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Graciane Regina Pereira

Henrique da Silva Pires


Leonardo Schorcht Bracony Porto Ferreira
Katiuscia Wilhelm Kangerski (Orgs.)

PISCICULTURA
CONTINENTAL COM
ENFOQUE AGROECOLGICO

1. Edio

Gaspar, 2016
CAPA:Programador visual Henrique Lara

FOTOGRAFIAS: Oflia Maria Campigotto

REVISO E DIAGRAMAO: Ana Paula Kuczmynda da


Silveira

ORGANIZADORES:

Graciane Regina Pereira IFSC Cmpus Gaspar/NUPA Gaspar


Ncleo de Pesquisa Aplicada Pesca e Aquicultura com Enfoque
Agroecolgico

Henrique da Silva Pires Prefeitura Municipal de Gaspar/NUPA


Gaspar Ncleo de Pesquisa Aplicada Pesca e Aquicultura com
Enfoque Agroecolgico

Leonardo Schorcht Bracony Porto Ferreira - NUPA Gaspar


Ncleo de Pesquisa Aplicada Pesca e Aquicultura com Enfoque
Agroecolgico

Katiuscia Wilhelm Kangerski - NUPA Gaspar Ncleo de


Pesquisa Aplicada Pesca e Aquicultura com Enfoque
Agroecolgico
Agradecemos ao CNPQ, ao Instituto Federal de Santa Catarina e
Prefeitura municipal de Gaspar que possibilitaram que o projeto
de elaborao deste livro se concretizasse.
SUMRIO

1. DESENVOLVIMENTO DA PISCICULTURA DE GASPAR


.......................................................................................................06
PEREIRA, G. R.;
PIRES, H. S.;
FERREIRA, L. S. B. P.;
WALTRICK, D.;
MAZOTTO, J.

2. PEIXE-VERDE, ALTERNATIVA PARA PISCICULTURA


ORGNICA ................................................................................. 21
CASACA, J.de M.

3. AQUAPONIA: TECNOLOGIA APLICADA PARA A


PRODUO DE ALIMENTOS COM MANEJO
AGROECOLGICO .................................................................. 37
ARAJO, F. A.;
NUER, A. P. O.

4. PROBITICOS NA PISCICULTURA................................. 64
JESUS, G. F. A.;
MOURIO, J. L. M.;
VIEIRA, F. N.;
SILVA, B. C.;
MARTINS,M. L.;
JATOB, A.

5. LICENCIAMENTO AMBIENTAL DA PISCICULTURA:


ESTUDO DE CASO NO MUNICPIO DE GASPAR/SC ....... 95
MAZOTTO, J.

6. SELO DE RASTREABILIDADE NA PISCICULTURA .. 105


MAZOTTO, J
7. PISCICULTURA: O POLICULTIVO INTEGRADO COM
ENFOQUE AGROECOLGICO ........................................... 115
SILVEIRA, F. S.

8. AS NORMAS BRASILEIRAS DE CERTIFICAO


ORGNICA PARA A PISCICULTURA DE GUA-DOCE
........ ............................................................................................. 133
MUELBERT, B.
BORBA, R. M.
WEINGARTNER, M.
SADO, R.
NUNES, J. S.

9. PATOLOGIA E MEDIDAS PROFILTICAS EM


PISCICULTURA COM ENFOQUE AGROECOLGICO . 154
NUNES, G. C.

10. PARASITOLOGIA EM PISCICULTURA ...................... 165


NUNES, G. C..

11. PRODUO DE JUVENIS DO CASCUDO


Pterygoplichthys pardalis EM TANQUES ESCAVADOS, NO
ESTADO DE SANTA CATARINA ......................................... 185
GARCIA, S.
LIEBL, D.
AMARAL, H.

12. ANTECIPAO DE MATURAO GONADAL EM


JUNDI Rhamdia quelen, ATRAVS DE ACRSCIMO NA
TEMPERATURA E NO FOTOPERODO ............................ 212
GARCIA, S.
SARAMENTO, I. S.
13. PLNCTONS Chlorella minutissima E Daphnia magna
COMO NICA FONTE ALIMENTAR DE CARPA Cyprinus
carpio E TILPIA Oreochromis niloticus................................ 235
BONAZZI, B
AMARAL, H.
GARCIA, S.

14. RESTRIO ALIMENTAR E CRESCIMENTO


COMPENSATRIO NA PISCICULTURA: UMA VISO
RACIONAL DE PRODUO................................................. 266
FERREIRA, L. S. B. P.
PIERRI, B. S.

15. COMPARAO DO PERFIL DE CIDOS GRAXOS


ENTRE JUNDI (Rhamdia quelen) SELVAGEM E CRIADO
EM CATIVEIRO ...................................................................... 281
FERNANDES, V. A. G.
LEMOS, L. F.
BAGGIO, S. R.
FRACALOSSI, D.

16. ECONOMIA DE ESCOPO: AVALIANDO A


VIABILIDADE ECONMICA NA PISCICULTURA
AGROECOLGICA ................................................................ 303
HERMES, C. A.
APRESENTAO

O NUPA Gaspar foi criado com o apoio da Chamada


MCTI/MAPA/MDA/MEC/MPA/CPNp 81/2013, atravs do
Projeto: Desenvolvimento da Piscicultura de Gaspar.
O NUPA uma unidade de referncia para o
desenvolvimento sustentvel da pesca e aquicultura, que tem como
princpios: incluso social, sustentabilidade ambiental, segurana e
soberania alimentar, equidade, tica, reconhecimento e
fortalecimento das culturas das comunidades tradicionais. Sua
criao s foi possvel graas s parcerias firmadas ao longo desses
dois anos com os rgos municipais e estaduais (Prefeitura
Municipal de Gaspar e EPAGRI), com as instituies de ensino
federais de Santa Catarina (UFSC, IFC e IFSC) e com a
Associao de Aquicultores do Municpio de Gaspar (AQUIPAR).
Esta publicao nasceu dos anseios da equipe do Ncleo de
Pesquisa Aplicada em Pesca em Aquicultura com enfoque
agroecolgico (NUPA) de Gaspar/SC, em construir um material
bibliogrfico atual e contextualizado para a Regio Sul sobre
piscicultura com enfoque agroecolgico, demanda percebida
durante o planejamento e execuo de uma capacitao com
produtores.
Para concretizar esta obra, identificamos profissionais que
vm trabalhando com essa temtica, em especial na regio Sul. Os
primeiros contatos iniciaram e tivemos a grata surpresa de ter boa
acolhida da solicitao da escrita de um captulo a partir da
experincia de cada autor. Assim, este livro est organizado em 16
captulos.
Acreditamos que a publicao se apresenta como um
material de apoio para todas as instituies e produtores que
buscam subsdios para desenvolver atividades relacionadas
piscicultura com enfoque agroecolgico. de suma importncia a
abordagem de formas de cultivo mais sustentveis, sejam elas
orgnicas ou agroecolgicas, pois os novos consumidores buscam
a segurana alimentar, e a piscicultura de gua-doce precisa se
inserir nesse mercado que cresce a cada ano.
64

4. PROBITICOS NA PISCICULTURA

RESUMO

O cultivo de peixes no Brasil se destaca pela alta produtividade e


lucratividade, porm a ocorrncia de enfermidades tem causado
prejuzos aos produtores. A fim de minimizar esse problema, a
utilizao de probiticos tem-se mostrado uma ferramenta
preventiva de combate a surtos bacterianos em cultivos de peixes,
sendo uma alternativa vivel ao uso de antibiticos. Probiticos so
micro-organimos vivos que, quando ministrados, colonizam o trato
intestinal, regularizando a flora, competindo com agentes
patognicos e estimulando o sistema imunolgico. Ao longo dos
anos, vrias estratgias para modular a composio da microbiota
intestinal de peixes, a fim de se obter melhores taxas de
crescimento, digesto, imunidade e resistncia a doenas, vm
sendo estudadas. Contudo, os resultados obtidos com a utilizao
de probiticos so bastante controversos, sendo necessrio o
isolamento e desenvolvimento de probiticos espcie-especficos,
ou seja, probiticos autctones. Dessa forma, esta reviso visa
contribuir para a utilizao de probiticos na piscicultura, desde o
isolamento e seleo de cepas, atravs de testes in vitro, at sua
utilizao comercial.

ABSTRACT

The Brazilian fish farming stands out for its high productivity and
profitability, but the occurrence of disease outbreak has caused
many losses. In order to reduce these problems, the use of
probiotics is a timely tool to be a preventative management against
the use of antibiotics. Probiotics are live microorganisms that,
when administered in adequate amounts, colonize the intestinal
tract, regulate the microbiota, compete with pathogens and
stimulate the immune system. Over the years, various strategies
were used to modulate the composition of the intestinal microbiota
of fish, and, in order to achieve better growth rates, digestion,
immunity and disease resistance, probiotics have been studied.
65

However, the results obtained with the use of probiotics are quite
controversial, requiring the isolation and development of probiotic
species-specific. Thus, this review aimed to contribute to the
knowledge of using probiotics in fish farming, from the isolation
and selection of strains to the in vitro tests until large-scale
commercial use.

1 INTRODUO

A produo aqucola mundial est em constante expanso.


Entre os peixes mais cultivados no Brasil, em guas continentais, a
tilpia e as carpas so as de maior importncia, somando 63,4% da
produo nacional em 2010, seguidas dos peixes redondos
tambaqui (Colossoma macropomum), pacu (Piaractus
mesopotamicus), pirapitinga (Piaractus brachypomus) e seus
hbridos, os quais representaram 24,6% da produo.
medida que se pretende aumentar a produo, seja em
pequena ou larga escala, um quesito importante a ser observado
biosseguridade. Grandes mortalidades de peixes so observadas
quando h a intensificao desordenada da produo. A ocorrncia
de enfermidades tem como principal fator o desequilbrio do
tringulo epidemiolgico patgeno - hospedeiro - meio-ambiente,
que consequentemente diminui a capacidade imunolgica dos
animais, alm de deteriorar a qualidade da gua do cultivo,
favorecendo, assim, o desenvolvimento de doenas .
Durante esses surtos, diversos agentes qumicos podem ser
utilizados como tratamentos profilticos e remediadores s
enfermidades, tais como cido actico, amnia quaternria, cal,
cloreto de sdio, formol, iodo, metrifonato, sulfato de cobre, verde
malaquita, cido oxolnico, sulfamerazina, sulfato de magnsio e,
especialmente, os antibiticos, diversas vezes utilizados
indiscriminadamente e de maneira errnea .
No Brasil, o Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento (MAPA, 2013) j proibiu o uso de diversos
antibiticos - clorafenicol e nitrofuranos, quilononas e
sufonamidas, eritromicina - como aditivo alimentar na produo
animal. Dessa forma, boas prticas sanitrias devem ser
66

incorporadas pelos produtores para possibilitar o equilbrio do


cultivo.
Dentre as prticas sanitrias alternativas, destaca-se a
utilizao de probiticos capazes de auxiliar no aumento da
capacidade imunolgica dos peixes. Probitico uma palavra
derivada do grego, que significa a favor da vida, porm, desde
1965, o uso desse termo vem sendo continuamente revisto, pois
suas definies podem variar de acordo com a forma de
suplementao, se h ou no colonizao do trato intestinal do
hospedeiro e se atua trazendo benefcios ao ambiente de cultivo
e/ou hospedeiro. Portanto, Mourino et al. (2008) definiram
probiticos como: micro-organismos vivos que, adicionados ao
cultivo de maneira que entrem no trato digestivo dos animais e,
mantendo-se vivos, atuem beneficamente no animal de interesse,
melhorando a eficincia alimentar, o sistema imunolgico e/ou
balano da relao de bactrias benficas e patognicas no trato
digestivo..
Atualmente, no mercado, encontramos diferentes frmulas
comerciais de probiticos testadas e utilizadas em peixes. Porm,
observa-se que probiticos isolados de outros animais ou em
espcies de peixes que no sejam o alvo podem apresentar
resultados controversos, sendo necessrio o isolamento e
desenvolvimento de probiticos espcie-especficos, ou seja,
probiticos autctones .
A utilizao de bactrias cido-lticas apresenta efeito
positivo registrado em diversas espcies, como robalos,
Centropomus spp. (BARBOSA et al., 2011), tilpias, Oreochromis
spp, (JATOB et al., 2011) e camares, Litopenaeus vannamei,
(VIEIRA et al., 2007), devido sua capacidade de colonizar o trato
digestrio, alterando a dominncia natural da microbiota intestinal
e promovendo melhoria no sistema imune dos animais (JATOB
et al., 2008; VIEIRA et al., 2008). Esses resultados esto
relacionados com a alta especificidade entre o micro-organismo
probitico e o hospedeiro, pois todas as cepas utilizadas nesses
trabalhos foram isoladas dos prprios animais em estudo.
Por outro lado, estudos demonstram que a utilizao de
bactrias alctones tambm pode apresentar bons resultados e um
papel positivo no bem estar dos peixes (RIDHA; AZAD, 2012),
67

porm h um consenso de que cepas de bactrias cido-lticas


autctones possuem maior chance de colonizar o intestino e trazer
benefcio sade do hospedeiro. A utilizao de cepas alctones
apresenta uma srie de desvantagens, como a insero de micro-
organismos exgenos ao ambiente de cultivo, o desconhecimento
dos possveis efeitos no trato intestinal e sua interao com os
demais micro-organismos do ambiente, alm da capacidade dessas
cepas sobreviverem ou se manterem em condies viveis e em
concentraes timas no trato intestinal dos animais (NAYAK,
2010b).

2 CRITRIOS DE SELEO DE MICRO-ORGANISMO


PROBITICOS PARA AQUICULTURA

Ao longo dos anos, vrias estratgias para modular a


composio da microbiota intestinal, a fim de se obter melhores
taxas de crescimento, digesto, imunidade e resistncia a doenas,
foram estudadas, nos mais diversos ramos da produo animal .
Os micro-organismos usados como probiticos na
aquicultura devem exercer boa atividade microbiana e ser seguros,
no apenas para o animal cultivado e o meio em que vivem, mas
tambm para os humanos. Alm de colonizar o trato digestrio e
produzir um efeito benfico no hospedeiro, outras caractersticas
devem ser observadas nesses micro-organismos, como: ser incuo,
resistir ao tempo de armazenamento e transporte, resistir s
enzimas do trato digestrio e bile, no possuir genes de
resistncia a antibiticos e possuir propriedades antimutagnicas e
anticancergenas .
Muitos dos probiticos empregados na aquicultura so
desenvolvidos para uso humano ou para o uso na produo de
animais terrestres. No entanto, a adaptao do uso desses
probiticos em meio aqutico mais complexa quando comparada
ao ambiente terrestre, justificando o insucesso desses produtos na
aquicultura. Alm disso, o isolamento, a caracterizao e a
comercializao de bactrias probiticas autctones precisam ser
estudados (AZAD; AI-MARZOUK, 2008). Assim, torna-se
conveniente seguir alguns critrios de seleo para garantir a
chegada ntegra de bactrias probiticas no trato intestinal e o
68

consequente aumento da efetividade do probitico na sade do


peixe cultivado (Figura 01).

Figura 01- Esquema de seleo de bactrias probiticas.

Fonte: Adaptado de RAY et al., 2012.

Portanto, a metodologia proposta para seleo de micro-


organismos probiticos para a aquicultura deve incluir: 1)
isolamento a partir do animal a ser estudado, 2) testes de seleo in
vitro, 3) testes in vivo e 4) avaliao dos efeitos no animal.

3 TESTES IN VITRO

3.1 Isolamento das cepas

Embora as bactrias com este potencial sejam isoladas em


diversos ambientes, na grande maioria das vezes, elas so extradas
do trato gastrointestinal dos hospedeiros nos quais atuaro
(autctones). Este um critrio relevante para a seleo de cepas
probiticas, pois se espera melhor desempenho em ambiente
69

semelhante quele no qual ela foi isolada, devido a sua alta


especificidade .
Vale ressaltar a existncia de cepas probiticas que no
atuam diretamente no hospedeiro, como as biocontroladoras e
bioremediadoras, que atuam no ambiente de cultivo. Ambos so
micro-organismos vivos, porm as biocontroladoras so
antagnicas a patgenos e no colonizam o trato gastrointestinal,
alm de diminurem a carga de bactrias patognicas no ambiente
de cultivo. J as cepas bioremediadoras melhoram a qualidade da
gua ou auxiliam na decomposio da matria orgnica do cultivo,
porm sem ter relao direta com o hospedeiro. Dessa forma, uma
cepa pode apresentar mais de uma ao e atender a critrios
simultaneamente. Por exemplo, uma bactria bioremediadora pode
decompor a matria orgnica do ambiente e produzir compostos
que diminuam a carga de bactrias patognicas na gua, alm de
poder ainda colonizar o trato intestinal do animal.
de extrema importncia definir precocemente qual ser o
efeito probitico que se espera obter nos animais, para que a
seleo do micro-organismo seja realizada baseada no carter
desejado. Por exemplo, para uma seleo que visa melhora do
sistema imune do hospedeiro, devem-se isolar micro-organismos
capazes de produzir compostos antimicrobianos e estimular a
formao de imunoglobulinas; para uma seleo que visa ao
aumento da capacidade digestria, devem-se selecionar cepas que
produzam mais enzimas e cidos orgnicos; dessa forma a seleo
ser direcionada e eficiente, diminuindo custos e mo de obra .

3.2 Espcies de micro-organismos utilizados como probiticos

Para facilitar o estudo sobre os tipos de cepas probiticas, os


micro-organismos utilizados sero divididos em dois grupos: as
bactrias Gram-negativas e as Gram-positivas. Dentre as Gram-
negativas, que j tiveram seu efeito probitico comprovado, esto
os gneros: Pseudomonas sp., Aeromonas sp (A. hydrophila., A.
sobria), Vibrio sp. (V. fluvialis), dentre outros.
No segundo grupo de micro-organismos, os Gram-
positivos, esto a maioria dos probiticos utilizados em
aquicultura, dentre os quais destacam-se os gneros: Lactobacillus,
70

Lactococcus, Bacillus, Enterococcus, Carnobacterium,


Micrococcus, Streptococcus, Vagococcus, Aerococcus,
Pediococcus e Leuconostoc. Atualmente, muitas tentativas vm
sendo realizadas com o objetivo de induzir a dominncia artificial
dessas bactrias no trato intestinal de peixes.
Entre os gneros citados, devemos destacar as bactrias
cido-lticas e os bacilos (B. subtilis, B. licheniformes, B.
circulans), devido a sua capacidade de produo de compostos
antimicrobianos, estimulao do sistema imune, alm de
secretarem enzimas digestivas capazes de favorecer a digesto e
absoro de nutrientes.

3.3 Antagonismo entre cepas probiticas

Probiticos podem ser administrados na forma monoespcie


ou multiespcies. Para alcanar resultados timos utilizando
diferentes gneros e espcies, deve-se dar nfase ao antagonismo
entre as cepas, pois uma bactria no deve inibir a outra. Assim,
evita-se a seleo de cepas resistentes a compostos produzidos por
uma nica cepa bacteriana.
Estudos recentes tm confirmado os efeitos benficos, tanto
da forma monoespcie como da multiespcie (mistura) de cepas
probiticas, em condies in vitro e in vivo. Repetidas vezes, a
induo do sistema imune inato em peixes tem sido registrada com
probiticos multiespcies. J foi demonstrado por testes in vitro,
que Bacillus subtilis e Lactobacillus acidophilus usados
conjuntamente aumentaram o efeito probitico no animal, inibindo
o crescimento de A. hydrophila e melhorando ndices de
sobrevivncia, ganho de peso, valores do hematcrito, ensaio de
nitroazul de tetrazlio (NBT) e atividade da lisozima srica, alm
de registrarem atividade bactericida do soro.
Nos ltimos estudos, percebeu-se que essas bactrias cido-
lticas tinham potencial para transferir resistncias a antibiticos.
Atualmente descrita, em praticamente todas as espcies
bacterianas, a existncia de resistncia a antibiticos,
possibilitando bactria vantagem de sobreviver na presena de
um determinado antibitico.
71

3.4 Formao de esporos

Tanto as cepas esporuladas como as no esporuladas, podem


ser utilizadas como probiticos. Contudo, a vantagem de bactrias
esporuladas sua resistncia a amplas faixas de temperatura e pH,
caractersticas no atribudas outros probiticos. Isso se torna
vantajoso na fabricao de raes suplementadas com tais micro-
organismos. Dentre as formas esporuladas, B. subtilis e B.
licheniformes so as cepas probiticas mais comuns utilizadas em
aquicultura. A maior vantagem na utilizao desse grupo de
bactrias como probiticos est relacionada com a facilidade de ser
produzida em massa e incorporada em produtos comerciais, pois
possuem a capacidade de esporulao, facilitando sua incluso em
dietas e produtos comerciais.
Os benefcios a longo prazo do uso de bactrias formadoras
de esporos, como probiticos, o fato de que alm de possurem
estabilidade ao calor, tambm podem sobreviver ao trnsito atravs
da barreira do estmago, propriedades essas que no podem ser
asseguradas com probiticos fornecidos na forma vegetativa. No
entanto, a maioria dos probiticos disponveis atualmente so
bactrias que no so formadores de esporos, ou seja, so
fornecidas como clulas vegetativas (geralmente preparadas
liofilizadas), apresentando bons efeitos probiticos.

3.5 Crescimento em diferentes concentraes de pH e resistncia


a sais biliares

A baixa resistncia de bactrias probiticas, frequentemente


constatada em ensaio de resistncia a sais biliares, consequncia
das condies extremas utilizadas in vitro para simular o ambiente
gstrico, sendo muitas vezes usados valores de pH inferiores e
tempo de exposio superiores aos encontrados in vivo. Por outro
lado, outros experimentos tm demonstrado que cepas de bactrias
cido-lticas geralmente so tolerantes s condies cidas em
estudos in vitro.
72

4 TESTES IN VIVO

Na seleo de cepas com potencial probitico comum


proceder-se aos testes in vitro para avaliar a viabilidade dos micro-
organismos. Quando so realizados testes in vivo, comum
identificar a microbiota endgena, nativa do trato gastrointestinal
do hospedeiro, e compar-la com a microbiota que se estabeleceu
no trato aps a administrao de uma dieta enriquecida com
probitico. Isto leva constatao da alterao e da colonizao de
tais cepas no trato do hospedeiro.
Outros fatores tambm devem ser levados em considerao
nos testes in vivo de cepas probiticas, como o modo de
suplementao, a concentrao oferecida e o perodo de oferta.
A suplementao com probiticos pode ser realizada
diretamente na gua, na dieta artificial ou no alimento vivo . As
concentraes dos micro-organismos probiticos podem variar,
sendo recomendvel concentraes maiores de 105 unidades
formadoras de colnia (UFC).
Foram testadas concentraes de 1 x 108 UFC g-1 de
bactrias lticas suplementadas na rao e foram obtidos bons
resultados em tilpia-do-Nilo e camaro marinho, respectivamente,
conseguindo alterar a microbiota intestinal e obter efeito
probitico. Contudo, essas concentraes de bactrias no
conseguem se manter estveis no trato intestinal do animal sem um
fornecimento constante do probitico. Nessa situao, as
concentraes de bactrias probiticas no intestino tendem a
diminuir, assim a viabilidade da bactria probitica (Lactobacillus
plantarum) no trato intestinal do camaro foi apenas de 4 dias.
Estimar a dose ou a concentrao ideal de probitico
necessrio no s para a proliferao adequada das bactrias no
intestino, mas tambm para obter os efeitos benficos causados por
elas, incluindo sua atividade imunomoduladora. Vrios estudos
tm demonstrado que as respostas imunes dos peixes variam em
funo da concentrao dos probiticos. Foram administradas, em
truta arco-ris, Bacillus sp isoladas do trato gastrointestinal de
tilpias, definindo a dose ideal de 2 x 10 8 cl/g e constatando
reduo nos ndices de mortalidade causada por bactrias
patognicas. Em aquicultura, costumam-se usar doses que variam
73

de 106 1010 CFU/g rao. Doses altas tambm podem causar


mortalidade nos hospedeiros. Portanto, necessrio ser
estabelecida a dose ideal para cada cepa probitica, em cada
hospedeiro especfico.
O perodo de administrao do probitico tambm um
fator importante. O tempo de fornecimento varia conforme o tipo
de cepa e com o parmetro imune que se deseja modular.
Analisando um mesmo parmetro, constatam-se diferenas nas
respostas imunolgicas causadas pelo perodo de oferta. O
incremento da atividade de burst respiratrio foi detectado em
peixes alimentados durante 60 dias com suplementao probitica.
Porm, em ensaio anterior, foi verificado efeito antagnico quando
o probitico foi ofertado por um perodo mais curto, de 4 semanas.
Alm disso, nem sempre maiores perodos de oferta do probitico
garantiro melhores efeitos estimulantes no animal.
Enquanto alguns pesquisadores acreditam que um regime de
alimentao longo no necessrio, o regime mais curto de
alimentao pode causar diminuio acentuada na resposta imune
nos peixes. Esse tipo de declnio pode acontecer devido
dificuldade das bactrias de probiticos para se estabelecerem e se
multiplicarem no intestino.
Embora se saiba que o modo mais eficaz de administrao
dos probiticos seja atravs da alimentao, eles tambm podem
ser administrados diretamente na gua de cultivo, causando efeitos
benficos ao ambiente e ao hospedeiro, ou podem ser
incorporados em rotferos e artmias em larviculturas de peixes,
por exemplo .

5 MODO DE AO

Benefcios ligados administrao de probiticos so:


excluso competitiva de bactrias patognicas, fonte de nutrientes
e enzimas digestivas, modulao do sistema imunolgico,
produo de compostos antimicrobianos como bacteriocinas e
cidos orgnicos.
74

5.1 Colonizao da microbiota intestinal

As bactrias, no trato gastrointestinal, podem ser


encontradas associadas ao epitlio ou livres na luz intestinal. As
livres devem-se multiplicar rapidamente a fim de compensar a
eliminao pelo movimento peristltico intestinal, ou mesmo
aglutinarem-se s demais bactrias aderidas na mucosa intestinal.
Existe ainda um prolongamento polissacardeo do entercito em
direo luz intestinal denominado glicoclix ou fmbria. O
processo de aderncia das bactrias feito por meio de
polissacardeos, molculas de acares ramificados, que se
estendem da parede externa da bactria formando uma estrutura
(glicoclix), a qual envolve a clula ou uma colnia de bactrias.
Essa estrutura apresenta outras funes importantes, como a
manuteno da camada aquosa prxima mucosa intestinal em pH
neutro, o que permite a ao de enzimas de membrana.
Dessa forma, o mecanismo regulador da colonizao das
bactrias no epitlio intestinal parece estar baseado na dependncia
da aderncia do glicoclix de uma bactria com o glicoclix do
entercito. Estudos apontam que, em muitos casos, essa ligao
entre glicoclix pode ser mediada por uma lectina, que se liga
especificamente a um polissacardeo. Vale pena ressaltar,
tambm, que estudos verificaram que os micro-organismos,
quando em meio de cultura, no produzem o glicoclix.
Aparentemente, os micro-organismos utilizam as reservas para
multiplicao e no para aderncia, a qual no necessria nessas
circunstncias.

5.2 Inibio competitiva

O antagonismo um fenmeno comum na natureza, em que


interaes bacterianas desempenham papel importante no
equilbrio da microbiota intestinal entre as bactrias benficas e as
potencialmente patognicas. A quebra desse equilbrio resultante
de ms prticas de manejo, rao de baixa qualidade, qualidade de
gua precria, alm de estresse e fatores ambientais, que podem
estimular a proliferao de bactrias patognicas no hospedeiro.
75

A colonizao do trato gastrointestinal dos animais por


probiticos se torna possvel aps o surgimento e antes da
instalao definitiva de uma microbiota endgena competitiva.
Aps essa instalao, somente a adio de doses elevadas de
probitico provocar a alterao na microbiota natural presente e
sua posterior manuteno.
A colonizao caracterizada pela adeso das bactrias
superfcie da mucosa, ou por associao ao muco ou por aderncia
s clulas epiteliais. A adeso aos stios e colonizao da mucosa
so mecanismos de defesa contra patgenos atravs da competio
por ligaes locais e nutrientes. O processo se inicia com a entrada
da bactria por meio de partculas de alimentos ou gua, seguindo
at o trato digestivo, onde podem ser mantidas como parte
residente da microflora. Outras so destrudas por processos
digestivos ou eliminadas nas fezes. No trato, o crescimento
bacteriano pode ser inibido por um conjunto de compostos
antimicrobianos produzidos pelo hospedeiro, como: proteases,
bacteriocinas (principalmente bactrias cido-lcticas), lisozimas,
perxido de hidrognio, alm de diminuir o pH pela produo de
cidos orgnicos.

5.3 Fonte de nutrientes e enzimas digestivas

O estudo dos probiticos aponta para vrios mecanismos de


ao conjunta da adio de bactrias probiticas e os efeitos
benficos de sua utilizao em seu hospedeiro. Entre esses efeitos,
comum a melhora do desempenho relacionada nutrio do
animal, seja pela produo suplementar de enzimas e vitaminas,
pelo aumento do crescimento, pelo aumento da eficincia alimentar
ou na preveno de desordens nutricionais, incluindo a pr-
digesto de fatores anti-nutricionais presentes em alguns
ingredientes.
A microflora probitica capaz de aumentar a
digestibilidade com a produo de enzimas digestivas, produo de
vitaminas do complexo B (cido flico), reduo do pH do trato
atravs da produo de cidos graxos de cadeia curta, regulao
dos movimentos peristlticos, absoro de minerais como o clcio
e sntese de colesterol.
76

A hidrlise enzimtica bacteriana pode aumentar a


biodisponibilidade de protenas, gorduras e aumentar a liberao de
aminocidos livres. Alm de cido ltico, cidos graxos de cadeia
curta, como propinico e butrico, tambm so produzidos pelas
bactrias lticas. Quando absorvidos, esses cidos graxos
contribuem para o pool de energia disponvel do hospedeiro e
podem proteger contra mudanas patolgicas na mucosa do clon.
Alm disso, uma concentrao mais elevada de cidos graxos de
cadeia curta auxilia na manuteno de um pH apropriado no lmen
do clon, crucial para a expresso de muitas enzimas bacterianas
sobre compostos estranhos e sobre o metabolismo de carcingenos
no intestino.
Adicionalmente, o butirato, alm de fornecer energia para as
clulas epiteliais e proteo contra enterites, aumenta a
proliferao e diferenciao dessas clulas, aumentando a altura
das vilosidades intestinais e, consequentemente, a absoro de
nutrientes.
Estudos demonstram que a microbiota intestinal
influenciada pela composio da dieta. Descreveram que, para
peixes onvoros (tilpias e jundis) alimentados com diferentes
fontes de carboidratos na dieta, houve alterao na microbiota
intestinal, influenciando nveis de bactrias amilolticas,
celulolticas, lipolticas, proteolticas e bactrias totais cultivveis
nos tratos dos peixes amostrados.
Aps a passagem pelo estmago, na colonizao ou mesmo
durante a passagem pelo trato intestinal, as bactrias usam diversas
fontes de acares (carboidratos) para seu crescimento e chegam a
produzir uma gama de enzimas digestivas durante esse processo, o
que auxilia na digesto do alimento.

5.4 Produo de compostos inibitrios

Foram isoladas e testadas, in vitro, bactrias isoladas do trato


gastrointestinal de trutas, as quais apresentaram capacidade para
inibir o crescimento de Flavobacterium psychrophilum, o agente
causador da doena de gua fria, descobrindo, assim, algumas
cepas com o potencial de reduzir ou controlar tal doena
(BALCAZAR, 2007; 2007b) isolaram cepas probiticas de truta-
77

arco-ris e carpa (Ciprinus sp.) que demonstraram bons resultados


na reduo da mortalidade quando os hospedeiros foram infectados
com Bacillus sp. e A. sobria, respectivamente.
As bactrias cido-lticas so capazes de secretar peptdeos
antimicrobianos e so utilizadas na conservao de alimentos,
assim como como promotoras de sade em humanos e animais.
Bacteriocinas produzidas por bactrias cido-lticas so
classificadas em trs grupos principais - (i) lantibiticos, (ii) no-
lantibiticos, pequenos peptdeos termoestveis, e (iii) grandes
protenas lbeis ao calor - sendo o dos lantibiticos o grupo mais
documentado e explorado industrialmente.
Estudos indicam que estas substncias probiticas
antibacterianas exercem seus efeitos inibitrios de patgenos
sozinhas ou sinergicamente. Cepas de Lactobacillus produzem
amplo grupo de bacteriocinas com sequncias divergentes. Esses
peptdeos apresentam um espectro relativamente estreito de
atividade e, na sua maior parte, so txicos para bactrias Gram-
positivas, como Lactococcus, Streptococcus, Staphylococcus,
Listeria e micobactrias. O principal mecanismo de ao por
meio da formao de poros na membrana citoplasmtica de
bactrias sensveis, podendo tambm interferir nas atividades
essenciais de enzimas em espcies mais sensveis.
Na dieta, os cidos orgnicos funcionam como agentes de
conservao, reduzindo o pH do alimento, inibindo o crescimento
microbiano e diminuindo a absoro de organismos patognicos.
No trato intestinal dos animais, os cidos orgnicos inibem o
crescimento de bactrias, principalmente as Gram-negativas. Os
cidos na sua forma no ionizada entram pela parede das bactrias
e realizam a liberao de prtons no citoplasma, onde elas
consomem uma grande quantidade de ATP para exportar os
prtons do interior da clula para fora, tentando manter o equilbrio
do pH intracelular. Esse gasto de ATP resulta em uma depleo de
energia celular e, posteriormente, na morte.
78

6 IMUNOMODULAO

6.1 Efeito nas clulas imunolgicas da mucosa intestinal

A proteo contra patgenos dos probiticos causada


atravs da competio pela adeso da parede do intestino bem
estudada em peixes e comprovada
O aumento da concentrao de linfcitos T no intestino de
larvas de robalo (Dicentrarchus labrax) alimentadas com bactria
probitica foi relatado recentemente por PICCHIETTI (2009), que
comprovou o esperado, ou seja, que os linfcitos esto presentes
em abundncia no muco da parede intestinal de peixes. Em
telesteos, o nvel de organizao do sistema linfide associado ao
intestino inferior ao de mamferos, porm mais difundido,
contendo uma grande quantidade de clulas linfides, macrfagos,
eosinfilos e neutrfilos granulares. Por outro lado, ainda no
existe consenso sobre a presena de clulas dendrticas em peixes.
Dentre essas clulas, destacam-se os macrfagos
encontrados em carpas, os quais possuem grande capacidade
ligante. Essas clulas podem carregar antgenos do lmen para
posterior degradao na superfcie do intestino. Os granulcitos
(neutrfilos, eosinfilos e basfilos) em geral possuem capacidade
de produzir e liberar triptase, peptdeos antimicrobianos como
lisozima, piscidina, entre outros; os quais so altamente
relacionados com respostas inflamatrias no intestino.

6.2 Interao com clulas imunes

As concentraes de clulas sanguneas em geral, assim


como os parmetros hematolgicos sofrem alteraes positivas em
peixes alimentados com cepas de bactrias probiticas. Essas
alteraes podem ser tanto em quantidade como qualidade. Por
exemplo, o valor do hematcrito (quantidade de clulas vermelhas
em circulao) aumenta significativamente em tilpias-do-nilo
alimentadas com uma mistura de probitico (Bacillus subtilis e
Lactobacillus acidophilus), como comprovado pelo estudo de Aly
et al. (2008a).
79

Os leuccitos so clulas de defesa dos peixes, que


desempenham um papel importante durante uma infeco.
Acredita-se que essas clulas comportam-se da mesma maneira que
em outros vertebrados, nos quais os probiticos interagem com as
clulas do sistema imune atravs de clulas especializadas do
epitlio do intestino, induzindo assim a sua multiplicao. Essa
ativao e multiplicao de leuccitos totais foi observada em
tilpias alimentadas com L. plantarum; em trutas alimentadas com
Bacillus e E. faecium e em juvenis de robalo (Centropomus
parallelus) alimentados com L. plantarum.
Nos trabalhos citados anteriormente de Jatob et al. (2011) e
Barbosa et al (2011), tambm foi relatado aumento na
concentrao de linfcitos em peixes alimentados com cepas
probiticas. A abundncia de linfcitos no sangue pode ser
considerada um indicador de sade de peixes, uma vez que essas
clulas desempenham uma ao importante no sistema inato e
adaptativo na defesa de peixes telesteos. Outros trabalhos relatam
aumento de linfcitos sanguneos em robalos, em tilpias e em
trutas-arco-ris, aps alimentao com dietas contendo probiticos.
Os linfcitos-B constituem a defesa inata dos peixes,
enquanto os linfcitos-T so responsveis por respostas mediadas
por outras clulas, ou seja, precisam de um estmulo prvio. Porm
poucos estudos demonstram a relao de aumento ou reduo
dessas clulas com a alimentao de peixes com bactrias
probiticas presentes na dieta .
As imunoglobulinas so produzidas e secretadas pelos
linfcitos-B como anticorpos e desempenham um papel
imunolgico importante em peixes telesteos. O nvel de
imunoglobulina em trutas-arco-ris aumentou significativamente
aps alimentao com probitico aps apenas uma semana. Esse
resultado foi confirmado por Panigrahi et al. (2005), onde
suplementaes de bactrias acido-lticas na dieta, tanto na forma
viva como na forma morta, induziu aumento na concentrao de
imunoglobulina no plasma de trutas arco-ris.
Esse aumento na concentrao de imunoglobulinas totais no
sangue dos peixes ocorreu tambm em tilpias-do-nilo alimentadas
com Bacillus sp. e Lactobacillus sp.; e em surubins hbridos,
80

Pseudoplatystoma sp., alimentados com dietas contendo Weissella


cibaria.
Assim como descrito acima, Panigrahi et al (2009) tambm
relataram aumento da atividade fagoctica em peixes aps
alimentao com cepas probiticas. Esse aumento da atividade
fagoctica da parte anterior do rim pode ser visto em trutas-arco-ris
alimentadas com diferentes cepas probiticas (Lactococcus lactis
ssp, Leuconostoc mesenteroide, e Lactobacillus sakei). Porm,
deve-se tomar cuidado com a forma de administrao dos
probiticos, pois trabalhos comprovam que a forma de
administrao das cepas na dieta probitica influencia ou no na
melhor atividade de fagocitose.
As clulas fagocitrias, tais como os neutrfilos e
macrfagos, desempenham papel importante na defesa
antibacteriana, pois combatem bactrias pela produo de espcies
reativas de oxignio (ROS), entre elas os nions superxidos (O2-),
perxido de hidrognio (H2O2) e radicais livres hidroxilas (OH-),
durante a atividade respiratria.
A produo de nions superxidos foi observada por
Panigrahi et al. (2009) em trutas-arco-ris alimentadas com
probiticos, e outros estudos demonstram que a administrao de
probiticos Lactobacillus rhamnosus, em dietas de peixes,
estimulam a atividade respiratria .
Os estudos de potencial de atividade respiratria utilizam
metodologias especficas, as quais induzem essa atividade, no
significando que os peixes so capazes de manter essa
concentrao de atividade respiratria alta continuamente. Todavia,
resultados dessa atividade so controversos, pois, em linguado
(Paralichthys olivaceus), no foram observadas diferenas na
atividade respiratria quando esses foram alimentados com
Lactococcus lactis subsp. Lactis.
As citocinas so molculas sinalizadoras intracelulares que
desempenham papel central na modulao de eventos
imunolgicos e fisiolgicos em animais. O aumento da regulao
de citocinas tipo interleucina (IL1) isoladas dos leuccitos da parte
anterior do rim, fator de necrose tumoral (TNF) e fator de
transformao de crescimento (TGF) foram observados em peixes
alimentados com probitico por Panigrahi et al (2009).
81

A lisozima presente no soro dos peixes uma importante


enzima bactericida do sistema imune, porm apresenta
especificidade para bactrias Gram positivas. Por isso, estudos
enfatizando a resposta humoral em peixes apresentam resultados
controversos. O aumento da atividade srica da lisozima foi
observado por Merrifield et al. (2010) em trutas-arco-ris
alimentadas com dietas contendo Bacillus probionts e confirmada
anteriormente por Panigrahi et al. (2009). Por outro lado, Mourio
et al. (2012) no detectou diferenas na concentrao de lisozima
srica em pintados hbridos alimentados com W. cibaria quando
comparados com peixes que no receberam probitico na dieta.
Peixes telesteos possuem as duas vias de sistema complemento, a
via alternativa complementar (ACP) e a via clssica complementar
(CCP). A atividade da ACP importante nos peixes e ativada
pela deteco dos lipopolissacardeos da parede de clulas Gram
negativas e resulta na quebra da clula bacteriana. No entanto,
anticorpos ligados parede das bactrias ativam a CCP, assim,
uma maior quantidade do sistema complemento pode ser ativada
em comparao ao ACP; ou ainda, os anticorpos podem direcionar
o CCP para locais na parede bacteriana onde o sistema
complemento pode causar maiores danos s bactrias. Portanto,
peixes suplementados com probitico apresentariam melhores
respostas imunolgicas, como aumento na formao de
imunoglobulinas e maior eficincia do sistema complemento
alternativo.
Foi relatado, em trutas-marrom (Salmo trutta) e em trutas-
arco-ris (Oncorhynchus mykiss) alimentadas com bactrias cido-
lticas, o aumento da atividade srica do sistema complemento
ACP aps duas semanas de suplementao de probitico. Esse
aumento do ACP tambm ocorreu em garoupas (Epinephelus
coioides) que receberam dieta contendo B. subtilis na concentrao
de 106 e 108 UFC/mL por 14 dias. Em peixes alimentados com essa
mesma bactria, o aumento do ACP ocorreu tambm na
concentrao de 104 UFC/ml, aps 28 dias. Esses resultados
confirmam que a concentrao de bactrias probiticas influencia
na resposta do sistema complemento, assim como seu tempo de
suplementao.
82

6.3 Interferncia do quorum sensing

Outro mtodo alternativo de combate s enfermidades


bacterianas o antagonismo ao quorum sensing, mecanismo pelo
qual as bactrias coordenam a expresso de genes em resposta
densidade populacional bacteriana, produzindo e detectando
pequenas molculas sinais.
Estas molculas de comunicao bacteriana so produzidas
por muitas bactrias. Em geral, as bactrias Gram positivas usam
oligopeptdeos para se comunicar e as Gram negativas usam como
autoindutores as molculas de acil-homoserina-lactona (AHL),
podendo estar envolvidas na regulao de fatores de virulncia, os
quais somente so expressos em altas concentraes de clulas.
O quorum sensing tambm pode regular, nas bactrias,
funes como conjugao, secreo de fatores de virulncia,
produo de antibiticos, formao de biofilmes e
bioluminescncia (DEFOIRDT et al., 2004). por este motivo que
diversos trabalhos tm relatado a relao entre luminescncia e
toxicidade em vibrios patognicos para o camaro
Com a interrupo da comunicao entre bactrias
patognicas, aumentam as chances do hospedeiro resistir
infeco bacteriana, a qual no ter aumento de fatores de
virulncia, no podendo debilitar assim o sistema de defesa animal
Compostos que inibem o quorum sensing podem constituir a
nova gerao de agentes antimicrobianos com aplicaes em
diversos campos, incluindo medicina humana e veterinria,
agricultura e aquicultura e podem ser associados a interesses
comerciais. Diversas estratgias para esse combate so possveis: a
inibio da gerao das AHL, da sua disseminao e da sua
recepo.
A maioria das bactrias que produzem as AHL codificam
um ou mais genes homlogos ao luxI do Vibrio fischeri. A
expresso destes genes tem demonstrado que o LuxI- tipo protena
suficientemente necessrio para produo dos sinais de AHL. O
conhecimento sobre a gerao dos sinais pode ser explorado para o
desenvolvimento de inibidores na formao de molculas como as
AHL envolvidas no quorum sensing. Vrios anlogos como os S-
adenosylhomocysteina, S-adenosylcysteina e sinefungin tm
83

demonstrado ser potentes inibidores da sntese de AHL catalisados


pela protena RhlI da bactria de P. aeruginosa, enfatizando que
esses anlogos podem ser utilizados como inibidores dos sinais de
gerao do quorum sensing sem afetar enzimas de eucariotos.
Muitos trabalhos vm sendo realizados na aquicultura com o
isolamento de bactrias probiticas do trato intestinal de
organismos aquticos, capazes de degradar AHLs e apresentar
boas caractersticas para o uso na aquicultura. O uso de um
probitico que degrade os AHLs poderia diminuir a virulncia da
populao bacteriana, aumentando a sobrevivncia dos animais de
cultivo. Como exemplo, culturas bacterianas com a capacidade de
degradar AHLs isoladas do trato intestinal de L. vannamei
aumentaram a sobrevivncia da larvicultura de linguado europeu
ao serem adicionadas gua de cultivo.

7 CONCLUSO

O uso de probiticos no cultivo de peixes uma ferramenta


vivel para a diminuio do aparecimento de doenas e incremento
da produtividade no cultivo. Contudo, at o momento, as cepas de
bactrias probiticas comerciais so importadas, gerando
controvrsias nos resultados encontrados em estudos. Ainda assim,
ao utilizar essas cepas, introduz-se no ambiente de cultivo bactrias
exticas e alctones, cuja proliferao e eficincia so
imprevisveis. Dessa forma, fundamental a seleo de bactrias
autctones do animal, baseando-se em seu modo de ao e na
possibilidade de sua utilizao em larga escala, atravs do
desenvolvimento de tecnologias que potencializem a chance de
sucesso de sua aplicao na piscicultura.
Por fim, a utilizao de probiticos autctones isolados do
trato digestivo de peixes no ambiente de cultivo constitui uma
possibilidade para minimizar os problemas de enfermidades na
piscicultura.

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