BIO

LOGIA
Genética Molecular
Profa. Rita de Cássia de Moura
Profa. Marília de França Rocha
P r o f a . M a r i a Te r e s a M a r q u i m N o g u e i r a C o r n é l i o

2a edição | Nead - UPE 2013

 Dados Internacionais de Catalogação-na-Publicação (CIP)
Núcleo de Educação à Distância - Universidade de Pernambuco - Recife

Moura, Rita de Cássia

M929b Biologia: genética molecular/Rita de Cássia de Moura; Marília de França
Rocha; Maria Tereza Marquim Nogueira Cornélio. – Recife: UPE/NEAD, 2011.

64 p.

1. Genética Molecular 2. Biologia 3. Educação à Distância I. Universidade de

Pernambuco, Núcleo de Educação à Distância II. Título


CDD – 17ed. – 575.1
Claudia Henriques – CRB4/1600
BFOP-090/2011
UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO - UPE
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Edição 2013
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Genética Molecular

Profa. Rita de Cássia de Moura Carga Horária I 60H

Colaboradoras: Profa. Marília de França Rocha
Profa. Maria Teresa Marquim Nogueira Cornélio

APRESENTAÇÃO
Caros alunos, vocês iniciam uma nova jor-
nada que os levará a conhecimentos tão
intrigantes quanto interessantes. Além da
habitual dedicação que todos deverão ter
à disciplina, destaco a importância de de-
senvolver a habilidade de abstração que
permitirá uma aprendizagem mais rápida e
prazerosa.

Os primeiros geneticistas estavam interes-

sados em compreender o mecanismo da
hereditariedade, particularmente o modo
de transmissão dos genes por meio da re-
produção. A partir da década de 1930, os
genes passaram a ser reconhecidos como
entidades físicas, o que os tornou candida-
tos a objeto de estudo através de métodos
bioquímicos e biofísicos. Estudos focados
nesta nova abordagem permitiram que a
natureza química dos genes fosse desven-
dada bem como foram um marco para a
Genética, pois, a partir do momento em
que os biólogos deixaram de perceber os
genes apenas como unidades de herança
e passaram a considerá-los unidades de in-
formação biológica, nascia um novo ramo
da Genética, a Genética Molecular.

O termo Genética Molecular é comumen-

te usado para se referir à área da Genéti-
ca, que estuda todos os aspectos do gene.
Desde a década 1950, os biólogos mole-
culares têm buscado compreender e descre-
ver os processos relacionados ao modo de
transmissão da informação biológica, ao seu
acondicionamento e à maneira pela qual esta
informação torna-se disponível para a célula.
Vários estudos colaboraram para a descober-
ta da estrutura dos genes; para a descrição
da molécula de DNA; para a compreensão da
organização e função dos genes; descrição
de novos tipos de moléculas de RNA; carac-
terização dos processos da expressão gênica
e dos diferentes modos de controle da ex-
pressão tanto em organismos procariontes
quanto em eucariontes; descrição e aplicação
de ferramentas moleculares, dentre outros
conhecimentos.
Nós teremos, durante esta disciplina, a opor-
tunidade de estudar as descobertas e os pro-
cessos moleculares acima citados e compre-
ender os conceitos fundamentais em genética
molecular, com ênfase na descrição dos prin-
cipais processos moleculares, organização e
função dos genes, organização molecular em
vírus e bactérias, os métodos moleculares e
suas aplicações. Contudo, é importante que
todos compreendam que a energia direciona-
da a este propósito não se trata simplesmente
do cumprimento de mais uma tarefa propos-
ta pelo docente em resposta à estrutura cur-
ricular do curso de Ciências Biológicas. Pode-
mos garantir que é bem mais que curiosidade
científica ou obrigação, pois a dimensão al-
cançada pela Genética Molecular, através de
sua aplicação na agricultura, medicina e meio
ambiente, tem provocado uma grande reper-
cussão social, portanto é natural o espaço
que as novas descobertas têm conseguido na
mídia e notória, a importância do estudo des-
ta disciplina, em particular pelos profissionais
da área de saúde (Medicina, Biologia, Nutri-
ção, Farmácia, etc.).
A disciplina Genética Molecular apresenta
conceitos fundamentais para compreensão
do modo de organização da estrutura mo-
lecular do material genético; do mecanismo
através do qual o material genético é repli-
cado; do processo de expressão da informa-
ção genética; de como o material genético
muda com o tempo; da descrição de siste-
mas biológicos modelos (vírus e bactérias);
da manipulação genética e dos mecanismos
envolvidos na regulação da expressão gêni-
ca. Adicionalmente permitirá aos estudantes
uma visão geral sobre o impacto significativo
que a genética tem obtido sobre a sociedade,
em particular sua aplicação na medicina e na
agricultura modernas.
Os conteúdos que serão estudados na discipli-
na Genética Molecular estão distribuídos em
quatro capítulos. Capítulo 1- A estrutura e a
replicação do DNA; Capítulo 2- Expressão gê-
nica, Mutação e reparo do DNA; Capítulo 3-
Genética de vírus e bactérias, Técnicas de ge-
nética molecular e suas principais aplicações;
Capítulo 4- Regulação da expressão gênica em
procariontes e eucariontes.
O estudo de qualquer área da Genética requer
o exercício do desprendimento, esforço e de-
dicação contínuos, o que resulta não apenas
na compreensão dos mecanismos (para alguns
mistérios) como também na capacidade de
participar efetivamente de discussões refe-
rentes a aspectos éticos que têm sido comuns
nos dias atuais. A Genética Molecular propi-
ciará o embasamento necessário para compre-
ensão da dimensão alcançada pela Engenharia
Genética, sua importância, e por que não seus
prós e contras.
Neste capítulo, manteremos o padrão apre-
sentado nos capítulos das disciplinas Genéti-
ca Geral e Citogenética, isto é, cada capítulo
apresentará atividades de revisão e de pesqui-
sa, com o objetivo de aprofundar conteúdos e
verificar seus conhecimentos. Você continua-
rá sendo desafiado pela Fix, a esfinge que foi
apresentada durante a disciplina de Genética
Geral. Contudo, é importante lembrar que o
maior desafio está sempre dentro do próprio
homem, consiste no que ele verdadeiramen-
te deseja e no quanto é capaz de transformar
sonho em realidade. Por isso, esperamos que
essa disciplina não seja apenas mais uma opor-
tunidade de crescimento intelectual, e sim que
contribua, através da beleza, complexidade e
precisão dos processos moleculares para o sur-
gimento de um novo modo de ver a vida, com
mais profundidade e consciência.
Desejamos-lhes sucesso nessa nova etapa de
aprendizagem.
Oi, sou Fix, leoa
alada com ca-
beça humana
e só posso ser
vencida pelo
intelecto. Meu
primeiro desafio
foi quando via-
java pela Grécia,
anos atrás.

Decifra-me ou te devoro! “Qual o ser que anda

de manhã com quatro patas, ao meio dia com
duas e, à tarde, com três e que, contrariamen-
te à lei geral, é mais fraco quando têm maior
número de membros?” Essa é fácil, porém de-
safio mesmo é o que tenho para vocês.

O caminho do conhecimento é árduo, mas ex-

tremamente gratificante para aquele que nele se
aventurar. Convido a quem tiver coragem a en-
trar na maravilhosa viagem do conhecimento.
 9

capítulo 1
Ácido Desoxirribonucléico
(DNA) A Estrutura e
a Replicação do DNA

Profa. Rita de Cássia de Moura Carga Horária I 15H

Colaboradoras: Profa. Marília de França Rocha
Profa. Maria Teresa Marquim Nogueira Cornélio

INTRODUÇÃO
Iniciaremos nosso estudo, relatando as des-
cobertas que levaram à determinação do
DNA como material genético e à descrição
da estrutura da molécula de DNA. Destaca-
remos suas funções biológicas, particular-
mente a capacidade que a molécula tem de
sofrer replicação, a qual ocorre devido a sua
composição e organização, que permitem
a ação de um complexo enzimático capaz
de sintetizar a cópia precisa da molécula de
DNA, garantindo a transmissão da informa-
ção genética de célula a célula, portanto, de
geração a geração.

Neste capítulo, estudaremos o ácido de-

soxirribonucléico - DNA, sua estrutura e o
processo de replicação, responsável pela
produção de cópias do DNA. O período
correspondente às décadas de 1920 até os
primeiros anos de 1950 foi fundamental
para descrição e compreensão de processos
moleculares. Dentre tantas descobertas, po-
demos destacar a descrição da dupla héli-
ce de DNA por Watson e Crick, em 1953 e
salientar que estes pesquisadores contaram
com conhecimentos prévios, os quais foram
relevantes e estão destacados a seguir: 1- a
descrição dos genes como sendo fatores he-
reditários por Mendel, embora ainda não se
soubesse sua natureza física; 2- o reconhe-
cimento da mutação como um fator capaz
10
capítulo 1
de alterar o funcionamento do gene; 3- a teo-
ria, um gene, uma proteína; 4- o conhecimen-
to de que os cromossomos estão constituídos
de DNA e proteínas; 5- uma série de outras
descobertas reveladas por experimentos reali-
zados a partir dos anos 1920, os quais serão
descritos no item 2.
SAIBA MAIS
Ácido desoxirribonucléico: ver DNA.
DNA: ácido desoxirribonucléico molécula de desoxir-
ribonucleotídeos, enrolada em dupla hélice, respon-
sável pela informação genética.
Genes: segmento de DNA, que produz um RNA ou
cadeia polipeptídica e inclui regiões que antecedem
e seguem a região codificadora, representada pelos
éxons..
Mutação: geralmente associada à alteração em um
único gene (mutação de ponto ou gênica), embora
possa designar, em um sentido mais amplo, alteração
nos cromossomos, no genoma ou no organismo; al-
teração nas células somáticas ou germinativas.
A replicação do DNA continua sendo um tema
interessante, apesar de já terem passado mais
de 50 anos da descoberta da dupla hélice.
Atualmente há um grande interesse no estudo
da maquinaria protéica, o replissomo, respon-
sável pela ação coordenada de um complexo
de proteínas, que se associam e atuam de for-
ma coordenada, para que a replicação do DNA
seja rápida e precisa.
OBJETIVO GERAL
Compreender os conceitos fundamentais em
genética molecular, com ênfase na descrição
dos principais processos moleculares, na orga-
nização e função dos genes, na organização
molecular em vírus e bactérias, nos métodos
moleculares e suas aplicações.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Reconhecer os principais experimentos
que identificaram o DNA como material
genético
• Descrever a estrutura do DNA
• Compreender o mecanismo de replicação
do DNA
• Comparar a replicação em procariontes e
eucariontes.
1. DE QUE SÃO FEITOS
OS GENES?
1.1 EXPERIMENTOS QUE
COMPROVAM QUE O DNA
É O MATERIAL GENÉTICO
Para responder a pergunta “De que são feitos
os genes?”, os pesquisadores precisaram des-
crever a natureza química do material genéti-
co. Um caminho promissor foi o de investigar
as substâncias bioquímicas presentes nos cro-
mossomos, pois já se sabia que os cromosso-
mos continham genes. Em meados de 1920,
vários experimentos foram realizados, até que
fossem conhecidos os componentes biológi-
cos do cromossomo: ácidos nucléicos (DNA
e RNA) e proteína. A partir dessa descoberta,
outras perguntas precisavam ser respondidas,
dentre elas, qual desses componentes biológi-
cos teria maior variabilidade, sendo, portanto,
capaz de variar de uma forma simples a uma
forma complexa, o que implicaria capacidade
de variação de estruturas químicas. A falta de
conhecimento sobre a estrutura da molécula
de DNA fez com que os biólogos concluíssem
equivocadamente que o material genético era
a proteína.
No final da década de 1930, tornou-se cres-
cente a necessidade de se ter uma prova expe-
rimental do material genético, pois, nessa épo-
ca, já havia evidências de que o DNA do mesmo
modo que a proteína poderia formar longos
polímeros e apresentar diferentes formas. Dois
experimentos foram cruciais para a identifi-
cação do material genético: a descoberta da
transformação bacteriana e a caracterização
química do material genético em bacteriófagos.
SAIBA MAIS
Bacteriófagos: vírus cujo hospedeiro é uma bactéria.
1.1.1 PRINCÍPIO TRANSFORMANTE
Frederick Griffith, em 1928, descobriu um tipo
de recombinação em Streptococcus pneumo-

niae (pneumococos), responsável pela transfor-
mação bacteriana. Como os demais organis-
mos, esta bactéria exibe variabilidade genética
que pode ser observada através de fenótipos
diferentes (tipo = I e II; aspecto = rugoso (R) e
liso (L); tamanho = grande e pequeno; cápsula
= ausente e presente; virulência = avirulenta
e virulenta). Os caracteres informativos obser-
vados por Griffith foram: a presença ou ausên-
cia de uma cápsula de polissacarídeo, a qual
pode ser de vários tipos antigênicos (tipo I, II,
III, etc), e o tipo de cápsula.
O cultivo de pneumococos em meio de ágar e
sangue, em placas de Petri permitiu que fos-
sem observadas colônias virulentas, grandes e
lisas denominadas de tipo S bem como colô-
nias avirulentas, pequenas, rugosas, denomi-
nadas de tipo R (Figura 1).
Figura 1- Aspecto das colônias de duas linhagens de Strep-
tococcus penumoniae. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J.
(2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
A grande descoberta de Griffith se deu a partir
do experimento em que amostras de diferen-
tes combinações de caracteres de pneumo-
cocos (tipo IIIS, tipo IIR, virulenta, avirulenta,
viva, morta) foram injetadas em camundon-
gos, ocasionando ou não a morte dos animais
e posteriormente recapturadas das bactérias a
partir destes. A Figura 2 ilustra as etapas que
compõem este experimento. Podemos resumi-
-las da seguinte forma:
1. amostra tipo IIIS viva injetada em camun-
dongo vivo: o camundongo morreu, e as
bactérias IIIS foram recapturadas;
2. amostra tipo IIIS morta por aquecimento
injetada em camundongo vivo: o camun-
dongo permaneceu vivo;
3. amostra tipo IIR viva injetada em camundon-
go vivo: o camundongo permaneceu vivo;
4. amostra tipo IIIS morta por aquecimento
mais tipo IIR viva injetada em camundongo
11
capítulo 1
vivo: o camundongo morreu, e as bactérias
IIIS foram recapturadas.
O resultado obtido na etapa número 4 foi
inesperado, pois, ao invés de o camundongo
permanecer saudável, morreu, indicando que
algum componente do tipo IIIS morto (princí-
pio transformante) tinha transformado o tipo
IIR em tipo IIIS.
Figura 2- Experimento de Griffith: transformação em Streptococcus
penumoniae. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Funda-
mentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
1.1.2 PROVA QUE O DNA MEDEIA A
TRANSFORMAÇÃO
A prova de que o DNA medeia a transformação
foi obtida por Oswald Avery e colaboradores
em 1944. Estes pesquisadores selecionaram
uma amostra de células S mortas por aque-
cimento, contendo o princípio transformante,
a qual teve os seus componentes individuais
submetidos à degradação através de enzimas
específicas, capazes de degradar DNA, RNA
ou proteínas. A amostra inicial de células IIIS
foi subdivida em três amostras, as quais foram
degradadas separadamente, por desoxirribu-
cuclease (DNAse), que degrada DNA; ribunu-
clease (RNAse), que degrada RNA; e protease,
que degrada proteína. Dos três tratamentos
apenas, aquele que utilizou DNAse apresen-
12
capítulo 1

tou efeito sobre a atividade transformante, mostrando, portanto, que a informação genética
em pneumococos está presente no DNA. (Figura 3)

Figura 3- O DNA como princípio transformante. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética.
Editora Guanabara Koogan.

1.1.3 OS GENES DE BACTERIÓFAGOS SÃO FEITOS DE DNA

Em 1952 Hershey e Chase mostraram que o material genético do bacteriófago ou fago T2 estava
presente no DNA e não, na proteína. Estes pesquisadores levaram em consideração o fato de esse
vírus ser composto por 50% de DNA e 50% de proteína bem como a informação de que o DNA
contém fósforo, mas não, enxofre, e que a proteína contém enxofre e nenhum fósforo. Daí por
diante, eles precisaram apenas marcar o DNA do fago com isótipo radioativo do fósforo 32P, ao
invés do fósforo normal 31P. Do mesmo modo, marcaram a cápsula de proteína com o enxofre
35S, ao invés do enxofre normal 32S. Os fagos marcados com 35S foram misturados a uma cultura
de E. coli por alguns minutos, as células infectadas foram submetidas a um liquidificador, e depois
transferidas para tubos de ensaio onde se pôde observar que a maior parte da radioatividade
poderia ser retirada das células, sem afetar a prole. Quando foram usados fagos marcados com
32
P, verificou-se que a radioatividade estava, predominantemente, dentro da célula. A cultura foi
centrifugada; as bactérias, contendo o DNA do fago, foram coletadas na parte inferior do tubo,
enquanto as partículas vazias dos fagos ficaram em suspensão.(Figura 4)
 13

capítulo 1
Figura 4 – Experimento de Hershey e Chase. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética.
Editora Guanabara Koogan.

Os experimentos apresentados até o momento

não deixaram dúvidas quanto à natureza do
material genético em procariontes. Contudo,
os pesquisadores continuaram insatisfeitos,
pois não sabiam se seria possível extrapolar
essas evidências para organismos superio-
res. Essas dúvidas foram elucidadas a partir
da descrição da dupla hélice de DNA, a qual
apresentou uma estrutura compatível com as
necessidades do material genético.

2. A ESTRUTURA DO DNA
2.1 NATUREZA QUÍMICA
O DNA ou ácido desoxirribonucléico é um polí-
mero ou molécula de cadeia longa, que possui
várias unidades individuais denominadas de
monômeros, unidas em série. Os monômeros,
também chamados de nucleotídeos, são con-
siderados as unidades básicas da molécula de
DNA, além de serem observados, compondo
os ácidos nucléicos; também desempenham
diferentes papéis na célula. O nucleotídeo está
composto por três componentes: 1- um açú- Figura 5- Componentes estruturais dos ácidos nucléicos.
car; 2- uma base nitrogenada e 3- um ácido
fosfórico. (Figura 5a)
14
capítulo 1
SAIBA MAIS
Nucleotídeo: molécula constituída de um grupamen-
to fosfato, uma pentose (desoxirribose, no DNA ou
ribose, no RNA) e uma base nitrogenada (púrica, com
dois anéis ou pirimídica, com um anel), responsável
pela formação dos ácidos nucléicos. Compare com o
nucleosídeo.
1. O açúcar do nucleotídeo é uma pentose
denominada 2’- desoxirribose, cuja forma
é de cadeia linear ou estrutura de Fischer
(Figura 5b). A denominação 2’- desoxirri-
bose indica que a estrutura da ribose foi
modificada a partir da substituição do gru-
pamento hidroxila (-OH) unido ao átomo
do carbono 2’ por um hidrogênio (-H). Os
carbonos são sempre numerados da mes-
ma forma 1’, 2’, 3’, 4’, 5’ e 6’, os quais são
chamados de um linha, dois linha e assim
por diante. A numeração dos carbonos é
importante, pois ela indica à qual posição
do carbono outros componentes do nucle-
otídeo estão ligados.
2. As bases nitrogenadas são estruturas sim-
ples, ligadas ao carbono 1’ do açúcar e que
se apresentam em forma de anel simples
ou duplo. As bases adenina e guanina são
denominadas purinas e são de anel duplo,
enquanto as bases timina e citosina são de
anel simples e são chamadas de pirimidi-
nas. (Figura 5c)
3. O ácido fosfórico, ao ser adicionado a uma
molécula que contém apenas um açúcar
ligado a uma base, a qual é denominada
nucleosídeo, provoca a conversão dessa
molécula em um nucleotídeo, através da
ligação do ácido fosfórico ao carbono 5’
do açúcar. (Figura 5d)
Os nucleotídeos que se polimerizam na forma-
ção do DNA são de quatro tipos diferentes: 2’
desoxiadenosina 5’ trifosfato (dATP); 2’desoxi-
guanosina 5’ trifosfato (dGTP); 2’desoxicitidina
5’ trifosfato (dCTP); 2’desoxitimidina 5’ trifos-
fato (TTP), os quais podem também ser cha-
mados de A, G, C e T, respectivamente.
SAIBA MAIS
Bases nitrogenadas: compostos nitrogenados que
são incorporados aos nucleosídeos ou nucleotídeos.
São classificadas em púrica, com dois anéis (como
exemplo, adenina e guanina) ou pirimídica, com um
anel e (como exemplo, citosina, timina, uracila).
Nucleosídeo: molécula constituída de uma pentose
(desoxirribose, no DNA ou ribose, no RNA) e uma
base nitrogenada (púrica, com dois anéis ou pirimí-
dica, com um anel). Compare com o nucleotídeos.
Para que haja a formação de polinucleotídeos,
é necessário que os nucleotídeos se unam atra-
vés de grupamentos fosfato. A ligação de mo-
nômeros de nucleotídeos se dá a partir da união
do grupamento -fosfato acoplado ao carbono
5’ de um dos nucleotídeos ao carbono 3’ do
próximo nucleotídeo na cadeia. A ligação que
ocorre entre os nucleotídeos se chama ligação
fosfodiéster, a qual também é conhecida como
3’-5’ fosfodiéster, e indica quais os átomos de
carbono no açúcar que participam da ligação.
É importante destacar que o polinucleotídeo
possui duas terminações diferentes. Em uma
das extremidades, observamos um nucleotídeo
cujo grupamento trifosfato ligado ao carbono
5’ não participa da ligação fosfodiéster. Esta
terminação é chamada 5’-P terminal. Na outra
extremidade, o grupamento 3’-hidroxila não
reage e é denominada 3’-OH terminal. Na Fi-
gura 6, podemos observar a estrutura de um
pequeno polinucleotídeo, permitindo a me-
lhor compre-
ensão de sua
organização
química, a
qual permite
a ocorrên-
cia de duas
terminações
distintas que
fazem com
que os poli-
nucleotídeos
possuam um
sentido que
pode ser 5’-
3’ ou 3’-5’.
Figura 6 - Formação de cadeia polinucle-
otídica. Fonte: genomasur.com/lecturas/
Guia02-2.htm

Um outro tipo de ácido nucléico encontrado
em células vivas é o RNA ou ácido ribonucléico,
que, do mesmo modo que o DNA, também
é um polinucleotídeo e possui um importante
papel na Genética Molecular. Apesar das gran-
des semelhanças entre DNA e RNA, podemos
destacar importantes diferenças: 1- o açúcar
no RNA é a ribose; 2- o RNA contém uracil ao
invés de timina; 3- o RNA, em geral, se apre-
senta como polinucleotídeo único; 4- os nu-
cleotídeos que se polimerizam para formar o
RNA são: adenosina 5’ trifosfato, guanosina
5’ trifosfato, citidina 5’ trifosfato e uridina 5’
trifosfato.
SAIBA MAIS
Ácido ribonucléico: ver RNA.
RNA: ácido ribonucléico - molécula sintetizada na
maioria dos organismos, a partir de um molde de
DNA.
2.2 DUPLA HÉLICE E FORMAS
ALTERNATIVAS
A dupla hélice de DNA foi descrita em 1953,
por James Watson e Francis Crick (Figura 7),
tendo sido uma das mais importantes des-
cobertas da Biologia, em particular, da Ge-
nética Molecular. Para compreender melhor
como estes pesquisadores chegaram ao mo-
delo da estrutura da molécula de DNA, é im-
portante conhecer os experimentos realiza-
dos por Erwin Chargaff e Rosalind Franklin.
O trabalho realizado por Chargaff e colabo-
radores usou técnicas sensíveis de cromato-
grafia para quantificar as quatro bases ni-
trogenadas presentes no DNA de amostras
de diferentes organismos. Os dados obtidos
permitiram observar que o número de ade-
ninas é igual ao de timinas e que o núme-
ro de citosinas é igual ao de guaninas, ou
seja, A=T e C=G. Já o experimento realizado
por Rosalind, em 1952, permitiu, através da
análise de difração de raios X, técnica pre-
viamente desenvolvida por Maurice Wilkins,
mostrar que o DNA é uma hélice com duas
periodicidades regulares de 3,4 Å e 34 Å ao
longo do eixo da molécula.
15
capítulo 1
Figura 7 – James Watson (esquerda) e Francis Crick (direita).
Fonte: www.hps.cam.ac.uk/medicine/studying.html
Considerando as informações disponíveis
sobre a estrutura e a função da molécula
de DNA até o momento, Watson e Crick
analisaram várias possibilidades e verifica-
ram que, apenas, o modelo da dupla hélice
correspondia às sete características consi-
deradas por eles, como sendo prováveis e
relevantes para descrever um modelo de
molécula estável: 1- a dupla hélice contém
dois polinucleotídeos, o que foi observado
a partir da análise da densidade do DNA;
2- as bases nitrogenadas estão arranjadas
no interior da hélice, e o arcabouço de açú-
car fosfato, na parte externa da molécula;
3- Pontes de hidrogênio unem as bases ni-
trogenadas dos dois polinucleotídeos (duas
pontes entre A e T, e três pontes entre G e
C). Esta característica é considerada muito
importante, pois mostra a complementari-
dade de bases; 4- a dupla hélice executa um
giro a cada 10 pares de bases; 5- os dois po-
linucleotídeos da dupla hélice têm sentidos
opostos (5’-3’e 3’-5’), e essa característica é
fundamental para replicação, transcrição e
recombinação; 6- a dupla hélice apresenta
dois sulcos diferentes; 7- a dupla hélice é
dextrógira. (Figura 8)
16
capítulo 1

Figura 8- Propriedades da molécula de DNA: complementaridade e polaridade inversa. Fonte: Snustad D.P. e
Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.

A dupla hélice descrita por Watson e Crick é

denominada de forma B com 10pb por giro Estudos realizados através de análises mate-
da hélice e diâmetro de 19 Å, porém existem máticas da cinética de renaturação dos DNAs
outras formas, como, por exemplo, a forma eucarióticos tem permitido observar diferentes
A, que é uma dupla hélice mais compacta e tipos de DNA. Três classes principais foram des-
possui 11pb por giro da hélice e diâmetro de critas para eucariontes: 1- DNA de sequência
23 Å, e a forma Z, que apresenta a particula- única, uma a dez cópias por genoma; 2- DNA
ridade de girar para esquerda (levógira), dife- de sequência moderadamente repetitiva, 10 a
rindo, portanto, do observado nas formas B e 105 cópias por genoma; 3- DNA de sequência
A (dextrógiras), as quais giram para a direita. altamente repetitiva, mais de 105 cópias por
Existem ainda estruturas helicoidais adicionais, genoma. A quantidade de qualquer um dos
as formas C, D e E, as quais são produzidas sob três tipos de sequências no genoma varia de
condições de laboratório. espécie para espécie. Entretanto, sabe-se que
as sequências únicas constituem cerca de 40 a
Desafio da FIX: constru- 70% do genoma da maior parte dos animais
am o modelo tridimen- e plantas. Já as sequências moderadamente
sional do DNA através repetitivas são consideradas bastante hetero-
da técnica do origa- gêneas, e as sequências altamente repetitivas
mi. Para isso, acessem: são compostas por DNA satélite e não, satélite.
www.sbg.org.br/Ge-
neticaEscola2/web/vol- SAIBA MAIS
2Num1.htm - Estrutura
do DNA em origami, Genoma: conjunto completo de DNA de uma célula
ou organismo.
possibilidades didáticas.
DNA satélite: porção do DNA altamente repetitivo,
2.3 TIPOS DE SEQUÊNCIAS que apresenta densidade de sedimentação específi-
DE DNA ca. Não confundir com o satélite dos cromossomos
acrocêntricos.

Os genomas de procariontes estão constituí- Replicação: duplicação do material genético a partir

dos predominantemente de sequências únicas de moléculas originais de DNA.
de pares de bases, o que indica que a maioria
dos genes está presente no genoma, apenas,
uma vez.

3. DE QUE MODO O DNA
E OS CROMOSSOMOS
SÃO REPLICADOS?
3.1 REPLICAÇÃO
SEMICONSERVATIVA
Durante a multiplicação celular, é preciso que a
molécula de DNA seja duplicada ou replicada,
para que as células filhas recebam a informa-
ção genética presente na célula mãe. Descre-
veremos, a partir de agora, como uma dupla
hélice de DNA pode originar duas moléculas
filhas; o mecanismo de replicação; as enzi-
mas envolvidas no processo de replicação e as
principais diferenças, quando comparamos a
replicação em eucariontes e procariontes. A
característica de complementaridade das ba-
ses nitrogenadas na estrutura da molécula de
DNA possibilita que ela apresente um poten-
cial natural para replicação, pois cada um dos
seus filamentos pode ser usado como molde
para síntese de um filamento complementar.
Contudo, a maneira como se dá o processo de
replicação não é tão óbvio assim, o que levou à
proposição de várias estratégias. Dentre elas,
as mais aceitas foram: 1- replicação semicon-
servativa, na qual cada molécula-filha possui
um filamento parental e outro recém sinteti-
zado; 2- replicação conservativa, na qual uma
das moléculas-filhas possui dois filamentos de
origem parental, e a outra possui dois filamen-
tos recém-sintetizados; 3- replicação dispersiva
consiste na produção de moléculas-filhas com
filamentos parcialmente de origem parental e
recém-sintetizado. (Figura 9)
Figura 9- Modelos de replicação do DNA: semiconservativo, conser-
vativo e dispersivo. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Funda-
mentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
17
capítulo 1
Um dos experimentos mais interessantes den-
tro da Biologia foi o de Meselson-Stahl (1958),
no qual foram usados isótipos de nitrogênio,
tanto na forma normal 14N quanto o 15N,
considerado nitrogênio pesado, que permitiu
distinguir, dentre as três propostas de repli-
cação, qual delas é realmente funcional. O
experimento consistiu no cultivo de células de
E. coli por várias gerações, em um meio com
o nitrogênio pesado 15N, o qual foi substituído
pelo 14N. Após o crescimento celular em um
meio com 14N, o DNA foi extraído e analisado
em gradientes de transferência de densidade
de cloreto de césio (CsCl). Os resultados mos-
traram-se coerentes com a replicação semicon-
servativa e poderão ser observados com mais
detalhes na Figura 10.
Figura 10 – Experimento de Meselson e Stahl demonstrando a replica-
ção semiconservativa. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fun-
damentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
3.1.1 FORQUILHAS E ORIGENS DE
REPLICAÇÃO
O estudo da replicação em procariontes teve
início com o trabalho de Jonh Cairns em 1963,
no qual foram cultivadas células de E. coli em
meio, contendo [3H] timidina em tempos va-
riados: as células foram lisadas com cuidado,
e os cromossomos, removidos em membra-
nas de filtragem, sendo afixados em lâminas e
guardadas no escuro para posterior análise. As
auto-radiografias mostraram que os cromos-
somos de E. coli são circulares durante a re-
plicação e que os dois filamentos da molécula
parental se deselicoidizam e sofrem replicação
semiconservativa simultaneamente. Cairns su-
geriu que a replicação ocorre a partir de um
ponto de origem e que prossegue unidirecio-
nalmente, em torno do círculo. Experimentos
18
capítulo 1

subseqüentes constataram que a replicação em E. coli, como em outros organismos que possuem
cromossomos lineares, é bidirecional e que cada estrutura em forma de Y consiste em uma forqui-
lha de replicação, e as duas forquilhas de replicação são movidas em sentidos opostos, até percor-
rer todo o cromossomo circular (Figura 11). Entretanto, a replicação bidirecional não é universal,
como observado no colifago P2, que apresenta replicação unidirecional.

Figura 11- Replicação bidirecional em procariontes. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de
Genética. Editora Guanabara Koogan.

A origem de replicação, também chamada 3. DNA topoisomerase, enzimas que catali-

replicon, é única em cromossomos de proca-
riontes, enquanto que, em eucariontes, são
múltiplas; em ambos os casos, ocorrem em
sítios ou sequências específicas denominadas
de sequências de replicação autônoma (ARS).
É esperado que ocorram múltiplas origens de
replicação em eucariontes, visto que é neces-
sário que a replicação da molécula de DNA,
presente em cada cromossomo, seja replicada
ordenadamente.
3.2 APARATO ENZIMÁTICO
Para que uma molécula de DNA seja replica-
da, é necessário que ocorra a desilecoidização
dos dois filamentos parentais, despareamento
de bases na origem de replicação bem como a
progressão desse despareamento ao longo da
molécula em ambas as direções, formando as
forquilhas de replicação. Além desses,passos
iniciais, é necessário que haja a síntese de poli-
nucleotídeos na medida em que os filamentos
da molécula se separam. Para que tudo isso
ocorra, é necessária a ação de várias enzimas,
as quais constituem um aparato complexo en-
zimático, no qual cada uma delas terá sua im-
portância e efetiva participação. Dentre elas,
destacamos:
1. DNA helicase, responsável pelo mecanismo
de desilecoidização da molécula de DNA
através do uso de energia derivada do ATP;
sam quebras transitórias e adicionam ou
removem superélices na molécula de DNA.
4. DNA primase, sintetiza um primer de RNA,
o qual fornece a extremidade 3’OH, neces-
sária para a ação da DNA polimerase;
5. DNA polimerase, enzima capaz de sinte-
tizar um novo polinucleotídeo a partir da
adição de desoxiribonucleotídeos no sen-
tido 5’-3’ (atividade polimerásica), corres-
pondentes aos pares de bases complemen-
tares, presentes no filamento molde. Para
manter-se ativa, a polimerase requer o 5’
trifosfato de cada um dos quatro desoxir-
ribonuclesídeos, íons de Mg+ e DNA pré-
-existente. Existem, em procariontes, três
tipos de DNA polimerase: a DNA polime-
rase I, que apresenta as funções de repa-
ro, replicação e excisão do primer; a DNA
polimerase II, cuja função é de reparo e a
DNA polimerase III, denominada também
de replicase, por ser a principal enzima de
replicação em E. coli. Todas as polimera-
ses precisam de uma ponta 3’OH e de um
molde de DNA apropriado. A atividade
exonucleásica no sentido 3’-5’ das DNAs
polimerases revisa os filamentos recém-
sintetizados. (Figura 12)
SAIBA MAIS
Primer: pequena sequência de RNA sintetizada pela
primase e adicionada a um molde de DNA para início
da síntese de DNA.

2. SSB são proteínas de ligação ao DNA unifila- Exonucleásica: ver exonuclease.

mentar, impedindo que o filamento sofra re- Exonuclease: enzima que cliva o DNA e/ou RNA a par-
naturação ou forme estruturas em grampo; tir de uma extremidade; atua no reparo do DNA.

Figura 12- Atividades da DNA polimerase I de E. coli. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora
Guanabara Koogan.
6. DNA ligase, enzima que catalisa o fecha-
mento covalente de cortes nas moléculas
de DNA, através da energia de nicotidami-
na adenina dinucleotídeo (NAD) ou adeno-
sina trifosfato (ATP);
Além das enzimas relacionadas acima, outros
tipos de enzimas participam da replicação
como, por exemplo, as proteínas DNA A, DNA
B, DNA C, DNA T, DNA J, DNA K, Pri A, Pri B,
Pri C e HU, todas participantes do processo de
iniciação da replicação e da formação das for-
quilhas bidirecionais.
3.3 COMPLEXO MECANISMO
DE REPLICAÇÃO
Estudos de auto-radiografia e microscopia
eletrônica revelaram que a síntese dos dois
filamentos-filhos se dá na mesma direção, em
ambas as forquilhas de replicação. Conside-
rando que os filamentos da molécula de DNA
19
capítulo 1
são complementares e que apresentam pola-
ridade oposta, a polimerização deve ocorrer
na extremidade 5’ de um filamento (amplia-
ção 3’-5’) e na extremidade 3’ do outro fila-
mento (ampliação 5’-3’). Sabendo ainda que
todas as DNAs polimerases precisam de uma
extremidade 3’OH livre, para realizar a síntese
do polinucleotídeo (sentido 5’-3’), é possível
perceber que estamos diante de um paradoxo,
o qual só foi resolvido a partir da descoberta
de que a síntese de um filamento de DNA é
contínua (sentido 5’-3’), enquanto a do outro
é descontínua (sentido 3’–5’), ou seja, apesar
dos filamentos de DNA estarem sendo ampli-
ficados em sentido físicos opostos, eles estão
sendo ampliados no sentido químico 5’- 3’. A
síntese do filamento descontínuo se dá através
da síntese de fragmentos curtos (sentido 5’-
3’), os quais foram denominados fragmentos
de Okasaki em homenagem ao pesquisador,
que os descobriu na década de 1960. Como
a síntese do filamento descontínuo gera vários
20
capítulo 1

fragmentos de DNA, estes são considerados Os filamentos da molécula parental continuam

como um produto intermediário no processo se separando. Para tal, é necessário que a mo-
de replicação e são posteriormente ligados co- lécula sofra um mecanismo de deselicoidiza-
valentemente, a partir da ação da DNA ligase. ção, o qual será catalizado pelas enzimas
Essa enzima não tem ação sobre o preenchi- DNA helicases, as quais, através de energia
mento de lacunas ou gaps oriundos do proces- derivada de ATP, são capazes de desenrolar a
so de replicação. Estes espaços são fechados molécula de DNA. Além das diferentes helica-
pela ação de uma DNA polimerase. (Figura 13) ses, cuja ação também promove a quebra das
pontes de hidrogênio e, portanto, separação
SAIBA MAIS das bases, é necessário que as proteínas SSB se
liguem cooperativamente ao DNA unifilamen-
Polimerização: união química de duas ou mais molé-
culas do mesmo tipo, para formar um novo compos- tar, evitando, dessa forma, a renaturação do
to, tendo os mesmos elementos em iguais propor- filamento de DNA ou a formação de estruturas
ções. Possui peso molecular mais alto e propriedades secundárias. É importante também destacar
físicas diferentes. que a deselicoidização da molécula promove
a formação de um eixo de rotação, que im-
pede que o DNA permaneça superelicoidizado
positivamente, diante da forquilha de replica-
ção. As enzimas DNA topoisomerases são as
responsáveis pelo eixo de rotação necessário
à replicação de moléculas circulares e compre-
endem dois tipos: As topoisomerases são de
dois tipos: topoisomerase I e topoisomerase
Figura13- Síntese semidescontínua. Observe
os fragmentos de Okasaki.
II. Ambas produzem quebras transitórias nas
moléculas, as quais são mantidas por ligações
covalentes, contudo diferem quanto à capaci-
Considerando as informações que temos até o
momento, podemos, então, descrever sucinta- dade de gerar quebras unifilamentares e bifila-
mente todas as etapas do processo de replica- mentares, respectivamente.
ção. (Figura 14) Inicialmente, devemos recor-
dar que estamos Assim que o aparato
estudando a re- de replicação é for-
plicação semicon- mado, a replicação é
servativa, adotan- iniciada pela ação da
do como exemplo DNA primase, enzi-
a replicação em ma responsável pela
E. coli, a qual se síntese de um primer
inicia a partir do de RNA, o qual apre-
reconhecimen- senta à DNA polime-
to da origem de rase uma extremidade
replicação deno- 3’OH livre. Os dois fi-
minado OriC. O lamentos necessitam
reconhecimen- do primer, embora
to da sequência o filamento descon-
presente em OriC tínuo precise de vá-
por um conjun- rios primers, um para
to de proteínas cada fragmento de
pré-iniciais é res- Okasaki. A replicação
ponsável pela no filamento descon-
separação dos tínuo é iniciada por
filamentos espe- um complexo pro-
cificamente no téico, formado pela
Figura 14- Replicação em E. coli: síntese contínua (filamento 3’-5’) e
ponto de origem. descontínua (filamento 5’-3’). Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. DNA primase e DNA
(2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
 21

capítulo 1
helicase, denominado primossomo. O primos- na várias unidades teloméricas repetidas, que
somo é ativado pela energia do ATP e move-se servirão de molde para que a DNA polimerase
pelo filamento. A DNA polimerase III sinteti- complete a síntese do filamento complementar.
za os filamentos-filhos. No caso do filamento
descontínuo, após a síntese dos fragmentos de Para melhor compreensão da replicação aces-
Okasaki, os primers são retirados, e a DNA po- sem o aplicativo GBOL material genético http://
limerase I preenche os gaps através da síntese www.ufv.br/dgb/gbol/htm/gbol23.htm. Nele
de DNA. Logo em seguida, os fragmentos são vocês poderão, de forma dinâmica, percorrer
unidos pela DNA ligase. A DNA polimerase II todos os passos de mecanismo de replicação.
atua na correção de possíveis erros durante a
síntese dos filamentos-filhos. Imediatamente Desafio da FIX: Vocês
após a replicação de um segmento de DNA, podem tentar reavaliar
este é superelicoidizado negativamente pela os principais conceitos
topoisomerase girase, sendo posteriormente da Genética mendelia-
dobrado e condensado no genoma. Todas as na e da Genética mole-
enzimas citadas acima atuam de forma coor- cular através da elabo-
denada, em cada forquilha de replicação. O ração de um mapa de
aparato completo, que se move na forquilha conceito. Para tal, aces-
de replicação, é chamado de replissomo. sem www.sbg.org.br/
GeneticaEscola2/web/
SAIBA MAIS vol1Num2htm - Men-
del enrolado na dupla
Renaturação: conversão do DNA do estado de fita hélice.
única para o de fita dupla, após desnaturação.

Primossomo: um complexo de replicação, que con-

tém atividades de DNA primase e DNA helicase.
3.4 REPLICAÇÃO EM
EUCARIONTES
A maior parte dos experimentos de replica-
ção foi realizada em procariontes, contudo as
informações disponíveis são suficientes para
considerarmos que a maioria dos aspectos
do processo de eplicação é similar em proca-
riontes e eucariontes. Algumas diferenças me-
recem ser destacadas. São elas: 1- os primers
de RNA e os fragmentos de Okasaki são mais
curtos em eucariontes; 2- a síntese de DNA em
eucariontes ocorre numa etapa específica do
ciclo celular; 3- os eucariontes possuem múl-
tiplas origens de replicação; 4- os eucarion-
tes possuem cinco tipos de DNA polimerase
α (alfa),β (beta),γ (gama),δ (delta),ε (epsilon),
sendo a γ especifica para as mitocôndrias; 5-
para cada forquilha de replicação, os eucarion-
tes usam duas DNAs polimerases diferentes (α
para a descontínua e δ para a contínua); 6- a
molécula de DNA linear em eucariontes difi-
culta a replicação das extremidades da molé-
cula no filamento descontínuo. Esse problema
é contornado pela enzima telomerase, a qual
possui um molde de RNA, cuja ação adicio-
REVISANDO
CONHECIMENTOS
1. Os avanços e a importância da genética
molecular são evidentes em diversas áre-
as, tais como na medicina e na agricultura.
Para melhor compreendê-los, é fundamen-
tal ter conhecimentos sobre a estrutura bá-
sica da molécula do DNA. Para tanto, es-
quematize a unidade básica da molécula,
mostrando (identificando) o grupamento
fosfato, o açúcar e a base nitrogenada.
2. Com base no segmento de DNA represen-
tado abaixo, responda as alternativas.
5...GGGATCCTGCCCAAAATC...3
a) Quantos desoxirribonucleotídeos consti-
tuem esta molécula?
b) Quantas ligações duplas e triplas de
pontes de hidrogênio estão
presentes no segmento complementar?
c) Represente a cadeia complementar deste
segmento.
3.
Você aprendeu que a replica-
22
capítulo 1

ção do DNA envolve um complexo de enzimas com papéis específicos que visa à ma-
nutenção da integridade genética nas moléculas-filhas. A seguir, citamos algu-
mas dessas enzimas, e você deverá relacioná-las com as funções correspondentes.

1- DNA polimerase III

2- Helicase
3- Proteínas SSB
4- DNA ligase
5- Primase

( ) Religa o arcabouço de DNA, catalisando as ligações fosfodiéster.

( ) Sintetiza o iniciador do processo da replicação.
( ) Adiciona nucleotídeos às novas cadeias.
( ) Responsável pelas quebras das pontes de hidrogênio.
( ) Ligam-se ao DNA unifilamentar, impedindo a reconstituição da dupla hélice.

4. Sabemos que as descobertas científicas resultam de pesquisas realizadas com muito rigor
e dedicação, muitas das quais levam anos para serem concluídas. É importante e necessário
conhecermos os trabalhos de tantos cientistas que fizeram e fazem com que a ciência se
desenvolva e traga benefícios para o nosso planeta. A seguir, relacionamos algumas etapas
de experimentos ou deduções que favoreceram o crescimento na área da biologia molecular.

1. As cepas de Bactérias tipo IIR foram transformadas em tipo IS. ( ) Watson e Crick
O princípio transformante é o material genético.
2. A digestão do DNA com desoxirribonuclease destruiu total- ( ) Maurice Wilkins e
mente a capacidade transformadora. O princípio transforman- Rosalind Franklin
te é o DNA.
3. Amostras de DNA e proteínas foram marcadas respectivamente, ( ) Frederick Griffith
com os radioisótopos 32P e 35S. Mais de 80% do 32P estavam
presentes no pellet da bactéria. O material genético é o DNA.
4. Deduziram que o DNA existe na forma de dupla hélice. ( ) Avery, MacLeod e
McCarty
5. A análise por difração de raios X indica que o DNA é uma mo- ( ) Alfred Hershey e
lécula helicoidal. Marta Chase

Identifique os principais autores envolvi- Guanabara Koogan S/A, 2006.

dos.
REFERÊNCIA SITES

LEITURA FUNDAMENTAL http://www.sbg.org.br/GeneticaEscola2/web/

vol2Num1.htm
SNUSTAD, D. P. e SIMMONS M. J. Fundamen-
tos de Genética: Guanabara Koogan S/A, 2000. http://www.ufv.br/dgb/gbol/htm/gbol23.htm

LEITURA COMPLEMENTAR http://www.sbg.org.br/GeneticaEscola2/web/

vol1Num2htm-
GRIFFITHS, A. J. F.; WESSLER, S. R.; LEWONTIN,
R. C.;GELBART, W. M.; SUZUKI, D. T.e MILLER,
J. H. Introdução à Genética: Rio de Janeiro:
 23

capítulo 2
Expressão Gênica,
Mutação e Reparo
do DNA
Profa. Rita de Cássia de Moura Carga Horária I 15H
Colaboradoras: Profa. Marília de França Rocha
Profa. Maria Teresa Marquim Nogueira Cornélio

INTRODUÇÃO
Iniciaremos nosso estudo conceituando
genes, descrevendo seus modos de orga-
nização e de expressão, ou seja, como os
genes expressam sua informação biológica
e a disponibilizam à célula. Veremos, ain-
da, as possíveis alterações que ocorrem na
sequência de nucleotídeos da molécula de
DNA e as diferentes formas de correção ou
reparo.

Neste capítulo, estudaremos os genes, não

mais considerando a sua composição, mas,
a sua estrutura e a sua forma de transmis-
são da informação biológica. No que diz
respeito à transmissão das informações,
estudaremos os processos que compõem a
expressão gênica, a transcrição e a tradução
bem como os diferentes tipos de moléculas
de RNA e o código genético.

Adicionalmente, abordaremos, ainda, de

forma sucinta, os principais agentes res-
ponsáveis pela mutação das sequências de
nucleotídeos da molécula de DNA, as prin-
cipais consequências das mutações e os di-
ferentes modos de reparo do DNA.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Comparar o processo de transcrição em
procariontes e eucariontes;
24
capítulo 2

• Descrever o processo de tradução;
• Distinguir os diferentes tipos de mutação;
• Identificar os mecanismos de reparo da
molécula de DNA.
1. TRANSMISSÃO DA
INFORMAÇÃO
BIOLÓGICA
1.1 GENES E INFORMAÇÃO
BIOLÓGICA
Um gene consiste em um segmento de uma
molécula de DNA, com comprimento variável,
que transporta a informação biológica. A in-
formação está contida no gene, sob a forma
de instruções, as quais orientarão a síntese de
uma molécula de RNA, que poderá ou não
subseqüentemente orientar a síntese de uma
molécula de proteína.
A maior parte dos genes está distribuída alea-
toriamente e de forma intercalar ao longo da
extensão de uma molécula de DNA. Contu-
do, em alguns casos, os genes encontram-se
agrupados separadamente, organizados em
grupos de genes que possuem unidades de
informações biológicas correlacionadas. São
exemplos de grupos de genes, os operons e
as famílias multigênicas. Operons consistem
em um grupamento de genes, que codificam
uma série de enzimas participantes de uma via
bioquímica. Este tipo de grupamento é carac-
terístico de bactérias. Por outro lado, em dife-
rentes organismos, podemos observar famílias
multigênicas, nas quais os genes também se
encontram correlacionados, e que, apesar de
serem distintos, possuem sequências idênticas.
Existem dois tipos de famílias multigênicas:
1. Família multigênica simples, na qual todos
os genes são idênticos. A maioria dos or-
ganismos superiores possui esse tipo de fa-
mília, como, por exemplo, as cópias múlti-
plas do gene RNAr 5S (Figura 2a).

A informação biológica de um gene é lida em, 2. Família multigênica complexa são grupos
apenas, um dos dois polinucleotídeos da du- de genes similares, embora não idênticos,
pla hélice, o como, por exemplo,
qual é chama- os genes dos polipep-
do filamento tídios da globina em
molde (direção vertebrados. A família
3’5’), que serve multigênica da globi-
de modelo para na possui ainda pseu-
a síntese de dogenes (ψ), que são
uma molécula genes muito parecidos
complementar com os outros genes
de RNA duran- da família, embora te-
te a transcrição nham perdido sua fun-
(Figura 1). ção (Figura 2b).

SAIBA MAIS
Família multigênica: conjun-
to de genes que descendem
de um gene ancestral co-
mum, que sofreu duplicação
e divergência; grupo de ge-
nes que codificam produtos
homólogos com funções se-
melhantes.

Pseudogenes: gene inativo

dentro de uma família mul-
Figura 1- Filamento molde (direção 3’5’) servindo de modelo para a tigênica.
síntese de uma molécula complementar de RNA durante a transcrição.
Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética.
Editora Guanabara Koogan.
 25

capítulo 2
Baltimore descobriram que, em alguns vírus, a
informação biológica pode ser transferida do
RNA para o DNA (Figura 3).

SAIBA MAIS
Éxons: segmento de um gene mantido após o pro-
cessamento e traduzido nos ribossomos.

Íntrons: segmento de DNA, que se intercala aos

éxons, sendo retirado durante o processamento do
RNA e, portanto, não traduzido.

Figura 2- Famílias multigênicas. (a) simples – genes RNAr 5S de Droso-

phila; (b) complexa – grupos de genes da globina humana.

Pesquisa da Fix: Você

deve estar se pergun-
tando por que um
dado organismo preci-
sa de repetições de ge-
nes? Para compreender
melhor este evento,
pesquise, em livros e
em sites especializa-
dos, exemplos de gru-
pamentos de genes, Figura 3- Fluxo da informação genética: replicação, transcrição e tra-
com ênfase no papel que desempenham e no dução ocorrem em todos os organismos; transcrição reversa ocor-
re em células infectadas com vírus com RNA. Fonte: Snustad D.P. e
seu grau de conservação. Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara
Koogan.

Alguns genes são ditos descontínuos, pois se

apresentam divididos em unidades distintas,
separadas por segmentos de DNA. As unida- 2. EXPRESSÃO GÊNICA
des que contêm a informação biológica são
chamadas éxons, e as sequências intermedi- 2.1 TRANSCRIÇÃO
árias, íntrons. Os genes descontínuos podem
ser observados em vírus, eubactérias, arqueo- A transcrição é o primeiro estágio da expressão
bactérias e organismos superiores. gênica, processo através do qual o filamento
molde de DNA orienta a síntese de um fila-
1.1.1 O DOGMA CENTRAL mento complementar de RNA, denominado
transcrito. Como a maioria dos experimentos
Francis Crick, 1958, descreveu o processo hoje pioneiros na Genética Molecular, as primeiras
conhecido como expressão gênica como sen- descrições do processo de transcrição ocorre-
do a transferência da informação biológica ram em organismos procariontes. Este fato se
contida no DNA de um gene para o RNA, e, deve à simplicidade desses
posteriormente, para proteína. Crick conside- organismos em compara-
rou ainda que o fluxo de informação é unidire- ção aos eucariontes.
cional, ou seja, que a proteína não pode orien-
tar a síntese de RNA e que o RNA não pode Lista da Fix: Para relembrar
orientar a síntese de DNA. Esta parte do Dog- e compreender melhor,
ma foi questionada a partir de 1970, quando faça uma lista comparativa
independentemente, Howard Temin e David entre procariontes e euca-
26
capítulo 2
riontes, considerando as características básicas
e a organização e a estrutura gênica.
A sequência de DNA molde na transcrição será
a de DNA não molde do gene (sentido 5’3’),
ou seja, a sequência capaz de orientar um
transcrito de RNA similar ao filamento de DNA
não molde (Figura 4).
SAIBA MAIS
Transcrição: processo através do qual as moléculas de
RNA são sintetizadas pela RNA polimerase a partir de
um molde de DNA.
Expressão gênica: manifestação fenotípica dos genes.
Figura 4- A transcrição usa apenas um filamento molde de DNA. Fonte: Snustad D.P. e
Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
Para que uma molécula de RNA seja sintetiza-
da, é necessário que ocorra a polimerização
de subunidades de ribonucleotídeos, a qual
pode ser resumida como: n(NTP) →RNA com
n nucleotídeos de comprimento + n - 1(PPi);
nesta reação, o grupo 3’-OH de um ribonucle-
otídeo reage com o grupo 5’-P do segundo,
formando uma ligação fosfodiéster. Isto impli-
ca a subseqüente perda de uma molécula de
pirofosfato (PPi) para cada ligação formada. O
RNA transcrito é, portanto, sintetizado no sen-
tido 5’→3. A enzima que catalisa esta reação
chama-se RNA polimerase.
2.1.1 RNA POLIMERASE
A enzima RNA polimerase responsável pela
transcrição de todos os genes de E.coli foi des-
coberta em 1958. A RNA polimerase é uma
grande proteína formada por subunidades po-
lipeptídicas diferentes (α2ββ’σ), denominada
holoenzima (peso molecular de 480.000 dal-
tons), a qual pode se organizar de outra for-
ma (α2ββ’), na qual o cerne da enzima (peso
molecular de 395.000 daltons) está separado
da subunidade σ (sigma). Diferentemente, os
organismos eucariontes apresentam RNA po-
limerase mais complexas (oito a doze subuni-
dades com peso molecular superior a 500.000
daltons), classificadas em três ti-
pos diferentes: RNA polimerase I,
II e III, que transcrevem genes de
RNA ribossomal; RNA mensagei-
ro e pequeno nuclear; RNA trans-
portador, pequeno nuclear e ri-
bossomal 5S, respectivamente.
2.1.2 ETAPAS DA TRANSCRIÇÃO
A transcrição é dividida em três
etapas: início, alongamento
e término. Na primeira etapa,
ocorre o reconhecimento do sítio
de início da transcrição pela RNA
polimerase. Este sítio é sinalizado
por uma região chamada promo-
tor ou sequência promotora, que
está localizada anteriormente ao
gene. Estas sequências são iguais
ou muito similares em diferentes
organismos, de modo que estas
possam ser reconhecidas pela
RNA polimerase, o que faz com que sejam co-
nhecidas também como sequências concenso.
Em E. coli, a sequência promotora foi descri-
ta como sendo composta por duas unidades
diferentes, uma denominada boxe -35 (5’-TT-
GACA-3’) e a outra, boxe -10 (5’-TATAAT-3’),
ambas recebendo a denominação de boxes
-35 e -10 devido a sua localização na molécula
de DNA, em relação ao início da transcrição
(Figura 5).
SAIBA MAIS
Promotor: sequência de DNA localizada na extremi-
dade 5’ de um gene e reconhecida pela RNA polime-
rase, para dar início à transcrição.

Figura 5 –Transcrição: início. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001)
Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
Ainda na etapa de início, podemos observar
que a subunidade σ da holoenzima RNA poli-
merase (α2ββ'σ) em E. coli é responsável pela
localização do sítio promotor. Inicialmente é
formado pela RNA polimerase e o DNA, um
complexo chamado promotor fechado (a en-
zima cobre cerca de 60pb desde o boxe -35
ao -10), logo depois no boxe -10, ocorre a
quebra do pareamento de bases e a deseli-
coidização da molécula de DNA, formando o
complexo promotor aberto. Após a formação
desse complexo, a subunidade --é liberada e a
holoenzima é convertida ao cerne da enzima.
Verificamos, ainda, o pareamento dos dois
primeiros ribonucleotídeos com o filamen-
to molde na posição +1 e +2 e a síntese da
primeira ligação fosfodiéster da molécula de
RNA (Figura 6).
Figura 6 – Complexo promotor fechado. http://paginas.terra.com.br/
educacao/biolmol/Genetica-Medicina/index.htm
Na etapa de alongamento (Figura 7), a RNA
polimerase desenrola a molécula de DNA, na
medida em que avança, adicionando ribonu-
cleotídeos à extremidade 3’ da molécula de
RNA. Apenas uma parte da molécula é aberta
durante a transcrição, pois, após a polimeri-
zação, o transcrito se dissocia do filamento
molde, permitindo que a dupla hélice volte ao
27
capítulo 2
seu estado. Uma outra característica do alon-
gamento refere-se à velocidade da transcrição,
a qual é variável. Verificamos, ainda, que o
transcrito produzido é maior que o gene, pois
uma sequência inicial ou transcrito líder que
antecede o gene também sofre transcrição
bem como uma região posterior ao gene e an-
terior ao término da transcrição.
Figura 7- Transcrição: alongamento. Fonte: Snustad D.P. e Simmons
M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
O término da transcrição consiste na disso-
ciação da RNA polimerase e liberação do RNA
transcrito. Pode ocorrer de duas formas: 1-
Através de palíndromos complementares, que
são sequências capazes de se parearem den-
tro do filamento de DNA ou de RNA transcri-
to, formando haste-alça ou grampo, seguido
de uma sequência de cinco a dez adeninas no
DNA, a qual se pareia com uma sequência de
Uracilas do RNA e posterior rompimento do
pareamento com subseqüente liberação do
RNA; 2- Proteína dependente de rô é um outro
tipo de finalizador da transcrição, que atua na
ausência de sequências de As. A proteína cha-
mada rô (peso molecular de 276.000 daltons)
liga-se à molécula de RNA e a libera após o
pareamento intrafilamentar, responsável pela
formação de haste-alça ou grampo (Figura 8).
28
capítulo 2
SAIBA MAIS
Palíndromos: sequência de DNA cuja sequência complementar é a mesma, lida de forma equivalente em ambas as
direções.
Figura 8- Transcrição: término; liberação do RNA através de haste-alça ou grampo. Fonte: Snustad D.P. e
Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
2.1.3 TRANSCRIÇÃO EM EUCARIONTES
A transcrição em eucariontes, apesar de ser si-
milar ao observado em procariontes, apresen-
ta-se mais complexa, em especial, na etapa de
início. As três RNAs polimerases (I, II e III) reco-
nhecem promotores diferentes, de modo que
a transcrição é específica para grupos de ge-
nes. A formação do complexo de pré-iniciação
se dá pela polimerase e por vários fatores de
transcrição, como, por exemplo, TFIID, TFIIA,
os quais estão envolvidos no reconhecimento
dos promotores pela RNA polimerase. A etapa
de ligação da RNA polimerase ao complexo en-
volve outros fatores de transcrição.
SAIBA MAIS
Fatores de transcrição: proteína que se liga ao DNA
para ativar e regular a transcrição gênica.
Dentre eles, podemos destacar o TFIIH, que
é uma helicase com atividade de dissociação
do DNA, permitindo o início da transcrição. A
etapa de término ainda precisa ser melhor es-
tudada, sabendo-se que fatores de transcrição
devem se dissociar do complexo no final do
gene, levando à sua desintegração.
Aprofunde seu conhecimento, consultando o
capítulo 12 do livro: Snustad D.P. e Simmons
M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Edito-
ra Guanabara Koogan. Acessem o site: http://
www.ufv.br/dgb/gbol
2.2 TIPOS DE RNA
a) O RNA mensageiro (RNAm) é produzido a
partir da informação biológica de uma sequ-
ência gênica. Ele é intermediário entre o gene
e o produto da tradução e, em geral, não tem
vida longa na célula, sendo, portanto, produ-
zido sempre que necessário. Este tipo de RNA
sofre modificações e processamento antes
do processo de tradução em eucariontes, en-
quanto em procariontes, ele é cópia direta do
gene. As principais modificações consistem em
alterações químicas nas duas extremidades da
molécula de RNAm, remoção de íntrons, e, em
alguns casos, alterações na sequência de nu-
cleotídeos do RNAm.
 29

capítulo 2
Inicialmente, vamos discutir as modificações químicas nas extremidades do RNAm, as extremida-
des 5’ são revestidas por uma estrutura complexa m7GpppNpN, onde m7G é o nucleotídeo, que
transporta a base modificada 7-metilguanina, e que é adicionado à molécula de RNAm após a
transcrição. Na extremidade 3’ da maioria dos RNAsm de eucariontes, é adicionada cerca de 250
nucleotídeos A, formando uma cauda denominada cauda poli (A): ...pNpNpA(pA)npA. Este tipo
de modificação é chamado poliadenilação e é produzido pela enzima poli (A) polimerase (Figura
9). Um outro tipo de modificação consiste na remoção de íntrons e reunião de éxons, antes que
ocorra a tradução. Este processo, denominado de recomposição (splicing), é considerado com-
plexo e ocorre em genes descontínuos (Figura 10).

SAIBA MAIS
Poliadenilação: adição de sequência de resíduos de adenina à extremidade 3’ de um pré RNAm (RNA heterogêneo),
em eucariotos.

Figura 10- Mecanismo de recomposição (splicing). Fonte: Snustad

D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Gua-
nabara Koogan.

Figura 9- Inserção do 7-metil guanosina e da cauda poli A. Fonte: Snustad

D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara
Koogan.

Pesquisa da Fix: você ção de duas proteínas com funções bioquími-

pode desvendar os cas diferentes, oriundas da informação bioló-
mistérios desse proces- gica de um mesmo gene.
so, pesquisando sobre
sinais envolvidos na re- b) O RNA ribossomal (RNAr) é um dos com-
moção de íntrons, vias ponentes dos ribossomos, que são estruturas
de remoção e diferen- complexas com grande atuação no processo
tes tipos de íntrons. Ver de tradução. Nos ribossomos, encontramos
bibliografia indicada. uma cópia de cada um dos tipos de RNAr exis-
tentes, três RNAsr em ribossomos de proca-
Por último, conversaremos um pouco sobre a riontes e quatro em eucariontes. O transcrito
edição de RNA, ou seja, a modificação de um primário do RNAr é chamado pré-RNAr e con-
RNAm através da inserção de novos nucleo- tém os tipos de RNAr (16S, 23S e 5S em pro-
tídeos ou pela deleção de nucleotídeos. Este cariontes, e 18S, 5,8S e 28S em eucariontes),
tipo de modificação é responsável pela obten- separados por espaçadores. Os genes de 5S
30
capítulo 2
em eucariontes encontram-se separados dos
demais genes de RNAr. Tanto para procarion-
tes como em eucariontes, existem repetições
de unidades de transcrição do RNAr e ocorrem
cerca de sete cópias em procariontes e de 50 a
5.000 cópias, em eucariontes (Figura 11).
SAIBA MAIS
Inserção: adição de qualquer segmento de DNA;
também pode se referir à alteração cromossômica
estrutural.
Deleção: perda de qualquer segmento de DNA; também
pode se referir à alteração cromossômica estrutural.
Ribossomos: organelas celulares constituídas de RNAr
e proteínas; organelas responsáveis pela tradução.
Figura 12- Configuração em trevo do RNAt. Fonte: Snustad D.P. e Simmons
M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
Figura 11- RNAs ribossomais (RNAr) e proteínas na formação
dos ribossomos. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001)
Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
c) O RNA transportador (RNAt) é relativamente
pequeno, possuindo cerca de 74 a 96 nucleo-
tídeos para diferentes moléculas de distintos
organismos. Todas as moléculas de RNAt for-
mam uma configuração que se assemelha a
um trevo, o qual está constituído dos seguin-
tes componentes: braço aceptor, braço D ou
DHU, braço anticódon, braço extra ou variável
e braço TψC (Figura 12). Veremos, com mais
detalhes no item tradução, o papel desempe-
nhado pelos braços do RNAt. Em procarion-
tes e eucariontes, os RNAt são transcritos em
precursores de RNAt, que são processados e,
posteriormente, liberados como RNAt madu-
ros. Do mesmo modo que o RNAr, o RNAt
também possui múltiplas cópias em respos-
ta à demanda celular.
Pesquisa da Fix: Existem
outros tipos de RNA,
como, por exemplo, o
pequeno nuclear e o
RNA de interferência.
Este último descoberto
no início dos anos 2000.
Aproveite este momen-
to, em que sua curiosi-
dade está aguçada e pesquise sobre o papel
dos RNAs pequeno nuclear e de interferência

na célula.
2.3 CÓDIGO GENÉTICO
A descrição completa do código genético só
foi determinada no ano de 1966, quando se
elucidou a colinearidade entre o gene e apro-
teína e a correspondência entre cada códon do
código a uma trinca de nucleotídeos. A partir
daí, foi possível conhecer as características do
código, dentre elas:
1. o código é redundante, no qual todos os
aminoácidos, exceto a metionina e o trip-
Tabela 1 - Código Genético. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
(Tabela 1).
2.4 TRADUÇÃO
A tradução é o segundo processo da expressão
gênica, diferente da transcrição, ocorrendo no
citoplasma, em eucariontes e de forma conco-
mitante com a transcrição em procariontes. É
considerado um processo complexo, que en-
volve muitos elementos. Para que a tradução
ocorra adequadamente, é fundamental que o
código genético seja respeitado. O RNAt é im-
prescindível durante esse processo, pois cada
31
capítulo 2
tofano, possuem mais de um códon;
2. é considerado não-ambíguo, ou seja, uma
trinca só pode codificar um aminoácido;
3. sem superposição, isto é, uma dada base
pertence a uma só trinca;
4. é contínuo, não existindo espaçamento
entre os códons;
5. o código é quase universal, pois códigos
fora do padrão foram observados em ge-
nes mitocondriais de Drosophila, fungos e
leveduras;
6. o código contém códons de pontuação
dos tipos códons de iniciação (AUG - me-
tionina) e finalização (UAA, UGA e UAG)
molécula de RNAt é específica a um dos 20
aminoácidos envolvidos na síntese protéica. O
RNAt sofre aminoacilação, ou seja, cada RNAt
forma uma ligação com um aminoácido espe-
cífico. O aminoácido se liga à extremidade do
braço aceptor do trevo do RNAt através da liga-
ção do grupamento carboxila do aminoácido e
do grupamento 3’-OH do nucleotídeo termi-
nal do RNAt. Esta associação é controlada pela
aminoacil-RNAt sintetase. Após a ligação do
aminoácido correto ao braço aceptor do RNAt,
a molécula necessita completar a ligação entre
32
capítulo 2

o RNAm e o polipeptídeo por meio do reconhecimento do códon correto e da ligação a ele. A alça
anticódon do RNAt liga-se a ele através do pareamento de bases, pois é complementar ao códon.

Da mesma forma que a transcrição, a tradução também apresenta três etapas: início, alongamen-
to e término. Como exemplo do processo de tradução, veremos as etapas em E. coli. No início,
a subunidade menor do ribossomo (30S) se ligará a uma molécula de RNAm em um ponto es-
pecífico (5’-AGGAGGU-3’), antecedente ao códon de início do gene. Esta sequência é chamada
sequência de Shine-Dalgarno. Logo após a localização do sítio de início, a subunidade migra até
encontrar o códon AUG, que corresponde ao códon de início da tradução. Quando um RNAt
associado à metionina é formilado (fmet) e forma pares de bases com o códon de iniciação locali-
zado na subunidade 30S, declaramos que foi formado o complexo de iniciação. Participam, ainda,
da formação desse complexo alguns fatores de iniciação (IF1, IF2, IF3) (Figura 13).

Figura 13 – Início da Tradução- fatores de iniciação (IF1, IF2, IF3). Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J.
(2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.

Durante a etapa de alongamento da cadeia pelo RNAtfmet aminoacetilado. O segundo sítio

polipeptídica, a subunidade maior do ribosso-
mo se liga ao complexo através da hidrólise da
molécula de GTP associada ao complexo de ini-
ciação, gerando dois sítios distintos. O primei-
ro sítio denominado Peptidil ou P’ é ocupado
chamado sítio aminoacil ou A posiciona-se so-
bre o segundo códon do gene. O alongamento
se inicia, quando o RNAt correto se encaixa no
sítio A e forma pares de bases com o segundo
códon. Alguns fatores de alongamento são ne-
 33

capítulo 2
cessários (EF-Tu, EF-Ts) para a entrada do aminoacil RNAt no sítio A. Após a ocupação dos dois sítios,
ocorrerá uma ligação peptídica entre o grupamento carboxila do fmet e o grupamento amino do se-
gundo aminoácido. A enzima que catalisa esta reação é a peptidil transferase. O ribossomo desliza
ao longo do RNAm, de modo que o RNAt a-a se encaixe no sítio P e o RNAtfmet se dissocie do sítio
A, liberando-o, para que outro RNAt aminoacetilado possa penetrar no sítio A. Esse processo é
chamado de translocação, repetindo-se várias vezes, durante o ciclo de alongamento (Figura 14).

Figura 14- Alongamento da tradução. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
34
capítulo 2

Figura 14- Alongamento da tradução. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara
Koogan.

Na etapa de término da tradução, um dos três
códons finalizadores (UAA, UAG ou UGA) se
apresenta ao sítio A. Um dos dois fatores de
liberação (RF1 ou RF2) entra no sítio A e cliva o
polipeptídio a partir do RNAt final. Um terceiro
fator (RF3) desempenha um papel secundário
nesse processo. Após a ação desses fatores
e liberação do polipeptídio, o complexo de
tradução é desfeito, as subunidades do ribos-
somo se separam, e os fatores são liberados
(Figura 15).
 35

capítulo 2
Figura 15- Término da tradução. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora
Guanabara Koogan.

2.4.1 TRADUÇÃO EM EUCARIONTES iniciação em eucariontes requer a hidrólise de

uma molécula de ATP; 5- o término da tradu-
A tradução em procariontes e eucariontes é ção requer a hidrólise de uma molécula de GTP.
bastante similar, contudo difere em alguns as-
pectos. São eles: 1- A subunidade pequena do Desafio da Fix: através
ribossomo reconhece uma estrutura capsular, da modelagem, vocês
a qual se liga à extremidade 5’ do RNAm, de- podem realizar os pro-
pois se move ao longo do RNAm, até alcançar cessos de transcrição e
um códon iniciador; 2- O RNAt iniciador trans- tradução, os quais ne-
porta uma metionina não formilada; 3- o início cessitam de abstração.
da tradução requer mais fatores de iniciação Para isso, acessem www.
do que o necessário para procariontes; 4- a sbg.org.br/GeneticaEs-
36
capítulo 2
cola2/web/vol2Num1.htm - O ensino da trans-
crição e tradução para portadores de necessi-
dades educativas especiais - visuais e pessoas
de visão normal. Uma outra forma dinâmica
de trabalhar com esses processos é acessar o
Programa GBOL (http://www.ufv.br/dgb/gbol -
Genética Molecular- Dogma central), no qual
é permitido ao usuário acompanhar os pro-
cessos de forma automática ou passo a passo
(botão manual), além de alterar a velocidade
da apresentação das etapas da transcrição ou
da tradução.
3. MUTAÇÃO E REPARO
DA MOLÉCULA DE DNA
3.1 MUTAÇÃO
Mutação é uma alteração do material gené-
tico de células (ou vírus), podendo ocorrer
no genoma, nos cromossomos ou no gene.
Geralmente, quando nos referimos à muta-
ção, estamos tratando de uma alteração em
um único gene, conhecida como mutação de
ponto ou gênica.
Uma mutação é uma pequena alteração na
molécula de DNA, a qual pode ocorrer duran-
te o processo de replicação, podendo ou não
ser corrigida. Quando o erro não é corrigido,
ocorre o mau pareamento entre os filamentos
da molécula filha, promovendo a formação
de moléculas-netas diferentes, uma apresen-
tando a sequência correta de nucleotídeos,
enquanto a outra apresenta uma mutação.
As mutações podem ser neutras ou graves,
por isso, para minimizar os problemas que
podem advir das mutações, os organismos
possuem mecanismos de reparo do DNA, os
quais corrigem o mau pareamento e as pos-
síveis alterações.
As mutações podem ocorrer dentro de um
gene ou em regiões intergênicas. Se a muta-
ção ocorrer em um gene, ela pode alterar o
produto gênico e provocar uma alteração de
fenótipo. Contudo, se a mutação ocorrer em
uma região intergênica, ela provavelmente
não terá efeito sobre a célula e será denomina-
da de silenciosa.
3.1.1 TIPOS DE MUTAÇÃO
Para classificar as mutações, em geral, são
considerados os seguintes aspectos: o tipo de
alteração sofrida pela sequência de DNA; os
possíveis efeitos provocados pela mutação e as
possíveis alterações fenotípicas resultantes da
mutação.
3.1.1 TIPOS DE MUTAÇÃO
Para classificar as mutações, em geral, são
considerados os seguintes aspectos: o tipo de
alteração sofrida pela sequência de DNA; os
possíveis efeitos provocados pela mutação e as
possíveis alterações fenotípicas resultantes da
mutação.
1. Mutações na sequência de DNA
A mutação pode ser denominada de mutação
de ponto (Figura 16a), quando ocorre a subs-
tituição de um nucleotídeo por outro. Pode ser
classificada de transição, por exemplo, quando
ocorre a substituição de uma purina por ou-
tra purina (A « G) ou de uma pirimidina por
outra pirimidina (T « C). Pode ainda ser uma
transversão, se a alteração for de uma purina
para uma pirimidina ou vice-versa (A ou G «
T ou C). São verificadas, ainda, mutações do
tipo inserção ou deleção, nas quais ocorre a
adição ou remoção de um par ou vários pares
de bases. Existe ainda a inversão, que consis-
te na retirada de uma sequência da molécula
de DNA e sua reintegração na mesma posição,
porém invertida.
SAIBA MAIS
Mutação de ponto: alteração em um loco gênico es-
pecífico, podendo ser ocasionada por substituição,
inserção ou deleção de uma única base (ou poucas).
Mutação silenciosa: aminoácidos equivalentes fun-
cionalmente podem substituir-se reciprocamente, e,
assim, o produto mutante funciona como o original.
Transição: substituição de base púrica por púrica ou
pirimídica por pirimídica.
Transversão: substituição de base púrica por pirimídi-
ca ou vice-versa.

Figura 16- Tipos de mutação. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Gua-
nabara Koogan.
2. Mutações em um gene
Pode ser qualquer um dos tipos de mutações
na sequência de DNA, considerando que es-
tas ocorram em uma região codificante de um
gene.
A mutação pode ser dita silenciosa, quando a
alteração de um nucleotídeo modificar, em ge-
ral, a terceira base de um códon, provocando
alteração do códon, mas não, do aminoáci-
do. Isso ocorre devido à redundância do có-
digo genético. Contudo, se a mutação ocorrer
no primeiro ou no segundo nucleotídeo do
códon, a mutação é denominada de sentido
trocado, a qual alterará a base e, por conse-
guinte, o aminoácido. A mutação sem sentido
também é uma mutação de ponto, que muda
um códon especificador para um códon fina-
lizador. Por último, falaremos da mutação ca-
paz de provocar mudança na matriz de leitura;
essa mutação pode ser dos tipos inserção ou
deleção, pois a adição ou remoção de pares de
bases que não seja múltiplo de três provocará
alteração na tradução (figura 16b).
37
capítulo 2
SAIBA MAIS
Deleção: perda de qualquer segmento de DNA; tam-
bém pode se referir à alteração cromossômica estru-
tural.
Inversão: quebra e rotação de 180º de qualquer seg-
mento de DNA; também pode se referir à alteração
cromossômica estrutural.
Mutação de sentido trocado: a substituição de uma
base troca o aminoácido original por outro.
Mutação sem sentido: mutação que gera um códon
finalizador.
Mutação por mudança na matriz de leitura: mutação
por deleção ou adição de número de bases não múl-
tiplo de três, alterando a leitura.
3. Mutação em um organismo
Consiste na ocorrência de uma mutação capaz
de formar um fenótipo mutante. Este mutan-
te poderá perder parcialmente a atividade de
uma dada proteína, que passa a ter sua ati-
vidade reduzida, aumentada ou nula. Isso
ocorre em procariontes e eucariontes. Vários
38
capítulo 2
exemplos de mutantes foram observados em
E. coli, dentre eles, os mutantes dos tipos au-
xotróficos, condicional-letais, sensíveis à tem-
peratura, resistentes a antibióticos e mutantes
regulatórios.
Pesquisa da Fix: pesquise
sobre esses tipos de mu-
tantes e procure observar
as consequências prove-
nientes da mutação para
o mutante, a ciência e a
sociedade.
A mutação poderá, também, gerar um produ-
to gênico incapaz de desempenhar sua função
na célula. Neste caso, a célula poderá morrer,
e esta mutação será considerada letal. Vários
exemplos foram destacados na disciplina Ge-
nética Geral, dentre esses um letal dominante
em humanos, a Acondroplasia.
SAIBA MAIS
Letal: gene ou genótipo que, ao se expressar, ocasio-
na morte ao seu portador.
3.1.2 AGENTES MUTAGÊNICOS
Vimos que as mutações podem ocorrer devido
a erros no processo de replicação. Além desses
erros, a mutação pode também ser provenien-
te da ação de mutágenos, que se encontram
freqüentemente no meio e provocam altera-
ções na molécula de DNA. Vejamos alguns ti-
pos principais, como: 1-análogos de bases, os
quais podem substituir uma base durante a re-
plicação, como por exemplo, a 5-bromouraci-
la, que é derivada da timina por uma substitui-
ção do grupamento metila (-CH3) por bromina
(-Br); 2- agentes intercalantes são compostos
que se intercalam na dupla hélice, provocan-
do perturbação na replicação, provavelmente
devido à inserção de pares de bases. Este tipo
de mutágeno é comumente usado em labo-
ratórios de pesquisa; em geral, são corantes,
como, por exemplo, a acridina e o brometo de
etídeo; 3- o calor é um dos mutágenos am-
bientais mais importante, é capaz de clivar as
ligações entre as bases púricas e seus açúca-
res, e em menor escala, também, afetam as
ligações das bases pirimídicas; 4- a radiação
ultravioleta, que causa dimerização das bases,
ou seja, faz com que as bases se juntem, origi-
nando deleções durante a replicação do DNA.
Você sabia que o câncer é uma doença genéti-
ca, embora nem sempre seja hereditário ?
Pesquisa da Fix: pesqui-
se os principais agentes
mutagênicos responsá-
veis por mutações em
protooncogenes, suas
consequências e as eta-
pas de desenvolvimento
do câncer (mutação ®
metástase).
Desafio da Fix: o Programa GBOL (http://www.
ufv.br/dgb/gbol - Mutações) disponibiliza vá-
rias formas de trabalhar com o tema muta-
ções. Vocês poderão observar as várias formas
mutantes em Drosophila, a diversidade genéti-
ca em plantas, como o milho, maracujá e fei-
jão, além de ter acesso ao código genético por
diferentes formas. Acessem e divirtam-se.
3.2 REPARO
O reparo do DNA é um processo complexo, no
qual existe um número variável de proteínas,
como, por exemplo, em E. coli foram obser-
vadas 24 proteínas diferentes. Existem vários
tipos de mecanismos de reparo, dentre eles
destacaremos quatro, que são: 1- reparo di-
reto, que consiste na reversão de uma altera-
ção estrutural; 2- reparo por excisão de bases,
que ocorre através da ação de enzimas (uracila
DNA glicosilase, endonucleases, fosfodiestera-
ses, polimerases); 3- reparo de excisão de nu-
cleotídeos, realizado por várias enzimas, que
fazem quebras unifilamentares em ambos os
lados de um nucleotídeo danificado; 4- repa-
ro de mau pareamento, que corrige erros in-
troduzidos durante a replicação no filamento
filho.
Pesquisa da Fix: você
sabia que existem vá-
rias síndromes humanas
oriundas de defeitos no
sistema de reparo de
DNA? Alguns exemplos
são o Xeroderma pig-
mentoso, a Síndrome de
 39

capítulo 2
Bloom, a Pancitopenia de Fanconi e a Atalaxia-
-telangiectasia. Para ter acesso a informações
3. Utilize a tabela do código genético para
citar duas seqüências diferentes do RNAm
sobre essas doenças, utilize o site de busca: que podem codificar a seguinte seqüência
http://www.google. de aminoácidos: Arginina – Glicina – Histi-
dina – Aspartato – Alanina.

REVISANDO 4. As mutações são classificadas em vários ti-

CONHECIMENTOS pos, alguns dos quais estão citados abaixo.
Faça a correta associação entre esses tipos
1. Com qual sequência de 5’ a 3’, a sequência com as características e os exemplos. (Pes-
quise a tabela do código genético)
5’ – ACTGCCATGCTA – 3’ em um filamento
molde de DNA codifica uma molécula de
RNA ? Tipo Características Exemplo
a) 5’...TGACGGTACGAT...3’ 1. Sentido A. Substituição I. G para A
b) 5’...UAGCAUGGCAGU..3’ contrário de uma purina
c) 5’...TAGCATGGCAGT...3’ por uma piri-
d) 5’...UGACGGUACGAU..3’ midina ou vice
e) 5’...ATCGTACCGAGA...3’ versa.
2. Transição B. Substituição II. T para G
2. Teste seus conhecimentos sobre as bases de uma purina
da expressão gênica, analisando as afir- por outra puri-
mativas abaixo e assinalando-as como ver- na ou de uma
dadeiras ( V ) ou falsas ( F ). Em seguida, pirimidina por
justifique as respostas consideradas falsas. outra pirimidi-
na.
Em procariontes e eucariotes, as mo- 3. Silenciosa C. Resulta na III. ATG GGA
( ) léculas de RNAm são sintetizadas no substituição deGCT CTA TTA
sentido 5’→3’, com a adição de ribonu- um aminoácido ACC TAA
cleotídeos ao grupo 3-hidroxila na ponta por outro tipo.para ATG
da cadeia da molécula. GGA GCT
Cada códon, presente no RNAm, é CTA TGA
( ) específico para um aminoácido, assim ACC TAA
como cada aminoácido é codificado por, 4. Transversão D. Muda um IV. ATG GGA
apenas, um tipo de códon. códon especifi- GCT CTA TTA
( ) Para início da transcrição, a RNA polime- cador de uma ACC TAA
rase liga-se a um sítio específico de DNA aminoácido para ATG
denominado de promotor. para um códon AGA GCT
( ) O código genético é composto por có- finalizador, CTA TTA
dons, cada um deles sendo constituído oca-si onan- ACC TAA
de três nucleotídeos. do o término
Nas células eucarióticas, os segmentos prematuro da
( ) íntrons e éxons são traduzidos de for- tradução.
mas diferentes ; os primeiros codificam 5. Sem E. Altera o có- V. ATG GGA
proteínas estruturais, e os segundos, sentido don, mas não GCT CTA TTA
proteínas repressoras ou reguladoras. altera o ami- ACC TAA
( ) Os códons que representam finalização noácido a ser para ATG
de cadeia são encontrados no RNAt. codificado. GGA GCT
CTA TTG
( ) A enzima aminoacil-RNAt sintetase ACC TAA
catalisa as ligações entre aminoácidos e
moléculas de RNAt.
40
capítulo 2

Assinale a alternativa que faz a correta as-

sociação

a) 1DII; 2AI; 3BIV; 4CV; 5EIII.

b) 1BIV; 2EII; 3AV; 4CIII; 5DI.
c) 1CIV; 2BI; 3EV; 4AII; 5DIII.
d) 1EII; 2CIV; 3DV; 4AIII; 5BI.
e) 1BI; 2AIII; 3EIV; 4CII; 5DV.

5. Você aprendeu que há diferentes tipos de

sistemas de reparo do DNA. Pesquise so-
bre o reparo de mau pareamento e respon-
da: 1) Por que é importante as enzimas de
reparo reconhecerem qual a fita parental e
a recém sintetizada? 2) Como é realizado
o reconhecimento?

REFERÊNCIAS
LEITURA FUNDAMENTAL

SNUSTAD, D. P. e SIMMONS M. J. Fundamen-

tos de Genética: Guanabara Koogan S/A, 2000.

LEITURA COMPLEMENTAR

GRIFFITHS, A. J. F.; WESSLER, S. R.; LEWONTIN,

R. C.;GELBART, W. M.; SUZUKI, D. T.e MILLER,
J. H. Introdução à Genética: Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan S/A, 2006.

SITES

http://www.ufv.br/dgb/gbol

www.sbg.org.br/GeneticaEscola2/web/vol-
2Num1.htm

http://www.google
 41

capítulo 3
Genética de Vírus e
Bactérias, Técnicas de
Genética Molecular e
suas Principais Aplicações

Profa. Rita de Cássia de Moura Carga Horária I 15H

Colaboradoras: Profa. Marília de França Rocha
Profa. Maria Teresa Marquim Nogueira Cornélio

INTRODUÇÃO
Estudaremos os vírus, que constituem a
mais simples forma de vida, e as bactérias
sob os seguintes aspectos: ciclo de vida,
organização genômica e recombinação. Es-
tes conhecimentos permitirão uma melhor
compreensão da variabilidade genética bem
como contribuirão para o melhor entendi-
mento das metodologias adotadas na bio-
logia molecular.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Comparar os ciclos de vida dos bacterió-
fagos;

• Distinguir os diferentes tipos de recombi-

nação em bactérias;

• Conhecer as principais técnicas de gené-

tica molecular.
42
capítulo 3

1. VÍRUS
Os vírus são biologicamente tão simples que
alguns pesquisadores consideram que eles não
são organismos, embora hoje concordem que
são parasitos ultracelulares permanentes; que
a maioria depende da maquinaria enzimática
da célula hospedeira para replicar e transcrever
seus genes e que necessitam dos ribossomos e
do aparato de tradução do hospedeiro. Quan-
to a sua origem, considera-se que o fato de
eles dependerem da célula hospedeira, seja ela
bacteriana ou eucariótica, indica que os vírus
evoluíram depois do aparecimento da célula,
provavelmente a partir de segmentos de DNA
ou RNA, os quais teriam adquirido a capacida-
de de se replicar independente do genoma da
célula hospedeira.

Existem diferentes tipos de vírus; os mais estu-

dados são aqueles capazes de infectar bacté-
rias, denominados de bacteriófagos ou fagos,
os quais veremos com mais detalhes abaixo.

SAIBA MAIS
Bacteriófagos (fagos) – vírus que infecta bactérias.

1.1 BACTERIÓFAGOS Figura 1 - Estrutura do capsídeo. a-eletromicrografia, b- diagrama.

Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética.
Editora Guanabara Koogan.

Os bacteriófagos estão constituídos de ácido

nucléico e proteínas. A proteína é responsável
pela formação de um revestimento chamado
capsídeo, o qual contém em seu interior o ge-
noma do fago. O capsídeo pode apresentar
três tipos de estrutura básica: Icosaédrica, em
forma geométrica; filamentar ou helicoidal,
em forma de bastão; cabeça e cauda, uma
combinação de uma estrutura icosaédrica a
uma cauda filamentar (Figura 1).
1.1.1 CICLOS DE VIDA DE BACTERIÓFAGOS
Para exemplificar os ciclos de vida dos bac-
teriófagos, usaremos exemplos de fagos que
infectam a E. coli: o T4 para o ciclo lítico ou
virulento e o λ (lambda) para o ciclo lisogênico
ou temperado.
1.1.1.1 CICLO LÍTICO
O primeiro passo para que o T4 infecte a E. coli
é a ligação do fago a uma proteína recepto-
ra (chamada OmpC) na superfície da bactéria.
Depois da ligação, o fago introduz o seu DNA
na bactéria, através de sua cauda.
Logo após a introdução do DNA do fago, a
síntese de DNA, RNA e proteínas da bactéria
é desligada, por um complexo entre a RNA
polimerase modificada da célula hospedeira e
as proteínas iniciais do fago, as quais são pro-
duzidas dentro de minutos, após a infecção.
A RNA polimerase modificada reconhece os
promotores dos genes do fago e catalisa sua
transcrição. Um aspecto importante do ciclo
de T4 consiste na adição de grupos hidroxi-
metila às citosinas do fago, protegendo-as
da degradação por nucleases produzidas pelo
fago, as quais degradam o DNA da bactéria
hospedeira. Proteínas posteriores também são
produzidas e são responsáveis pela formação
de estruturas da cabeça e cauda do fago. Este
 43

capítulo 3
ciclo dura 22 minutos e é encerrado quando o fago codifica uma enzima chamada lisozima, a
qual junto com outras proteínas rompe a bactéria hospedeira e libera cerca de 100 a 300 fagos
da prole (Figura 2).

Figura 2 - Ciclo lítico. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.

1.1.1.2 CICLO LISOGÊNICO

O fago λ , como a maioria de outros fagos temperados, pode seguir o ciclo lítico, embora freqüen-
temente utilize o ciclo lisogênico, cuja diferença básica consiste na integração do genoma do fago
ao DNA hospedeiro. Logo após a entrada do DNA do fago na bactéria, ocorre a integração, e o
bacteriófago passa a ser chamado de profago. A integração ocorre devido ao processo de recom-
binação, que é possível graças a uma pequena região (cerca de 15pb) idêntica entre a molécula
de DNA do fago e o genoma de E. coli.

O profago integrado pode permanecer na molécula hospedeira, por muitas gerações da célula.
Ele pode ser induzido por estímulos químicos ou físicos a assumir o ciclo lítico. Para que isso ocor-
ra, é necessária uma segunda recombinação, que excisa o genoma do fago do DNA hospedeiro.
O DNA do fago se replica, as proteínas de revestimento são sintetizadas, a célula se rompe, e os
novos fagos λ são liberados (Figura 3).
44
capítulo 3

Figura 3- Ciclo lisogênico. Fonte: Pierce, B.A. (2004) Genética um enfoque conceitual. Editora Guanabara Koogan.

1.1.2 ORGANIZAÇÃO GÊNICA para traçar uma comparação entre bacterió-

fagos e vírus eucariótico. Além de termos, é
Quando dizemos que os bacteriófagos estão claro, a oportunidade de conhecer um pouco
constituídos de ácidos nucléicos, nos referimos sobre sua estrutura, ciclo de vida, genoma e
ao fato de alguns fagos terem como material curso da infecção. Pesquise esse tema no ca-
genético o DNA e outros, o RNA. O genoma pítulo 16, do livro: Snustad D.P. e Simmons
dos fagos, seja de DNA ou RNA, pode ser bi- M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora
filamentar ou unifilamentar. Pode ainda estar Guanabara Koogan e em outras bibliografias
constituído de, apenas, uma molécula ou de especializadas.
um número de moléculas diferentes. Nesse
caso, dizemos que o genoma é segmentado. Desafio da Fix: acesse o
texto Gripe aviária: Se-
Os genomas de bacteriófagos são relativamen- guindo as pegadas de
te pequenos, como, por exemplo, o genoma um novo vírus, Eliana M.
do M13, que possui 6.407 nucleotídeos e um B. Dessen, no site abai-
pouco mais de dez genes conhecidos; o ΦX174 xo. http://www.sbg.org.
com 5.386 nucleotídeos armazena informação br/GeneticaEscola2/web/
biológica extra, pois possui genes superpostos, Vol1Num1.htm
os quais compartilham sequências de nucleo-
tídeos que codificam 11 proteínas diferentes
com mais de 2.300 aminoácidos. Por outro 2. BACTÉRIAS
lado, alguns bacteriófagos possuem genomas
maiores, como o T4, com 166kb e cerca de 2.1 RECOMBINAÇÃO EM
150 genes, e o fago λ com 49,5kb e mais de BACTÉRIAS: UMA VISÃO
44 genes. GERAL
Pesquisa da FIX: considerando que a estrutura As bactérias se reproduzem assexuadamente,
básica do vírus HIV é comum a de outros vírus contudo, elas também possuem o modo de re-
eucarióticos, podemos usá-lo como modelo produção sexuada, o qual permite a recombi-
 45

capítulo 3
nação entre o cromossomo de uma linhagem Quadro 1: Critérios para o reconhecimento
doadora com o cromossomo de uma linhagem dos três processos parassexuais.
receptora, de forma unidirecional. Como não Processo de Critério: Critério: sensibi-
há processo meiótico em procariontes, devido recombinação Contato celular lidade à DNase
à ausência de citoesqueleto, a recombinação Transformação Não Sim
não é necessariamente recíproca. Uma bacté- Conjugação Sim Não
ria contém um cromossomo, em geral circular, Transdução Não Não
o qual possui milhares de genes. Pode ter, ain-
da, elementos extracromossômicos denomina-
dos plasmídeos. Contudo, se a DNase estiver presente no meio
de cultura do tubo em U, e ainda assim ocorrer
SAIBA MAIS recombinação, é porque o processo envolvido
é do tipo transdução.
Plasmídeo – DNA circular extracromossômico encon-
trado em bactérias, possui capacidade de auto-repli-
2.1.2 TRANSFORMAÇÃO
cação e serve como vetor de clonagem.

A transformação é um processo que só ocor-

Os três principais tipos de transferência gené-
re em bactérias ditas competentes, pois estas
tica em bactérias são: transformação, proces-
possuem a maquinaria enzimática e as proteí-
so pelo qual uma molécula de DNA doadora
nas necessárias para captar moléculas de DNA
é captada no meio e incorporada ao genoma
livres no meio e transportá-las para o citoplas-
de uma célula receptora; conjugação, proces-
ma. Apenas as células que portam um fator
so no qual as bactérias fazem contato efetivo,
competente, uma pequena proteína que induz
e há transferência de DNA de uma célula do-
a síntese de oito a dez proteínas envolvidas na
adora para uma célula receptora; transdução,
transformação. Como exemplo, usaremos o
transferência de DNA de uma célula para ou-
Streptococcus pneumoniae, onde uma célula
tra, através de vírus. Todos os três processos
competente liga-se a um grande filamento bi-
são ditos parassexuais, visto que a recombina-
filamentar de DNA em sítios receptores espe-
ção não ocorre através da meiose.
cíficos na superfície da bactéria. Após o reco-
nhecimento e ligação ao sítio, a molécula de
2.1.1 TESTE PARA TRANSFORMAÇÃO,
DNA move-se através da membrana celular, e
CONJUGAÇÃO E TRANSDUÇÃO
um dos dois filamentos de DNA é hidrolisado
por uma exonclease, recebendo, desse modo,
Os tipos parassexuais de transferência gênica
energia para o transporte do DNA através da
em bactérias podem ser separados através de
membrana. O filamento de DNA não degrada-
critérios simples, são eles: sensibilidade à de-
do é transportado através da membrana. Esse
soxirribonuclease (DNase) e dependência de
DNA está revestido com proteínas de ligação
contato célula-célula (ver Quadro 1). Estes cri-
ao DNA, e proteínas de recombinação procu-
térios são facilmente testados, pois basta que
ram regiões homológas na célula receptora
se adicione ao meio, contendo linhagens de
(Figura 4). Este tipo de recombinação é unidi-
bactérias envolvidas na recombinação. Caso
recional e não recíproco.
não ocorra a recombinação, o processo envol-
vido deve ser do tipo transformação, no qual
Pesquisa da FIX: o
o DNA fica livre no meio e facilmente pode
processo de transfor-
ser degradado pela DNase. Na conjugação e
mação pode diferir de
transdução, o DNA não fica livre no meio. O
bactéria para bactéria,
processo de conjugação deverá ser verificado
por isso sugiro que vo-
através do experimento do tubo em U, no qual
cês pesquisem em sites
bactérias de duas linhagens diferentes são co-
e na bibliografia reco-
locadas nos braços opostos de um tubo de
mendada o processo
cultura em forma de U. Como nesse proces-
de transformação em
so ocorre contato célula-célula, o filtro evita a
Haemophilis influenzae, para que possam co-
passagem da molécula de DNA de um braço
nhecer outro modo de transformação.
para o outro, evitando a recombinação.
46
capítulo 3
Figura 4- Transformação em Streptococcus pneumoniae. Fonte: Snus-
tad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Gua-
nabara Koogan.
2.1.3 CONJUGAÇÃO
A conjugação é o processo no qual ocorre
transferência de material genético de uma li-
nhagem de bactérias para outra, unidirecio-
nalmente, criando genótipos de recombina-
ção. Durante a conjugação, o DNA bacteriano
pode ou não ser transferido para uma célula
receptora. Em um cruzamento entre uma célu-
la doadora F+ x F-, os genes da célula doadora
raramente são transferidos para uma célula re-
ceptora, o que ocorre é a transferência de um
plasmídeo chamado fator F de fertilidade, que
torna a célula receptora F+. Os genes do fator
F facilitam o contato celular e a transferência
do fator F, enquanto que alguns genes do fa-
tor F- direcionam a síntese de filamentos (pili)
sexuais. O fator F se insere no cromossomo
bacteriano, devido à presença de sequências
de inserção denominadas (IS). A replicação do
fator F é do tipo círculo rolante, e apenas um
filamento de DNA é transferido para célula
receptora, onde sofre replicação e passa a ser
bifilamentar. A frequência de recombinação,
em geral, é baixa, podendo, contudo, ocor-
rer, caso o fator F se integre ao cromossomo
(Figura 5).
Figura 5 - Conjugação F+ x F- Fonte: Snustad D.P. e Simmons
M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara
Koogan.
A frequência de recombinação pode ser alta,
caso o fator F esteja integrado ao genoma da
célula doadora. Esta célula é denominada de
Hfr (alta frequência de recombinação). A cé-
lula Hfr inicia a transferência a partir do ponto
de origem da replicação do fator F integrado.
A replicação círculo rolante transfere o DNA da
célula doadora para a célula receptora, onde
ele passa a ser bifilamentar. A célula receptora
permanece F-, pois apenas uma parte do fator
F foi transferido e integrado à célula, entre-
tanto ela poderia passar a ser F+, caso todo
o cromossomo bacteriano fosse transferido
(Figura 6).
 47

capítulo 3
Pesquisa da FIX: além
dos fatores F+ e F-, exis-
te o fator F’, pesquise
um pouco sobre esse
fator e compare-o com
os fatores F+ e F-.

2.1.4 TRANSDUÇÃO

Na transdução, os genes bacterianos são em-

balados no capsídeo do fago, devido a erros,
durante o ciclo de vida do vírus. Após a lise da
célula hospedeira, os vírus serão liberados e in-
fectarão outra célula, na qual ocorrerá a trans-
ferência de material genético. Podem ocorrer
dois tipos de transdução:

1. generalizada, na qual o fago pode transfe-

rir qualquer segmento do genoma da célu-
la doadora para receptora;

2. especializada, na qual ocorre transferência

de segmentos restritos do genoma de uma
célula para outra (Figura 7).

Figura.6 - Conjugação F+ x Hfr. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J.

(2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.

Figura 7- Transdução especializada e generalizada. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de
Genética. Editora Guanabara Koogan.
48
capítulo 3
2.2 ORGANIZAÇÃO GÊNICA
Como se organizam os genes em bactérias?
Essa pergunta é muito ampla, por isso ao
invés de tentar, de forma resumida, respon-
dê-la, achamos adequado mais uma vez
usarmos a E. coli como exemplo, visto que
é um dos organismos modelo da Genética
bem como a bactéria melhor estudada até
o momento.
Figura 8- Genoma de Escherichia coli. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
3. TÉCNICAS DE
GENÉTICA MOLECULAR
E SUAS PRINCIPAIS
APLICAÇÕES
3.1 CONSIDERAÇÕES GERAIS
A década de 70 do século XX foi crucial para
os geneticistas moleculares, pois foi a partir
do desenvolvimento de novas tecnologias que
se tornou possível o isolamento de sequências
Em E. coli, o tamanho do genoma corresponde
a 4.639,221pb, com cerca de 4.280 sequên-
cias hipoteticamente codificantes de proteínas
ou genes, desses genes apenas 1/3 são bem
conhecidos. O tamanho das sequências inter-
gênicas é de 118pb. Os genes que especificam
proteínas, RNAs estáveis e DNA repetitivo cor-
respondem a cerca de 87,5%, 0,6% e 0,7% do
genoma, respectivamente. Os 10,7% restantes
do genoma devem envolver sequências regu-
ladoras dentre outras sequências ainda desco-
nhecidas (Figura 8).
gênicas, a recombinação de moléculas de DNA
in vitro bem como o seqüenciamento de áci-
dos nucléicos, o uso de microscopia eletrônica
e de outras técnicas analíticas. Muito do que
se sabe hoje sobre os genes, deve-se a análises
moleculares através da aplicação de tecnolo-
gias do DNA recombinante e subseqüente clo-
nagem gênica. Discutiremos, de forma sucin-
ta, algumas das principais ferramentas usadas
em análises moleculares, como, por exemplo,
as enzimas de restrição, a reação em cadeia da
polimerase e suas principais aplicações.
 49

3.2 TÉCNICAS USADAS
PARA CLONAGEM
3.2.1 ENZIMAS DE RESTRIÇÃO (RES)
Para que se possa clonar e sequênciar qualquer
gene de interesse, é fundamental o uso de en-
zimas de restrição, as quais são produzidas por
microorganismos e possuem a capacidade de
reconhecer sequências diferentes de nucleotí-
deos no DNA. As REs cortam a molécula de
DNA apenas em sequências específicas ditas
sítios de restrição (ver Quadro 2). A nomen-
clatura usada para determinar o tipo de REs,
baseia-se na espécie de microorganismo que a
produziu, como, por exemplo, a endonuclease
de restrição EcoRI. A primeira letra se refere a
inicial do gênero (Escherichia), e as demais, ao
início do nome da espécie (coli), seguido da
linhagem bacteriana (R) e da referência ao fato
de ter sido a primeira enzima de restrição iden-
tificada nesta linhagem (I).
SAIBA MAIS
DNA recombinante – DNA sintetizado artificialmente,
onde uma sequência específica de DNA de um orga-
nismo é inserido no genoma de outro.
capítulo 3
3.2.2 MOLÉCULAS DE DNA RECOMBINANTES
O fato da enzima de restrição cortar um par
específico de nucleotídeos, independente do
organismo (fago, humano, camundongo,
mosca, etc), permite que sejam produzidos
fragmentos com as mesmas extremidades,
ou seja, complementares, seja qual for à
origem do DNA. Esses fragmentos oriundos
de distintos organismos podem ser fusio-
nados, gerando uma molécula de DNA re-
combinante (Figura 9). Após a produção do
DNA recombinante, é necessário agora que ele
seja amplificado, isto é, que sejam produzidas
muitas cópias ou clones desta molécula. Para
que isto ocorra, é preciso que a molécula de
DNA recombinante seja inserida em um vetor
de clonagem, o qual é auto-replicante, como,
por exemplo, plasmídeos. Como já sabemos,
os plasmídeos são moléculas de DNA extracro-
mossômico presentes em microorganismos.
O seu tamanho varia de 1kb (= 1.000pb) a
mais de 200kb. Além dos plasmídeos, outros
vetores são usados de acordo com suas ca-
racterísticas e capacidade de inserto, sendo os
principais tipos: bacteriófagos, cosmídeos e
cromossomos artificiais.

Clonagem gênica – método que envolve a multiplica-

ção de sequências de DNA incorporadas a um vetor
de clonagem, em geral um plasmídeo, um cosmídeo
ou um fago, capaz de se replicar ao ser introduzido
em um hospedeiro adequado.

Enzimas de Restrição (REs) – enzima, oriunda de bac-

térias, capaz de reconhecer uma sequência específica
de ácido nucléico e cortar dentro do sítio de restrição.

Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) – ver PCR

PCR ou Reação em Cadeia da Polimerase – Técnica

utilizada na rápida amplificação enzimática in vitro
de sequências específicas de DNA.

Quadro 2 – Sequências de reconhecimento

e sítios de restrição de algumas enzimas de
restrição.
Enzima Fonte Sequência de
reconhecimento
e Sítio de restrição
EcoRI Escherichia coli GˇAATTC
CTTAAˆG
HindIII Haemophilus AˇAGCTT
influenzae lR TTCGAˆA

AluI Arthobacter AGˇCT

luteus TCˆGA Figura 9 - Formação de molécula de DNA recombinante. Fonte: Snus-
tad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Gua-
nabara Koogan.
50
capítulo 3

SAIBA MAIS sejam favoráveis ao gene marcador selecioná-

Inserto – sequência de DNA a ser inserida em um ve-
tor de clonagem.
Cosmídeos – vetor de clonagem construído pela in-
serção da sequência cos do fago lambda em um plas-
mídeos, permitindo a clonagem de insertos de 30 a
46 kb de tamanho.
Cromossomos artificiais – vetor capaz de propagar
insertos maiores do que os encontrados em fagos e
cosmídeos. Podem ser de origem bacteriana (BAC),
de levedura (YAC), ou até mesmo humana (HAC).
Um vetor de clonagem possui três componen-
tes básicos: 1- origem de replicação; 2- gene
marcador dominante selecionável; 3- ao me-
nos um sítio de restrição (Figura 10). Os veto-
res atualmente mais usados possuem um sítio
de policlonagem.
vel presente no vetor (Figura 11).
A triagem de uma biblioteca de DNA é feita
principalmente pela seleção genética, podendo
também ser feita através do uso de sequências
de DNA ou RNA como sondas de hibridização
ou através de anticorpos que reconhecem pro-
dutos gênicos.
SAIBA MAIS
Sítio de Policlonagem – sequência de DNA reconheci-
da por diferentes enzimas de restrição.
Sondas de Hibridização – pequena molécula (cerca
de mil pb) de ácido nucléico marcado (radioativa-
mente ou enzimaticamente) usada na detecção de
sequências complementares de DNA ou RNA.

Figura 10- Vetor de clonagem e seus componentes básicos. Fonte:

Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Edi-
tora Guanabara Koogan.

3.2.3 CONSTRUÇÃO E TRIAGEM DE

BIBLIOTECAS DE DNA

O primeiro passo para clonagem consiste na

construção de uma biblioteca de DNA genô-
mico, que corresponde a um conjunto de dife-
rentes fragmentos de DNA do genoma inteiro. Figura 11- Construção de bibliotecas de DNA. Fonte: Snustad D.P. e
O processo é iniciado com o isolamento do Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara
Koogan.
DNA total de um organismo, o qual é digerido
por enzimas de restrição, gerando vários seg-
mentos de DNA, os quais são inseridos em um VOCÊ SABIA
vetor de clonagem apropriado. Após a ligação
dos fragmentos do DNA genômico ao DNA ve- Você sabia que além das bibliotecas genômicas, exis-
tor, as moléculas recombinantes são inseridas tem as bibliotecas cromossômicas e de cDNA (DNA
complementar)? Ambas são mais específicas que a
em células hospedeiras, em geral E. coli, para
biblioteca genômica e são úteis para o mapeamento
posterior replicação in vivo. As bactérias trans- cromossômico e estudos de expressão gênica, respec-
formadas, ou seja, que contêm o DNA vetor, tivamente.
deverão crescer em um meio, cujas condições
 51

capítulo 3
Desafio da FIX: visite o carga por unidade de massa essencialmente
site da Sociedade Brasilei- constante, elas se separam em géis de agarose
ra de Genética e consulte ou acrilamida com base em seu tamanho ou
a prática de DNA recom- conformação. São feitas cavidades em uma
binante (Enzima de res- extremidade do gel, onde são depositadas as
trição), Octavio Henrique amostras de DNA, e é passada uma corrente
de O. Pavan. http://www. elétrica no gel. Os fragmentos de DNA migram
sbg.org.br/GeneticaEsco- para extremidade positiva do gel. Isso ocorre,
la2/web/Vol1Num2.htm porque o grupo fosfato de cada nucleotídeo
da molécula de DNA tem carga negativa. Após
3.3 ANÁLISE MOLECULAR DE a eletroforese, os fragmentos são separados
ÁCIDOS NUCLÉICOS E pelo tamanho e são observados como bandas
GENES a partir de sua revelação por corantes espe-
cíficos, como o brometo de etídio. Alternati-
3.3.1 ELETROFORESE vamente também se pode usar um marcador
radioativo ou químico (Figura 12). A eletrofo-
A eletroforese é usada para separação de ma- rese em gel é usual em experimentos de DNA
cromoléculas com tamanhos e cargas dife- recombinante.
rentes. Como as moléculas de DNA possuem

Figura 12 - Eletroforese. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
52
capítulo 3
3.3.2 ANÁLISE DE DNA POR HIBRIDIZAÇÃO E
TRANSFERÊNCIA DE SOUTHERN
Esta técnica permite localizar genes e sequên-
cias de DNA em fragmentos de restrição sepa-
rados por eletroforese em gel, em particular,
pela transferência das moléculas de DNA do
gel para uma membrana de nitrocelulose ou
Figura 13 - Transferência de Southern. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara
Koogan.
3.3.3 ANÁLISE DE RNA POR HIBRIDIZAÇÃO E
TRANSFERÊNCIA DE NORTHERN
O procedimento da análise de RNA é similar ao
descrito na transferência de Southern. Contu-
do, as moléculas de RNA são muitos sensíveis
à degradação por RNase e, em geral, contém
uma estrutura secundária. Por isso, se deve ter
cuidado quanto a contaminação de materiais
e manutenção das moléculas de RNA desnatu-
radas durante a eletroforese, para garantir que
elas se separem pelo tamanho. A hibridização
e transferência de Northern podem ser usadas
para o estudo temporal da expressão de genes.
Pesquisa da FIX: pes-
quise, na literatura
recomendada e em
sites, a análise de pro-
teínas por hibridiza-
ção e transferência de
Western e compare
este procedimento com
Southern e Northern.
náilon (Figura 13). O DNA é desnaturado an-
tes da transferência, colocando-se o gel numa
solução alcalina. Após a transferência, o DNA
é imobilizado na membrana por secagem ou
radiação UV e identificado por uma sonda ra-
dioativa de DNA, a qual será hibridizada à se-
quência de interesse, cuja sequência de nucle-
otídeos é complementar à sequência da sonda.
3.3.4 REAÇÃO EM CADEIA DA
POLIMERASE (PCR)
A reação em cadeia da polimerase (PCR) permite
a amplificação de uma sequência selecionada
de DNA milhares de vezes. Este procedimento
só pode ser usado, quando se conhecem as
sequências de nucleotídeos das extremidades
da sequência de interesse. É necessário o uso
de oligonucleotídeos sintéticos complementa-
res a estas sequências conhecidas, servindo de
início para amplificação destas.
A PCR compreende três etapas, são elas: Eta-
pa 1, o DNA genômico a ser amplificado é
desnaturado por aquecimento a 95-97°C,
por 15 a 30 segundos; etapa 2, o DNA des-
naturado é helicoidizado a um excesso de
primers de oligonucleotídeos sintéticos, in-
cubando-os juntos a 50-60°C por 30 segun-
dos; etapa 3, a DNA polimerase (atualmente
substituída por uma DNA termoestável, a Taq
polimerase) é usada para replicar o segmen-
to de DNA, o primer fornece a extremidade
 53

capítulo 3
3’-OH livre para a ampliação, e o DNA genômico desnaturado fornece o molde. A polimeri-
zação é feita a 70-72°C por 1,5 minuto (Figura 14). O procedimento é repetido muitas vezes,
até que se obtenha o nível de amplificação desejada.

SAIBA MAIS
Oligonucleotídeos – molécula curta de DNA (cerca de 8 a 50 pb), usualmente utilizada como sonda.

Primers – pequeno oligonucleotídeo de uma sequência definida que se liga a um molde de DNA, para dar início à
replicação (sintetizado pela primase) ou à reação em cadeia da polimerase (sintetizado artificialmente).

Figura 14 - Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Fonte: Snustad D.P. e Sim-

mons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.

A PCR tem sido usada no diagnóstico de do- SAIBA MAIS

enças hereditárias humanas, diagnóstico pré-
-natal, casos forenses, clonagem e sequen-
ciamento. A principal vantagem do uso dessa
metodologia se deve ao uso de DNA isolado de
amostras muito pequenas.
Sequenciamento – determinação da sequência de ba-
ses de um fragmento de DNA ou RNA bem como da
sequência de aminoácidos de uma proteína.

Desafio da FIX: procure REVISANDO

saber mais sobre apli-
cações das técnicas de
CONHECIMENTOS
Genética Molecular. Para
tal, acesse: http: /www. 1. Vimos que as bactérias, embora não reali-
biotecnologia.com.br. zem reprodução sexuada, realizam outros
Neste site, você terá aces- processos que permitem a recombinação
so a entrevistas e artigos gênica, denominados de parasexuais. Três
científicos sobre temas tipos básicos de recombinação são obser-
relacionados à Biologia Molecular e Biotecno- vados, cada um apresentando particulari-
logia, como, por exemplo, clonagem, marca- dades. Faça a correta associação entre as
dores moleculares, terapia gênica do câncer, características apresentadas e o tipo espe-
dentre outros. cífico de recombinação.
54
capítulo 3
( a ) Conjugação ( ) Molécula de DNA lde uma
célula doadora é captada
do ambiente externo e in-
corporada no genoma de
uma célula receptora.
( b ) Transdução ( ) O DNA é transferido de
uma célula para outra,
através de um vírus bacte-
riano.
( ) As bactérias que têm a ca-
pacidade de receber DNA
são denominadas de com-
petentes.
( c ) Transformação ( ) Formação do pili sexual.
( ) É necessária a presença de
um bacteriófago.
2. A Reação em cadeia de polimerase (PCR)
tem sido um recurso valioso para ampli-
ficação (um milhão ou mais de vezes) de
sequências específicas de DNA em poucas
horas. Dentre os processos apresentados
abaixo, assinale com um X aqueles que
ocorrem durante a aplicação dessa técnica.
( ) Replicação da região de interesse com a atuação
de uma DNA polimerase especial tolerante ao
calor, por exemplo, a taq polimerase.
( ) Formação de um híbrido molecular que identifi-
ca regiões mutadas no genoma.
( ) Ativação de genes promotores, ocasionando in-
tensa replicação gênica.
( ) Desnaturação de todo o DNA envolvido no pro-
cesso.
( ) Duplicação de ácidos nucléicos através da DNA
e RNA polimerase, após estas moléculas serem
separadas por eletroforese em gel de agarose.
( ) Helicoidização do DNA desnaturado a primers.
Dentre os eventos assinalados por você, rela-
cione-os por ordem de acontecimentos e expli-
que sucintamente, como são realizados.
3. Uma biblioteca de cDNA não apresenta ín-
trons, porque
a) é construída a partir de DNA genômico. R. C.;GELBART, W. M.; SUZUKI, D. T.e MILLER,
b) os íntrons são retirados in vitro depois
da construção do cDNA.
c) é construída com genes isolados do
cromossomo bacteriano.
d) é construída a partir de RNAm.
e) é construída a partir do filamento mol-
de de DNA.
4. No processo de clonagem gênica, diferen-
tes tipos de vetores podem ser utilizados,
dependendo do organismo e do tamanho
do genoma. Um dos vetores valiosos para
mapear e seqüenciar genomas eucarióti-
cos corresponde a
a) Plasmídeos
b) Cosmídeos
c) YACs
d) Bacteriófagos
e) Sondas híbridas
5. Sobre as atuações das enzimas de restri-
ção, analise as afirmativas abaixo.
I. Quebram as pontes de hidrogênio e se
intercalam entre as duas fitas de DNA,
favorecendo a clonagem de um seg-
mento molecular específico.
II. Reconhecem e clivam as duas fitas de
DNA em sítios específicos.
III. Protegem os organismos que as produ-
zem contra a ação de DNA exógenos.
IV. Ligam-se a sítios específicos do DNA e,
associadas a proteínas histônicas, favo-
recem a amplificação gênica.
Estão corretas:
a) I e II.
b) I e III.
c) II e III.
d) III e IV.
e) II e IV.
REFERÊNCIAS
LEITURA FUNDAMENTAL
SNUSTAD, D. P. e SIMMONS M. J. Fundamen-
tos de Genética: Guanabara Koogan S/A, 2000.
LEITURA COMPLEMENTAR
GRIFFITHS, A. J. F.; WESSLER, S. R.; LEWONTIN,
J. H. Introdução à Genética: Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan S/A, 2006.
SITES
http://www.sbg.org.br/GeneticaEscola2/web/
Vol1Num1.htm
http://www.sbg.org.br/GeneticaEscola2/web/
Vol1Num2.htm
 55

capítulo 4
Regulação da
Expressão Gênica
em Procariontes
e Eucariontes

Profa. Rita de Cássia de Moura Carga Horária I 15H

Colaboradoras: Profa. Marília de França Rocha
Profa. Maria Teresa Marquim Nogueira Cornélio

INTRODUÇÃO
A totalidade de genes de uma célula repre-
senta uma grande quantidade de informação
biológica, a qual não é requisitada, integral-
mente e a todo tempo, pela célula. Entretan-
to, alguns genes permanecem sempre ativos,
como, por exemplo, genes de RNA e de pro-
teínas ribossomais, RNA polimerase e histo-
nas, dentre outros. Os genes que codificam
produtos desse tipo e que são continuamen-
te expressos são denominados genes consti-
tutivos (mantenedores). Entretanto, o mais
freqüentemente observado é a atividade de
genes, de acordo com a necessidade da cé-
lula, fazendo com que algumas informações
biológicas sejam necessárias, o que determina
a expressão de alguns genes. De um modo
geral, podemos dizer que os organismos são
capazes de regular a expressão de seus ge-
nes. A regulação gênica pode ocorrer em cin-
co níveis principais. São eles: transcricional,
processamento do RNA, estabilidade do RNA,
traducional e pós-traducional. Abordaremos,
prioritariamente, neste capítulo, tanto para
procariontes como eucariontes, o nível mais
comum de regulação gênica, o transcricional.
56
capítulo 4
SAIBA MAIS
Genes constitutivos (mantenedor) – gene cuja
expressão é essencial à manutenção da função da
maioria ou de todos os tipos de células.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Distinguir os tipos de controle positivo e
negativo da expressão gênica;
• Diferenciar os operons indutíveis dos ope-
rons repressíveis;
• Conhecer os principais mecanismos de
ação do nível de regulação transcricional
em eucariontes;
• Diferenciar os mecanismos reguladores em
procariontes e eucariontes.
1. REGULAÇÃO GÊNICA
EM PROCARIONTES
As mudanças ambientais afetam diretamente a
expressão de genes em bactérias. Consideran-
do a E. coli como exemplo, observamos que o
fato de essa bactéria possuir vários genes que
codificam diferentes enzimas, capazes de me-
tabolizar qualquer um dos diferentes açúca-
res, não implica necessariamente na expressão
contínua de todos os seus genes que utilizam
açúcar. Isso é compreensível, visto que impli-
caria um gasto energético desnecessário, pois
não faz sentido que a bactéria requisite uma
enzima, se no meio não houver oferta imedia-
ta de um determinado açúcar. Podemos, en-
tão, dizer que as bactérias só expressam genes
codificantes de enzimas necessárias, enquanto
os demais genes são mantidos inativados.
As enzimas envolvidas em vias catabólicas,
como lactose e galactose, são ditas indutíveis,
pois ligam a expressão de genes em respos-
ta à presença de uma substância no meio. Os
genes regulados deste modo são denomina-
dos indutíveis, e suas enzimas são chamadas
enzimas indutíveis, diferente das enzimas que
compõem as vias anabólicas, que, em geral,
são repressíveis. Tanto a indução como a re-
pressão ocorrem no nível da transcrição, que é
considerado o nível de regulação gênica mais
comum para procariontes e vírus.
1.1 CONTROLE POSITIVO
E NEGATIVO DA
EXPRESSÃO GÊNICA
A regulação gênica pode ser ligada ou desli-
gada por indução ou repressão dos genes,
respectivamente. Para que isso ocorra, existem
dois mecanismos de controle, tanto positivos
como negativos. Em ambos os casos, existe
a participação de genes reguladores, os quais
codificam produtos que regulam a expressão
de outros genes.
No mecanismo de controle positivo, o produ-
to do gene regulador liga a expressão de um
ou mais genes estruturais. Já o mecanismo de
controle negativo precisa do produto do gene
regulador para desligar a expressão dos genes
estruturais. A figura 1 ilustra os mecanismos
de controle positivo e negativo nos sistemas
indutíveis e repressíveis.
SAIBA MAIS
Genes reguladores – genes cuja função primária é
controlar a síntese dos produtos de outros genes.
Genes estruturais – genes que codificam a estrutura
primária (sequência de amininoácidos) de um poli-
peptídeo.
O produto do gene regulador pode ser deno-
minado de ativador, quando este é capaz de
ativar a expressão gênica no sistema de con-
trole positivo, podendo, também, ser chama-
do de repressor, caso reprima a expressão gê-
nica no sistema de controle negativo. Para que
a proteína reguladora seja capaz de se ligar ao
sítio de ligação da proteína reguladora (RBS),
o qual fica adjacente ao promotor do(s)
gene(s) estrutural(ais), é necessária a presença
ou ausência de moléculas efetoras na célula.
Essas moléculas são denominadas indutores
ou co-repressores, quando estão envolvidas na
indução ou repressão, respectivamente.
Desafio da FIX: analise
a figura 1 e descreva,
sucintamente, os meca-
nismos de controle indu-
tível negativo e positivo,
repressível negativo e po-
sitivo.

Figura 1 - Mecanismos de controle positivo e negativo nos sistemas indutíveis e repressíveis. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Funda-
mentos de Genética. Editora Guanabara Koogan.
1.2 OPERONS
Operons são unidades coordenadamente regu-
ladas de expressão gênica. O modelo de ope-
ron (controle negativo) foi descrito para E. coli
por Jacob e Monod, em 1961, através do qual
esses pesquisadores explicaram a regulação
dos genes que codificam as enzimas necessá-
rias para o uso de lactose nessa bactéria. Para
compreender como o operon é regulado, é im-
portante conhecer os componentes que fazem
57
capítulo 4
parte dele (Figura 2). São eles: um conjunto
de genes estruturais; um promotor (sítio de li-
gação da RNA polimerase) e um operador (sí-
tio de ligação de uma proteína regulatória). A
regulação acontece através de dois elementos
reguladores, o produto do gene regulador e o
operador. Quando o repressor está ligado ao
operador, não ocorre a transcrição. A ligação
do repressor ao operador, desligando os genes
estruturais, como dito anteriormente, depende
da presença ou ausência da molécula efetora.
58
capítulo 4
Figura 2- Componentes do operon. Fonte: Snustad D.P. e Sim-
mons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara
Koogan.
A B
Figura 3 - Operons indutíveis (a) e repressíveis (b). Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora Guanabara
Koogan.
1.2.1 OPERON DA LACTOSE
O operon da lactose (lac) é, dentre os conheci-
dos e estudados em E. coli, o melhor caracteri-
zado, e foi, a partir de estudos sobre ele, que Ja-
cob e Monod propuseram o modelo do operon.
Os operons indutíveis e repressíveis podem ser
distinguidos pela ligação apenas do repressor
ou de um complexo repressor-efetor ao opera-
dor. Quando se trata de um operon indutível,
o repressor livre se liga ao operador, desligan-
do a transcrição. Já no caso do operon repres-
sível, o repressor livre não consegue se ligar ao
operador; é preciso a formação do complexo
repressor-efetor (co-repressor), que é capaz de
se ligar ao operador, impedindo a transcrição
(Figura 3).
O operon lac contém um promotor (P), um
operador (O) e três genes estruturais: o gene
lacZ, que codifica a β-galactosidade; o lacY,
que codifica a β-galactosídeo permease e o
lacA, que codifica a β-galactosídeo transaceti-
lase (Figura 4). Com relação à função das enzi-
 59

capítulo 4
mas codificadas pelo operon lac, sabemos que a β-galactosídeo permease bombeia a lactose para
o interior da célula e que a β-galactosidade quebra a lactose em glicose e galactose. O papel da
transacetilase não é bem conhecido.

Figura 4- O operon lac. paginas.terra.com.br/.../aula4_controle.htm

O promotor do operon lac con-

tém dois componentes separa-
dos. São eles: 1- o sítio de ligação
da RNA polimerase; 2- o sítio de
ligação de uma proteína chama-
da proteína ativadora do catabo-
lismo (CAP), cuja função consiste
em impedir que o operon lac seja
induzido na presença de glicose.

1.2.1.1 INDUÇÃO

O operon lac é do tipo indutível

de controle negativo. O gene re-
gulador (I) desse operon codifica
um repressor, cuja forma ativa
corresponde a um tetrâmero
contendo quatro cópias do pro-
duto do gene I. Na ausência do
indutor, o repressor se liga ao
operador, impedindo que a RNA
polimerase catalise a transcrição
dos três genes estruturais. Con-
tudo, na presença do indutor
(alolactose), é formado o com-
plexo repressor-indutor, levan-
do à liberação do repressor do
operador e subseqüente trans-
crição dos genes (Figura 3). A
alolactose é derivada da lactose
Figura 3 - Operons indutíveis. Fonte: Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de
em uma reação catalisada pela Genética. Editora Guanabara Koogan.
β-galactosidade. Para que a alo-
lactose esteja presente no meio,
é necessário que algumas enzimas dos genes
estruturais sejam produzidas no estado não in-
duzido, fornecendo, dessa maneira, um nível
mínimo de atividade enzimática.
60
capítulo 4
1.2.1.2 REPRESSÃO CATABÓLICA
A repressão catabólica (ou efeito da glicose)
assegura que a glicose seja catabolizada quan-
do presente, em detrimento a outras fontes de
energia. Por isso, quando a glicose está pre-
sente no meio, ela impede a indução do ope-
ron lac. Isto ocorre porque a glicose impede
a ação de adenilciclase, a enzima que catalisa
a formação de uma molécula efetora chama-
da adenosina-3’, 5’-monofosfato (cAMP) a
partir de ATP. Quando há baixa concentração
de cAMP, a proteína CAP não pode se ligar ao
promotor do operon lac, portanto não ocorre
a ligação da RNA polimerase de forma eficien-
te ao promotor, e a taxa de transcrição não
excede a 2%. Por outro lado, se a proteína CAP
e a molécula efetora cAMP estiverem presentes
em concentrações suficientes, elas formarão
um complexo, o qual se liga ao promotor, in-
duzindo à transcrição do operon lac, exercen-
do, neste caso, um controle positivo.
Pesquisa da FIX: um ou-
tro operon de E. coli bas-
tante estudado é o trip-
tofano (trp). Pesquise, na
literatura recomendada,
a composição e a estru-
tura desse operon bem
como os níveis de regula-
ção de sua expressão.
Desafio da FIX: para ter acesso à animação dos
operons lac e trp, acessem o site www.whfree-
man.com/pierce. Cliquem na capa do livro: Ge-
netics: A conceptual approuch by Benjamin A.
Pierce. Genetics 1e. Selecionem Genetics in mo-
tion, Chapter 16 - Control of gene expression.
2. REGULAÇÃO GÊNICA
EM EUCARIONTES
Os mecanismos de regulação gênica em eucarion-
tes são mais complexos que os observados em pro-
cariontes, e isso se deve, principalmente, por se tra-
tar de organismos multicelulares, os quais possuem
diferentes tipos de células. Os diferentes genes
presentes nessas células sofrem regulação espacial
e temporal de sua expressão por meio de diver-
sos mecanismos moleculares. Estudaremos alguns
exemplos que ilustram a regulação em nível trans-
cricional e de processamento do RNA bem como da
organização e ativação/inativação cromossômica.
2.1 TRANSCRICIONAL
A regulação gênica em nível transcricional é
mediada por interações DNA-protéina. Estas
proteínas são chamadas de fatores de trans-
crição, e muitas delas possuem dois domínios
quimicamente importantes, um de ligação ao
DNA e o outro, de ativação transcricional. Um
fator de transcrição pode se ligar a um acentu-
ador (enhancer) ou fazer contato com proteí-
nas em dois ou mais acentuadores, ou ainda,
interagir diretamente com proteínas associa-
das ao promotor. Estes contatos e interações
podem induzir a mudanças conformacionais
nas proteínas, através da ação do domínio de
ativação transcricional. Estas mudanças permi-
tem que a RNA polimerase inicie a transcrição.
Existem vários motivos estruturais resultantes
de associações entre aminoácidos, em suas
cadeias polipeptídicas. Dentre eles, os mais
conhecidos são: zinc finger; hélice-giro-hélice;
zíper de leucina e hélice-alça-hélice.
SAIBA MAIS
Fatores de transcrição – proteínas responsáveis pela
expressão de um gene.
Acentuador – sequência reguladora de DNA que
interage com fatores de transcrição específicos, au-
mentando a frequência da transcrição de sequências
adjacentes.
Os acentuadores são sequências repetidas que
apresentam atividade parcial de regulação, em
geral são grandes e funcionam de modo histo-
específico. Eles apresentam três propriedades
básicas:
1. atuam a distâncias grandes;
2. funcionam independente de sua orienta-
ção (normal ou invertida);
3. seus efeitos independem de sua posição
(anterior ou posterior ao gene).
Estas propriedades permitem distinguir os
acentuadores dos promotores.
A indução da atividade transcricional também
se dá pela ação de fatores ambientais e bioló-
gicos. Como exemplo, temos as proteína de
 61

choque térmico observadas na Drosophila me-
lanogaster e, em muitos outros organismos,
as quais têm sua expressão regulada através
do estresse provocado pelo calor, que induz
a transcrição de genes, que codificam estas
proteínas. Em D. melanogaster, por exemplo,
a proteína de choque térmico HSP70 (peso
molecular de 70 quilodáltons) é codificada
quando a temperatura excede 33°C. A trans-
crição induzida pelo calor é mediada por um
polipeptídio denominado fator de transcrição
Heat-Shock (ou de choque térmico). Quando
a mosca é estressada pelo calor, esses fatores
de transcrição são quimicamente alterados por
fosforilação e associam-se a elementos de res-
posta heat-shock, promovendo o estímulo da
transcrição dos genes hsp70 (Figura 5).
capítulo 4
RNAm, que codifica uma proteína reguladora,
a proteína SXL. A presença dessa proteína em
embriões regula a expressão de um conjunto
de genes, fazendo com que esses embriões
se desenvolvam como fêmeas. Contudo, nos
machos (XY), ocorre a recomposição alternati-
va do transcrito Sxl, com inclusão de um éxon
com códon finalizador, levando à produção de
um polipeptídio sem função reguladora, de
modo que, em embriões XY, na ausência da
proteína SXL, um conjunto diferente de genes
é expresso, fazendo com que os embriões se
desenvolvam como machos (Figura 6).
SAIBA MAIS
Recomposição alternativa – formas alternativas de re-
moção de íntrons e reunião de éxons na geração de
RNAm maduro, a partir do transcrito primário, pos-
sibilitando a formação de diferentes polipeptídeos
oriundos de um mesmo gene.

Figura 5- Transcrição de genes de choque térmico HSP70. Fonte:

Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética.
Editora Guanabara Koogan.

Como já foi discutido no capítulo 2, todos já

sabem que a maioria dos genes eucarióticos
possuem íntrons, e que esses íntrons são ex-
cisados por um processo chamado recompo-
sição. Além deste tipo de recomposição, pode
ocorrer, também, a recomposição alternativa.
A recomposição alternativa dos transcritos é
Figura 6- Recomposição alternativa do gene Sxl em Drosophila. Fonte:
um modo de regulação gênica, que pode ser Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética. Editora
utilizada para possibilitar que um único gene Guanabara Koogan.
codifique diferentes polipeptídeos. Um exem-
plo bastante interessante de recomposição al-
Pesquisa da FIX: pes-
ternativa pode ser observado durante a expres-
quise, na literatura re-
são de genes envolvidos na determinação do
comendada e em sites,
sexo em Drosophila. O gene regulador do pro-
exemplos de regulação
cesso de determinação sexual em Drosophila
gênica através da meti-
está localizado no cromossomo X e foi deno-
lação e imprinting do
minado sexo-letal (Sxl). Nas fêmeas (XX), esse
DNA.
gene sofre recomposição para produzir um
62
capítulo 4

2.2 ORGANIZAÇÃO de proteínas MSL. Estes genes são conhecidos

CROMOSSÔMICA X
REGULAÇÃO DA EXPRESSÃO
Quando falamos de expressão gênica e orga-
nização cromossômica, estamos nos referindo
à possibilidade de alteração da transcrição de
genes, a partir de sua transferência para outros
sítios dentro do cromossomo. Dentre vários
exemplos, vamos detalhar o que pode ocorrer
em genes de Drosophila, quando estes, devido
a rearranjos cromossômicos dos tipos inversão
e translocação, são transferidos de uma região
eucromática para uma região heterocromáti-
ca, levando ao funcionamento anormal ou, até
mesmo, ao silenciamento desses genes. O mau
funcionamento dos genes pode levar à mistura
de caracteres normais e mutantes no mesmo
indíviduo, o que é chamado de variegação de
efeito de posição.
também como loci letais de machos, pois se
eles sofrerem mutações, o cromossomo X não
será hiperativado, e os machos morrerão. Cada
uma das quatro proteínas MSL se liga especi-
ficamente ao X nos machos e se associam a
dois RNAs diferentes, roX1 e roX2, produzidos
pelo cromossomo X. Ainda não se conhece
detalhadamente como este complexo MSL e
RNAs roX hiperativam genes ligados ao X em
machos. Contudo, especula-se que o comple-
xo facilite a acetilação do X e posterior altera-
ção na estrutura da cromatina, intensificando
a atividade transcricional do único X do macho
(Figura 7a).

Muitos exemplos de variegação de efeito de

posição foram descritos em Drosophila, dentre
eles o alelo salpicado white é um bom exemplo.
Neste caso, o alelo selvagem do gene white
mudou de posição devido a uma inversão, que
o transferiu de uma região eucromática para
uma região heterocromática no cromossomo X.

Esta mudança de posição do gene white al-

terou a expressão do gene, levando a um fe-
nótipo de olho salpicado. Este exemplo ilustra
bem a ação da heterocromatina na repressão
da expressão gênica, que pode ocorrer devido
ao alto grau de condensação dessa cromatina
bem como pela inacessibilidade dessa região à
maquinaria transcricional.
Figura 7- Mecanismos de compensação de dose gênica. Fonte:
Snustad D.P. e Simmons M.J. (2001) Fundamentos de Genética.
2.3 ATIVAÇÃO E INATIVAÇÃO Editora Guanabara Koogan.

CROMOSSÔMICA
Organismos, cujos mecanismos de determina-
ção sexual são do tipo XX/XY ou XX/XO, preci-
sam usar estratégias para equalizar a atividade
dos genes ligados ao cromossomo X nos dois
sexos. Para exemplificar diferentes tipos de ati-
vação e inativação do cromossomo X, vamos
estudar a hiperativação do X em Drosophila e
a inativação do X em fêmeas de mamíferos.
A compensação de dose gênica em Drosophila
requer a ação de quatro genes diferentes, os
quais são chamados de msl, e seus produtos,
Quanto à inativação aleatória de um dos cro-
mossomos X de fêmeas de mamíferos, esta
tem início em um sítio chamado centro de
inativação do X (XIC) e, a partir deste ponto,
se propaga em sentidos opostos para as ex-
tremidades do cromossomo. Entretanto, nem
todos os genes do cromossomo X inativado
são silenciados, como, por exemplo, o gene
XIST, que se encontra dentro do XIC. O gene
XIST codifica um RNA funcional, que reveste
gradativamente o cromossomo X, reprimindo
a maioria dos genes do X inativo (Figura 7b).
É importante destacar que no mecanismo de

compensação de dose em mamíferos, o X que
permanece ativo é paradoxalmente o que re-
prime o seu gene XIST.
REVISANDO
CONHECIMENTOS
1. No modelo do operon, a principal função
do gene promotor é:
a) produzir uma proteína repressora
b) ser o sítio de ligação para a molécula
indutora.
c) ser o sítio de ligação para a RNA poli-
merase.
d) produzir uma proteína acentuadora.
2. Você tem conhecimento de que, nas mu-
lheres, um dos cromossomos X sofre pro-
cesso de inativação, tornando-se quase
todo heterocromático. Sobre esse proces-
so, analise as afirmativas abaixo e identifi-
que as corretas.
I. A inativação de um dos cromossomos X
tem início em um sítio específico deno-
minado centro de inativação do X (XIC).
II. Um cromossomo X com o alelo XIST
inativo permanece eucromático, en-
quanto um cromossomo X com alelo
XIST ativo é heterocromatinizado.
III. O gene XIST codifica um RNA não tra-
duzido, o qual permanecerá no núcleo
e será fundamental na inativação do X.
IV. No caso das células masculinas, as
quais contêm XY, o gene XIST encon-
tra-se ativo.
São corretas apenas as afirmativas:
a) I, II e III.
b) I, II e IV.
c) II, III e IV.
d) I e IV.
e) II e IV.
3. As afirmativas abaixo referem-se ao pro-
cesso de regulação gênica em procarion-
63
capítulo 4
tes, exemplificado através do operon lac-
tose de E.coli.
I - Quando a proteína repressora liga-se
ao gene operador, a RNA polimerase liga-
-se ao gene promotor dando início ao pro-
cesso de transcrição e, conseqüentemente,
dando início à formação das três enzimas
necessárias ao metabolismo da lactose.
II - A RNA polimerase, após se ligar ao gene
promotor, realiza o processo da transcrição
dos três genes estruturais, envolvendo as
regiões denominadas de íntrons e éxons.
III - O gene promotor corresponde a uma
sequência de nucleotídeos na qual a RNA
polimerase reconhece e se encaixa para
dar início a transcrição.
IV - O operon Lac contém um promotor (P),
um operador (O) e três genes estruturais: o
gene lacZ que codifica a β-galactosidase; o
lacY que codifica a β-galactosídeo perme-
ase e o lacA que codifica a β-galactosídeo
transacetilase.
Estão corretas as afirmativas:
a) I e IV.
b) II e III.
c) I e II.
d) II e IV.
e) I e III.
4. O processo de regulação gênica em pro-
cariontes envolve diferentes mecanismos
moleculares cujo princípio básico consiste
na ativação ou repressão de genes especí-
ficos. Ambos os processos se enquadram
em duas categorias de controle da regu-
lação: positiva e negativa, cada uma apre-
sentando particularidades. A seguir, asso-
cie as características apresentadas ao tipo
de controle de regulação.
(1) Controle ( ) O produto do gene regulador
positivo corresponde a um ativador.
( ) O produto do gene regulador
(2) Controle corresponde a um repressor.
negativo
O produto do gene regulador la-
( ) ga-se ao sítio de ligação da pro-
teína reguladora, impedindo a
transcrição de genes específicos.
( ) O modelo de operon Lac é u
exempolo.
64
capítulo 4

5. Você estudou que tanto em procariontes

quanto em eucariontes, fatores ambientais
podem induzir a expressão de genes. Em
Drosophila melanogaster., por exemplo, a
temperatura acima de 33ºc leva à ativação
de genes codificadores de proteínas espe-
cíficas (proteínas de choque térmico), as
quais ajudam no controle da temperatura
celular interna. Pesquise sobre esse exem-
plo e responda:

a) Qual o peso molecular e a denomina-

ção da referida proteína?

b) Qual o gene que a codifica?

c) De que modo esse gene é ativado?

REFERÊNCIAS
LEITURA FUNDAMENTAL

SNUSTAD, D. P. e SIMMONS M. J. Fundamen-

tos de Genética: Guanabara Koogan S/A, 2000.

LEITURA COMPLEMENTAR

GRIFFITHS, A. J. F.; WESSLER, S. R.; LEWONTIN,

R. C.;GELBART, W. M.; SUZUKI, D. T.e MILLER,
J. H. Introdução à Genética: Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan S/A, 2006.

SITES

www.whfreeman.com/pierce