 0,657 2,733
C1C 0,061 0,039 0,086 0,351 0,045 0,591 0,251 0,941 0,756 0,316
C2C 0,011 0,014 0,021 0,160 ND 0,113 0,030 0,654 0,033 0,085
C1A, C1B, C1C e C1D: suco comercial 01; C2A, C2B, C2C e C2D: suco comercial
02; C3A, C3B, C3C e C3D: suco comercial 03.
ND: No detectado o sinal do metablito no espectro de RMN de 1H.
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58
Resultados e Discusses
0,01 0,05
ND* ND* ND*
0 0
C1A C1B C1C C1D C2A C2B C2C C2D C3A C3B C3C C3D C1A C1B C1C C1D C2A C2B C2C C2D C3A C3B C3C C3D
3 cido Ltico
rea do metablito/rea do TMSP-d4
1,5
0,5
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59
Resultados e Discusses
Lote A (14C)
Laranja lima (N4)
Lote C (24C)
urcote (N3)
Laranja murcote
Figura 4.2.2.6. Grfico de escores PC1 (70%) versus PC2 (22%) das amostras de
suco de laranja do grupo natural analisadas pelo mtodo A.
Na Figura 4.2.2.6.
4.2.2.6 observa-se a formao de cinco grupos (5) bem
definidos para as amostras de suco natural N1 (laranja pra Rio), N2 (laranja Bahia),
N3 (laranja murcote), N4 (laranja lima) e N5 (laranja lima da Prsia). Pode-se
Pode
visualizar que as amostras
ras de suco natural N1, N2 e N3 esto separadas em trs (3)
grupos distintos nos valores positivos da primeira componente principal, enquanto
que, nos valores negativos da primeira componente principal observa-se
observa a formao
de dois (2) grupos para as amostras
amost de suco natural N4 e N5. Esses dois grupos
apresentam-se mais sensveis a temperatura de armazenamento que os demais, a
qual pode ser observada pela disperso das amostras no grfico de escores.
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60
Resultados e Discusses
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61
Resultados e Discusses
Figura 4.2.2.7. Grfico de pesos das componentes principais um (01) e dois (02)
das amostras de suco de laranja natural destacando-se as variveis de maior
importncia na separao do mtodo A.
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62
Resultados e Discusses
Laranja murcote
urcote (N3)
Lote A (14C)
Figura 4.2.2.8. Grfico de escores PC1 (59%) versus PC2 (17%) das amostras de
suco de laranja do grupo natural analisadas pelo mtodo B.
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63
Resultados e Discusses
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64
Resultados e Discusses
Figura 4.2.2.9. Grfico de pesos das componentes principais um (01) e dois (02)
das amostras de suco de laranja natural destacando-se as variveis de maior
importncia na separao do mtodo B.
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65
Resultados e Discusses
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66
Resultados e Discusses
Tempo 0 24 0 24 0 24 0 24 0 24 0 24
(horas)
ND ND ND ND 0,066 0,053 ND ND ND ND ND ND
N1A
ND ND ND ND 0,062 0,039 ND ND ND ND ND ND
N1C
ND ND ND ND 0,093 0,124 ND 0,042 ND ND ND ND
N2A
ND 0,017 ND 0,012 0,081 0,111 ND 0,037 ND ND ND 2,734
N2C
ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
N3A
ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
N3C
ND ND 0,034 0,137 0,120 0,090 ND ND ND ND ND ND
N4A
ND 0,111 0,045 0,025 0,156 3,165 ND 0,117 ND 1,832 ND 2,023
N4C
ND ND 0,012 0,059 0,034 0,026 ND ND 0,083 0,084 ND ND
N5A
ND 0,041 0,011 0,011 0,033 2,010 ND 0,047 0,079 1,719 ND 1,297
N5C
N1A e N1C: Laranja pra Rio; N2A e N2C: Laranja Bahia; N3A e N3C: Laranja
murcote; N4A e N4C: Laranja lima; N5A e N5C: Laranja lima da Prsia.
ND: No detectado o sinal do metablito no espectro de RMN de 1H.
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67
Resultados e Discusses
0,06 0,08
0,06
0,04
0,04
0,02
0,02
ND* ND* ND* ND* ND* ND* ND* ND* ND* ND* ND* ND*
0 0
N1A N1C N2A N2C N3A N3C N4A N4C N5A N5C N1A N1C N2A N2C N3A N3C N4A N4C N5A N5C
2 0,08
1,5 0,06
1 0,04
0,5 0,02
ND* ND* ND* ND* ND* ND* ND* ND*
0 0
N1A N1C N2A N2C N3A N3C N4A N4C N5A N5C N1A N1C N2A N2C N3A N3C N4A N4C N5A N5C
N1A N1C N2A N2C N3A N3C N4A N4C N5A N5C N1A N1C N2A N2C N3A N3C N4A N4C N5A N5C
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68
Resultados e Discusses
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69
Resultados e Discusses
100,000
Intensidade mxima do sinal
80,000
60,000
40,000
20,000
0,000
0,000 2,000 4,000 6,000 8,000 10,000 12,000
Concentrao (g/L)
Para a construo dos modelos PCR e PLS foram usadas treze (13)
amostras de referncias. Na primeira etapa da construo do modelo de calibrao
multivariada foram selecionadas apenas as variveis da matriz de dados referentes
ao sinal em 1,17 ppm, desse modo o vetor inicial era representado por 20767
variveis e aps seleo passou a ser representado por apenas 128 variveis. A
Figura 4.3.2. apresenta as variveis selecionadas das amostras de referncias para
a etapa de validao e calibrao dos modelos PCR e PLS para o etanol.
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Resultados e Discusses
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71
Resultados e Discusses
Concentrao de etanol
Amostra
(g/L)
cal01 0,136
cal02 0,548
cal03 0,767
cal04 1,096
cal05 2,192
cal06 3,056
cal07 4,370
cal08 5,479
cal09 5,767
cal10 6,867
cal 11 8,767
cal 12 11,000
cal 13 13,000
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72
Resultados e Discusses
a
Var c d 2 e f g 2 h i
Modelo PCs b
SEVal RMSEVal r Val SECal RMSECal r Cal SECal/SEVal
%
Calibrao
-- -- -- -- -- -- -- 0,992 --
Univariada
a b c d
Componentes Principais; Percentual de Varincia na matriz X; Erro Padro de Validao;
Validao Erro Quadrtico Mdio de
e f
Validao; Coeficiente de Correlao entre a Concentrao Real e a Concentrao Prevista durante a Validao; Erro
g h
Padro de Calibrao; Erro Quadrtico Mdio de Calibrao; Coeficiente de Correlao entre a Concentrao Real e a
Concentrao Prevista durante a Calibrao e i Critrio de Similaridade.
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73
Resultados e Discusses
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74
Resultados e Discusses
Tempo Tempo
0 15 0 24
(dias) (horas)
3,334 ( 0,193) 3,839 ( 0,122) 0,873 ( 0,260) 0,721 ( 0,341)
C1A N1A
1,619 ( 0,421) -- 0,856 ( 0,374) 0,846 ( 0,281)
C1B N1C
3,180 ( 0,124) 9,575 ( 1,332) 0,578 ( 0,391) 0,500 ( 0,211)
C1C N2A
2,387 ( 0,288) -- 0,485 ( 0,352) 0,555 ( 0,266)
C1D N2C
-- -- 0,204 ( 0,107) 0,392 (0,094)
C2A N3A
-- -- 0,286 ( 0,127) 0,258 ( 0,098)
C2B N3C
-- 12,476 ( 0,720) 0,914 ( 0,483) 2,208 ( 1,208)
C2C N4A
-- -- 0,864 ( 0,580) 3,244 ( 0,660)
C2D N4C
0,617 ( 0,308) 0,324 ( 0,098) -- 0,212 ( 0,102)
C3A N5A
0,360 ( 0,404) -- -- 0,913 ( 0,189)
C3B N5C
0,691 ( 0,094) 0,736 ( 0,104)
C3C
0,314 ( 0,448) --
C3D
C1A, C1B, C1C e C1D: suco comercial 01; C2A, C2B, C2C e C2D: suco comercial
02; C3A, C3B, C3C e C3D: suco comercial 03; N1A e N1C: Laranja pra Rio; N2A e
N2C: Laranja Bahia; N3A e N3C: Laranja murcote; N4A e N4C: Laranja lima; N5A e
N5C: Laranja lima da Prsia.
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75
Resultados e Discusses
Suco Comercial
14
Concentrao de Etanol
12
Tempo Incial (0 dia)
Concentrao de Etanol (g/L)
ND*
0
C1A C1B C1C C1D C2A C2B C2C C2D C3A C3B C3C C3D
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76
Resultados e Discusses
Suco Natural
3,5
Concentrao de Etanol
3
Concentrao de Etanol (g/L)
1,5
0,5
ND* ND*
0
N1A N1C N2A N2C N3A N3C N4A N4C N5A N5C
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77
Concluses
5. CONCLUSES
As concluses a respeito desse trabalho so as seguintes:
1) A ressonncia magntica nuclear (RMN de 1H e bidimensionais) mostrou-se
como uma importante ferramenta na caracterizao e quantificao relativa dos
metablitos presentes nas amostras de suco de laranjas estudadas. Os espectros de
1
RMN de H combinados com anlise multivariada dos dados mostraram-se
promissores na deteco de indicadores de degradao nos sucos comerciais (em
trs (3) fabricantes diferentes) e nas cinco (5) variedades de sucos naturais das
laranjas pra Rio e Bahia (C. sinensis (L.) Osbeck spp.), murcote (Citrus grandis (L.)
Osbeck), lima (C. aurantifolia) e lima da Prsia (C. limettiodes).
1
2) Os dados fornecidos pelos espectros de RMN de H aliados a anlise
multivariada se mostraram muito adequados para diferenciar amostras comerciais
das amostras naturais de sucos de laranjas atravs dos constituintes qumicos
majoritrios (sacarose, -glicose, -glicose, frutose, cido ctrico e etanol) e
minoritrios (histidina, cido frmico, fenilalanina, tirosina, florina, DMP, cido mlico,
cido actico, arginina, cido pirvico e cido mlico), utilizando o mtodo A (dados
centrados na mdia) e o mtodo B (dados autoescalados), respectivamente, por
anlise de componentes principais (PCA).
3) As amostras de sucos naturais da laranja lima e lima da Prsia foram as que
mais sofreram alteraes durante o perodo de 24 horas sob as temperaturas de 14
C e 24 C, onde os cidos: frmico, fmarico, succnico, pirvico, actico e ltico
tiveram suas concentraes alteradas. As amostras de sucos de laranjas comerciais
01, 02 e 03 tambm apresentaram alteraes durante o perodo em que foram
analisadas sob as temperaturas de 14 C e 24 C, tanto antes quanto aps a
validade, porm o suco comercial 01 foi o que mais apresentou alteraes como, por
exemplo, o aumento da concentrao de cido pirvico em cinco (5) vezes e treze
(13) vezes, nas amostras mantidas sob refrigerao de 14 C e 24C,
respectivamente, analisadas aps a validade do produto. Portanto, o uso da
quantificao relativa aliada anlise multivariada dos dados apresentou-se com
grande potencial para avaliar o processo de degradao em amostras de sucos de
laranjas tanto comerciais quanto naturais.
4) Os dados fornecidos pelos espectros RMN de 1H aliados ao modelo de
calibrao multivariada PLS possibilitou quantificar o contedo de etanol (intervalo
de 0,136 g/L - 13,000 g/L) presente nas amostras de sucos de laranjas comerciais e
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Concluses
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Referncias Bibliogrficas
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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