FUNDAMENTOS DA ENGENHARIA

GENÉTICA
 A descoberta em meados do século passado, da estrutura das moléculas
contém informação genética abrem caminho para uma nova área do
Fundamentos da Engenharia Genética

conhecimento, a Engenharia Genética – que permite manipular

diretamente os genes de determinados organismos com objetivos práticos.

Em 1953, Watson e Crick apresentaram o modelo de

dupla hélice para a molécula de DNA – dupla cadeia
polinucleotídica antiparalela.
 Para que ocorra a expressão génica, é necessário que a informação contida no
DNA seja transcrita em RNA (por complementaridade com o DNA) e que,
posteriormente essa informação seja traduzida em proteínas.
Fundamentos da Engenharia Genética
 ENGENHARIA GENÉTICA

A partir da década de 70 do séc. XX, foi desenvolvido um vasto conjunto de

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técnicas de análise e manipulação do DNA, com implicações éticas e sociais.

➢ Foi possível abrir a molécula de DNA, extrair genes e transplantá-los

para outras células.

➢ Multiplicar alguns desses genes milhões e milhões de vezes.

➢ “Criar” novos organismos.

 Como isolar os genes sem danificar o DNA?
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▪ Durante a década de 60, diversas investigações com microrganismos permitiram a

descoberta de enzimas capazes de cortar o DNA em locais específicos

Enzimas de restrição
São capazes de reconhecer pequenas sequências específicas de
nucleótidos, cortando a molécula de DNA apenas nesses locais.
 Técnicas de manipulação de DNA
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 DNA recombinante (rDNA)

 DNA complementar (cDNA)

 DNA fingerprint

 Reacções de Polimerização em Cadeia (PCR)

 TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE (rDNA)

Intervenientes moleculares na técnica do rDNA

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Ferramentas moleculares Características

• Reconhecem determinadas sequências de DNA e

cortam aí a molécula.
•São específicas e ocorrem naturalmente em
Enzimas de restrição bactérias.
•Protegem as bactérias dos ataques por vírus, uma
vez que reconhecem e cortam sequências específicas
do DNA viral, inativando-o.
•Enzimas que voltam a ligar as moléculas de DNA,
Ligases de DNA depois de estas terem emparalhado por
complementaridade de bases.
•É uma entidade, constituída por DNA, que transfere
Vector DNA de uma célula ou organismo dador para outra
célula ou organismo receptor.
 TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE (rDNA)

Permite produzir moléculas de DNA a partir da combinação de genes com

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proveniências diferentes

zona de restrição zona de restrição

Enzima de restrição

extremidades coesivas extremidades coesivas

Ligase do DNA

DNA recombinante
 TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE (rDNA)

Vectores utilizados para obter rDNA

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Genes Bacteriófagos
com
interesse

Plasmídeos
 TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE (rDNA)

Vectores utilizados para obter rDNA

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 Bacteriófagos: vírus que atacam bactérias introduzindo no seu interior DNA viral.

Vírus
bacteriofagoT4
 TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE (rDNA)

Vectores utilizados para obter rDNA

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 Plasmídeos: Pequenas moléculas circulares de DNA existentes em determinadas

bactérias, que se multiplicam autonomamente. Geralmente, os genes dos plasmídeos
não são essenciais à sobrevivência da bactéria, podendo ser-lhes retirado.
 TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE (rDNA)
Bactéria Célula humana
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1) Plasmídeos isolado e
cortados pela 1) Genes com interesse
mesma enzima de isolados e cortados por
restrição enzimas de restrição

2)DNA humano e plasmídico são postos em contacto

3)Adiciona-se ligase do DNA

4) Obtenção de rDNA
5) O plasmídeo recombinante é
6) Só as bactérias que contêm o plasmídeo
colocado numa cultura bacteriana
recombinante se reproduzem formando
e entra para algumas bactérias
colónias
 TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE (rDNA)
Produtos obtidos pela técnica do rDNA e suas aplicações
Além da insulina, muitas outras substâncias são actualmente produzidas à custa da
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tecnologia do DNA recombinante.

SUBSTÂNCIA APLICAÇÃO
Hormona do crescimento Disfunção hipofisária
Factor do crescimento da epiderme Processos de cicatrização de feridas
Interferão Cancro
Factores de coagulação VII, VIII e XI Hemofilia
Vacina para a hepatite Hepatite B
Teste da SIDA Despiste da SIDA
Superóxido desmutase Evita a extensão de danos após enfarte
de miocárdio
Eritropoetina Anemia

O rDNA (DNA recombinante)permite a clonagem de genes responsáveis pela produção de

determinadas substâncias codificadas por esse gene e também a criação de bibliotecas
genómicas onde os genes são armazenados para posteriores utilizações.
 TÉCNICA DO DNA COMPLEMENTAR (cDNA)
 O DNA complementar (cDNA) é uma molécula de DNA sem intrões, que é
directamente transcrita numa molécula de RNA mensageiro funcional ;
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Facilita a produção de proteínas de seres eucariontes em bactérias, sendo

frequentemente usado na medicina;

A produção de cDNA é possível devido à acção da enzima transcriptase reversa

(permite produzir DNA a partir de uma molécula de RNAm, ao contrário do que
habitualmente acontece).
 TÉCNICA DO DNA COMPLEMENTAR (cDNA)
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• O RNA degrada-se
 DNA fingerprint
Devido ao facto de todos os indivíduos possuírem o seu próprio DNA, surgiu esta técnica
que permite identificação genética de indivíduos.
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Em que consiste
Amostras de DNA e enzimas de restrição

Solução-
tampão

Gel Enzimas Enzimas Enzimas

Poços

Cada amostra é inserida num poço e desloca-se no

gel sob a acção de uma corrente eléctrica.
+

Os fragmentos da molécula de DNA Como o DNA é diferente de pessoa

(carga negativa) irá migrar ao longo para pessoa, cada amostra vai ter um
do campo polarizado. percurso diferente no gel.
 DNA fingerprint

➢ Impressões digitais genéticas

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• Submetido à acção de enzimas de restrição o DNA fragmenta-se em porções de

diferentes tamanhos e pesos moleculares.

• Estas pequenas porções de DNA, sujeitas a electroforese, revelam um padrão de

fragmentos de restrição que é único para cada indivíduo, funcionando como um
“código de barras” genético.
 DNA fingerprint

➢ Vantagem:
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Esta técnica, muito utilizada em ciência forense e problemas de paternidade,

permite identificar os suspeitos utilizando pequenas porções de material biológico
(ex: cabelo, sémen, sangue).
Amostra
de sangue Aplicação forense do DNA fingerprint
Amostra do Amostra do
sangue do sangue da
suspeito vítima

Amostra do Amostra do
Amostra de sangue encontrada na
DNA do DNA do
sujeito1 sujeito2
roupa do suspeito
 DNA fingerprint

Qual é a quantidade necessária de DNA para esta técnica?

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Cerca de 1 micrograma

Como se obtêm tal quantidade de DNA

Através da técnica (PCR) – reacção de polimerização em cadeia,

permitindo amplificar uma determinada porção de DNA.
 Reacções de Polimerização em Cadeia (PCR)
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É uma das técnicas para clonar DNA de modo a obter grandes

quantidades a partir de uma pequena amostra.
 Reacções de Polimerização em Cadeia (PCR)

➢ Fases do processo de amplificação de uma determinada porção de DNA:

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1) aquecimento do DNA para separar as duas cadeias;

2) adição de primers ou iniciadores, de nucleótidos e da enzima DNA

polimerase para que a dupla hélice seja reconstruída a partir de cada uma das
cadeias simples;
3)repetição do procedimento de modo a produzir cópias suficientes do DNA em
estudo.

2. Emparelhamento dos
iniciadores necessários (54ºC);

1. Desnaturação (a 95ºC) da 3. Polimerização (a 72ºC)

dupla hélice pela acção do da cadeia de DNA.
calor;
 Reacções de Polimerização em Cadeia (PCR)
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Qual a dificuldade nesta técnica

Foi de conciliar esta técnica que decorre a elevadas temperaturas

(95 0 ) com a fragilidade da enzima polimerase.

Recorreu-se aos microorganismos, utilizando-se a

DNA polimerase, extraída de bactérias termófilas
que vivem em meios muito quentes.
 APLICAÇÕES DA ENGENHARIA GENÉTICA
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Organismos
Geneticamente Terapia Génica
Modificados

A manipulação genética, iniciou-se Introdução de genes clonados em

em microrganismos, alargando-se células de um organismo com o
a outros seres vivos (animais e objectivo de curar uma doença
plantas). resultante de defeitos génicos.
 Organismos Organismo cujo genoma foi manipulado
Geneticamente apresentando diferenças relativamente à
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Modificados sua constituição original

Quando da manipulação resulta a inserção, no seu genoma, de material genético

de outros organismos, estes designam-se por ORGANISMOS TRANSGÉNICOS

A manipulação genética permite obter, de forma rápida, organismos detentores

de características vantajosas
 Organismos Geneticamente Modificados
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Plantas transgénicas
Maior resistência a doenças, a herbicidas, ao calor, à seca e à geada e
redução das necessidades em fertilizantes;

Desenvolvimento de produtos com maior valor e qualidade alimentar

(frutos de maior tamanho e tubérculos com maior valor nutritivo, etc);

Produção de fármacos (como por exemplo, vacinas) que sejam

administrados nos seres humanos juntamente com o alimento.
 Organismos Geneticamente Modificados
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Plantas transgénicas
 Organismos Geneticamente Modificados
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Animais transgénicos

Ao contrário das plantas, os animais transgénicos, ainda não são utilizados na

nossa alimentação.

Contudo, alguns produtos resultantes da manipulação genética têm já uma

aplicação, como a produção de diversas proteínas de interesse.
 Organismos Geneticamente Modificados
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Animais transgénicos
A produção de calcitonina (hormona necessária para a deposição de cálcio nos ossos)
pode ser obtida a partir de coelhos transgénicos.
 - A evolução da Engenharia Genética tem sido de extrema
importância e com efeitos indiscutivelmente benéficos.
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- No entanto, os OGM levantam reservas não só em

termos de saúde humana mas também em termos de
perturbação ambiental

Necessidade de adoptar medidas rígidas de

segurança nos laboratórios

- É possível manipular intencionalmente DNA, tendo em vista, a

produção de organismos perigosos que podem ser usadas como
armas biológicas.

Necessidade de realizar experiências para estudar as

possíveis consequências da introdução destes
organismos