Aspectos moleculares da transformao celular: conceitos e implicaes

Patrcia C. B. Beltro-Braga, Vernica Rodrigues Teixeira e Roger Chammas

Cncer um conjunto de doenas caracterizado pelo progressivo

acmulo de mutaes no genoma de uma clula. Estas mutaes levam a

alteraes na expresso ou funo de genes-chave para a manuteno da

homeostasia celular. Essas alteraes genticas podem converter uma clula

normal em uma clula transformada, que se caracteriza por no mais

responder aos sinais de controle de proliferao, morte e diferenciao que

governam a comunidade celular (Figura 1).

Estudos epidemiolgicos mostram que a idade um dos principais

fatores de risco para o desenvolvimento do cncer. Ou seja, o cncer uma

doena relacionada com a idade, ocorrendo mais freqentemente em pessoas

idosas. Assim, com o aumento progressivo da expectativa de vida mdia das

pessoas, a incidncia de cncer tende a aumentar. Este fato interpretado

como um aumento na probabilidade de mutaes acumularem-se no material

gentico de cada indivduo devido exposio acumulada a fatores

mutagnicos. Assim, numa situao limite, o aparecimento de uma clula

cancerosa seria praticamente inevitvel.

Entretanto, o cncer uma doena de mltiplos passos, ou seja, para

que o cncer ocorra necessrio acontecer mais de uma leso diferente no

genoma celular para que se complete o processo de transformao. Por

exemplo, para clulas de roedores em cultura adquirirem competncia

tumorignica, so necessrias pelo menos duas alteraes genticas. J para

1
clulas humanas nas mesmas condies, esse nmero sobe para quatro a sete

leses diferentes. Em adultos, estima-se que o intervalo de tempo entre a

primeira leso gentica e o aparecimento do cncer seja em torno de dez a

vinte anos. Assim, pelo tempo necessrio para seu desenvolvimento, alguns

tipos de cnceres seriam potencialmente prevenveis. A compreenso do

processo de carcinognese tem permitido o desenho de estratgias de

interveno que visam em ltima anlise prevenir o aparecimento de tumores.

Neste captulo sero discutidas as bases moleculares do processo de

transformao celular e algumas de suas implicaes para a preveno de

tumores.

Mutaes e alteraes epigenticas

Os tipos de alteraes fsicas no genoma, ou mutaes, mais

freqentemente encontradas em cncer so:

1) mutaes pontuais; quando um nico par de nucleotdeos encontra-

se alterado. o que ocorre com o gene ras, que codifica uma protena

associada sinalizao de vias de proliferao celular. Mutaes pontuais em

ras, especificamente nos cdons 12, 13 e 61 levam formao de uma forma

constitutivamente ativada do produto deste gene. Clulas com esta alterao,

freqentes em adenocarcinomas de pncreas por exemplo, proliferam de

maneira desordenada mesmo na ausncia de estmulos externos. Mutaes

pontuais podem tambm levar gerao de cdons de terminao, que

levariam produo de protenas truncadas.

2) rearranjo gnico; quando genes ou fragmentos de genes so

movidos de lugar, por mecanismos como inverso ou translocao, ou

2
eventualmente perdidos (deleo). Rearranjos gnicos podem levar ao

truncamento de genes (por exemplo, por alteraes da fase de leitura de

genes). Translocaes podem levar gerao de genes quimricos, como por

exemplo na translocao recproca entre os cromossomos 9 e 22 (gerando

cromossomo Philadelphia), freqente na leucemia mielide crnica, que origina

o gene de fuso bcr-abl, com potencial transformante. Translocaes tambm

podem mudar as relaes entre genes e elementos reguladores da transcrio

destes genes. o que acontece na translocao entre os cromossomos 8 e 14

associada a linfomas de Burkitt em algumas regies da frica. O gene myc,

que codifica uma protena nuclear que est associada ao controle de

transcrio de genes-chave para o controle do ciclo celular, posiciona-se frente

ao promotor dos genes das imunoglobulinas, um promotor forte em linfcitos. A

transcrio desregulada de myc um dos eventos necessrios para a

transformao maligna destes linfcitos.

3) amplificao gnica, quando h aumento no nmero de cpias de

um alelo. Citogeneticamente, a amplificao gnica est associada formao

de regies homogeneamente coradas em cromossomos, ou ainda ao

aparecimento de mini-cromossomos extranumerrios. Tcnicas de localizao

de alelos em cromossomos, baseadas em tcnicas de hibridao in situ

atualmente utilizadas na clnica permitem a identificao deste fenmeno, que

ocorre, por exemplo, em adenocarcinomas de mama, onde o gene do receptor

associado a proliferao celular, erbB2, encontra-se amplificado.

Tumores apresentam ainda uma srie de alteraes epigenticas,

caracterizadas como alteraes na expresso gnica, onde se observam

3
diferentes conseqncias fenotpicas, sem haver nenhuma mudana na

seqncia de DNA. Um mecanismo freqentemente descrito para estas

alteraes a variao no grau de metilao do promotor de genes. De

maneira geral, porm no absoluta, a hipermetilao de regies do promotor

associa-se ao silenciamento da transcrio de genes; enquanto a

hipometilao pode estar associada transcrio desordenada destes genes.

Em tumores humanos, por exemplo, o silenciamento do gene regulador do ciclo

celular CDKN2a (Cyclin-Dependent Kinase iNhibitor) que codifica duas

protenas com funes supressoras do aparecimento de tumores p14 e p19ARF

ocorre por hipermetilao de seu promotor.

Um dos mecanismos associados flutuao da expresso de genes

devida a variaes da metilao a reorganizao da cromatina. Esta

reorganizao depende do grau de interao do DNA com protenas da classe

das histonas. O estado de acetilao das histonas altera a estrutura da

cromatina: a acetilao de histonas afrouxa a interao entre o DNA e estas

protenas, favorecendo a transcrio gnica; a desacetilao de histonas est

associada ao bloqueio da transcrio de alguns genes. Duas classes de

enzimas podem afetar a acetilao de histonas: histono-acetiltransferases

(HATs), que adicionam um grupo acetil, e histono-deacetilases (HDACs), que

removem um grupo acetil, e dessa forma provoca a represso transcricional de

genes que esto envolvidos no controle do ciclo celular, diferenciao e/ou

apoptose.

Mutaes so eventos mais freqentes do que geralmente se imagina.

Claramente, uma pequena frao delas leva ao desenvolvimento de cnceres.

Postula-se que as mutaes que ocorrem freqentemente em todos os

4
organismos garantem a variabilidade gentica, tida como necessria para a

evoluo das espcies. De maneira anloga ao que acontece com as espcies,

um processo micro-evolutivo tambm ocorre em nosso organismo, porm

durante o tempo de vida de um indivduo.

Vrios mecanismos moleculares atuam na manuteno da integridade

dos genomas celulares. Uma vez que uma clula mutada, mecanismos

operantes ou reparam as leses no DNA (Figura 2), ou ento induzem a morte

da clula mutada. A eficincia deste processo no , porm, absoluta. Na falha

ou no relaxamento destes mecanismos, as clulas mutadas no so excludas

nem reparadas. Mutaes que confiram uma vantagem seletiva clula

mutada (por exemplo, crescimento autnomo ou evaso dos processos de

morte celular) so fixadas na populao de clulas de um organismo. As

vantagens conferidas s clulas mutadas culminam com a expanso da

populao destas clulas (expanso clonal), dando origem a um eventual

tumor. Assim, os tumores originam-se freqentemente de uma nica clula

(origem monoclonal). Contudo, medida que as mutaes progressivamente

se acumulam, freqente observar o aumento da heterogeneidade da massa

tumoral, devido ao aparecimento de subpopulaes. Esta heterogeneidade

pode ter uma base gentica, com alteraes fsicas do DNA das clulas

tumorais, ou ser devida a flutuaes no nvel de expresso de conjuntos de

genes (base epigentica). A interao entre clulas de diferentes

subpopulaes tumorais pode modular o processo de carcinognese. Esta

noo vem sendo conhecida como efeito de comunidade, e tem um grande

impacto nas fases mais tardias do processo de carcinognese.

Agentes mutagnicos

5
 As mutaes podem ser causadas por erros durante o processo de

replicao ou por mutagnicos endgenos, como as espcies reativas de

oxignio, ou induzidas por agentes externos. De maneira didtica, os agentes

externos so divididos em trs classes:

1) Agentes fsicos, como luz ultravioleta e radiaes ionizantes;

2) Agentes biolgicos, como alguns vrus, que se integram ao genoma

celular interrompendo seqncias gnicas ou promovendo rearranjos gnicos;

3) Agentes qumicos, como os hidrocar bonetos policclicos aromticos e

nitrosaminas. Alguns carcingenos qumicos so inativos e se tornam

potencialmente lesivos ao DNA aps terem sido modificados para uma forma

mais reativa por processos metablicos, como por exemplo por enzimas

intracelulares conhecidas como citocromo P-450 oxidases. Essas enzimas

normalmente atuam na converso de toxinas ingeridas em compostos

inofensivos que so facilmente excretados. Entretanto, sua atividade sob certos

agentes qumicos gera produtos que so altamente mutagnicos, como

observado com uma toxina fngica, a aflatoxina B1 (vide abaixo). As enzimas

detoxificantes como as citocromo P-450 oxidases apresentam um grande

nmero de variantes polimrficas nas populaes humanas. Diferentes

variantes polimrficas podem ter maior ou menor atividade sobre os vrios

agentes pr-carcinognicos, sugerindo uma possvel explicao para as

diferenas quanto susceptibilidade a diferentes tipos de cncer em

populaes humanas definidas.

As etapas da carcinognese

O processo de carcinognese classicamente dividido em quatro fases:

(i) iniciao; (ii) promoo; (iii) manuteno e (iv) progresso tumoral.

6
 No incio do processo de carcinognese ocorre uma alterao no DNA.

Para gerar -se a doena, necessrio que esta mutao seja herdvel, isto

seja transmitida para as clulas filhas. Essa alterao inicial recebe o nome de

iniciao. Como j mencionamos anteriormente, somente uma alterao no

DNA no suficiente para causar o cncer. So necessrias vrias mutaes

em seqncia, que no sejam letais para a clula. Mutaes ocorrem em

qualquer parte do genoma, porm o efeito deletrio que provocam s

contribuir para o desenvolvimento do cncer se ocorrerem em classes de

genes especficas. As mutaes responsveis pelo desenvolvimento do cncer

ocorrem preferencialmente em duas classes de genes: nos genes supressores

de tumores e nos protoncogenes. Mais recentemente alteraes em genes

associados ao reparo de DNA tm sido relatadas em diferentes tipos de

cncer, sendo freqentemente associados s sndromes hereditrias que

cursam com o desenvolvimento de tumores. Alguns exemplos de

protoncogenes e genes supressores de tumor esto listados nas tabelas I e II.

Genes supressores de tumores codificam protenas com funes

especficas que atuam, por exemplo, impedindo o acumulo de mutaes no

genoma da clula, e portando garantindo a integridade do genoma, como o

produto do gene TP53, ou controlando a progresso da clula ao longo das

fases do ciclo celular, como os produtos dos genes Rb e os inibidores de

quinases dependentes de ciclinas, como os produtos dos genes WAFp21 e

CDKN2a (p14). Os produtos destes genes atuam em diferentes nveis de

regulao, como no processo de transcrio e transduo de sinal. Estudos

moleculares permitiram a identificao de vrios genes supressores de tumor

(Tabela I).

7
 O gene supressor de tumor mais bem estudado em tumores humanos

o TP53. Este gene codifica uma fosfoprotena nuclear (p53) que tem papel

ativo na parada do ciclo celular e induo da expresso de genes de reparo de

DNA lesado. Quando h uma leso no DNA o nvel de p53 na clula aumenta,

e aps o reparo o nvel diminui. Dependendo da intensidade do agravo, p53

pode induzir a morte das clulas geneticamente alteradas (via induo do gene

pr-apopttico bax (Figura 1 e 2).

Protoncogenes so genes celulares normais que participam do controle

das funes celulares vitais como proliferao, diferenciao, migrao e morte

celular (apoptose). De maneira geral, os protoncogenes podem ser divididos

em quatro classes de genes que codificam as seguintes protenas: fatores de

crescimento, receptores para fatores de crescimento, transdutores de sinal e

fatores de transcrio (Tabela II). Quando esse genes se encontram mutados

ou sua expresso descontrolada por alguns dos mecanismos de rearranjo

gnico mencionados acima, diz-se que esto ativados, e passam a receber o

nome de oncogenes.

As mutaes em genes supressores mais freqentes so do tipo

deleo e mutao de ponto. Elas atuam de maneira rec essiva, ou seja, ambos

os alelos desses genes devem ser perdidos ou inativados para que sua funo

celular seja afetada. Genes supressores de tumores como TP53 e Rb so

alvos da ao de oncoprotenas virais, como os produtos dos genes E6 e E7 de

HPVs de alto risco, respectivamente. A hipermetilao de promotores dos

genes supressores de tumor representa um mecanismo freqente de

inativao transcricional.

8
 Nos protoncogenes as mutaes mais freqentes so por substituio

(mutao pontual) ou amplificao, e essas mutaes atuam de maneira

dominante, onde apenas um alelo precisa estar mutado para a ativao do

gene. Em relao ao promotor, postula-se que a hipometilao do promotor

est associada transcrio descontrolada de oncogenes.

A etapa seguinte do processo de carcinognese a promoo, onde as

clulas geneticamente alteradas, ou seja, iniciadas, sofrem o efeito de agentes

que no so mutagnicos, porem que promovem a expanso da populao

celular que carrega uma mutao inicial. Leses causadas por infeces com

alguns parasitas, bactrias e vrus podem atuar como promotores de cncer.

Por exemplo, infeco do estmago com a bactria Helicobacter pylori,

associada gastrite , parece ser a principal causa do cncer de estmago. J o

cncer de bexiga parece estar associado com a infeco com um platelminto, o

Schistosoma haematobium . A hepatite causada pelo vrus da hepatite B (VHB),

tem sido bastante associada ao desenvolvimento de cncer heptico quando

se manifesta a forma crnica da doena. De maneira semelhante, a

persistncia da infeco pelo vrus da hepatite C um importante fator de risco

para o desenvolvimento de cncer heptico. A persistncia da infeco levaria

a uma exposio descontrolada a fatores que regulam a transcrio de genes

associados proliferao celular, como o caso do fator de transcrio Stat 3,

cujo acmulo na forma fosforilada est associado ao desenvolvimento de

hepatocarcinomas.

O cncer s ocorrer se as clulas forem expostas primeiramente a um

iniciador e seqencialmente a um agente promotor. Essa ordem deve ser

respeitada, caso contrrio no h a desenvolvimento de cncer. Se a

9
exposio ao promotor no ocorrer imediatamente aps a exposio ao

iniciador, ainda assim pode haver o desenvolvimento do cncer. Alguns

agentes mutagnicos podem eventualmente tambm desencadear a promoo

tumoral; estes agentes so chamados de carcingenos completos.

importante notar que nem todo agente carcinognico

necessariamente um agente mutagnico, isto , causa um dano no mater ial

gentico (genotxico). Estes agentes atuam por diversos mecanismos, dentre

os quais dois so os principais: (1) promovem a proliferao celular

desregulada, quer diretamente por causar um dano tecidual persistente,

associado criao de microambiente pr-inflamatrio que estimule a

proliferao celular; (2) induzem o estresse oxidativo, que leva ao acmulo de

espcies reativas de oxignio com potencial genotxico.

Aps a iniciao e a promoo, h a fase de manuteno, onde as

clulas geneticamente alteradas so mantidas na populao. Isto s ocorrer:

1) se as mutaes no forem excessivas. Mutaes excessivas so deletrias;

de fato, clulas com grande instabilidade gentica so selecionadas

negativamente; 2) se as alteraes genticas estiverem associadas a maior

capacidade de proliferar em relao s clulas normais; 3) se as mutaes

levarem ao escape do processo de morte celular induzida.

Como mencionado acima, nossas clulas tm um mecanismo de reparo

do DNA. S no desenvolvemos cncer rapidamente porque nossos

mecanismos de reparo so em geral eficientes. Dessa forma, podemos dizer

que a manuteno da clula alterada significa que a mesma escapou dos

mecanismos homeostticos intracelulares, que as levariam a apoptose. Esses

mecanismos ainda no esto completamente conhecidos, porm garantem a

10
integridade do genoma celular. Se os mecanismos homeostticos

intracelulares no foram capazes de eliminar a clula tumoral, essas mutaes

sero fixadas na populao celular e sua freqncia ir aumentar medida que

as clulas se duplicam. Se os mecanismos de integridade do genoma

estiverem comprometidos (por exemplo, houver mutaes em TP53 ou em

genes de reparo), aumentar a probabilidade de mutaes se acumularem. A

progresso do tumor se manifestar em funo do acmulo destas mutaes.

Uma caracterstica essencial da clula transformada sua capacidade

de replicao sustentada, muitas vezes chamada de capacidade de replicao

infinita, um conceito ligado a caractersticas de linhagens estabelecidas em

cultura. Clulas normais tendem a dividir um nmero finito de vezes. A cada

diviso, h um progressivo encurtamento das extremidades dos cromossomos

(os telmeros). O tamanho destes telmeros funcionaria assim como um

relgio biolgico, este encurtamento se d at um tamanho limite. Quando

atingido este limite de encurtamento a clula sofre apoptose. Clulas

embrionrias, clulas progenitoras dos diferentes tecidos (stem cells ) e clulas

tumorais apresentam mecanismos de reposio destas extremidades

cromossmicas, mantendo sua capacidade de replicao indefinidamente. A

manuteno de caractersticas de replicao so geralmente associadas de

maneira inversa com o grau de diferenciao celular. Por exemplo, em um

epitlio, as clulas que apresentam as caractersticas mais diferenciadas no

proliferam; de fato, muitas vezes o processo de diferenciao celular em alguns

tecidos culmina em morte celular. Os modelos de carcinognese mais aceitos

no momento propem que a clula transformada mantm algumas das

caractersticas de clulas progenitoras, abortando os processos de

11
diferenciao celular normal. No ocorre, assim, uma "desdiferenciao"

celular. Alguns dos traos de diferenciao podem ainda ser observados em

clulas ao longo da progresso tumoral; contudo, o processo de diferenciao

em tumores incompleto e disfuncional. Esta noo tem importncia clnica em

alguns modelos, onde a base da transformao est associada a resposta

incompleta a agentes diferenciadores. A identificao dos mecanismos desta

resposta incompleta e o uso de drogas que compensem estas vias defectivas

so reas promissoras de estudo, apresentando alguns resultados positivos,

embora incompletos, no controle da progresso tumoral.

At aqui descrevemos o processo de carcinognese centrado na clula

tumoral. Atualmente, muitas evidncias indicam que as diferentes etapas da

carcinognese so moduladas pela interao entre as clulas geneticamente

alteradas (clulas tumorais propriamente ditas) e elementos do microambiente

tecidual destas clulas. De fato, a aquisio da capacidade de invaso tecidual,

a induo de formao de vasos sanguneos ou linfticos e a capacidade de

metastatizao, todas estas caractersticas associadas ao comportamento das

clulas cancerosas, so claramente dependentes de clulas no tumorais

presentes ou recrutadas para o microambiente tumoral. Estas caractersticas

da transformao celular que caracterizam as fases finais da progresso

tumoral sero discutidas em outros captulos deste livro.

Quimiopreveno

Por se tratar de uma doena na maioria das vezes de difcil tratamento,

a idia de prevenir o aparecimento do cncer atrai diversos pesquisadores para

a rea da quimiopreveno. Quimiopreveno pode ser definida como o uso de

12
compostos sintticos e naturais (encontrados em alimentos) para intervir

precocemente em estgios pr-cancerosos da carcinognese, inibindo,

retardando ou revertendo a carcinognese, assim, um agente quimiopreventivo

deve atuar em alvos moleculares e celulares especficos, como nos processos

de inflamao, vias de transduo de sinal e nos processos de metilao e

acetilao de histonas.

Diversos protocolos tm sido avaliados na tentativa de se reduzir os

riscos de desenvolvimento do cncer, usando-se agentes quimiopreventivos.

Esses estudos so baseados em experincias anteriores com animais em

laboratrio, que resultaram na determinao do efeito protetor de diversas

substncias no desenvolvimento de cncer experimental.

Agentes quimiopreventivos devem ser no txicos e relativamente livres

de efeitos colaterais, pois eles tm de ser administrados em pessoas saudveis

por longos perodos. Desta forma devem ser preferencialmente administrados

oralmente, como plulas, alimentos ou bebidas modificadas. Os alimentos so

uma fonte das mais promissoras contendo componentes que podem ser

usados na quimiopreveno. Vegetais e frutas podem diminuir o risco de

desenvolvimento do cncer. Entretanto, a identificao e isolamento das

substncias ativas como agentes quimiopreventivos no necessariamente

simples.

Uma grande variedade de agentes quimiopreventivos vem sendo

estudada desde 1990. Aproximadamente 2000 compostos naturais e sintticos

tm demonstrado, em modelos experimentais, atividade quimiopreventiva.

Entre estes compostos encontram-se inibidores hormonais (anti-estrognios),

anti-inflamatrios, antioxidantes e outros componentes derivados da dieta. A

13
seguir comentaremos sobre alguns agentes quimiopreventivos que j possuem

resultados em ensaios clnicos com humanos e seu modo de ao. A maior

parte dos estudos visa a preveno secundria, isto , acaba recaindo sobre

pacientes que j tem o diagnstico de cncer. A analise-se o impacto destes

agentes na sobrevida livre de doena na vigncia dos tratamentos

convencionalmente preconizados. Em menor proporo, h tambm os

estudos de preveno primria, que avalia populaes sadias com risco

aumentado de desenvolvimento de tumores de maneira comparativa a grupos

controle.

Iniciao como alvo para quimiopreveno: o caso da aflatoxina

Aflatoxinas so substncias produzidas por fungos que so

freqentemente encontradas como contaminantes de alimentos como o milho,

amendoim, molhos de soja e gros de soja fermentados. A aflatoxina B1

(AFB1) por exemplo, aps sofrer modificao por ao do citocromo P450

ativada, formando adutos com o DNA (aflatoxina N7-guanina). A formao

destes adutos est associada a mutaes do tipo transverso, onde h a

substituio de G (guanina) para T(timina) no DNA. A presena de aflatoxina

N7 -guanina na urina um indicador de exposio a aflatoxina e est associada

a um risco relativo de 2 a 3 vezes maior para o desenvolvimento do carcinoma

hepatocelular (HCC).

Diversas anlises mutacionais no gene supressor de tumor TP53 em

indivduos com HCC em populaes da China e frica que foram expostas a

aflatoxina mostraram altas freqncias de transverses de G para T,

especialmente no cdon 249. Esta mutao ocorre no domnio de ligao de

14
TP53 ao DNA, interferindo com a funo normal deste gene supressor de

tumor.

Como a contaminao de aflatoxina na comida um problema difcil de

ser completamente eliminado, programas de preveno secundria

(quimiopreveno) so altamente desejveis. Ditioltionas, encontrados em

vegetais crucferos com brcoles, couve-flor e repolho, so potentes inibidores

do citocromo P-450. Assim, seu uso bloquearia a ativao da aflatoxina,

bloqueando a etapa de iniciao (Figura 3). Um derivado sinttico de ditioltiona

(Oltipraz) inibe o desenvolvimento de tumores em animais e atualmente est

sendo estudado em humanos. Entretanto, enquanto a avaliao da eficcia de

Oltipraz est em andamento, outros agentes quimiopreventivos tambm tm

sido alvo de estudos, como o caso da clorofilina.

A clorofilina, encontrado em vegetais de colorao verde, uma mistura

de sais de sdio e cobre da clorofila, utilizada como corante de alimentos. Ela

atua diminuindo a biodisponibilidade de AFB1 e seus metablitos, por diminuir

sua absoro e aumentando sua excreo, assim como inibindo a formao

de adutos derivados de AFB1. Recentemente, foi feito um ensaio clnico em

uma populao na China, exposta a aflatoxinas em sua dieta e com alto risco

de desenvolvimento subseqente de HCC. Nesse estudo, esses indivduos

ingeriram clorofilina e foi constatada uma reduo de 55% de aflatoxina N7-

guanina na urina, sugerindo que a clorofilina poderia ser usada contra os

efeitos da AFB1.

Promoo como alvo para preveno

Muitos alimentos possuem grandes quantidades de flavonides, como a

genistena por exemplo. Es tas substncias tm sido estudadas como potentes

15
inibidores de tirosino-quinases, enzimas associadas a resposta proliferativa.

Alteraes na funo destas enzimas so frequentes na fase de promoo.

Alm de modular a resposta proliferativa, h evidncias de que genistena

tambm induza o processo de morte celular (apoptose), por interferir com o

grau de fosforilao de protenas que atuam no controle da mitose (Figura 4).

Ainda,genistena inibe a ativao do fator de transcrio nuclear, NF-kB e a via

de sinalizao Akt, ambos envolvidos na manuteno de um balanceamento

entre a sobrevivncia celular e a morte celular programada (Figura 1). O fator

de transcrio nuclear NFkB desempenha um papel importante no processo

inflamatrio. Produtos naturais (como curcumin e resveratrol), possuem

atividade antiinflamatria e anticarcinognica, pois bloqueiam a atividade

transcricional de NF-kB.

Vitaminas e anti-oxidantes como agentes quimiopreventivos

Cncer de prstata o tumor mais comumente diagnosticado e o

segundo relacionado com tumores que levam ao bito de homens em paises

desenvolvidos. Dados epidemiolgicos mostram que variaes tnicas e

geogrficas na incidncia e mortalidade do cncer de prstata podem estar

relacionadas ao consumo de substncias na dieta, em especial anti-oxidantes.

Essas substncias incluem vitamina D e E, soja, licopene e selnio. Entretanto,

a ingesto de grandes quantidades de vitamina D prejudicial a sade,

causando hipercalcemia. J anlogos sintticos de vitaminas D (deltanides)

que tm ao antiproliferativa e baixo risco de provocar hipercalcemia so

eficientes na diminuio do risco de desenvolvimento de cncer coloretal em

humanos.

16
 Estudos clnicos para determinar o valor preventivo de vitaminas A e E

para cncer de pulmo em jovens fumantes foram um dos primeiros ensaios

clnicos de quimiopreveno. Nesse estudo utilizaram -se altas doses de

vitamina E (alfa-tocoferol) associado com beta-caroteno ou vitamina A (retinol).

Embora o estudo tenha falhado em indicar qualquer grau de proteo contra o

cncer de pulmo; o grupo de indivduos que recebeu vitamina E (sozinha ou

associada com beta-caroteno) apresentou uma diminuio de 34% no risco

para desenvolvimento de cncer de prstata, e de 16% para cncer de

intestino (coloretal).

Outro alvo potencial para quimiopreveno so os receptores de

hormnios esterides, como o receptor de estrgeno. Desenvolvido

originalmente como um anti-estrognico, o tamoxifeno vem sendo utilizado em

protocolos de quimiopreveno com resultados bastante promissores. Esta

droga um modulador seletivo do receptor de estrognio (SERM) que tem

atividade antiestrognio em um rgo, como mama, e pr-estrognio em outro,

como osso e tero. A atividade antiestrognio em mama desejvel, pois o

estrognio aumenta o crescimento de quase todas as clulas de cncer de

mama durante os estgios iniciais da carcinognese. Por outro lado, a

exposio do epitlio uterino a tamoxifeno pode levar ao desenvolvimento de

carcinoma endometrial. Novas drogas com o o raloxifeno apresentam menos

efeitos adversos sobre o tero e sua utilizao alvo de estudos clnicos.

Outro grupo de agentes quimiopreventivos que parece promissor so os

rexinides. Estas molculas se ligam seletivamente a receptores retinides X,

apresentando grande capacidade de modular a ao de muitos fatores de

17
transcrio. Em modelos animais esta droga tem demonstrado ao preventiva

contra cncer de mama.

Modificadores da estrutura da cromatina

Diferentemente das alteraes genticas, as mudanas epigenticas

(metilao e desacetilao) so potencialmente reversveis. Dessa forma, h a

possibilidade de reativar genes que esto silenciados epigeneticamente. A

estrutura da cromatina pode ser modificada com o uso de drogas que

aumentem a acetilao de histonas (inibidores de histono-deacetilases) ou

promovam a desmetilao de resduos de citidina no DNA. Alguns genes

silenciados por metilao podem ser re-expressos usando agentes

desmetilantes como 5-azacitidina e 5-aza-2-deoxiacitidina. Estes compostos e

seus derivados tm sido usados como agentes quimiopreventivos em ensaios

clnicos e vm mostrando alguns resultados teraputicos, principalmente em

tumores hematopoiticos. No entanto, as doses dessas drogas usadas

atualmente so bastante txicas. Essas dosagens podem ser reduzidas se

forem administradas em conjunto com agentes inibidores de histono-

deacetilases como o fenilbutirato.

Vrios inibidores de histono-deacetilases tm demonstrado capacidade

de inibir o crescimento do tumor in vitro e in vivo a quantidades que so pouco

ou no txicas. Algumas dessas drogas j esto sendo testadas em protocolos

clnicos. Estes compostos atuam de maneira seletiva alterando a transcrio de

cerca de 2% dos genes expressos. Os inibidores de histono-deacetilases

incluem aminocidos de cadeia curta como o 4-fenilbutirato e o acido valprico;

cidos hidroxmicos como SAHA e tricostatina-A (TSA), entre outros;

tetrapeptideos cclicos como trapoxin, apidicin e FK-228; e benzamidas como

18
MS-275. cidos hidroxmicos apresentam a capacidade de interagir com o stio

catallico de histono-deacetilases. Inibidores de histono-deacetilases causam

parada de ciclo celular em G1 e/ou G2, apoptose e/ou diferenciao de clulas

transformadas em cultura. Os efeitos de inibio de crescimento tm sido

documentados em quase todos tipos de clulas transformadas, incluindo

linhagens de clulas que surgem de tumores hematolgicos (leucemias,

linfomas e mielomas) e epitelial (cncer de mama, bexiga, ovrio, prstata e

pulmo).

Os inibidores de HDACs butirato, TSA, oxamflatin, MS -275 e SAHA

induzem a expresso do gene CDKN1A, que codifica um inibidor da quinase

dependente de ciclina, WAF1 (p21, Figura 2). WAF1 inibe a progresso do ciclo

celular, bloqueando a atividade da quinase dependente de ciclina e,

conseqentemente provocando a parada do ciclo em G1.

Genes que so induzidos por inibidores de HDACs em clulas

transformadas so os seguintes: CDKN2A, que codifica INK4A tambm

conhecido como p16, e os genes para ciclina E, todos reguladores do ciclo

celular. Uma grande variedade de inibidores de HDACs demonstraram

capacidade de inibir o crescimento de tumor em modelos animais. O anlogo

do butirato, fenilbutirato tem demonstrado capacidade de inibir o crescimento

de tumor in vivo. Muitos estudos com derivados do butirato mostraram que so

necessrias doses muito altas desses compostos. Inibidores de HDACs como

TSA, CHAP1, CHAP31, SAHA, piroxiamida e oxamflatin administrados

intravenosamente e intraperitonialmente, inibiram o crescimento de tumores de

mama, prstata, pulmo e estmago em modelos animais. Alm disso, esses

compostos tambm foram capazes de inibir a progresso de neuroblastomas e

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leucemias com pouca toxicidade. SAHA e MS -275 administrados oralmente

foram eficientes na supr esso do crescimento de tumores em ratos ou

camundongos. Inibidores de HDACs provocam uma acumulao de histonas

acetiladas no tumor e tecidos normais. O aumento de histonas acetiladas

funciona como um marcador biolgico da atividade de HDACs, e tem sido

usado em estudos clnicos em pacientes com cncer.

H um longo caminho a se percorrer at a consolidao de estratgias

quimiopreventivas para o cncer. Como as bases biolgicas da carcinognese

continuam sendo elucidadas, diferentes estratgias para quimiopreveno

certamente surgiro. O relativo sucesso dos protocolos clnicos iniciais,

destinados a prevenir cncer em indivduos com alto risco desta doena sugere

que quimiopreveno seja uma estratgia possvel e sensata. Investimentos

sero necessrios para a formao de recursos humanos na rea de pesquisa

clnica, nutricional e em educao para preveno, para assim explorar as

perspectivas abertas pela melhor compreenso das etapas da carcinognese.

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Legendas das Figuras

Figura 1. A manuteno do nmero de clulas em qualquer tecido normal

depende do equilbrio entre proliferao e morte celular. Diversos
mecanismos homeostticos determinam este equilbrio. Fatores de crescimento
e fatores de sobrevivncia favorecem o aumento do nmero de clulas em um
tecido; enquanto fatores pr-apoptticos, isto que promovem a morte celular,
e fatores anti-proliferativos favorecem a diminuio deste nmero de clulas.
No equilbrio, o nmero de clulas em uma populao tende a ser mantido:
fatores de crescimento se contrape a fatores anti-proliferativos, assim como
fatores pr-apoptticos se contrape a fatores de sobrevivncia. Genes -chave
da homeostasia celular, como por exemplo o gene supressor de tumores TP53
atuam interferindo de maneira controlada sobre este balano. Em tumores, o
aumento do nmero de clulas o resultado lquido do desbalano entre
proliferao e morte (proliferao >> morte), que poderia ser obtido pela
resposta descontrolada a fatores de proliferao; diminuio da sensibilidade
(ou evaso) aos mecanismos pr-apoptticos; diminuio da sensibilidade a
fatores anti-proliferativos e at mesmo resposta descontrolada a fatores de
sobrevivnc ia.

Figura 2. Respostas celulares a agentes mutagnicos. A exposio das

clulas a agentes mutagnicos endgenos e exgenos bastante freqente.
As leses causadas no DNA por estes agentes, no entanto, geralmente no se
propagam. Diversos mecanismos de reparo de DNA atuam em clulas que
sofreram agravos genotxicos revertendo a clula mutada ao seu estado
normal. Dependendo da intensidade do agravo, as clulas alteradas so
excludas da populao de clulas do organismo. O gene supressor de tumor
TP53 atua no controle do processo de reparo. Quando a funo de TP53 est
preservada, em resposta ao agravo genotxico, h induo de expresso de
genes como p21WAF, um inibidor universal de quinases dependentes de
ciclinas, que leva s clulas a uma parada no cic lo celular; genes de reparo so
tambm induzidos. Em consequncia disto, as clulas mutadas so reparadas
e revertem ao estado normal. Alternativamente, p53 pode tambm induzir a
transcrio de bax, por exemplo, que atua induzindo o processo de morte
celular (apoptose). Quando o gene TP53 est mutado, estes mecanismos no
esto operantes, favorecendo a manuteno da clula mutada na populao.
Se houver condies, a clula mutada sofre expanso clonal gerando um
tumor.

Figura 3. Iniciao como alvo para quimiopreveno. A aflatoxina B1

(AFB1), presente em alimentos contaminados com o fungo Aspergillus
fumigatus um pr-carcingeno, que aps metabolizada por isoformas de
citocromo P450 pode dar origem a um agente mutagnico, associado
iniciao de hepatcitos no desenvolvimento do carcinoma hepatocelular.
Infecco persistente pelo vrus da Hepatite B, associado ao desenvolvimento
da hepatite crnica ativa, atua como fator promotor para o desenvolvimento do
tumor. Inibidores de citocromo P450, como ditioltionas (Oltipraz) inibem a
ativao do carcingeno. Substncias como clorofilina ligam -se a aflatoxinas e

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derivados, diminuindo a biodisponibilidade do pr-carcingeno e competindo
com a ligao do carcingeno ao DNA.

Figura 4. A fase de promoo como alvo para quimiopreveno.

Flavonides como a genistena atuam de diversas maneiras favorecendo a
morte celular de clulas em proliferao. Genistena atua como um inibidor de
tirosino-quinases, enzimas envolvidas na transduo de sinais proliferativos,
como, por exemplo, aqueles associados ativao de receptores da famlia de
EGF (epidermal growth factor), como erbB2, frequentemente ativado em
tumores de mama e prstata. Ensaios pr-clnicos so promissores. Indutores
de diferenciao celular tambm podem ser usados nesta fase. A tentativa
seria a de reprogramar a clula iniciada a executar um programa de
diferenciao, que culminaria com o processo de morte celular.

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